JP2000023682A - ホスホジエステラ―ゼ酵素 - Google Patents

ホスホジエステラ―ゼ酵素

Info

Publication number
JP2000023682A
JP2000023682A JP11150423A JP15042399A JP2000023682A JP 2000023682 A JP2000023682 A JP 2000023682A JP 11150423 A JP11150423 A JP 11150423A JP 15042399 A JP15042399 A JP 15042399A JP 2000023682 A JP2000023682 A JP 2000023682A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
pde11
seq
sequence
expression
nucleotide sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP11150423A
Other languages
English (en)
Inventor
Jeremy Lanfear
ジェレミー・ランフィアー
Nicola Melanie Robas
ニコラ・メラニー・ロバス
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pfizer Inc
Original Assignee
Pfizer Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9811500.9A external-priority patent/GB9811500D0/en
Priority claimed from GBGB9823882.7A external-priority patent/GB9823882D0/en
Priority claimed from GBGB9826777.6A external-priority patent/GB9826777D0/en
Priority claimed from GBGB9908247.1A external-priority patent/GB9908247D0/en
Priority claimed from GBGB9910801.1A external-priority patent/GB9910801D0/en
Application filed by Pfizer Inc filed Critical Pfizer Inc
Publication of JP2000023682A publication Critical patent/JP2000023682A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規酵素及びその遺伝子を提供する。 【解決手段】 アミノ酸配列及びヌクレオチド配列が記
載されている。アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
２又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４又はＳＥＱＩＤ Ｎｏ．
１５又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７又はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１９として示される配列又はその変異体、相同
体、フラグメント又は誘導体を含む。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は酵素に関する。本発
明はまたそれをコードするヌクレオチド配列に関する。
【０００２】特に、本発明は新規なホスホジエステラー
ゼ酵素をコードする新規な核酸配列に関する。本発明は
また疾患の診断及び治療における新規な核酸及びアミノ
酸の用途に関する。
【０００３】本発明はまたホスホジエステラーゼ活性を
調節し得る薬剤を評価する及び／又はスクリーニングす
るための新規な核酸及びアミノの用途に関する。本発明
はさらにホスホジエステラーゼ活性を調節し得る薬剤を
評価する及び／又はスクリーニングするための、新規核
酸及びアミノ酸配列を包含する又は発現させる遺伝子工
学的に処理された宿主細胞に関する。
【０００４】
【従来の技術】サイクリックヌクレオチドホスホジエス
テラーゼ（ＰＤＥｓ）は、サイクリックヌクレオチドの
分解を触媒する酵素ファミリーである。サイクリックヌ
クレオチド、特にｃＡＭＰ（サイクリックアデノシン
３'，５'−一リン酸）は、重要な細胞内の第二メッセン
ジャーである。ＰＤＥｓはサイクリックヌクレオチドの
濃度を制御する細胞内の一因子である。
【０００５】最近、少なくとも７種のＰＤＥ酵素（ＰＤ
ＥＩ〜ＰＤＥＶＩＩ）が、これら酵素の多くのサブタイ
プとともに、基質親和性と補助因子の要求性に基づいて
定義されている（Ｂｅａｖｏ ＪＡ ＆ Ｒｅｉｆｓｎ
ｙｄｅｒ ＤＨ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
Ｓｃｉ．１１：１５０[１９９０]；ＢｅａｖｏＪ，
「サイクリックヌクレオチドホスホジエステラーゼ：構
造、調節及び薬物作用」Ｂｅａｖｏ Ｊ ＆ Ｈｏｕｓ
ｌｅｙ ＭＤ（編）ウィリー：チチェスター、３〜１５
頁［１９９０］）。ＰＤＥｓ（即ち、サイクリックヌク
レオチドホスホジエステラーゼ）の例には、Ｃａ2+／カ
ルモジュリン依存性ＰＤＥであるＰＤＥＩ、ｃＧＭＰに
よって刺激されるＰＤＥであるＰＤＥＩＩ、ｃＧＭＰに
よって阻害されるＰＤＥであるＰＤＥＩＩＩ、高親和性
ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥであるＰＤＥＩＶ，ｃＧＭＰ特異
的ＰＤＥであるＰＤＥＶ等がある。
【０００６】各ＰＤＥファミリーは２つ又はそれ以上の
イソ型を含む可能性がある（つまり、２つ又はそれ以上
のＰＤＥアイソザイムがある可能性がある）。例えば、
ショウジョウバエのダンス（Ｄｕｎｃｅ）遺伝子の相同
体である哺乳類のＰＤＥＩＶ（Ｃｈｅｎ ＣＮ等、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８３：９
３１３［１９８６］）にはラットで４種のイソ型がある
ことが知られている（Ｓｗｉｎｎｅｎ ＪＶ等、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８６：５３
２５［１９８９］）。ヒトＰＤＥｓもまたイソ型として
出現し、スプライシングの変異体があることが知られて
いる。例えば、単球由来のヒトＰＤＥＩＶのイソ型をク
ローン化した１９９０年の報告がある（Ｌｉｖｉ ＧＰ
等、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．，１０：２６７８［１
９９０］。別の例として、他の研究者たちは別々に３種
のＰＤＥＩＶスプライシング変異体をクローン化した
が、それは今日ｈＰＤＥＩＶ−Ｂ１、ｈＰＤＥＩＶ−Ｂ
２、ｈＰＤＥＩＶ−Ｂ３と命名されている。
【０００７】別のサイクリックヌクレオチドホスホジエ
ステラーゼ−即ちＣＮ ＰＣＤＥ８−に関する知見がＷ
Ｏ−Ａ−９７／３５９８９に見出される。ＷＯ−Ａ−９
７／３５９８９によれば、ＣＮ ＰＣＤＥ８には２種の
アイソザイムがあり、ＣＮＰＣＤＥ８Ａ及びＣＮ ＰＣ
ＤＥ８Ｂと命名された。「アイソザイム」という用語は
当該技術分野では「イソ型」と言及される場合がある。
【０００８】ＷＯ−Ａ−９７／３５９８９によると、様
々なＰＤＥの多くの阻害剤が同定され、なかには臨床評
価を受けたものもある。例えば、ＰＤＥＩＩＩ阻害剤は
抗血栓薬、降圧薬及び鬱血性心不全の治療に有用である
強心薬として開発されている。ＰＤＥＩＩＩ阻害剤であ
るロリプラム（Ｒｏｌｉｐｒａｍ）は既にうつ病の治療
に使われていて、ＰＤＥＩＩＩ阻害剤のなかには抗炎症
剤として評価されているものもある。ロリプラムはま
た、リポ多糖（ＬＰＳ）によって誘発され、インビトロ
でＨＩＶ−１の複製を高めるとされている、α−ＴＮＦ
の作用を阻害することが示されている。それ故、ロリプ
ラムはＨＩＶ−１の複製を阻害する可能性がある（Ａｎ
ｇｅｌ等、１９９５ ＡＩＤＳ ９：１１３７〜４
４）。さらに、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β及びγ−インタ
ーフェロンの産生を抑制する能力に基づいて、ロリプラ
ムは、多発性硬化症の実験動物モデルである脳脊髄炎の
治療に有効であることが示されていて（Ｓｏｍｍｅｒ
等、１９９５ Ｎａｔ Ｍｅｄ １：２４４〜２４
８）、遅発性異常運動症の治療にも有効である可能性が
ある（Ｓａｓａｋｉ等、１９９５ Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ ２８２：７１〜７６）。
【０００９】ＷＯ−Ａ−９７／３５９８９によると、気
管支喘息等の呼吸器系疾患の治療に使われているテオフ
ィリンや間欠性跛行と糖尿病性末梢血管疾患の治療に使
われているペントキシフィリンのような非特異的ＰＤＥ
阻害剤もある。呼吸器系疾患の治療において、抗炎症作
用と免疫調節作用を有するテオフィリンは、気道平滑筋
の機能にも作用すると考えられている（Ｂａｎｎｅｒ
等、１９９５ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ ８：９９６〜１００
０）。ＣＮＰＤＥによるｃＡＭＰとｃＧＭＰの加水分解
を阻害することによって作用すると考えられている（Ｂ
ａｎｎｅｒ等、１９９５ Ｍｏｎａｌｄｉ Ａｒｃｈ
Ｃｈｅｓｔ Ｄｉｓ ５０：２８６〜２９２）。ＴＮＦ
−αの産生を妨害することも知られているペントキシフ
ィリンも、ＨＩＶ−１の複製を阻害する可能性がある
（Ａｎｇｅｌ等、同上）。ＣＮＰＤＥ阻害剤のリストが
Ｂｅａｖｏ（１９９５、同上）の論文にある。
【００１０】ＰＤＥ、そのアイソザイム及びそのサブタ
イプの選択的阻害剤は、より副作用が少なくより効果的
な治療薬になると示唆されている。例えば、Ｗｉｅｓｈ
ａａｒ ＲＥ等（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８：５３
７［１９８５］）、Ｇｉｅｍｂｙｃｚ ＭＡ（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．，４３：２０４１［１９９
２］）、Ｌｏｗｅ ＪＡとＣｈｅｎｇ ＪＢ（Ｄｒｕｇ
ｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ，１７：７９９〜８０
７［１９９２］）の概説を参照されたい。
【００１１】従って、ある治療応用にとっては、ＰＤＥ
の個別タイプの選択的阻害を獲得することが望ましい。
それ故、新規ＰＤＥのクローン化と発現は、選択的阻害
剤の発見にとって大いに有用であろう。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】特許請求の範囲と以下
の説明には本発明の態様が示されている。要約すれば、
本発明の幾つかの態様は、 １．新規アミノ酸 ２．新規核酸配列 ３．前記新規配列を用いるアッセイ ４．前記アッセイの適用によって同定される化合物／組
成物 ５．前記新規配列を包含又は発現させる発現システム ６．前記新規配列に基づいた治療方法 ７．前記新規配列に基づいた医薬組成物、に関する。
【００１３】本発明のアミノ酸配列及び／又はヌクレオ
チド配列に関する他の態様には、本発明の配列を包含又
は発現させ得る構築物、本発明の配列を包含又は発現さ
せ得るベクター、本発明の配列を包含又は発現させ得る
プラスミド、本発明の配列を包含又は発現させ得る組
織、本発明の配列を包含又は発現させ得る器官、本発明
の配列を包含又は発現させ得る形質転換された宿主、本
発明の配列を包含又は発現させ得る形質転換された生物
体、等がある。本発明はまた、本発明の配列を転移させ
る方法と、微生物における発現のように、それを発現さ
せる方法も含む。
【００１４】分かり易くするために、本発明の態様は以
下のセクション見出しのもとに論じる。しかしながら、
各セクションの教示は必ずしもそれぞれ特定のセクショ
ンに限定されるものではない。
【００１５】以下の説明では、「本発明のヌクレオチド
配列」及び「本発明のアミノ酸配列」は、それぞれ、こ
こに示される１以上のヌクレオチド配列及びここに示さ
れる１以上のアミノ酸配列のことを指す。また、ここに
用いられているように、「アミノ酸配列」とはペプチド
又はタンパク質配列を指し、その一部を指す場合もあ
る。さらに、「本発明のアミノ酸配列」という用語は、
「本発明のポリペプチド配列」と同義である。また、
「本発明のヌクレオチド配列」という用語は、「本発明
のポリヌクレオチド配列」と同義である。
【００１６】
【課題を解決するための手段】本発明の第一の態様によ
ると、式Ｉ又はその変異体、相同体、フラグメント又は
誘導体として示される配列を含む、ＰＤＥ活性を示すア
ミノ酸配列が提供される。式Ｉ ペプチド配列又はアミノ酸Ｚ１〜Ｚ２８の１以上を含
む、１５９アミノ酸残基より長いアミノ酸配列であっ
て、このペプチド配列又はアミノ酸Ｚ１〜Ｚ２８の１以
上のいずれもが、適当なペプチド配列又はアミノ酸残基
によって、他のペプチド配列又はアミノ酸Ｚ１〜Ｚ２８
から分離されてよい。ここでＺ１〜Ｚ２８は、 Z1= LTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRK Z2= NK Z3= DE Z4= PKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDN Z5= LLLYELSSII Z6= IATKADGFALYFLGECNNSLC Z7= F Z8= PPG Z9= KEG Z10 = PRLIPAGPITQGTT Z11 =SAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTA
IGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQ
TELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKN
KELYSDLFDIGEEKEGKP Z12 =FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDAYADPRFNREVDLYT
GYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKMFAVFCAL
ALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSEEWQGLM Z13 = F Z14 = LP Z15 = R Z16 = C Z17 = IELFHFDIGPFENMWPGIFVYM Z18 = HRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMY
AILQNN Z19 = LFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPL Z20 =ALYSTSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRK
AIIATDLALYFGNRQLEEMYQTGSLNLZ21 = NQSHRDRVIGLMMTACD
LCSVTK Z22 = WPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDK Z23 = DEVPQGQLGFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNL Z24 = QWEKVIRGEETA Z25 = WIS Z26 = P Z27 = A Z28 = E 便宜上、アミノ酸を示すコード表を示す。
【００１７】
【表１】 ---------------------------------------------------------------------- アミノ酸 ３文字コード １文字コード ---------------------------------------------------------------------- アラニン Ａｌａ Ａ アルギニン Ａｒｇ Ｒ アスパラギン Ａｓｎ Ｎ アスパラギン酸 Ａｓｐ Ｄ システイン Ｃｙｓ Ｃ グルタミン Ｇｌｎ Ｑ グルタミン酸 Ｇｌｕ Ｅ グリシン Ｇｌｙ Ｇ ヒスチジン Ｈｉｓ Ｈ イソロイシン Ｉｌｅ Ｉ ロイシン Ｌｅｕ Ｌ リジン Ｌｙｓ Ｋ メチオニン Ｍｅｔ Ｍ フェニルアラニン Ｐｈｅ Ｆ プロリン Ｐｒｏ Ｐ セリン Ｓｅｒ Ｓ スレオニン Ｔｈｒ Ｔ トリプトファン Ｔｒｐ Ｗ チロシン Ｔｙｒ Ｙ バリン Ｖａｌ Ｖ 任意の残基 Ｘａａ Ｘ ---------------------------------------------------------------------- 好ましくは、式Ｉのアミノ酸配列は、Ｚ１１、Ｚ１２、
Ｚ１８及びＺ２０、又はその類縁体のうち少なくとも１
つ又はそれ以上を含む。
【００１８】ここに用いられている「類縁体」という用
語は、式Ｉの配列に類似した配列を有するがアミノ酸の
置換や欠損が悪影響を与えない（つまり、酵素活性に対
して悪影響しない）アミノ酸配列を意味する。
【００１９】好ましくは、式Ｉのアミノ酸配列は、Ｚ１
１、Ｚ１２、Ｚ１８及びＺ２０、又はその類縁体のうち
少なくとも各々を含む。好ましくは、式Ｉのアミノ酸配
列は、Ｚ１１、Ｚ１２、Ｚ１８及びＺ２０のうち少なく
とも各々を含む。
【００２０】好ましくは、式Ｉのアミノ酸配列は、Ｚ
１、Ｚ４、Ｚ１７、Ｚ１９、Ｚ２１、Ｚ２２及びＺ３
