JP2000125880A - ユビキチン特異的プロテアーゼ遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】例えば神経芽腫、乳癌、膵癌、横紋筋肉腫等を
含む染色体の局在領域の異常と関係する各種疾患の治療
等に有用なユビキチン特異的プロテアーゼ遺伝子の提
供。 【解決手段】特定のアミノ酸配列をコードする塩基配列
を含むユビキチン特異的プロテアーゼ遺伝子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はユビキチン特異的プ
ロテアーゼ遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】多種の蛋白質の翻訳後の修飾の１つとし
てユビキチンの結合（ユビキチン化）が知られている。
この蛋白質のユビキチン化はＤＮＡ修復や蛋白質分解、
エンドサイトーシス等の生物学的に重要なプロセスに関
係している(Hershko, A., Ciechanover, A., Annu. Re
v. Biochem., 61, 761-807 (1992): Hochstrasser, M.,
Annu. Rev. Genet., 30, 405-439 (1996) )。その中で
も最もよく研究されているのは、ポリユビキチン化であ
る。そのような修飾を受けた蛋白質は、速やかにプロテ
アソームにより分解、排除される(Hochstrasser, M.,An
nu. Rev. Genet., 30, 405-439 (1996): Coux, O., et
al., Annu. Rev. Biochem., 65, 801-847 (1996))。

【０００３】最近、上記ユビキチン化が可逆的な過程で
あることが分かり、ユビキチン化された蛋白質からユビ
キチンを特異的に切断する酵素(DUBs)が酵母からほ乳類
まで多くの生物種で発見された。例えば、脱ユビキチン
化酵素をコードする１７の遺伝子が、出芽酵母の染色体
に存在することが判った(Wilkinson, K.D., FASEB J.,
11, 1245-1256 (1997))。しかしながら、それらの特異
的な生物学的役割については、殆ど知られていない。

【０００４】上記ユビキチン化と、脱ユビキチン化は、
細胞内において、ターゲット蛋白質の機能を調節してい
ると考えられ、かかる反応に関与するユビキチン特異的
プロテアーゼのファミリーは、それに特徴的なシステイ
ン−ドメインとヒスチジン−ドメインが非常によく保存
されており、蛋白質分解のための活性部位を形成してい
る。

【０００５】しかして、全ての真核生物は、構造的に相
互に関連性のない２つの遺伝子ファミリーである、ＵＣ
Ｈ（ユビキチンのＣ末端ヒドロラーゼ)ファミリー及び
ＵＢＰ(ユビキチン特異的プロセッシング・プロテアー
ゼ)ファミリーに属する遺伝子によってそれぞれコード
される脱ユビキチン化酵素(DUBs)を含んでいる。現在、
60以上のかかる脱ユビキチン化酵素の存在が既に報告さ
れているが、それらのヒト相同物については、僅かの同
定がなされているのみである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、新規なユビキチン特異的プロテアーゼおよびその遺
伝子を提供することにある。

【０００７】本発明者は、上記目的より鋭意研究を重ね
た結果、ヒト胎児脳、ヒト成人動脈及びヒト成人胎盤の
cDNAライブラリーからランダムに約３万クローンのEST
(expression sequence tag)のデータを解析し、独自の
データベースを開発し、その中からコンピュータを用い
たホモロジー検索により上記目的に合致する、活性部位
が保存されている蛋白質をコードする遺伝子を単離する
に成功し、ここに本発明を完成するに至った。

【０００８】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明によれば、
配列番号１で示されるアミノ酸配列からなる蛋白質をコ
ードする塩基配列を含むユビキチン特異的プロテアーゼ
遺伝子（ubiquitin-specific protease 1、以下「ＵＳ
Ｐ１遺伝子」という）が提供される。

【０００９】また本発明によれば、塩基配列が配列番号
２で示されるものである上記ＵＳＰ１遺伝子が提供され
る。

【００１０】更に本発明によれば、以下の（ａ）及び
（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドからなるＵＳＰ１
遺伝子、特にヒトＵＳＰ１遺伝子が提供される。

【００１１】（ａ）配列番号３で示される塩基配列の全
部又は一部を含むポリヌクレオチド （ｂ）配列番号３で示される塩基配列からなるＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌ
クレオチド。

【００１２】加えて本発明によれば、ＵＳＰ１遺伝子検
出用の特異プローブ又は特異プライマーとして使用され
るＤＮＡ断片である上記遺伝子が提供される。

【００１３】また、本発明は上記遺伝子によってコード
されるユビキチン特異的プロテアーゼ（以下「ＵＳＰ
１」という）及びこれと結合性を有する抗体をも提供す
るものである。

【００１４】本発明により提供される新規なＵＳＰ１遺
伝子の利用によれば、該遺伝子の各種組織での発現の検
出や、ヒトＵＳＰ１の遺伝子工学的製造が可能となり、
これらにより、前述したように多様で且つ細胞に基本的
な活動に深く関与しているヒトＵＳＰ１システム乃至ヒ
トＵＳＰ１の機能の解析や、染色体の局在領域の異常と
関係する各種疾患、例えば、神経芽腫、乳癌、膵癌、横
紋筋肉腫等を含む各種癌や上記染色体領域の異常とは直
接関係はないが、細胞周期、増殖、分化等に関わるネッ
トワークの異常による各種疾患や、またパーキンソン氏
病において別種の脱ユビキチン蛋白（ＵＣＨＬ１）の異
常が見いだされた（Nature, 395, 451-452 (1998)）こ
とから、中枢神経系の疾患等の診断等を行うことができ
る。また、前記各疾患の治療、特に遺伝子治療、及び予
防薬のスクリーニングや評価等をも行うことができる。

【００１５】

【発明の実施の形態】以下、本明細書におけるアミノ
酸、ペプチド、塩基配列、核酸等の略号による表示は、
ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔IUPAC-IUB Communication
on BiologicalNomenclature, Eur. J. Biochem., 138:
9 (1984)〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書
等の作成のためのガイドライン」（特許庁編）及び当該
分野における慣用記号に従うものとする。

【００１６】本発明遺伝子の一具体例としては、後述す
る実施例に示される「ＧＥＮ−４２１Ｇ０５」と名付け
られたＤＮＡ配列から演繹されるものを挙げることがで
きる。その塩基配列は、配列番号３に示されるとおりで
ある。

【００１７】該遺伝子は、配列番号１に示される７８５
アミノ酸配列の新規なＵＳＰ１をコードする２３５５塩
基のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むｃ
ＤＮＡであり、全長３２２２塩基（ポリＡを除く）から
なっている。その分子量は88.2KDa、等電点は5.24と計
算される。

【００１８】本発明遺伝子の発現産物であるＵＳＰ１
は、ユビキチン特異的プロテアーゼの活性部位を形成す
るシステイン−ドメイン(アミノ酸配列番号の82番目か
ら99番目まで)とヒスチジン−ドメイン(アミノ酸配列番
号の576番目から784番目まで)を持っているばかりでな
く、ユビキチン特異的プロテアーゼのファミリーでよく
保存されている領域、即ちアスパラギン酸ドメイン(ア
ミノ酸配列番号の197番目から213番目まで)とKRFドメイ
ン(アミノ酸配列番号の524番目から535番目まで)も保持
している。これらのことから、本発明ＵＳＰ１は、ユビ
キチン特異的プロテアーゼのファミリーの新たなメンバ
ーと考えられる。

【００１９】更に 脱ユビキチン化活性試験により、本
発明ＵＳＰ１が実際にユビキチン特異的な切断活性を有
することが確認された。

【００２０】また、ラディエーション−ハイブリッドマ
ッピング法(ＲＨ法，Hum. Mol. Genet., 5, 339-346 (1
996))及びフルオレッセンス・インサイト・ハイブリダ
イゼーション分析(ＦＩＳＨ法)により、蛍光標識したDN
Aプローブをスライド上の染色体標本にハイブリダイズ
させたとき、本発明ＵＳＰ１遺伝子は１ｐ３１．３−ｐ
３２．１にシグナルが検出された。これらのことから、
染色体ローカスは１ｐ３１．３−ｐ３２．１と決定でき
た。

【００２１】かかる本発明ＵＳＰ１遺伝子の局在する染
色体局在領域（１ｐ３１−ｐ３２領域）を含む領域は、
神経芽腫や乳癌において、欠失、転座、ＬＯＨ(ヘテロ
接合性の喪失)などが共通にあると報告されている領域
である(Ritke, M.K., et al.,Cytogenet. Cell Genet.,
50, 84-90 (1989): Takeda, O., et al., Genes Chro
m. Cancer, 10, 30-39 (1994): Bieche, I., et al., O
ncol. Rep. 5, 267-272(1998) )。

【００２２】更に、上記１ｐ３１．３−ｐ３２．１領域
は、その増幅などの染色体異常が膵癌と横紋筋肉腫で生
じていると報告されている(Solinas-Toldo, S., et a
l., Cancer Res., 56, 3803-3807 (1996): Steilen-Gim
bel, H., et al., Hum. Genet., 97, 87-90 (1996) )。

【００２３】これらの報告と、今まで言われてきたユビ
キチン蛋白質分解系の生理的機能（例えば、ＤＮＡ修
復、細胞周期調節、異常蛋白質の分解、エンドサイトー
シス等、Wilkinson, K.D., FASEB J., 11, 1245-1256
(1997)）を考え合わせると、本発明ＵＳＰ１遺伝子は、
癌抑制遺伝子あるいは癌遺伝子の候補遺伝子であること
が示唆される。

【００２４】また、ユビキチン系に関するこれまでの多
くの研究成果では、ユビキチン化による蛋白質の修飾が
生物学的に重要であると言われてきた（Hershko, A., C
iechanover, A., Annu. Rev. Biochem., 61, 761-807
(1992): Hochstrasser, M.,Annu. Rev. Genet., 30, 40
5-439 (1996): Coux, O., et al., Annu. Rev. Bioche
m., 65, 801-847 (1996))。

【００２５】しかしながら、細胞中に多くの異なるＵＢ
Ｐが存在する理由は、未だに判明していない。ユビキチ
ンは、ポリユビキチンやユビキチン融合遺伝子産物から
機能的なユビキチンを作り出すこと、間違ったユビキチ
ン蛋白質の見直し、異常なポリユビキチンの切り出し、
あるいはプロテアソームによって作られた分解中間物の
解離に関係していると考えられる。

【００２６】多くのヒトの疾患は脳においてユビキチン
やあるいはユビキチン化蛋白質の異常な蓄積に関係して
いることが知られている(Wilkinson, K. D., FASEB J.,
11,1245-1256 (1997))。そしてヒト疾患との関係にお
いて、細胞内のユビキチンプールを正常に調節するユビ
キチン代謝経路の機能喪失があると考えられる。

