JP2000159800A - 抗ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 モノクロナル抗ｈＣＧ抗体の特異性に匹敵す
る特異性を持つ精製ポリクロナル抗ｈＣＧ抗体を提供す
る。 【解決手段】 (a)支持体上に固定化された式：Asp¹¹²-
Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Lys-Ala-Pro-
Pro-Pro¹²⁵-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro¹³⁰-Ser-Arg-Leu-Pro-
Gly¹³⁵-Pro-Pro-Asp-Thr-Pro¹⁴⁰-Ile-Leu-Pro-Gln-Ser
¹⁴⁵-Leu-Proで示されるペプチド配列を有するｈＣＧ分
析物類似物を抗ｈＣＧ抗体含有体液と接触させて、該ペ
プチド配列に特異的な抗ｈＣＧ抗体を吸着させ、ついで
(b)特異的に吸着された該抗ｈＣＧ抗体に溶出させる工
程から成る抗ｈＣＧ抗体精製方法により製造される抗
体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は抗ヒト絨毛性性腺刺
激ホルモン(ｈＣＧ)抗体に関する。さらに詳しくは、合
成ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン(ｈＣＧ)を用いて精製し
て得られた抗ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン(ｈＣＧ)抗体
に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】種々
の分析方法および手段が生体体液あるいは他の物質中に
存在し得る興味あるかつ臨床上重要な物質の存在および
／あるいは濃度の測定分析に利用されている。そのよう
な物質は一般に分析物(analytes)と称され、抗体、抗
原、薬物、ホルモン等が含まれる。血清、血漿、尿およ
び脳脊髄液等生体体液中の特殊な分析物の検出は、近年
研究および臨床両分野において重要になっている。興味
ある分析物の検出は種々の病的状況に関係し得、従っ
て、病気の診断および治療の効果を知るうえで、非常に
有効である。分析物が抗原あるいは抗体の場合には、こ
れらの物質と特殊づける免疫学的反応性を利用して検定
が行なわれる。一般にこのような検定は総して免疫学的
検定法と称される。

【０００３】免疫学的検定法は、生物にとって病原性か
あるいは異質である抗原の存在に応答して抗体が生成さ
れるという、高等生物の免疫系の機構を利用するもので
ある。特定の抗原に応答して１個以上の抗体が生成さ
れ、それらは該特定の抗原と反応して高特異性反応機構
を創製するもので、それによって、インビトロで生物学
的検体中のその抗原の存在およびその濃度の測定が行な
われる。しかしながら、免疫学的検出法の測定結果は使
用する抗体の型と、特定の抗原に対するその抗体の特異
性によって変化し得る。ｈＣＧの定量においては、使用
される特定の抗ｈＣＧ抗体は、第２の糖蛋白抗原、たと
えばヒト黄体ホルモン(ｈＬＨ)、卵胞刺激ホルモン(Ｆ
ＳＨ)あるいは甲状腺刺激ホルモンと交叉反応する可能
性があり、そのため、検定の精度が低下する。たとえ
ば、ｈＣＧを認識し結合する抗体は一般にｈＣＧと特異
的に結合するというよりもＬＨ、ＦＳＨおよびＴＳＨと
も結合するであろう。抗体精製法は交叉反応を最小にす
るように工夫されている。このような従来の代表例とし
て、ｈＣＧの全分子を含有してＩｇＧ分子の特異な部分
を濃縮する第１アフィニティーカラムと、ＬＨまたはＦ
ＳＨを含みｈＣＧと交叉反応する抗体を除くようにした
第２アフィニティーカラムからなる２カラム方式を使う
方法がある。この従来法で得られるｈＣＧポリクロナル
抗体は、なお、著しい交叉反応性を有している。さら
に、この２カラム方式は時間がかかり、かつ高価であ
る。ｈＣＧやｈＬＨのような分析物の化学的分析によれ
ば、これらのホルモンの交叉反応性は構造的に類似して
いるそれらのα−サブユニットに負うことが判明した。
従って、ｈＬＨと構造上比較的異なっているｈＣＧのβ
−サブユニット(β−hＣＧ)の分離、精製が試みられて
いる。しかしながら、その分離法では依然不純物を含
み、ｈＣＧとｈＬＨ両者に共通のアミノ酸配列を含んで
いる。

【０００４】β−ｈＣＧのＣＯＯＨ末端に位置するペプ
チド部はおよそ４５のアミノ酸からなる。この部分はｈ
ＬＨに対するｈＣＧの顕著な識別を可能にすることがわ
かっている(マツウラら、Endocrinology、 104: 396, 19
79)。また、イワサらも、抗ｈＣＧ抗体調製に有用なβ
−ｈＣＧのＣＯＯＨ末端ペプチド(以下、ＣＴＰと略す)
の特異性を持つ部分を再生成する合成ペプチド配列の製
造について報告している(米国特許第４,５１７,２９０
号)。このβ−ｈＣＧのＣＴＰのアミノ酸配列は４５の
アミノ酸からなり、式： Gly-Gly-Pro-Lys-Asp¹⁰⁵-His-Pro-Leu-Thr-Cys¹¹⁰-Asp-
Asp-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Ser-Lys-
Ala-Pro-Pro¹²⁵-Pro-Ser-Leu-Pro-Ser¹³⁰-Pro-Ser-Arg-
Leu-Pro¹³⁵-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-Pro-
Gln¹⁴⁵ で表わされる[モルガンら、Mol. Cell. Bio Chem. 2
(1), 97-99 (1973)]。イワサによって報告されたポリク
ロナル抗体精製のための合成ペプチド配列は式： Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln¹⁴⁵ から式： Ala-Pro-Pro¹²⁵-Pro-Ser-Leu-Pro-Ser¹³⁰-Pro-Ser-Arg-
Leu-Pro¹³⁵-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-Pro-
Gln¹⁴⁵ までの１０から２３までのアミノ酸残基のＣＴＰフラグ
メントあるいはアミノ酸配列からなる。上記の文献いず
れも抗体の交叉反応性を軽減するために２３以上のアミ
ノ酸残基のＣＴＰ配列を示唆していない。

