JP2000502757A

JP2000502757A - 繊維染色のための酵素的方法

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Publication number: JP2000502757A
Application number: JP9523867A
Authority: JP
Inventors: イルク，オレ; バーホード，マーティン
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-20
Publication date: 2000-03-07
Also published as: CN1110599C; EP0873444B1; AU1687797A; AR008749A1; US6036729A; PL327306A1; WO1997023685A1; ATE241723T1; BR9612149A; DE69628456D1; CN1205755A; EP0873444A1; TR199801129T2; ES2200086T3

Abstract

(57)【要約】本発明は材料を染色する方法であって、（ａ）当該材料を１又は複数種の単環、二環又は多環式の芳香族又はヘテロ芳香族化合物を含んで成る水性溶液中に浸漬し；そして（ｂ）この浸漬材料を（ｉ）過酸化水素源及びペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素又は（・）１もしくは複数種の芳香族もしくはヘテロ芳香族化合物に対してオキシダーゼ活性を発揮する酵素を有する水性溶液中に浸漬することを含んで成る方法に関連する。ここで当該材料は毛皮、獣皮、皮革、絹又はウール製の布帛、糸、繊維、衣料又はフィルムである。

Description

【発明の詳細な説明】繊維染色のための酵素的方法発明の分野本発明は材料を染色する方法であって、（ａ）当該材料を１又は複数種の単環、二環又は多環式の芳香族又はヘテロ芳香族化合物を含んで成る水性溶液中に浸漬し；そして（ｂ）この浸漬材料を（ｉ）過酸化水素源及びペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素又は（ii）１もしくは複数種の芳香族もしくはヘテロ芳香族化合物に対してオキシダーゼ活性を発揮する酵素を有する水性溶液中に浸漬することを含んで成る方法に関連する。ここで当該材料は毛皮、獣皮、皮革、絹又はウール製の布帛、糸、繊維、衣料又はフィルムである。発明の背景繊維の染色は往々にして布帛及び衣料の製造において最も重要且つ費用のかさむ単独工程と考えられている。繊維産業において、２通りの主たる工程、即ちバッチ式及び連続式工程が染色のために現在利用されている。バッチ式工程においては、とりわけジェット、ドラム及びバット染色が利用されている。連続工程においては、とりわけパジング方式が利用されている。例えばI.D.Rattec，In C.M .Carr（編）「The Chemistry of the Textiles Industry」 BlackieAcademic an d Professional，Glasgow，1995，p.276 を参照のこと。主要な染料のクラスはアゾ（モノ-、ジ-、トリ等）、カルボニル（アントラキノン及びインジゴ誘導体）、シアニン、ジ−及びトリフェニルメタン、並びにフタロシアニンである。これらの染料は全て発色を担う発色基を含む。酸化／還元メカニズムの関与する３タイプの染料、即ち、バット、硫黄及びアゾ染料がある。これらの染色における酸化／還元工程の目的は染料の不溶性及び可溶性形態間での変化にある。オキシドリダクターゼ、例えばオキシダーゼ及びペルオキシダーゼが当業界において公知である。オキシドリダクターゼの一のクラスはラッカーゼ（ベンゼンジオール：酸素オキシドリダクターゼ）であり、これはフェノール及び近縁化合物の酸化を触媒する多重銅含有酵素である。ラッカーゼ媒介式酸化は適当な基質からの芳香族ラジカル中間体の生産を供する。このようにして生成される中間体の究極的なカップリングは二量、オリゴマー及びポリマー反応生成物の組合せを供する。かかる反応は自然界においては生合成経において重要であり、それはメラニン、アルカロイド、毒素、リグニン及びフミン酸の形成に至る。別のオキシドリダクターゼのクラスは過酸化水素の存在下で化合物を酸化するペルオキシダーゼである。ラッカーゼは毛髪染色に有用であることが認められている。例えば PCT出願 P CT／US95／06815 及び PCT／US95／06816 を参照のこと。ヨーロッパ特許第 0,5 04,005号はウールを 6.5〜8.0 の範囲のpHで染色するためにラッカーゼが利用できうることを開示する。 SaundersらPeroxidase，London，1964，p10 以降はペルオキシダーゼが様々なアミノ及びフェノール系化合物に作用し、発色を供することを開示している。日本国特開平６−316874号は酸素含有媒体による綿の処理を含んで成る綿を染色するための方法を開示しており、それにおいてはアスコルビン酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、カタラーゼ、ラッカーゼ、ペルオキシダーゼ及びポリフェノールオキシダーゼより成る群から選ばれる酸化還元酵素が酸素を発生させるために利用されている。 WO 91／05839 はオキシダーゼ及びペルオキシダーゼが繊維染料の転写を阻害するのに有用であることを開示している。本発明の目的は布帛を染色する酵素的方法の提供にある。発明の概要本発明は材料を染色する方法であって、（ａ）当該材料を１又は複数の官能基又は置換基により任意的に置換されている１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物を含んで成る水性溶液に浸漬する、ここで各官能基又は置換基はハロゲン；スルホ；スルホナト；スルファミノ；スルファニル；アミノ；アミド；ニトロ；アゾ；イミノ；カルボキシ；シアノ；ホルミル；ヒドロキシ；ハロカルボニル；カルバモイル；カルバミドイル；ホスホナト；ホスホニル；Ｃ_1-18アルキル；Ｃ_1-18アルケニル；Ｃ_1-18アルキニル；Ｃ_1-18アルコキシ；Ｃ_1-18オキシカルボニル；Ｃ_1-18オキソアルキル；Ｃ_1-18アルキルスルファニル；Ｃ_1-18アルキルスルホニル；Ｃ_1-18アルキルイミノ又はアミノであって１，２又は３個のＣ_1-18アルキル基により置換されているもの；より成る群から選ばれる；そして (ｂ)(ｉ) この浸漬材料を過酸化水素源及びペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素又は（ii）１もしくは複数種の芳香族もしくはヘテロ芳香族化合物に対してオキシダーゼ活性を発揮する酵素；を有する水性溶液で処理することを含んで成る方法に関連し、ここで当該材料は毛皮、獣皮、皮革、絹又はウール製の布帛、糸、繊維、衣服又はフィルムである。発明の詳細な説明材料を染色するためのオキシドリダクターゼの利用はいくつかの有意義な利点を有する。例えば、本発明の方法において利用する染色剤は安価な着色前駆体を利用する。更に、当該方法における温和な条件（例えば低温及び短い時間）は布帛に対する損傷を少なくし、且つエネルギー消費を少なくする。本発明の方法は材料、例えば布帛、糸、繊維、衣料及びフィルム染色するのに利用できうる。好ましくは、この材料は毛皮製である。別の好適な態様において、この材料は獣皮製である。別の好適な態様において、この材料は皮革製である。別の好適な態様において、この材料は絹製である。別の好適な態様において、この材料はウール製である。本発明の方法において、材料を１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物の中に浸漬する。ここで各化合物は任意的に１又は複数の官能基又は置換基により置換されており、ここで各官能基又は置換基はハロゲン；スルホ；スルホナト；スルファミノ；スルファニル；アミノ；アミド；ニトロ；アゾ；イミノ；カルボキシ；シアノ；ホルミル；ヒドロキシ；ハロカルボニル；カルバモイル；カルバミドイル；ホスホナト；ホスホニル；Ｃ_1-18アルキル；Ｃ_1-18アルケニル；Ｃ_1-18アルキニル；Ｃ_1-18アルコキシ；Ｃ_1-18オキシカルボニル；Ｃ_1-18オキソアルキル；Ｃ_1-18アルキルスルファニル；Ｃ_1-18アルキルスルホニル；Ｃ_1-18アルキルイミノ又はアミノであって１，２又は３個のＣ_1-18アルキル基により置換されたものより成る群から選ばれる。Ｃ_1-18アルキル、Ｃ_1- ₁₈ アルケニル及びＣ_1-18アルキニル基は任意の上記の官能基又は置換基により一、二又は多置換されていてよい。本発明の目的のための多環式化合物は２，３又は４個の芳香環を有する。かかる単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物には、限定することなく、アクリジン、アントラセン、アズレン、ベンベン、ベンゾフラン、ベンゾチアゾール、ベンゾチアゾリン、カルボリン、カルバゾール、シンノリン、クロマン、クロメン、クリセン、フルベン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インデン、インドール、インドリン、インドリジン、イソチアゾール、イソキノリン、イソキサゾール、ナフタレン、ナフチレン、ナフチルピリジン、オキサゾール、ペリレン、フェナントレン、フェナジン、フタリジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラゾール、ピレン、ピリダジン、ピリダゾン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、キナゾリン、キノリン、キノキサリン、スルホニル、チオフェン及びトリアジンが含まれ、それらは任意的に置換されている。