【００２７】本発明遺伝子は、具体的には配列番号１で
示されるアミノ酸配列からなる蛋白質をコードする塩基
配列を含む遺伝子又は配列番号２で示される塩基配列を
含む遺伝子として例示されるが、特にこれらに限定され
ることなく、例えば、上記特定のアミノ酸配列中に一定
の改変を有する遺伝子や、上記特定の塩基配列と一定の
相同性を有する遺伝子であることができる。

【００２８】即ち、本発明遺伝子には、配列番号１に示
されるアミノ酸配列において１又は複数のアミノ酸が欠
失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる蛋白質を
コードする塩基配列を含む遺伝子もまた包含される。こ
こで、「アミノ酸の欠失、置換又は付加」の程度及びそ
れらの位置等は、改変された蛋白質が、配列番号１で示
されるアミノ酸配列からなる蛋白質と同様の機能を有す
る同効物であれば特に制限されない。具体的には、ヒト
ＵＳＰ１の活性を保持するものが挙げられる。また、上
記複数には、２以上、通常数個が含まれる。

【００２９】尚、これらアミノ酸配列の改変（変異）等
は、天然において、例えば突然変異や翻訳後の修飾等に
より生じることもあるが、天然由来の遺伝子（例えば本
発明の具体例遺伝子）に基づいて人為的に改変すること
もできる。本発明は、このような改変・変異の原因及び
手段等を問わず、上記特性を有する全ての改変遺伝子を
包含する。

【００３０】上記の人為的手段としては、例えばサイト
スペシフィック・ミュータゲネシス〔Methods in Enzym
ology, 154: 350, 367-382 (1987)；同 100: 468 (198
3)；Nucleic Acids Res., 12: 9441 (1984)；続生化学
実験講座１「遺伝子研究法II」、日本生化学会編, p105
(1986)〕等の遺伝子工学的手法、リン酸トリエステル
法やリン酸アミダイト法等の化学合成手段〔J. Am. Che
m. Soc., 89: 4801 (1967)；同91: 3350 (1969)；Scien
ce, 150: 178 (1968)；Tetrahedron Lett., 22:1859 (1
981)；同24: 245 (1983)〕及びそれらの組合せ方法等が
例示できる。

【００３１】本発明遺伝子のひとつの態様としては、配
列番号３で示される塩基配列の全部或は一部を含むポリ
ヌクレオチドからなる遺伝子を例示できる。この塩基配
列に含まれるオープンリーディングフレームは、上記ア
ミノ酸配列（配列番号１）の各アミノ酸残基を示すコド
ンの一つの組合せ例でもあり、本発明遺伝子はこれに限
らず、各アミノ酸残基に対して任意のコドンを組合せ選
択した塩基配列を有することも勿論可能である。該コド
ンの選択は、常法に従うことができ、例えば利用する宿
主のコドン使用頻度等を考慮することができる〔Ncleic
Acids Res., 9: 43 (1981)〕。

【００３２】また、本発明遺伝子は、例えば配列番号３
の具体例で示されるように、一本鎖ＤＮＡの塩基配列と
して表示されるが、本発明はかかる塩基配列に相補的な
塩基配列からなるポリヌクレオオチドやこれらの両者を
含むコンポーネントも当然に包含するものであり、ま
た、ｃＤＮＡ等のＤＮＡに限定されることもない。

【００３３】更に、本発明遺伝子は、前記のとおり、配
列番号３に示される塩基配列の全部又は一部を含むポリ
ヌクレオチドからなるものに限定されず、当該塩基配列
と一定の相同性を有する塩基配列からなるものも包含す
るものである。かかる遺伝子としては、少なくとも、下
記に掲げるようなストリンジェントな条件下で、配列番
号２で示される塩基配列からなるＤＮＡとハイブリダイ
ズし、一定の条件下での洗浄においてもこれより脱離し
ないものが挙げられる。

【００３４】即ち、配列番号３の塩基配列を有するＤＮ
Ａと、６×ＳＳＣ中６５℃一夜の条件下或は５０％ホル
ムアミドを含む４×ＳＳＣ中３７℃一夜の条件下におい
てハイブリダイズし、２×ＳＳＣ中６５℃での３０分間
の洗浄条件下においても該ＤＮＡから脱離しない塩基配
列を有する遺伝子が例示される。ここで、ＳＳＣは、標
準食塩−クエン酸緩衝液である（standard saline citr
ate; 1×SSC = 0.15MNaCl, 0.015M sodium citrate）。

【００３５】本発明の遺伝子は、その具体例についての
配列情報に基づいて、一般的な遺伝子工学的手法により
容易に製造・取得することができる〔Molecular Clonin
g 2dEd, Cold Spring Harbor Lab. Press (1989)；続生
化学実験講座「遺伝子研究法Ｉ、II、III」、日本生化
学会編（1986）等参照〕。

【００３６】具体的には、本発明遺伝子が発現される適
当な起源より、常法に従ってｃＤＮＡライブラリーを調
製し、該ライブラリーから、本発明遺伝子に特有の適当
なプローブや抗体を用いて所望クローンを選択すること
により実施できる〔Proc. Natl. Acad. Sci., USA., 7
8: 6613 (1981)；Science, 222: 778 (1983)等〕。

【００３７】上記において、ｃＤＮＡの起源としては、
本発明遺伝子を発現する各種の細胞、組織やこれらに由
来する培養細胞等、特に脳組織が例示され、これらから
の全ＲＮＡの分離、ｍＲＮＡの分離や精製、ｃＤＮＡの
取得とそのクローニング等はいずれも常法に従い実施で
きる。尚、ｃＤＮＡライブラリーは市販されてもおり、
本発明においてはそれらｃＤＮＡライブラリー、例えば
クローンテック社（Clontech Lab. Inc.）より市販の各
種ｃＤＮＡライブラリー等を用いることもできる。

【００３８】本発明遺伝子をｃＤＮＡライブラリーから
スクリーニングする方法も、特に制限されず、通常の方
法に従うことができる。具体的には、例えばｃＤＮＡに
より産生される蛋白質の特異抗体を使用した免疫的スク
リーニングにより対応するｃＤＮＡクローンを選択する
方法、目的のＤＮＡ配列に選択的に結合するプローブを
用いたプラークハイブリダイゼーション、コロニーハイ
ブリダイゼーション等やこれらの組合せ等を例示でき
る。

【００３９】ここで用いられるプローブとしては、本発
明遺伝子の塩基配列に関する情報をもとにして化学合成
されたＤＮＡ等が一般的に例示できるが、勿論既に取得
された本発明遺伝子そのものやその断片等も良好に利用
できる。

【００４０】また、上記特異抗体に代えてＵＳＰ１を利
用した、蛋白質相互作用クローニング法（protein inte
raction cloning procedure）によることもでき、更
に、本発明遺伝子の塩基配列情報に基づき設定したセン
ス・プライマー、アンチセンス・プライマーをスクリー
ニング用プローブとして用いることもできる。

【００４１】本発明では、またディファレンシャルデイ
スプレイ法（differential displaymethod, Liand P.,
et al., Science, 257, 967-971 (1992)）によって、異
なる条件下の細胞もしくは複数の異なる細胞群間のｍＲ
ＮＡの発現を直接比較、検討することができる。

【００４２】本発明遺伝子の取得に際しては、ＰＣＲ法
〔Science, 230: 1350 (1985)〕によるＤＮＡ／ＲＮＡ
増幅法も好適に利用できる。殊に、ライブラリーから全
長のｃＤＮＡが得られ難いような場合には、レース法
（ＲＡＣＥ：Rapid amplification of cDNA ends；実験
医学、12(6): 35 (1994))、殊に５’−レース（５’−
ＲＡＣＥ）法〔Proc. Natl. Acad. Sci., USA., 8: 899
8 (1988)〕等の採用が好適である。かかるＰＣＲ法の採
用に際して使用されるプライマーは、既に本発明によっ
て明らかにされた本発明遺伝子の配列情報に基づいて適
宜設定でき、これは常法に従い合成できる。

【００４３】尚、増幅させたＤＮＡ／ＲＮＡ断片の単離
精製は、前記の通り常法に従うことができ、例えばゲル
電気泳動法等によればよい。

【００４４】上記で得られる本発明遺伝子或は各種ＤＮ
Ａ断片は、常法、例えばジデオキシ法〔Proc. Natl. Ac
ad. Sci., USA., 74: 5463 (1977)〕やマキサム−ギル
バート法〔Method in Enzymology, 65: 499 (1980)〕等
に従って、また簡便には市販のシークエンスキット等を
用いて、その塩基配列を決定することができる。

【００４５】本発明遺伝子の利用によれば、一般の遺伝
子工学的手法を用いることにより、その遺伝子産物を容
易に大量に安定して製造することができる。従って、本
発明は、本発明にかかるＵＳＰ１遺伝子を含有するベク
ター（発現ベクター）及び該ベクターによって形質転換
された宿主細胞並びに該宿主細胞を培養することにより
ＵＳＰ１を製造する方法をも提供するものである。

【００４６】該製造方法は、通常の遺伝子組換え技術
〔Science, 224: 1431 (1984); Biochem. Biophys. Re
s. Comm., 130: 692 (1985); Proc. Natl. Acad. Sci.,
USA.,80: 5990 (1983)及び前記引用文献等参照〕に従
うことができる。

【００４７】上記宿主細胞としては、原核生物及び真核
生物のいずれも用いることができ、例えば原核生物の宿
主としては、大腸菌や枯草菌といった一般的に用いられ
るものが広く挙げられるが、好適には大腸菌、とりわけ
エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２株に含
まれるものが例示できる。また、真核生物の宿主細胞に
は、脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、前者としては、
例えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞〔Cell, 23: 175 (1
981)〕やチャイニーズ・ハムスター卵巣細胞及びそのジ
ヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株〔Proc. Natl. Acad. Sc
i., USA., 77:4216 (1980)〕等が、後者としては、サッ
カロミセス属酵母細胞等が好適に用いられているが、こ
れらに限定される訳ではない。

【００４８】原核生物細胞を宿主とする場合は、該宿主
細胞中で複製可能なベクターを用いて、このベクター中
に本発明遺伝子が発現できるように該遺伝子の上流にプ
ロモーター及びＳＤ（シャイン・アンド・ダルガーノ）
塩基配列、更に蛋白合成開始に必要な開始コドン（例え
ばＡＴＧ）を付与した発現プラスミドを好適に利用でき
る。上記ベクターとしては、一般に大腸菌由来のプラス
ミド、例えばｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１
２、ｐＵＣ１３等がよく用いられるが、これらに限定さ
れず既知の各種のベクターを利用することができる。大
腸菌を利用した発現系に利用される上記ベクターの市販
品としては、例えばｐＧＥＸ−４Ｔ（Amersham Pharmac
ia Biotech)、ｐＭＡＬ−Ｃ２，ｐＭＡＬ−Ｐ２（New E
ngland Biolabs社)、ｐＥＴ２１，ｐＥＴ２１／ｌａｃ
ｑ(Invitrogen社)、ｐＢＡＤ／Ｈｉｓ(Invitrogen社)等
を例示できる。

