JP2000074919A - 免疫学的測定試薬及び免疫学的測定試薬の製造方法 - Google Patents
免疫学的測定試薬及び免疫学的測定試薬の製造方法Info
- Publication number
- JP2000074919A JP2000074919A JP10247127A JP24712798A JP2000074919A JP 2000074919 A JP2000074919 A JP 2000074919A JP 10247127 A JP10247127 A JP 10247127A JP 24712798 A JP24712798 A JP 24712798A JP 2000074919 A JP2000074919 A JP 2000074919A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- substance
- measured
- antigens
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 検体試料中の微量成分の測定に際して、抗原
抗体反応の進行を安定化させ、各種凝集促進剤を添加し
なくても、より広い範囲で測定が可能な、不溶性担体を
用いた免疫学的測定試薬を提供する。 【解決手段】 被測定物質である抗原（または抗体）に
対する抗体（または抗原）、及び、該被測定物質である
抗原（または抗体）に対して特異性を有しない抗体（ま
たは抗原）の両方が担持された不溶性担体を含有するこ
とを特徴とする免疫学的測定試薬及びその製造方法。
抗体反応の進行を安定化させ、各種凝集促進剤を添加し
なくても、より広い範囲で測定が可能な、不溶性担体を
用いた免疫学的測定試薬を提供する。 【解決手段】 被測定物質である抗原（または抗体）に
対する抗体（または抗原）、及び、該被測定物質である
抗原（または抗体）に対して特異性を有しない抗体（ま
たは抗原）の両方が担持された不溶性担体を含有するこ
とを特徴とする免疫学的測定試薬及びその製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、不溶性担体を用い
た免疫学的測定試薬及びその製造方法に関する。
た免疫学的測定試薬及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、血液や尿などの体液中の蛋白質や
脂質等、例えば、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ−反応性蛋白
質、リウマチ因子、β2 マイクログロブリン等、免疫学
的に抗原の属する物質の測定にラテックス担体の様な不
溶性担体に、上記抗原に反応する抗体を担持させ、抗原
抗体反応による該担体の凝集の程度を検出することによ
り、該抗原を測定する試薬が、一般に使用されている。
脂質等、例えば、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ−反応性蛋白
質、リウマチ因子、β2 マイクログロブリン等、免疫学
的に抗原の属する物質の測定にラテックス担体の様な不
溶性担体に、上記抗原に反応する抗体を担持させ、抗原
抗体反応による該担体の凝集の程度を検出することによ
り、該抗原を測定する試薬が、一般に使用されている。
【０００３】従来、このような担体の凝集を検出して、
被測定物質を測定する試薬においては、通常、反応液中
の不溶性担体の凝集による吸光度の増加を光学密度（以
下「Ｏ．Ｄ．」という）で測定し、Ｏ．Ｄ．と被測定物
質との関係を表わす検量線を予め作成し、この検量線を
用いて未知量の被測定物質を定量する。
被測定物質を測定する試薬においては、通常、反応液中
の不溶性担体の凝集による吸光度の増加を光学密度（以
下「Ｏ．Ｄ．」という）で測定し、Ｏ．Ｄ．と被測定物
質との関係を表わす検量線を予め作成し、この検量線を
用いて未知量の被測定物質を定量する。
【０００４】このＯ．Ｄ．による測定において、短時間
で広範囲な測定を可能にするために、ポリエチレングリ
コール、ポリビニルピロリドン等の合成高分子物質、デ
キストラン（特開昭５９−２２０４６）、デキストラン
硫酸（特開平２−６１５６１）等の多糖類、マルトトリ
オース重合体（特開平６−１６７４９３）といった凝集
促進剤を添加する試みがなされている。これらの凝集促
