BR112021014715A2 - Uso de frações de extrato de laurus nobilis para proteger contra doenças relacionadas à poluição do ar - Google Patents

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Abstract

uso de frações de extrato de laurus nobilis para proteger contra doenças relacionadas à poluição do ar. a presente invenção se refere à desintoxicação sistêmica e inflamação crônica com o uso de frações de extrato de laurus nobilis, que levam a uma diminuição de marcadores anti-inflamatórios em linhagens celulares de pulmão humano e à ativação da via de nrf2, o qual é um elemento crucial em vias de desintoxicação intracelular e diminui a expressão de citocinas inflamatórias. portanto, o extrato pode ser usado para reduzir os efeitos colaterais da poluição do ar de modo geral (e especialmente de poluição do ar particulada), os quais incluem: problemas cardiovasculares, doenças respiratórias e inflamação crônica de tecidos que entram em contato com partículas transportadas pelo ar.

Description

“USO DE FRAÇÕES DE EXTRATO DE LAURUS NOBILIS PARA PROTEGER CONTRA DOENÇAS RELACIONADAS À POLUIÇÃO DO AR” BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
[0001] A presente invenção se refere à desintoxicação sistêmica com o uso de frações de um extrato de Laurus nobilis (folha de louro, loureiro).
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0002] A poluição do ar foi associada à morbidez e mortalidade principalmente devido a doenças pulmonares e cardiovasculares.
[0003] A inflamação é um processo crucial no desenvolvimento das doenças induzidas pela matéria particulada de poluição do ar. A interleucina-8 (IL-8) faz parte do sistema imunológico inato e é importante na iniciação de uma resposta imune, porém a superestimulação e a disfunção resultante dos neutrófilos recrutados nas vias aéreas podem resultar na liberação de moléculas pró- inflamatórias, resultando em danos em vez proteção do tecido de pulmão.
[0004] A interleucina-6 (IL-6) é secretada por linfócitos T e macrófagos e também ajuda a estimular uma resposta imune. A IL-6 inibe as ações de fator de necrose tumoral α (TNF-α) e interleucina-1 (IL-1). Foi associada principalmente à ação anti-inflamatório, porém também algumas funções pró-inflamatórias. Portanto, o benefício em sua inibição depende do estado da infecção. Em inflamação crônica, é útil diminuir a expressão de IL-6.
[0005] A proteína quimioatraente monócito-1 (MCP-1) recruta monócitos, linfócitos T de memória e células dendríticas para o local de inflamação. Além disso, em inflamação crônica ou inflamação mediada por poluição do ar, pode ser vantajoso diminuir a expressão de MCPO-1.
[0006] A prostaglandina E2 (PGE2) é uma citocina inflamatória que aumenta a dor causada por outros mediadores de inflamação, com bradicinina ou histidina. Também está envolvida com outras citocinas na indução de febre. Ademais, tem outras funções complexas em muitos tecidos. A PGE2 é aceita como um marcador geral para inflamação.
[0007] Uma melhora da via de desintoxicação celular é considerada útil em condições como envelhecimento, doenças cardiovasculares e doenças pulmonares, como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD). De modo similar, uma melhora da via de desintoxicação celular deve melhorar distúrbios causados por poluição do ar. O fator nuclear eritroide 2 relacionado ao fator 2 (Nrf2) é um fator de transcrição que ativa genes que codificam proteínas desintoxicantes. Em seu estado inativo, faz parte de um complexo citoplasmático com proteína 1 associada a ECH semelhante a Kelch (KEAP1), uma proteína sensora de 69 kDa que contém 27 resíduos de cisteína e que atua como um dímero para se ligar a Nrf2 e ubiquitina ligase E3 Cul3.
[0008] Nrf2 pertence a uma família cap ‘n’ collar de fatores de transcrição de zíper de leucina básica. Nrf2 é ativado através da modificação dos grupos SH de KEAP1 e da translocação para o núcleo ao qual se liga, juntamente a pequenas proteínas MAF a seu elemento de resposta antioxidante (ARE) nos promotores de seus genes-alvo. Os genes-alvo de Nrf2 estão envolvidos em respostas antioxidantes, reações de fase II e transporte. Em pacientes de COPD humanos, mostrou-se que uma ativação de Nrf2 pode recuperar fagocitose por macrófagos alveolares.
[0009] Os vários ativadores de Nrf2 estão sob desenvolvimento como substâncias farmacêuticas. Metil bardoxolona, um composto de triterpenoide oleanano sintético, está sob investigação clínica para o tratamento de doenças pulmonares. Além disso, o triterpenoide sintético RTA 408 que possui atividades antioxidantes e anti-inflamatórias foi topicamente aplicado na pele humana e foi bem tolerado por voluntários humanos saudáveis.
[0010] O envelhecimento se deve em parte a estresse oxidativo, isto é, oxidação e, desse modo, danos a moléculas celulares. Muitas doenças crônicas são associadas ao envelhecimento. Já que o Nrf2 é um fator crucial para desintoxicação e para defesas antioxidantes de hospedeiro, o mesmo pode ajudar a desacelerar o envelhecimento. Isso foi mostrado em diferentes modelos de animal bem estabelecidos, e suspeita-se que, em seres humanos mais velhos, o Nrf2 é constitutivamente ativo.
[0011] Brotos de brócolis ricos em glucorafanina, o precursor da sulforafano ativador de Nrf2, atenuaram respostas alérgicas nasais a partículas de escape de diesel. Em um estudo de intervenção humana recente, mostrou-se que brotos de brócolis melhoraram a desintoxicação de alguns poluentes transportados pelo ar, em que uma maior ocorrência de conjugados derivados de glutationa de benzeno e acroleína, isto é, metabólitos de fase II, poderia ser mostrada na urina (Egner et al 2014. Cancer Prev Res Publicado online primeiramente em 9 de junho de 2014).
[0012] É desejável ter compostos ou extratos naturais que possam ser usados como uma substância nutracêutica, substância farmacêutica ou aditivo alimentar que funcionaria através da via de Nf2 para proteger contra a poluição do ar.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0013] Constatou-se, de acordo com esta invenção, que frações de um extrato de Laurus nobilis são ativadores de via de Nrf2 potentes e, como tais, podem ser usados como agentes de desintoxicação geral, de modo similar ao sulforafano. Constatou-se que essas frações de extrato têm atividades anti-inflamatórias e ativadoras de Nrf2 em linhagens de células de pulmão humano tratadas com matéria particulada de Diesel. Preferencialmente, as frações podem ser usadas para proteger o coração, os pulmões e o sistema respiratório de uma pessoa ou animal exposto ou em risco de exposição à poluição do ar, e especialmente poluição do ar particulada.