【００４９】脊椎動物細胞を宿主とする場合の発現ベク
ターとしては、通常、発現しようとする本発明遺伝子の
上流に位置するプロモーター、ＲＮＡのスプライス部
位、ポリアデニル化部位及び転写終了配列等を保有する
ものが挙げられ、これは更に必要により複製起点を有し
ていてもよい。該発現ベクターの例としては、具体的に
は、例えばＳＶ４０の初期プロモーターを保有するｐＳ
Ｖ２dhfr〔Mol. Cell. Biol., 1: 854 (1981)〕等が例
示できる。上記以外にも既知の各種の市販ベクターを用
いることができる。動物細胞を利用した発現系に利用さ
れるかかるベクターの市販品としては、例えばｐＥＧＦ
Ｐ−Ｎ，ｐＥＧＦＰ−Ｃ(Clontech社)、ｐＩＮＤ(Invit
rogen社)、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ(Invitrogen社)等
の動物細胞用ベクターや、ｐＦａｓｔＢａｃＨＴ(Gibco
BRL社)、ｐＡｃＧＨＬＴ(PharMingen社)、ｐＡｃ５／
Ｖ５−Ｈｉｓ，ｐＭＴ／Ｖ５−Ｈｉｓ，ｐＭＴ／Ｂｉｐ
／Ｖ５−Ｈｉｓ（以上Invitrogen社)等の昆虫細胞用ベ
クター等が挙げられる。

【００５０】また、酵母細胞を宿主とする場合の発現ベ
クターの具体例としては、例えば酸性ホスフアターゼ遺
伝子に対するプロモーターを有するｐＡＭ８２〔Proc.
Natl. Acad. Sci., USA., 80: 1 (1983)〕等が例示でき
る。市販の酵母細胞用発現ベクターには、例えばｐＰＩ
ＣＺ(Invitrogen社)、ｐＰＩＣＺα(Invitrogen社）等
が包含される。

【００５１】プロモーターとしても特に限定なく、エシ
ェリヒア属菌を宿主とする場合には、例えばトリプトフ
ァン(trp)プロモーター、lpp プロモーター、lac プロ
モーター、recA プロモーター、PL/PR プロモーター等
を好適に利用できる。宿主がバチルス属菌である場合
は、例えばSP01 プロモーター、SP02 プロモーター、pe
nP プロモーター等が好ましい。酵母を宿主とする場合
のプロモーターとしては、例えばpH05プロモーター、PG
Kプロモーター、GAPプロモーター、ADHプロモーター等
を好適に利用できる。また動物細胞を宿主とする場合の
好ましいプロモーターとしては、SV40由来のプロモータ
ー、レトロウイルスのプロモーター、メタロチオルイン
プロモーター、ヒートショックプロモーター、サイトメ
ガロウイルスプロモーター、ＳＲαプロモーター等を例
示できる。

【００５２】尚、本発明遺伝子の発現ベクターとして
は、通常の融合蛋白発現ベクターも好ましく利用でき、
該ベクターの具体例としては、グルタチオン−Ｓ−トラ
ンスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白として発現させ
るためのｐＧＥＸ（Promega社）等を例示できる。

【００５３】上記所望の組換えＤＮＡ（発現ベクター）
の宿主細胞への導入方法・形質転換法にも特に制限はな
く、一般的な各種方法を採用できる。また得られる形質
転換体も、常法に従い培養することができ、該培養によ
り本発明遺伝子によりコードされる目的のＵＳＰ１が発
現・産生され、形質転換体の細胞内、細胞外もしくは細
胞膜上に蓄積もしくは分泌される。

【００５４】上記培養に用いられる培地としては、採用
した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択
利用でき、その培養も宿主細胞の生育に適した条件下で
実施できる。

【００５５】かくして得られる組換え蛋白質（ＵＳＰ
１）は、所望により、その物理的性質、化学的性質等を
利用した各種の分離操作従って分離、精製することがで
きる〔「生化学データブックII」、1175-1259頁、第１
版第１刷、1980年 6月23日株式会社東京化学同人発行；
Biochemistry, 25(25): 8274 (1986); Eur. J. Bioche
m., 163: 313 (1987) 等参照〕。該方法としては、具体
的には例えば通常の再構成処理、蛋白沈澱剤による処理
（塩析法）、遠心分離、浸透圧ショック法、超音波破
砕、限外濾過、分子篩クロマトグラフィー（ゲル濾
過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグ
ラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各種液体クロマト
グラフィー、透析法、これらの組合せ等が挙げられ、特
に好ましい上記方法としては、本発明ＵＳＰ１の特異抗
体を結合させたカラムを利用するアフィニティクロマト
グラフィーを例示できる。

【００５６】しかして、本発明は、例えば上記の如くし
て得られる、新規なＵＳＰ１自体をも提供するものであ
る。該蛋白質は、ユビキチン特異的切断活性を有するこ
とにより特徴付けられ、前記のとおり医薬分野において
有用である。

【００５７】また、このＵＳＰ１は、該蛋白質の特異抗
体を作成するための免疫抗原としても利用できる。ここ
で抗原として用いられるコンポーネントは、例えば上記
遺伝子工学的手法に従って大量に産生された蛋白或はそ
のフラグメントであることができ、これら抗原を利用す
ることにより、所望の抗血清（ポリクローナル抗体）及
びモノクローナル抗体を収得することができる。

【００５８】該抗体の製造方法自体は、当業者によく理
解されているところであり、本発明においてもこれら常
法に従うことができる〔続生化学実験講座「免疫生化学
研究法」、日本生化学会編（1986）等参照〕。

【００５９】例えば、抗血清の取得に際して利用される
免疫動物としては、ウサギ、モルモット、ラット、マウ
スやニワトリ等の通常動物を任意に選択でき、上記抗原
を使用する免疫方法や採血等もまた常法に従い実施でき
る。

【００６０】また、モノクローナル抗体の取得も、常法
に従い、上記免疫抗原で免疫した動物の形質細胞（免疫
細胞）と形質細胞腫細胞との融合細胞を作成し、これよ
り所望抗体を産生するクローンを選択し、該クローンの
培養により実施することができる。免疫動物は、一般に
細胞融合に使用する形質細胞腫細胞との適合性を考慮し
て選択され、通常マウスやラット等が有利に用いられて
いる。免疫は、上記抗血清の場合と同様であり、所望に
より通常のアジュバント等と併用して行なうこともでき
る。

【００６１】尚、融合に使用される形質細胞腫細胞とし
ても、特に限定なく、例えばｐ３（p3/x63-Ag8）〔Natu
re, 256: 495-497 (1975)〕、ｐ３−Ｕ１〔Current Top
icsin Microbiology and Immunology, 81: 1-7 (197
8)〕、ＮＳ−１〔Eur. J. Immunol., 6: 511-519 (197
6)〕、ＭＰＣ−１１〔Cell, 8: 405-415 (1976)〕、Ｓ
Ｐ２／０〔Nature, 276: 269-271 (1978)〕等、ラット
におけるＲ２１０〔Nature,277: 131-133 (1979)〕等及
びそれらに由来する細胞等の各種の骨髄腫細胞をいずれ
も使用できる。

【００６２】上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との融合
は、通常の融合促進剤、例えばポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）やセンダイウイルス（ＨＶＪ）等の存在下に
公知の方法に準じて行なうことができ、所望のハイブリ
ドーマの分離もまた同様に行ない得る〔Meth. in Enzym
ol., 73: 3 (1981)；上記続生化学実験講座等〕。

【００６３】また、目的とする抗体産生株の検索及び単
一クローン化も常法により実施され、例えば抗体産生株
の検索は、上記の本発明抗原を利用したＥＬＩＳＡ法
〔Meth. in Enzymol., 70: 419-439 (1980)〕、プラー
ク法、スポット法、凝集反応法、オクテロニー（Ouchte
rlony）法、ラジオイムノアッセイ等の一般に抗体の検
出に用いられている種々の方法に従い実施することがで
きる。

【００６４】かくして得られるハイブリドーマからの本
発明抗体の採取は、該ハイブリドーマを常法により培養
してその培養上清として得る、また、ハイブリドーマを
これと適合性のある哺乳動物に投与して増殖させその腹
水として得る方法等により実施される。前者の方法は、
高純度の抗体を得るのに適しており、後者の方法は、抗
体の大量生産に適している。このようにして得られる抗
体は、更に塩析、ゲル濾過、アフィニティクロマトグラ
フイー等の通常の手段により精製することができる。

【００６５】かくして得られる抗体は、本発明ＵＳＰ１
に結合性を有することによって特徴付けられ、これは、
前述したＵＳＰ１の精製及びその免疫学的手法による測
定乃至識別等に有利に利用できる。本発明は、かかる新
規な抗体をも提供するものである。

【００６６】また、本発明によって明らかにされた本発
明遺伝子の配列情報を基にすれば、例えば該遺伝子の一
部又は全部の塩基配列を利用することにより、個体もし
くは各種組織における本発明遺伝子の発現の検出を行う
ことができる。

【００６７】かかる検出は常法に従って行うことがで
き、例えばＲＴ−ＰＣＲ〔Reverse transcribed-Polyme
rase chain reaction; E.S. Kawasaki, et al., Amplif
ication of RNA. In PCR Protocol, A Guide to method
s and applications, AcademicPress, Inc., SanDiego,
21-27 (1991)〕によるＲＮＡ増幅やノーザンブロット
解析〔Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Lab.
(1989)〕、in situ ＲＴ−ＰＣＲ〔Nucl. Acids Res.,
21: 3159-3166 (1993)〕や in situ ハイブリダイゼー
ション等の細胞レベルでのそれら測定、ＮＡＳＢＡ法
〔Nucleic acid sequence-based amplification, Natur
e, 350: 91-92 (1991)〕及びその他の各種方法によりい
ずれも良好に実施し得る。

【００６８】尚、ＲＴ−ＰＣＲ法を採用する場合におい
て、用いられるプライマーは、本発明遺伝子のみを特異
的に増幅できる該遺伝子特有のものである限り何等限定
されず、本発明の遺伝情報に基いてその配列を適宜設定
することができる。通常、これは２０〜３０ヌクレオチ
ド程度の部分配列を有するものとすることができる。

【００６９】このように、本発明は、本発明にかかるＵ
ＳＰ１遺伝子の検出用の特異プライマー及び／又は特異
プローブとして使用されるＤＮＡ断片をも提供するもの
である。

【００７０】

【発明の効果】本発明によれば、新規なヒトＵＳＰ１遺
伝子が提供され、該遺伝子を用いれば、該遺伝子の各種
組織での発現の検出や、ヒトＵＳＰ１の遺伝子工学的製
造が可能となり、これらにより、前述したように多様で
且つ細胞に基本的な活動に深く関与しているヒトＵＳＰ
１システム乃至ヒトＵＳＰ１の機能の解析や、染色体の
局在領域の異常等と関係する各種疾患の診断や治療、特
に遺伝子治療、及び予防薬のスクリーニングや評価等を
行うことができる。