進剤により、Ｏ．Ｄ．の増加率は上昇するが、抗原抗体
凝集塊が反応溶液中で、不均一に成長すると、ときに非
特異的な凝集を起こし、誤った測定値を与えることがあ
るという問題があった。また、吸光度の増加が、被測定
物質の濃度に対して直線的に伸びず、頭打ちの状態にな
ることがあるといった問題もあった。
で広範囲な測定を可能にするために、ポリエチレングリ
コール、ポリビニルピロリドン等の合成高分子物質、デ
キストラン（特開昭５９−２２０４６）、デキストラン
硫酸（特開平２−６１５６１）等の多糖類、マルトトリ
オース重合体（特開平６−１６７４９３）といった凝集
促進剤を添加する試みがなされている。これらの凝集促
進剤により、Ｏ．Ｄ．の増加率は上昇するが、抗原抗体
凝集塊が反応溶液中で、不均一に成長すると、ときに非
特異的な凝集を起こし、誤った測定値を与えることがあ
るという問題があった。また、吸光度の増加が、被測定
物質の濃度に対して直線的に伸びず、頭打ちの状態にな
ることがあるといった問題もあった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
に鑑みてなされたものであり、その目的は、検体試料中
の微量成分の測定に際して、抗原抗体反応の進行を安定
化させ、各種凝集促進剤を添加しなくても、より広い範
囲で測定が可能な、不溶性担体を用いた免疫学的測定試
薬を提供することである。
に鑑みてなされたものであり、その目的は、検体試料中
の微量成分の測定に際して、抗原抗体反応の進行を安定
化させ、各種凝集促進剤を添加しなくても、より広い範
囲で測定が可能な、不溶性担体を用いた免疫学的測定試
薬を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】請求項１記載の発明は、
被測定物質である抗原（または抗体）に対する抗体（ま
たは抗原）、及び、該被測定物質である抗原（または抗
体）に対して特異性を有しない抗体（または抗原）の両
方が担持された不溶性担体を含有することを特徴とする
免疫学的測定試薬である。請求項２記載の発明は、被測
定物質である抗原（または抗体）に対する抗体（または
抗原）、及び、該被測定物質である抗原（または抗体）
に対して特異性を有しない抗体（または抗原）を、予め
混合した後、不溶性担体に担持して製造することを特徴
とする請求項１記載の免疫学的測定試薬の製造方法であ
る。
被測定物質である抗原（または抗体）に対する抗体（ま
たは抗原）、及び、該被測定物質である抗原（または抗
体）に対して特異性を有しない抗体（または抗原）の両
方が担持された不溶性担体を含有することを特徴とする
免疫学的測定試薬である。請求項２記載の発明は、被測
定物質である抗原（または抗体）に対する抗体（または
抗原）、及び、該被測定物質である抗原（または抗体）
に対して特異性を有しない抗体（または抗原）を、予め
混合した後、不溶性担体に担持して製造することを特徴
とする請求項１記載の免疫学的測定試薬の製造方法であ
る。
【０００７】なお、本明細書において、一文章中に、抗
原（または抗体）という表現と、抗体（または抗原）と
いう表現がある場合、括弧内は括弧内同士が対応し、括
弧外は括弧外同士が対応しているものとする。
原（または抗体）という表現と、抗体（または抗原）と
いう表現がある場合、括弧内は括弧内同士が対応し、括
弧外は括弧外同士が対応しているものとする。
【０００８】上記不溶性担体としては、従来、抗体（ま
たは抗原）が担持された不溶性担体の凝集により抗原
（または抗体）測定を行うために使用される物質は、い
ずれも使用可能であり、例えば、無機物質の粉末、有機
高分子物質の粉末、微生物、血球、細胞膜片等が挙げら
れる。上記無機物質としては、例えば、金、チタン、
鉄、ニッケル等の金属；アルミナ、チタニア等の金属酸
化物；シリカ等が挙げられる。上記有機高分子物質とし
ては、特に限定されないが、例えば、スチレン重合体、
スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合体、メタクリル
酸重合体、アクリル酸重合体、アクリロニトリル−ブタ
ジエン−スチレン共重合体、塩化ビニル−アクリル酸エ
ステル共重合体、酢酸ビニル−アクリル酸エステル共重
合体等が挙げられる。特に、これらの重合体粉末を水に
均一に懸濁させたラテックス粒子を用いるのが好まし