[0014] Além do que foi dito acima, foram identificados os compostos que são os ingredientes ativos nos extratos de Laurus nobilis, detalhados abaixo. Então, esses compostos ou extratos enriquecidos nesses compostos podem ser usados para proteger o coração, os pulmões e o sistema respiratório de uma pessoa ou animal exposto ou em risco de exposição à poluição do ar, e especialmente poluição do ar particulada.
[0015] Mostrou-se que frações de extrato de L. nobilis podem reduzir citocinas pró-inflamatórias induzidas por matéria particulada de Diesel e podem ativar o fator de transcrição Nrf2. O Nrf2 é um elemento crucial em vias de desintoxicação intracelular e diminui a expressão de citocinas inflamatórias. Portanto, as frações de extrato de Laurus nobilis podem ser usadas para reduzir os efeitos colaterais da poluição do ar de modo geral (e especialmente de poluição do ar particulada), os quais incluem: problemas cardiovasculares, doenças respiratórias e inflamação crônica de tecidos que entram em contato com partículas transportadas pelo ar.
[0016] Propriedades antidiabéticas, anti-inflamatórias e anti-hiperlipidêmicas das folhas de Laurus nobilis foram detectadas (Bower A et al 2016 Crit Rev Food Sci Nutr. 2016 56(16):2728-46.). Até a presente data, nenhum efeito de Laurus nobilis em doenças relacionadas à poluição do ar foi descrito. Pela primeira vez, foram encontradas atividades anti-inflamatórias e ativadoras de Nrf2 em linhagens de células de pulmão humano tratadas com matéria particulada de Diesel.
[0017] Os ingredientes ativos foram identificados como a seguir: Fórmula I: (denominada Amostra LN-3.12 na seção de Exemplos): 2 CH2 HO 1 16 14 4 6 7 3 5 H2C 8 9 10 15 O 12 11 13 CH2 18
O 17 Fórmula 2 (denominada LN-3.14 na seção de Exemplos):
OH CH 15 3 16 9 5 3 7 1 2 H 8 6 4 11 CH2 H 10 H 17 CH3 O 12 14 13
O 18 Fórmula 3 (denominada LN-3.16 e LN-3.19 na seção de Exemplos): H2C 16 CH3 H 7 20 2 6 O 4 21 19 10 O 1 5 9 14 8 H 3 H CH2 H2C H 12 15 O 18 11 13
O 17
[0018] Ainda outra modalidade desta invenção é um composto selecionado a partir do grupo que consiste em: Fórmula I, Fórmula 2, Fórmula 3 e misturas de pelo menos dois desses compostos, na fabricação de um medicamento para o uso na proteção contra efeitos prejudiciais da poluição do ar.
[0019] Outra modalidade desta invenção é um extrato de Laurus nobilis enriquecido em pelo menos um composto selecionado a partir do grupo que consiste na Fórmula 1, 2 e 3 e em misturas de pelo menos dois desses compostos. Tais extratos enriquecidos podem ser administrados para proteger, melhorar ou diminuir o risco de condição adversa cardiovascular e/ou respiratória resultante da exposição à poluição do ar, preferencialmente poluição do ar em matéria particulada, em que a condição adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em: óbito prematuro em pessoas que sofrem de doença cardíaca ou pulmonar, infartos não fatais, frequência cardíaca irregular, asma ou asma agravada, função pulmonar diminuída, exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e sintomas respiratórios aumentados, como irritação das vias aéreas, tosse e/ou dificuldade de respirar.
DEFINIÇÕES
[0020] “Pessoa saudável” significa uma pessoa que a) não foi diagnosticada com ou não apresenta sintomas de nenhuma das seguintes doenças ou condições: doença cardiovascular (incluindo ter tido um infarto não fatal, frequência cardíaca irregular e sistema circulatório debilitado), diabetes tipo 2 e doença respiratória, asma ou asma agravada, função pulmonar diminuída ou outras condições que resultam em dificuldade de respirar).
[0021] “Poluição do ar particulada” se refere ao ar que contém partículas que são classificadas como nanopartículas ou têm um tamanho de partícula de PM2,5 ou menos. Essas partículas diminutas podem ser o resultado de “fontes naturais”, como emissão vulcânica, tempestades de areia, incêndios florestais, fumaça de incêndio em pastagem e similares, ou como resultado de atividade humana, como emissões automotivas, emissões de fábricas ou outras atividades, incluindo tabagismo.
[0022] “Saúde cardiovascular” é definida como a ausência de condições associadas ao funcionamento cardiovascular anormal, como: arteriosclerose, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, trombose, doença arterial periférica ou fluxo sanguíneo cerebral diminuído e diabetes
(Tipo I ou Tipo 2) e seus problemas cardiovasculares associados.
[0023] “Saúde respiratória” é definida como a ausência de afeções associadas ao funcionamento respiratório anormal, como: asma, enfisema, bronquite, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), alergias do tipo febre dos fenos, tosses devido a irritações, infecções pulmonares, sintomas de resfriado comum e sinusite crônica.
[0024] “Poluição do ar”, como usado no presente documento, se refere a condições em que particulados, moléculas biológicas ou outras substâncias potencialmente prejudiciais foram introduzidos no ar. Exemplos de categorias de poluentes incluem: • Óxidos de enxofre, como aqueles produzidos como resultado de combustão de carvão e petróleo; • Óxidos de nitrogênio, como aqueles produzidos por combustão em alta temperatura, incluindo dióxido de nitrogênio (um dos poluentes do ar mais proeminentes, é um gás castanho-avermelhado com um odor forte característico); • Monóxido de carbono que pode ser produzido por combustão incompleta de combustível e escape veicular; • Compostos orgânicos voláteis podem incluir compostos do tipo metano ou não metano e são frequentemente denominados gases de estufa; • Particulados (também denominados matéria particulada ou MP) que são partículas sólidas ou líquidas pequenas que são suspensas na atmosfera. As origens podem ser “naturais”, como de emissões vulcânicas, tempestades de areia ou incêndios florestais e de pastagem, ou podem ser resultado de atividades humanas. • Poluição na forma de fuligem, gases e outra matéria que estão na forma de partículas minúsculas, denominadas “matéria particulada respirável”. A matéria particulada respirável é categorizada por tamanho, como abaixo de 10 ou 2,5 mícrons de diâmetro aerodinâmico (PM10 ou PM2,5, respectivamente), ou como nanopartículas (menos de 100 nm de diâmetro, ou PM0,1). Essas partículas são frequentemente provenientes de emissões veiculares, particularmente combustível diesel ou de maquinário com motor a diesel. • “Melhora do risco” de uma condição adversa significa: proteção contra a ocorrência da condição; prevenção contra a ocorrência da condição; atraso do aparecimento de uma condição; diminuição da severidade de uma condição que já ocorreu; diminuição do tempo durante o qual a condição persiste; e/ou eliminação da condição.