【００７１】

【実施例】以下、本発明を更に詳細に説明するため実施
例を挙げる。

【００７２】実施例１：クローニング及びＤＮＡシーク
エンシング ヒト胎児脳、ヒト成人動脈及び胎盤より抽出したｍＲＮ
Ａをクローンテック社より購入して出発材料とした。上
記ｍＲＮＡよりｃＤＮＡを合成し、ベクターλＺＡＰII
（ストラタジーン社製）に挿入し、ｃＤＮＡライブラリ
ーを構築した（大塚ＧＥＮリサーチ・インスティチュー
ト、大塚製薬株式会社）。インビボ・エキシジョン法
（in vivo excision: Short, J. M., et al., Nucleic
Acids Res., 16, 7583-7600 (1988)）によって寒天培地
上にヒト遺伝子を含む大腸菌コロニーを形成させ、ラン
ダムにそのコロニーをピックアップし、９６ウエルマイ
クロプレートにヒト遺伝子を含む大腸菌クローン約３万
を登録した。登録されたクローンは、−８０℃にて保存
した。

【００７３】次に登録した各クローンを１．５ｍｌのＬ
Ｂ培地で一昼夜培養し、プラスミド自動抽出装置ＰＩ−
１００（クラボウ社製）を用いてＤＮＡを抽出精製し
た。尚、コンタミした大腸菌のＲＮＡは、ＲＮase処理
により分解除去した。最終的に３０μｌに溶解し、２μ
ｌはミニゲルによりおおまかにＤＮＡのサイズ及び量を
チェックした。その７μｌをシークエンス反応用に用
い、残りの２１μｌは、プラスミドＤＮＡとして４℃に
保存した。また、この方法は若干のプログラム変更によ
って後記に示されるＦＩＳＨ（fluoresence in situ hy
bridization）のプローブ用としても使用可能なコスミ
ドを抽出することができる。

【００７４】続いてＴ３、Ｔ７、或は合成オリゴヌクレ
オチド・プライマーを用いるサンガーらのジデオキシタ
ーミネーター法（Sanger, F., et al., Proc. Natl. A
cad.Sci., U.S.A., 74, 5463-5467 (1977)）或はジデオ
キシターミネーター法にＰＣＲ法を加味した方法である
サイクルシークエンス法（Carothers, A.M., et al., B
io. Techniques, 7, 494-499 (1989)）を実施した。之
等の方法は少量のプラスミドＤＮＡ（およそ０．１−
０．５μｇ）をテンプレート（鋳型）として４種の塩基
を特異的に停止する伸長反応させる方法である。

【００７５】シークエンスプライマーとして、ＦＩＴＣ
（fluorescein isothiocyanate）蛍光標識したものを使
用し、Ｔａｑポリメラーゼにより約２５サイクル反応さ
せた。蛍光標識したＤＮＡ断片につき、自動ＤＮＡシー
クエンサー、ＡＬＦ^TMＤＮＡシークエンサー（ファルマ
シア社製）によりｃＤＮＡの５’末端側から約４００塩
基の配列を決定した。

【００７６】３’非翻訳領域は、各遺伝子の異質性（he
terogeneity）が高く、個々の遺伝子を区別するのに適
しているので、場合によっては、３’側のシークエンス
も行なった。

【００７７】ＤＮＡシークエンサーで得られた膨大な塩
基配列情報を、６４ビットのコンピューターＤＥＣ３４
００に転送し、コンピュターによるホモロジー解析を行
なった。該ホモロジー解析は、ＵＷＧＣＧのＦＡＳＴＡ
プログラム（Pearson, W.R.and Lipman, D. J., Proc.N
atl.Acad.Sci., USA., 85, 2444-2448 (1988)）による
データーベース（GenBank, EMBL）検索により行なっ
た。

【００７８】ヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーについて
の上記解析方法は、藤原ら〔Fujiwara, T., et al., DN
A Res., 2, 107-111 (1991)〕に詳述されている。

【００７９】上記と同様な方法で、構築されたヒト胎児
脳ｃＤＮＡライブラリーから無作為に選択したＥＳＴｓ
（expressed sequence tags:発現遺伝子断片の部分ＤＮ
Ａ配列）の配列決定を実施した。

【００８０】ＦＡＳＴＡプログラムによるGene Bankと
ＥＭＢＬの配列検索の結果、ＧＥＮ−４２１Ｇ０５と命
名したクローンを、ヒトＵＳＰ１をコードする遺伝子と
して発見した。

【００８１】テンプレート（鋳型）としてベクター（pB
luescript vector: ストラタジーン社製（Stratagen
e)）内に挿入された二本鎖ＤＮＡと、プライマーとして
の合成オリゴヌクレオチドとを使用して、サンガーらの
ジデオキシ・チェーン・ターミネェーション法によっ
て、上記クローンの有する全コード領域を含むｃＤＮＡ
の塩基配列を決定した。

【００８２】上記で得られたクローンのｃＤＮＡ配列
は、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭＴＭ３７７自動ＤＮＡシークエ
ンサーによる配列決定の結果、２３５５塩基の推定アミ
ノ酸翻訳領域を含んでおり、これによってコードされる
アミノ酸配列は、７８５アミノ酸残基を有し、全長ｃＤ
ＮＡクローンの核酸配列は、３２２２塩基からなってい
た。その全配列は、配列番号３に示す通りであり、オー
プン・リーディング・フレームｋ核酸配列は配列番号２
に、該酸配列でコードされるアミノ酸の推定アミノ酸配
列は配列番号１に示す通りであった。

【００８３】また、ＵＳＰ１遺伝子の分子量は88.2KD
a、等電点は5.24と計算された。

【００８４】本発明遺伝子の発現産物であるＵＳＰ１
は、ユビキチン特異的プロテアーゼの活性部位を形成す
るシステイン−ドメイン(アミノ酸配列番号の82番目か
ら99番目まで)とヒスチジン−ドメイン(アミノ酸配列番
号の576番目から784番目まで)を持っているばかりでな
く、ユビキチン特異的プロテアーゼのファミリーでよく
保存されている領域、即ちアスパラギン酸ドメイン(ア
ミノ酸配列番号の197番目から213番目まで)とKRFドメイ
ン(アミノ酸配列番号の524番目から535番目まで)も保持
している。

【００８５】実施例２：脱ユビキチン化活性試験 （１）ＵＳＰ１発現ベクターの構築 次に、ＵＳＰ１が実際にユビキチン特異的な切断活性を
有するかどうかの検討を以下のとおり行った。

【００８６】Bakerらの方法(Baker,R.T., Tobias,J.W.,
and Varshavsky,A. (1992), Ubiquitin-dependent pro
cesses by deubiquitinating enzymes. J. Biol. Chem.
267:23364-23375)を用いて、大腸菌内でユビキチン−
β−ガラクトシダーゼの融合タンパク質(ユビキチンと
レポータータンパク質のβ−ガラクトシダーゼの融合タ
ンパク質；以下Ub-galと略する)を発現させ、同時にＵ
ＳＰ１遺伝子を導入して発現させることにより、該発現
物が上記融合タンパク質を切断するかどうかを調べた。

【００８７】実施例１で得られたＵＳＰ１遺伝子のコー
ド領域を含む発現プラスミドを構築するために、配列番
号３に示される塩基配列の開始コドン（１１０−１１
３）部位に、Nde Iサイト（ＣＡＴＡＴＧ）を導入し
た。

【００８８】元のpBluescriptに挿入されたＵＳＰ１ｃ
ＤＮＡを、BamHI（切断位置＝pBluescriptのマルチクロ
ーニングサイト内）と、Pst I (切断位置＝ＣＴＧＣＡ
Ｇ，２９４−２９９）とで切断し、Ｎ末端を除去した。

【００８９】Nde IサイトがＡＴＧの直前につくように
設計したプライマー（BamHIとNde Iサイトを含む、配列
番号４）と、Pst Iの３’側に設定したアンチセンスプ
ライマー（配列番号５）とを用いて、ＰＣＲを行った。
ＰＣＲ産物をBamHIとPst Iとを用いて切断し、上記Blue
scriptにつないだ。Nde Iサイトと３’のベクター側のX
ho Iサイトとで切断し、発現ベクターｐＥＴ１６ｂ（ノ
バゲン社製）をNde IとXho Iとを用いて切断し、脱リン
酸したものに挿入した。

【００９０】（２）活性測定 ｐＥＴ発現プラスミドが使用できる宿主としての大腸菌
NovaBlueをノバゲン社より購入し、ｐＡＣ−Ｕｂ−Ｒ−
ｂｇａｌ又はｐＡＣ−Ｕｂ−Ｍ−ｂｇａｌ（Baek, S.H.
らから供与; Baek, S.H., et al., (1997), J. Biol. C
hem., 272, 25560-25565; Tobias, J.W., and Varshavs
ky,A., (1991), J.Biol.Chem., 266, 12021-12028）と
上記（１）で調製した発現プラスミドとを同時にトラン
スフォームした。５ｍｌのＬＢ培養液（アンピシリンと
クロラムフェニコールを添加）で濁度ＯＤ６００＝０．
２まで培養した。そして、１ｍＭのＩＰＴＧを添加し、
０、１、２及び３時間後にそれぞれ５００μｌずつ菌を
回収し、４００μｌのＳＤＳサンプルバッファーを加え
て可溶化し、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を
行った。ＰＶＤＦ膜に転写し、抗β−ｇａｌ抗体（プロ
メガ社製、Ｚ３７８Ａ）の５０００倍希釈液でインキュ
ベートし、洗浄後、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ−コンジュ
ゲート（プロメガ社製、Ｗ４０２Ｂ）の３０００倍希釈
液でインキュベートし、洗浄した。検出のためにアマシ
ャム社製のＥＣＬウエスタンブロッティング検出キット
を用いた。

【００９１】ＵＳＰ１をコードする領域を含むｐＥＴ１
６ｂの５０ｎｇと、Ub-Met-gal融合ベクターの５０ｎｇ
或いは同ｐＥＴ１６ｂの５０ｎｇと、Ub-Arg-gal融合ベ
クター５０ｎｇのそれぞれを、大腸菌(NovaBlue(DE3))
に同時にコトランスフェクト(co-transfect)した。その
後各ベクターを含む大腸菌を、アンピシリン及びクロラ
ムフェニコールを含むLuria broth培地で３７℃で１４
時間培養後、同培地で１０倍に希釈し、３７℃で約３時
間（ＯＤ６００＝０．２になるまで）培養し、これに１
ｍＭになるようにＩＰＴＧを添加して、更に３７℃で
１、２及び３時間培養し、タンパク質の発現誘導を行っ
た。また、コントロールとしてＵＳＰ１を挿入していな
いｐＥＴ１６ｂベクターのみも同様に培養した。尚、宿
主細胞が発現した内因性のβ−ガラクトシダーゼ断片を
lacＺΔM15産物と名づけた。