かかる化合物の例には限定することなく、芳香族ジアミン、アミノフェノール、フェノール及びナフトールが含まれる。本発明において利用するための芳香族及びヘテロ芳香族化合物の例には、限定することなく下記のものが含まれる：３，４−ジエトキシアニリン２−メトキシ−ｐ−フェニレンジアミン１−アミノ−４−ｂ−メトキシエチルアミノ−ベンゼン（Ｎ−ｂ−メトキシエチル−ｐ−フェニレンジアミン）１−アミノ−４−ビス−（ｂ−ヒドロキシエチル）−アミノベンゼン（Ｎ，Ｎ −ビス−（ｂ−ヒドロキシエチル）−ｐ−フェニレンジアミン２−メチル−１，３−ジアミノ−ベンゼン（２，６−ジアミノトルエン）２，４−ジアミノトルエン２，６−ジアミノトルエン１−アミノ−４−スルホナト−ベンゼン１−Ｎ−メチルスルホナト−４−アミノベンゼン１−メチル−２−ヒドロキシ−４−アミノベンゼン（３−アミノｏ−クレゾール）１−メチル−２−ヒドロキシ−４−ｂ−ヒドロキシエチルアミノベンゼン（２ −ヒドロキシ−４−ｂ−ヒドロキシエチルアミノートルエン）１−ヒドロキシ−４−メチルアミノ−ベンゼン（ｐ−メチルアミノフェノール）１−メトキシ−２，４−ジアミノ−ベンゼン（２，４−ジアミノアニソール）１−エトキシ−２，３−ジアミノ−ベンゼン（２，４−ジアミノフェネトール）１−ｂ−ヒドロキシエチルオキシ−２，４−ジアミノ−ベンゼン（２，４−ジアミノフェノキシエタノール）１，３−ジヒドロキシ−２−メチルベンゼン（２−メチルレソルシノール）１，２，４−トリヒドロキシベンゼン１，２，４−トリヒドロキシ−５−メチルベンゼン（２，４，５−トリヒドロキシトルエン）２，３，５−トリヒドロキシトルエン４，８−ジスルホナト−１−ナフトール３−スルホナト−６−アミノ−１−ナフトール（Ｊ酸）６，８−ジスルホナト−２−ナフトール１，４−フェニレンジアミン２，５−ジアミノトルエン２−クロロ−１，４−フェニレンジアミン２−アミノフェノール３−アミノフェノール４−アミノフェノール１，３−フェニレンジアミン１−ナフトール２−ナフトール４−クロロレソルシノール１，２，３−ベンゼントリオール（ピロガロール）１，３−ベンゼンジオール（レソルシノール）１，２−ベンゼンジオール（ピロカテコール）２−ヒドロキシ−シンナミン酸３−ヒドロキシ−シンナミン酸４−ヒドロキシ−シンナミン酸２，３−ジアミノ安息香酸２，４−ジアミノ安息香酸３，４−ジアミノ安息香酸３，５−ジアミノ安息香酸メチル２，３−ジアミノベンゾエートエチル２，３−ジアミノベンゾエートイソプロピル２，３−ジアミノベンゾエートメチル２，４−ジアミノベンゾエートエチル２，４−ジアミノベンゾエートイソプロピル２，４−ジアミノベンゾエートメチル３，４−ジアミノベンゾエートエチル３，４−ジアミノベンゾエートイソプロピル３，４−ジアミノベンゾエートメチル３，５−ジアミノベンゾエートエチル３，５−ジアミノベンゾエートイソプロピル３，５−ジアミノベンゾエートＮ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジアミノ安息香酸アミドＮ，Ｎ−ジエチル−３，４−ジアミノ安息香酸アミドＮ，Ｎ−ジプロピル−３，４−ジアミノ安息香酸アミドＮ，Ｎ−ジブチル−３，４−ジアミノ安息香酸アミド４−クロロ−１−ナフトールＮ−フェニル−ｐ−フェニレンジアミン３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドピロルピロル−２−イソノミダゾール１，２，３−トリアゾールベンゾトリアゾールベンズイミダゾールイミダゾールインドール１−アミノ−８−ヒドロキシナフタレン−４−スルホン酸（Ｓ酸）４，５−ジヒドロキシナフタレン−２，７−ジスルホン酸（クロモトロビン酸）アントラ二リン酸４−アミノ安息香酸（PABA）２−アミノ−８−ナフトール−６−スルホン酸（ガンマー酸）５−アミノ−１−ナフトール−３−スルホン酸（Ｍ酸）２−ナフトール−３，６−ジスルホン酸（Ｒ酸）１−アミノ−８−ナフトール−２，４−ジスルホン酸（シカゴ酸）１−ナフトール−４−スルホン酸（ネビル−ウィンサー酸）ペリ酸Ｎ−ベンゾイルＪ酸Ｎ−フェニルＪ酸１，７−クレベス酸１，６−クレベス酸ボン酸ナフトールAS ディスパースブラック９ナフトールAS OL ナフトールAS PH ナフトールAS KB ナフトールAS BS ナフトールAS D ナフトールAS B1 モルダントブラック3CI 14640（エリオクロムブルーブラックＢ）４−アミノ−５−ヒドロキシ−２，６−ナフタレンジスルホン酸（Ｈ酸）ファットブラウンRRソルベントブラウン１（CI 11285）ヒドロキノンマンデリン酸メラミンｏ−ニトロベンズアルデヒド１，５−ジヒドロキシナフタレン２，６−ジヒドロキシナフタレン２，３−ジヒドロキシナフタレンベンジルイミダゾール２，３−ジアミノナフタレン１，５−ジアミノナフタレン１，８−ジアミノナフタレンサリチル酸３−アミノサリチル酸４−アミノサリチル酸５−アミノサリチル酸メチル−３−アミノサリチレートメチル−４−アミノサリチレートメチル−５−アミノサリチレートエチル−３−アミノサリチレートエチル−４−アミノサリチレートエチル−５−アミノサリチレートプロピル−３−アミノサリチレートプロピル−４−アミノサリチレートプロピル−５−アミノサリチレートサリチル酸アミド４−アミノチオフェノール４−ヒドロキシチオフェノールアニリン４，４′−ジアミノジフェニルアミンスルフェート４−フェニルアゾアニリン４−ニトロアニリンＮ，Ｎ−ジメチル−１，４−フェニレンジアミンＮ，Ｎ−ジエチル−１，４−フェニレンジアミンディスパースオレンジ３ディスパースイエロー９ディスパースブルー１Ｎ−フェニル−１，２−フェニレンジアミン６−アミノ−２−ナフトール３−アミノ−２−ナフトール５−アミノ−１−ナフトール１，２−フェニレンジアミン２−アミノピリミジン４−アミノキナルジン２−ニトロアニリン３−ニトロアニリン２−クロロアニリン３−クロロアニリン４−クロロアニリン４−（フェニルアゾ）レソルシノール（スーダンオレンジＧ、CI11920）スーダンレッドＢ、CI 26110 スーダンレッドＢ、CI 26050 ４′−アミノアセトアニリドアリザリン１−アントラミン（１−アミノアントラセン）１−アミノアントラキノンアントラキノン２，６−ジヒドロキシアントラキノン（アントラフラビン酸）１，５−ジヒドロキシアントラキノン（アントラルフィン）３−アミノピリジン（ニコチンアミド）ピリジン−３−カルボン酸（ニコチン酸）モーダントイエロー１、アリザリンイエローGG、GI 14025 クマジーブルーグレー、アシドブラック48、CI 65005 パランチンファストブラック WAN、アンドブラック52、CI 15711 バランチンクロムブラック 6BN、CI 15705、エリオクロムブルーブラックＲモルダンドブラック11、エリオクロムブラックＴナフトールブルーブラック、アシドブラック１、 CI 20470 １，４−ジヒドロキシアントラキノン（キニザリン）４−ヒドロキシクマリンウンベリフェロン、７−ヒドロキシクマリンエスクレチン６，７−ジヒドロキシクマリンクマリンクロモトロープ２Ｂアシドレッド 176、CI 1657 クロモトロープ２Ｂアシドレッド29、CI 16570 クロモトロープFBアシドレッド14、CI 14720 ２，６−ジヒドロキシイソニコチン酸、シトラジニン酸２，５−ジクロロアニリン２−アミノ−４−クロロトルエン２−ニトロ−４−クロロアニリン２−メトキシ−４−ニトロアニリン及びｐ−ブロモフェノール。当該材料を１又複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物を有する水性溶液の中に浸漬した後、この材料を過酸化水素源及びペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素又は１もしくは複数種の芳香族もしくはヘテロ芳香族化合物に対してオキシダーゼ活性を発揮する酵素を有する水性溶液で処理する。本発明の方法に利用する、当該材料を含んで成る染色液は水／材料比を約 0. 5：１〜約 200：１、好ましくは約５：１〜約20：１の範囲で有しうる。本発明の方法に従うと、当該１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物は、（ａ）過酸化水素源及びペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素、又は（ｂ）１もしくは複数種の単環、二環もしくは多環式芳香族もしくはヘテロ芳香族化合物、例えばフェノール及び近縁物質に対してオキシダーゼ活性を発揮する酵素により酸化されうる。ペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素には、限定することなく、ペルオキシダーゼ(EC 1.11.1.7) 及びハロペルオキシダーゼ、例えばクロロ（EC 1.11.1.10）、ブロモ(EC 1.11.1) 及びヨードペルオキシダーゼ(EC 1.11.1.8) が含まれる。オキシダーゼ活性を発揮する酵素には、限定することなく、ビリルビンオキシダーゼ（EC 1.3.3.5）、カテコールオキシダーゼ(EC 1.10.3.1)、ラッカーゼ(EC 1.10.3.2)、ｏ−アミノフェノールオキシダーゼ(EC 1.10.3.4) 及びポリフェノールオキシダーゼ(EC 1.10.3.2) が含まれる。これらの酵素の活性を決定するためのアッセイは当業者に周知である。