[0025] “Extrato enriquecido” significa um extrato contendo pelo menos um composto da Fórmula 1, da Fórmula 2 e/ou da Fórmula 3 em uma % em peso que é pelo menos 10 % maior do que aquela encontrada em uma planta Laurus nobilis.
[0026] Particulados de atividades humanas são ligados a muitos perigos à saúde, incluindo doença cardíaca, e condições respiratórias adversas, incluindo câncer de pulmão.
[0027] Fumaça de cigarro também contém PMs, bem como outras substâncias químicas que também são encontradas no ar poluído. Então, outro aspecto desta invenção é o uso de uma fração de extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3 e/ou misturas de pelo menos dois desses compostos para proteger uma pessoa exposta ou em risco de exposição à fumaça de cigarro. Outro aspecto é um método de diminuição do risco de condições adversas em uma pessoa exposta à fumaça de cigarro que compreende administrar à pessoa em risco uma quantidade eficaz de frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo de Fórmula 1, 2 e 3 ou e misturas de pelo menos dois desses compostos.
[0028] MP inclui poeira, sujeira, fuligem e fumaça. As partículas denominadas “partículas grossas inaláveis” têm diâmetros maiores que 2,5 micrômetros, porém menores que 10 micrômetros. “Partículas finas” são menores, tendo diâmetros de menos de 2,5 micrômetros. São tipicamente responsáveis por visibilidade reduzida e névoa. Muitas das partículas finas são “partículas secundárias”, as quais são os produtos finais de reações químicas na atmosfera que ocorrem quando dióxidos de enxofre e óxidos de nitrogênio são emitidos por usinas elétricas, automóveis e outras atividades industriais.
[0029] As partículas finas são particularmente problemáticas já que podem penetrar profundamente nos pulmões e na corrente sanguínea e podem causar potencialmente problemas de saúde graves, incluindo: O óbito prematuro em pessoas que sofreram de doenças cardíacas ou pulmonares, Infartos não fatais Frequência cardíaca irregular Asma ou asma agravada
Função pulmonar diminuída Exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) Sintomas respiratórios aumentados, como irritação das vias aéreas, tosse e/ou dificuldade de respirar.
[0030] Então, outro aspecto desta invenção é o uso de frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3 e/ou misturas de pelo menos dois desses compostos para proteger, melhorar ou diminuir o risco de condição adversa cardiovascular e/ou respiratória resultante da exposição à poluição do ar, preferencialmente poluição do ar em matéria particulada, em que a condição adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em: óbito prematuro em pessoas que sofrem de doença cardíaca ou pulmonar, infartos não fatais, frequência cardíaca irregular, asma ou asma agravada, função pulmonar diminuída, exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e sintomas respiratórios aumentados, como irritação das vias aéreas, tosse e/ou dificuldade de respirar. Outro aspecto é um método para diminuir o risco de condições adversas em uma pessoa exposta à poluição do ar que compreende administrar frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3 e misturas de pelo menos dois desses compostos a uma pessoa que necessita dos mesmos, e em que a condição adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em: óbito prematuro em pessoas que sofrem de doença cardíaca ou pulmonar, infartos não fatais, frequência cardíaca irregular, asma ou asma agravada, função pulmonar diminuída, exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e sintomas respiratórios aumentados, irritação das vias aéreas, tosse e/ou dificuldade de respirar.
[0031] Outro aspecto desta invenção é um método de proteção, melhora ou diminuição do risco de condição adversa cardiovascular e/ou respiratória resultante da exposição à poluição do ar, preferencialmente poluição do ar em matéria particulada, em que a condição adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em: óbito prematuro em pessoas que sofrem de doença cardíaca ou pulmonar, infartos não fatais, frequência cardíaca irregular, asma ou asma agravada, função pulmonar diminuída, exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e sintomas respiratórios aumentados, como irritação das vias aéreas, tosse e/ou dificuldade de respirar, que compreende administrar uma fração de um extrato de Laurus nobilis, um extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, e/ou misturas de pelo menos dois desses compostos.
COMBINAÇÕES COM OUTROS INGREDIENTES ATIVOS
[0032] Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, e/ou misturas de pelo menos dois desses compostos desta invenção podem ser combinadas a outros ingredientes ativos para produzir uma composição que tem resultados benéficos. Exemplos de demais ingredientes ativos incluem Vitamina E, extrato de tomate solúvel em água, resveratrol, Vitamina D, 25-hidroxivitamina D3, hidroxitirosol, ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs),
Vitamina A e misturas dos mesmos.
Então, esta invenção também inclui a seguinte combinação de ingredientes: Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e Vitamina E; Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e extrato de tomate solúvel em água (como FRUITFLOW® disponível junto à DSM Nutritional Products, Suíça); Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e resveratrol; Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e Vitamina D; Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e Vitamina D3 25-OH; Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e hidroxitirosol; Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e Ácidos graxos poli- insaturados (PUFAs); e Frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos e Vitamina A.
[0033] Em cada um dos casos acima, a quantidade das frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos é como detalhada neste relatório descritivo, e a quantidade do segundo ingrediente está presente em uma quantidade que é a quantidade diária máxima conhecida na técnica para cada ingrediente.
DOSAGENS
[0034] Uma dose diária recomendada de um extrato de Laurus nobilis seria de até 2 gramas/dia para um adulto. Para extratos enriquecidos, a quantidade seria suficiente para fornecer de 0,1 mg a 10 mg do ingrediente ativo (ou ingredientes ativos) por dia. Para compostos da Fórmula 1, 2 ou 3 como um ingrediente ativo único, uma dose diária é de 0,1 mg a 10 mg; preferencialmente de 0,5 a 8 mg por dia e mais preferencialmente 1-6 mg por dia. Para combinações dos ingredientes ativos, as dosagens podem ser ajustadas para que as dosagens dos ingredientes combinados sejam de pelo menos 0,1 a 10 mg por dia, porém não devem exceder 30 mg por dia.