【００９２】上記で得られた培養液から５００mlを分取
して、菌体を回収し、４００μｌのＳＤＳローディング
緩衝液（150mM Tris-HCl(pH6.8), 1.5%(w/v) SDS, 2%(v
/v)２−メルカプトエタノール, 0.002%(w/v) ブロモフ
ェノールブルー, 7% グリセロール）に懸濁させた後、1
00℃で2分間加熱し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（1%ポリアクリ
ルアミドゲル, 0.1% SDS）を行った後、クマシーブルー
Ｒ−２５０染色或いは抗β−ガラクトシダーゼ抗体(ザ
イメット社製)によるウエスタンブロッティングを行っ
て、目的タンパク質の発現状況を調べた。

【００９３】その結果を、図１に示す。

【００９４】図１は、ＵＳＰ１によるUb-β-galactosid
ase融合蛋白の切断試験における、抗−β−galactosida
se抗体を用いた免疫染色による測定結果（下図：Ub-M-
β-galレベル及び上図：Ub-R-β-galレベル）を示す図
である。

【００９５】図１の下図に示すように、ＵＳＰ１とUb-A
rg-galを同時に発現させることによってArg-galは検出
されなかった。しかしながら、ＵＳＰ１とUb-Met-galを
同時に発現させた場合（図１の上図）はMet-galは検出
された。このことはN末端がメチオニンの場合はその蛋
白質は安定であるが、アルギニンの場合は非常に不安定
になるというN-末端ルール(Varshavsky, A., The N-end
Rule. Cell, 69, 725-735(1992))により、ユビキチン
とメチオニン或いはアルギニンの間で本発明のＵＳＰ１
が切断したことを示している。このように本発明のＵＳ
Ｐ１はユビキチン特異的プロセッシング活性を保有して
いることが分かる。

【００９６】実施例３：ＵＳＰ１遺伝子の染色体の局在 （１）ラディエーション−ハイブリッドマッピング法 次に、ラディエーション−ハイブリッドマッピング法
(ＲＨ法：Walter, M.A.,et al., Nat. Genet., 7, 22-2
8 (1994))によってＵＳＰ１遺伝子の染色体の局在を調
べた。

【００９７】リサーチ・ジエネティクス社(Research Ge
netics社)から購入したGeneBridge4パネルを用いてＲＨ
法による位置決定を行った。この方法はヒトの細胞株に
3000ラドの放射線を照射し、ヒトの染色体DNAをランダ
ムに切断し、レシピエントのハムスター細胞に導入し、
ハイブリッド細胞を作製した。このようにしてハイブリ
ッド細胞にはいろいろな部位のヒト染色体ＤＮＡ断片を
含むものができる。93種類のハイブリッド細胞中に目的
の遺伝子があるかどうかをＵＳＰ１特異的プライマーを
用いてＰＣＲで調べ、そのパターンから統計的処理によ
り位置を推定した。ここで用いたプライマー１及び２の
塩基配列は、配列番号６及び７に示すとおりである。

【００９８】増幅されたＰＣＲ産物は、１．５％アガロ
ースゲル上に電気泳動によるサイズに従って分離され
た。各ハイブリッドクローンは、それぞれ２６７塩基の
バンドのあるなしによって陽性(１)又は陰性(０)として
スコア化された。

【００９９】GeneBridge ４パネルから得られたデータ
は、two-point maximum-likelihoodanalysis software
によって分析された。

【０１００】その結果、ＵＳＰ１遺伝子は、DNAマーカ
ーＤ１Ｓ２０３の近傍、即ち、１ｐ３１．３−ｐ３２．
１にあることが分かった。

【０１０１】（２）フルオレッセンス・インサイト・ハ
イブリダイゼーション(ＦＩＳＨ)分析 上記の局在を確認するためにさらにＦＩＳＨ分析を行っ
た。

【０１０２】即ち、上記で使用したプライマー１及びプ
ライマー２を使用するＰＣＲスクリーニングによってヒ
ト染色体ライブラリー(リサーチ・ジェネティクス社製)
から単離されたＵＳＰ１ｃＤＮＡを含んでいる一つのＢ
ＡＣ（bacterial artificalchromosome)クローンをプロ
ーブとして使用した。

【０１０３】ＢＡＣクローンに含まれる反復配列を抑制
するために、リヒター(Lichter, P., et al., Proc. N
atl. Acad. Sci. USA, 87, 6634-6638 (1990))らの記載
の方法を少し改良した方法(Takahashi, E., et al., Hu
m. Genet., 88, 119-121 (1991))を用いて、２倍過剰の
ヒトＣｏｔ−１ＤＮＡ(ギブコBRL社製)を使用した。標
識、ハイブリダイゼーション、洗浄及び検出は通常の方
法で行った。

【０１０４】その結果、100の典型的な複製プロメタフ
ェーズＲバンドを試験して、染色体１のｐ３１．３−ｐ
３２．１のバンドでシグナルを観察した。そして他の染
色体上に疑わしいシグナルは観察されなかった。