【０００５】

【課題を解決するための手段】特殊な合成アミノ酸配列
が高特異性のある抗ｈＣＧ抗体の生成に有効に使われる
ということがわかり、本発明はこの知見に基づいてなさ
れたものである。従って、本発明はｈＣＧ分析物類似物
を用いる抗ｈＣＧ抗体の精製法を目的とし、さらにはｈ
ＣＧ分析物類似物の生成を目的とする。この精製法は
式： Asp¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Ser-L
ys-Ala-Pro-Pro¹²⁵-Pro-Ser-Leu-Pro-Ser¹³⁰-Pro-Ser-A
rg-Leu-Pro¹³⁵-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-P
ro-Gln¹⁴⁵ のペプチド配列を持つｈＣＧ分析物類似物を担体あるい
は支持体上に不溶化したアフィニティーカラムを使う。
またペプチド配列に同じ様にエピトープを持つ抗hＣＧ
抗体は、特異的に抗ｈＣＧ抗体を含有する体液から吸着
される。

【０００６】本発明の他の好ましいｈＣＧ分析物類似物
は式： Asx¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Glx-Asx-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Lys-A
la-Pro-Pro-Pro¹²⁵-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro¹³⁰-Ser-Arg-L
eu-Pro-Gly¹³⁵-Pro-Pro-Asx-Thr-Pro¹⁴⁰-Ile-Leu-Pro-G
lx-Ser¹⁴⁵-Leu-Pro [式中、AsxがAsp、GlxがGlu]で示されるＣ末端ペプチド
の変異体も含む。さらに本発明の好ましいペプチド配列
は、アフィニティーカラムでの使用に際し支持体へのペ
プチドの固定を促進するために１つあるいはそれ以上の
末端Lys残基を含有し得る。たとえばｈＣＧ分析物類似
物は式：Asx¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Glx-Asx-Ser-Ser-Ser
¹²⁰-Lys-Ala-Pro-Pro-Pro¹²⁵-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro¹³⁰-
Ser-Arg-Leu-Pro-Gly¹³⁵-Pro-Pro-Asx-Thr-Pro¹⁴⁰-Ile-
Leu-Pro-Glx-Ser¹⁴⁵-Leu-Pro [式中、AsxはAsp、GlxはGln]で示され、またそのペプチ
ド配列は少なくとも１つの末端Lys残基を含む。さらに
２３以下のアミノ酸残基のペプチド配列および変異体配
列体も使われ得る。

【０００７】本発明により生成される抗ｈＣＧ抗体は、
以下に詳述するように、検定に有効に使用される。本発
明はｈＣＧ分析物類似物を用いて抗ｈＣＧ抗体の精製法
を提供することを目的とする。本発明の方法はモノクロ
ナル抗ｈＣＧ抗体の特異性に匹敵する特異性を持つ精製
ポリクロナル抗ｈＣＧ抗体の生成を可能とする。本発明
の方法は、上記の従来の方法に比べて時間節約や低製造
コストの点で非常に有利である。

【０００８】ここで用いる語句を以下に説明する。「抗
原決定基」(determinants)とは、抗原と抗体の免疫学的
結合で象徴される特異的な結合反応に密接に関与する分
析物や他の特異的結合因子の部位である。すなわち、本
質的に抗原決定基は、免疫学的特異性に基づいて、抗原
を、従って抗体を他のものと区別する因子である。「分
析物類似物」(analyte−analog)とは、実質的に対照の分
析物の１以上の抗原決定基と同じ空間的極性的機構を有
する分子である。この抗原決定基の複製は、分析物類似
物が分析物の特異的結合特製を模倣するのを可能にす
る。従って、分析物類似物は分析物の特異的結合因子に
結合できる。さらに分析物類似物は、分析物と同一では
ないが、分析物の特異的結合因子に結合するのに必要な
抗原決定基を含むよう改変され得る。

【０００９】「特異的結合因子」(specific binding memb
er)とは、特異的結合ペアーの一員、すなわち、１つの
分子が化学的あるいは物理的手段によりもう１つの分子
に結合する２つの異なった分子のうちの一方である。免
疫学的特異的結合因子には、抗原、ハプテン、抗体およ
びそれらのＤＮＡ組換え法やペプチド合成により形成さ
れた複合体が含まれる。抗体はモノクロナルあるいはポ
リクロナル抗体、組換え蛋白あるいはその混合物やフラ
グメント、さらに抗体と他の特異的結合因子との混合物
である。このような抗体の調製およびそれらの特異的結
合因子としての適合性はこの分野で公知である。

【００１０】「標識」とは、特異的結合因子に結合し、可
視的にあるいは機器による手段によって検出可能な信号
を生成することのできる物質である。本発明に使用され
る種々の好ましい標識は色素源、触媒、蛍光物質、化学
ルミネッセンス化合物、放射性標識、コロイド状金属あ
るいは非金属粒子などの直接可視標識、染色粒子、酵素
あるいは基質、有機重合体粒子、リポソームあるいは信
号生成物質を含有した小胞体等である。

【００１１】標識として好ましく使用される多くの酵素
が米国特許第４,２７５,１４９号、カラム１９−２３に
報告されている。また、本発明に有用な酵素／基質信号
生成システムの一例は、アルカリホスファターゼと基質
のニトロブルーテトラゾリウム−５−ブロモ−４−クロ
ロ−３−インドールリン酸塩あるいはその誘導体あるい
はその類似物である。もう１つの信号生成システムで
は、標識は蛍光物質で、この場合は測定可能な信号を生
成するために標識の酵素処理は必要としない。この反応
では標識としてフルオレセイン、フィコビリン蛋白、ロ
ーダミンおよびそれらの誘導体や類似物が好ましい。

【００１２】可視的に測定可能な着色した粒子が指示試
薬の標識成分として使用され、それによりさらに標識生
成試薬の必要もなくて、検体中の分析物の存在および濃
度を測定し得る直接的着色指標が提供される。着色粒子
して使用できる物質には、米国特許第４,３１３,７３４
号および第４,３７３,９３２号に記載の金などの金属コ
ロイドや染料粒子が挙げられる。コロイド状セレン粒子
などの非金属コロイドの調製、使用は１９８７年７月９
日に出願された米国特許出願第０７２０８４号に記載さ
れている。免疫クロマトグラフィーにおけるコロイド状
粒子標識の使用は、１９８７年７月１３日出願の米国特
許出願第０７２４５９号に記載されている。有機重合体
ラテックス粒子の使用は１９８８年９月２３日出願の米
国特許出願第２４８８５８号に記載されている。