３、又はその類縁体のうち少なくとも１つ又はそれ以上
を含む。好ましくは、式Ｉのアミノ酸配列は、Ｚ１、Ｚ
４、Ｚ１７、Ｚ１９、Ｚ２１、Ｚ２２及びＺ３３、又は
その類縁体のうち少なくとも各々を含む。
【００２１】好ましくは、式Ｉのアミノ酸配列は、Ｚ
１、Ｚ４、Ｚ１７、Ｚ１９、Ｚ２１、Ｚ２２及びＺ３３
のうち少なくとも各々を含む。式Ｉとして示される配列
を含むアミノ酸配列の好ましい例は、式ＩＩ又はその変
異体、相同体、フラグメント又は誘導体として示される
アミノ酸配列である。式ＩＩ X0-Z1-X1-Z2-X2-X3-Z3-X4-X5-Z4-X6-Z5-X7-Z6-X8-Z7-X9
-Z8-X10-Z9-X11-Z10-X12-Z11-X13-Z12-X14-Z13-X15-Z14
-X16-Z15-X17-Z16-X18-X19-Z17-X20-Z18-X21-X22-Z19-X
23-Z20-X24-Z21-X25-Z22-X26-Z23-X27-Z24-X28-Z25-X29
-Z26-X30-X31-Z27-X32-X33-X34-X35-X36-X37-Z28-X38 ここで、Ｚ１〜Ｚ２８はそれぞれ上記に定義したもので
あり、Ｘ０〜Ｘ３８は、適当なペプチド配列又はアミノ
酸から独立して選択され、Ｘ０、Ｘ２８、Ｚ２５、Ｘ２
９、Ｚ２６、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｚ２７、Ｘ３２、Ｘ３
３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｚ２８及びＸ３
８の１つ又はそれ以上は任意である。
【００２２】式Ｉとして示される配列を含むアミノ酸配
列のより好ましい例は、式ＩＩＩ又はその変異体、相同
体、フラグメント又は誘導体として示されるアミノ酸配
列である。
【００２３】式ＩＩＩ LTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKX1NKX2X3DEX4X
5PKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNX6LLLYELSSIIX7IA
TKADGFALYFLGECNNSLCX8FX9PPGX10KEGX11PRLIPAGPITQGTT
X12SAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTAIG
DLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQTE
LNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKNKE
LYSDLFDIGEEKEGKPX13FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDA
YADPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKT
DENNFKMFAVFCALALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSEEW
QGLMX14FX15LPX16RX17CX18X19IELFHFDIGPFENMWPGIFVYMX
20HRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAILQ
NNX21X22LFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLX23ALY
STSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATDLA
LYFGNRKQLEEMYQTGSLNLX24NQSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKX25W
PVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKX26DEVPQGQLGFY
NAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLX27QWEKVIRGEETA ここで、Ｘ1は、Ｎ又はＴ、Ｘ2は、Ｓ又はＡ、Ｘ3は、
Ｅ又はＫ、Ｘ4は、Ｓ又はＰ、Ｘ5は、Ａ又はＳ、Ｘ
6は、Ｑ又はＨ、Ｘ7は、Ｋ又はＲ、Ｘ8は、Ｉ又はＶ、
Ｘ9は、Ｔ又はＩ、Ｘ10は、Ｉ又はＭ、Ｘ11は、Ｋ又は
Ｑ、Ｘ12は、Ｖ又はＩ、Ｘ13は、Ｖ又はＩ、Ｘ14は、Ｑ
又はＲ、Ｘ15は、Ｔ又はＮ、Ｘ16は、Ｖ又はＡ、Ｘ
17は、Ｌ又はＩ、Ｘ18は、Ｋ又はＲ、Ｘ19は、Ｅ又は
Ｄ、Ｘ20は、Ｖ又はＩ、Ｘ21は、Ｈ又はＮ、Ｘ22は、Ｔ
又はＧ、Ｘ23は、Ｔ又はＡ、Ｘ24は、Ｎ又はＨ、Ｘ
25は、Ｐ又はＬ、Ｘ26は、Ｋ又はＲ、Ｘ27は、Ｓ又はＮ
である。
【００２４】式Ｉとして示される配列を含むアミノ酸配
列のより好ましい例は、式ＩＶ又はその変異体、相同
体、フラグメント又は誘導体として示されるアミノ酸配
列である。式ＩＶ X0LTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKX1NKX2X3DEX
4X5PKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNX6LLLYELSSIIX7
IATKADGFALYFLGECNNSLCX8FX9PPGX10KEGX11PRLIPAGPITQG
TTX12SAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTA
IGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQ
TELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKN
KELYSDLFDIGEEKEGKPX13FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIP
DAYADPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFS
KTDENNFKMFAVFCALALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSE
EWQGLMX14FX15LPX16RX17CX18X19IELFHFDIGPFENMWPGIFVY
MX20HRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAI
LQNNX21X22LFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLX23A
LYSTSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATD
LALYFGNRKQLEEMYQTGSLNLX24NQSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKX
25WPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKX26DEVPQGQL
GFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLX27QWEKVIRGEETA ここで、Ｘ0は、Ｓ又はＧ、Ｘ1は、Ｎ又はＴ、Ｘ2は、
Ｓ又はＡ、Ｘ3は、Ｅ又はＫ、Ｘ4は、Ｓ又はＰ、Ｘ
5は、Ａ又はＳ、Ｘ6は、Ｑ又はＨ、Ｘ7は、Ｋ又はＲ、
Ｘ8は、Ｉ又はＶ、Ｘ9は、Ｔ又はＩ、Ｘ10は、Ｉ又は
Ｍ、Ｘ11は、Ｋ又はＱ、Ｘ12は、Ｖ又はＩ、Ｘ13は、Ｖ
又はＩ、Ｘ14は、Ｑ又はＲ、Ｘ15は、Ｔ又はＮ、Ｘ
16は、Ｖ又はＡ、Ｘ17は、Ｌ又はＩ、Ｘ18は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ19は、Ｅ又はＤ、Ｘ20は、Ｖ又はＩ、Ｘ21は、Ｈ
又はＮ、Ｘ22は、Ｔ又はＧ、Ｘ23は、Ｔ又はＡ、Ｘ
24は、Ｎ又はＨ、Ｘ25は、Ｐ又はＬ、Ｘ26は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ27は、Ｓ又はＮである。
【００２５】式Ｉとして示される配列を含むアミノ酸配
列のより好ましい例は、式Ｖ又はその変異体、相同体、
フラグメント又は誘導体として示されるアミノ酸配列で
ある。式Ｖ X0LTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKX1NKX2X3DEX
4X5PKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNX6LLLYELSSIIX7
IATKADGFALYFLGECNNSLCX8FX9PPGX10KEGX11PRLIPAGPITQG
TTX12SAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTA
IGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQ
TELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKN
KELYSDLFDIGEEKEGKPX13FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIP
DAYADPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFS
KTDENNFKMFAVFCALALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSE
EWQGLMX14FX15LPX16RX17CX18X19IELFHFDIGPFENMWPGIFVY
MX20HRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAI
LQNNX21X22LFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLX23A
LYSTSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATD
LALYFGNRKQLEEMYQTGSLNLX24NQSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKX
25WPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKX26DEVPQGQL
GFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLX27QWEKVIRGEETAX28
WIS ここで、Ｘ0は、Ｓ又はＧ、Ｘ1は、Ｎ又はＴ、Ｘ2は、
Ｓ又はＡ、Ｘ3は、Ｅ又はＫ、Ｘ4は、Ｓ又はＰ、Ｘ
5は、Ａ又はＳ、Ｘ6は、Ｑ又はＨ、Ｘ7は、Ｋ又はＲ、
Ｘ8は、Ｉ又はＶ、Ｘ9は、Ｔ又はＩ、Ｘ10は、Ｉ又は
Ｍ、Ｘ11は、Ｋ又はＱ、Ｘ12は、Ｖ又はＩ、Ｘ13は、Ｖ
又はＩ、Ｘ14は、Ｑ又はＲ、Ｘ15は、Ｔ又はＮ、Ｘ
16は、Ｖ又はＡ、Ｘ17は、Ｌ又はＩ、Ｘ18は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ19は、Ｅ又はＤ、Ｘ20は、Ｖ又はＩ、Ｘ21は、Ｈ
又はＮ、Ｘ22は、Ｔ又はＧ、Ｘ23は、Ｔ又はＡ、Ｘ
24は、Ｎ又はＨ、Ｘ25は、Ｐ又はＬ、Ｘ26は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ27は、Ｓ又はＮ、Ｘ28は、Ｔ又はＭである。
【００２６】式Ｉとして示される配列を含むアミノ酸配
列のより好ましい例は、式ＶＩ又はその変異体、相同
体、フラグメント又は誘導体として示されるアミノ酸配
列である。
【００２７】式ＶＩ X0LTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKX1NKX2X3DEX
4X5PKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNX6LLLYELSSIIX7
IATKADGFALYFLGECNNSLCX8FX9PPGX10KEGX11PRLIPAGPITQG
TTX12SAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTA
IGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQ
TELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKN
KELYSDLFDIGEEKEGKPX13FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIP
DAYADPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFS
KTDENNFKMFAVFCALALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSE
EWQGLMX14FX15LPX16RX17CX18X19IELFHFDIGPFENMWPGIFVY
MX20HRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAI
LQNNX21X22LFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLX23A
LYSTSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATD
LALYFGNRKQLEEMYQTGSLNLX24NQSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKX
25WPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKX26DEVPQGQL
GFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLX27QWEKVIRGEETAX28
WISX29PX30X31A ここで、Ｘ0は、Ｓ又はＧ、Ｘ1は、Ｎ又はＴ、Ｘ2は、
Ｓ又はＡ、Ｘ3は、Ｅ又はＫ、Ｘ4は、Ｓ又はＰ、Ｘ
5は、Ａ又はＳ、Ｘ6は、Ｑ又はＨ、Ｘ7は、Ｋ又はＲ、
Ｘ8は、Ｉ又はＶ、Ｘ9は、Ｔ又はＩ、Ｘ10は、Ｉ又は
Ｍ、Ｘ11は、Ｋ又はＱ、Ｘ12は、Ｖ又はＩ、Ｘ13は、Ｖ
又はＩ、Ｘ14は、Ｑ又はＲ、Ｘ15は、Ｔ又はＮ、Ｘ
16は、Ｖ又はＡ、Ｘ17は、Ｌ又はＩ、Ｘ18は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ19は、Ｅ又はＤ、Ｘ20は、Ｖ又はＩ、Ｘ21は、Ｈ
又はＮ、Ｘ22は、Ｔ又はＧ、Ｘ23は、Ｔ又はＡ、Ｘ
24は、Ｎ又はＨ、Ｘ25は、Ｐ又はＬ、Ｘ26は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ27は、Ｓ又はＮ、Ｘ28は、Ｔ又はＭ、Ｘ29は、Ｓ
又はＧ、Ｘ30は、Ｓ又はＧ、Ｘ31は、Ｖ又はＰである。
【００２８】式Ｉとして示される配列を含むアミノ酸配
列のより好ましい例は、式ＶＩＩ又はその変異体、相同
体、フラグメント又は誘導体として示されるアミノ酸配
列である。式ＶＩＩ X0LTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKX1NKX2X3DEX
4X5PKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNX6LLLYELSSIIX7
IATKADGFALYFLGECNNSLCX8FX9PPGX10KEGX11PRLIPAGPITQG
TTX12SAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTA
IGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQ
TELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKN
KELYSDLFDIGEEKEGKPX13FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIP
DAYADPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFS
KTDENNFKMFAVFCALALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSE
EWQGLMX14FX15LPX16RX17CX18X19IELFHFDIGPFENMWPGIFVY
MX20HRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAI
LQNNX21X22LFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLX23A
LYSTSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATD
LALYFGNRKQLEEMYQTGSLNLX24NQSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKX
25WPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKX26DEVPQGQL
GFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLX27QWEKVIRGEETAX28
WISX29PX30X31AX32X33X34X35X36X37EX38 ここで、Ｘ0は、Ｓ又はＧ、Ｘ1は、Ｎ又はＴ、Ｘ2は、
Ｓ又はＡ、Ｘ3は、Ｅ又はＫ、Ｘ4は、Ｓ又はＰ、Ｘ
5は、Ａ又はＳ、Ｘ6は、Ｑ又はＨ、Ｘ7は、Ｋ又はＲ、
Ｘ8は、Ｉ又はＶ、Ｘ9は、Ｔ又はＩ、Ｘ10は、Ｉ又は
Ｍ、Ｘ11は、Ｋ又はＱ、Ｘ12は、Ｖ又はＩ、Ｘ13は、Ｖ
又はＩ、Ｘ14は、Ｑ又はＲ、Ｘ15は、Ｔ又はＮ、Ｘ
16は、Ｖ又はＡ、Ｘ17は、Ｌ又はＩ、Ｘ18は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ19は、Ｅ又はＤ、Ｘ20は、Ｖ又はＩ、Ｘ21は、Ｈ
又はＮ、Ｘ22は、Ｔ又はＧ、Ｘ23は、Ｔ又はＡ、Ｘ
24は、Ｎ又はＨ、Ｘ25は、Ｐ又はＬ、Ｘ26は、Ｋ又は
Ｒ、Ｘ27は、Ｓ又はＮ、Ｘ28は、Ｔ又はＭ、Ｘ29は、Ｓ
又はＧ、Ｘ30は、Ｓ又はＧ、Ｘ31は、Ｖ又はＰ、Ｘ
32は、Ｑ又はＰ、Ｘ33は、Ｋ又はＳ、Ｘ34は、Ａ又は
Ｋ、Ｘ35は、Ａ又はＳ、Ｘ36は、Ａ又はＴ、Ｘ37は、Ｓ
又はＰ、Ｘ38は、Ｄ又はＫである。式Ｉとして示される
配列を含むアミノ酸配列の好ましい例は、ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１５又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７及び／又はＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１９のアミノ酸またはその変異体、相
同体、フラグメント又は誘導体として示されるアミノ酸
を含む。式Ｉ及び／又は式ＩＩ〜式ＶＩＩのどれか１つ
又はそれ以上について述べることは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１５又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７及び／又はＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１９を含むアミノ酸のどれか１つ又は
それ以上にも同様に適用されることに留意されたい。
【００２９】式ＩＩ〜式ＶＩＩのどれか１つの変異体の
１例は、．．．ＫＲＫＸ1ＮＫＸ2Ｘ 3．．．の基
が．．．ＫＲＫＸ1ＤＫＸ2Ｘ3．．．に置換されている
アミノ酸配列である。
【００３０】式ＩＩ〜式ＶＩＩのどれか１つの変異体の
１例は、．．．ＬＬＬＹＥＬＳＳＩＩＸ7．．．の基
が．．．ＬＬＬＹＥＬＮＳＳＩＩＸ7．．．に置換され
ているアミノ酸配列である。
【００３１】好ましくは、式Ｉ及び／又は式ＩＩ〜式Ｖ
ＩＩのどれか１つ又はそれ以上について述べることは、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４、Ｓ
ＥＱＩＤ Ｎｏ．１５又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７及
び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９を含むアミノ酸のど
れか１つ又はそれ以上のことを意味する。
【００３２】より好ましくは、式Ｉ及び／又は式ＩＩ〜
式ＶＩＩのどれか１つ又はそれ以上について述べること
は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
４のどれか１つ又はそれ以上のことを意味する。
【００３３】本発明の第二の態様によれば、式Ｉとして
示される配列を含むアミノ酸配列が提供される。本発明
の第三の態様によれば、本発明のアミノ酸配列をコード
する核酸配列が提供される。
【００３４】本発明の第四の態様によれば、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１４として示される配列を含むヌクレオチド
配列、又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１８又はその変異体、相同体、フラグメ
ント又は誘導体を含むヌクレオチド配列が提供される。
【００３５】本発明の第五の態様によれば、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１４として示される配列を含むヌクレオチド
配列、又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレオチド配列が提供され
る。
【００３６】本発明の第六の態様によれば、本発明によ
るヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションできるヌ
クレオチド配列が提供される。本発明の第七の態様によ
れば、本発明の第六の態様によるヌクレオチド配列にハ
イブリダイゼーションできるヌクレオチド配列が提供さ
れる。
【００３７】本発明の第八の態様によれば、本発明によ
るヌクレオチド配列を含むベクターが提供される。本発
明の第九の態様によれば、本発明によるヌクレオチド配
列が取り込まれた宿主細胞が提供される。
【００３８】本発明の第十の態様によれば、ＰＤＥ１１
の活性又は発現に影響を与え得る薬剤を同定するアッセ
イ方法、つまり、薬剤を本発明によるアミノ酸又は本発
明によるヌクレオチド配列と接触させ、ＰＤＥ１１の活
性又は発現を測定し、ａ）薬剤の非存在下におけるＰＤ
Ｅ活性又は発現とｂ）薬剤の存在下におけるＰＤＥ活性
又は発現との差をもって薬剤のＰＤＥ１１活性又は発現
への効果の指標とするアッセイ方法が提供される。好ま
しくは、このアッセイは、男性の勃起不全又は女性の性
機能不全のような性機能障害の治療に有用な薬剤をスク
リーニングするためのものである。
【００３９】本発明の第十一の態様によれば、（ａ）本
発明によるアッセイを実施し、（ｂ）ＰＤＥ１１の活性
又は発現に影響を与える１つ又はそれ以上の薬剤を同定
し、（ｃ）１つ又はそれ以上の同定された薬剤を大量に
製造する工程を含む方法が提供される。
【００４０】本発明の第十二の態様によれば、本発明の
アッセイ方法であるインビトロのアッセイ方法において
ＰＤＥ１１の活性又は発現に影響を与え得る薬剤でイン
ビボのＰＤＥ１１活性又は発現に影響を与える方法が提
供される。
【００４１】本発明の第十三の態様によれば、本発明の
アッセイ方法によってインビトロでアッセイするときＰ
ＤＥの活性又は発現に効果を及ぼし得る薬剤の、ＰＤＥ
１１に関連した疾患又は病態の治療に用いる医薬組成物
の製造における用途が提供される。
【００４２】本発明の第一四の態様によれば、ＰＤＥ１
１に対して産生された抗体と免疫反応し得る酵素が提供
される。本発明の第十五の態様によれば、ＮＣＩＭＢ４
０９２５、ＮＣＩＭＢ４０９２６又はＮＣＩＭＢ４１０
０７から得られる、ＰＤＥをコードするヌクレオチド配
列が提供される。
【００４３】本発明の第十六の態様によれば、ＮＣＩＭ
Ｂ４０９２５、ＮＣＩＭＢ４０９２６又はＮＣＩＭＢ４
１００７から得られるヌクレオチド配列より発現される
ＰＤＥが提供される。
【００４４】本発明の第十七の態様によれば、ＰＤＥ１
１の活性又はその発現に影響を与える薬剤の、ＰＤＥ１
１に関連した疾患又は病態の治療に用いる医薬組成物の
製造における用途が提供される。
【００４５】本発明の更なる態様によれば、以下のヌク
レオチド配列より選択されるヌクレオチド配列が提供さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、３又は１４とし
て示されるヌクレオチド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１６及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレ
オチド配列、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、３又は１
４として示されるヌクレオチド配列又はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１６及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８を含む
ヌクレオチド配列の変異体、相同体、誘導体又はフラグ
メントであるヌクレオチド配列、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１、３又は１４として述べられているヌクレオチ
ド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレオチド配列の相補体で
あるヌクレオチド配列、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１、３又は１４として示されるヌクレオチド配列又はＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１８を含むヌクレオチド配列の変異体、相同体、誘
導体又はフラグメントの相補体であるヌクレオチド配
列、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、３又は１４として
述べられているヌクレオチド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１６及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌ
クレオチド配列とハイブリダイズし得るヌクレオチド配
列、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、３又は１４として
示されるヌクレオチド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１
６及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレオ
チド配列の変異体、相同体、誘導体又はフラグメントと
ハイブリダイズし得るヌクレオチド配列、（ｇ）ＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１、３又は１４として述べられているヌ
クレオチド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又
はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレオチド配列と
ハイブリダイズし得るヌクレオチド配列の相補体である
ヌクレオチド配列、（ｈ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、３
又は１４として示されるヌクレオチド配列又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８
を含むヌクレオチド配列の変異体、相同体、誘導体又は
フラグメントとハイブリダイズし得るヌクレオチド配列
の相補体であるヌクレオチド配列、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１、３又は１４として述べられているヌクレオ
チド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレオチド配列の相補体
とハイブリダイズし得るヌクレオチド配列、（ｊ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１、３又は１４として示されるヌクレ
オチド配列又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６及び／又はＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８を含むヌクレオチド配列の変異
体、相同体、誘導体又はフラグメントの相補体とハイブ
リダイズし得るヌクレオチド配列、（ｋ）（ａ）、
（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、
（ｈ）、（ｉ）又は（ｊ）で定義されたヌクレオチドに
対して遺伝暗号の結果として縮重しているヌクレオチド
配列、（ｌ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、
（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）及び
／又は（ｋ）のいずれか１つを含むヌクレオチド配列。
【００４６】本発明の他の態様には以下のものがある。
本発明による単離されたヌクレオチド配列又はタンパク
質配列。本発明のヌクレオチド配列の発現パターン又は
その発現産物の活性に影響を与え得る薬剤を同定するア
ッセイ方法であって、本発明のヌクレオチド配列又はそ
の発現産物（「ＥＰ」）に薬剤を曝露し、本発明のヌク
レオチド配列又はその発現産物を薬剤が（発現パターン
又は活性に影響を与えるように）調節（モジュレート）
するか否かを決定することから成る、アッセイ方法。
【００４７】本発明のアッセイ方法によって同定される
薬剤。本発明のアッセイ方法によって同定され、本発明
によるＰＤＥモジュレーション効果を有することがこれ
まで知られていなかった薬剤。
【００４８】（ａ）本発明のアッセイを実施し、（ｂ）
本発明のヌクレオチド配列の発現パターン又はその発現
産物の活性に影響を与える１つ又はそれ以上の薬剤を同
定し、（ｃ）１つ又はそれ以上の同定された薬剤を大量
に製造する、工程を含む方法。
【００４９】（ａ）本発明によるアッセイを実施し、
（ｂ）本発明のヌクレオチド配列の発現パターン又はそ
の発現産物の活性に影響を与える１つ又はそれ以上の薬
剤を同定し、（ｃ）１つ又はそれ以上の同定された薬剤
を含む医薬組成物を製造する、工程を含む方法。
【００５０】（ａ）本発明によるアッセイを実施し、
（ｂ）本発明のヌクレオチド配列の発現パターン又はそ
の発現産物の活性に影響を与える１つ又はそれ以上の薬
剤を同定し、（ｃ）１つ又はそれ以上の同定される薬剤
を、本発明のヌクレオチド配列の発現パターン又はその
発現産物に対して別の効果を引き起こすように修飾す
る、工程を含む方法。
【００５１】本発明のヌクレオチド配列の発現パターン
又はその発現産物の活性に影響を与える医薬品の製造に
使用する、本発明によるアッセイによって同定された薬
剤の用途。
【００５２】対象（哺乳類、好ましくはヒトを含む）に
対し、本発明のヌクレオチド配列の発現パターン又はそ
の発現産物の活性を調節し得る薬剤の有効量をデリバリ
ー（投与又は曝露等）することを含む、対象を治療する
方法。
【００５３】対象（哺乳類、好ましくはヒトを含む）に
対し、本発明によるアッセイによって同定された薬剤の
有効量をデリバリー（投与又は曝露等）することを含
む、対象を治療する方法。
【００５４】披検者に対し本発明のヌクレオチド配列又
はその発現産物を投与し、披検者に免疫応答を引き起こ
す方法。 ［ＰＤＥ１１（ＰＤＥＸＩ）]以上のように、本発明は
新規ＰＤＥ酵素−ＰＤＥ１１と呼ぶ（又はＰＤＥＸＩと
も表記される）−及びそれをコードするヌクレオチド配
列に関する。
【００５５】本発明はまた新規な核酸及びアミノ酸配列
の、疾患の診断及び治療における用途に関する。本発明
はまた新規な核酸及びアミノ酸配列の、ホスホジエステ
ラーゼ活性を調節し得る薬剤を評価及び／又はスクリー
ニングするのに使用する用途に関する。本発明はさらに
ホスホジエステラーゼ活性を調節し得る薬剤を評価及び
／又はスクリーニングする新規な核酸及びアミノ酸配列
を包含又は発現する、遺伝子工学的に処理された宿主細
胞に関する。
【００５６】ここに使用される「ＰＤＥ１１」という用
語はこれまで特徴づけされていなかった新規なＰＤＥフ
ァミリーを指す。例として、我々は２種のヒトＰＤＥ１
１のアイソザイム−ＰＤＥ１１Ａ１及びＰＤＥ１１Ａ２
と呼ぶ（それぞれＨＳＰＤＥ１１Ａ１、ＨＳＰＤＥ１１
Ａ２と言及される場合もある）−を同定した。ＰＤＥ１
１Ａ２はＰＤＥ１１Ａ１のスプライシング変異体である
と考えられる。我々はまたマウスの配列−ＰＤＥ１１Ａ
３と呼ぶ（ＭｍＰＤＥ１１Ａ３と言及される場合もあ
る）−を同定した。我々はまたラットの配列を同定し−
ＰＤＥ１１Ａ４と呼ぶ（ＲｔＰＤＥ１１Ａ４と言及され
る場合もある）−一部の配列を決定した。
【００５７】便宜上、特に断らなければ、ＰＤＥ１１と
言えば、ＰＤＥ１１Ａ１及び／又はＰＤＥ１１Ａ２及び
／又はＰＤＥ１１Ａ３及び／又はＰＤＥ１１Ａ４を含む
ものとする。
【００５８】ＰＤＥ１１（例えば、アイソザイムＰＤＥ
１１Ａ１及び／又はＰＤＥ１１Ａ２）は、様々な源に存
在し、そこから入手できると考えられる。例えば、ＰＤ
Ｅ１１は線条体及び海綿体に見出される。別の例では、
ＰＤＥ１１はヒト及びマウスだけでなく、ラットからも
採取できる。ＰＤＥ１１はまた、例えば、ウシ、羊、
豚、ウマ、といった多くの他の源にも存在していると考
えられる。好ましくは、本発明は上記の源の哺乳類のＰ
ＤＥ１１を含むが、それらに限定されるものではない。
【００５９】ＰＤＥ１１は自然界に存在している形体と
同じものでもよいが、本態様にとっては、ＰＤＥ１１
は、好ましくは非天然のアミノ酸配列（即ち、その自然
の形体において及びその自然環境において存在していな
い）であるか又はその変異体、相同体、フラグメント又
は誘導体である。さらに、又は代わりに、ＰＤＥ１１は
単離されたＰＤＥ１１及び／又は精製されたＰＤＥ１１
である。ＰＤＥ１１は天然か否かを問わずあらゆる適切
な源から入手又は生成し得るし、合成、半合成又は組換
えのものであってもよい。
【００６０】ＰＤＥ１１のコード配列は自然界に存在し
ている形体と同じものでもよいが、本態様にとっては、