好ましくは、この酵素はアスペルギルス(Aspergillus)、ボツリチス（Botryti s）、コリビア（Collybia）、ホメス(Fomes)、レンチヌス（Lentinus）、ミセリオフソラ（Myceliophthora）、ニューロスポラ（Neurospora）、プレウロトゥス (Pleurotus)、ポドスポラ(Podospora)、ポリポルス(Polyporus)、シタリジウム( Scytalidium)、トラメテス（Trametes）及びリゾクトニア(Rhizoctonia)より成る群から選ばれる属より得られるラッカーゼである。より好適な態様において、このラッカーゼはフミコラ・ブレビス・バー・サーモイデア(Humicola brevis v ar．thermoidea)、フミコラ・ブレビスポラ(H．brevispora)、フミコラ・グリセア・バー・サーモイデア(H．grisea var．thermoidea)、フミコラ・インソレンス(H．insolens) 及びフミコラ・ラヌギノサ(H．lanuginosa)(サーモマイセス・ラヌギノサス(Thermomyces lanuginosus) としても知られる)、ミセリオフソラ・サーモフィラ（M．thermophila）、ミセリオフソラ・ベレレア(M．ve llerea)、ポリポルス・ピンシトゥス(P．pinsitus)、シタリジウム・サーモフィラ（S．thermophila）、シタリジウム・インドネシアカム(S．indonesiacum) 及びトルラ・サーモフィラ（Torula thermophila）より成る群から選ばれる種より獲得される。このラッカーゼはその他のシタリジウムの種、例えばシタリジウム・アシドフィルム（S．acidophilum）、シタリジウム・アルブム（S．album）、シタリジウム・オーランチアカム（S.aurantiacum）、シタリジウム・サーシナトゥム(S．circinatum)、シタリジウム・フラベオブランネウム(S．flaveobrunn eum)、シタリジウム・ヒアリヌム(S．hyalinum)、シタリジウム・リグニコラ（S ．lignicola）及びシタリジウム・ウレジニコルム(S．uredinicolum) より得られうる。ラッカーゼはその他のポリポルスの種、例えばポリポルス・ゾナトゥス（P．zonatus）、ポリポルス・アルベオラリス(P．alveolaris)、ポリポルス・アルキュラリウス(P.arcularius)、ポリポルス・オーストラリエンシス（P．aus traliensis）、ポリポルス・バジウス(P．badius)、ポリポルス・ビフォルミス( P．biformis)、ポリポルス・ブルマリス(P．brumalis)、ポリポルス・シリアトゥス(P．ciliatus)、ポリポルス・コレンソイ(P．colensoi)、ポリポルス・ユーカリプトルム(P．eucalyptorum)、ポリポルス・メリジオナリス(P．meridionali s)、ポリポルス・バリウス(P．varius)、ポリポルス・バルストリス（P．palust ris）、ポリポルス・リゾフィルス（P．rhizophilus）、ポリポルス・ルグロサス（P．rugulosus）、ポリポルス・スカモサス（P．ｓquamosus）、ポリポルス・トゥベラスター(P．tuberaster)及びポリポルス・トゥムロサス（P．tumulosu s）より得られうる。ラッカーゼはその他のリゾクトニアの種、例えばリゾクトニア・ソラニ（R．solani) より得られうる。ラッカーゼはＩ型（Ｔ１）銅部位における少なくとも１個のアミノ酸残基による修飾ラッカーゼであってもよく、ここでかかる修飾オキシダーゼは野生型オキシダーゼと比べ改変されたpH及び／又は比活性を有する。例えば、修飾ラッカーゼはＴ１銅部位のセグメント（ａ）において修飾されていてよい。本目的のために採用されうるペルオキシダーゼは植物（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ）又は微生物、例えば真菌もしくは細菌より単離又は生産されうる。一部の好適な真菌には亜門不完全菌類（Deuteromycotina）、網ヒホケミス類（Hyphomycetes）、例えばフサリウム（Fusarium）、フミコラ、トリコデルマ(T richoderma)、ミロセシウム(Myrothecium)、バーチシルム(verticillum)、アルソロマイセス(Arthromyces)、カルダリオマイセス（Caldariomyces）、ウロクラジウム（Ulocladium）、アンベリッシア（Embellisia）、クラドスポリウム（Cl adosporium）又はドレシュレラ（Dreschlera）、特にフサリウム・オキシスポルム(F．oxysporum)(DSM 2672）、フミコラ・インソレンス、トリコデルマ・レシー（T．resii）、ミロセシウム・ベルカナ(M．verrucana)(IFO 6113)、バーチシルム・アルボアトルム（V．alboatrum）、バーチシルム・ダリー（V．dahlie）、アルソロマイセス・ラモサス(A．ramosus)(FERM P-7754)、カルダリオマイセス・フマゴ(C．fumago)、ウロクラジウム・チャータルム（U．chartarum）、アンベリシア・アリ（E．alli）又はドレシュレア・ハロデス（D．halodes）に属する株が含まれる。その他の好適な真菌には、亜門担子菌類（Basidiomycetes）、網担子菌類、例えばコプリヌス（Coprinus）、フェネロシェテ(Phanerochaete)、コリオルス（C oriolus）又はトラメテス（Trametes）、特にコプリヌス・シネレウスｆ．ミクロスポルス (C．cinereusf．microsporu s)(IFO 8371)、コプリヌス・マクロリザス（C．macrorhizus）、フェネロシェテ・クリソスポリウム (P．chrysosporium)(例えば NA-12)又はコリオルス・バーシカラー(Coriolus versicolor)(例えばPR4 28-A) に属する株が含まれる。更に好適な真菌には接合菌亜門（Zygomycotina）、マイコラセア（Mycoraceae ）網、例えばリゾプス（Rhizopus）又はムコー(Mucor)、特にムコー・ヒエマリス(M．hiemalis) に属する株が含まれる。一部に好適な細菌にはアクチノマイセタレス目(Actinomycetales)、例えばストレプトマイセス・スフェロイデス(Streptomyces spheroides)(ATCC 23965)、ストレプトマイセス・サーモビオラセウス(S．thermoviolaceus)(IFO 12382) 又はストレプトバーチシルム・バーチシリウム種バーチシリウム（Streptovertici llum verticillum ssp．verticillium）の株が含まれる。その他の好適な細菌にはバチルス・プミルス(Bacillus pumillus)(ATCC 12905 )、バチルス・ステアロサーモフィルス（B．stearothermophillus）、ロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)、ロドモナス・パルストリ(R ．palustri)、ストレプトコッカス・ラクチス（Streptococcus lactis）、シュードモナス・プロシニア (Pseudomonas purrocinia)(ATCC 15958) 又はシュードモナス・フルオレセンス (P．fluoresens)(NRRL B-11) が含まれる。ペルオキシダーゼのその他の潜在的な起源はB.C.Saundersら、前掲、pp.41-43 に列挙されている。本発明に従って利用される酵素を製造する方法は当業界において発光されており、例えば下記のものに記載されている：FEBS Lette rs 1625 ，173 (1)， Applied and Environmental Microbiology,Feb．1985，pp .273-278; Applied Microbiol.Biotechnol ．26，1987，pp.158-163，Biotechno logy Letters 9 (5)，1987，pp.357-360; Nature 326，2 April 1987，FEBS Le tters 4270 ，209 (2)，ｐ.321; EP 179 486; EP 200 565; GE 2 167 421; EP 17 1 074及びAgric.Biol.Chem ． 50(1)，1986，p.247。特に好適な酵素は約 2.5〜約12.0の範囲、好ましくは約４〜約10の範囲、最も好ましくは約 4.0〜約 7.0の範囲、及び約 7.0〜約10.0の範囲である。かかる酵素は例えば R.E.Childs and W.G.Bardsley，Biochem ．J． 145 ，1975，pp.93- 103 に記載のABTSアッセイを利用して好アルカリ性微生物による関連の酵素生産についてスクリーニングすることにより単離し得る。その他の好適な酵素は良好な熱安定性及び汎用の染色助剤、例えば非イオン、カチオン又はアニオン界面活性剤、錯形成剤、塩、ポリマー等に対する良好な安定性を発揮するものである。当該酵素はそれをコードする DNA配列及びその酵素をコードするDNA配列の発現を可能にする機能をコードする DNA配列を担持する組換 DNAベクターで形質転換された宿主細胞を、当該酵素の発現を可能とする条件下で培養培地の中で培養し、そして当該酵素を培養物から回収することを含んで成る方法によっても製造し得る。