JP2000131301A - 液体クロマトグラフィー用フィルター、液体クロマトグラフィー用カラム及びヘモグロビン類の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 生体試料の吸着が少なく、寿命が長く、分離
性能に悪影響を与えない液体クロマトグラフィー用フィ
ルター、該フィルターを用いることにより寿命が長く、
分離性能に悪影響を与えない液体クロマトグラフィー用
カラム及び該フィルター又はカラムを用いるヘモグロビ
ン類の測定方法を提供する。 【解決手段】 少なくとも表面素材が、特定の材質
（例、ポリエチレン、チタン、ポリプロピレン、表面が
シリル化処理された二酸化珪素）群から選ばれる少なく
とも一種よりなる、又は、上記の特定の材質のものを複
数組み合わせてなることを特徴とする液体クロマトグラ
フィー用フィルター１。上記の液体クロマトグラフィー
用フィルターが装着されたことを特徴とする液体クロマ
トグラフィー用カラム。上記液体クロマトグラフィー用
フィルター又はカラムを用いることを特徴とするヘモグ
ロビン類の測定方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フィー用フィルター、液体クロマトグラフィー用カラム
及び該フィルター又はカラムを用いるヘモグロビン類の
測定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】有機化学、生化学、医学などの分野にお
ける試料中の成分の分離や分取に液体クロマトグラフが
汎用されている。この液体クロマトグラフは、通常、図
７のようなシステムに構成されている。溶離液などの移
動相１１が電磁弁１２を通り、送液ポンプ１３により試
料導入装置１４を経由して、フィルタ−装置１５を通り
分離カラム１６に入り、この分離カラム１６により試料
中の各成分が分離される。分離された各成分は検出器１
７によって、例えば、吸光度を測定する等によって検出
され、その結果がデーター処理装置１８により処理され
てクロマトグラム１９として表される。

【０００３】上記、分離カラム１６の上流のフィルタ−
装置１５はラインフィルタ−（例えば、後述の図４）と
呼ばれ、フィルターとそれを収容するホルダーで構成さ
れており、該フィルターによって、試料中の固形物や送
液ポンプのシール部品の摩耗物などの不溶物が濾過され
る。また、液体クロマトグラフにおいて使用されるフィ
ルタ−には、上記のラインフィルタ−の他に、分離カラ
ムの試料導入側及び試料導出側に取り付けられるフィル
ターもある。このようなフィルターが装着された液体ク
ロマトグラフィー用カラムを図８に示した。図８におい
て、符号４０は分離カラム本体、符号４１はフィルタ
ー、符号４２はエンドフィッティングである。なお、図
８は試料導入側のみを示したものであり、試料導出側を
省略しているが、試料導出側も同様に構成される。この
カラムにおいては、エンドフィッティング４２の中にフ
ィルター４１が装着され、フィルター４１とエンドフィ
ッティング４２との間隙はシール部材４３で密閉されて
いる。そして、エンドフィッティング４２と分離カラム
本体４０が螺合されることにより、分離カラム本体４０
の端部にフィルター４１が密着されている。

【０００４】このようなフィルタ−装置に用いられるフ
ィルタ−は、一般に、円板状であり、材質はステンレス
製焼結体などが用いられている。

【０００５】特開平７−２６０７６３号公報には、充填
剤が収納されたカラム本体のエンドフィティングフィル
ターとして、ステンレス鋼繊維を積層し、それを焼結し
た繊維焼結フィルターを用いた高速液体クロマトグラフ
ィーカラムが提案されている。このフィルターが装着さ
れた液体クロマトグラフィーカラムを、生体試料の測定
に用いると、フィルターに生体試料が吸着し、圧力が上
昇し、連続して多数の試料を測定できないという問題が
あった。

【０００６】また、クロマトグラフィー用カラムの製造
方法の一つとして、管の内壁に、珪素化合物の溶液を通
流し、ＣＬＤ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｑｕｉｄ Ｄｅ
ｐｏｓｉｔｉｏｎ）法により、不活性な二酸化珪素被膜
を形成させ、この管内部に充填剤を充填する方法がある
（特公平２−１３２６８号公報）。

【０００７】液体クロマトグラフィーによる測定の一つ
として、血液中の糖化ヘモグロビン、特にヘモグロビン
Ａ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃという）が糖尿病診断の指標
となるため広く測定されている。糖化ヘモグロビンとは
血液中の糖がヘモグロビンと結合して生成したものであ
る。溶血液試料中の糖化ヘモグロビンは、過去１〜２カ
月間の血液中の平均的な糖濃度を反映するので溶血液中
の糖化ヘモグロビンは、糖尿病の診断の指標となる。

【０００８】このＨｂＡ１ｃの液体クロマトグラフィー
法による測定は、主にカチオン交換液体クロマトグラフ
ィー法により行われている（特公平８−７１９８号公報
など）。溶血液試料をカチオン交換液体クロマトグラフ
ィーにより分離すると、通常、ヘモグロビンＡ１ａ（以
下、ＨｂＡ１ａという）及びヘモグロビンＡ１ｂ（以
下、ＨｂＡ１ｂという）、ヘモグロビンＦ（以下、Ｈｂ
Ｆという）、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ並
びにヘモグロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）などの
ピークに分画できる。なお、糖尿病の診断の指標として
使用されているＨｂＡ１ｃは、上記のうちの安定型Ｈｂ
Ａ１ｃであり、全ヘモグロビンピークの面積に対する安
定型ＨｂＡ１ｃピークの面積の比率（％）として求めら
れている。

【０００９】このＨｂＡ１ｃの液体クロマトグラフィー
法による測定は、カラムとしてカチオン交換液体クロマ
トグラフィー用充填剤（例えば、カルボキシル基やスル
ホン酸基を官能基として有する充填剤）が充填されたも
のを用い、ｐＨ５．０〜９．０の溶離液を用いて行われ
ている。

【００１０】この測定において、ステンレス焼結体から
なるフィルターを用いると、該フィルターに生体試料が
吸着し、圧力が上昇し、連続して多数の試料を測定でき
ない、及び、分離性能に悪影響がでるという問題があっ
た。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
に鑑みてなされたものであり、その目的は、生体試料の
吸着が少なく、寿命が長く、分離性能に悪影響を与えな
い液体クロマトグラフィー用フィルター、該フィルター
を用いることにより寿命が長く、分離性能に悪影響を与
えない液体クロマトグラフィー用カラム及び該フィルタ
ー又はカラムを用いるヘモグロビン類の測定方法を提供
することにある。