ＰＤＥ１１のコード配列は、好ましくは非天然のヌクレ
オチド配列（即ち、その自然の形体において及びその自
然環境において存在していない）であるか又はその変異
体、相同体、フラグメント又は誘導体である。さらに、
又は代わりに、ＰＤＥ１１のコード配列は単離されたＰ
ＤＥ１１のコード配列及び／又は精製されたＰＤＥ１１
のコード配列である。ＰＤＥ１１のコード配列は天然か
否かを問わずあらゆる適切な源から入手し又は生成し得
るし、合成、半合成又は組換えのものであってもよい。
【００６１】ＰＤＥ１１はｃＧＭＰからＧＭＰへの変換
を触媒すると考えられる。ｃＧＭＰは男性の勃起反応に
おけるメッセンジャーである。それ故、ＰＤＥ１１の活
性を阻害すれば、ｃＧＭＰ濃度を高め、男性の勃起反応
を強める可能性がある。従って、ＰＤＥ１１及び／又は
そのコード配列及び／又はそれとハイブリダイズし得る
配列は、男性の勃起不全を治療する薬剤の候補物質をス
クリーニングするのに有用である。さらに、ＰＤＥ１１
及び／又はそのコード配列及び／又はそれとハイブリダ
イズし得る配列は、女性の性機能不全を治療する薬剤の
候補物質をスクリーニングするのに有用であると考えら
れる。また、ＰＤＥ１１及び／又はそのコード配列及び
／又はそれとハイブリダイズし得る配列は、薬剤の候補
物質の様々なＰＤＥに対する選択性を試験するのに有用
である。
【００６２】本発明の好ましい態様は、組換えＰＤＥ１
１酵素及びＰＤＥ１１酵素をコードする組換えヌクレオ
チド配列を含む。好ましくは、本発明の組換えＰＤＥ１
１酵素及び／又は組換えヌクレオチド配列は、哺乳類の
組換えＰＤＥ１１酵素及び／又は哺乳類の組換えヌクレ
オチド配列である。
【００６３】本発明によれば、組換えＰＤＥ１１酵素
は、式Ｉとして示された式を少なくとも有する。ＰＤＥ
１１をコードするヌクレオチド配列とＰＤＥ１１酵素そ
のもののいずれか又は両方は、ＰＤＥ１１活性に影響を
与え得る薬剤をスクリーニングするために利用できる。
特に、ＰＤＥ１１をコードするヌクレオチド配列又はＰ
ＤＥ１１酵素そのものは、ＰＤＥ１１活性を阻害し得る
薬剤をスクリーニングするために利用できる。さらに、
ＰＤＥ１１をコードするヌクレオチド配列又はＰＤＥ１
１酵素そのものは、ＰＤＥ１１活性を選択的に阻害する
ように、ＰＤＥ１１活性に選択的に影響を与える薬剤を
スクリーニングするために利用できる。
【００６４】さらに、ＰＤＥ１１をコードするヌクレオ
チド配列又はそれと相補的である配列は、ヒト細胞にお
けるＰＤＥ１１コード配列の存在を検出するアッセイに
利用できる。このアッセイは、この酵素の組織分布及び
特殊な病態との生物学的関連性に関する情報を提供する
だろう。
【００６５】本発明はまたＰＤＥ１１（その誘導体、フ
ラグメント、相同体又は変異体を含む）に対する抗体も
含む。ＰＤＥ１１の抗体は、ヒト細胞におけるＰＤＥ１
１の存在を検出するアッセイに利用できる。このアッセ
イは、この酵素の組織分布及び特殊な病態との生物学的
関連性に関する情報を提供する。
【００６６】特に、ＰＤＥ１１のアイソザイム（即ち、
ＰＤＥ１１Ａ１及びＰＤＥ１１Ａ２又はＰＤＥ１１Ａ３
又はＰＤＥ１１Ａ４）、それらをコードするヌクレオチ
ド配列、それらと相補的なヌクレオチド配列及びそれら
に対する抗体のうち１つ又はそれ以上は、アイソザイム
の１つに選択的に影響を与える薬剤をスクリーニングす
るアッセイに利用できる。このアッセイは、これらのア
イソザイムそれぞれの組織分布及び特殊な病態との生物
学的関連性に関する情報を提供する。このアッセイはま
た、特殊な組織又は特殊な病態等においてＰＤＥ１１の
発現又は活性に影響を与えるのに有用な薬剤を、試験し
て同定することを可能にするだろう。 ［天然に存在している］ここに使用される「天然に存在
している」は、自然に見出されるアミノ酸配列を有する
ＰＤＥ１１を指す。 ［単離／精製された］ここに使用される「単離された]
又は[精製された]は、自然環境から取り出され、本来共
存している少なくとも１つの他の成分から単離又は分離
された、核酸又はアミノ酸、いずれかの分子を指す。 ［生理活性がある］ここに使用される「生理活性があ
る」は、天然に存在しているＰＤＥ１１と類似の構造的
機能（必ずしも同程度ではなくてもよい）及び／又は、
類似の制御機能（必ずしも同程度ではなくてもよい）及
び／又は、類似の生化学的機能（必ずしも同程度ではな
くてもよい）及び／又は、類似の免疫活性（必ずしも同
程度ではない）を有する本発明によるＰＤＥ１１、例え
ば組換えＰＤＥ１１を指す。特に、本発明のＰＤＥ１１
はサイクリックヌクレオチドを加水分解する能力を有す
るが、それは本発明のＰＤＥ酵素の有する特徴的な活性
の１つである。 ［免疫活性］ここに使用される「免疫活性」は、適切な
動物又は細胞において特異的な免疫反応を引き起こして
特異的な抗体と結合する、天然、組換え又は合成のＰＤ
Ｅ１１又はそのオリゴペプチドの有する能力として定義
される。 ［誘導体］アミノ酸配列と関連して用いられている「誘
導体」という用語は、ＰＤＥ１１の化学修飾を含む。そ
のような修飾の例は、水素をアルキル、アシル又はアミ
ノ基で置換することである。 ［欠失］ここに使用される「欠失」は、ヌクレオチド又
はアミノ酸配列において、それぞれヌクレオチド又はア
ミノ酸残基の１つ又はそれ以上が欠損している変化とし
て定義される。 ［挿入／付加］ここに使用される「挿入」又は「付加」
とは、天然に存在しているＰＤＥと比較して、それぞれ
１つ又はそれ以上のヌクレオチド又はアミノ酸残基の追
加をもたらすヌクレオチド又はアミノ酸配列の変化のこ
とである。 ［置換］ここに使用される「置換」は、１つ又はそれ以
上のヌクレオチド又はアミノ酸をそれぞれ別のヌクレオ
チド又はアミノ酸に置き換えることより生じる。 ［変異体／相同体］本発明のヌクレオチド配列及び本発
明のアミノ酸配列に関して用いられる「変異体」又は
「相同体」という用語は、配列の対立遺伝子変異と同義
である。
【００６７】特に、ここで用いられている「相同性」と
いう用語は「同一性」と同等である。つまり、本発明の
ヌクレオチド配列及び本発明のアミノ酸配列に関する配
列の相同性は、１つ又はそれ以上の配列を他の配列と単
純に「眼球」比較（即ち、厳密な比較）し、他の配列が
当該の配列と少なくとも７５％の同一性を有するかどう
か確かめることによって、決定し得る。相対的な配列相
同性（即ち、配列同一性）は、２つ又はそれ以上の配列
間の相同性（％）を計算できる市販のコンピュータ・プ
ログラムによっても決定し得る。ＣＬＵＳＴＡＬはこの
ようなコンピュータ・プログラムの典型的な例である。
【００６８】配列相同性（又は同一性）は、適切な相同
性アルゴリズム、例えばデフォルト（ｄｅｆａｕｌｔ）
・パラメータを利用しても決定され得る。有利には、Ｂ
ＬＡＳＴアルゴリズムはパラメータをデフォルト値に設
定して使用される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムの詳細は、
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂ
ＬＡＳＴ／ｂｌａｓｔ＿ｈｅｌｐ．ｈｔｍｌに記載され
ており、これを援用してここに取り込む。検索パラメー
タは以下のように定義され、有利には、定義されたデフ
ォルト・パラメータに設定する。
【００６９】有利には、ＢＬＡＳＴによって評価すると
き、「実質的な相同」とは、少なくとも約７、好ましく
は少なくとも約９、最も好ましくは１０又はそれ以上の
ＥＸＰＥＣＴ値に一致する配列に等しい。ＢＬＡＳＴ検
索におけるＥＸＰＥＣＴのデフォルト閾値は通常１０で
ある。
【００７０】ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａ
ｌｉｇｎｍｅｎｔ ＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）は、ｂｌａ
ｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ
及びｔｂｌａｓｔｘというプログラムによって使用され
る帰納的な検索アルゴリズムであり、上記プログラムは
地検の有意性を、ＫａｒｌｉｎとＡｌｔｓｃｈｕｌの統
計手法（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇ
ｏｖ／ＢＬＡＳＴ／ｂｌａｓｔ＿ｈｅｌｐ．ｈｔｍｌを
参照せよ）にいくつかの改良点を加えた手法を用いて判
断するものである。これらのＢＬＡＳＴプログラムは、
配列類似性を検索するために手を加え、例えば疑義配列
との相同体を同定できるようにしたものである。これら
のプログラムはモチーフのスタイルの検索には一般に有
用ではない。配列データベースの類似性検索における基
本的な課題に関する論議については、Ａｌｔｓｃｈｕｌ
等の論文（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
６：１１９〜１２９を参照せよ。
【００７１】ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｉ
ｈ．ｇｏｖで入手可能な５つのＢＬＡＳＴプログラムは
以下のタスクを実行する：ｂｌａｓｔｐは、アミノ酸の
疑義配列をタンパク質の配列データベースに対して比較
する。
【００７２】ｂｌａｓｔｎは、ヌクレオチドの疑義配列
をヌクレオチドの配列データベースに対して比較する。
ｂｌａｓｔｘは、ヌクレオチドの疑義配列（２本鎖）の
６−フレーム（ｆｒａｍｅ）の概念的翻訳産物をタンパ
ク質の配列データベースに対して比較する。
【００７３】ｔｂｌａｓｔｎは、タンパク質の疑義配列
を全ての６−読み取りフレーム（２本鎖）において力学
的に翻訳されるヌクレオチドの配列データベースに対し
て比較する。
【００７４】ｔｂｌａｓｔｘは、ヌクレオチドの疑義配
列の６−フレーム翻訳をヌクレオチド配列データベース
の６−フレーム翻訳と比較する。ＢＬＡＳＴでは以下の
検索パラメータを用いる。
【００７５】ＨＩＳＲＴＯＧＲＡＭは、各検索スコアの
ヒストグラムを表示する。デフォルトはイエスである
（ＢＬＡＳＴマニュアルのパラメータＨを参照せよ）。
ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮＳは、報告される一致配列の簡
略記載数を特定された数へ制限する。デフォルト限界は
１００の記載である（マニュアルのパラメータＶの頁を
参照せよ）。また、ＥＸＰＥＣＴ及びＣＵＴＯＦＦも参
照せよ。
【００７６】ＡＬＩＧＮＭＥＮＴＳはハイスコア・セグ
メント・ペア（ＨＳＰ）として報告されるデータベース
配列を所定の数へ制限する。デフォルト限界は５０であ
る。これよりも多くのデータベース配列が統計的有意性
の報告閾値を満足させるならば（以下に示すＥＸＰＥＣ
Ｔ及びＣＵＴＯＦＦを参照せよ）、最大の統計的有意性
に帰される一致だけが報告される（ＢＬＡＳＴマニュア
ルのパラメータＢを参照せよ）。
【００７７】ＥＸＰＥＣＴはデータベース配列に対する
一致を報告する統計的有意性の閾値であり、デフォルト
値は１０である。１０の一致は、ＫａｒｌｉｎとＡｌｔ
ｓｃｈｕｌの推計モデル（１９９０）によれば、単なる
偶然によって見出されると期待される。ある一致による
統計的有意性がＥＸＰＥＣＴ閾値よりも大きければ、こ
の一致は報告されない。より低いＥＸＰＥＣＴ閾値はよ
り厳格（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ）であり、一致が報告され
る頻度を低くする。端数値は許容される（ＢＬＡＳＴマ
ニュアルのパラメータＥを参照せよ）。
【００７８】ＣＵＴＯＦＦは、ハイスコア・セグメント
・ペア（ＨＳＰ）の報告をカットオフする値である。デ
フォルト値はＥＸＰＥＣＴ値より算出される（上記参
照）。データベース配列のＨＳＰが報告されるのは、そ
れらの統計的有意性が、ＣＵＴＴＯＦＦ値に匹敵するス
コアを有する唯一のＨＳＰによるものと少なくとも同じ
くらい高い場合だけである。より高いＣＵＴＯＦＦ値を
設けるとより厳格（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ）になり、偶然
の一致はより報告されない（ＢＬＡＳＴマニュアルのパ
ラメータＳを参照せよ）。普通、有意性の閾値はＥＸＰ
ＥＣＴを用いてより直感的に処理し得る。
【００７９】ＭＡＴＲＩＸは、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳ
ＴＸ、ＴＢＬＡＳＴＮ及びＴＢＬＡＳＴＸの代替となる
スコアリング・マトリックスを特定する。デフォルト・
マトリックスはＢＬＯＳＵＭ６２（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ
＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２）である。有効な代替
選択は、ＰＡＭ４０、ＰＡＭ１２０、ＰＡＭ２５０及び
ＩＤＥＮＴＩＴＹを含む。ＢＬＡＳＴＮには代替となる
スコアリング・マトリックスがないので、ＢＬＡＳＴＮ
リクエストにＭＡＴＲＩＸ指示を特定するとエラー応答
が帰ってくる。
【００８０】ＳＴＲＡＮＤは、ＴＢＬＡＳＴＮ検索をデ
ータベース配列の上側鎖又は下側鎖に制限する、又は、
ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ又はＴＢＬＡＳＴＸ検索を
疑義配列の上側又は下側の鎖上の読み取りフレームのみ
に制限する。
【００８１】ＦＩＬＴＥＲは、疑義配列の、Ｗｏｏｔｔ
ｏｎ ＆ Ｆｅｄｅｒｈｅｎ（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １７：１４９〜
１６３のＳＥＧプログラムによって決定されるような組
成上の複雑性が低い疑義配列セグメント又は、Ｃｌａｖ
ｅｒｉｅ ＆ Ｓｔａｔｅｓ（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １７：１９１〜
２０１のＸＮＵプログラム又は、ＢＬＡＳＴＮの場合は
Ｔａｔｕｓｏｖ ＆ ＬｉｐｍａｎのＤＵＳＴプログラ
ム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉ
ｈ．ｇｏｖを参照せよ）によって決定されるような短周
期性の内部リピートから成るセグメントを遮蔽する。フ
ィルタリングは統計的に有意であっても生物学的には興
味のない報告をｂｌａｓｔの出力(例えば、酸性、塩基
性又は高プロリンの共通領域に対するヒット)から消去
し、データベース配列に対する特異的な一致のために供
される疑義配列のより生物学的に興味深い領域を残すこ
とができる。
【００８２】フィルター・プログラムによって見出され
る複雑性が低い配列は、ヌクレオチド配列中ではＮによ
り（例えば「ＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮ」のよう
に）、タンパク質配列ではＸにより（例えば「ＸＸＸＸ
ＸＸＸＸＸ」のように）代用される。
【００８３】フィルタリングは疑義配列（又はその翻訳
産物）にのみ適用され、データベース配列には適用され
ない。デフォルト・フィルタリングは、ＢＬＡＳＴＮに
対してはＤＵＳＴであり、他のプログラムに対してはＳ
ＥＧである。
【００８４】ＳＥＧ、ＸＮＵ又はその両方にでも、ＳＷ
ＩＳＳ−ＰＲＯＴの配列に適用したとき、何もマスクさ
れないことは稀ではないので、フィルタリングがいつで
も効果を生むと期待してはならない。さらに、配列が全
体にマスクされてしまい、フィルターのかかっていない
疑義配列に対して報告されたいかなる一致の統計的有意
性も疑うべきであることを示す場合もある。
【００８５】ＮＣＢＩ−ｇｉにより、登録（ａｃｃｅｓ
ｓｉｏｎ）及び／又は（遺伝子）座の名称に加えて、Ｎ
ＣＢＩ ｇｉの同定記号が出力に示される。最も好まし
くは、配列比較は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．
ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴで提供される単純
なＢＬＡＳＴ検索アルゴリズムを用いて実行される。
【００８６】２つの配列の同一性及び類似性を決定する
他のコンピュータ・プログラム方法の例には、ＧＣＧプ
ログラム・パッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ等（１９８
４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
１２：３８７及びＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ等（１９
９０）Ｊ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉｏｌ ４０３〜４１０）が
あるが、それに限定されるものではない。
【００８７】配列の同一性を決定する際にＧａｐ Ｐｅ
ｎａｌｔｉｅｓが用いられるならば好ましくは、以下の
パラメータを使用する：
【００８８】