当該酵素をコードする DNAフラグメントは例えば注目の酵素を生産する微生物、例えば上記の微生物のいづれかのcDNA又はゲノムライブラリーを樹立し、次いで当該酵素の全部又は部分アミノ酸配列に基づいて合成したオリゴヌクレオチドプローブに対するハイブリダイゼーションの如き慣用の手順により陽性クローンをスクリーニングすることにより、又は天然酵素に対する抗体と反応性であるタンパク質を産生するクローンを選別することにより単離し得る。選定できたら、この DNA配列を適当な複製式発現ベクターであって当該酵素が特定の宿主生物内で発現されるようにする適当なプロモーター、オペレーター及びターミネター配列、並びに注目の宿主生物においてこのベクターが複製されるようにする複製起点を含んで成るものに挿入してよい。得られる発現ベクターを次に適当な宿主細胞、例えば真菌細胞に形質転換せしめてよく、その好適な例はアスペルギルスの種、最も好ましくはアスペルギルス・オリザ(A．oryzae) 又はアスペルギルス・ニガー（A．niger）である。真菌細胞は公知の手段によるプロトプラストの形式及びプロトプラストの形質転換、それに続く細胞壁の再生を包含する工程により形質転換されうる。宿主微生物としてのアスペルギルスの利用は、その内容を引用することで本明細書に組入れるEP 238,023 (Novo Industri A/S)に記載されている。他方、宿主生物は細菌、特にストレプトマイセス、バチルス又はＥ．コリ(E． coli) の株であってよい。細菌細胞の形質転換は慣用の方法、例えばT.Maniatis ら、Molecular Cloning: A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor，1982に記載の通りに実施してよい。適当な DNA配列のスクリーニング及びベクターの構築は標準の手順によっても実施してよい。T.Maniatisら、前掲参照のこと。形質転換した宿主細胞を培養するのに用いる培地は注目の宿主細胞を増殖するのに適当な任意の慣用の培地であってよい。発現酵素は好都合には培養培地に分泌させ、そして遠心分離又は濾過により細胞を培地から分離し、培地のタンパク質性成分を塩、例えば硫酸アンモニウムにより沈殿させ、次いでクロマトグラフィー手順、例えばイオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等にかけることを含む公知の手順により培養培地から回収し得る。本発明において利用する酵素がペルオキシダーゼであるとき、過酸化水素源、例えば過酸化水素自体を使用しなければならない。過酸化水素源は当該方法の始めに又は最中に、例えば 0.001〜５mM、特に0.01〜ｌmMの量で加えてよい。過酸化水素の一の起源には過酸化水素の前駆体、例えば過硼酸塩又は過炭酸塩が含まれる。過酸化水素のその他の起源には分子酸素及び有機又は無機基質を過酸化水素及び酸化基質のそれぞれへと変換することのできる酵素が含まれる。これらの酵素は低レベルの過酸化水素しか生成しないが、本発明の方法においてかなり好都合に採用されることができ、なぜならペルオキシダーゼの存在は生成される過酸化水素の有効利用を確実にするからである。過酸化水素を生成できる酵素の例には、限定することなく、グルコースオキシダーゼ、ウレートオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ及びコレステロールオキシダーゼが含まれる。本発明の方法において、約５〜約 120℃の範囲、好ましくは約５〜約80℃の範囲、そしてより好ましくは約15〜約70℃の範囲の温度、及び約 2.5〜約12の範囲、好ましくは約４〜約10の範囲、より好ましくは約 4.0〜約 7.0又は約 7.0〜約 10.0の範囲のpHが利用されうる。より好ましくは、6.5未満のpH（例えば３〜６の範囲内のpH、好ましくは４〜６の範囲内のpH、そして最も好ましくは4.5〜5.5 の範囲内のpH）又は 8.0より高いpH（例えば８〜10の範囲内のpH、好ましくは 8.5〜10の範囲内のpH、そして最も好ましくは９〜10の範囲内のpH）が使用される。驚くべきことに、6.5未満及び8.0より高いpHで本発明の方法により染色した材料の色は6.5〜8.0の範囲内のpHで本発明の方法により染色した同じ材料の色と異なる。最も好適な態様において、酵素の至適温度及びpH付近の温度及びpH のそれぞれが利用される。好適な態様において、本発明の方法は更に一価又は二価イオン、例えば限定することなくナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウムイオン（０〜３Ｍ、好ましくは25mM〜１Ｍ）、ポリマー、例えば限定することなくポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアスパルテート、ポリビニルアミド、ポリエチレンオキシド（０〜50ｇ／ｌ、好ましくは１〜 500mg／ｌ）、並びに界面活性剤（10mg〜５ｇ／ｌ）を前記水性溶液に添加することを含んで成りうる。かかる界面活性剤の例はアニオン界面活性剤、例えばカルボキシレート、例えば長鎖脂肪酸の金属カルボキシレート；Ｎ−アシルサルコシネート；リン酸と脂肪アルコールエトキシレートとのモノ−もしくはジエステル又はかかるエステルの塩；脂肪アルコールスルフェート、例えばドデシル硫酸ナトリウム、オクタデシル硫酸ナトリウム又はセチル硫酸ナトリウム；エトキシル化脂肪アルコールスルフェート；エトキシル化アルキルフェノールスルフェート；リグニンスルホネート；石油スルホネート；アルキルアリールスルホネート、例えばアルキルベンゼンスルホネート又は低級アルキルナフタレンスルホネート、例えばブチルナフタレンスルホネート；スルホン化ナフタレン−ホルムアルデヒド縮合物の塩；スルホン化フェノール−ホルムアルデヒド縮合物の塩；又はより複雑なスルホネート、例えばアミドスルホネート、例えばオレイン酸とＮ−メチルタウリンとのスルホン化縮合生成物又はジアルキルスルホスクシネート、例えばスルホン酸ナトリウム又はコハク酸ジオクチルである。かかる界面活性剤の例は非イオン性界面活性剤、例えば脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪酸アミド又は脂肪アルキル又はアルケニル置換化フェノールとエチレンオキシドとの縮合生成物、エチレンオキシド及びプロピレンオキシドのブロックコポリマー、アセチレン系グリコール、例えば２，４，７，９−テトラエチル−５−デシン−４，７−ジオール、又はエトキシル化アセチレン系グリコールである。かかる界面活性剤の更なる例はカチオン界面活性剤、例えば脂肪族モノ−、ジ−又はポリアミン、例えばアセテート、ナフタレネート又はオレエート；酸素含有アミン、例えばポリオキシエチレンアルキルアミンのアミンオキシド；カルボン酸とジ−又はポリアミンとの縮合により調製されるアミド連結アミン；又は第四級アンモニウム塩である。別の好適な態様においては、本発明の方法は更に当該水性溶液にペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素又はオキシダーゼ活性を発揮する酵素の活性を高める試薬を添加することを含んで成る。かかる増強剤は当業界において周知である。例えば、WO 95／01426 号に開示されている有機化学化合物がラッカーゼの活性を高めることで知られる。更に、WO 94／12619 及び WO 94／12621 に開示の化学化合物はペルオキシダーゼの活性を高めることで知られる。本発明を以下の非限定例により更に説明する。実施例例１ラッカーゼ活性の決定ラッカーゼ活性は好気性条件下でのシリンガルダジンの酸化により決定した。生成する紫色を光度計により 530nmで測定した。分析条件は19μＭのシリンガルダジン、23.2mMのアセテートバッファー、pH 5.5、30℃及び１分の反応時間とした。１ラッカーゼ単位（LACU）はこれらの条件で１分当り１μmoleのシリンガルダジンの変換を触媒するラッカーゼの量である。ペルオキシダーゼ活性の決定１ペルオキシダーゼ単位（POXU）は下記の分析条件で１分当り１μmol の過酸化水素の変換を触媒する酵素の量である：0.88mMの過酸化水素、1.67mMの２，２ ′−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホネート）、0.1Ｍのリン酸バッファー(TritonX405含有(1.5ｇ／1000ml))、pH 7.0；30℃でのインキュベーション; 418nmで光学的に追跡（ABTSの励起係数は3.6l／mmol・mmに設定）。布帛の染色５mgの第一化合物(ｐ−フェニレンジアミン（「Ａ」）、ｐ−トルエンジアミン（「Ｂ」）又はｏ−アミノフェノール(「Ｃ」))及び５mgの第二化合物（ｍ− フェニレンジアミン（「Ｄ」）、α−ナフトール（「Ｅ」）又は４−クロロレソルシノール(「Ｆ」)(又は第二化合物抜きの実験においては10mgの第一化合物)を 10mlの 0.1ＭのK₂HPO₄、pH 7.0バッファーに溶かした。71.7LACU／mlの活性を有するポリポルス・ピンシトゥスラッカーゼ(「PpL」)(CentraalBureau voor Schi mmelcultures に寄託、受託番号CBS 678.70)又は 690LACU／mlの活性を有するミセリオフソラ・サーモフィラ(「MtL」)(Centraal Bureau voor Schimmelcutures に寄託、受託番号CBS 117.65)を同バッファーの中に10LACU／mlの活性へと希釈した。 Test Fabrics Inc．（Middlesex，New Jersey）より入手した多繊維見本スタイル10Ａ（４×10cm）を巻き、そして試験管に入れた。