【００１２】

【課題を解決するための手段】請求項１記載の発明は、
少なくとも表面素材が、セルロース系樹脂、フッ素系樹
脂、スルホン系樹脂、ポリエチレン、エチレンのアルキ
ル誘導体の重合体、アクリル系樹脂、ナイロン、炭化物
セラミック、窒化物セラミック、珪化物セラミック、硼
化物セラミック、表面がシリル化処理された二酸化珪
素、ガラス及びチタンからなる群より選ばれる少なくと
も一種よりなる、又は、これらを複数組み合わせてなる
ことを特徴とする液体クロマトグラフィー用フィルター
である。

【００１３】請求項２記載の発明は、請求項１に記載の
液体クロマトグラフィー用フィルターが、更に、ブロッ
キング試薬でブロッキング処理されていることを特徴と
する液体クロマトグラフィー用フィルターである。

【００１４】請求項３記載の発明は、請求項１又は２に
記載の液体クロマトグラフィー用フィルターが装着され
たことを特徴とする液体クロマトグラフィー用カラムで
ある。請求項４記載の発明は、更に、カラム本体がシリ
コーン被膜でコーティングされていることを特徴とする
請求項３記載の液体クロマトグラフィー用カラムであ
る。請求項５記載の発明は、更に、カラム本体がブロッ
キング試薬でブロッキング処理されていることを特徴と
する請求項４記載の液体クロマトグラフィー用カラムで
ある。

【００１５】請求項６記載の発明は、請求項１又は２に
記載の液体クロマトグラフィー用フィルターを用いるこ
とを特徴とするヘモグロビン類の測定方法である。

【００１６】請求項７記載の発明は、請求項３〜５のい
ずれかに記載の液体クロマトグラフィー用カラムを用い
ることを特徴とするヘモグロビン類の測定方法である。

【００１７】以下、本発明の液体クロマトグラフィー用
フィルターについて詳述する。本発明の液体クロマトグ
ラフィー用フィルターは、少なくとも表面素材が、セル
ロース系樹脂、フッ素系樹脂、スルホン系樹脂、ポリエ
チレン、エチレンのアルキル誘導体の重合体、アクリル
系樹脂、ナイロン、炭化物セラミック、窒化物セラミッ
ク、珪化物セラミック、硼化物セラミック、表面がシリ
ル化処理された二酸化珪素、ガラス及びチタンからなる
群より選ばれる少なくとも一種よりなる、又は、これら
を複数組み合わせてなることを特徴とする。

【００１８】上記セルロース系樹脂には、例えば、酢酸
セルロース、三酢酸セルロース、セルロース、硝酸セル
ロースなどが挙げられる。上記フッ素系樹脂には、例え
ば、ポリ四フッ化エチレン、四フッ化エチレン−パーフ
ルオロアルキルビニルエーテル共重合体、四フッ化エチ
レン−六フッ化プロピレン共重合体、ポリ三フッ化塩化
エチレン、ポリフッ化ビニリデン、四フッ化エチレン−
エチレン共重合体、三フッ化塩化エチレン−エチレン共
重合体などが挙げられる。

【００１９】上記スルホン系樹脂には、例えば、ポリス
ルホン、ポリエーテルスルホンが挙げられる。上記エチ
レンのアルキル誘導体の重合体としては、例えば、ポリ
プロピレン、ポリブチレンが挙げられる。上記アクリル
系樹脂には、例えば、アクリル共重合体が挙げられる。

【００２０】上記「表面がシリル化処理された二酸化珪
素」におけるシリル化処理とは、二酸化珪素の表面のシ
ラノール基の水酸基をトリアルキルシリル化（例えば、
トリメチルシリル化）、ジアルキルシリル化（例えば、
ジメチルシリル化）などのシリル化する処理のことをい
う。シリル化に使用される薬剤としては、例えば、ヘキ
サメチルジシラザン、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリ
ル）アセトアミド、ビス（トリメチルシリル）トリフル
オロアセトアミド、ジメチルジクロロシラン、Ｎ−（ｔ
ｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−Ｎ−メチルトリフロ
ロアセトアミド、ｔ−ブチルジメチルクロロシラン、ト
リメチルクロロシラン、トリメチルシリルジエチルアミ
ン、トリメチルシリルイミダゾールなどが挙げられる。

【００２１】本発明のフィルターの形態は、メンブレン
フィルター、繊維を積層し焼結したもの、微粒子を焼結
成形したもの等が挙げられる。

【００２２】本発明でいうフィルター表面とは、測定試
料が接触する孔表面などの部位である。本発明において
は、上記フィルター表面に、上記の素材が、好ましくは
３０％以上、より好ましくは６０％以上、最も好ましく
は８０％以上存在するのがよい。

【００２３】本発明のフィルターは、必要に応じて、シ
リコーンコーティングされてもよい。

【００２４】本発明のフィルターは、上記の液体クロマ
トグラフィー用フィルターが、更に、ブロッキング試薬
でブロッキング処理されていることが好ましい。上記ブ
ロッキング試薬としては、例えば、ウシ血清アルブミ
ン、カゼイン、ゼラチン、ヘモグロビン、ミオグロビン
などの蛋白質；例えば、リン脂質等の極性脂質；例え
ば、ＳＤＳ、ポリエチレングリコールモノ−４−オクチ
ルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）などの界面
活性剤などが挙げられる。

【００２５】本発明のフィルターの形状は、液体の流れ
を乱さない構造であれば、特に限定されない。例えば、
図１に示すような、（イ）円柱状、（ロ）円錐状、
（ハ）円錐台状の凸部を有するもの、（ニ）円錐状の凸
部と円柱部分を組み合わせた形状、（ホ）円錐台状の凸
部と円柱部分を組み合わせた形状、（ヘ）２つの円錐
の、底面同士を接触したような形状が挙げられる。図１
において、符号１は本発明の液体クロマトグラフィー用
フィルター、符号２は必要に応じて使用されるシール部
材である。上記凸部の位置は、液体流入側又は液体流出
側のどちらでもよく、また上記の両側でもよい。

【００２６】本発明のフィルターのサイズは、直径は１
〜１０００ｍｍが好ましく、２〜５０ｍｍがより好まし
い。厚さは０．１〜１００ｍｍが好ましく、０．２〜１
０ｍｍがより好ましい。濾過孔径は、公知の孔径でよ
く、０．１〜２０μｍが好ましく、０．２〜１０μｍが
より好ましい。

【００２７】本発明のフィルターを製造するには、上記
記載の素材を用いる以外は、公知の方法でよく、例え
ば、上記記載の素材の繊維状のもの、粉体状のものを積
層し、焼結処理する方法や上記記載の素材をメンブレン
状、濾紙状に加工する方法などが挙げられる。また、上
記記載の素材を通常のフィルターの表面に被覆する方法
でもよい。