[0035] Se desejado, a ingestão diária pode ser dividida em duas ou mais dosagens, como comprimidos duas vezes ao dia.
[0036] Para animais não humanos, as dosagens humanas acima podem ser ajustadas para o peso corporal do animal.
FORMULAÇÕES
[0037] A composição da presente invenção está preferencialmente na forma de composição nutricional, como alimento fortificado, ração fortificada ou bebidas fortificadas, ou na forma de alimento/ração líquida fortificada (como drinks ou shots), pílulas ou cápsulas para animais, incluindo seres humanos.
[0038] As composições dietéticas e farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem estar em qualquer forma galênica que seja adequada para administração ao corpo do animal, incluindo o corpo humano, especialmente em qualquer forma que é convencional para administração oral, por exemplo, em forma sólida, como (aditivos/suplementos para) alimento ou alimentação, pré-mistura de alimento ou alimentação, alimento ou alimentação fortificada, comprimidos, pílulas, grânulos, drágeas, cápsulas e formulações efervescentes como pós e comprimidos, ou em forma líquida como soluções, emulsões ou suspensões como, por exemplo, bebidas, pastas e suspensões oleosas. As pastas podem ser encapsuladas em cápsulas com invólucro duro ou mole, através do que as cápsulas apresentam, por exemplo, uma matriz de (peixe, suíno, ave, vaca) gelatina, proteínas vegetais ou sulfonato de lignina. Os exemplos para outras formas de aplicação são formas para administração transdérmica, parenteral ou injetável. As composições dietéticas e farmacêuticas podem estar na forma de formulação com liberação controlada (retardada). As composições da presente invenção não são administradas topicamente, como aplicação à passagem nasal.
[0039] As composições dietéticas e farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem conter ainda hidrocoloides protetores (como gomas, proteínas, amidos modificados), ligantes, agentes formadores de filme, agentes/materiais encapsulantes, materiais de parede/invólucro, compostos de matriz, revestimentos, emulsificantes, agentes tensoativos, agentes solubilizantes (óleos, gorduras, ceras, lecitinas, etc.), adsorventes, carreadores, cargas, cocompostos, agentes dispersantes, agentes umectantes, auxiliares de processamento (solventes), agentes de fluxo, agentes mascaradores de sabor, agentes de aumento de peso, agentes gelificantes, agentes formadores de gel, antioxidantes e antimicrobianos.
[0040] Exemplos de alimentos são barras de cereal, produtos lácteos, como iogurtes, e itens de confeitaria, como tortas e biscoitos. Os exemplos de alimento fortificado são barras de cereal, e itens de confeitaria, como pão, baguetes, roscas, bolos e biscoitos. Os exemplos de suplementos dietéticos são comprimidos, pílulas, grânulos, drágeas, cápsulas e formulações efervescentes, na forma de bebidas não alcoólicas, como refrigerantes, sucos de fruta, limonadas, bebidas parecidas com água, chás e bebidas à base de leite, na forma de alimento líquido, como sopas e produtos lácteos (bebidas do tipo muesli).
[0041] As bebidas abrangem bebidas não alcoólicas e alcoólicas, bem como preparações líquidas para serem adicionadas à água potável e alimento líquido. As bebidas não alcoólicas são, por exemplo, refrigerantes, bebidas esportivas, sucos de fruta, sucos de vegetal (por exemplo, suco de tomate), limonadas, chás e bebidas à base de leite. Os alimentos líquidos são, por exemplo, sopas e produtos lácteos (por exemplo, bebidas do tipo muesli).
[0042] Além das frações de um extrato de Laurus nobilis, extrato enriquecido ou pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, ou misturas de pelo menos dois desses compostos, as composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem conter ainda aditivos e adjuvantes farmacêuticos adicionais, excipientes ou diluentes, incluindo, mas sem limitação, água, gelatina de qualquer origem, gomas vegetais, ligninsulfonato, talco, açúcares, amido, goma arábica, óleos vegetais, polialquileno glicóis, agentes saborizantes, conservantes, estabilizantes, agentes de emulsificação, tampões, lubrificantes, corantes, agentes de molhagem, cargas e similares.
[0043] Os seguintes Exemplos não limitativos são apresentados para melhor ilustrar a invenção. EXEMPLO 1 Ativação de via de Nrf2 Métodos:
[0044] Ensaio de repórter de luciferase com o uso de células H4IIE-ARE8L:
[0045] As células H4IIE-ARE8L são uma linhagem celular de hepatoma de rato que é transfectada de modo estável com um gene repórter de luciferase, o qual é controlado por elementos de resposta antioxidante repetidos oito vezes (ARE) (Kratschmar DV, et al 2012. PloS One. 2012; 7 (5): e36774).
[0046] O meio para células H4IIE-ARE8L era Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) com alto teor de glicose contendo Soro bovino fetal (FBS) a 10 % ativado por calor. Os meios foram trocados a cada dois a três dias. O meio de ensaio de DMEM usou FBS tratado por carvão (DMEMct).
[0047] O ensaio de transativação foi realizado em placas de 96 poços. As placas foram semeadas com aproximadamente
40.000 células por poço em 100 µl de DMEMct e incubadas de um dia para o outro a 37 °C. Então, os compostos de teste foram diluídos em DMEDct e dados para as células como descrito abaixo. As células foram incubadas por pelo menos mais 16 h a 37 °C e CO2 a 5 %. As células foram equilibradas à temperatura ambiente. A lise das células foi feita adicionando-se 100 µl de solução de lise, tampão luciferase Steady-Glo© de acordo com o fabricante (Promega) contendo 0,5 mM de DTT por poço e incubada por 10 min à temperatura ambiente com agitação moderada. A luminescência foi medida em 2 horas após a incubação em um luminômetro (Mithras, Berthold Technologies).
[0048] O controle positivo era 5 µM de R-sulforafano (LKT Laboratories Cat. S8046) em DMSO a 0,5 %, concentrações finais respectivamente. O controle negativo eram células em DMSO a 0,5 %.