【０１０５】

【配列表】 ＳＥＱＵＥ
ＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ ＜１１０＞ Ｏｓｔｕｋａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， ｌｔ
ｄ．
＜１２０＞ Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｇｅ
ｎｅ ＜１３０＞ ２Ｂ６８ＪＰ ＜１６０＞ ７ ＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｖｅｒ． ２．０
＜２１０＞ １
＜２１１＞ ７８５
＜２１２＞ ＰＲＴ
＜２１３＞ Ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｂｒａｉｎ
＜４００＞ １
Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ ２０ ２５
３０ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ
Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ ３５ ４０
４５ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｉｌｅ
Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ ５０ ５５
６０ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ
Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｈｅ ６５ ７０
７５ ８０ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ ８５
９０ ９５ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｐｈｅ
Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ １００ １０５
１１０ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｇｌｕ １３０ １３５
１４０ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ
Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ １４５ １５０
１５５ １６０ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｈｒ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ
Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｔｙｒ １８０ １８５
１９０ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｎ
Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ １９５ ２００
２０５ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ ２１０ ２１５
２２０ Ａｓｎ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｌｙｓ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ
Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ａｒｇ Ｈｉｓ ２４５
２５０ ２５５ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｌｙｓ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ ２７５ ２８０
２８５ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｎ
Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ２９０ ２９５
３００ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ
Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ ３２５
３３０ ３３５ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ ３４０ ３４５
３５０ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ ３５５ ３６０
３６５ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ａｓｐ
Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ ３７０ ３７５
３８０ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｖａｌ Ａｓｎ
Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ ４０５
４１０ ４１５ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｙ ４２０ ４２５
４３０ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｕ ４３５ ４４０
４４５ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ ４５０ ４５５
４６０ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ４６５ ４７０
４７５ ４８０ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ ４８５
４９０ ４９５ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｐｈｅ
Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｈｉｓ Ｔｙｒ ５００ ５０５
５１０ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｈｅ
Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ ５１５ ５２０
５２５ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｐｈｅ Ａｌａ Ａｌａ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｃｙｓ ５３０ ５３５
５４０ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｎ
Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ ５４５ ５５０
５５５ ５６０ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ ５６５
５７０ ５７５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ ５８０ ５８５
５９０ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ ５９５ ６００
６０５ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｇｌｎ
Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｐｒｏ ６１０ ６１５
６２０ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ａｓｎ ６２５ ６３０
６３５ ６４０ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ ６４５
６５０ ６５５ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｌａ
Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｎ ６６０ ６６５
６７０ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｔｙｒ
Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ａｓｐ ６７５ ６８０
６８５ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｇｌｕ
Ａｓｎ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ ６９０ ６９５
７００ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ
Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ ７０５ ７１０
７１５ ７２０ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ
Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｖａｌ ７２５
７３０ ７３５ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ａｓｐ ７４０ ７４５
７５０ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ
Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ ７５５ ７６０
７６５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ ７７０ ７７５
７８０ Ｌｅｕ
７８５
＜２１０＞ ２
＜２１１＞ ２３５５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｂｒａｉｎ
＜４００＞ ２
ａｔｇｃｃｔｇｇｔｇ ｔｃａｔａｃｃｔａｇ ｔｇａａａｇｔａａｔ ｇｇａ
ｃｔｔｔｃａａ ｇａｇｇｔａｇｃｃｃ ｔｔｃａａａｇａａａ ６０ ａａｃａｇａｃｔｔｔ ｃｃｔｔａａａｇｔｔ ｔｔｔｔｃａｇａａａ ａａｇ
ｇａａａｃｔａ ａｇａｇａｇｃｔｔｔ ｇｇａｔｔｔｃａｃａ １２０ ｇａｔｔｃｔｃａａｇ ａａａａｔｇａａｇａ ａａａａｇｃｔｔｃｔ ｇａａ
ｔａｔａｇａｇ ｃａｔｃｔｇａａａｔ ｔｇａｔｃａａｇｔｔ １８０ ｇｔｔｃｃｔｇｃａｇ ｃａｃａｇｔｃｔｔｃ ａｃｃｔａｔａａａｃ ｔｇｔ
ｇａｇａａｇａ ｇａｇａａａａｃｔｔ ｇｔｔａｃｃａｔｔｔ ２４０ ｇｔｇｇｇａｃｔｇａ ａｔａａｔｃｔｃｇｇ ｃａａｔａｃｔｔｇｃ ｔａｔ
ｃｔｔａａｔａ ｇｔａｔａｃｔｔｃａ ｇｇｔａｔｔａｔａｔ ３００ ｔｔｔｔｇｔｃｃｃｇ ｇｔｔｔｔａａａｔｃ ｔｇｇａｇｔａａａｇ ｃａｃ
ｔｔａｔｔｔａ ａｔａｔｔａｔｔｔｃ ａａｇｇａａｇａａａ ３６０ ｇａａｇｃｔｃｔａａ ａｇｇａｔｇａａｇｃ ｃａａｔｃａａａａａ ｇａｃ
ａａｇｇｇａａ ａｔｔｇｃａａａｇａ ａｇａｔｔｃｔｔｔｇ ４２０ ｇｃａａｇｔｔａｔｇ ａａｔｔｇａｔａｔｇ ｃａｇｔｔｔａｃａｇ ｔｃｃ
ｔｔａａｔｃａ ｔｔｔｃｇｇｔｔｇａ ａｃａｇｃｔｃｃａｇ ４８０ ｇｃｔａｇｔｔｔｔｃ ｔｃｔｔａａａｔｃｃ ａｇａｇａａａｔａｔ ａｃｔ
ｇａｔｇａａｃ ｔｔｇｃｃａｃｔｃａ ｇｃｃａａｇｇｃｇａ ５４０ ｃｔｇｃｔｔａａｃａ ｃａｃｔｇａｇｇｇａ ａｃｔｃａａｃｃｃｔ ａｔｇ
ｔａｔｇａａｇ ｇａｔａｔｃｔａｃａ ｇｃａｔｇａｔｇｃａ ６００ ｃａｇｇａａｇｔａｔ ｔａｃａａｔｇｔａｔ ｔｔｔｇｇｇａａａｃ ａｔｔ
ｃａａｇａａａ ｃａｔｇｃｃａａｃｔ ｃｃｔａａａａａａａ ６６０ ｇａａｇａａｇｔａａ ａａａａｔｇｔｇｇｃ ａｇａａｔｔａｃｃｔ ａｃｔ
ａａｇｇｔａｇ ａａｇａａａｔａｃｃ ｔｃａｔｃｃｇａａａ ７２０ ｇａｇｇａａａｔｇａ ａｔｇｇｔａｔｔａａ ｃａｇｃａｔａｇａｇ ａｔｇ
ｇａｃａｇｔａ ｔｇａｇｇｃａｔｔｃ ｔｇａａｇａｃｔｔｔ ７８０ ａａａｇａｇａａａｃ ｔｃｃｃａａａａｇｇ ａａａｔｇｇｇａａａ ａｇａ
ａａａａｇｔｇ ａｃａｃｔｇａａｔｔ ｔｇｇｔａａｃａｔｇ ８４０ ａａｇａａａａａａｇ ｔｔａａａｔｔａｔｃ ｃａａｇｇａａｃａｃ ｃａｇ
ｔｃａｔｔｇｇ ａａｇａｇａａｃｃａ ｇａｇａｃａａａｃｔ ９００ ａｇａｔｃａａａａａ ｇａａａａｇｃｔａｃ ａａｇｔｇａｔａｃａ ｔｔａ
ｇａｇａｇｔｃ ｃｔｃｃｔａａａａｔ ａａｔｔｃｃｃａａｇ ９６０ ｔａｔａｔｔｔｃｔｇ ａａａａｔｇａｇａｇ ｔｃｃａａｇａｃｃｃ ｔｃａ
ｃａａａａｇａ ａａｔｃａａｇａｇｔ ｔａａａａｔａａａｔ １０２０ ｔｇｇｔｔａａａｇｔ ｃｔｇｃａａｃｔａａ ｇｃａａｃｃｃａｇｃ ａｔｔ
ｃｔｔｔｃｔａ ａａｔｔｔｔｇｔａｇ ｔｃｔｇｇｇａａａａ １０８０ ａｔａａｃａａｃａａ ａｃｃａａｇｇａｇｔ ｃａａａｇｇａｃａａ ｔｃｔ
ａａａｇａａａ ａｔｇａａｔｇｔｇａ ｔｃｃｔｇａａｇａｇ １１４０ ｇａｃｔｔｇｇｇｇａ ａｇｔｇｔｇａａａｇ ｔｇａｔａａｃａｃａ ａｃｔ
ａａｔｇｇｔｔ ｇｔｇｇａｃｔｔｇａ ａｔｃｔｃｃａｇｇａ １２００ ａａｔａｃｔｇｔｔａ ｃａｃｃｔｇｔａａａ ｔｇｔｔａａｔｇａａ ｇｔｔ
ａａａｃｃｃａ ｔａａａｃａａａｇｇ ｔｇａａｇａａｃａａ １２６０ ａｔｔｇｇｔｔｔｔｇ ａｇｃｔａｇｔｇｇａ ｇａａａｔｔａｔｔｔ ｃａａ
ｇｇｔｃａｇｃ ｔｇｇｔａｔｔａａｇ ｇａｃｇｃｇｔｔｇｃ １３２０ ｔｔｇｇａａｔｇｔｇ ａａａｇｔｔｔａａｃ ａｇａａａｇａａｇａ ｇａａ
ｇａｔｔｔｔｃ ａａｇａｃａｔｃａｇ ｔｇｔｇｃｃａｇｔａ １３８０ ｃａａｇａａｇａｔｇ ａｇｃｔｔｔｃｃａａ ａｇｔａｇａｇｇａｇ ａｇｔ
ｔｃｔｇａａａ ｔｔｔｃｔｃｃａｇａ ｇｃｃａａａａａｃａ １４４０ ｇａａａｔｇａａｇａ ｃｃｃｔｇａｇａｔｇ ｇｇｃａａｔｔｔｃａ ｃａａ
ｔｔｔｇｃｔｔ ｃａｇｔａｇａａａｇ ｇａｔｔｇｔａｇｇａ １５００ ｇａａｇａｔａａａｔ ａｔｔｔｃｔｇｔｇａ ａａａｃｔｇｃｃａｔ ｃａｔ
ｔａｔａｃｔｇ ａａｇｃｔｇａａｃｇ ａａｇｔｃｔｔｔｔｇ １５６０ ｔｔｔｇａｃａａａａ ｔｇｃｃｔｇａａｇｔ ｔａｔａａｃｔａｔｔ ｃａｔ
ｔｔｇａａｇｔ ｇｃｔｔｔｇｃｔｇｃ ｔａｇｔｇｇｔｔｔｇ １６２０ ｇａｇｔｔｔｇａｔｔ ｇｔｔａｔｇｇｔｇｇ ｔｇｇａｃｔｔｔｃｃ ａａｇ
ａｔｃａａｃａ ｃｔｃｃｔｔｔａｔｔ ｇａｃａｃｃｔｃｔｔ １６８０ ａａａｔｔｇｔｃａｃ ｔａｇａａｇａａｔｇ ｇａｇｃａｃａａａｇ ｃｃａ
ａｃｔａａｃｇ ａｃａｇｃｔａｔｇｇ ａｔｔａｔｔｔｇｃｇ １７４０ ｇｔｔｇｔｇａｔｇｃ ａｔａｇｔｇｇｃａｔ ｔａｃａａｔｔａｇｔ ａｇｔ
ｇｇｇｃａｔｔ ａｃａｃｔｇｃｔｔｃ ｔｇｔｔａａａｇｔｃ １８００ ａｃｔｇａｃｃｔｔａ ａｃａｇｔｔｔａｇａ ａｃｔａｇａｔａａａ ｇｇａ
ａａｔｔｔｔｇ ｔｇｇｔｔｇａｃｃａ ａａｔｇｔｇｔｇａａ １８６０ ａｔａｇｇｔａａｇｃ ｃａｇａａｃｃａｔｔ ｇａａｔｇａｇｇａｇ ｇａａ
ｇｃａａｇｇｇ ｇｔｇｔｇｇｔｔｇａ ｇａａｔｔａｔａａｔ １９２０ ｇａｔｇａａｇａａｇ ｔｇｔｃａａｔｔａｇ ａｇｔｔｇｇｔｇｇａ ａａｔ
ａｃａｃａｇｃ ｃａａｇｔａａａｇｔ ｔｔｔｇａａｃａａａ １９８０ ａａａａａｔｇｔａｇ ａａｇｃｔａｔｔｇｇ ａｃｔｔｃｔｔｇｇａ ｇｇａ
ｃａａａａｇａ ｇｃａａａｇｃａｇａ ｔｔａｔｇａｇｃｔａ ２０４０ ｔａｃａａｃａａａｇ ｃｃｔｃｔａａｔｃｃ ｔｇａｔａａｇｇｔｔ ｇｃｔ
ａｇｔａｃａｇ ｃｇｔｔｔｇｃｔｇａ ａａａｔａｇａａａｔ ２１００ ｔｃｔｇａｇａｃｔａ ｇｔｇａｔａｃｔａｃ ｔｇｇｇａｃｃｃａｔ ｇａａ
ｔｃｔｇａｔａ ｇａａａｃａａｇｇａ ａｔｃｃａｇｔｇａｃ ２１６０ ｃａａａｃａｇｇｃａ ｔｔａａｔａｔｔａｇ ｔｇｇａｔｔｔｇａｇ ａａｃ
ａａａａｔｔｔ ｃａｔａｃｇｔａｇｔ ｇｃａａａｇｃｔｔａ ２２２０ ａａｇｇａｇｔａｔｇ ａｇｇｇｇａａｇｔｇ ｇｔｔｇｃｔｔｔｔｔ ｇａｔ
ｇａｔｔｃｔｇ ａａｇｔｃａａａｇｔ ｔａｃｔｇａａｇａｇ ２２８０ ａａｇｇａｃｔｔｔｃ ｔｇａａｔｔｃｔｃｔ ｔｔｃｃｃｃｔｔｃｔ ａｃａ
ｔｃｔｃｃｔａ ｃｔｔｃｔａｃｔｃｃ ｔｔａｃｔｔｇｃｔａ ２３４０ ｔｔｔｔａｔａａｇａ ａａｔｔａ
２３５５ ＜２１０＞ ３
＜２１１＞ ３２２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｂｒａｉｎ
＜２２０＞
＜２２１＞ ＣＤＳ
＜２２２＞ （１１０）．．（２４６４）
＜４００＞ １
ｇｇｃａｃｇａｇｃｃ ｇｃｃｇｃｇｇａｃｔ ｔｃｇｃｔｔｔｇｇｇ ｃｃａ
ｔｇａｃｃａｇ ａｔａｔａａｔｔｇｇ ｔｇａｔｔａｃａａｃ ６０ ｔｔｔｃｃｔｃｔａｔ ａａａｔｔａａｃｔｃ ｔｔｇａｃａｃｔｃｃ ｔｔｇ
ｇｇａｔｔｔｇ ａａｇａａａａａａ ａｔｇ ｃｃｔ ｇｇｔ １１８
Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｇｌｙ
１ ｇｔｃ ａｔａ ｃｃｔ ａｇｔ ｇａａ ａｇｔ ａａｔ ｇｇａ ｃｔｔ
ｔｃａ ａｇａ ｇｇｔ ａｇｃ ｃｃｔ ｔｃａ ａａｇ １６６ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ ５ １０
１５ ａａａ ａａｃ ａｇａ ｃｔｔ ｔｃｃ ｔｔａ ａａｇ ｔｔｔ ｔｔｔ
ｃａｇ ａａａ ａａｇ ｇａａ ａｃｔ ａａｇ ａｇａ ２１４ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ２０ ２５
３０ ３５ ｇｃｔ ｔｔｇ ｇａｔ ｔｔｃ ａｃａ ｇａｔ ｔｃｔ ｃａａ ｇａａ
ａａｔ ｇａａ ｇａａ ａａａ ｇｃｔ ｔｃｔ ｇａａ ２６２ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ ４０
４５ ５０ ｔａｔ ａｇａ ｇｃａ ｔｃｔ ｇａａ ａｔｔ ｇａｔ ｃａａ ｇｔｔ
ｇｔｔ ｃｃｔ ｇｃａ ｇｃａ ｃａｇ ｔｃｔ ｔｃａ ３１０ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｖａｌ
Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｓｅｒ ５５ ６０
６５ ｃｃｔ ａｔａ ａａｃ ｔｇｔ ｇａｇ ａａｇ ａｇａ ｇａａ ａａｃ
ｔｔｇ ｔｔａ ｃｃａ ｔｔｔ ｇｔｇ ｇｇａ ｃｔｇ ３５８ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｌｅｕ ７０ ７５
８０ ａａｔ ａａｔ ｃｔｃ ｇｇｃ ａａｔ ａｃｔ ｔｇｃ ｔａｔ ｃｔｔ