【００２８】また、表面素材がシリル化処理された二酸
化珪素よりなる液体クロマトグラフィー用フィルターを
製造するには、例えば、ステンレス焼結体からなるフィ
ルターを製造し、その表面に二酸化珪素を被覆した後、
例えば、ヘキサメチルジシラザン、トリメチルクロロシ
ランなどのシリル化処理剤と反応させる方法が挙げられ
る。

【００２９】また、本発明のフィルターを製造するに
は、特開平２−２６２０５４号公報に記載あるような濾
過孔径の異なるフィルターを組み合わせてもよい。すな
わち、溶液の流入側に濾過孔径の大きなものを使用し、
溶液の流出側に濾過孔径の小さなものを使用して組み合
わせる。このように、濾過孔径の異なるフィルターを組
み合わせたものを製造するには、それぞれのフィルター
を製造後、貼り合わせてもよいが、直径の太い繊維を液
体の流入側に用い、直径の細い繊維を液体の流出側に用
いて、積層した状態で型に入れて焼結するのが好まし
い。積層数は、特に限定されないが、通常、２〜３層で
必要に応じて増やしてもよい。

【００３０】また、本発明のブロッキング試薬でブロッ
キング処理されているフィルターを製造するには、請求
項１に記載の液体クロマトグラフィー用フィルターを、
濃度０．０１〜５重量％程度のブロッキング試薬溶液と
接触させればよい。上記接触方法としては、上記フィル
ターに上記ブロッキング試薬溶液を通液する方法が挙げ
られる。

【００３１】本発明のフィルターの用途としては、液体
クロマトグラフィーのラインフィルター、カラムの試料
導入側及び試料導出側のフィルターなどがある。

【００３２】本発明のフィルターをラインフィルターと
して用いる場合について以下説明する。ラインフィルタ
ーは、フィルターがホルダー内に装着されて構成されて
いる。本発明のフィルターがラインフィルター中に装着
される態様は、従来の態様と同様である。

【００３３】図２は、本発明のフィルターが装着される
ホルダーの一例を示す断面図である。ホルダー３は半体
３ａ及び３ｂからなり（図２に矢印で示したように、半
体３ａ側を液体流入側とし、半体３ｂ側を液体流出側と
する）、半体３ａには内面の一部に雌ねじが設けられて
おり、半体３ｂにはその外周面に上記雌ねじに螺合する
雄ねじが設けられている。各半体３ａ及び３ｂは、液体
の通流方向に並設されている。半体３ａの内部には、そ
れぞれ開口部が相互に対向するように形成された円柱状
の空間部３１ａと円錐状の空間部３２ａが設けられ、更
に、該空間部３２ａの先端には薄い円板状の空間部３３
ａが設けられており、また、円柱状の空間部３１ａを形
成している部分の半体３ａの内面には雌ねじが設けら
れ、この雌ねじに溶離液などの液体が通流するための配
管がネジ止めされ得るようにされている。また、半体３
ｂの内部にも、それぞれ開口部が相互に対向するように
形成された円柱状の空間部３１ｂと円錐状の空間部３２
ｂが設けられ、円柱状の空間部３１ｂを形成している部
分の半体３ｂの内面には雌ねじが設けられ、この雌ねじ
に液体が通流するための配管がネジ止めされ得るように
されている。

【００３４】上記円錐状の空間部３２ａ及び３２ｂの円
錐の頂角Ａは、試料をフィルター全体に導くことにより
フィルター全体で濾過されるようにし、しかも、試料の
拡散を最小に抑える大きさであることが好ましい。上記
頂角Ａは、９０度よりも小さくなると、空間部が大きく
なり、試料の拡散が起こり易くなり、１７９度よりも大
きくなると、更に、空間部が大きくなり、試料の拡散が
起こり易くなるので、９０〜１７９度が好ましく、１０
０〜１７０度がより好ましい。

【００３５】ホルダー３の形状は、例えば、円柱状、立
方体状など特に限定されない。

【００３６】また、ホルダー３は、フィルター交換時に
工具を使う必要がないように、図３に示すように、半体
３ａと３ｂの外周面を、それぞれ円筒形の被覆部３４ａ
と３４ｂで被覆することにより、ホルダーの大きさを大
きくして、手で十分締められるようにしてもよい。

【００３７】ホルダーの材質としてはステンレス等の金
属；ポリエチレン、ポリエーテルエーテルケトン、フッ
素樹脂、ポリエーテルエーテルケトンとフッ素樹脂の混
合物等のプラスチックなどが挙げられるが、生体試料の
吸着が少ないポリエーテルエーテルケトンやフッ素樹脂
が好ましい。また、本発明のフィルターの素材に用いら
れるものも必要に応じて用いられる。また、生体試料の
吸着が起こり易い材質のもの、例えば、ステンレスのよ
うなものは、シリコーン被膜でコーティングしてもよ
い。

【００３８】図４は、本発明のフィルター１がホルダー
３内に装着されて構成されているラインフィルター５の
断面図である。ラインフィルター５においては、ホルダ
ー３の半体３ａの薄い円板状の空間部３３ａに本発明の
フィルター１が収められている。

【００３９】ホルダー３とフィルター１との間の気密性
を十分保てない場合は、ホルダー３とフィルター１の間
にシール部材２を設ける必要がある。具体的には、ホル
ダー３とフィルター１の間に隙間ができないように、図
５（イ）、（ロ）に示すように、フィルター１をシール
部材２で囲む方法がある。

【００４０】上記シール部材の材質は、フィルターを保
持できる強度を有するものであれば特に限定されず、例
えば、ポリエーテルエーテルケトン、フッ素樹脂、ポリ
エーテルエーテルケトンとフッ素樹脂の混合物、ステン
レスなどが挙げられる。シール部材の大きさ及び形状に
ついては、フィルターの形状にフィットした形状が好ま
しく、しかも、試料の拡散を起こさない大きさ及び形状
が好ましい。

【００４１】本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィルターが装
着されたことを特徴とする。以下、本発明の液体クロマ
トグラフィー用カラムについて説明する。

【００４２】本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
は、本発明のフィルターがカラムの試料導入側及び試料
導出側のフィルターとして装着されている。すなわち、
本発明の液体クロマトグラフィー用カラムは、図６に示
すように、フィルター１として本発明のフィルターが装
着されている他は、図８に示した従来の液体クロマトグ
ラフィー用カラムと同様である。

【００４３】本発明のフィルター及びカラムは、生体試
料の吸着が特に少ない。従って、本発明のフィルター又
はカラムを用いた液体クロマトグラフィーは、生体試料
の分離に特に適している。上記生体試料とは、血液、血
清、血漿、尿などの生体由来の試料を指し、その中に
は、蛋白質や脂質などが含まれているものである。