[0049] Os ensaios de sobrevivência celular das células H4IIE-ARE8L foram realizados com Reagente de Viabilidade Celular PrestoBlue® (ThermoFisher Scientific) de acordo com o protocolo do fabricante. As concentrações não tóxicas dos extratos, frações e compostos individuais foram selecionadas para o ensaio de atividade de Nrf2. Resultados:
[0050] Foi usada uma linhagem celular de hepatoma de rato que foi transfectada de modo estável com um construto que contém oito elementos de ARE em tandem em frente a um gene repórter de luciferase (H4IIE-ARE8L) (Kratschmar DV, et al 2012. PloS One. 2012;7(5):e36774). Todos os extratos, frações e compostos puros foram testados para concentrações que induzem toxicidade. As concentrações não tóxicas foram, então, selecionadas para tratar células como descrito na seção de métodos.
[0051] Em uma primeira triagem de 1654 extratos de planta, frações e compostos puros com o ensaio de ativação de Nrf-2 recombinante, quatro frações de um extrato de Laurus nobilis mostraram uma ativação significativa de Nrf- 2 (Tabela 1). Todo o extrato de Laurus nobilis estava inativo, porém algumas frações do extrato mostraram atividade. Sem se ater à teoria, acredita-se que isso pode ser explicado como a) o composto ativo (ou compostos ativos) está muito diluído em todo o extrato para que atividade seja registrada, porém está mais concentrado na fração; ou b) o extrato pode conter um inibidor que é removido durante a purificação, embora isso seja menos provável que a).
[0052] Todos os extratos e frações testadas não eram tóxicas para as células H4IIE-ARE8L nas concentrações usadas. Tabela 1: Ativação de Nrf-2 de R-sulforafano, DMSO e frações de um extrato de Laurus nobilis nas concentrações indicadas. A atividade de Nrf-2 é dada em unidades relativas de fluorescência de luciferase. (Para comparação, o calor do R-sulforafano de controle positivo é ajustado em
1,0; n.s.: não significativo.) Composto Conc. Final Média Desvio µg / ml padrão R-Sulforafano 4,55 13233 1299 DMSO 0,45 % 2921 125 Fração de Laurus nobilis 22235 12844 C-0542-E-08 Fração de Laurus nobilis 12376 2374 C-0542-G-04 Fração de Laurus nobilis 11229 2344 C-0542-F-05 Fração de Laurus nobilis 5923 1362 C-0542-F-02 EXEMPLO 2 Diminuição de marcadores inflamatórios induzida por Partículas de Diesel Métodos:
[0053] A linhagem celular epitelial brônquica humana BEAS-2B era da ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA) e foi cultivada em Meio de Crescimento de Meio de Crescimento de Célula Epitelial Brônquica (BEGM, Lonza, Wakersville, MD) em frascos plásticos de superfície CellBIND® (Corning Inc., Corning, NY). A linhagem celular A549 epitelial alveolar humana adenocarcinômica foi obtida a partir de ATCC e cultivada em Meio F-12 de Kaighn de Modificação do Meio Ham (meio F-12K) (Life Technologies, EUA), suplementado com FBS a 10 % (Sigma, Saint-Louis, MO). Essas células foram cultivadas a 37 °C em uma atmosfera umidificada contendo CO2 a 5 %.
[0054] As células BEAS-2B foram semeadas em placas de cultura de superfície CellBIND® de 12 poços (Corning Inc.) a 3 a 4 × 105 células por poço. As células A549 foram semeadas em placas de 12 poços a 2 x 105 células por poço.
[0055] Matéria Particulada de Diesel (Material de Referência Padrão SRM 1650b, National Institute of Standards & Technology, NIST, Gaithersburg, MD) a 80 mg/ml DMSO (100 %) foi sonicada por 5 min e posteriormente diluída 400 vezes em meio. Essa diluição foi diluída mais duas vezes para o ensaio.
[0056] Após 24 h, as células foram tratadas com a Matéria Particulada de Diesel diluída a 100 µg/ml e na presença de diferentes concentrações de Extratos de Laurus nobilis, outros extratos vegetais, frações e compostos como indicado. As concentrações de DSMO finais eram de 0,175 %. As células não tratadas ou células tratadas com DMSO a 0,175 % foram usadas como controles. Após 24 h, os sobrenadantes de célula foram coletados.
[0057] As concentrações de IL-6 e IL-8 nos sobrenadantes foram determinadas por Luminex kits (BIO-RAD Laboratories, Hercules, CA) e usadas na LiquiChip Workstation IS 200 (Qiagen, Hilden, Alemanha). Os dados foram avaliados com o software LiquiChip Analyser (Qiagen).
[0058] Os ensaios de sobrevivência celular das células BEAS-2B e A549 células foram realizados com Reagente de Viabilidade Celular AlamarBlue® (ThermoFisher Scientific) de acordo com o protocolo do fabricante. As concentrações não tóxicas dos extratos, frações e compostos individuais foram selecionadas para os ensaios. A PGE2 secretada foi determinada por Ensaio Imunoenzimático (EIA) (Cayman Chemicals, Ann Harbor, WI).