い。該ラテックス粒子の平均粒径は、０．０５〜１．０
μｍが好ましく、より好ましくは、０．０５〜０．５μ
ｍである。
たは抗原）が担持された不溶性担体の凝集により抗原
（または抗体）測定を行うために使用される物質は、い
ずれも使用可能であり、例えば、無機物質の粉末、有機
高分子物質の粉末、微生物、血球、細胞膜片等が挙げら
れる。上記無機物質としては、例えば、金、チタン、
鉄、ニッケル等の金属；アルミナ、チタニア等の金属酸
化物；シリカ等が挙げられる。上記有機高分子物質とし
ては、特に限定されないが、例えば、スチレン重合体、
スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合体、メタクリル
酸重合体、アクリル酸重合体、アクリロニトリル−ブタ
ジエン−スチレン共重合体、塩化ビニル−アクリル酸エ
ステル共重合体、酢酸ビニル−アクリル酸エステル共重
合体等が挙げられる。特に、これらの重合体粉末を水に
均一に懸濁させたラテックス粒子を用いるのが好まし
い。該ラテックス粒子の平均粒径は、０．０５〜１．０
μｍが好ましく、より好ましくは、０．０５〜０．５μ
ｍである。
【０００９】上記被測定物質である抗原（または抗体）
としては、特に限定されず、一般に抗原抗体反応を利用
して測定し得る生理活性物質はいずれも測定可能であ
る。被測定物質としては、タンパク、脂質等があり、よ
り詳しくは、抗原としては、例えば、各種抗原、レセプ
ター、酵素等が挙げられる。具体的には、β2 マイクロ
グロブリン、Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）、ヒトフィブ
リノーゲン、フェリチン、リウマチ因子、α−フェトプ
ロティン（ＡＦＰ）、ＨＢｓ抗原等が例示される。抗体
としては、例えば、各種の毒素や病原菌などに対する抗
体が挙げられ、具体的には、抗ストレプトリジンＯ抗
体、梅毒トレポネーマ抗体、梅毒脂質抗原に対する抗
体、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗体、ＨＢｅ抗体等が例示され
る。
としては、特に限定されず、一般に抗原抗体反応を利用
して測定し得る生理活性物質はいずれも測定可能であ
る。被測定物質としては、タンパク、脂質等があり、よ
り詳しくは、抗原としては、例えば、各種抗原、レセプ
ター、酵素等が挙げられる。具体的には、β2 マイクロ
グロブリン、Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）、ヒトフィブ
リノーゲン、フェリチン、リウマチ因子、α−フェトプ
ロティン（ＡＦＰ）、ＨＢｓ抗原等が例示される。抗体
としては、例えば、各種の毒素や病原菌などに対する抗
体が挙げられ、具体的には、抗ストレプトリジンＯ抗
体、梅毒トレポネーマ抗体、梅毒脂質抗原に対する抗
体、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗体、ＨＢｅ抗体等が例示され
る。
【００１０】上記被測定物質である抗原に対する抗体と
は、上記被測定物質である抗原と抗原抗体反応を起こす
性質を有する抗体であり、例えば、ポリクローナル抗体
が挙げられる。ポリクローナル抗体は、同一ロットで多
量に供給可能な山羊等の大型動物産生の抗体が好まし
い。上記抗体は、通常、硫安沈殿、ゲルクロマトグラフ
ィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー
クロマトグラフィー等の公知の抗体精製手段を適宜組み
合わせて精製される。上記抗体の種類としては、例え
ば、ＩｇＧやＩｇＭ等の免疫グロブリンが挙げられ、必
要に応じて、Ｆ（ａｂ’）2 Ｆａｂとなされてもよい。
は、上記被測定物質である抗原と抗原抗体反応を起こす
性質を有する抗体であり、例えば、ポリクローナル抗体
が挙げられる。ポリクローナル抗体は、同一ロットで多
量に供給可能な山羊等の大型動物産生の抗体が好まし
い。上記抗体は、通常、硫安沈殿、ゲルクロマトグラフ
ィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー
クロマトグラフィー等の公知の抗体精製手段を適宜組み
合わせて精製される。上記抗体の種類としては、例え
ば、ＩｇＧやＩｇＭ等の免疫グロブリンが挙げられ、必