【００１３】「指示薬」とは特異的結合因子に結合してい
る標識を意味する。指示薬は検体中の分析物の量に相関
したレベルで測定可能信号を生成する。一般に指示薬は
固相に捕獲されたあと検出、測定されるが、非結合指示
薬も測定されて、分析結果に現れてくることもある。指
示薬の特異的結合因子は、サンドイッチ検定法における
ように分析物に結合するか、競合法におけるように捕獲
試薬に結合するか、あるいは間接検定法に置けるように
副特異的結合因子と結合することができる。上記のごと
く、標識は指示薬が検体中の分析物の量に相関して測定
可能信号を生成するの可能にする。指示薬の特異的結合
成分は、標識が分析物や副特異的結合因子やあるいは捕
獲試薬に間接的に結合するのを可能にする。粒子標識の
選択は重大ではないが、しかし、標識は着色有機重合体
ラテックス粒子によって生じた可視的測定可能信号のよ
うな、それ自体によって測定可能信号を発生させること
もできるし、あるいは酵素／基質信号生成システムのよ
うに、１つあるいはそれ以上の付加信号生成成分と結合
することにより測定可能信号を発生させることができ
る。種々の異なった指示薬が標識や特異的結合因子を変
えることによって得られる。これらの選択は検出すべき
分析物や検出方法を考慮してなされるということは、こ
の分野で自明である。

【００１４】「捕獲試薬」(capture reagent)とは、一般
に、しかし、すべての場合ではないが、固相に付着した
非標識特異的結合因子である。成分の付着は本質的には
不可逆性で共有結合機構を含む。捕獲試薬は実質的に分
析物および／あるいは指示薬を他の分析試薬や残りの検
体と分離することにより、測定可能信号の観察を助長す
るために使用される。捕獲試薬の特異的結合因子はサン
ドイッチ検定法におけるように分析物に特異的である
か、または競合法におけるように指示薬あるいは分析物
に特異的であり、あるいは間接検定法におけるようにそ
れ自体分析的に特異性を示す副特異的結合因子に特異的
である。「副特異的結合因子」(ancillary specific bind
ing member)とは、捕獲試薬や指示薬の特異的結合因子
に加えてさらに検定に使用される特異的結合ペアの一員
である。たとえば間接検定法において副特異的結合因子
は分析物自体が付着できない第２の特異的結合因子と同
様分析物を結合し、あるいは競合法では副特異的結合因
子は下記の如く参照結合因子かもしれない。１つあるい
はそれ以上の副特異的結合因子が１つの検定に使用され
得る。

【００１５】「固相」(solid phase)とは、不溶性である
かまたはのちの反応によって不溶化され得る物質であ
る。本発明の検定法は多くの形態があり、そのいくつか
は固相の物質の選択に依存する。たとえば固相は適当な
多孔性物質を含む。多孔性とは、液体が流れたり容易に
通過できる性質である。本発明では固相は１つ以上の検
出試薬を含有する１つあるいはそれ以上の層を有する流
下式検定器具(pour andflow-through assay device)に
用いられるガラス繊維、セルロース、あるいはナイロン
パッド、浸漬読み取り検定法(dip and read assay)で用
いられるディップスティック、吸上法(wicking)用の試
験片(紙等)あるいは薄層クロマトグラフィー用の試験片
(ニトロセルロース等)、あるいはこの分野で公知の多孔
性物質を含む。しかしながら、固相は多孔性物質に限定
されない。固相は重合体あるいはガラスビーズ、マイク
ロパーティクル、チューブ、シート、プレート、スライ
ド、小孔、テープ、試験管など、あるいは固相の充填物
を有する物質または充填物を保持することのできる他の
いかなる物質をも含む。

【００１６】本発明の説明に使用する略語は以下の通り
である。略語 アミノ酸 Ala アラニン Arg アルギニン Asn アスパラギン Asp アスパラギン酸(アスパラギン酸塩) Asx アスパラギン酸あるいはアスパラギン Cys システイン Gln グルタミン Glu グルタミン酸(グルタミン酸塩) Glx グルタミンあるいはグルタミン酸 Gly グリシン His ヒスチジン Ile イソロイシン Leu ロイシン Lys リシン Met メチオニン Phe フェニルアラニン Pro プロリン Ser セリン Thr スレオニン Trp トリプトファン Tyr チロシン Val バリン Xaa 未知あるいはその他

【００１７】

【発明の実施の形態】一般的方法と材料 合成ペプチド 本発明は抗ｈＣＧ抗体の精製のための化学的に合成され
たＣＴＰフラグメントつまり分析物類似物を含む。好ま
しい態様においてそのようなフラグメントは式： Asp¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Ser-L
ys-Ala-Pro-Pro¹²⁵-Pro-Ser-Leu-Pro-Ser¹³⁰-Pro-Ser-A
rg-Leu-Pro¹³⁵-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-P
ro-Gln¹⁴⁵ のアミノ酸配列からなる。この配列はモルガンらによっ
て報告された[Mol. Cell. Biochem. 2(1) 97-99 (197
3)]。本発明の合成フラグメントにおいて１１２位から
１２２位のペプチド部分の含有は少なくとも１個あるい
は３個の、該ｈＣＧ分析物類似物を他の糖蛋白や他のＣ
ＴＰペプチド配列と有効に区別せしめる付加的抗原決定
基を提供することがわかった。さらに好ましい態様にお
いては、本発明の分析物類似物は配列の両末端において
１個あるいはそれ以上のLys残基を含有する。Lys残基の
付加はカラムクロマトグラフィーの際にペプチドの不溶
化を助長する。たとえばこの発明によれば、ＣＴＰ１１
２−１４５分析物類似物を含有するペプチド配列は５個
の付加リシン残基を有するように合成され、抗ｈＣＧ抗
体の精製のためのアフィニティーカラムを形成するため
樹脂支持体に結合させられた。ＣＴＰ分析物類似物のＣ
ＯＯＨ末端へのポリリシンユニットの付加はアフィニテ
ィーカラムにおいて、アフィーゲル１０(Affigel−１
０)のような支持体への分析物類似物の結合を、抗体作
用に悪影響与えることなく、助けることがわかった(７
２−７８％結合能)。