[0059] Valores médios, desvio padrão e valores p com teste t de Student foram calculados com Excel. Os valores p maiores que 0,05 foram considerados como indicação para significância. Resultados:
[0060] Frações de um extrato de Laurus nobilis foram testadas quanto à sua capacidade de inibir secreção de IL-6 induzida por Matéria Particulada de Diesel (MP) em linhagens celulares de pulmão humano. Células BEAS-2B não tratadas não secretaram IL-6 (Tabela 2, linha 2). O solvente DMSO mostrou uma diminuição moderada em secreção de IL-6 de células BEAS-2B e, desse modo, todos os valores das frações de Laurus nobilis testadas devem ser comparados ao controle de PM na presença de DMSO (Tabela 2, linhas 1 e 3). As partículas de TiO2 não levaram a um aumento de secreção de IL-6, o que mostra que um efeito físico das partículas não é responsável pelos efeitos (Tabela 2, linha 5). O lipopolissacarídeo (LPS), um indutor conhecido de IL- 6, teve um forte efeito; foi 40 vezes mais forte que PM e DMSO (Tabela 2, linhas 1 e 4). Tabela 2: Secreção de IL-6 (pg/ml) de células BEAS-2B tratadas com Matéria Particulada de Diesel (MP) na presença de compostos como indicado. A concentração de MP era sempre 100 µg/ml. A concentração de IL-6 da MP de controle positivo com DMSO foi ajustada a 100 % para comparação. Tratamento Concentração IL-6 Desvio % de valor [pg/ml] padrão MP + p DMSO (teste t) MP + DMSO 0,175 % 84 4 100 1 Células 1,6 0,1 1 0,001 não tratadas MP 119 4 141 0,012 LPS 10 µg /ml 3760 424,3 4482 0,007
Tratamento Concentração IL-6 Desvio % de valor [pg/ml] padrão MP + p DMSO (teste t) TiO2 100 µg /ml 1,5 0,2 1 0,001
[0061] A fração de extratos de Laurus nobilis foi tratada como mostrado na Tabela 3, abaixo. O controle positivo, um extrato de Withania somnifera WS-7.1, mostrou uma diminuição significativa de secreção de IL-6 em células BEAS-2B (Tabela 3, linha 5). Nenhuma das frações de Laurus nobilis mostrou uma diminuição significativa. Tabela 3: Secreção de IL-6 (pg/ml) de células BEAS-2B tratadas com Matéria Particulada de Diesel (MP) na presença de diferentes frações de extrato de Laurus nobilis. A concentração de MP era sempre 100 µg/ml. A concentração de IL-6 da MP de controle positivo com DMSO foi ajustada a 100 % para comparação. Tratamento Concentração IL-6 Desvio % de valor p [pg/ml] padrão MP + (teste DMSO t) MP + DMSO 0,175 % 61 5,1 100 1 Células 0,9 0 1 não tratadas MP 81,2 10,2 133 0,037 LPS 10 µg/ml 6477 336 10612 0,000005 PM + 25 µg/ml 23,4 1,1 38 0,0002 Withania somnifera WS-7.1 PM + C- 1 µg/ml 75,9 5,5 124 0,026 0542-C-02 PM + C- 1 µg/ml 76,9 2,8 126 0,009 0542-D-01 PM + C- 1 µg/ml 69,2 10,4 113 0,290 0542-D-05 PM + C- 1 µg/ml 68 9,6 111 0,329 0542-E-02
Tratamento Concentração IL-6 Desvio % de valor p [pg/ml] padrão MP + (teste DMSO t) PM + C- 1 µg/ml 68,2 3,4 112 0,109 0542-E-03 PM + C- 1 µg/ml 57,4 4,2 94 0,387 0542-E-04 PM + C- 1 µg/ml 79,1 4,6 130 0,010 0542-E-07 PM + C- 1 µg/ml 63,5 9,8 104 0718 0542-E-08 PM + C- 1 µg/ml 75,4 9,9 123 0,089 0542-F-02 PM + C- 1 µg/ml 77,3 5,7 127 0,021 0542-F-03 PM + C- 1 µg/ml 91,3 9,1 150 0,007 0542-F-05 PM + C- 1 µg/ml 85,9 8,7 141 0,013 0542-G-08 PM + C- 1 µg/ml 94,7 4,2 155 0,001 0542-G-10 PM + NIG- 1 µg/ml 67,3 7,1 110 0,282 014682 PM + NIG- 1 µg/ml 67,7 15,4 111 0,516 008368 PM + NIG- 1 µg/ml 71 7,5 116 0,130 006259 PM + V- 5 µg/ml 90,8 7,2 149 0,004 00075-W-02
[0062] A secreção de IL-6 na presença de PM da linhagem celular de pulmão humano A549 foi diminuída por diversas frações de Laurus nobilis. Os resultados são mostrados na Tabela 4, abaixo. Foram significativamente positivas frações C-0542-E-04 (Linha 11) e fração C-0542-F-02 (linha 14). Tabela 4: Secreção de IL-6 (pg/ml) de células A549 tratadas com Matéria Particulada de Diesel (MP) na presença de compostos puros e frações de extrato de Laurus nobilis, como indicado. A concentração de MP era sempre 100 µg/ml. A concentração de IL-6 da MP de controle positivo com DMSO foi ajustada a 100 % para comparação. Tratamento Concentração IL-6 Desvio % de valor [pg/ml] padrão MP + p DMSO (teste t) MP + DMSO 0,175 % 43,2 2,8 100 1 Células não 8 0,6 19 0,0005 tratadas MP 51,2 0,4 118 0,033 LPS 10 µg/ml 19,6 2,1 45 0,002 PM + Withania 25 µg/ml 32,5 0,6 75 0,003 somnifera WS-
7.1 PM + C-0542- 1 µg/ml 48,3 0,3 112 0,035 C-02 PM + C-0542- 1 µg/ml 46,3 2 107 0,191 D-01 PM + C-0542- 1 µg/ml 47,3 5,8 109 0,333 D-05 PM + C-0542- 1 µg/ml 45,2 3,2 105 0,464 E-02 PM + C-0542- 1 µg/ml 48,3 5,8 112 0,240 E-03 PM + C-0542- 1 µg/ml 37,5 0,3 87 0,026 E-04 PM + C-0542- 1 µg/ml 40,5 1,9 94 0,241 E-07 PM + C-0542- 1 µg/ml 42,8 1,8 99 0,848 E-08 PM + C-0542- 1 µg/ml 28,3 2,3 65 0,002 F-02 PM + C-0542- 1 µg/ml 45 2,9 104 0,472 F-03 PM + C-0542- 1 µg/ml 43,7 2,7 101 0,813 F-05 PM + C-0542- 1 µg/ml 40,5 2,7 94 0,301 G-08 PM + C-0542- 1 µg/ml 40,3 1,5 93 0,193 G-10 PM + NIG- 1 µg/ml 49,3 1,5 114 0,030 014682 PM + NIG- 1 µg/ml 48,5 1,5 112 0,044 008368 PM + NIG- 1 µg/ml 45,4 5,3 105 0,556 006259 PM + V-00075- 5 µg/ml 42,8 1,2 99 0,847 W-02