【００４４】本発明のフィルターを用いた液体クロマト
グラフィー用カラムにおいて、カラム本体（カラムの管
部分）の材質は、カラム本体としての強度を有するもの
であれば特に限定されず、例えば、ステンレス、チタン
等の金属；ポリエーテルエーテルケトン等のプラスチッ
ク；ガラス；ステンレス等の金属の内面をフッ素樹脂又
はポリエーテルエーテルケトン等で被覆したものなどが
挙げられる。

【００４５】上記カラム本体の試料が接する部位は、本
発明のフィルターの表面素材として用いる素材で被覆さ
れてもよい。

【００４６】上記カラム本体は、必要に応じて、シリコ
ーン被膜でコーティングされてもよい。上記シリコーン
被膜とは、シリコーンから得られる被膜であれば特に限
定されない。上記シリコーンとしては、被膜を形成でき
るものであれば特に限定されず、例えば、オイル、ワニ
ス、ゴム、シランなどの種類がある。好ましくは、硬化
型シリコーンゴムである。シリコーン被膜を形成させる
方法には、室温又は加熱して、図１１に示すようなベー
スポリマーと架橋剤（図１１におけるＸは、例えば、メ
トキシ基、ケトオキシム基、アセトキシ基のような加水
分解性の有機基）を縮合、又は、付加反応、又は、ＵＶ
硬化反応などさせる方法があり、いずれも用いることが
できる。好ましくは、縮合、又は、付加反応が良い。

【００４７】シリコーン被膜の厚さは、好ましくは、
０．１ｎｍ〜１００μｍ、より好ましくは、０．５ｎｍ
〜１０μｍ、最も好ましくは、０．７ｎｍ〜２μｍであ
る。

【００４８】上記シリコーン被膜でカラム本体をコーテ
ィングする場合、カラム本体全体をコーティングする必
要はなく、少なくとも分析試料が接触する部分（すなわ
ち、カラム本体内側）がコーティングされていればよ
い。カラム本体内側のコーティングの割合は、内側部の
全表面積に対して、好ましくは、１０％以上、より好ま
しくは、３０％以上、最も好ましくは、６０％以上であ
る。

【００４９】上記のシリコーン被膜でコーティングされ
たカラム本体を製造するには、上記記載のカラム本体に
硬化型シリコーンを塗布、又はコーティングし、室温、
又は、加温して硬化させる方法が挙げられる。

【００５０】また、上記カラム本体は、必要に応じて、
二酸化珪素膜が形成され、次いでシリル化処理がなされ
ていてもよい。このような処理をカラム本体に施す方法
としては、前述のフィルターをこのように処理する方法
と同様である。

【００５１】また、上記カラム本体は、必要に応じて、
ブロッキング試薬でブロッキングされてもよい。上記ブ
ロッキング試薬及びブロッキング方法としては、フィル
ターに用いられるブロッキングとして前述したものと同
様である。

【００５２】本発明のフィルターを用いた液体クロマト
グラフィーにおいて、溶離液などの移動相は、公知のも
のでよい。また、液体クロマトグラフ装置も公知のもの
でよい。

【００５３】本発明のカラムを用いた液体クロマトグラ
フィーにおいて、溶離液などの移動相は、公知のもので
よく、また、液体クロマトグラフ装置も公知のものでよ
い。

【００５４】本発明の請求項６記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いることを特徴とする。

【００５５】本発明の請求項７記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
を用いることを特徴とする。

【００５６】

【作用】本発明のフィルターは、その表面が生体試料の
吸着が起こりにくい材質で構成されているので、フィル
ター寿命が長く、また、同様に、試料の吸着が少ないの
で、フィルター中で試料の拡散が起こりにくいため、分
離性能に悪影響を与えない。更に、ブロッキング試薬で
ブロッキング処理されているフィルターにおいては、上
記の作用の全てを奏すると共に、更に、より一層、生体
試料の吸着が起こりにくいため、生体試料の液体クロマ
トグラフ測定に使用すると、測定の最初から正確な測定
値を得ることができる。

【００５７】本発明のカラムは、本発明のフィルターを
装着しているので、寿命が長く、分離性能に悪影響を与
えない。

【００５８】本発明の請求項６記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いているため、ヘモグロビン類がフィルターに
吸着しにくいので、フィルター寿命が長い。また、同様
に、ヘモグロビン類がフィルターに吸着しにくいので、
フィルター中でのヘモグロビン類の拡散が少なくヘモグ
ロビン類の分離性能に悪影響を与えない。また、ヘモグ
ロビン類の分離に適したｐＨ範囲において、ヘモグロビ
ン類の吸着が非常に起こりにくいので、ヘモグロビン類
の分離性能に悪影響を与えない。

【００５９】本発明の請求項７記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いたカラムを用いるので、ヘモグロビン類が吸
着しにくいため、カラム寿命が長い。また、同様に、フ
ィルターにヘモグロビン類が吸着しにくいので、カラム
中でヘモグロビン類の拡散が少なく、ヘモグロビン類を
効果的に分離できる。また、ヘモグロビン類の分離に適
したｐＨ範囲において、ヘモグロビン類の吸着が非常に
起こりにくいので、ヘモグロビン類が効果的に分離でき
る。

【００６０】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例及び比較例
を挙げることにより、本発明を詳細に説明する。

【００６１】（実施例１）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をポリエチレン樹脂の一体成形品として製造
した。その構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５ｍ
ｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、
このフィルター１をポリエーテルエーテルケトン製のシ
ール部材２に挿入した後、図４に示すように、ステンレ
ス製ホルダー３（頂角Ａ＝９０度）に嵌め込み、半体３
ａ及び３ｂ同士をネジ結合して、ラインフィルター５を
作製した。

【００６２】（実施例２）実施例１と同様にして得られ
た本発明のフィルター１をポリエーテルエーテルケトン
製のシール部材２に挿入した後、ポリエーテルエーテル
ケトン製のホルダー３（頂角Ａ＝１５０度）に嵌め込
み、半体３ａ及び３ｂ同士をネジ結合して、ラインフィ
ルター５を作製した。

【００６３】（実施例３）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をチタンの一体成形品として製造した。その
構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５ｍｍの円柱体
からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、このフィル
ター１をフッ素樹脂（テフロン）製のシール部材２に挿
入した後、ポリエーテルエーテルケトン製のホルダー３
（頂角Ａ＝１５０度）に嵌め込み、半体３ａ及び３ｂ同
士をネジ結合して、ラインフィルター５を作製した。