ａａｔ ａｇｔ ａｔａ ｃｔｔ ｃａｇ ｇｔａ ｔｔａ ４０６ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ ８５ ９０
９５ ｔａｔ ｔｔｔ ｔｇｔ ｃｃｃ ｇｇｔ ｔｔｔ ａａａ ｔｃｔ ｇｇａ
ｇｔａ ａａｇ ｃａｃ ｔｔａ ｔｔｔ ａａｔ ａｔｔ ４５４ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｉｌｅ １００ １０５
１１０ １１５ ａｔｔ ｔｃａ ａｇｇ ａａｇ ａａａ ｇａａ ｇｃｔ ｃｔａ ａａｇ
ｇａｔ ｇａａ ｇｃｃ ａａｔ ｃａａ ａａａ ｇａｃ ５０２ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ
Ａｓｐ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ａｓｐ １２０
１２５ １３０ ａａｇ ｇｇａ ａａｔ ｔｇｃ ａａａ ｇａａ ｇａｔ ｔｃｔ ｔｔｇ
ｇｃａ ａｇｔ ｔａｔ ｇａａ ｔｔｇ ａｔａ ｔｇｃ ５５０ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｃｙｓ １３５ １４０
１４５ ａｇｔ ｔｔａ ｃａｇ ｔｃｃ ｔｔａ ａｔｃ ａｔｔ ｔｃｇ ｇｔｔ
ｇａａ ｃａｇ ｃｔｃ ｃａｇ ｇｃｔ ａｇｔ ｔｔｔ ５９８ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｖａｌ
Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｈｅ １５０ １５５
１６０ ｃｔｃ ｔｔａ ａａｔ ｃｃａ ｇａｇ ａａａ ｔａｔ ａｃｔ ｇａｔ
ｇａａ ｃｔｔ ｇｃｃ ａｃｔ ｃａｇ ｃｃａ ａｇｇ ６４６ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ
Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ａｒｇ １６５ １７０
１７５ ｃｇａ ｃｔｇ ｃｔｔ ａａｃ ａｃａ ｃｔｇ ａｇｇ ｇａａ ｃｔｃ
ａａｃ ｃｃｔ ａｔｇ ｔａｔ ｇａａ ｇｇａ ｔａｔ ６９４ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ １８０ １８５
１９０ １９５ ｃｔａ ｃａｇ ｃａｔ ｇａｔ ｇｃａ ｃａｇ ｇａａ ｇｔａ ｔｔａ
ｃａａ ｔｇｔ ａｔｔ ｔｔｇ ｇｇａ ａａｃ ａｔｔ ７４２ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｉｌｅ ２００
２０５ ２１０ ｃａａ ｇａａ ａｃａ ｔｇｃ ｃａａ ｃｔｃ ｃｔａ ａａａ ａａａ
ｇａａ ｇａａ ｇｔａ ａａａ ａａｔ ｇｔｇ ｇｃａ ７９０ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｖａｌ Ａｌａ ２１５ ２２０
２２５ ｇａａ ｔｔａ ｃｃｔ ａｃｔ ａａｇ ｇｔａ ｇａａ ｇａａ ａｔａ
ｃｃｔ ｃａｔ ｃｃｇ ａａａ ｇａｇ ｇａａ ａｔｇ ８３８ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ
Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｍｅｔ ２３０ ２３５
２４０ ａａｔ ｇｇｔ ａｔｔ ａａｃ ａｇｃ ａｔａ ｇａｇ ａｔｇ ｇａｃ
ａｇｔ ａｔｇ ａｇｇ ｃａｔ ｔｃｔ ｇａａ ｇａｃ ８８６ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ａｓｐ
Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｐ ２４５ ２５０
２５５ ｔｔｔ ａａａ ｇａｇ ａａａ ｃｔｃ ｃｃａ ａａａ ｇｇａ ａａｔ
ｇｇｇ ａａａ ａｇａ ａａａ ａｇｔ ｇａｃ ａｃｔ ９３４ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｓｎ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ ２６０ ２６５
２７０ ２７５ ｇａａ ｔｔｔ ｇｇｔ ａａｃ ａｔｇ ａａｇ ａａａ ａａａ ｇｔｔ
ａａａ ｔｔａ ｔｃｃ ａａｇ ｇａａ ｃａｃ ｃａｇ ９８２ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ｇｌｎ ２８０
２８５ ２９０ ｔｃａ ｔｔｇ ｇａａ ｇａｇ ａａｃ ｃａｇ ａｇａ ｃａａ ａｃｔ
ａｇａ ｔｃａ ａａａ ａｇａ ａａａ ｇｃｔ ａｃａ １０３０ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｔｈｒ
Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ ２９５ ３００
３０５ ａｇｔ ｇａｔ ａｃａ ｔｔａ ｇａｇ ａｇｔ ｃｃｔ ｃｃｔ ａａａ
ａｔａ ａｔｔ ｃｃｃ ａａｇ ｔａｔ ａｔｔ ｔｃｔ １０７８ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ ３１０ ３１５
３２０ ｇａａ ａａｔ ｇａｇ ａｇｔ ｃｃａ ａｇａ ｃｃｃ ｔｃａ ｃａａ
ａａｇ ａａａ ｔｃａ ａｇａ ｇｔｔ ａａａ ａｔａ １１２６ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｎ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｉｌｅ ３２５ ３３０
３３５ ａａｔ ｔｇｇ ｔｔａ ａａｇ ｔｃｔ ｇｃａ ａｃｔ ａａｇ ｃａａ
ｃｃｃ ａｇｃ ａｔｔ ｃｔｔ ｔｃｔ ａａａ ｔｔｔ １１７４ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ ３４０ ３４５
３５０ ３５５ ｔｇｔ ａｇｔ ｃｔｇ ｇｇａ ａａａ ａｔａ ａｃａ ａｃａ ａａｃ
ｃａａ ｇｇａ ｇｔｃ ａａａ ｇｇａ ｃａａ ｔｃｔ １２２２ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｓｎ
Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｓｅｒ ３６０
３６５ ３７０ ａａａ ｇａａ ａａｔ ｇａａ ｔｇｔ ｇａｔ ｃｃｔ ｇａａ ｇａｇ
ｇａｃ ｔｔｇ ｇｇｇ ａａｇ ｔｇｔ ｇａａ ａｇｔ １２７０ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ ３７５ ３８０
３８５ ｇａｔ ａａｃ ａｃａ ａｃｔ ａａｔ ｇｇｔ ｔｇｔ ｇｇａ ｃｔｔ
ｇａａ ｔｃｔ ｃｃａ ｇｇａ ａａｔ ａｃｔ ｇｔｔ １３１８ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｖａｌ ３９０ ３９５
４００ ａｃａ ｃｃｔ ｇｔａ ａａｔ ｇｔｔ ａａｔ ｇａａ ｇｔｔ ａａａ
ｃｃｃ ａｔａ ａａｃ ａａａ ｇｇｔ ｇａａ ｇａａ １３６６ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ
Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ４０５ ４１０
４１５ ｃａａ ａｔｔ ｇｇｔ ｔｔｔ ｇａｇ ｃｔａ ｇｔｇ ｇａｇ ａａａ
ｔｔａ ｔｔｔ ｃａａ ｇｇｔ ｃａｇ ｃｔｇ ｇｔａ １４１４ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｙｓ
Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｖａｌ ４２０ ４２５
４３０ ４３５ ｔｔａ ａｇｇ ａｃｇ ｃｇｔ ｔｇｃ ｔｔｇ ｇａａ ｔｇｔ ｇａａ
ａｇｔ ｔｔａ ａｃａ ｇａａ ａｇａ ａｇａ ｇａａ １４６２ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｇｌｕ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ ４４０
４４５ ４５０ ｇａｔ ｔｔｔ ｃａａ ｇａｃ ａｔｃ ａｇｔ ｇｔｇ ｃｃａ ｇｔａ
ｃａａ ｇａａ ｇａｔ ｇａｇ ｃｔｔ ｔｃｃ ａａａ １５１０ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ
Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ ４５５ ４６０
４６５ ｇｔａ ｇａｇ ｇａｇ ａｇｔ ｔｃｔ ｇａａ ａｔｔ ｔｃｔ ｃｃａ
ｇａｇ ｃｃａ ａａａ ａｃａ ｇａａ ａｔｇ ａａｇ １５５８ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｙｓ ４７０ ４７５
４８０ ａｃｃ ｃｔｇ ａｇａ ｔｇｇ ｇｃａ ａｔｔ ｔｃａ ｃａａ ｔｔｔ
ｇｃｔ ｔｃａ ｇｔａ ｇａａ ａｇｇ ａｔｔ ｇｔａ １６０６ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｐｈｅ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｖａｌ ４８５ ４９０
４９５ ｇｇａ ｇａａ ｇａｔ ａａａ ｔａｔ ｔｔｃ ｔｇｔ ｇａａ ａａｃ
ｔｇｃ ｃａｔ ｃａｔ ｔａｔ ａｃｔ ｇａａ ｇｃｔ １６５４ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ａｌａ ５００ ５０５
５１０ ５１５ ｇａａ ｃｇａ ａｇｔ ｃｔｔ ｔｔｇ ｔｔｔ ｇａｃ ａａａ ａｔｇ
ｃｃｔ ｇａａ ｇｔｔ ａｔａ ａｃｔ ａｔｔ ｃａｔ １７０２ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｍｅｔ
Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ ５２０
５２５ ５３０ ｔｔｇ ａａｇ ｔｇｃ ｔｔｔ ｇｃｔ ｇｃｔ ａｇｔ ｇｇｔ ｔｔｇ
ｇａｇ ｔｔｔ ｇａｔ ｔｇｔ ｔａｔ ｇｇｔ ｇｇｔ １７５０ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｐｈｅ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ５３５ ５４０
５４５ ｇｇａ ｃｔｔ ｔｃｃ ａａｇ ａｔｃ ａａｃ ａｃｔ ｃｃｔ ｔｔａ
ｔｔｇ ａｃａ ｃｃｔ ｃｔｔ ａａａ ｔｔｇ ｔｃａ １７９８ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ ５５０ ５５５
５６０ ｃｔａ ｇａａ ｇａａ ｔｇｇ ａｇｃ ａｃａ ａａｇ ｃｃａ ａｃｔ
ａａｃ ｇａｃ ａｇｃ ｔａｔ ｇｇａ ｔｔａ ｔｔｔ １８４６ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｔｈｒ
Ａｓｎ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ ５６５ ５７０
５７５ ｇｃｇ ｇｔｔ ｇｔｇ ａｔｇ ｃａｔ ａｇｔ ｇｇｃ ａｔｔ ａｃａ
ａｔｔ ａｇｔ ａｇｔ ｇｇｇ ｃａｔ ｔａｃ ａｃｔ １８９４ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｔｈｒ
Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ ５８０ ５８５
５９０ ５９５ ｇｃｔ ｔｃｔ ｇｔｔ ａａａ ｇｔｃ ａｃｔ ｇａｃ ｃｔｔ ａａｃ
ａｇｔ ｔｔａ ｇａａ ｃｔａ ｇａｔ ａａａ ｇｇａ １９４２ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ ６００
６０５ ６１０ ａａｔ ｔｔｔ ｇｔｇ ｇｔｔ ｇａｃ ｃａａ ａｔｇ ｔｇｔ ｇａａ
ａｔａ ｇｇｔ ａａｇ ｃｃａ ｇａａ ｃｃａ ｔｔｇ １９９０ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｇｌｕ
Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ ６１５ ６２０
６２５ ａａｔ ｇａｇ ｇａｇ ｇａａ ｇｃａ ａｇｇ ｇｇｔ ｇｔｇ ｇｔｔ
ｇａｇ ａａｔ ｔａｔ ａａｔ ｇａｔ ｇａａ ｇａａ ２０３８ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ
Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ６３０ ６３５
６４０ ｇｔｇ ｔｃａ ａｔｔ ａｇａ ｇｔｔ ｇｇｔ ｇｇａ ａａｔ ａｃａ
ｃａｇ ｃｃａ ａｇｔ ａａａ ｇｔｔ ｔｔｇ ａａｃ ２０８６ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｈｒ
Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ ６４５ ６５０
６５５ ａａａ ａａａ ａａｔ ｇｔａ ｇａａ ｇｃｔ ａｔｔ ｇｇａ ｃｔｔ
ｃｔｔ ｇｇａ ｇｇａ ｃａａ ａａｇ ａｇｃ ａａａ ２１３４ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｌｙｓ ６６０ ６６５
６７０ ６７５ ｇｃａ ｇａｔ ｔａｔ ｇａｇ ｃｔａ ｔａｃ ａａｃ ａａａ ｇｃｃ
ｔｃｔ ａａｔ ｃｃｔ ｇａｔ ａａｇ ｇｔｔ ｇｃｔ ２１８２ Ａｌａ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｌａ
Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ ６８０
６８５ ６９０ ａｇｔ ａｃａ ｇｃｇ ｔｔｔ ｇｃｔ ｇａａ ａａｔ ａｇａ ａａｔ
ｔｃｔ ｇａｇ ａｃｔ ａｇｔ ｇａｔ ａｃｔ ａｃｔ ２２３０ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ａｒｇ Ａｓｎ
Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ６９５ ７００
７０５ ｇｇｇ ａｃｃ ｃａｔ ｇａａ ｔｃｔ ｇａｔ ａｇａ ａａｃ ａａｇ
ｇａａ ｔｃｃ ａｇｔ ｇａｃ ｃａａ ａｃａ ｇｇｃ ２２７８ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｙｓ
Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ７１０ ７１５
７２０ ａｔｔ ａａｔ ａｔｔ ａｇｔ ｇｇａ ｔｔｔ ｇａｇ ａａｃ ａａａ
ａｔｔ ｔｃａ ｔａｃ ｇｔａ ｇｔｇ ｃａａ ａｇｃ ２３２６ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｙｓ
Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｓｅｒ ７２５ ７３０
７３５ ｔｔａ ａａｇ ｇａｇ ｔａｔ ｇａｇ ｇｇｇ ａａｇ ｔｇｇ ｔｔｇ
ｃｔｔ ｔｔｔ ｇａｔ ｇａｔ ｔｃｔ ｇａａ ｇｔｃ ２３７４ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ ７４０ ７４５
７５０ ７５５ ａａａ ｇｔｔ ａｃｔ ｇａａ ｇａｇ ａａｇ ｇａｃ ｔｔｔ ｃｔｇ
ａａｔ ｔｃｔ ｃｔｔ ｔｃｃ ｃｃｔ ｔｃｔ ａｃａ ２４２２ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ７６０
７６５ ７７０ ｔｃｔ ｃｃｔ ａｃｔ ｔｃｔ ａｃｔ ｃｃｔ ｔａｃ ｔｔｇ ｃｔａ
ｔｔｔ ｔａｔ ａａｇ ａａａ ｔｔａ ２４６４ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ７７５ ７８０
７８５ ｔａｇａｇｔｇａｇｔ ｇｔａｔｔｔｔｃｃｔ ｔｇｔｇｔａｔａｔａ ｔｔａ
ａａｃａｃａｃ ｃｃａｔａｃａａａｃ ａｔｔｇｇｔａａａｇ ２５２４ ｔｔｇａｔｔａｃａｔ ｃａａａｇａａｔｃｔ ｔｔａｇｃｔｔａｔｃ ｔｔｔ
ｔｇａａｇｃｔ ａｃｔｇｇａｔａｔｔ ａｔｔｇｇｔｃｔｃｔ ２５８４ ｃｔａｇｇｔｔｔｔｔ ａｔａｔａａａｔａｇ ｔｇａａａｔｔｔｇａ ａｔｔ
ａｃｔｇａａａ ａｃｃａｔｇｔｔａａ ｔｔｔｔｔａｇａａｃ ２６４４ ｔｃａｔｔｔｔｃｃｔ ｃａｇｔａｇａｇａｃ ｔａｇｔｇａｔｇｃａ ｔｔａ
ｇｃｔｔｃｔｇ ｇｇａａｃａａａｃｔ ｔｇｔａｔｃｇｇｔｔ ２７０４ ｃｔｔａａｔｔａａａ ｔｔａｔｃｃａａａａ ｃｇｇａｇｇｃａｔｔ ｔａａ
ａｃａｃｔｔｇ ｇａｔｔｔａｃａｃｃ ａｇｔｃｔｔｔｔｇｔ ２７６４ ｇｔｔｔｇｃｔｔｔｔ ｔａａａａｔａａａｇ ｔｇｃｔｃｇｔａｔｔ ｔｇｔ
ａｔｔｃｔｃｃ ａｔａｔｔｔｔｇｇａ ｇｔａａｔｔａｔｃｔ ２８２４ ａｃａｔｇａｔｇｔｔ ｔａｔａｇｔｔｃｃｔ ｇｔｇｇｔｔｔｔｔｃ ａｃｃ
ｃａａｇａａｇ ｃａｇａａｔｃｔｃａ ｔｔｃａｇｔａｃａｔ ２８８４ ｔｔａｇｔｔｔｔａｔ ａａｇａｇｔｃａｔｇ ａａｇｃｔａａａｔｃ ｃｔｔ
ｇｇｇｃｔａｔ ｇｔｃａｇａｇｇｃａ ｃａａａｇｔｃｔａｇ ２９４４ ａａｔｇｔｇｔｇｔａ ｔｔｃａｃａａｔｇｇ ｔｇｔａｔｇｔａｃａ ｔｔｔ
ｔｇｔｇｃｃｔ ｔｇａｔｔｃａｃｔｔ ａｇａａｇｔｇｔｃｔ ３００４ ｃａｇａａａａｃｃｔ ｇｇａｃａｇｔｔｃｇ ｃｔｔｃｔａｃａｃａ ａｇａ
ａｔｔｔｔａｔ ａｔｇｔａｔｔｔａｔ ｇａａｇａｔｇａｔｔ ３０６４ ｃｔｇｔａｃｃｃｔａ ｇｔａｔａｔｃｔｔｔ ｔｔｇｇｇｃａｔｇｇ ａｃｔ
ａａｔｔｔｇｔ ａｔｃｔｇｔｔｔａａ ｃｔｃａｔａｔｔｃｔ ３１２４ ｇｃａｃｇａｔｃｔｇ ｔａｔａｔａｇｔａｃ ａｔｃａａａｃｔｔａ ｇａｇ
ｇｔｇｔｇａｃ ｃｔｔａａａｔｔｔａ ａｃｔｔｔｔｔｔｔａ ３１８４ ａａａａｃｔｇｇｇａ ｇｇｔｃａａｔａａａ ａｔｔｔａａａｃｔｇ ｃｔｔ
ａａｃｔｔ ３２２２ ＜２１０＞ ４
＜２１１＞ ３３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ＵＳＰ
１ ＜４００＞ ４
ａａｇｇａｔｃｃａｔ ａｔｇｃｃｔｇｇｔｇ ｔｃａｔａｃｃｔａｇ ｔｇａ
３３ ＜２１０＞ ５
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ＵＳＰ
１ ＜４００＞ ５
ｃｃｔｃａｇｔｇｔｇ ｔｔａａｇｃａｇｔｃ ｇｃｃｔ
２４ ＜２１０＞ ６
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ＵＳＰ
１ ＜４００＞ ６
ａｔｇａａｇｃｔａａ ａｔｃｃｔｔｇｇｇｃ ｔａｔｇｔ
２５ ＜２１０＞ ７
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ＵＳＰ
１ ＜４００＞ ７
ｔａａｇｇｔｃａｃａ ｃｃｔｃｔａａｇｔｔ ｔｇａｔｇ
２５