この見本はウール製の繊維ストリップを含む。4.5mlの前駆体／カップラー溶液及び１mlのラッカーゼ溶液をこの試験管に加えた。試験管に封をし、混合し、そして試験管シェーカーに載せ、そして暗所キャビネットの中で60分インキュベーションした。インキュベーション後、見本を流温水道水で約30秒すすいだ。その実験の結果を下記の表にまとめる：表１表２表３これらの結果は、前駆体及びポリポルス・ピンシトゥスラッカーゼの存在下で、ウール上に着色が形成されることを示す。類似の結果がミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼより得られる。例２様々な材料をAtlas Launder-O-Meter(「LOM」) で30℃で１時間、４〜10の範囲のpHにおいて染色した。染色した材料（全て TestFabrics lnc.より入手）は梳ウール（スタイル 526、７cm×７cm）及び塩素化梳ウール（スタイル 530、７ cm×７cm）とした。 0.1ＭのBritten-Robinsonバッファー溶液を、溶液Ａ(0.1Ｍの H₃PO₄、0.1Ｍの CH₃COOH、 0.1ＭのH₃BO₄)とＢ(0.5ＭのNaOH)とを適当なpHで混合することにより調製した。pH４，５，６，７，８，９及び10のバッファー溶液を作るため、80 6ml，742ml，706ml，656ml，624ml，596ml及び562mlの溶液Ａそれぞれを溶液Ｂで１リットルへと希釈した。 75mlづつのバッファー溶液にｐ−フェニレンジアミン、ｏ−アミノフェノール及びｍ−フェニレンジアミンより選ばれる 0.5mg／mlの化合物を加えた。pHを検定し、そして必要なら調整した。75mlのバッファー／化合物溶液を組合せ 150ml づつのバッファー／化合物組合せ溶液を作り、それを LOMビーカーに加えた。材料の見本を各バッファー／化合物組合せ溶液に浸した。添加するラッカーゼの容量に相当する容量を抜き取った。690LACU／mlの活性を有するミセリオフソラ・サーモフィラ・ラッカーゼ（「MtL」）をバッファー溶液で希釈して 300LAC U／mlの活性にした。pH 7.0を除き、各pHにつき２LACU／mlを添加した。pH 7.0 では０，１，２，４LACU／mlを投与プロフィールのために添加した。次いで LOM ビーカーを L0Mの上に載せた。42RPM及び30℃で１時間後、LOMを停止させた。液を注ぎ出し、そして見本をビーカーの中で脱イオン流水で約15分すすいだ。見本を乾かし、そしてCIELAB値をColor Eye 7000装置を用いて測定した。CIELABの結果を表４〜７に示す。表４前駆体ｐ−フェニレンジアミン及びｍ−フェニレンジアミンによる染色（pH−プロフィール、２LACU／ml） pH4 pH5 pH6 pH7 pH8 pH9 pH10 梳ウール L^* 41.57 28.21 20.25 14.73 18.94 35.06 13.52 a^* 2.71 1.24 0.43 1.63 3.56 -1.92 1.79 b^* -0.75 -2.09 -5.76 -5.84 -17.52 -14.05 -4.28 梳塩素化 L^* 18.46 16.05 15.04 14.19 15.47 31.44 13.84 ウール a^* 2.32 1.01 0.88 1.83 2.78 -3.05 2.97 b^* 0.09 0.87 1.03 1.53 -11.43 -13.27 2.06 表５前駆体ｐ−フェニレンジアミン及びｍ−フェニレンジアミンによる染色（投与量プロフィール−ｐＨ７） 0LACU 1LACU 4LACU 梳ウール L^* 54.97 14.52 14.27 a^* 1.48 1.55 1.49 b^* 1.26 -6.09 -5.6 梳塩素化 L^* 43.2 14.42 14.33 ウール a^* 1.79 1.75 1.69 b^* 1.61 1.5 1.65 表６ｏ−アミノフェノール及びｍ−フェニレンジアミンによる染色（pH−プロフィール、２LACU／ml） pH4 pH5 pH6 pH7 pH8 pH9 pH10 梳ウール L^* 33.68 33.05 35.96 37.42 42.55 59.24 49.65 a^* 3.77 5.35 8.56 10.07 8.75 1 0.53 8.63 b^* 8.26 11.03 18.83 22.33 22.82 37.2 34.81 梳塩素化 L^* 21.07 19.11 21.01 24.7 34.42 59.9 48.74 ウール a^* 3.14 2.77 4.82 7.22 6.88 10.08 10.4 b^* 4.23 4.31 8.04 12.64 18.08 36.78 34.76 表７ｏ−アミノフェノール及びｍ−フェニレンジアミンによる染色（投与量プロフィール−ｐＨ７） 0LACU 1LACU 4LACU 梳ウール L^* 80.23 38.57 36.18 a^* 1.1 9.21 10.8 b^* 20.09 21.33 22.76 梳塩素化 L^* 77.36 27.1 26.33 ウール a^* 0.86 7.92 6.92 b^* 19.53 14.8 13.5 表の中に用いているパラメーター「Ｌ^*」、「ａ^*」及び「ｂ^*」は色彩を定量化するために用いており、そして色彩科学の当業者に公知である。例えば、Bill meyer & Saltzman，Principles of Color Technology、第２版、John Wiley & S ons，New York，1981，p.59で参照のこと。これらの結果は、梳ウール及び塩素化梳ウールが、ｐ−フェニレンジアミンとｍ−フェニレンジアミンとの組合せにより全pHにおいて、低pHでの灰色から高pH でのマリンブルー及び黒色に至る色相をもって染色され、そしてｏ−アミノフェノールとｍ−フェニレンジアミンとの組合せでは低pHでの茶色から高pHでの橙色／黄色に至る色相をもって染色されることを示す。全ての投与量実験において、投与量１，２又は４LACU/mlでは顕著な差は認められなかった。０LACU／mlによるコントロール実験は染色がラッカーゼにより触媒されることを明示した。例３染色のための時間プロフィールを例２記載の手順を利用して決定したが、ただし実験はpH 5.0及び 8.0のみで０，５，15，35及び55 分の時間間隔で実施した。各実験において、２LACU／mlのミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼを加えた。その結果を表８〜11に示す。表８前駆体ｐ−フェニレンジアミン及びｍ−フェニレンジアミンによる染色時間プロフィール、２LACU/ml、pH5 0min 5min 15min 35min 55min 梳ウールＬ^* 76.48 52.08 36.3 27.02 26.56 ａ^* 0.02 1.35 1.96 1.3 1.18 ｂ^* 8 -0.02 -1.39 -1.68 -2.03 梳塩素化Ｌ^* 63.73 19.23 16.81 16.48 16.75 ウールａ^* 0.1 1.86 1.28 0.77 1.11 ｂ^* 10.３ -0.68 0.49 1.04 1.03 表９前駆体ｐ−フェニレンジアミン及びｍ−フェニレンジアミンによる染色時間プロフィール、２LACU／ml、pH8 0min 5min 15min 35min 55min 梳ウールＬ^* 64.43 23.66 14.57 13.11 13.06 ａ^* -3.03 1.05 2.14 1.49 1.2 ｂ^* -3.32 -15.45 -8.72 -4.52 -3.68 梳塩素化Ｌ^* 58.96 17.36 14.09 13.89 13.66 ウールａ^* -1.66 0.57 1.9 2.71 2.64 ｂ^* 2.68 -3.98 0.1４ 2.21 1.99 表10 ｏ−アミノフェノール及びｍ−フェニレンジアミンによる染色時間プロフィール、２LACU／ml、pH5 0min 5min 15min 35min 55min 梳ウールＬ^* 79.4 50.67 35.94 32.4 32.89 ａ^* 1.54 6.47 7.11 6.08 5.98 ｂ^* 16.02 20.88 18.43 14.28 12.52 梳塩素化Ｌ^* 76.72 39.53 22.12 18.82 19.58 ウールａ^* 2.33 6.81 4.21 2.88 3.1 ｂ^* 18.26 16.48 8.23 4.89 4.77 表11 ｏ−アミノフェノール及びｍ−フェニレンジアミンによる染色時間プロフィール、２LACU/mlN、pH8 0min 5min 15min 35min 55min 梳ウールＬ^* 80.06 63.03 49.37 42.51 41.24 ａ^* 1.63 15.71 17.1 12.32 9.97 ｂ^* 25.87 43.37 38.69 30.26 25.78 梳塩素化Ｌ^* 79.6 62.87 47.88 36.72 33.62 ウールａ^* 0.57 13.17 14.46 10.26 7.88 ｂ^* 24.63 41.64 34.34 24.47 19.7 これらの結果は、ほとんどの色が最初の15分以内に形成することを示す。梳ウール及び塩素化梳ウールは双方のpHで染色された。例４ウールをAtlas Launder-O-Meter(「LOM」) で30℃で１時間、pH5.5で染色した。染色材料（Test Fabrics，Inc.より入手）は梳ウール（スタイル 526、８cm× ８cm）とした。 