【００６４】（実施例４）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をポリプロピレン樹脂の一体成形品として製
造した。その構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５
ｍｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次
に、このフィルター１をポリエーテルエーテルケトン製
のシール部材２に挿入した後、ポリエーテルエーテルケ
トン製のホルダー３（頂角Ａ＝１５０度）に嵌め込み、
半体３ａ及び３ｂ同士をネジ結合して、ラインフィルタ
ー５を作製した。

【００６５】（実施例５）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をステンレス焼結体の一体成形品として製造
した。その構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５ｍ
ｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、
従来の技術の項に記載したＣＬＤ法により、二酸化珪素
被膜をフィルターに形成させる処理をした。具体的に
は、日本曹達社製アトロンをＨＰＬＣ用ポンプ（島津製
作所社製）を用いて、上記フィルターの内部まで通液し
た後、余剰の液をフィルター内部から除去した。その
後、２００℃で３０分間乾燥し、次に、５００℃で３０
分間加熱し、二酸化珪素被膜を形成させた。次に、この
フィルターをヘキサメチルジシラザンでシリル化処理し
た。次に、このフィルターをフッ素樹脂（テフロン）製
のシール部材２に挿入した後、ポリエーテルエーテルケ
トン製ホルダー３（頂角Ａ＝１５０度）に嵌め込み、半
体３ａ及び３ｂ同士をネジ結合して、ラインフィルター
５を作製した。

【００６６】（比較例１）図１（イ）に示した形状のフ
ィルターを、ステンレス焼結体の一体成形品として製造
した。その構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５ｍ
ｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、
このフィルターをフッ素樹脂（テフロン（登録商標））
製のシール部材２に挿入した後、ステンレス製ホルダー
３（頂角Ａ＝９０度）に嵌め込み、半体３ａ及び３ｂ同
士をネジ結合して、ラインフィルター５を作製した。

【００６７】（比較例２）実施例５と同様のステンレス
焼結体の一体成形品として製造したフィルターに、実施
例５と同様にして二酸化珪素被膜を形成させた後、この
フィルターをヘキサメチルジシラザンでシリル化処理す
ることなく、フッ素樹脂（テフロン）製のシール部材２
に挿入した後、ポリエーテルエーテルケトン製ホルダー
３（頂角Ａ＝１５０度）に嵌め込み、半体３ａ及び３ｂ
同士をネジ結合して、ラインフィルター５を作製した。

【００６８】実施例１〜５及び比較例１、２で得られた
ラインフィルターを用いて以下のようにして、（１）吸
着性の評価、及び（２）生体試料の吸着性とｐＨ（ｐＨ
５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０）の関係の評価を行っ
た。

【００６９】（１）吸着性の評価 以下に示した測定条件を用い、実施例１〜５又は比較例
１、２で作製したラインフィルターのみを用いて（すな
わち、カラムは使用せず）、ヘモグロビン類の測定をす
ることにより、生体試料の吸着性について検討した。 測定条件 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．
８） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜３分の間は溶離液Ａを流し、３〜５分
の間は溶離液Ｂを流し、５〜１０分の間は溶離液Ａを流
した。 流速：２．０ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００７０】測定試料 以下のようにして調製した糖負荷血液を用いた。血液抗
凝固剤としてフッ化ナトリウムを用いて採血した健常人
血に、５００ｍｇ／ｄｌとなるようグルコース水溶液を
添加し、３７℃で３時間反応させた後、溶血希釈液Ｘ
（０．１重量％トリトンＸ−１００のリン酸緩衝液溶
液、ｐＨ７．０）で溶血し、１５０倍に希釈して測定試
料とした。

【００７１】測定結果 上記測定条件により、測定試料を測定して得られた代表
的なクロマトグラムを図９（イ）（ラインフィルター使
用せず）、図９（ロ）（実施例１〜５のラインフィルタ
ー使用）、図９（ハ）（比較例１又は２のラインフィル
ター使用）に示した。ピーク６１はヘモグロビン類のピ
ークを示す（なお、カラムで分離されていないので単一
のピークとなっている）。ピーク６２は、溶離液Ａでは
フィルタに吸着したヘモグロビン類が溶離液Ｂによって
脱着したために表れたピークと思われる。

【００７２】評価方法 ラインフィルターを装着せずに、測定試料を測定したと
きのヘモグロビン類のピーク面積を１００％として、実
施例１〜５、比較例１、２のラインフィルターを用いて
測定（ｎ＝５）したときのヘモグロビン類のピーク面積
（ピーク６１の面積）から、以下の式により溶離液Ａに
よる回収率を求め、結果を表１に示した。 回収率（％）＝（ラインフィルター装着時のヘモグロビ
ン類のピーク面積）÷（ラインフィルター装着なし時の
ヘモグロビン類のピーク面積）×１００

【００７３】

【表１】

【００７４】比較例１、２では、回収率の平均値が、そ
れぞれ５６．４０％、５８．８０％であったのが、実施
例１〜５では、回収率の平均値がそれぞれ９７．７０
％、９７．９８％、９７．４０％、９６．０８％、９
７．８６％であった。以上より、実施例１〜５のライン
フィルターを用いたものでは、比較例１、２のラインフ
ィルターを用いたものに比べてヘモグロビン類の吸着が
少なかったことがわかる。

【００７５】また、表１（及び後述の表２〜４）におけ
る、ＣＶ（％）とは変動係数（すなわち、ＣＶ（％）＝
標準偏差÷平均値×１００）のことであるが、比較例
１、２のラインフィルターを用いたものは、実施例１〜
５のラインフィルターを用いたものに比較してＣＶがは
るかに大きく、ヘモグロビン類の吸着量のばらつきが大
きいことが分かる。

【００７６】（２）生体試料の吸着性とｐＨの関係の評
価 以下に示した測定条件を用い、実施例１〜５又は比較例
１、２で作製したラインフィルターのみを用いて（すな
わち、カラムは使用せず）、ヘモグロビン類の測定をす
ることにより、生体試料の吸着性とｐＨ（ｐＨ５．０、
ｐＨ６．０、ｐＨ７．０）の関係を評価した。

【００７７】測定条件 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．
０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜３分の間は溶離液Ａを流し、３〜５分
の間は溶離液Ｂを流し、５〜１０分の間は溶離液Ａを流
した。 流速：２．０ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００７８】測定試料 血液抗凝固剤としてフッ化ナトリウムを用いて採血した
健常人血を、溶血希釈液Ｘ（０．１重量％トリトンＸ−
１００のリン酸緩衝液溶液、ｐＨ７．０）で溶血し、１
５０倍に希釈して測定試料とした。