要に応じて、Ｆ（ａｂ’）2 Ｆａｂとなされてもよい。
【００１１】上記被測定物質である抗原に対して特異性
を有しない抗体とは、上記被測定物質である抗原と抗原
抗体反応を起こす性質を有しない抗体をいう。なお、上
記被測定物質である抗原に対して特異性を有しない抗体
についても、上記被測定物質である抗原に対する抗体と
同様にして精製される。
を有しない抗体とは、上記被測定物質である抗原と抗原
抗体反応を起こす性質を有しない抗体をいう。なお、上
記被測定物質である抗原に対して特異性を有しない抗体
についても、上記被測定物質である抗原に対する抗体と
同様にして精製される。
【００１２】上記被測定物質である抗原（または抗体）
に対する抗体（または抗原）、及び、上記被測定物質で
ある抗原（または抗体）に対して特異性を有しない抗体
（または抗原）を、予め、適宜組み合わせ、混合抗体
（または抗原）溶液を調製する。この際、被測定物質で
ある抗原（または抗体）に対する抗体（または抗原）の
蛋白量は感作しようとする担体の表面積や表面電荷、結
合力によって左右されるが、いずれの場合についても、
被測定物質に対して十分反応しうる量が必要である。被
測定物質に対して十分反応しうる量については、実際に
試薬化を行い、被測定物質と反応させることで、必要量
が求められる。上記被測定物質である抗原（または抗
体）に対して特異性を有さない抗体（抗原）の蛋白量
は、感作しようとする担体によって変化するが、担体の
表面を完全に覆える量が上限となる。
に対する抗体（または抗原）、及び、上記被測定物質で
ある抗原（または抗体）に対して特異性を有しない抗体
（または抗原）を、予め、適宜組み合わせ、混合抗体
（または抗原）溶液を調製する。この際、被測定物質で
ある抗原（または抗体）に対する抗体（または抗原）の
蛋白量は感作しようとする担体の表面積や表面電荷、結
合力によって左右されるが、いずれの場合についても、
被測定物質に対して十分反応しうる量が必要である。被
測定物質に対して十分反応しうる量については、実際に
試薬化を行い、被測定物質と反応させることで、必要量
が求められる。上記被測定物質である抗原（または抗
体）に対して特異性を有さない抗体（抗原）の蛋白量
は、感作しようとする担体によって変化するが、担体の
表面を完全に覆える量が上限となる。
【００１３】上記混合抗体（または抗原）の不溶性担体
への担持の方法は、公知の物理吸着法あるいは化学的結
合法を用いることができる。抗体（または抗原）の担持
工程終了後、不溶性担体表面の抗体（または抗原）付着
可能部位がまだ残っている場合、該担体使用時に非特異
吸着反応が起こらないように、ｐＨが５〜１０、より好
ましくは、６．５〜８．５である緩衝液中において、４
℃〜４０℃、より好ましくは１５℃〜２５℃で、１０分
〜２時間、より好ましくは、４０分〜１時間、０．５〜
３重量％、より好ましくは、１〜２重量％の牛血清アル
ブミン等の蛋白質で不溶性担体上の活性点を飽和させる
操作（ブロッキングという）を行うのがよい。上記緩衝
液としては、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グ
リシン緩衝液等が挙げられる。その後、不溶性担体の表
面に吸着していない溶液中の抗体（または抗原）と溶液
とを分離する操作（Ｂ／Ｆ（Ｂｉｎｄｉｎｇ／Ｆｒｅ
ｅ）分離という）を行い、該不溶性担体を、ｐＨ５〜１
０の緩衝液（好ましくは、ブロッキングで用いたのと同
じ成分のもの）で再懸濁させるのがよい。この緩衝液に
は、試薬の安定性を向上させるために、例えば、アジ化
ナトリウム等の添加剤を適宜加えてもよい。
への担持の方法は、公知の物理吸着法あるいは化学的結
合法を用いることができる。抗体（または抗原）の担持
工程終了後、不溶性担体表面の抗体（または抗原）付着
可能部位がまだ残っている場合、該担体使用時に非特異
吸着反応が起こらないように、ｐＨが５〜１０、より好
ましくは、６．５〜８．５である緩衝液中において、４
℃〜４０℃、より好ましくは１５℃〜２５℃で、１０分
〜２時間、より好ましくは、４０分〜１時間、０．５〜
３重量％、より好ましくは、１〜２重量％の牛血清アル
ブミン等の蛋白質で不溶性担体上の活性点を飽和させる
操作（ブロッキングという）を行うのがよい。上記緩衝
液としては、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グ