0.5mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び 0.5mg／mlの第二化合物溶液（１−ナフトール「Ｂ」）を、これらの化合物を適量の 0.1ＭのCH₃COONa、pH 5.5バッファーの中に溶解することにより調製した。100mlの総容量を各 LOMビーカーに用いた。100mlの「Ａ」を一個のビーカーに入れ、そして50mlの「Ａ」及び50mlの「Ｂ」を第二ビーカーの中で組合せて 1 00mlにした。上記の材料の見本をDI水の中で湿らし、そして前駆体溶液の中に浸した。690LACU／ml（80LACU／mg）の活性を有するミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ（「MtL」）を各ビーカーに12.5mg／ｌの濃度で加えた。これらの L OMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。42RPM及び30℃で１時間後、LOMを停止させた。消費液を注ぎ出し、そして見本を冷水道水で約15分すすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB値を Macbeth Colordye 7000を利用して全ての見本について測定した。その結果を表12及び13に示す。表12−前駆体ｐ−フェニレンジアミンによる染色（pH 5.5、12.5mg／ｌ MtL）表13−前駆体ｐ−フェニレンジアミン及び１−ナフトールによる染色（pH 5.5、12.5mg／ｌ MtL）これらの結果は、様々なタイプの繊維が前駆体及びミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼにより染色されうることを示す（Ａでは茶色、そしてＡ／Ｂでは紫色）。例５ウールをAtlas Launder-O-Meter(「LOM」) で30℃で１時間、pH5.5で染色した。染色材料（Test Fabrics,Inc．より入手）は梳ウール（スタイル526、８cm× ８cm）とした。 0.5mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び0.5mg／ mlの第二化合物溶液（１−ナフトール「Ｂ」）を、これらの化合物を適量の0.1 ＭのCH₃COONa、pH 5.5バッファーの中に溶解することにより調製した。100mlの総容量を各 LOMビーカーに用いた。100mlの「Ａ」を一個のビーカーに入れ、そして50mlの「Ａ」及び50mlの「Ｂ」を第二ビーカーの中で組合せて100mlにした。上記の材料の見本をDI水の中で湿らし、そして前駆体溶液の中に浸した。70LA CU／ml(100LACU／mg) の活性を有するポリポルス・ピンジトゥスラッカーゼ（「 PpL」）を各ビーカーに12.5mg／ｌの濃度で加えた。これらの LOMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。 42RPM及び30℃で１時間後、LOMを停止させた。消費液を注ぎ出し、そして見本を冷水道水で約15分すすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB値を Macbeth Colordye 7000を利用して全ての見本について測定した。その結果を表14及び15に示す。表14−前駆体ｐ−フェニレンジアミンによる染色（pH 5.5、12.5mg／ｌ PpL）表15−前駆体ｐ−フェニレンジアミン及び１−ナフトールによる染色（pH 5.5、12.5mg／ｌ PpL）これらの結果は、ウールが前駆体及びポリポルス・ピンシトゥス（PpL）ラッカーゼにより染色されうることを示す（Ａでは茶色、そしてＡ／Ｂでは紫色）。例６ウールをAtlas Launder-O-Meter(「LOM」) で30℃で１時間、pH5.5で染色した。染色材料（Test Fabrics，Inc.より入手）は梳ウール（スタイル526、８cm× ８cm）とした。 0.5mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び0.5mg／ mlの第二化合物溶液（１−ナフトール「Ｂ」）を、これらの化合物を適量の0.1 ＭのCH₃COONa、pH 5.5バッファーの中に溶解することにより調製した。100mlの総容量を各 LOMビーカーに用いた。100mlの「Ａ」を一個のビーカーに入れ、そして50mlの「Ａ」及び50mlの「Ｂ」を第二ビーカーの中で組合せて100mlにした。上記の材料の見本をDI水の中で湿らし、そして前駆体溶液の中に浸した。0.04 LACU／mg（１mg／ml）の活性を有するミロセシウム・ベルカリア（Myrothecium verrucaria）ビリルビンオキシダーゼ（「BiO」）を各ビーカーに12.5mg／ｌの濃度で加えた。これらの LOMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。42RPM及び30℃で１時間後、LOMを停止させた。消費液を注ぎ出し、そして見本を冷水道水で約15分すすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB値を Macbeth Colordy e 7000を利用して全ての見本について測定した。その結果を表16及び17に示す。表16−前駆体ｐ−フェニレンジアミンによる染色表17−前駆体ｐ−フェニレンジアミン及び１−ナフトールによる染色これらの結果は、ウールが前駆体及びビリルビンオキシダーゼにより染色されうることを示す（Ａでは茶色、そしてＡ／Ｂでは紫色）。例７ウールをAtlas Launder-O-Meter(「LOM」) で30℃で１時間、pH5.5で染色した。染色材料（Test Fabrics，Inc.より入手）は梳ウール（スタイル526、８cm× ８cm）とした。 0.5mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び0.5mg／ mlの第二化合物溶液（１−ナフトール「Ｂ」）を、これらの化合物を適量の0.1 ＭのCH₃C0ONa、pH 5.5バッファーの中に溶解することにより調製した。100mlの総容量を各 L0Mビーカーに用いた。100mlの「Ａ」を一個のビーカーに入れ、そして50mlの「Ａ」及び50mlの「Ｂ」を第二ビーカーの中で組合せて 100mlにした。上記の材料の見本をDI水の中で湿らし、そして前駆体溶液の中に浸した。5.2L ACU／mg（２mg／ml）の活性を有するリゾクトニア・ソラニラッカーゼ（「RsL」）を各ビーカーに12.5mg／ｌの濃度で加えた。これらの LOMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。４ 2RPM及び30℃で１時間後、LOMを停止させた。消費液を注ぎ出し、そして見本を冷水道水で約15分すすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB値を Macbeth C olordye 7000を利用して全ての見本について測定した。その結果を表18及び19に示す。表18−前駆体ｐ−フェニレンジアミンによる染色（pH 5.5、12.5mg／ｌ RsL）表19−前駆体ｐ−フェニレンジアミン及び１−ナフトールによる染色（pH 5.5、12.5mg／ｌ RsL）これらの結果は、ウールが前駆体及びリゾクトニア・ソラニラッカーゼにより染色されうることを示す（Ａでは茶色、そしてＡ／Ｂでは紫色）。例８染色材料（全てTest Fabrics Inc.より入手）はウール(Style５26、８cm×８c m)とし、Atlas Launder-O-Meter(「LOM」) の中で60℃及びpH 5.5で染色した。 0.25mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び0.25mg／ mlの第二化合物溶液（２−アミノフェノール「Ｂ」）を、これらの化合物を適量の２ｇ／ｌのCH₃COONa、pH 5.5バッファーの中に溶解することにより調製した。 100mlの総容量を各 LOMビーカーに用いた。50mlの「Ａ」及び50m1の「Ｂ」を LO Mビーカーの中で組合せて100mlとした。上記の材料の見本をDI水で濡らし、そして前駆体溶液に浸した。LOMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。LOM内で10分のインキュベーション後（42RPM）LOMを停止し、そして 690LACU／ml（80LACU／mg）の活性を有するミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ（「MtL」）をビーカーに１LACU／mlの濃度で加えた。42RPM及び60℃で50，45又は30分後、LOMを停止させ、そしてサンプルを除去した。プレインキュベーション抜きの２つのコントロールを LOMビーカーに前駆体溶液、見本及び酵素を加えることにより作った。ビーカーを LOMに載せた。42RPM及び60℃で15分後、１個のビーカーを取り出した。その他のコントロールは 42RPM及び60℃で全部で30分工程にかけ、次いで取り出した。消費液をサンプルから注ぎ出し、そして見本を約15分冷水道水ですすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB値をMacbeth Color Eye7000を用い全ての見本について測定した。その結果を表20〜24に示す。表20−前駆体Ａ及びＢによるコントロール染色：０min.／30min. 