【００７９】評価方法 ラインフィルターを装着せずに、測定試料を測定したと
きのヘモグロビン類のピーク面積を１００％として、実
施例１〜５又は比較例１、２で得られたラインフィルタ
ーを用いて測定（ｎ＝５）したときのヘモグロビン類の
ピーク面積から、以下の式により溶離液Ａによる回収率
を求め、結果を表２〜４に示した。 回収率（％）＝（ラインフィルター装着時のヘモグロビ
ン類のピーク面積）÷（ラインフィルター装着なし時の
ヘモグロビン類のピーク面積）×１００

【００８０】

【表２】

【００８１】

【表３】

【００８２】

【表４】

【００８３】比較例１では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、
ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均１３．５６％、７
６．５２％、９１．９８％であった。また、ＣＶ％は、
ｐＨが低くなるほど悪くなり、ｐＨ５．０で、３７．２
７％であった。比較例２では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．
０、ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均２４．６６
％、７７．０４％、９１．７０％であった。また、ＣＶ
％は、ｐＨが低くなるほど悪くなり、ｐＨ５．０で、１
２．２１％であった。実施例１では、ｐＨ５．０、ｐＨ
６．０、ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均９６．６
４％、９７．８６％、９７．９４％であった。実施例２
では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０での回収率
がそれぞれ平均９７．７２％、９８．２２％、９８．４
６％であった。実施例３では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．
０、ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均９７．６４
％、９８．１６％、９８．４８％であった。実施例４で
は、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０での回収率が
それぞれ平均９６．２６％、９７．２０％、９７．２８
％であった。実施例５では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、
ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均９７．９８％、９
８．２８％、９８．４２％であった。また、実施例１〜
５でのＣＶ％は、いずれのｐＨにおいても、１％以下で
あった。

【００８４】以上より、比較例１のステンレス製フィル
ター；比較例２のステンレス製フィルターに二酸化珪素
膜を被覆したもののいずれにおいても、ヘモグロビン類
の吸着性は、ｐＨの影響を非常に強く受けることが明ら
かになった。また、ヘモグロビン類の定量には、通常、
ｐＨ５〜９程度の溶離液を用いるのが一般的であるの
で、ステンレス製フィルターではヘモグロビン類の吸着
が極めて大きくなり、吸着率も大きくばらつくので、ス
テンレス製フィルターをヘモグロビン類の測定に用いる
とフィルター寿命が短くなり、データーのばらつく原因
になると考えられる。実施例１〜５の本発明のフィルタ
ーでのヘモグロビン類の吸着性は、ｐＨ９．０から酸性
側５．０付近までのｐＨの影響を受けず、回収率もほぼ
１００％であった。以上より、ヘモグロビン類の測定に
用いるフィルターとしては、広いｐＨの範囲でヘモグロ
ビン類の吸着が殆どない本発明のフィルターを用いた方
がよいことが明らかである。

【００８５】（実施例６）図１（イ）に示したフィルタ
ー１を、ポリエチレン樹脂の一体成形品として製造し
た。その構造の詳細は、直径４．６ｍｍ、厚さが１．５
ｍｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次
に、このフィルター１をポリエーテルエーテルケトン製
のシール部材２（外径６．３ｍｍ、内径４．６ｍｍ、厚
さ１．５ｍｍ）に挿入した後、これを図６に示したステ
ンレス製カラム本体４０（内径４．６ｍｍ、長さ３５ｍ
ｍ）のカラム両端に取り付けるためのエンドフィッティ
ング４２に装着した。

【００８６】上記のカラム本体４０に、以下のようにし
て調製した充填剤を、以下に示すカラムの作製の項で述
べるようにして充填して、本発明の液体クロマトグラフ
ィー用カラムを製造した。 ・充填剤の調製 テトラエチレングリコールジメタクリレート（新中村化
学社製）４００ｇ及び２−アクリルアミド−２−メチル
スルホン酸（和光純薬社製）１５０ｇの混合物にベンゾ
イルパーオキサイド（重合開始剤、和光純薬社製）１．
５ｇを溶解した。これを、４重量％ポリビニルアルコー
ル（日本合成化学社製）水溶液２５００ｍｌに分散さ
せ、攪拌しながら窒素雰囲気下で７５℃に昇温し、８時
間重合した。重合後、洗浄し、乾燥した後、分級して平
均粒径６μｍの粒子を得た。 ・カラムの作製 カラム１本あたり、上記充填剤１．０ｇを、５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌに分散し、５分間超
音波処理した後、よく攪拌した。全量を上記のステンレ
ス製カラム本体４０（内径４．６φ×３５ｍｍ）を接続
したパッカー（梅谷精機社製）に注入した。パッカー
（梅谷精機社製）に送液ポンプ（サヌキ工業社製）を接
続し、上記充填剤を上記ステンレス製カラム本体４０に
圧力３００ｋｇ／ｃｍ² で定圧充填した後、エンドフィ
ッティング４２とカラム本体４０を螺合して本発明の液
体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【００８７】（実施例７）図１（イ）に示したフィルタ
ー１を、チタンの一体成形品として製造した。その構造
の詳細は、直径４．６ｍｍ、厚さが１．５ｍｍの円柱体
からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、このフィル
ター１をフッ素樹脂（テフロン）製のシール部材２（外
径６．３ｍｍ、内径４．６ｍｍ、厚さ１．５ｍｍ）に挿
入した後、これを図６に示したステンレス製カラム本体
４０（内径４．６ｍｍ、長さ３５ｍｍ）のカラム両端に
取り付けるためのエンドフィッティング４２に装着し
た。

【００８８】上記のカラム本体４０に、実施例６と同様
の充填剤を、実施例６と同様にして充填して、本発明の
液体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【００８９】（実施例８）図１（イ）に示したフィルタ
ー１を、ポリプロピレン樹脂の一体成形品として製造し
た。その構造の詳細は、直径４．６ｍｍ、厚さが１．５
ｍｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次
に、このフィルター１をポリエーテルエーテルケトン製
のシール部材２（外径６．３ｍｍ、内径４．６ｍｍ、厚
さ１．５ｍｍ）に挿入した後、これをシリコーン処理し
たステンレス製カラム本体４０（直径４．６ｍｍ、長さ
３５ｍｍ）のカラム両端に取り付けるためのエンドフィ
ッティング４２に装着した。

【００９０】なお、上記のシリコーン処理したステンレ
ス製カラム本体は、以下のようにして作製した。２液型
硬化型シリコーンを用い、上記カラム本体をシリコーン
コーティングした後、１００℃で３０分間加熱して、乾
燥・硬化させ、均一なコーティング層を形成させた。