【図面の簡単な説明】

【図１】ＵＳＰ１とＵｂ−β-galとを同時にトランスフ
ェクトさせた大腸菌において、ＩＰＴＧを加えて０、
１、２及び３時間後のUb-M-β-gal及びUb-R-β-galのレ
ベルを調べた結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｎ 9/48 Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA14 CA04 DA02 DA06 DA12 EA04 GA11 GA18 GA19 HA01 HA14 HA17 4B050 CC03 DD11 LL01 LL03 4H045 AA11 AA20 AA30 CA40 CA46 DA75 DA76 EA20 EA50 FA72 GA22 GA26

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号１で示されるアミノ酸配列からな
   る蛋白質をコードする塩基配列を含むユビキチン特異的
   プロテアーゼ遺伝子。
2. 【請求項２】塩基配列が配列番号２で示されるものであ
   る請求項１に記載のユビキチン特異的プロテアーゼ遺伝
   子。
3. 【請求項３】以下の（ａ）及び（ｂ）のいずれかのポリ
   ヌクレオチドからなるユビキチン特異的プロテアーゼ遺
   伝子： （ａ）配列番号３で示される塩基配列の全部又は一部を
   含むポリヌクレオチド （ｂ）配列番号３で示される塩基配列からなるＤＮＡと
   ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌ
   クレオチド。
4. 【請求項４】ヒト遺伝子である請求項１〜３のいずれか
   に記載の遺伝子。
5. 【請求項５】ユビキチン特異的プロテアーゼ遺伝子検出
   用の特異プローブ又は特異プライマーとして使用される
   ＤＮＡ断片である請求項１に記載の遺伝子。
6. 【請求項６】請求項１に記載の遺伝子によってコードさ
   れるユビキチン特異的プロテアーゼ。
7. 【請求項７】請求項６に記載のユビキチン特異的プロテ
   アーゼに結合性を有する抗体。