【表２】 ---------------------------------------------------------------------- ＢＬＡＳＴについて ---------------------------------------------------------------------- ＧＡＰ ＯＰＥＮ ０ ---------------------------------------------------------------------- ＧＡＰ ＥＸＴＥＮＴＩＯＮ ０ ---------------------------------------------------------------------- ---------------------------------------------------------------------- ＣＬＵＳＴＡＬについて ＤＮＡ ＰＲＯＴＥＩＮ ---------------------------------------------------------------------- ＷＯＲＤ ＳＩＺＥ ２ １ Ｋ ｔｒｉｐｅ ---------------------------------------------------------------------- ＧＡＰ ＰＥＮＡＬＴＹ １０ １０ ---------------------------------------------------------------------- ＧＡＰ ＥＸＴＥＮＴＩＯＮ ０．１ ０．１ ---------------------------------------------------------------------- ここに使用される「変異体」、「相同体」、「フラグメ
ント」及び「誘導体」は、配列の対立遺伝子変異を包含
する。
【００８９】「変異体」という用語はここに示されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイズできる配列に相補的な
配列も含む。 ［ハイブリダイゼーション］ここに使用される「ハイブ
リダイゼーション」という用語は、Ｄｉｅｆｆｅｎｂａ
ｃｈ ＣＷ及びＧＳ Ｄｖｅｋｓｌｅｒの論文（１９９
５、ＰＣＲプライマー、研究室マニュアル、コールド・
スプリング・ハーバー出版、プレインビュー、ＮＹ）に
記載されているポリメラーゼ連鎖反応において実行され
るような増幅工程だけでなく、「１本鎖の核酸が塩基対
合を介して相補的な鎖と結合する工程」（Ｃｏｏｍｂｓ
Ｊ （１９９４）「バイオテクノロジー辞典」、スト
ックトン出版、ニューヨーク、ＮＹ）も含む。
【００９０】ハイブリダイゼーション条件は、Ｂｅｒｇ
ｅｒとＫｉｍｍｅｌ（１９８７、分子クローニング技法
のガイド、「酵素学の手法」１５２巻、アカデミック出
版、サンディエゴ、ＣＡ）に示されるように、核酸結合
複合体の融点（Ｔｍ）に基づいており、「ストリンジェ
ンシィ」の定義は以下のように説明される。
【００９１】ハイブリダイゼーションのストリンジェン
シィとはポリ核酸ハイブリッドが安定である条件を指
す。このような条件は当業者には明らかである。当業者
に知られているように、ハイブリッドの安定性は、配列
相同性が１％減少するごとに約１〜１．５℃減少するハ
イブリッドの融点（Ｔｍ）に反映される。一般に、ハイ
ブリッドの安定性はナトリウムイオンの濃度及び温度の
関数である。通常、より高位のストリンジェンシィ条件
下でハイブリダイゼーション反応を実施し、その後、様
々なストリンジェンシィで洗浄する。
【００９２】ここに使用される、高位のストリンジェン
シィとは１Ｍナトリウムイオン、６５〜６８℃において
安定なハイブリッドを形成する核酸配列にのみハイブリ
ダイゼーションを許容する条件を指す。
【００９３】最大ストリンジェンシィは通常約Ｔｍ−５
℃（プローブの融点より５℃低い温度）で起こる。高位
ストリンジェンシィは、プローブの融点より約５℃〜１
０℃低い温度で起こる。高位ストリンジェンシィ条件
は、例えば、６ｘＳＳＣ、５ｘデンハート（Ｄｅｎｈａ
ｒｄｔ）液、１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、
０．１Ｍピロリン酸ナトリウム、非特異的競合物として
の変性サケ精子ＤＮＡ０．１ｍｇ／ｍｌを含む水溶液に
おけるハイブリダイゼーションによってもたらされる。
ハイブリダイゼーションの後、高位ストリンジェンシィ
洗浄が幾つかの工程においてなされてもよく、最終洗浄
（約３０分）は、０．２〜０．１ｘＳＳＣ、０．１％Ｓ
ＤＳ、ハイブリダイゼーション温度という条件下で実施
する。
【００９４】中位又は中間的ストリンジェンシィは通常
プローブのＴｍより約１０℃〜２０℃低い温度で起こ
る。低位ストリンジェンシィは通常プローブのＴｍより
約２０℃〜２５℃低い温度で起こる。
【００９５】当業者に理解されるように、最大ストリン
ジェンシィ・ハイブリダイゼーションは同一のポリヌク
レオチド配列を同定又は検出するのに利用され、中位
（又は低位）ストリンジェンシィ・ハイブリダイゼーシ
ョンは類似又は関連したポリヌクレオチド配列を同定又
は検出するのに利用される。
【００９６】中位ストリンジェンシィは、上記の溶液の
ハイブリダイゼーションと同じだが約６０〜６２℃であ
る条件を指す。この場合、最終洗浄は、１ｘＳＳＣ、
０．１％ＳＤＳ、ハイブリダイゼーション温度という条
件下で実施する。
【００９７】低位ストリンジェンシィは、上記の溶液で
約５０〜５２℃におけるハイブリダイゼーションに等し
い条件を指す。この場合、最終洗浄は、２ｘＳＳＣ、
０．１％ＳＤＳ、ハイブリダイゼーション温度という条
件下で実施する。
【００９８】以上の反応条件は、様々な緩衝液（例、ホ
ルムアミドを基本とする緩衝液）と温度を用いて構築
し、繰り返してよい。デンハート溶液とＳＳＣは他の適
切なハイブリダイゼーション緩衝液と同じように当業者
には良く知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等編
（１９８９）分子クローニング：研究室マニュアル、コ
ールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー出版、ニ
ューヨーク、又はＡｕｓｕｂｅｌ等編（１９９０）分子
生物学の最新プロトコール、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ社を参照せよ）。最適なハイブリダイゼーシ
ョン条件は、プローブの長さ及びＧＣ含量もある役割を
果たしているので、経験的に決定されるべきである。 ［本発明のポリペプチド］本発明のポリペプチドは実質
的に単離された形態で存在する可能性がある。ポリペプ
チドはその意図された目的を干渉しない担体又は希釈剤
と混合してよく、依然として実質的に単離されたものと
みなされると理解される。本発明のポリペプチドはまた
実質的に精製された形態で存在する可能性もあるが、こ
の場合、一般に、調製物のポリペプチドの90％以上、例
えば、95％、98％又は99％が本発明のポリペプチドであ
る調製物中にポリペプチドを含む。本発明のポリペプチ
ドは、例えばヒスチジン残基の付加によりその精製を支
援する、又はシグナル配列の付加により以下に論じるよ
うな細胞からの分泌を促進するように修飾してもよい。
【００９９】本発明のポリペプチドは合成的手段（例え
ば、Ｇｅｙｓｅｎ等（1996）により記載されているよう
な）又は以下に論じるような組換え技術によって製造で
きる。
【０１００】好ましい実施形態では、本発明のアミノ酸
配列そのものには、本発明による天然のＰＤＥ１１は、
それが自然環境に存在して、やはり自然環境に存在して
いる天然のヌクレオチドコード配列によって発現され、
そのヌクレオチド配列がやはり自然環境に存在している
天然のプロモータのコントロール下にある場合は、包含
されない。わかりやすくするために、この好ましい実施
形態を「非天然型アミノ酸配列」と呼ぶ。
【０１０１】本発明の酵素のアミノ酸配列に関する「変
異体」、「相同体」又は「フラグメント」という用語
は、その配列から又はその配列に１つ（又はそれ以上）
のアミノ酸が代替、変異、修飾、置換、欠損又は付加し
たものであり、その結果として生じる酵素は、ＰＤＥ１
１活性、好ましくはＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５として示
される酵素と少なくとも同等の生理活性を有する。特
に、「相同体」という用語は構造及び／又は機能に関す
る相同性を包含する。配列相同性に関しては、式Ｉとし
て示される配列に対して好ましくは少なくとも７５％、
より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少な
くとも９０％の相同性がある。式Ｉとして示される配列
に対して、より好ましくは少なくとも９５％、より好ま
しくは少なくとも９８％の相同性がある。ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．２又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４又はＳＥＱ Ｉ
ＤＮｏ．１５として示される配列、又はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１７及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９を含む
アミノ酸配列に対して、好ましくは少なくとも７５％、
より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少な
くとも９０％の相同性がある。ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２
又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１５として示される配列に対して、より好ましくは少な
くとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の相同
性がある。
【０１０２】通常、どんなアミノ酸置換をしても、この
アミノ酸配列の疎水性／親水性は維持されるべきであ
る。変更後の配列が、本発明によるＰＤＥ酵素として作
用する能力を保持している限り、アミノ酸置換、例えば
１、２又は３〜１０、２０又は３０の置換がなされても
よい。アミノ酸置換は、例えば血中半減期を増加させる
ために非天然に存在している類縁体を使用してもよい。
【０１０３】本発明のアミノ酸配列は、それをコードし
ているヌクレオチド配列の、適切な発現系における発現
によって製造し得る。さらに、又は他に、タンパク質そ
のものの全体又は部分は、ＰＤＥのアミノ酸配列を合成
する化学的方法によって製造し得る。例えば、ペプチド
は固相法によって合成し、樹脂から切離し、調製的高速
液体クロマトグラフィーによって精製することができる
（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８３）「タンパク
質の構造と分子的原理」、ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎ
ｄ Ｃｏ．ニューヨーク ＮＹ）。合成ペプチドの組成
はアミノ酸分析又は配列決定法（例えば、エドマン分解
法）によって確認し得る。
【０１０４】直接的ペプチド合成は様々な固相技術を利
用してなし得る（ＲｏｂｅｒｇｅＪＹ等（１９９５）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２６９：２０２〜２０４）。自動合成
は、例えばＡＢＩ ４３ １Ａ ペプチド・シンセサイ
ザー（パーキン・エルマー社）を製造業者の指示書に従
って操作することによって、可能である。さらに、ＰＤ
Ｅのアミノ酸配列又はそのいかなる部分も直接合成の間
に変更し得るし、及び／又は化学的方法を用いて、他の
サブユニットからの配列又はそのいかなる部分をも結合
して、変異したポリペプチドを製造することも可能であ
る。
【０１０５】本発明の別の実施形態では、融合タンパク
質をコードするために、ＰＤＥの天然型、修飾型又は組
換え型の配列を異種の配列と結合させることが可能であ
る。例えば、ＰＤＥ活性の阻害剤を求めてペプチド・ラ
イブラリーをスクリーニングするためには、市販の抗体
によって認識される異種エピトープを発現するキメラＰ
ＤＥタンパク質をコードすることが有用であろう。融合
タンパク質はまた、ＰＤＥ配列と異種タンパク配列の間
に位置する開裂部位を含み、ＰＤＥを異種の部分から切
離して精製することができるように設計され得る。
【０１０６】ＰＤＥはまた、タンパク精製を促進させる
ための１つ又はそれ以上のポリペプチド・ドメインが付
加された組換えタンパク質としても発現される。このよ
うな精製促進ドメインは、固定化金属上の精製を可能に
するヒスチジン−トリプトファン・モジュールのような
金属キレート・ペプチド（Ｐｏｒａｔｈ Ｊ（１９９
２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ ３−．２
６３２８ １）、固定化免疫グロブリン上の精製を可能
にするプロテインＡドメイン及びＦＬＡＧＳ拡張／親和
性精製システム（イミュネクス社、シアトル、ＷＡ）に
利用される領域を含むが、これらに限定されない。精製
ドメインとＰＤＥの間にＸＡ因子又はエンテロキナーゼ
（インビトロジェン社、サンディエゴ、ＣＡ）のような
切り離し可能なリンカー配列を導入することは、精製を
促進する上で、有用である。
【０１０７】ＰＤＥ１１の特定のなアミノ酸配列は、Ｓ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２及びＳＥＱＩＤ Ｎｏ．４及びＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７
及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９として示される。しかし
ながら、本発明は、ＳＥＱＩＤ Ｎｏ．２又は４又は１
５又は１７又は１９というアミノ酸配列に対して少なく
とも６０％の同一性（より好ましくは少なくとも７５％
の同一性）を有するアミノ酸配列を含む、ＰＤＥ１１フ
ァミリーに由来する他のものをコードするアミノ酸配列
も含む。すでに示したように、本発明によるＰＤＥ１１
ファミリーの適切な一般式は式Ｉ又は式ＩＩ〜式ＶＩＩ
の一つとして提示される。
【０１０８】本発明のポリペプチドはまた提示されたア
ミノ酸配列及びその変異体のフラグメントを含む。適切
なフラグメントのサイズは少なくとも５つ、例えば、少
なくとも１０、１２、１５又は２０個のアミノ酸であ
る。
【０１０９】本発明のポリペプチドはまた、保存された
置換を含めて、１つ又はそれ以上の（例えば、少なくと
も２、３、５又は１０）置換、欠失又は挿入を含むよう
に修飾してもよい。
【０１１０】保存された置換は、第二カラムの同一ブロ
ック及び好ましくは第三カラムの同一ラインのアミノ酸
がお互いに置換される、保守的な置換を示す以下の表に
よってなされる。
【０１１１】
【表３】 ---------------------------------------------------------------------- 脂肪族 非極性 ＧＡＰ ------------------ ＩＬＶ ---------------------------------------------------------------------- 極性−非荷電性 ＣＳＴＭ ------------------ ＮＱ ---------------------------------------------------------------------- 極性−荷電性 ＤＥ ------------------ ＫＲ ---------------------------------------------------------------------- 芳香族 ＨＦＷＹ ---------------------------------------------------------------------- その他 ＮＱＤＥ ---------------------------------------------------------------------- ［本発明のヌクレオチド配列］ここに使用される「ヌク
レオチド配列」という用語は、オリゴヌクレオチド配列
又はポリペプチドヌクレオチド配列及びその変異体、相
同体、フラグメント及び誘導体（その一部等）を指す。
ヌクレオチド配列は、ゲノム又は合成又は組換えを起源
とし、センス又はアンチセンス鎖のいずれかを表わす２
本鎖又は１本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡであり得る。
【０１１２】好ましくは、「ヌクレオチド配列」という
用語はＤＮＡを意味する。より好ましくは、「ヌクレオ
チド配列」という用語は、組換えＤＮＡ技術を利用して
製造されたＤＮＡ（即ち、組換えＤＮＡ）を意味する。
【０１１３】好ましい実施形態では、自然環境に存在し
ている本発明の天然のヌクレオチド配列は、それがやは
り自然環境に存在している天然のプロモータのコントロ
ール下にある場合は、本発明のヌクレオチド配列そのも
のには包含されない。わかりやすくするために、この好
ましい実施形態を「非天然型ヌクレオチド配列」と呼
ぶ。
【０１１４】本発明のヌクレオチド配列はそこに合成的
又は修飾されたヌクレオチドを含む場合がある。オリゴ
ヌクレオチドに対する様々なタイプの修飾が多数この技
術分野で知られている。それはホスホン酸メチル及びホ
スホロチオエート骨格分子の３'及び／又は５'末端にア
クリジン又はポリリジン鎖を付加することを含む。本発
明の目的のためにはここに示されているヌクレオチド配
列は当該技術分野で利用し得るあらゆる方法によって修
飾してよい。このような修飾は本発明のヌクレオチド配
列のインビボ活性又は寿命を高めるために実施され得
る。
【０１１５】本発明はまた、ここに示された配列に相補
的なヌクレオチド配列又はあらゆるその誘導体、フラグ
メント又は誘導体を含む。その配列がそのフラグメント
に相補的であるならば、その配列は他の生物体等に存在
する同様のコード配列を同定するためのプローブとして
利用し得る。
【０１１６】本発明はまた、ここに示された配列にハイ
ブリダイズできるヌクレオチド配列又はあらゆるその誘
導体、フラグメント又は誘導体を含む。本発明はまた、
ここに示された配列と相補的である配列にハイブリダイ