リシン緩衝液等が挙げられる。その後、不溶性担体の表
面に吸着していない溶液中の抗体（または抗原）と溶液
とを分離する操作（Ｂ／Ｆ（Ｂｉｎｄｉｎｇ／Ｆｒｅ
ｅ）分離という）を行い、該不溶性担体を、ｐＨ５〜１
０の緩衝液（好ましくは、ブロッキングで用いたのと同
じ成分のもの）で再懸濁させるのがよい。この緩衝液に
は、試薬の安定性を向上させるために、例えば、アジ化
ナトリウム等の添加剤を適宜加えてもよい。
【００１４】上記免疫学的測定試薬によって検体中の被
測定物質を測定するは、光学的に測定する方法であって
も、肉眼で測定する方法であってもよい。
測定物質を測定するは、光学的に測定する方法であって
も、肉眼で測定する方法であってもよい。
【００１５】上記光学的に測定する方法は、例えば、検
体を反応容器に分注した後、上記免疫学的測定試薬を分
注し、混合・反応させる。この工程において、検体及び
試薬の分注順序は、上記方法の逆でも、また、同時であ
っても良い。反応時におけるｐＨは、５〜１０が好まし
く、より好ましくは、６．５〜８．５である。使用でき
る緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝
液、グリシン緩衝液等が挙げられる。反応温度は、０℃
〜５０℃が好ましく、より好ましくは、２０℃〜４０℃
である。また、凝集反応時間は、２０秒〜３０分が好ま
しく、より好ましくは、１〜１５分である。こうして得
られる凝集物の生成量または生成速度を吸光度等の測定
により、検体中の被測定物質の濃度を算出する。これに
は、吸光度を１回または２回測定する方法がある。ま
た、吸光度を測定する代わりに、散乱光を測定する方法
も用いることができる。測定は、３００〜１０００ｎｍ
の適当な波長で行うことができるが、不溶性担体として
ラテックスを用いる場合、その粒径に対して十分長い波
長を用いることが望ましい。このような光学的測定装置
は既知のもの、例えば、吸光度を測定する通常の分光光
度計、光の分散強度測定装置、粒子数および／または粒
子径を測定する装置等を用いることができる。上記凝集
反応を測定するための専用装置としては、分光光度計を
組み込んだ生化学自動分析装置、免疫比濁法による凝集
反応を測定するための専用装置、フローインジェクショ
ンを利用して凝集反応を測定するための装置、ラテック
ス凝集反応を測定するための専用装置等がある。
体を反応容器に分注した後、上記免疫学的測定試薬を分
注し、混合・反応させる。この工程において、検体及び
試薬の分注順序は、上記方法の逆でも、また、同時であ
っても良い。反応時におけるｐＨは、５〜１０が好まし
く、より好ましくは、６．５〜８．５である。使用でき
る緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝
液、グリシン緩衝液等が挙げられる。反応温度は、０℃
〜５０℃が好ましく、より好ましくは、２０℃〜４０℃
である。また、凝集反応時間は、２０秒〜３０分が好ま
しく、より好ましくは、１〜１５分である。こうして得
られる凝集物の生成量または生成速度を吸光度等の測定
により、検体中の被測定物質の濃度を算出する。これに
は、吸光度を１回または２回測定する方法がある。ま
た、吸光度を測定する代わりに、散乱光を測定する方法
も用いることができる。測定は、３００〜１０００ｎｍ
の適当な波長で行うことができるが、不溶性担体として
ラテックスを用いる場合、その粒径に対して十分長い波
長を用いることが望ましい。このような光学的測定装置
は既知のもの、例えば、吸光度を測定する通常の分光光
度計、光の分散強度測定装置、粒子数および／または粒
子径を測定する装置等を用いることができる。上記凝集
反応を測定するための専用装置としては、分光光度計を
組み込んだ生化学自動分析装置、免疫比濁法による凝集
反応を測定するための専用装置、フローインジェクショ
ンを利用して凝集反応を測定するための装置、ラテック
ス凝集反応を測定するための専用装置等がある。
【００１６】
【実施例】以下に、本発明の実施例を述べ、本発明を更
に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定
されるものではない。以下の実施例においては、β2 マ
イクログロブリン（以下、ＢＭＧという）を測定するた