【００９１】上記のカラム本体４０に、実施例６と同様
の充填剤を実施例６と同様にして充填して、本発明の液
体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【００９２】（実施例９）図１（イ）に示したフィルタ
ー１を、ステンレス焼結体の一体成形品として製造し
た。その構造の詳細は、直径４．６ｍｍ、厚さが１．５
ｍｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次
に、従来の技術の項に記載したＣＬＤ法により、二酸化
珪素被膜をフィルターに形成させる処理をした。具体的
には、日本曹達社製アトロンをＨＰＬＣ用ポンプ（島津
製作所社製）を用いて、上記フィルター１の内部まで通
液した後、余剰の液をフィルター内部から除去した。そ
の後、２００℃で３０分間乾燥し、次に、５００℃で３
０分間加熱し、二酸化珪素被膜を形成させた。次に、こ
のフィルター１をヘキサメチルジシラザンでシリル化処
理した。次に、このフィルター１をフッ素樹脂（テフロ
ン）製のシール部材２（外径６．３ｍｍ、内径４．６ｍ
ｍ、厚さ１．５ｍｍ）に挿入した後、これをシリコーン
処理したステンレス製カラム本体４０（直径４．６ｍ
ｍ、長さ３５ｍｍ）のカラム両端に取り付けるためのエ
ンドフィッティング４２に装着した。

【００９３】なお、上記のシリコーン処理したステンレ
ス製カラム本体の作製方法は、実施例８と同様である。

【００９４】上記のカラム本体４０に、実施例６と同様
の充填剤を実施例６と同様にして充填して、本発明の液
体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【００９５】（比較例３）ステンレス焼結体の一体成形
品として製造したフィルターを用いたことの他は、実施
例６と全く同様にして液体クロマトグラフィー用カラム
を製造した。

【００９６】（比較例４）ステンレス焼結体の一体成形
品として製造したフィルターを、実施例９と同様にして
二酸化珪素被膜を形成させて製造したフィルター（シリ
ル化処理はせず）を用いたことの他は、実施例６と全く
同様にして液体クロマトグラフィー用カラムを製造し
た。

【００９７】実施例６〜９及び比較例３、４で得られた
液体クロマトグラフィー用カラムを用いて以下のように
して、ヘモグロビン類の測定を行うことにより、該カラ
ムの分離性能に与える評価を行った（なお、ラインフィ
ルターは用いなかった）。 測定条件 得られたカラムを以下の液体クロマトグラフに取り付け
た後、以下の測定を行った。 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．
８） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜５分の間は溶離液Ａを流し、５〜６分
の間は溶離液Ｂを流し、６〜１０分の間は溶離液Ａを流
した。 流速：１．６ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００９８】測定試料 実施例１の（１）吸着性の評価の項で用いた測定試料と
同様の方法で調製したもの。

【００９９】測定結果 上記測定条件により、試料を測定して得られたクロマト
グラムを図１０（イ）（実施例６〜９の液体クロマトグ
ラフィー用カラムを用いたもの）、図１０（ロ）（比較
例３又は４の液体クロマトグラフィー用カラムを用いた
もの）に示した。ピーク５１はＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１
ｂ、ピーク５２はＨｂＦ、ピーク５３は不安定型ＨｂＡ
１ｃ、ピーク５４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５５はＨ
ｂＡ０を示す。この結果、実施例６〜９の液体クロマト
グラフィー用カラムを用いたものでは、比較例３又は４
の液体クロマトグラフィー用カラムを用いたものに比較
して分離性能に優れていることが分かる。

【０１００】（実施例１０）実施例６で得られたポリエ
チレンフィルター１に、０．１重量％ヘモグロビン水溶
液を通液し、ブロッキング処理した。また、カラム本体
は、実施例８と同様にシリコーンコーティングした。上
記フィルター及びカラム本体を用いた以外は、実施例６
と同様にして本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
を製造した。

【０１０１】（実施例１１）実施例７で得られたチタン
フィルター１に、０．１重量％ウシ血清アルブミン水溶
液を通液し、ブロッキング処理した。また、カラム本体
は、実施例８と同様にシリコーンコーティングした。上
記フィルター及びカラム本体を用いた以外は、実施例６
と同様にして本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
を製造した。

【０１０２】（実施例１２）実施例８で得られたポリプ
ロピレンフィルター１に、０．１重量％ウシ血清アルブ
ミン水溶液を通液し、ブロッキング処理した。また、カ
ラム本体は、実施例８と同様にシリコーンコーティング
した。上記フィルター及びカラム本体を用いた以外は、
実施例６と同様にして本発明の液体クロマトグラフィー
用カラムを製造した。

【０１０３】（実施例１３）実施例９で得られたフィル
ター１（シリル化処理二酸化珪素被覆ステンレス焼結体
フィルター）に、０．１重量％カゼイン水溶液を通液
し、ブロッキング処理した。また、カラム本体は、実施
例９のフィルター処理と同様にして、二酸化珪素膜を形
成させた後、ヘキサメチルジシラザンでシリル化処理し
た。上記フィルター及びカラム本体を用いた以外は、実
施例６と同様にして本発明の液体クロマトグラフィー用
カラムを製造した。

【０１０４】（比較例５）図１（イ）に示したフィルタ
ーをポリエーテルエーテルケトンの一体成形品として製
造した。その構造の詳細は、直径４．６ｍｍ、厚さが
１．５ｍｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとし
た。このフィルターを用いたこと以外は、実施例６と同
様にして液体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【０１０５】実施例６、７、１０〜１３及び比較例３〜
５で得られた液体クロマトグラフィー用カラムを用い
て、実施例６と同様にして、ヘモグロビン類の測定を行
うことにより、該カラムの分離性能に与える評価を行っ
た。

【０１０６】測定試料 健常人血液を溶血したものであって、後述の定義による
安定型ＨｂＡ１ｃ濃度が４．５％であるものを用いた。

【０１０７】測定結果 試料を５回連続して測定し、得られたクロマトグラムか
ら、以下の式で定義される安定型ＨｂＡ１ｃ濃度を求
め、測定回数と安定型ＨｂＡ１ｃ濃度の関係を表５に示
した。 安定型ＨｂＡ１ｃ濃度（％）＝（安定型ＨｂＡ１ｃピー
クの面積）÷（全ヘモグロビンピークの面積の和）×１
００

【０１０８】

【表５】

【０１０９】比較例３のカラムでは、安定型ＨｂＡ１ｃ
濃度は、測定１回目から５回目にかけて、３．５％から
３．９％に上昇した。比較例４のカラムでは、安定型Ｈ
ｂＡ１ｃ濃度は、測定１回目から５回目にかけて、３．
６％から４．１％に上昇した。比較例５のカラムでは、
安定型ＨｂＡ１ｃ濃度は、測定１回目から５回目にかけ
て、３．９％から４．３％に上昇した。すなわち、これ
らのカラムでは、測定初期では正確な値が得られないこ
とがわかる。一方、実施例６又は７のカラムでは、測定
１回目〜３回目までは安定型ＨｂＡ１ｃ濃度は４．４％
であったが、測定４回目と５回目では、４．５％とな
り、正確な値が得られた。更に、ブロッキングしたフィ
ルター及びシリコーンコーティング（又は二酸化珪素膜
被覆をシリル化処理）したカラム本体を用いた実施例１
０〜１３のカラムでは、測定１回目から安定型ＨｂＡ１
ｃ濃度は４．５％と正確な値が得られた。