【００１８】さらにもう１つ態様においては、本発明で
提供された分析物類似物は式： Asx¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Glx-Asx-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Lys-A
la-Pro-Pro-Pro¹²⁵-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro¹³⁰-Ser-Arg-L
eu-Pro-Gly¹³⁵-Pro-Pro-Asx-Thr-Pro¹⁴⁰-Ile-Leu-Pro-G
lx-Ser¹⁴⁵-Leu-Pro のように変化されたＣＴＰ配列の変異体である。そのよ
うな配列はバールらによって報告されている[Biochemic
al and Biophysical Research Communications,48(2) 4
16-422 (1972)]。このＣＴＰ変異体は１２０位からSer
アミノ酸残基１つが除かれ１３８位のSerがProに置き換
わりさらにペプチド配列に-Ser-Leu-Pro基が加わった点
で上記の第一の態様と異なっている。さらに好ましい態
様においては、AsxがAsp、GlxがGlnであり、分析物類似
物はペプチド配列のどちらの末端にもさらに１あるいは
それ以上のLys残基の付加を含有する。

【００１９】ペプチド合成あるいは他の化学的方法によ
るペプチド配列抗原決定基の合成は本発明が実施される
唯一の方法ではない。個々の実施者にとってその技術の
程度、利用できる材料、そして複製すべき抗原決定基の
型によって他の方法がさらに有効だということもある。
例えば、ＤＮＡ組換え技術が結合に必要な抗原決定基を
改造することに利用され得る。一方、必要な分析物類似
物抗原決定基は分析物を小片やフラグメントに細断(min
cing)したり消化(digesting)することより生成され得
る。そのようなフラグメントは例えば音波破砕のような
機械的方法、化学的方法あるいは酵素を用いた方法によ
り改造される。結果として生じたフラグメントとなった
分析物物質は抗原決定基が付着できる適当な抗体が固定
化されているアフィニティークロマトグラフィーカラム
を通過させ得る。そのあと分析物類似物はカラムから適
当な溶媒により溶出され得る。

【００２０】抗体精製 抗体はヤギに免疫原に対する応答を誘発させて生成され
る。免疫原はこの分野で公知の方法により一連の接種に
より動物に投与された。ここで述べる実験ではヤギが免
疫動物として使用されたがインビトロ、インビボ、いず
れにおいても免疫原に対して抗体を生成可能な動物が使
用できる。抗ｈＣＧ抗体は免疫原としてｈＣＧ全分子を
使用したり、または免疫原として合成β−サブユニット
あるいは本発明のＣ末端ペプチド配列などのｈＣＧ分析
物類似物を使用して誘発される。ｈＣＧ分子のβ−サブ
ユニットに対して生じた抗体をＣＴＰペプチドあるいは
本発明のＣＴＰ変異体が固定化されているアフィニティ
ーカラムに通した。カラムを洗浄後、ＣＴＰ抗原決定基
に特異的な抗体をカラムから溶出した。本発明に従って
生成されたこれらのポリクロナル抗体はｈＬＨに対して
無視できる程の交差反応性を有していることが判明し、
従来の生成抗体に比べてｈＣＧ全分子の検出に異種サン
ドイッチ免疫学的検出法などの免疫学的検出法において
有効に使用され得る。使用にあたっては結果として生じ
た精製抗体は免疫学的検出法においては指示試薬および
捕捉試薬を生成するために適当な機能的部分例えば標識
あるいは固相などに結合され得る。正確な使用条件は個
々の検出法の型およびその独自の要求条件に基づき日常
作業者により決定されるだろう。

【００２１】本発明の好ましいＣＴＰ変異体の使用は、
ｈＣＧ類似物のβ−サブユニットを認識するがｈＬＨと
は反応しない高特異的ポリクロナル抗体の精製のため
に、簡単に再生可能な１工程のアフィニティーカラムク
ロマトグラフィー操作の生成を可能にしそれによってそ
のような抗体が使用される検出法の特異性を強化するこ
とが判明した。さらに本発明のＣＴＰ変異体を用いて精
製されたポリクロナル抗体はＣＴＰペプチドを使用する
場合に比べ検出感度を増加させることが判明している。
本発明の他の利点は、分析物類似物を用いてペプチドア
フィニティーカラムが容易に調製されること、また従来
の方法に比べてそのようなカラムを用いて容易に特異性
抗体が生成されることである。こうして先行文献にある
ような２本のｈＣＧの全分子のアフィニティーカラムと
ｈＬＨのアフィニティーカラムの必要がないアフィニテ
ィーカラムが本発明により製造され得、またそのカラム
はｈＬＨに対して実質的に交差反応性を示さない抗体溶
液を生成することが判明している。さらにこの方法は迅
速で信頼でき再生可能で製造経費は低い。また本発明に
より精製されたポリクロナル抗体は従来使用されている
モノクロナル抗ｈＣＧ抗体に観察される特異性に近い特
異性を有することが判明している。この驚くべき結果は
ＣＴＰに存在する限定された数のエピトープに帰する
(ビダルトら, Immuno.134: 457, 1985)。

【００２２】本発明により提供される分析物類似物はま
た分析物類似物抗原決定基に特異的な抗体を誘発するた
めの免疫原を生成するために使用され得る。このような
免疫原は分析物類似物を担体蛋白、例えばヘモグロビン
あるいは牛血清アルブミン(ＢＳＡ)などに結合させるこ
とにより生成される。例えばそのような免疫原にはｈＣ
Ｇのβ−サブユニットに結合した担体蛋白およびＣＴＰ
配列あるいはその一部や変異体に結合した担体蛋白があ
る。ペプチドと担体はカルバミン酸塩、アミド、アミ
ノ、チオエーテルおよびエーテルなどの連結基により連
結している。本発明の好ましい態様は下記の実験例によ
り詳細に説明するがそれに限定されるものではない。