表21−前駆体Ａ及びＢによるコントロール染色：０min.／60min. 表22−前駆体Ａ及びＢによる染色：10min.／50min. 表23−前駆体Ａ及びＢによる染色：15min.／45min. 表24−前駆体Ａ及びＢによる染色：30min.／30min. これらの見本についての洗濯に対する色彩堅牢度（洗濯堅牢度）を American Association of Textile Chemist and Colorist（AATCC）試験方法 61-1989，2A を利用して評価した。Launder-O-Meterを49℃にまで予備加熱し、そして200mlの 0.2％ AATCC標準対照洗剤WOB（増白剤なし）及び50個のスチールボールを各 LOM ビーカーの中に入れた。ビーカーに封をし、そして LOMに載せ、そしてビーカーを試験温度に予備加熱するために 42RPMで２分工程にかけた。ローターを止め、そしてビーカーを解放した。見本をビーカーに入れ、そして LOMを45分運転した。ビーカーを取り出し、そして見本を温水道水で５分、時折り絞りながらすすいだ。次いで見本を室温で乾かし、そしてMacbeth Color Eye 7000により評価した。灰色等級（１〜５）を AATCC評価手順１、変色についての灰色スケールを利用し、各見本に付した。その結果を表25〜29に示す。表25−Ａ及びＢについての洗濯堅牢度結果：０min.／30min. 表26−Ａ及びＢについての洗濯堅牢度結果：０min.／60min. 表27−Ａ及びＢについての洗濯堅牢度結果：15min.／45min. 表28−Ａ及びＢについての洗濯堅牢度結果：10min.／50min. 表29−Ａ及びＢについての洗濯堅牢度結果：30min.／30min. これらの結果は、ウールが前駆体及びミセリオフソラ・サーモフィラ(MtL) ラッカーゼを利用して染色できうる。Ｌ^*及び灰色等級の双方から、着色強度及び洗濯堅牢度は見本を前駆体溶液内で酵素の添加前にインキュベーションすることにより改善されることが明らかである。例９染色材料(Test Fabrics Inc.)は梳ウール（スタイル 526、７cm×７cm）及び塩素化梳ウール（スタイル 526、７cm×７cm）とし、Atlas Launder-O-Meter(「 LOM」) の中で40℃で１時間、pH 5.5で染色した。この実験においては２種類の媒体を利用し、そしてそれぞれバッファー溶液中に溶かした。３種類のバッファーを作った：２ｇ／ｌのCH₃COONa、 pH 5.5、バッファー（「１」）； 100ｐＭの10−プロピオン酸フェノチアジン(P PT) を含む２ｇ／１のCH₃COONa、pH 5.5（「２」）；及び 100μＭのメチルシリンゲートを含む２ｇ／ｌのCH₃COONa、pH 5.5。化合物を適量のバッファー（１，２又は３）の中に溶解することにより３種類の0.25mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び３種類の 0.25mg／mlの第二化合物溶液（ｍ−フェニレンジアミン「Ｂ」）を調製した。総容量120mlを各 LOMビーカー中で用いた。60mlのＡと60mlのＢとを組合せて 120m lにした。（各バッファー１，２又は３につき）。上記の見本をDI水で濡らし、そして前駆体溶液の中に浸した。LOMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。4 2RPM及び40℃で10分後、LOMを停止させた。690LACU／ml（80LACU／mg）の活性を有するミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ（「MtL」）を各ビーカーに 0. 174LACU／mlの活性に至るまで加えた。ビーカーに再び封をしそして LOMに載せ、40℃で50分運転した(42RPM)。ビーカーを取り出し、そして消費液を注ぎ出し、そして見本を冷水道水で約15分すすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB 値を全ての見本についてMacbeth Color Eye 7000を用い測定した。これらの結果を表30，31及び32に示す。表30−前駆体Ａ及びＢによる染色（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、MtL）表31−前駆体Ａ及びＢによる染色（２ｇ／Ｌ CH₃COONaN、pH 5.5、100μＭPPT、MtL）表32−前駆体Ａ及びＢによる染色（２ｇ／Ｌ CH₃COONa，pH 5.5、100μＭメチルシリンゲート、MtL）これらの見本についての洗濯に対する色彩堅牢度（洗濯堅牢度）を American Association of Textile Chemist and Colorist（AATCC）試験方法 61-1989，2A を利用して評価した。Launder-O-Meterを49℃にまで予備加熱し、そして 200ml の0.2％ AATCC標準対照洗剤WOB（増白剤なし）及び50個のスチールボールを各 L OMビーカーの中に入れた。ビーカーに封をし、そして LOMに載せ、そしてビーカーを試験温度に予備加熱するために 42RPMで２分工程にかけた。ローターを止め、そしてビーカーを解放した。見本をビーカーに入れ、そして LOMを45分運転した。ビーカーを取り出し、そして見本を温水道水で５分、時折り絞りながらすすいだ。次いで見本を室温で乾かし、そしてMacbeth Color Eye 7000により評価した。灰色等級（１〜５）を AATCC評価手順１、変色についての灰色スケールを利用し、各見本に付した。その結果を表33〜35に示す。表33−前駆体Ａ及びＢについての洗濯堅牢度の結果（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、MtL）表34−前駆体Ａ及びＢについての洗濯堅牢度の結果（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、100μＭ PPT、MtL）表35−前駆体Ａ及びＢについての洗濯堅牢度の結果（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、100μＭメチルシリンゲート、MtL）同じ実験を繰り返したが、ただし第二化合物（２−アミノフェノール「Ｃ」）及び第三化合物（ｍ−フェニレンジアミン「Ｄ」）を使用した。利用した温度は 70℃とした。その結果を表36−41に示す。表36−前駆体Ｃ及びＤによる染色（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、MtL）表37−前駆体Ｃ及びＤによる染色（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、100μＭ PPT、MtL）表38−前駆体Ｃ及びＤによる染色（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、100μＭメチルシリンゲート、MtL）表39−前駆体Ｃ及びＤについての洗濯堅牢度結果（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、MtL）表40−前駆体Ｃ及びＤについての洗濯堅牢度結果（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、100μＭ PPT、MtL）表41−前駆体Ｃについての洗濯堅牢度結果（２ｇ／Ｌ CH₃COONa、pH 5.5、100μＭメチルシリンゲート、MtL）これら２組の実験由来の結果は染色のため及び改善された洗濯堅牢度を得るために媒体が使用できうることを示す。双方の実験において、梳ウール及び塩素化梳ウールをpH 5.5においてCH₃COONaバッファー中で、PPT含むCH₃COONaバッファー中で、及びメチルシリンゲートを含むCH₃COONaバッファー中で染色した。しかしながら、媒体は第一実験においてのみ改善された洗濯堅牢度を供した。例10 ウールをAtlas Launder-O-Meter(「LOM」) で30℃で１時間、pH5.5で染色した。染色材料（Test Fabrics，Inc.より入手）は梳ウール（スタイル526、８cm× ８cm）とした。 0.5mg／mlの第一化合物溶液（ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」）及び0.5mg／ mlの第二化合物溶液（1−ナフトール「Ｂ」）を、これらの化合物を適量の0.1ＭのCH₃COONa、pH 5.5バッファーの中に溶解することにより調製した。100mlの総容量を各 LOMビーカーに用いた。100mlの「Ａ」を一個のビーカーに入れ、そして50mlの「Ａ」及び50mlの「Ｂ」を第二ビーカーの中で組合せて100mlにした。上記の材料の見本をDI水の中で湿らし、そして前駆体溶液の中に浸した。180,000POXU／ml の活性を有するコプリヌス・シネレウスペルオキシダーゼ（「CiP」）を各ビーカーに0.05POXU/mlの濃度で加えた。各 LOMビーカーに 200又は 500μＭの過酸化水素を加えた。これらの LOMビーカーに封をし、そして LOMに載せた。42RPM 及び30℃で１時間後、LOMを停止させた。消費液を注ぎ出し、そして見本を冷水道水で約15分すすいだ。見本を室温で乾かし、そしてCIELAB値を Macbeth Color dye 7000を利用して全ての見本について測定した。その結果を表42〜45に示す。