[0063] Além disso, a secreção de IL-8 na presença de PM da linhagem celular de pulmão humano A549 foi diminuída por diversas frações de Laurus nobilis. Os resultados são mostrados na Tabela 5, abaixo. Novamente, foram significativamente positivas frações C-0542-E-04 (Linha 11) e fração C-0542-F-02 (Linha 14). Tabela 5: Secreção de IL-8 (pg/ml) de células A549 tratadas com Matéria Particulada de Diesel (MP) na presença de frações de extrato de Laurus nobilis, como indicado. A concentração de MP era sempre 100 µg/ml. A concentração de IL-8 da MP de controle positivo com DMSO foi ajustada a 100 % para comparação. Tratamento Concentração IL-8 Desvio % de valor [pg/ml] padrão MP + p DMSO (teste t) MP + DMSO 0,175 % 290 30,8 100 1 Células não 117 14,1 40 0,006 tratadas MP 333 21,2 115 0,191 LPS 10 µg/ml 406 50,9 140 0,046 PM + Withania 25 µg/ml 192,7 24 66 0,012 somnifera WS-
7.1 PM + C-0542- 1 µg/ml 382 65,6 132 0,093 C-02 PM + C-0542- 1 µg/ml 328 58,8 113 0,378 D-01 PM + C-0542- 1 µg/ml 280,3 7,4 97 0,625 D-05 PM + C-0542- 1 µg/ml 296,7 34,1 102 0,814 E-02 PM + C-0542- 1 µg/ml 326,7 65,1 113 0,427 E-03 PM + C-0542- 1 µg/ml 240,7 28,6 83 0,112 E-04 PM + C-0542- 1 µg/ml 273,7 12,7 94 0,444 E-07
Tratamento Concentração IL-8 Desvio % de valor [pg/ml] padrão MP + p DMSO (teste t) PM + C-0542- 1 µg/ml 268 23,4 92 0,381 E-08 PM + C-0542- 1 µg/ml 235,3 26,3 81 0,080 F-02 PM + C-0542- 1 µg/ml 290 32,2 100 1 F-03 PM + C-0542- 1 µg/ml 357,7 18,1 123 0,031 F-05 PM + C-0542- 1 µg/ml 266,7 28,3 92 0,389 G-08 PM + C-0542- 1 µg/ml 295,3 26,1 102 0,830 G-10 PM + NIG- 1 µg/ml 320,7 30 111 0,284 014682 PM + NIG- 1 µg/ml 288,3 31,7 99 0,951 008368 PM + NIG- 1 µg/ml 352,7 11,5 122 0,030 006259 PM + V-00075- 5 µg/ml 286 36,1 99 0,891 W-02
[0064] Então, a secreção de MCP-1 na presença de PM da linhagem celular de pulmão humano A549 foi medida com as mesmas frações de Laurus nobilis. Nenhuma alteração significativa pôde ser observada. EXEMPLO 3 Identificação de Ingredientes Ativos.
[0065] Quatro compostos foram isolados de amostras positivas, como discutido ao final deste Exemplo, e analisados por espectroscopia por RMN a fim de elucidar a estrutura. Os resultados são mostrados abaixo:
Proposta de ID de amostra Quantidade estrutura LN-3.12 25 mg CH2
HO H2C
O CH2
O LN-3.14 37 mg OH CH3 CH2 CH3 O
O LN-3.16 23 mg CH3 H2C
O
O H2C CH2
O
O LN-3.19 4 mg H2C CH3
O
O H2C CH2
O O
[0066] Espectros são dados abaixo: LN- 3.12: (Fórmula 1) 2 CH2 HO 1 16 14 4 6 7 3 5 H2C 8 9 10 15 O 12 11 13 CH2 18
O 17
[0067] O sistema de numeração é usado para atribuição na Tabela 6, abaixo. Tabela 6. Atribuição característica de 1H e 13C da estrutura da Fórmula 1. Átomo δ Int. Mult. δ HMBC NOESY nº (1H)/ (1H) (1H) (13C)/ ppm ppm 1 4,53 CH tt 74,3 C2, C15, C3 2,26 2 2,26 CH2 m 40,1 C1, C6, C4 1,73, 1,73 2,97 2,26, 2,52, 4,99 3 - C - 154,9 - - 4 2,97 CH m 44,9 Sobr. Sobr. 5 2,88 CH tt 50,6 C4, C8, C15, - C6, C3 6 - C - 150,5 - - 7 2,52 CH2 m 35,9 Sobr. Sobr. 2,21 2,52, 2,32, 1,46 8 4,14 CH dd 86,3 C10, C3 1,46, 5,33 9 2,96 CH m 46,6 Sobr. Sobr. 10 2,32 CH2 m 32,3 C7, C9, C8, 1,46, 1,46 C12, C6 2,52 2,32, 2,52 12 - C - 142,1 - - 13 - C - 172,6 - - 15 5,28 CH2 t 110,3 C5, C1, C3 5,33 5,33 5,28 16 4,94 CH2 m 114,7 C10, C7, C4, 1,46, 4,99 C5, C6 2,52 1,73 18 6,15 CH2 dd 121,0 C9, C12, C13 5,62 5,62 6,15, 2,32
[0068] A estereoquímica dessa estrutura não pôde ser determinada devido à sobreposição dos sinais dos prótons em C4, C5 e C9. LN- 3.14: (Fórmula 2)
OH CH 15 3 16 9 5 3 7 1 2 H 8 6 4 11 CH2 H 10 H 17 CH3 O 12 14 13
O 18
[0069] Fórmula 1. O sistema de numeração é usado para atribuição na Tabela 7, abaixo. Tabela 7. Atribuição característica de 1H e 13C da estrutura na Fórmula 2: Átomo δ Int. Mult. δ HMBC NOESY nº (1H)/ (1H) (1H) (13C)/ ppm ppm 1 - C - 40,8 - - 2 2,40 CH Sobr. 50,9 C16, C1, 3,63, C4, C10 2,58 3 3,64 CH dd 74,5 C5, C16, 2,37, C1, C2 1,35 4 - C - 132,9 - - 5 2,01 CH2 m 32,1 C6, C3, 0,89, 2,37 C4, C1, C2 2,37 2,01 6 5,38 CH m 121,4 C14, C2, 2,37, C3, C5 2,01, 1,85 7 2,12 CH2 m 20,8 C9, C8, 1,68 1,68 C10 2,12, 1,35, 0,89 8 2,58 CH m 50,8 C7, C2, 1,35, C10, C11, 2,40 C17 9 2,05 CH2 m 34,2 C16, C3, 1,35 1,35 C1, C7, C8 2,37, 2,58, 3,64, 1,68 10 4,03 CH dd 82,0 C1, C2, 0,89, C8, C7, 1,68, C11 1,85 11 - C - 139,0 - - 12 - C - 171,0 - -
Átomo δ Int. Mult. δ HMBC NOESY nº (1H)/ (1H) (1H) (13C)/ ppm ppm 14 1,85 CH3 m 22,3 C2, C4, C6 2,40, 4,03, 5,38 16 0,89 CH3 s 10,1 C9, C1, 4,03, C2, C3 2,05, 1,67 17 6,01 CH2 d 115,6 C8, C11, 5,51 5,51 C12 6,01, 2,12 LN- 3.16 e LN-3.19: (Fórmula) 3 H2C 16 CH3 H 7 20 2 6 O 4 21 19 10 O 1 5 9 14 8 H 3 H CH2 H2C H 12 18 15 O 11 13
O 17
[0070] Fórmula 3. O sistema de numeração é usado para atribuição na Tabela 8, abaixo. Tabela 8. Atribuição característica de 1H e 13C da estrutura na Fórmula 3. Sobr. significa sobreposto. Átomo δ Int. Mult. δ HMBC NOESY nº (1H)/ (1H) (1H) (13C)/ ppm ppm 1 5,60 CH m 74,8 C2, C3, C15 - 2 2,47 CH2 m 36,0 C4, C5, C3, 3,05, 1,87 1,87 C6, C1 2,47 3 - C - 149,2 - - 4 3,05 CH m 44,3 Sobr. 2,47, 2,22, 1,87 5 2,95 CH m 49,9 Sobr. 3,05 6 - C - 148,7 - - 7 2,54 CH2 m 34,7 Sobr. 2,22, 2,22 2,35, 1,47 2,54, 1,47 8 4,11 CH dd 84,5 C3, C5, C4, 5,40, C9, C10 1,47,