【００２３】

【実施例】実施例１ ヘルペスペプチドの合成 ヘルペスペプチド分析物類似物は本発明により生成さ
れ、下記のように１１０８−１１４０位塩基対の間の部
分に暗号化された単純ヘルペスウイルスＩ型糖蛋白Ｄ
(ＨＳＩＧＤ)の２９０−３００位アミノ酸に対応してい
る[ワトソンら, Science, 218: 381-384 (1982)]。その
分析物類似物のペプチド配列は式： Gln-Pro-Glu-Leu-Ala-Pro-Glu-Asp-Pro-Glu-Adp-Gly で示される。アミノ酸グリシンはペプチドのＣ末端で連
結されており、ペプチドと樹脂支持体の間の連結基とし
て作用する。

【００２４】Boc-Gly-OCH₂-Pam-樹脂はミッチェルらの
報告した下記の方法により合成された[J. Org. Chem.,
43: 2845-3852 (1978)およびJ. Am. Chem. Soc., 98: 7
357-7362 (1976)]。２.３６ｇのアミノメチル樹脂(０.
２５ｍＭ／ｇ)を反応器に入れ塩化メチレン中で３０分
間静かに膨潤させた。その後０.８９ｍＭのジクロロヘ
キシルカルボジイミド(ＤＣＣ)を添加して塩化メチレン
中で０.８９ｍＭのBoc-Gly-OCH₂C₆H₄CH₂CO₂Hと結合させ
た。保護されたアミノ酸は、アスパラギン酸とグルタミ
ンの場合を除いて、既存の対称無水物法により段階的に
樹脂支持体に結合させた。すべての末端アミノ残基はt
−ブトキシカルボニール(t−ＢＯＣ)により保護され、
種種のアミノ酸残基の側鎖はAspはシクロヘキシル基(OC
hxl)で、Gluはベンジル基(OBzl)で保護された。アミノ
酸Glu、Pro、LeuおよびAlaには下記の結合実験プロトコ
ールが用いられた。

【００２５】１．塩化メチレンを添加し、１分間振盪さ
せたのち濾過した（この工程は６回繰り返した)。 ２．５０％トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)の塩化メチレン溶
液を添加し１分間振盪させたのち濾過した。 ３．５０％トリフルオロ酢酸の塩化メチレン溶液を添加
し２０分間振盪させたのち濾過した。 ４．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾過
した（この工程は６回繰り返した)。 ５．５％ジエチルアミン(ＤＩＥＡ)の塩化メチレン溶液
を添加し２分間振盪させたのち濾過した（この工程は２
回繰り返した)。 ６．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾過
した（この工程は３回繰り返した)。 ７．８当量の保護アミノ酸を塩化メチレンに溶解し、０
℃に冷却した。この溶液に４当量のＮ−Ｎ−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド(ＤＣＣ)の塩化メチレン溶液を添
加した。０℃で１０分間攪拌した後、溶液を濾過した。
最終濃度が０.０５モルから０.１モルになるようにこの
対称無水物を樹脂が入った反応器に加えた。この反応器
を室温で２時間振盪したのち反応液を濾過した。

【００２６】８．塩化メチレンを添加し、１分間振盪さ
せたのち濾過する（この工程は３回繰り返した)。 ９．５％ジエチルアミン(ＤＩＥＡ)の塩化メチレン溶液
を添加し２分間振盪させたのち濾過した。 １０．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾
過した（この工程は３回繰り返した)。 １１．工程７を繰り返し、４当量の１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール(ＨＯＢＴ)をジメチルホルムアミド(Ｄ
ＭＦ)に溶解し０℃に冷却した。この溶液に４当量のＤ
ＣＣの塩化メチレン溶液を添加し次いで４当量の保護ア
ミノ酸のＤＭＦ: 塩化メチレン＝１:１混液溶液を添加
した。この反応混合液を０℃で１０分間攪拌した。次に
反応混合液を樹脂を含んだ反応器に移し室温で２時間振
盪した。 １２．ＤＭＦ: 塩化メチレン＝１:１混液を添加し、１
分間振盪させたのち濾過する（この工程は３回繰り返し
た)。 １３．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾
過した（この工程は３回繰り返した)。 反応の終了はサリンらの報告した定量ニンヒドリン試験
により監視した[Analytical Biochemistry, 117: 147-1
57 (1981)]。

【００２７】保護アミノ酸Aspの場合は工程１から６ま
では上記と同じでその後下記の工程を続けた。 ７．４当量の保護アミノ酸の塩化メチレン溶液を４当量
のＤＣＣの塩化メチレン溶液と反応器に加え、室温で２
４〜７２時間振盪した。 ８．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾過
する（この工程は６回繰り返した)。反応の終了は定量
ニンヒドリン分析により監視した。グルタミンの場合は
コニックとガイガーが報告したＤＣＣ／ＨＯＢＴ結合実
験プロトコールを用いた[Chem. Ber., 103: 788-798 (1
970)]。

【００２８】完全保護ペプチド−樹脂を塩化メチレン中
で５分間静かに膨潤させ下記のプロトコールを用いてＮ
−α−ＢＯＣ保護基を除いた。 １．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾過
した（この工程は６回繰り返した)。 ２．５０％ＴＦＡの塩化メチレン溶液を加え１分間振盪
させたのち濾過した。 ３．５０％ＴＦＡの塩化メチレン溶液を加え２０分間振
盪させたのち濾過した。 ４．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾過
した（この工程は６回繰り返した)。 ５．５％ＤＩＥＡの塩化メチレン溶液を加え３分間振盪
させたのち濾過した。 ６．塩化メチレンを添加し、１分間振盪させたのち濾過
した（この工程は４回繰り返した)。 ７．樹脂を乾燥した。