ズできるヌクレオチド配列又はあらゆるその誘導体、フ
ラグメント又は誘導体を含む。
【０１１７】「変異体」という用語はまた、ここに示さ
れたヌクレオチド配列にハイブリダイズできる配列と相
補的である配列を含む。好ましくは、「変異体」という
用語は、ストリンジェントな条件（例えば、６５℃、
０．１ｘＳＳＣ｛１ｘＳＳＣは、０．１５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．
０｝）下でここに示されたヌクレオチド配列にハイブリ
ダイズできる配列と相補的である配列を含む。
【０１１８】本発明はまた、（ここに示された配列の相
補配列を含めて）本発明のヌクレオチド配列にハイブリ
ダイズできるヌクレオチド配列に関する。本発明はま
た、（ここに示された配列の相補配列を含めて）本発明
のヌクレオチド配列にハイブリダイズできる配列と相補
的であるヌクレオチド配列に関する。
【０１１９】また、中位から最高のストリンジェンシィ
条件下でここに示されたヌクレオチド配列にハイブリダ
イズできるポリヌクレオチド配列も本発明の範囲に含ま
れる。
【０１２０】好ましい態様では、本発明は、ストリンジ
ェントな条件（例えば６５℃、０．１ｘＳＳＣ）下で本
発明のヌクレオチド配列にハイブリダイズできるヌクレ
オチド配列を含む。
【０１２１】典型的な核酸はまた、ＰＤＥ１１タンパク
質をコードして、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥ
ＱＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８とし
て示されたＤＮＡ配列又はそのＤＮＡ配列から選択され
たフラグメントにハイブリダイズするヌクレオチド配列
として特徴づけることができる。好ましいのは、高位ス
トリンジェンシィ条件下でＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又は
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤＮｏ．１４又
はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１８の配列とハイブリダイズする、ＰＤＥ１１のコード
配列である。
【０１２２】有利には、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１のフラグメント又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３のフ
ラグメント又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ
ＩＤＮｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８のフラグ
メントと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
できる核酸配列を提供する。好ましくは、フラグメント
は長さが１５から５０塩基である。有利には、長さが約
２５塩基である。
【０１２３】本発明の好ましい酵素をコードするヌクレ
オチド配列に関する「変異体」、「相同体」又は「フラ
グメント」という用語は、その配列から又はその配列に
１つ（又はそれ以上）の核酸が代替、変異、修飾、置
換、欠損又は付加したものであり、その結果として生じ
るヌクレオチド配列は、ＰＤＥ１１活性、好ましくはＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又は
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４として示される配列によって
コードされる酵素と少なくとも同等の生理活性を有する
酵素をコードする又はコードする能力がある。特に、
「相同体」という用語は構造及び／又は機能に関する相
同性を包含し、得られたヌクレオチド配列はＰＤＥ１１
活性を有する酵素をコードする又はコードする能力があ
る。配列相同性に関しては、式Ｉとして示されるアミノ
酸配列をコードするヌクレオチド配列に対して好ましく
は少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５
％、より好ましくは少なくとも９０％の相同性がある。
式Ｉとして示されるアミノ酸配列をコードするヌクレオ
チド配列配列に対して、より好ましくは少なくとも９５
％、より好ましくは少なくとも９８％の相同性がある。
好ましくは、配列相同性に関して、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤＮ
ｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１８として示される配列に対して、好ましく
は少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５
％、より好ましくは少なくとも９０％の相同性がある。
ＳＥＱ ＩＤＮｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又は
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４として示される配列に対し
て、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは
少なくとも９８％の相同性がある。
【０１２４】すでに示したように、本発明はＰＤＥ１１
をコードするＤＮＡ配列（好ましくはｃＤＮＡ配列）に
関する。特に、本発明は、ＰＤＥ１１Ａ１又はＰＤＥ１
１Ａ２又はＰＤＥ１１Ａ３又はＰＤＥ１１Ａ４をコード
するｃＤＮＡ配列に関する。
【０１２５】本発明はまたＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又は
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱＩＤ Ｎｏ．１４又
はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１８又はそれら配列の対立遺伝子変異のＤＮＡ配列を含
むＤＮＡセグメントに関する。
【０１２６】本発明はまた前述のＤＮＡ配列又はその対
立遺伝子変異が取り込まれた宿主細胞における発現によ
って製造されたポリペプチドに関する。本発明の特に好
ましい態様は、（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２又はＳＥＱ
ＩＤＮｏ．４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１７又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９のよ
うな）式Ｉのアミノ酸配列を含むポリペプチドに関す
る。例えば、本発明は、（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２又は
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５
又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７又はＳＥＱ ＩＤＮｏ．
１９のような）式Ｉのアミノ酸配列を含む単離されたポ
リペプチドに関する。
【０１２７】本発明はまた、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又
はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１
４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１８またはその対立遺伝子変異のＤＮＡ配列を含む
ＤＮＡに関する。
【０１２８】本発明はまた、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又
はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１
４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１８またはその対立遺伝子変異のＤＮＡ配列を含む
非天然型のＤＮＡに関する。
【０１２９】本発明の特に好ましい態様は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳ
ＥＱＩＤ Ｎｏ．１８またはその対立遺伝子変異のＤＮ
Ａ配列を含む組換えＤＮＡに関する。
【０１３０】本発明のポリペプチドヌクレオチドは本発
明のポリペプチドをコードする核酸配列を含む。遺伝暗
号の縮重の結果として、ある特定のアミノ酸をコードす
るのに種々様々なポリヌクレオチドがあることが理解さ
れよう。
【０１３１】ここに説明されたアミノ酸配列を知ること
によって、本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡ
及び／又はゲノム・クローンのような部分長及び全長の
核酸を設計することができる。例えば、本発明のポリヌ
クレオチドはここに示されたアミノ酸配列をコードする
配列をターゲットするように設計されたプライマーを用
いる縮重ＰＣＲを利用することによって得られる。通常
プライマーには多種の縮重ポジションがある。しかしな
がら、縮重を最小化するためには、メチオニンのような
唯一のトリプレットによってコードされるアミノ酸を含
む、ここに示したようなアミノ酸配列の領域をコードす
る配列が選択される。さらに、配列は、その核酸がＰＣ
Ｒ手法の鋳型ＤＮＡとして用いられる生物体のコドン使
用を考慮して選択される。ＰＣＲは、既知の配列に対し
て単一の配列（非縮重）プライマーで配列をクローニン
グするのに利用される条件よりも低位のストリンジェン
シィ条件で用いられる。
【０１３２】ＰＣＲによって得られる、本発明のポリペ
プチドフラグメントをコードする核酸配列は、ハイブリ
ダイゼーションによりライブラリーをスクリーニングす
る技術を利用して、より大きな配列を得るために利用さ
れる可能性がある。例えば、ＰＣＲクローンは放射活性
原子で標識し、他の生物種、好ましくは他の哺乳類由来
のｃＤＮＡ又はゲノム・ライブラリーをスクリーニング
するために利用される可能性がある。ハイブリダイゼー
ション条件は通常中位から高位のストリンジェンシィ
（例えば、０．０３Ｍ塩化ナトリウム及び０．０３Ｍク
エン酸ナトリウム、約５０℃〜約６０℃）である。
【０１３３】また、アミノ酸配列の全て又は部分をコー
ドする縮重核酸プローブを利用して、ｃＤＮＡ及び／又
は他の生物種、好ましくは他の哺乳類由来のゲノム・ラ
イブラリーをプローブしてもよい。しかしながら、初め
にＰＣＲ技術を実行して、さらなるスクリーニング工程
に使用する単一の配列を得ることが望ましい。
【０１３４】本発明によれば、ＰＤＥ１１、該ポリペプ
チドのフラグメント、その融合タンパク質又は機能的同
等物をコードするＰＤＥ１１のポリヌクレオチド配列
は、適切な宿主細胞におけるＰＤＥ１１の発現を指令す
る組換えＤＮＡ分子を生産するために利用し得る。遺伝
暗号本来の縮重性のために実質的に同じ又は機能的に等
価なアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列もＰＤＥ
１１のクローン化及び発現に利用し得る。当業者に理解
されるように、非天然に存在しているコドンを有するＰ
ＤＥをコードするヌクレオチド配列を製造することが有
利であろう。例えば、ＰＤＥ１１の発現速度を高める又
は天然に存在している配列から産生される転写産物より
半減期が長いというような所望の性質を有する組換えＲ
ＮＡ転写産物を製造するために、特殊な原核又は真核細
胞の宿主（Ｍｕｒｒａｙ Ｅ等（１９８９）Ｎｕｃ．Ａ
ｃｉｄ Ｒｅｓ．１７：４７７〜５０８）によって好ま
れるコドンが選択され得る。
【０１３５】上記に記載した技術を利用して得られる本
発明のポリヌクレオチド配列は、上記に記載した技術を
利用して、さらに別の相同的な配列又は変異体を得るた
めに利用し得る。それはまた、例えばポリヌクレオチド
配列を発現させる特定の宿主細胞のコドン選択性を最適
化することを目的として、多様な宿主細胞系において本
発明のポリペプチドを発現させる用途のために修飾され
得る。制限酵素の認識部位を導入する又はポリヌクレオ
チドによってコードされるポリペプチドの性質又は機能
を変更するためには他の配列変換も望ましい。
【０１３６】本発明によって利用され得る変更されたＰ
ＤＥ１１のポリヌクレオチド配列は、結果として同一又
は機能的に同等なＰＤＥをコードするポリヌクレオチド
を生じる種々のヌクレオチド残基の欠失、挿入又は置換
を含む。ＰＤＥ１１タンパク質も、潜在的な変化（ｓｉ
ｌｅｎｔ ｃｈａｎｇｅ）を生じているが機能的には同
等なＰＤＥとなるアミノ酸残基の欠失、挿入又は置換を
有していてもよい。ＰＤＥの生理活性が保持され得る範
囲で、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性及び
／又は両性における類似性を慎重に考慮してアミノ酸置
換はなされるであろう。例えば、電荷が陰性のアミノ酸
にはアスパラギン酸及びグルタミン酸があり、電荷が陽
性のアミノ酸にはリジン及びアルギニンがあり、同様の
親水性値を有する非荷電性の極性基頭部を有するアミノ
酸にはロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、ア
ラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニ
ン、フェニルアラニン及びチロシンがある。
【０１３７】本発明の範囲にはＰＤＥの対立遺伝子も含
まれる。ここに使用される、「対立遺伝子」又は「対立
遺伝子配列」とはＰＤＥの別の形態である。対立遺伝子
は突然変異、即ち核酸配列における変化から生じて、一
般に、構造又は機能が変化しているか又は変化していな
い変更されたｍＲＮＡ又はポリペプチドを産生する。ど
の特定の遺伝子も対立遺伝子の形態を持たないか又は１
つ又は多く持つ。対立遺伝子を生む突然変異的変化は、
通常、アミノ酸の欠失、付加又は置換に帰される。この
ようなタイプの変化はそれぞれ単独で発生するか又は他
の変化とともに、ある特定の配列において１回又はそれ
以上の回数で起こる。
【０１３８】本発明のヌクレオチド配列は様々な理由の
ためにＰＤＥコード配列を変更する−遺伝子産物のクロ
ーニング、プロセシング及び／又は発現を修飾する変更
を含むがそれに限定されない−ために遺伝子工学的に処
理され得る。例えば、新しい制限部位を挿入する、グリ
コシル化パターンを変更する又はコドン選択性を変化さ
せるための部位特異的突然変異誘発のような、本発明技
術分野でよく知られている技術を利用して、突然変異を
導入し得る。
【０１３９】本発明のポリヌクレオチドは、例えばＰＣ
Ｒプライマー、別の増幅反応用プライマーのようなプラ
イマー、例えば放射活性又は非放射活性標識体を用いる
従来の方法によってラベル標識されている等のプローブ
を製造するために利用し得るし、又はポリヌクレオチド
はベクターに導入してクローン化してもよい。このよう
なプライマー、プローブ及び他のフラグメントの長さは
少なくとも１５、好ましくは少なくとも２０、例えば少
なくとも２５、３０又は４０のヌクレオチドであり、こ
こで用いられているような本発明のポリヌクレオチドと
いう用語にも含まれる。
【０１４０】本発明のポリヌクレオチド又はプライマー
には標識ラベルを付してよい。適切なラベルは32Ｐ又は
35Ｓのような放射性同位体、酵素ラベル又はビオチンの
ような他のタンパク質ラベルを含む。このようなラベル
は本発明のポリヌクレオチド又はプライマーに付加して
それ自身知られている技術を用いて検出され得る。
【０１４１】本発明によるＤＮＡポリヌクレオチド及び
プライマーのようなポリヌクレオチドは、組換え的に、
合成的に又は当業者が利用し得る手段によって製造し得
る。それはまた標準的な技術によってクローン化し得
る。
【０１４２】一般に、プライマーは、所望の核酸配列を
得るために、１回ごとに１つのヌクレオチドの段階的製
造法によって、合成的手段によって製造される。自動化
技術を利用してこれを達成する技術はこの技術分野で容
易に実用化されている。
【０１４３】より長いポリヌクレオチドは一般に組換え
手段、例えばＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）クローニ
ング技術を利用して製造される。この方法は、クローン
化が望まれるヌクレオチド配列領域に一対のプライマー
（例えば、約１５〜３０のヌクレオチド）を製造するこ
と、このプライマーを真菌、植物又は原核細胞より得ら
れるｍＲＮＡ又はｃＤＮＡに接触させること、所望の領
域の増幅をもたらす条件下でポリメラーゼ連鎖反応を実
行すること、増幅されたフラグメントを（例えば反応混
合物をアガロースゲル上で精製して）単離すること、及
び増幅されたＤＮＡを回収すること、を含む。プライマ
ーは、増幅されたＤＮＡが適切なクローニング・ベクタ
ーにクローン化され得るように、適切な制限酵素認識部
位を含むように設計し得る。
【０１４４】ＤＮＡ分子は細胞内の安定性及び半減期を
増加させるように修飾し得る。可能な修飾には、分子の
５'及び／又は３'末端にフランキング配列を付加するこ
と又は、分子骨格内部のホスホジエステラーゼ結合に代
えてホスホロチオエート又は２'Ｏ−メチルを利用する
ことが含まれるが、それに限定されるものではない。
【０１４５】前述したように、本発明はまた、ＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤＮｏ．３又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８又はその対立遺伝子変異の全て