め試薬について説明する。 （実施例１） （抗ＢＭＧ抗体担持ラテックス試薬の調製） （抗体の不溶性担体への担持工程）抗ヒトＢＭＧ山羊産
生粗血清（ＡＴＡＢ社製）及び山羊プール血清（ＡＴＡ
Ｂ社製）を、硫酸アンモニウム塩析法により、免疫グロ
ブリンを生成したものを蛋白質として、各々１０ｍｇ／
ｍｌに調製し、等量混合して混合抗体（蛋白質濃度１０
ｍｇ／ｍｌ）を得た。該混合抗体０．２ｍｌを０．０３
６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）０．４ｍｌに溶解し、
平均粒径が０．１μｍのポリスチレン系ラテックス（固
形分１０％、積水化学工業社製）０．２５ｍｌを添加し
て、２５℃で１．５時間攪拌した。 （担持抗体のブロッキング工程）牛血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）を４重量％含有した０．０３６Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．５）０．４２ｍｌを上記混合抗体保持懸濁液
に加え、２５℃で１時間攪拌した。 （担持抗体のＢ／Ｆ分離工程）上記工程で得られた懸濁
液を、１５℃、１８０００ｒｐｍの条件で４０分間遠心
分離を行い、上清を廃棄し、不溶性担体と担持されてい
ない抗体を除去した。次に、０．１重量％のアジ化ナト
リウム、１重量％ＢＳＡを溶解した、０．０３６Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６．５）１．２５ｍｌで沈殿を再度溶解
した。この工程を２回繰り返し、最終的にラテックス固
形分量が、０．３５％になるように上記緩衝液を加え
て、ＢＭＧ測定用試薬を製造した。 （ＢＭＧの光学的測定）上記ラテックス試薬９０μｌを
ＢＳＡ１重量％を溶解させた０．０３６Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．５）１８０μｌにて希釈し、ＢＭＧ陽性血清
（検体濃度：０、１．２５、２．５、５．０、１０、２
０μｇ／ｍｌ、ヒト由来）３μｌ添加、攪拌し、４分後
の波長８００ｎｍと５７０ｎｍのＯ．Ｄ．の差を一回測
定した。得られたＯ．Ｄ．の差と濃度との関係を図１に
示した。
に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定
されるものではない。以下の実施例においては、β2 マ
イクログロブリン（以下、ＢＭＧという）を測定するた
め試薬について説明する。 （実施例１） （抗ＢＭＧ抗体担持ラテックス試薬の調製） （抗体の不溶性担体への担持工程）抗ヒトＢＭＧ山羊産
生粗血清（ＡＴＡＢ社製）及び山羊プール血清（ＡＴＡ
Ｂ社製）を、硫酸アンモニウム塩析法により、免疫グロ
ブリンを生成したものを蛋白質として、各々１０ｍｇ／
ｍｌに調製し、等量混合して混合抗体（蛋白質濃度１０
ｍｇ／ｍｌ）を得た。該混合抗体０．２ｍｌを０．０３
６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）０．４ｍｌに溶解し、
平均粒径が０．１μｍのポリスチレン系ラテックス（固
形分１０％、積水化学工業社製）０．２５ｍｌを添加し
て、２５℃で１．５時間攪拌した。 （担持抗体のブロッキング工程）牛血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）を４重量％含有した０．０３６Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．５）０．４２ｍｌを上記混合抗体保持懸濁液
に加え、２５℃で１時間攪拌した。 （担持抗体のＢ／Ｆ分離工程）上記工程で得られた懸濁
液を、１５℃、１８０００ｒｐｍの条件で４０分間遠心
分離を行い、上清を廃棄し、不溶性担体と担持されてい
ない抗体を除去した。次に、０．１重量％のアジ化ナト
リウム、１重量％ＢＳＡを溶解した、０．０３６Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６．５）１．２５ｍｌで沈殿を再度溶解
した。この工程を２回繰り返し、最終的にラテックス固
形分量が、０．３５％になるように上記緩衝液を加え
て、ＢＭＧ測定用試薬を製造した。 （ＢＭＧの光学的測定）上記ラテックス試薬９０μｌを