【００２９】ペプチド−樹脂は２個の分離した反応器に
分けあらかじめ１.５ｍｌのｐ−クレゾールを添加した
１３.５ｍｌの無水フッ化水素酸で０℃で６０分間処理
した。フッ化水素酸は０℃で真空留去する。分離した遊
離ペプチドと樹脂は各１０ｍｌのジエチルエーテルで４
回洗った。ペプチドは１０％および２０％の酢酸水溶液
でおのおの３回抽出した。抽出した水溶液を集め各１０
ｍｌのジエチルエーテルと酢酸エチルで３回ずつ洗浄し
た。水層を凍結乾燥しふわふわした白いペプチドを得
た。ポリペプチドは逆相高速液体クロマトグラフィー
(ＨＰＬＣ)によりリビエルらの報告した常法により精製
した[Journal of Chromatography, 288; 303-328 (198
4)]。精製ペプチドの組成は１１０℃で２４時間真空加
水分解したあとアミノ酸分析機により確認した。

【００３０】実施例２ β−ｈＣＧのＣ末端ペプチドの合成 β−ｈＣＧのＣＴＰの１１２−１４５位に対応して下記
のようにhＣＧ分析物類似物を本発明に従って生成し
た。ペプチド配列は式： Asp¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Ser-L
ys-Ala-Pro-Pro¹²⁵-Pro-Ser-Leu-Pro-Ser¹³⁰-Pro-Ser-A
rg-Leu-Pro¹³⁵-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-P
ro-Gln¹⁴⁵- で示される。

【００３１】分析物類似物をカルボン酸残基から段階固
相合成法により樹脂支持体上で合成した。実質的にはこ
の合成にはバラニーやメリーフィールドが報告した方法
と(The Peptides, 2: 1984), グロスやマインホッファ
ーが報告した方法[Academic Press, New York, N.Y.(19
80)]を使用した。BOC-L-Gln-OCH₂-樹脂を反応器、ベッ
クマンシンセサイザー(Beckman synthesizer)モデル９
００に移した。保護アミノ酸を実質的に実施例１に述べ
た方法に従い樹脂支持体に段階法により結合した。１２
８、１３４位のアミノ酸Leuを結合反応の終了を確実に
するため二重に結合させた。１２６位のProを取り込ん
だあと、すべての残りのアミノ酸を二重に結合させた。

【００３２】完全なペプチドは実施例１で述べたプロト
コールを用いて無水フッ化水素酸により完全保護ペプチ
ド−樹脂から分離された。粗ペプチドはＣ４カラム(１
０ｍｍX２５ｃｍ)で逆相ＨＰＬＣにより精製された[流
速:３ｍｌ／分、溶媒系:０.１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ(Ａ)と１
００％アセトニトリル(Ｂ)の勾配溶出]。使用した勾配
は１０％Ｂから３５％Ｂまで３０分間を要して行った。
ＨＰＬＣカラムからのポリペプチド溶出液は２２５ｎｍ
と２８０ｎｍの吸光度により監視した。精製ペプチドの
組成は実施例１の方法で確認した。

【００３３】実施例３ β−ｈＣＧポリリシンＣ末端ペプチドの合成 Ｃ末端に付着した５個の付加リシン残基(ポリリシンＣ
ＴＰと略す)も含めたポリリシン分析物類似物を下記の
工程により本発明により生成した。付加リシンは抗ｈＣ
Ｇ抗体の精製のためのアフィニティーカラムにおける使
用においてペプチド免疫吸着剤の生成を促進した。付加
アミノ酸はたとえば式： Asp¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Ser-L
ys-Ala-Pro-Pro¹²⁵-Pro-Ser-Leu-Pro-Ser¹³⁰-Pro-Ser-A
rg-Leu-Pro¹³⁵-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr¹⁴⁰-Pro-Ile-Leu-P
ro-Gln¹⁴⁵-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys のようなペプチド配列のいずれかの末端に付加され得
る。

【００３４】ペプチドはアプライドバイオシステムシン
セサイザー(Applied Biosystems synthesizer)モデル４
３０Ａで合成された点を除いて上記と同様に、集めら
れ、分離され、精製された。Boc-L-Lys(2 Cl-Z)-OCH₂-P
am-樹脂を反応器に移し、保護アミノ酸を対称無水物法
により段階的に樹脂支持体に結合した(ＤＣＣ／ＨＯＢ
Ｔ結合実験プロトコールを使用したときのアルギニン、
グルタミン添加の場合は除く)。完全保護ペプチド−樹
脂は無水フッ化水素酸で処理し次いで上記のようにペプ
チドの抽出精製を行った。

【００３５】実施例４ ポリリシンＣＴＰ変異体の合成 式： Asx¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Glx-Asx-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Lys-A
la-Pro-Pro-Pro¹²⁵-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro¹³⁰-Ser-Arg-L
eu-Pro-Gly¹³⁵-Pro-Pro-Asx-Thr-Pro¹⁴⁰-Ile-Leu-Pro-G
lx-Ser¹⁴⁵-Leu-Pro (式中AsxはAsp、GlxがGln、および配列の末端に５個の
付加リシン残基を含む)の配列を有するポリリシンＣＴ
Ｐ変異体分析物類似物を本発明により合成した。ペプチ
ドをアミノ酸の側鎖官能基がLysを２−Ｃl−Ｚ；SerをB
zl ;AspをOBzl；Argをtosyl(ＴＯＳ)；ThrをBzlの結合
反応で保護されている点を除いて実質的には実施例３の
工程と同じように、集め、分離し、精製した。１１２、
１２３、１２４、１２７、１３３、１３５、１３６、１
４１、１４２および１４６位のアミノ酸を対称無水物法
を用いて塩化メチレン中で実質的には実施例１のおなじ
ように再結合した。

【００３６】完全保護ペプチド−樹脂を無水フッ化水素
酸で処理し次いでさらに４０％酢酸水溶液で抽出するこ
と以外は実質的には実施例１の工程に従いペプチドの抽
出を行った。粗ペプチドはＣ４カラム(Vydac ２２ｍｍ
×２５ｃｍ、The SeparationGroup, Hesperia, CA)で逆
相ＨＰＬＣにより実質的に実施例１の工程により精製さ
れた[流速: １２ｍｌ／分、溶媒系：０.１％ＴＦＡ／Ｈ
₂Ｏ(Ａ)と１００％アセトニトリル(Ｂ)の勾配溶出]。勾
配は１９％Ｂで始まり３分間保ち次にウォーターの自動
勾配コントローラー(Water's Millipore Corporation,
Bedford, MA)の曲線７番を用いて４０％Ｂまで２０分間
を要して変化させた。勾配は４０％Ｂを１分間保持し次
いで１分間を要して１９％Ｂまで戻した。ＨＰＬＣカラ
ムからのポリペプチド溶出液は同時に２２５ｎｍと２５
４ｎｍの吸光度により監視した。精製ペプチドの組成は
実施例１の方法で確認した。