又は部分にハイブリダイズできるヌクレオチド配列に関
する。このヌクレオチド配列はＰＤＥ１１発現を修飾す
るアンチセンス技術に利用できる可能性がある。また、
これらの配列（又はその一部）は、プローブとして、又
はポリメラーゼ連鎖反応のプライマーとして利用される
ときは、そのような配列の全て又は部分の増幅用に利用
し得る。
【０１４６】組換えＤＮＡ配列だけでなく、ゲノムの配
列も新薬発見において有用である。ある特定のイソ型の
翻訳タンパク質を阻害するよりそのｍＲＮＡ転写を阻害
するのに極めて有用である場合がある。このことが特に
ＰＤＥ１１に当てはまるのは、様々なスプライシング変
異体を様々なプロモーターから転写させ得るからであ
る。マウスの脳の２'，３'−サイクリック−ヌクレオチ
ド３'ホスホジエステラーゼの転写を複数のプロモータ
に指令させた例がある（Ｋｕｒｉｈａｒａ Ｔ等、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７
０：１０７４［１９９０］）。
【０１４７】本発明の別の有用性は、このＤＮＡ配列が
ひとたび判明すれば、各アイソザイム又はスプライシン
グ変異体を特異的に検出するアッセイを設計するのに必
要な情報がもたらされることである。アイソザイム特異
的ＰＣＲプライマー対は、アイソザイム又はスプライシ
ング変異体の特異的ＤＮＡ配列に関する知識に完全に依
存したアッセイの１例にすぎない。このようなアッセイ
によってアイソザイムのｍＲＮＡが検出され、各アイソ
ザイムの組織分布やある特定の病態に対する生物学的関
連性を知ることが可能になる。それはまた唯一のアイソ
ザイムを自然に発現している可能性がある細胞系の同定
も可能にするが、この発見があれば組換え遺伝子を発現
させる必要性はなくなる。もし特定のＰＤＥ１１アイソ
ザイムがある特定の病態に関連していることが示された
ならば、本発明はアイソザイムｍＲＮＡの存在を検出す
る診断アッセイの設計において有用であろう。
【０１４８】ある生物標本における、ＰＤＥ１１をコー
ドしているヌクレオチド配列の異常レベルは、核酸欠失
又は突然変異のような染色体異常を反映する可能性があ
る。それ故、ＰＤＥ１１をコードしているヌクレオチド
配列は、ＰＤＥコード遺伝子における欠損、突然変異又
は染色体転座のような染色体異常を検出する診断に利用
され得るプローブの基礎を提供する。このような病態で
はＰＤＥ１１遺伝子の発現が変化している可能性がある
か又はＰＤＥ１１コード遺伝子領域に染色体異常が存在
している可能性がある。
【０１４９】本発明の別の実施形態では、ＰＤＥコード
配列は、この技術分野でよく知られている化学的な方法
を利用して、全体的又は部分的に、合成し得る（Ｃａｒ
ｕｔｈｅｒｓ ＭＨ等（１９８０） Ｎｕｃ Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ Ｓｙｍｐ Ｓｅｒ ２１５〜２３、Ｈｏｒ
ｎ Ｔ等（１９８０） Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ ＲｅｓＳ
ｙｍｐ Ｓｅｒ ２２５〜２３２を参照せよ）。 ［調節配列］好ましくは、本発明のポリヌクレオチド
は、選択された宿主細胞によるようなコード配列の発現
を規定し得る調節配列と機能可能に結合している。例え
ば、本発明はこのような調節配列と機能可能に結合した
本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを包含する。
即ち、このベクターは発現ベクターである。
【０１５０】「機能可能に結合している」という用語
は、記載された成分がその意図されたやり方で機能し得
る関係にあるように並置されることを指す。コード配列
に「機能可能に結合している」調節配列は、コントロー
ル配列と同じ条件下でコード配列の発現が達成されるよ
うに結びついている。
【０１５１】「調節配列」という用語はプロモーター、
エンハンサー及び他の発現調節シグナルを含む。「プロ
モーター」という用語は本技術分野の通常の意味で使わ
れる。例えば、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位である。
【０１５２】本発明のポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドの発現を増加させることはまた、例えばプロ
モーターや分泌リーダー領域及び終始領域のような、選
択された発現宿主由来の関心対象となるタンパク質の発
現及び、所望により、分泌を増加させること及び／又は
本発明のポリペプチドの発現の誘導コントロールを規定
することに役立つ異種の調節領域の選択によっても達成
し得る。
【０１５３】好ましくは、本発明のヌクレオチド配列は
少なくともプロモーターに機能可能に結合し得る。本発
明のポリペプチドの発現を指令するためには、本発明の
ポリペプチドをコードしている遺伝子に本来備わってい
るプロモーターとは別に、他のプロモーターを利用し得
る。プロモーターは、所望の発現宿主における本発明の
ポリペプチドの発現を指令する効率性によって選択され
得る。
【０１５４】他の実施形態では、本発明の所望のポリペ
プチドの発現を指令するために、構成的プロモーターが
選択され得る。このような発現構造体が更なる利点を提
供し得るのは、それが誘導基質を含む培養液で発現宿主
を培養する必要性を無くすからである。
【０１５５】真菌の発現宿主において使用されることが
好ましい強力な構成的及び／又は誘導的プロモーターの
例は、キシラナーゼ（ｘｌｎＡ）、フィターゼ、ＡＴＰ
−シンテターゼ、サブユニット９（ｏｌｉＣ）、トリオ
ースリン酸イソメラーゼ（ｔｐｉ）、アルコールデヒド
ロゲナーゼ（ＡｄｈＡ）、α−アミラーゼ（ａｍｙ）、
アミログルコシダーゼ（ｇｌａＡ遺伝子由来のＡＧ）、
アセトアミダーゼ（ａｍｄＳ）及びグリセルアルデヒド
−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ｇｐｄ）の各プロモー
ターの真菌遺伝子から入手できるものである。
【０１５６】強力な酵母プロモーターの例は、アルコー
ルデヒドロゲナーゼ、ラクターゼ、３−ホスホグリセリ
ン酸キナーゼ及びトリオースリン酸イソメラーゼの遺伝
子から入手できるものである。
【０１５７】強力な細菌プロモーターの例は、α−アミ
ラーゼ及びＳＰ０２のプロモーター及び細胞外プロテア
ーゼ遺伝子由来のプロモーターである。発現構築体の誘
導調節を改善するためにハイブリッド・プロモーターも
利用され得る。
【０１５８】プロモーターはさらに適切な宿主における
発現を確保又は増加させる特徴を含み得る。例えば、こ
の特徴とは、プリブナウ（Ｐｒｉｂｎｏｗ）ボックス又
はＴＡＴＡボックスのような保存された領域であり得
る。プロモーターはまた本発明のヌクレオチド配列の発
現レベルに影響を与える（維持、増加、減少させる）他
の配列を含む場合がある。例えば、適切な他の配列に
は、Ｓｈ１−イントロン又はＡＤＨイントロンがある。
他の配列は、温度、化学品、光又はストレスにより誘導
されるような誘導要素配列を含む。また、転写又は翻訳
を増加させるのに適した要素配列も存在し得る。後者の
例はＴＭＶ５'シグナル配列（Ｓｌｅａｔ、Ｇｅｎｅ
２１７［１９８７］２１７〜２２５、及びＤａｗｓｏ
ｎ、ＰｌａｎｔＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３［１９９３］９
７を参照せよ）である。 ［分泌］本発明のポリペプチドが発現宿主から培養液へ
分泌されることがしばしば望ましいのは、そこから本発
明のポリペプチドがより容易に回収されるからである。
本発明によれば、分泌リーダー配列は、望ましい発現宿
主を基に選択され得る。ハイブリッド・シグナル配列も
本発明の文脈に沿って利用され得る。
【０１５９】異種の分泌リーダー配列の典型的な例は、
真菌のアミログルコシダーゼ（ＡＧ）遺伝子（例えば、
アスペルギルス属由来のｇｌａＡ−１８及び２４アミノ
酸体の双方）、ａ−ファクター遺伝子（サッカロミセス
属及びクリーベロミセス属のような酵母）又はα−アミ
ラーゼ遺伝子（バシラス属）由来のものである。 ［構築体］「結合体」、「カセット」及び「ハイブリッ
ド」のような用語と同義である「構築体」という用語
は、プロモーターと直接的又は間接的に付着した本発明
によるヌクレオチド配列を含む。間接的な付着の例は、
Ｓｈ１−イントロン又はＡＤＨイントロンのようなイン
トロン配列のような、適当なスペーサーグループがプロ
モーターと本発明のヌクレオチド配列の間に割り込むこ
とである。同じことは、本発明に関連した「融合した」
という用語にも当てはまり、直接的又は間接的な付着を
含む。いずれの場合でも、この用語は、野生型の遺伝子
プロモーターと通常結合していていずれも自然環境に存
在しているタンパク質をコードするヌクレオチド配列の
自然の組み合わせを包含するものではない。
【０１６０】構築体はマーカーを含む又は発現する可能
性さえあるが、このマーカーによって、それが転移され
る、例えば枯草菌のような好ましくはバシラス属の細菌
又はポテト、サトウキビのような植物において、この遺
伝的構築体の選択が考慮される。例えば（特に植物の）
マンノース−６−リン酸イソメラーゼをコードしている
マーカー、又は抗生物質への耐性−例えばＧ４１８、ヒ
グロマイシン、ブレオマイシン、カナマイシン及びゲン
タマイシンに対する耐性−を規定するマーカーのよう
に、利用し得る様々なマーカーがある。
【０１６１】好ましくは、本発明の構築体は、プロモー
ターに機能可能に結合した本発明のヌクレオチド配列を
少なくとも含む。 ［ベクター］「ベクター」という用語は発現ベクター及
び形質転換ベクター及びシャトルベクターを含む。
【０１６２】「発現ベクター」はインビボ又はインビト
ロで発現できる構築体を意味する。「形質転換ベクタ
ー」は、ある実体から別の実体−同じ生物種であるか別
の生物種である−へ転移し得る構築体を意味する。この
構築体がある種から別の種へ転移し得る−例えば、大腸
菌プラスミドからバシラス属のような細菌へ−ならば、
この形質転換ベクターは「シャトルベクター」と呼ばれ
ることがある。これは、大腸菌プラスミドからアグロバ
クテリウム属、植物へ転移される構築体である場合もあ
る。
【０１６３】本発明のベクターは以下に述べられるよう
に適切な宿主細胞へ形質転換されて本発明のポリペプチ
ドの発現を規定し得る。従って、本発明の別の態様で
は、発現ベクターで形質転換された又はそれを移入され
た宿主細胞を、ポリペプチドをコードしているコード配
列の発現をこのベクターによって規定する条件下で培養
すること及び発現されたポリペプチドを回収することを
含む、本発明によるポリペプチドを製造する方法を提供
する。
【０１６４】例えば、ベクターは、複製起点、所望によ
り上記ポリヌクレオチドの発現プロモーター及び、所望
によりプロモーターの調節部分を備えたプラスミド、ウ
ィルス又はファージベクターである。
【０１６５】本発明のベクターは１つ又はそれ以上の選
択されるマーカー遺伝子を含み得る。工業用微生物に最
も適した選択系は、宿主生物体における突然変異を必要
としない選択マーカーのグループによって形成されるも
のである。真菌の選択マーカーの例は、アセトアミダー
ゼ（ａｍｄＳ）、ＡＴＰシンテターゼ、サブユニット９
（ｏｌｉＣ）、オロチジン−５'−リン酸デカルボキシ
ラーゼ（ｐｖｒＡ）、フレオマイシン及びベノミル耐性
（ｂｅｎＡ）の遺伝子である。非真菌の選択マーカーの
例は、細菌のＧ４１８耐性遺伝子（これは酵母にも使え
るが糸状真菌には使えない）、アンピシリン耐性遺伝子
（大腸菌）、ネオマイシン耐性遺伝子（バシラス）及び
β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）をコードする大腸菌の
ｕｉｄＡ遺伝子である。
【０１６６】ベクターは、例えばＲＮＡの製造のために
インビトロで使用でき、又は宿主細胞を感染（トランス
フェクト）又は形質転換するために使用できる。従っ
て、本発明のポリヌクレオチドは組換えベクター（通常
は、複製可能なベクター）、例えばクローニング又は発
現ベクターへ取り込むことができる。ベクターは適合可
能な宿主細胞において核酸を複製するために利用し得
る。従って、別の実施形態では、本発明は、複製可能な
ベクターに本発明のポリペプチドを導入すること、適合
可能な宿主細胞へベクターを導入すること及びベクター
の複製をもたらす条件下で宿主細胞を培養することによ
って、本発明のポリペプチドを製造する方法を提供す
る。ベクターは宿主細胞から回収し得る。適切な宿主細
胞は発現ベクターに関連して以下に記載される。
【０１６７】本発明はまた、ＰＤＥ１１又はその変異
体、相同体、フラグメント又は誘導体を発現する遺伝子
工学的に処理された宿主細胞の、ホスホジエステラーゼ
活性をモジュレートしてサイクリックヌクレオチドのレ
ベルを調節するＰＤＥ１１の阻害剤及び拮抗剤を同定す
るスクリーニング方法における用途に関する。このよう
な遺伝子工学的に処理された宿主細胞は、ＰＤＥ１１活
性を調節し得るペプチド・ライブラリー又は有機分子を
スクリーニングするために利用し得る。抗体、ペプチド
又は有機低分子のようなＰＤＥ１１の拮抗剤及び阻害剤
は、例えば男性の勃起不全に関連した疾患の治療のため
の医薬組成物の基礎を提供する。このような阻害剤又は
拮抗剤は単独で又はこのような疾患の他の治療薬と共に
投与され得る。
【０１６８】本発明はまた、ＰＤＥ１１タンパク質をイ
ンビボ又はインビトロで製造すること又はＰＤＥ１１の
発現又は活性に影響を与え得る薬剤をスクリーニングす
ることを目的とする、ＰＤＥ１１をコードするポリヌク
レオチド配列又はその変異体、相同体、フラグメント又
は誘導体を含む発現ベクター及び宿主細胞に関する。 ［組織］ここで用いられている「組織」という用語は、
組織そのもの及び器官を含む。 ［宿主細胞］本発明に関連した「宿主細胞」という用語
は、本発明による組換えタンパク質をコードするヌクレ
オチド配列及び／又はそれより得られる産物を含むあら
ゆる細胞を包含するものであって、プロモーターが宿主
細胞の中に存在するとき、それにより本発明によるヌク
レオチド配列が発現できる。
【０１６９】従って、本発明の別の実施形態は、本発明
のポリヌクレオチドで形質転換された又はそれに感染し
た宿主細胞を提供する。好ましくは、上記のポリヌクレ
オチドは上記ポリヌクレオチドの複製及び発現のために
ベクターに担われている。宿主細胞は上記ベクターと適
合するものが選択され、例えば原核（例えば細菌）、真
菌、酵母又は植物細胞である。
【０１７０】グラム陰性菌である大腸菌は異種遺伝子発
現の宿主として広く使われている。しかしながら、その
内部では大量の雑多なタンパク質が蓄積しやすい。大腸
菌の細胞内タンパク質全体から所望のタンパク質を引き
続いて精製することは時に困難である。
【０１７１】大腸菌に比較して、バシラス属の細菌が異
種宿主として非常に適しているのはタンパク質を培養液
に分泌する能力のためである。宿主として適している他
の細菌は、ストレプトマイセス及びシュードモナス属の
ものである。
【０１７２】本発明のポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドの性質及び／又は発現されたタンパク質のさ
らなる処理の必要性に照らせば、酵母又は他の真菌のよ
うな真核宿主の方が好まれる。一般に、酵母細胞が真菌
細胞よりも好まれるのはより操作しやすいためである。
しかしながら、酵母細胞から分泌されにくいタンパク質
もあれば、（例えば酵母内の過糖鎖形成（ｈｙｐｅｒｇ
ｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）のために）うまく処理され
ないタンパク質もある。このような場合は、別の真菌宿
主生物体が選択されるべきである。 本発明の範囲内に
ある適切な発現宿主の例は、アスペルギルス種（ＥＰ−
Ａ−０１８４４３８及びＥＰ−Ａ−０２８４６０３に記
載されているような種）及びトリコデルマ種のような真
菌、バシラス属の細菌（ＥＰ−Ａ−０１３４０４８及び
ＥＰ−０２５３４５５に記載されているような種）、ス
トレプトマイセス種及びシュードモナス種、及び、クリ
ーベロミセス種（ＥＰ−Ａ−００９６４３０及びＥＰ−
Ａ−０３０１６７０に記載されているような種）及びサ
ッカロミセス種のような酵母である。例えば、典型的な
発現宿主は、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス
・ニガー・バー・チュビケニス、アスペルギルス・ニガ
ー・バー・アワモリ、アスペルギルス・アクレアチス、
アスペルギルス・ニデュランス、アスペルギルス・オー
ブツァエ、トリコデルマ・リーセイ、枯草菌、バシラス
・リシェニフォルミス、バシラス・アミロリクェファシ
エンス、クリーベロミセス・ラクティス及びサッカロミ
セス・セレビシエから選択され得る。
【０１７３】酵母、真菌及び植物宿主細胞のような適切
な宿主細胞を用いると、本発明の組換え発現産物に最適
な生理活性を与えるのに必要とされるような翻訳後の修
飾（例えば、ミリスチン酸化、糖鎖形成、切断（トラン
ケーション）、不活性化（ラピデーション）及びチロシ
ン、セリン又はトレオニンのリン酸化）が行われる可能
性がある。 ［生物体］本発明に関連した「生物体」という用語は、
本発明による組換えタンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列及び／又はそれより得られる産物を含み得るあら
ゆる生物体を包含するものであって、プロモーターが生
物体の中に存在するとき、本発明によるヌクレオチド配
列を発現させる。生物体の例は真菌、酵母又は植物を含
み得る。
【０１７４】本発明に関連した「トランスジェニック生