Átomo δ Int. Mult. δ HMBC NOESY nº (1H)/ (1H) (1H) (13C)/ ppm ppm 1,87, 2,54 9 2,99 CH m 44,9 Sobr. 2,35 10 2,35 CH2 m 30,7 C6, C7, C9, 1,47, 2,54 1,47 C8, C12 2,22, 2,35, 2,54 12 - C - 140,1 - - 13 - C - 170,7 - - 15 5,40 CH2 t 111,5 C3, C5, C1 5,26 5,26 5,40 16 4,97 CH2 br. s 112,9 C5, C4, C7, 1,87, 2,54 C10, C6 18 6,17 CH2 d 119,4 C9, C12, C13 5,63 5,63 6,17, 2,35 19 - C - 171,1 - - 20 2,11 CH3 s 19,8 C19, C1, C2 -
[0071] Quatro frações isoladas de um extrato de Laurus nobilis são analisadas por espectroscopia por RMN a fim de elucidar sua estrutura. As estruturas propostas foram confirmadas e caracterizadas. LN-3.16 e LN-3.19 consistem no mesmo composto. A estereoquímica proposta é baseada em experimentos de NOESY. Experimental
[0072] Os experimentos de RMN foram realizados em um espectrômetro de RMN Bruker Avance III que opera a 600 MHz de prótons correspondentes a 150 MHz de frequência de Larmor de carbono e é equipado com uma sonda TCI de 5 mm criogenicamente resfriada. Todos os experimentos foram realizados a 298 K.
[0073] Espectros foram registrados em metanol deuterado com propósitos de bloqueio. Os deslocamentos químicos foram relacionados ao solvente. Os dados foram adquiridos com o uso de TopSpin 3.6 e processados com execução de ACD/Labs em um computador pessoal.

Claims (12)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição caracterizada por compreender um ingrediente ativo selecionado a partir do grupo que consiste em: a) Frações de um extrato de Laurus nobilis, b) um extrato enriquecido de Laurus nobilis, e c) pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, e misturas de pelo menos dois desses compostos; em que a Fórmula 1 é 2 CH2 HO 1 16 14 4 6 7 3 5 H2C 8 9 10 15 O 12 11 13 CH2 18
O 17 a Fórmula 2 é
OH CH 15 3 16 9 5 3 7 1 2 H 8 6 4 11 CH2 H 10 H 17 CH3 O 12 14 13
O 18 e a Fórmula 3 é
H2C 16 CH3 H 7 20 2 6 O 4 21 19 10 O 1 5 9 14 8 H 3 H CH2 H2C H 12 18 15 O 11 13
O 17 para uso na prevenção ou melhora dos efeitos colaterais da poluição do ar.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a poluição do ar é poluição do ar particulada.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o efeito colateral é selecionado a partir do grupo que consiste em: problemas cardiovasculares, doenças respiratórias e inflamação crônica de tecidos que entram em contato com partículas transportadas pelo ar.
4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizada pelo fato de que a poluição do ar particulada é proveniente de fumaça de cigarro.
5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizada por compreender ainda um ingrediente ativo selecionado a partir do grupo que consiste em: Vitamina E, extrato de tomate solúvel em água, resveratrol, Vitamina D, 25-hidroxi vitamina D3, hidroxitirosol, ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs), Vitamina A e misturas dos mesmos.
6. Substância nutracêutica, alimento funcional ou suplemento alimentar caracterizados por compreenderem uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1-5.
7. Método de melhora dos efeitos colaterais de exposição à poluição do ar caracterizado por compreender administrar uma quantidade eficaz de uma composição que compreende um ingrediente ativo selecionado a partir do grupo que consiste em: a) frações de um extrato de Laurus nobilis, b) um extrato enriquecido de Laurus nobilis, e c) pelo menos um composto selecionado a partir do grupo da Fórmula 1, 2 e 3, e misturas de pelo menos dois desses compostos em que a Fórmula 1 é 2 CH2 HO 1 16 14 4 6 7 3 5 H2C 8 9 10 15 O 12 11 13 CH2 18
O 17 a Fórmula 2 é:
OH CH 15 3 16 9 5 3 7 1 2 H 8 6 4 11 CH2 H 10 H 17 CH3 O 12 14 13
O 18 e a Fórmula 3 é
H2C 16 CH3 H 7 20 2 6 O 4 21 19 10 O 1 5 9 14 8 H 3 H CH2 H2C H 12 15 O 18 11 13
O 17 a uma pessoa ou animal exposto ou em risco de exposição à poluição do ar.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a poluição do ar é poluição do ar particulada.
9. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o efeito colateral é selecionado a partir do grupo que consiste em: problemas cardiovasculares, doenças respiratórias e inflamação crônica de tecidos que entram em contato com partículas transportadas pelo ar.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a poluição do ar particulada é proveniente de fumaça de cigarro.
11. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por compreender ainda um ingrediente ativo selecionado a partir do grupo que consiste em: Vitamina E, extrato de tomate solúvel em água, resveratrol, Vitamina D, 25-hidroxi vitamina D3, hidroxitirosol, ácidos graxos poli- insaturados (PUFAs), Vitamina A e misturas dos mesmos.
12. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a composição é uma substância nutracêutica, alimento funcional ou suplemento alimentar.
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