ＢＳＡ１重量％を溶解させた０．０３６Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．５）１８０μｌにて希釈し、ＢＭＧ陽性血清
（検体濃度：０、１．２５、２．５、５．０、１０、２
０μｇ／ｍｌ、ヒト由来）３μｌ添加、攪拌し、４分後
の波長８００ｎｍと５７０ｎｍのＯ．Ｄ．の差を一回測
定した。得られたＯ．Ｄ．の差と濃度との関係を図１に
示した。
【００１７】（実施例２）山羊プール血清を、硫酸アン
モニウム塩析法により、免疫グロブリンを生成したもの
を蛋白質として、２０ｍｇ／ｍｌに調製したこと以外
（混合抗体の蛋白質濃度１５ｍｇ／ｍｌ）、実施例１と
同様にして行った。
モニウム塩析法により、免疫グロブリンを生成したもの
を蛋白質として、２０ｍｇ／ｍｌに調製したこと以外
（混合抗体の蛋白質濃度１５ｍｇ／ｍｌ）、実施例１と
同様にして行った。
【００１８】（実施例３）山羊プール血清を、硫酸アン
モニウム塩析法により、免疫グロブリンを生成したもの
を蛋白質として、３０ｍｇ／ｍｌに調製したこと以外
（混合抗体の蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ）、実施例１と
同様にして行った。
モニウム塩析法により、免疫グロブリンを生成したもの
を蛋白質として、３０ｍｇ／ｍｌに調製したこと以外
（混合抗体の蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ）、実施例１と
同様にして行った。
【００１９】（比較例１）混合抗体の代わりに、抗ヒト
ＢＭＧ抗体のみを不溶性担体に担持させたこと以外、実
施例１と同様にして行った。
ＢＭＧ抗体のみを不溶性担体に担持させたこと以外、実
施例１と同様にして行った。
【００２０】（比較例２）Ｂ／Ｆ分離後に、増感剤とし
てポリエチレングリコール０．２５重量％を添加した
０．０３６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）を用いること
以外は、比較例１と同様にして行った。
てポリエチレングリコール０．２５重量％を添加した
０．０３６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）を用いること
以外は、比較例１と同様にして行った。
【００２１】（評価）図１から分かるように、実施例１
〜３では、比較例１と比較して、増感剤を添加した比較
例２と同様に検量線が直線的になっている。
〜３では、比較例１と比較して、増感剤を添加した比較
例２と同様に検量線が直線的になっている。
【００２２】
【発明の効果】本発明は、上述の構成からなるので、検
体試料中の微量成分の測定に際して、抗原抗体反応の進
行を安定化させ、各種凝集促進剤を添加しなくても、よ
り広い範囲で測定が可能な免疫学的測定試薬を提供する
ことができる。
体試料中の微量成分の測定に際して、抗原抗体反応の進
行を安定化させ、各種凝集促進剤を添加しなくても、よ
り広い範囲で測定が可能な免疫学的測定試薬を提供する
ことができる。
【図１】実施例１〜３及び比較例１・２で得られたＢＭ
Ｇ測定用試薬の検量線
Ｇ測定用試薬の検量線
Claims (2)
- 【請求項１】 被測定物質である抗原（または抗体）に
対する抗体（または抗原）、及び、該被測定物質である
抗原（または抗体）に対して特異性を有しない抗体（ま
たは抗原）の両方が担持された不溶性担体を含有するこ
とを特徴とする免疫学的測定試薬。 - 【請求項２】 被測定物質である抗原（または抗体）に
対する抗体（または抗原）、及び、該被測定物質である
抗原（または抗体）に対して特異性を有しない抗体（ま
たは抗原）を、予め混合した後、不溶性担体に担持して
製造することを特徴とする請求項１記載の免疫学的測定
試薬の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10247127A JP2000074919A (ja) | 1998-09-01 | 1998-09-01 | 免疫学的測定試薬及び免疫学的測定試薬の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10247127A JP2000074919A (ja) | 1998-09-01 | 1998-09-01 | 免疫学的測定試薬及び免疫学的測定試薬の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000074919A true JP2000074919A (ja) | 2000-03-14 |