【００３７】実施例５ ＣＴＰ：ヘモシアニン免疫原 実施例２の工程により実質的に生成されたＣＴＰをヘモ
シアニン(リムルス・ポリフェムス・ヘモリンフVIII型
起源、シグマ社製)に１−エチル−３−(３−ジメチルア
ミノプロピル)カルボジイミド(ＥＤＣ)法により結合し
た。１ｍｇのＣＴＰをリン酸緩衝生理食塩水１.０ｍｌ
に溶解した。２.０ｍｇのヘモシアニンを秤量しＣＴＰ
溶液に移した。２０ｍｇのＥＤＣを計り水２００μｌに
溶解した。ＥＤＣ溶液をゆっくりと撹拌下ＣＴＰヘモシ
アニン溶液に加えた。混合液は１時間反応させそれから
セルロース透析膜(Spectra/por,スペクトラム・メディ
カル・インダストリーズ・インク、ロサンゼルス、カル
フォルニア；分子量１２,０００〜１４,０００)を用い
て水に対し透析した。透析は透析外液を３回変えて２４
時間行った。透析後、遠心分離により溶液を透明にし
た。結果として生じた接合体をビウレット法での蛋白含
量測定で検定した。

【００３８】実施例６ 抗ｈＣＧ抗体精製 抗体精製用のアフィニティーカラムを下記の工程により
本発明の分析物類似物を用いて作った。実質的には実施
例４に記載の工程により製造された本発明のＨＰＬＣに
よる精製ポリリシンＣＴＰ変異体ペプチドを０.１Ｍ ３
−(Ｎ−モルホリノ)−プロパンスルホン酸(ＭＯＰＳ)緩
衝液、ｐＨ７.５に溶解した。その溶液をあらかじめ洗
浄し０.１Ｍ ＭＯＰＳ, ｐＨ７.５中で活性化しておい
たアフィーゲル１０樹脂(Affigel−１０、バイオラッド
社製)のスラリーと結合した。ペプチド(ｍｇ)とアフィ
ーゲル１０(ｍｌ)の割合は約７:１だった。２〜８℃で
一晩結合反応させた後、樹脂と結合したペプチドを０.
１Ｍ ＭＯＰＳ、ｐＨ７.５で３回洗浄し０.１Ｍトリス
−(ヒドロキシメチル)アミノエタン（ｐＨ７.５)、０.
５Ｍ 塩化ナトリウム、０.１％窒化ナトリウム含有のト
リス緩衝生理食塩液中で平衡させ、２８０ｎｍの初期吸
光度(Ａ２８０)を測定した。

【００３９】ヤギに生じたｈＣＧのβ−サブユニットに
対する抗血清を２〜８℃で硫酸アンモニウムで沈澱させ
た。沈澱した抗体を遠心分離で集めその沈澱をトリス緩
衝生理食塩液に再懸濁させた。再懸濁した抗体を２〜８
℃でトリス緩衝生理食塩液に徹底的に透析し、−１５℃
で凍結保存した。抗体のカラムクロマトグラフィーによ
る精製工程は室温で行った。凍結抗体は解凍し自然に室
温に戻した。抗体は０.５ｍｌ／分の流速でアフィニテ
ィーカラムに通した。非結合物質をトリス緩衝生理食塩
液で洗浄後の初期Ａ２８０値が基準値に戻るまで洗浄し
て除いた。結合抗体を０.１Ｍグリシン塩酸緩衝液、ｐ
Ｈ２.５で１.５ｍｌ／分の流速で溶出させた。抗体を含
んだ分画を集め直ちに０.５Ｍ トリスで中和した。中和
した抗体溶液は０.１５Ｍ塩化ナトリウム含有の０.０２
Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７.２に２〜８℃で徹底的に
透析した。透析後の抗体溶液は約１０ｍｇ／ｍｌまで濃
縮し、−１５℃で凍結保存した。

【００４０】精製抗体の比較 ＣＴＰペプチド精製抗体と実質的に実施例６に記載の工
程により生成されたＣＴＰ変異体精製抗体の当量蛋白量
を本発明の原理を用いる抗体生成を実施するために用い
た。上記を完成するために、ＣＴＰペプチド抗体および
ＣＴＰ変異体抗体を下記のように異種サンドイッチ免疫
学的検定法において２個の異なる抗体／酵素指示薬を作
るためにアルカリホスファターゼと結合させた。

【００４１】アルカリホスファターゼの酸化は２５ｍＭ
過ヨウ素酸ナトリウム、０.２ｍＭ酢酸ナトリウム、お
よび０.２Ｍリン酸ナトリウム混合液、ｐＨ４.５中で暗
所、室温下３時間行った。酸化はグリセロールを添加し
て終了させ、生成物は１００ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍ
Ｍ塩化マグネシウム、および１ｍＭ塩化亜鉛含有の１０
ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４.５に１晩透析した。透析
したアルカリホスファターゼを最終抗体濃度が１.５か
ら２.０ｍｇ／ｍｌになるように各精製抗体と１: １の
割合で結合させた。溶液のｐＨを炭酸水素ナトリウムを
添加してｐＨ９.５まで上げ、その溶液を暗所室温下で
５時間静かにインキュベイトした。各指示薬を２〜８℃
にして水素化ホウ素ナトリウムを添加して３時間還元し
た。還元した指示薬は１晩２〜８℃で０.１ｍＭ塩化マ
グネシウム、０.１ｍＭ塩化亜鉛および０.１％(ｗ/ｖ)
窒化ナトリウム含有の５０ｍＭトリス塩酸緩衝液、ｐＨ
７.５に透析した。