【０１１０】

【発明の効果】本発明の請求項１記載の液体クロマトグ
ラフィー用フィルターの構成は、上記の通りであり、そ
の表面が生体試料の吸着が起こりにくい材質で構成され
ているので、フィルター性能の寿命が長く、しかも、試
料の吸着が少ないので、フィルター中で試料拡散が起こ
りにくいため、分離性能に悪影響を与えない。本発明の
請求項２記載の液体クロマトグラフィー用フィルターの
構成は、上記の通りであり、更に、ブロッキング試薬で
ブロッキング処理されているので、上記の効果の全てを
奏すると共に、更に、より一層、生体試料の吸着が起こ
りにくいため、生体試料の液体クロマトグラフ測定に使
用すると、測定の最初から正確な測定値を得ることがで
きる。

【０１１１】本発明の請求項３記載の液体クロマトグラ
フィー用カラムの構成は、上記の通りであり、生体試料
の吸着がおこりにくい材質で構成されているフィルター
を用いているので、寿命が長く、分離性能に悪影響を与
えない。

【０１１２】本発明の請求項４記載の液体クロマトグラ
フィー用カラムの構成は、上記の通りであり、更にカラ
ム本体がシリコーン被膜でコーティングされているので
生体試料の吸着がより起こりにくくなり、カラム寿命が
より一層長くなると共に、分離性能に悪影響をより一層
与えない。

【０１１３】本発明の請求項５記載の液体クロマトグラ
フィー用カラムの構成は、上記の通りであり、更に、カ
ラム本体がブロッキング試薬でブロッキング処理されて
いるので、請求項４記載のカラムの効果に加えて、測定
の最初からより正確な測定値を得ることができる。

【０１１４】本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いるヘモグロビン類の測定方法の構成は、上記
の通りであり、広いｐＨの範囲でヘモグロビン類の吸着
が少ない材質で構成されているフィルターを用いている
ので、フィルターの寿命が長い。そのため、フィルター
の交換頻度がきわめて少なくなる。また、ヘモグロビン
類の吸着が少ないフィルターを用いているので、ヘモグ
ロビン類分析の分離性能に悪影響を与えない。

【０１１５】本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
を用いるヘモグロビン類の測定方法の構成は、上記の通
りであり、広いｐＨの範囲でヘモグロビン類の吸着が少
ない材質で構成されているフィルターを用いたカラムを
用いているので、カラムの寿命が長い。また、ヘモグロ
ビン類の吸着が少ないフィルターを用いているので、カ
ラム中でのヘモグロビン類の拡散が起こりにくいためヘ
モグロビン類分析の分離性能に悪影響を与えない。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の液体クロマトグラフィー用フィルター
の例を示す断面図。

【図２】本発明のフィルターが装着されるホルダーの一
例を示す断面図。

【図３】本発明のフィルターが装着されるホルダーの他
の例を示す断面図。

【図４】本発明のフィルターがホルダー内に装着されて
構成されているラインフィルターの断面図。

【図５】本発明の液体クロマトグラフィー用フィルター
を示す図であり、図５（イ）はその断面図。図５（ロ）
は平面図。

【図６】本発明の液体クロマトグラフィー用カラムを示
す断面図。

【図７】液体クロマトグラフのシステムの構成を示す説
明図。

【図８】従来の液体クロマトグラフィー用カラムを示す
断面図。

【図９】測定試料を測定して得られたクロマトグラム。

【図１０】測定試料を測定して得られたクロマトグラ
ム。

【図１１】シリコーン被膜を形成させるための反応の例
を示す図。

【符号の説明】

１ 液体クロマトグラフィー用フィルター ２ シール部材 ３ ホルダー ３ａ、３ｂ 半体 ３１ａ、３１ｂ 円柱状の空間部 ３２ａ、３２ｂ 円錐状の空間部 ３３ａ 円板状の空間部 ３４ａ、３４ｂ 被覆部 ５ ラインフィルター

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｕ 33/72 33/72 Ａ (72)発明者 川辺 俊樹 山口県新南陽市開成町4560 積水化学工業 株式会社内 Ｆターム(参考） 2G045 AA01 AA25 BB05 BB39 BB50 BB51 CA25 CA26 CB03 DA30 DA31 DA36 DA44 DA45 DA46 DA47 DA48 DA51 FA29 FB06 GC10 HA09 JA04 JA07 4D019 AA03 BA02 BA04 BA05 BA12 BA13 BA18 BB06 BD01 CB01 CB04 CB06

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも表面素材が、セルロース系樹
   脂、フッ素系樹脂、スルホン系樹脂、ポリエチレン、エ
   チレンのアルキル誘導体の重合体、アクリル系樹脂、ナ
   イロン、炭化物セラミック、窒化物セラミック、珪化物
   セラミック、硼化物セラミック、表面がシリル化処理さ
   れた二酸化珪素、ガラス及びチタンからなる群より選ば
   れる少なくとも一種よりなる、又は、これらを複数組み
   合わせてなることを特徴とする液体クロマトグラフィー
   用フィルター。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の液体クロマトグラフィ
   ー用フィルターが、更に、ブロッキング試薬でブロッキ
   ング処理されていることを特徴とする液体クロマトグラ
   フィー用フィルター。
3. 【請求項３】 請求項１又は２に記載の液体クロマトグ
   ラフィー用フィルターが装着されたことを特徴とする液
   体クロマトグラフィー用カラム。
4. 【請求項４】 更に、カラム本体がシリコーン被膜でコ
   ーティングされていることを特徴とする請求項３記載の
   液体クロマトグラフィー用カラム。
5. 【請求項５】 更に、カラム本体がブロッキング試薬で
   ブロッキング処理されていることを特徴とする請求項４
   記載の液体クロマトグラフィー用カラム。
6. 【請求項６】 請求項１又は２に記載の液体クロマトグ
   ラフィー用フィルターを用いることを特徴とするヘモグ
   ロビン類の測定方法。
7. 【請求項７】 請求項３〜５のいずれかに記載の液体ク
   ロマトグラフィー用カラムを用いることを特徴とするヘ
   モグロビン類の測定方法。