Family
ID=17158843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10247127A Pending JP2000074919A (ja) | 1998-09-01 | 1998-09-01 | 免疫学的測定試薬及び免疫学的測定試薬の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000074919A (ja) |
-
1998
- 1998-09-01 JP JP10247127A patent/JP2000074919A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS60256057A (ja) | 免疫学的測定法 | |
| JPH08101197A (ja) | 制御された感度の免疫クロマトグラフィー検定 | |
| JP2001502795A (ja) | 血液型抗原および抗体の検出に有用な方法および装置 | |
| CA1305409C (en) | Analyte detection in particulate-containing samples | |
| JPH11337551A (ja) | 非特異反応抑制剤、免疫測定試薬及び免疫測定方法 | |
| JP3899029B2 (ja) | 免疫学的分析方法 | |
| JP4086266B2 (ja) | 免疫測定方法 | |
| JPH08262024A (ja) | 生体内物質の免疫測定用キットおよび免疫測定方法 | |
| JPH0224559A (ja) | 免疫学的に検出可能な物質の測定法、反応容器及びイムノアツセイ原理による方法における種々のパラメーターの測定法 | |
| CA2520631C (en) | Turbidimetric immunoassay for lipoprotein(a) and reagent therefor | |
| Kapmeyer | Nephelometric immunoassay with shell/core particles | |
| JP3220546B2 (ja) | 免疫複合体存在下の抗原または抗体の測定方法 | |
| JPH02257063A (ja) | 免疫測定試薬および免疫測定法 | |
| JP2000074919A (ja) | 免疫学的測定試薬及び免疫学的測定試薬の製造方法 | |
| US5637472A (en) | Hydrazine derivatized cells | |
| JPH0727764A (ja) | Ｆｃ部位をブロックした免疫学的測定用抗体、該抗体を含む免疫学的測定用試薬、該免疫学的測定用試薬を使用する免疫学的測定法及びＦｃ部位をブロックするブロック試薬 | |
| JPS60111158A (ja) | 特異結合検定用試薬 | |
| JP3328053B2 (ja) | 免疫凝集反応による抗体又は抗原の濃度定量法 | |
| JP3598701B2 (ja) | 不溶性担体を用いた免疫化学的測定方法 | |
| JPH0862214A (ja) | 生体内物質の測定方法 | |
| JPH08193999A (ja) | 免疫測定法 | |
| JP2729917B2 (ja) | 生体液中アナライトの遊離部分の測定方法 | |
| JPH05281234A (ja) | リューマチ性因子決定法および該方法実施用試薬 | |
| JP2836009B2 (ja) | 生化学用微粒子およびその製法ならびにそれを使用する免疫学的測定法 | |
| JP2004117068A (ja) | 免疫測定試薬および免疫測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20040922 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040929 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20050209 |