【００４２】生じた指示薬をアボット１Ｍx^TM自動微粒
子酵素免疫学的検定システム(アボット・インダストリ
ーズ社製)を用いてｈＣＧサンドイッチ免疫学的検定に
おいて使用される当量の信号を生成するために滴定し
た。捕獲試薬は微粒子上に、０.５ｍＭ塩化ナトリウ
ム、０.１％窒化ナトリウム、および１３.６％ショ糖含
有の５０ｍＭトリス塩酸緩衝液、ｐＨ７.５中で被覆さ
れたモノクロナル抗β−ｈＣＧ抗体であった。検体(５
０μｌ)と捕獲試薬(５０μｌ)および１種の指示薬(５０
μｌ)[溶媒:０.５Ｍ塩化ナトリウム、２.２５％(ｗ/ｖ)
魚ゼラチン、１％(ｗ/ｖ)Brij−３５、１.０ｍＭ塩化マ
グネシウム、０.１ｍＭ塩化亜鉛、０.１％(ｗ/ｖ)窒化
ナトリウムおよび正常ヒト血清 : 正常ヤギ血清＝７５:
２５(ｖ／ｖ)混合液(１０μｌ)含有の５０ｍＭトリス塩
酸緩衝液、ｐＨ７.４]、および希釈剤(０.３Ｍ塩化ナト
リウムおよび０.１％窒化ナトリウム含有の０.０５Ｍト
リス塩酸緩衝液、ｐＨ７.５)(１０μｌ)と混合した。反
応混合液は反応小孔に分配し５分間インキュベイトし
た。反応混合液の一部(１１０μｌ)を微粒子の結合する
ガラス繊維マトリックスに移し、マトリックスを希釈剤
で洗浄した。蛍光基質の４−メチルウンベリフェロルホ
スフェイト (６５μｌ) をマトリックスに添加して検体
を蛍光分析機で読み取る。マトリックスの表面から発光
する蛍光度は検体中の分析物の濃度に直接的に比例して
いる。

【００４３】正常子牛血清マトリックスにおいて既知量
のｈＣＧを含有しているキャリブレーターを測定しそれ
を各指示薬の標準曲線を計算するために使用した。計算
結果は表１に示した。１／２０００力価の指示薬を特異
的結合因子としてＣＴＰ変異体抗体含有の試薬として用
いた。１／１０００力価の指示薬を特異的結合因子とし
てＣＴＰペプチド抗体含有の試薬として用いた。ＣＴＰ
変異体抗体から生成された指示薬は hＣＧ濃度が０μI
Ｕ／ｍｌでより低いバックグラウンドを作ることによっ
てより高い信号／雑音 (Ｓ／Ｎ) 比率を示すことが表１
から判明した。カウント／秒／秒(ｃ/ｓ/ｓ)比率はフィ
オーレらの報告した酵素／基室反応により生じた蛍光発
光の強さの測定値である[Clinical Chemistry, 34(9);
1726-1732, 1988]。Ｓ／Ｎは０値キャリブレーターの測
定値で割った各検体の測定値として定義される。

【００４４】

【表１】指示薬の効果の比較

【００４５】一群の対照群も測定し、キャリブレーター
により作成された標準曲線から得られた結果を表２に示
す。対照はｈＣＧを約２５、１５０、および７５０ｍI
Ｕ／ｍｌ含有していた。結果は本発明により精製された
抗体から製造した２個の異なった指示薬が当量の信号を
生成すること、および信号を生成するために必要なＣＴ
Ｐ変異体を含有した指示薬の濃度はかなりの低濃度(２
分の１の濃度)でいいことも示している。

【００４６】

【表２】標準曲線を用いた対照群の測定 (注) 検体のｈＣＧ濃度は標準曲線から求めた。

【００４７】検体結果は本発明により製造された好まし
い抗体すなわちＣＴＰ変異体を用いて精製された抗体か
ら作った指示薬は検定感度をｈＣＧの０ｍIＵ／ｍｌ濃
度において９５％信頼限界まで増加させたことを示して
いる。さらにｈＬＨ交叉反応性は既知ｈＬＨ検体を用い
た同じ検査を行うこと、および結果として生じるｈＣＧ
値を測定することによって決定される。ｈＬＨ交叉反応
性は表３に示すように指示薬にＣＴＰ変異体を用いた場
合に比べて３倍から８倍低いことが判った。

【００４８】

【表３】交叉反応性 (注) 検体のｈＣＧ濃度は標準曲線から求めた。

【００４９】本発明の方法は分析物類似物の製造および
ｈＣＧ以外の分析物の抗体の精製に等しく適用できるこ
とは同業者には明白であろう。従って、上記の好ましい
態様および提示した他の態様は例示したものでそれに限
定されるものではない。つまり本発明の記載事項は記載
の特別の態様に限定されるものではなく上記の本発明の
請求範囲内のすべての同等物および目的主題を包含す
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジョン・ビイ・ボドナー アメリカ合衆国イリノイ60031、ガーニー、 テイラー・ドライブ931番

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）支持体上に固定化された式： Asp¹¹²-Pro-Arg-Phe¹¹⁵-Gln-Asp-Ser-Ser-Ser¹²⁰-Lys-A
   la-Pro-Pro-Pro¹²⁵-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro¹³⁰-Ser-Arg-L
   eu-Pro-Gly¹³⁵-Pro-Pro-Asp-Thr-Pro¹⁴⁰-Ile-Leu-Pro-G
   ln-Ser¹⁴⁵-Leu-Pro で示されるペプチド配列を有するｈＣＧ分析物類似物を
   抗ｈＣＧ抗体含有体液と接触させて、該ペプチド配列に
   特異的な抗ｈＣＧ抗体を吸着させ、ついで（ｂ）特異的
   に吸着された該抗ｈＣＧ抗体を溶出させる工程からなる
   抗ｈＣＧ抗体精製方法により製造される抗ｈＣＧ抗体。
2. 【請求項２】 該ペプチド配列が、それを支持体に結合
   させるために、さらに少なくとも１つの末端Lys残基を
   含んでいる請求項第１項に記載の抗体。