表42−前駆体Ａによる染色： 200ttＭ H₂O₂ 表43−前駆体Ａによる染色： 500μＭ H₂O₂ 表44−前駆体Ａ及びＢによる染色： 200μＭ H₂O₂ 表45−前駆体Ａ及びＢによる染色： 500μＭ H₂O₂ これらの結果は、ウールが前駆体、ペルオキシド及びコプリヌス・シネレウス(CiP) ペルオキシダーゼを利用して染色されうることを示す（Ａ及びＡ／Ｂで紫色の色相）。例11 クロム染めしたブルーストック皮革（Prime Tanning Corp.，St.Joseph，MO）を試験管内で室温にて16時間、pH５，７及び９で染色した。３種類の 0.5mg／mlの第一化合物溶液(ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」)(pH５，７及び９)、３種類の 0.5mg/mlの第二化合物溶液（ｌ−ナフトール「Ｂ」）及び３種類の第三化合物溶液（４−ヒドロキシシンナミン酸「Ｃ」）を、各化合物を適量の 0.1ＭのBritten-Robinsonバッファー（Ｂ−Ｒバッファー）に溶かすことにより調製した。皮革支持体(1.5cm×４cm) を巻き、そして４インチ試験管に入れた。各試験管において７mlの全容量を利用した。６mlのＡ（又は６mlのＣ）を第一試験管に加え、そして３mlのＡ及び３mlのＢ（又は３mlのＡ及び３mlのＣ）を第二試験管の中で組合せて６mlにした。 690LACU／ml（80LACU／mg）の活性を有するミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ（「MtL」）を各ビーカーに２LACU／mlの濃度において加えた（試験管当り７ｍｌの総容量となるように各試験管に１mlの酵素溶液を加えた）。試験管に封をし、混合し、そして試験管ローテーターに載せた。試験管を暗所キャビネットの中で室温で16時間インキュベーションした。インキュベーション後、見本を冷水道流水で１分すすぎ、そして室温で乾燥させた。実験結果を表46に示す：表46 これらの結果は、ミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ及び様々な前駆体の存在下で広範囲のpH条件で皮革が着色されることを示す。例12 絹を試験管内で常温で16時間、pH５，７及び９で染色した。染色材料（Test F abrics，Inc.より入手）は絹クレープデシン（スタイル601、 1.5cm×４cm）とした。３種類の 0.5mg／mlの第一化合物溶液(ｐ−フェニレンジアミン「Ａ」)(pH５，７及び９)及び３種類の0.5mg／mlの第二化合物溶液（1−Kナフトール「Ｂ」）を、各化合物を適量の 0.1ＭのBritten-Robinsonバッファー（Ｂ−Ｒバッファー）に溶かすことにより調製した。絹支持体を巻き、そして４インチ試験管に入れた。各試験管において７mlの全容量を利用した。６mlのＡを第一試験管に加え、そして３mlの及び３mlのを第二試験管の中で組合せて６mlにした。 690LACU／ml（80LACU／mg）の活性を有するミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ（「MtL」）を各ビーカーに２LACU／m lの濃度において加えた（試験管当り７mlの総容量となるように各試験管に１ml の酵素溶液を加えた）。試験管に封をし、混合し、そして試験管ローテーターに載せた。試験管を暗所キャビネットの中で室温で 16時間インキュベーションした。インキュベーション後、見本を冷水道流水で１分すすぎ、そして室温で乾燥させた。実験結果を表47に示す：表47 これらの結果は、ミセリオフソラ・サーモフィララッカーゼ及び様々な前駆体の存在下で広範囲のpH条件で絹が着色されることを示す。例13 ５mg／mlのパラフェニレンジアミンを 0.1Ｍのリン酸ナトリウム、pH 5.5のバッファーに溶かし、そして 2.5％のアラビアゴムを添加することによりプリントペーストを作る。このプリントペーストをプリンティングスクリーン及びスクレーパーを用いてウール布帛に手動式に転写する。プリントしない布帛の一部にはマスクをかぶせる。次いで布帛をスチームチャンバーの中に10分スチームし、そして乾燥させる。色は布帛を２LACU／mlのラッカーゼ溶液に浸し、次いで１時間インキュベーションすることにより発色させる。例14 単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物はパジングにより材料に適用し得る。例えば、0.5mg／mlのｐ−フェニレンジアミンを 500mlの 0.1ＭのK₂ PO₄、pH７バッファーに溶かす。ラッカーゼを同じバッファーに希釈する。ｐ− フェニレンジアミンを標準の研究室パッドを用い、60℃で材料にパジングする。スチームした材料は酵素溶液により２回パジングを施してよい。染料は見本を40℃でインキュベーションすることにより発色させる。インキュべーション後、見本を温流水道水で約30秒すすぐ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者バーホード，マーティンアメリカ合衆国，ノースカロライナ 27604，ラレイ，ロイヤルトルーンドライブ 4708

Claims

【特許請求の範囲】１．材料を染色する方法であって：（ａ）前記材料を、１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物を含んで成る水性溶液に浸漬する、ここで各化合物は任意的に１又は複数の官能基又は置換基により置換されており、ここで各官能基又は置換基はハロゲン；スルホ；スルホナト；スルファミノ；スルファニル；アミノ；アミド；ニトロ；アゾ；イミノ；カルボキシ；シアノ；ホルミル；ヒドロキシ；ハロカルボニル；カルバモイル；カルバミドイル；ホスホナト；ホスホニル；Ｃ_1-18アルキル；Ｃ_1-18アルケニル；Ｃ_1-18アルキニル；Ｃ_1-18アルコキシ；Ｃ_1-18オキシカルボニル；Ｃ_1-18オキソアルキル；Ｃ_1-18アルキルスルファニル；Ｃ_1-18アルキルスルホニル；Ｃ_1-18アルキルイミノ又はアミノであって１，２又は３個のＣ_1-18 アルキル基により置換されているものであり、ここで各Ｃ_1-18アルキル、Ｃ_1-18 アルケニル及びＣ_1-18アルキニル基は任意の上記の官能基又は置換基により一、二又は多置換されていることがある；そして（ｂ）前記浸漬材料を、（ｉ）過酸化水素源及びペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素又は(ii）１もしくは複数種の芳香族もしくはヘテロ芳香族化合物に対してオキシダーゼ活性を発揮する酵素を有する水性溶液の中で処理する；ことを含んで成り、ここで前記材料は毛皮、獣皮、皮革、絹又はウール製の布帛、糸、繊維、衣料又はフィルムである、前記方法。２．前記１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族がナフトールである、請求項１記載の方法。３．前記１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族が芳香族ジアミンである、請求項１記載の方法。４．前記１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族がアミノフェノールである、請求項１記載の方法。５．前記１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族がフェノールである、請求項１記載の方法。６．前記材料が毛皮製である、請求項１記載の方法。７．前記材料が獣皮製である、請求項１記載の方法。８．前記材料が皮革製である、請求項１記載の方法。９．前記材料が絹製である、請求項１記載の方法。 10．前記材料がウール製である、請求項１記載の方法。 11．前記浸漬材料を１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物に対してペルオキシダーゼ活性を発揮する酵素及び過酸化水素源で処理するを含んで成る、請求項１記載の方法。 12．前記酵素がペルオキシダーゼ又はハロペルオキシダーゼである、請求項11 記載の方法。 13．前記浸漬材料を１又は複数種の単環、二環又は多環式芳香族又はヘテロ芳香族化合物で処理する、請求項１記載の方法。 14．前記酵素がビリルビンオキシダーゼ、カテコールオキシダーゼ、ラッカーゼ、ｏ−アミノフェノールオキシダーゼ及びポリフェノールオキシダーゼより成る群から選ばれる、請求項13記載の方法。 15．前記材料を約５〜約 120 ℃の範囲の温度で染色する、請求項１記載の方法。 16．前記工程（ｂ）の水性溶液にナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウムイオンより成る群から選ばれる一又は二価のイオンを添加することを更に含んで成る、請求項１記載の方法。 17．前記工程（ｂ）の水性溶液にポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアスパルテート、ポリビニルアミド及びポリエチレンオキシドより成る群から選ばれるポリマーを添加することを更に含んで成る、請求項１記載の方法。 18．前記工程（ｂ）の水性溶液にアニオン、非イオン又はカチオン界面活性剤を添加することを更に含んで成る、請求項１記載の方法。 19．前記材料を 2.5〜12の範囲のpHで染色する、請求項１記載の方法。 20．前記工程（ｂ）の水性溶液に酵素の活性を高める試薬を添加することを更に含んで成る、請求項１記載の方法。 21．前記工程（ａ）及び（ｂ）に利用する水性溶液が同一である、請求項１記載の方法。