物体」という用語は、本発明によるタンパク質をコード
するヌクレオチド配列及び／又はそれより得られる産物
を含むあらゆる生物体を包含するものであって、プロモ
ーターは生物体の内部で、本発明によるヌクレオチド配
列を発現させる。好ましくは、ヌクレオチド配列は生物
体のゲノムの中に取り入れられている。
【０１７５】「トランスジェニック生物体」という用語
は、自然環境に存在している天然のヌクレオチドコード
配列がやはり自然環境に存在している天然のプロモータ
のコントロール下にある場合は、本発明による天然のヌ
クレオチドコード配列を包含しない。さらに、本発明
は、天然のタンパク質が自然環境に存在していて、やは
り自然環境に存在している天然のヌクレオチドコード配
列によって発現され、そのヌクレオチド配列がやはり自
然環境に存在している天然のプロモータのコントロール
下にある場合は、本発明による天然のタンパク質を包含
しない。
【０１７６】それ故、本発明のトランスジェニック生物
体は、本発明によるアミノ酸配列をコードするヌクレオ
チド配列、本発明による構築体（その組み合わせたもの
を含む）、本発明によるベクター、本発明によるプラス
ミド、本発明による細胞、本発明による組織又はその産
物のうち１つ又はその組み合わせを含む生物体を包含す
る。形質転換された細胞又は生物体は、細胞又は生物体
から容易に回収し得る妥当量の所望化合物を製造し得
る。 ［宿主細胞／宿主生物体の形質転換］前述したように、
宿主生物体は、原核又は真核生物である。適切な原核宿
主の例は大腸菌及び枯草菌を含む。原核宿主の形質転換
に関する教示は本技術分野において十分文書化されてい
て、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ等（「分子クローニング：
実験マニュアル」第２版、１９８９、コールド・スプリ
ング・ハーバー・ラボラトリー出版）及びＡｕｓｕｂｅ
ｌ等の「分子生物学の最新プロトコール」（１９９
５）、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、が参考に
なる。
【０１７７】原核宿主が使われるならば、ヌクレオチド
配列は、イントロン除去のように、形質転換の前に適切
に修飾される必要がある場合がある。別の実施形態で
は、トランスジェニック生物体は酵母である。この点
で、酵母も異種遺伝子発現の運搬体として広く利用され
てきた。サッカロミセス・セレビシエ種は、異種遺伝子
発現の用途を含めて、長いこと工業的に利用されてい
る。サッカロミセス・セレビシエにおける異種遺伝子の
発現は、Ｇｏｏｄｅｙ等（１９８７、「酵母のバイオテ
クノロジー」、Ｄ Ｒ Ｂｅｒｒｙ等編、４０１〜４２
９頁、アレン・アンド・アンウィン社、ロンドン）及び
Ｋｉｎｇ等（１９８９、「酵母の分子細胞生物学」Ｅ
Ｆ Ｗａｌｔｏｎ及びＧ Ｔ Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ編、
１０７〜１３３頁、ブラッキィ社、グラスゴー）に概説
されている。
【０１７８】幾つかの理由で、サッカロミセス・セレビ
シエは異種遺伝子発現に好適である。第一に、人体に無
害であり、ある種の内毒素を産生できないこと。第二
に、種々の目的で数世紀にわたって産業的に利用され、
長く安全に使用されていること。このために広く一般に
受け入れられている。第三に、この生物体に注がれた広
範な産業利用と研究によって、サッカロミセス・セレビ
シエの大量発酵特性だけでなくその遺伝学及び生理学に
関する豊富な知識がもたらされたこと。
【０１７９】サッカロミセス・セレビシエにおける異種
遺伝子発現及び遺伝子産物の分泌に関する原理は、Ｅ
Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ Ｅ Ｋｅｎｎｙ（１９９３、
「異種遺伝子発現の運搬体としての酵母」、「酵母」、
第５巻、Ａｎｔｈｏｎｙ ＨＲｏｓｅ及びＪ Ｓｔｕａ
ｒｔ Ｈａｒｒｉｓｏｎ編、第２版、アカデミック・プ
レス社）に概説されている。
【０１８０】統合的ベクターを含めて数タイプの酵母ベ
クターが実用化されているが、それを維持して自動的に
プラスミド・ベクターを複製させるには宿主ゲノムとの
組換えが必要とされる。
【０１８１】トランスジェニック・サッカロミセスを製
造するには、酵母で発現するように設計された構築体の
中へ本発明のヌクレオチド配列を挿入することによっ
て、発現構築体を製造する。異種発現のために利用され
る幾つかのタイプの構築体が開発されてきた。構築体
は、本発明のヌクレオチド配列に融合した、酵母で活性
のあるプロモーターを含むが、通常は、ＧＡＬ１プロモ
ーターのような酵母起源のプロモーターが使われる。通
常は、ＳＵＣ２シグナル・ペプチドをコードする配列の
ような、酵母起源のシグナル配列が使われる。酵母で活
性のあるターミネーターがこの発現系を終了させる。
【０１８２】酵母の形質転換のために、幾つかの形質転
換プロトコールが開発されてきた。例えば、本発明によ
るトランスジェニック・サッカロミセスは、Ｈｉｎｎｅ
ｎ等（１９７８、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈ
ｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＵＳＡ ７５，１９２
９）、Ｂｅｇｇｓ，ＪＤ（１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｌ
ｏｎｄｏｎ，２７５，１０４）及びＩｔｏ，Ｈ等（１９
８３，Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １５３，１６３
〜１６８）の教示によって製造し得る。
【０１８３】形質転換された酵母細胞は種々の選択的マ
ーカーを利用して選択される。形質転換のために利用さ
れるマーカーには、ＬＥＵ２、ＨＩＳ４及びＴＲＰ１の
ような多くの栄養要求性マーカー、及びアミノグリコシ
ド耐性マーカー（例、Ｇ４１８）のような主要抗生物質
耐性マーカーがある。
【０１８４】他の宿主生物体は植物である。遺伝学的に
修飾された植物を構築するときの基本原理は、植物ゲノ
ムに遺伝情報を挿入し、挿入された遺伝物質の安定な維
持体を得ることである。
【０１８５】遺伝情報を挿入する幾つかの技術が存在す
るが、２つの基本原理は、遺伝情報を直接導入すること
と、ベクター系を利用して遺伝情報を導入することであ
る。一般的な技術の概説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎ
ｕ Ｒｅｖ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔ
Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ［１９９１］４２：２０５〜２２
５）及びＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｇｒｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎ
ｄｕｓｔｒｙ Ｈｉ−Ｔｅｃｈ Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉ
ｌ １９９４ １７〜２７）の論文にある。植物の形質
転換に関する更なる教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５
に見出せる。
【０１８６】従って、本発明はまた、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ
ＩＤＮｏ．１８として示されたヌクレオチド配列又はそ
の誘導体、相同体、変異体又はフラグメントで宿主細胞
を形質転換する方法を提供する。
【０１８７】ＰＤＥヌクレオチドコード配列で形質転換
された宿主細胞は、コードされたタンパク質が発現し、
細胞培養液から回収されるのに適した条件の下で培養さ
れ得る。組換え細胞によって製造されたタンパク質は分
泌されるか又は使われた配列及び／又はベクターによっ
ては細胞内に封じられる。当業者に理解されるように、
ＰＤＥコード配列を含む発現ベクターは、特定の原核又
は真核細胞の膜を介したＰＤＥコード配列の分泌を指示
するシグナル配列を付けて設計され得る。組換え構築物
のなかには、ポリペプチド・ドメインをコードしている
ヌクレオチド配列へＰＤＥコード配列をつなげて、可溶
性タンパク質の精製を促進させ得るものもある（Ｋｒｏ
ｌｌ ＤＪ等（１９９３）ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ
１２：４４１〜５３、また、融合タンパク質を含むベ
クターに関する先述の議論も参照のこと）。 ［ポリペプチドの生産］本発明によれば、本発明のポリ
ペプチドの生産は、例えば、本発明の１つ又はそれ以上
のポリヌクレオチドで形質転換された微生物の発現宿主
の、従来の栄養源を含む発酵培養液における培養によっ
て影響され得る。培養液の選択は発現宿主の選択及び／
又は発現構築体の調節的要求物に基づいてよい。このよ
うな培養液は当業者にはよく知られている。培養液に
は、所望されるならば、他の汚染している可能性のある
微生物よりも形質転換された発現宿主により好都合な成
分を付加してよい。
【０１８８】従って、本発明はまた、ＰＤＥ１１活性を
有するポリペプチドを生産する方法であって、ａ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳ
ＥＱＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又
はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８として示されたヌクレオチ
ド配列又はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメン
トで宿主細胞を形質転換する、ｂ）この形質転換された
宿主細胞をこのポリペプチドの発現に適した条件で培養
する、という工程を含む方法を提供する。
【０１８９】本発明はまた、ＰＤＥ１１活性を有するポ
リペプチドを生産する方法、つまり、ａ）ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ Ｉ
ＤＮｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１８として示されたヌクレオチド配列又
はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメントで形質
転換された宿主細胞をこのポリペプチドの発現に適した
条件で培養する、ｂ）このポリペプチドを宿主細胞培養
液から回収する、という工程を含む方法を提供する。
【０１９０】本発明はまた、ＰＤＥ１１活性を有するポ
リペプチドを生産する方法、つまり、ａ）ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ Ｉ
ＤＮｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１８として示されたヌクレオチド配列又
はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメントで形質
転換する、ｂ）形質転換された宿主細胞をこのポリペプ
チドの発現に適した条件で培養する、ｃ）このポリペプ
チドを宿主細胞培養液から回収する、という工程を含む
方法を提供する。 ［リボザイム］リボザイムはＲＮＡの特異的開裂を触媒
し得る、酵素のようなＲＮＡ分子である。リボザイム作
用の機構は、リボザイム分子が相補的なターゲットＲＮ
Ａと配列特異的にハイブリダイゼーションした後に、エ
ンドヌクレアーゼのようにそれを開裂することを含む。
本発明の範囲には、ＰＤＥのＲＮＡ配列をエンドヌクレ
アーゼのように開裂することを特異的かつ効率的に触媒
する、設計されたハンマーヘッド・モチーフ（ｈａｍｍ
ｅｒｈｅａｄ ｍｏｔｉｆ）のリボザイム分子が含まれ
る。
【０１９１】ターゲットになる可能性があるＲＮＡの内
部に存在するリボザイム特異的な開裂部位は、ＧＵＡ、
ＧＵＵ及びＧＵＣという配列を含むリボザイム開裂部位
に対してターゲット分子をスキャンすることによって、
初めは同定される。いったん同定されれば、開裂部位を
含むターゲット遺伝子の領域に相当する１５〜２０のリ
ボヌクレオチドの短いＲＮＡ配列が二次構造上の特徴を
評価されるが、そのような二次構造があるとオリゴヌク
レオチド配列が作用できないことがある。ターゲット候
補の適合性は、リボヌクレアーゼ保護アッセイを利用し
て相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーショ
ンのしやすさを試験することによっても評価され得る。
【０１９２】アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子と本発
明のリボザイムは、いずれもＲＮＡ分子の合成法として
本技術分野で知られている方法によって製造し得る。こ
れには、固相ホスホルアミダイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａ
ｍｉｄｉｔｅ）化学合成法のような化学的にオリゴヌク
レオチドを合成する技術が含まれる。また、ＲＮＡ分子
はアンチセンスＲＮＡ分子をコードしているＤＮＡ配列
のインビトロ又はインビボ転写によって産生し得る。こ
のようなＤＮＡ配列は、Ｔ７又はＳＰ６のような適切な
ＲＮＡポリメラーゼ・プロモーターを有する多様なベク
ターの中へ組み込むことが可能である。また、アンチセ
ンスＲＮＡを合成するアンチセンスｃＤＮＡ構築体は、
構成的に又は誘導可能的に細胞系、細胞又は組織へ導入
できる。 ［検出］ＰＤＥコード配列の存在は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱＩ
Ｄ Ｎｏ．１８として示された配列のプローブ、部分又
はフラグメントを用いたＤＮＡ−ＤＮＡ又はＤＮＡ−Ｒ
ＮＡハイブリダイゼーション又は増幅によって検出され
る。核酸増幅に基づいたアッセイでは、ＰＤＥコード配
列に基づいたオリゴヌクレオチド又はオリゴマーを用い
てＰＤＥのＤＮＡ又はＲＮＡを含む形質転換体を検出す
る。ここに用いる「オリゴヌクレオチド」又は「オリゴ
マー」とは、プローブ又はアンプリマーとして利用し得
る、少なくとも約１０のヌクレオチドないし約６０のヌ
クレオチドであり、好ましくは約１５〜３０ヌクレオチ
ド、より好ましくは約２０〜２５のヌクレオチドからな
る核酸配列を指す。好ましくは、オリゴヌクレオチド
は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１６又はＳＥＱＩＤ Ｎｏ．１８として示されるヌ
クレオチド配列の３'領域から由来する。
【０１９３】タンパク質特異的なポリクローナル又はモ
ノクローナル抗体のいずれかを用いるような、ＰＤＥポ
リペプチドの発現を検出及び測定する様々なプロトコー
ルが本技術分野で知られている。例えば、酵素結合性免
疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ
（ＲＩＡ）及び蛍光細胞分析分離（ＦＡＣＳ）法であ
る。ＰＤＥポリペプチド上の２つの非干渉性エピトープ
に反応するモノクローナル抗体を用いた２部位のモノク
ローナル抗体に基づいたイムノアッセイが好ましいが、
競合的結合アッセイも利用され得る。こういったアッセ
イ及び他のアッセイについては、Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒ等
（１９９０、「血清学の方法、実験マニュアル」、ＡＰ
Ｓ出版、セントポール、ＭＮ）及びＭａｄｄｏｘ ＤＥ
等（１９８３、Ｊ ＥＸＰ Ｍｅｄ １５ ８：１２１
１）に詳しい。
【０１９４】多種多様な標識物及び結合技術が当業者に
知られていて、様々な核酸及びアミノ酸アッセイに利用
し得る。ＰＤＥポリヌクレオチド配列を同定するための
標識ハイブリダイゼーション又はＰＣＲプローブを製造
する手段は、オリゴラベリング、ニックトランスレーシ
ョン、エンドラベリング又は標識ヌクレオチドを用いた
ＰＣＲ増幅を含む。また、ＰＤＥコード配列又はその任
意の部分は、ｍＲＮＡプローブの生産用としてベクター
へ組み込んでクローン化し得る。このようなベクターは
本技術分野で知られていて市販されており、Ｔ７、Ｔ３
又はＳＰ６のような適切なＲＮＡポリメラーゼ及び標識
ヌクレオチドの付加によるインビトロのＲＮＡプローブ
合成に利用できる。
【０１９５】ファルマシア・バイオテク（ピスカタウェ
イ、ＮＪ）、プロメガ（マジソン、ＷＩ）及びＵＳバイ
オケミカル・コープ（クリーブランド、ＯＨ）のような
多くの企業が上記手法用のキット製品及びプロトコール
を供給している。適切なレポーター分子又はラベルは、
基質、補助因子、阻害剤、磁性粒子等だけでなく、放射
活性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤又は色素産生剤を
含む。このようなラベルの用途を教示している特許に、
ＵＳ−Ａ−３，８１７，８３７、ＵＳ−Ａ−３，８５
０，７５２、ＵＳ−Ａ−３，９３９，３５０、ＵＳ−Ａ
−３，９９６，３４５、ＵＳ−Ａ−４，２７７，４３
７、ＵＳ−Ａ−４，２７５，１４９及びＵＳ−Ａ−４，
３６６，２４１がある。また、組換え免疫グロブリン
は、ＵＳ−Ａ−４，８１６，５６７に示されているよう
に生産できる。
【０１９６】特定分子の発現を定量化する別の方法は、
ヌクレオチドの放射標識（Ｍｅｌｂｙ ＰＣ等 １９９
３ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １５９：２
３５〜４４）又はビオチニル化（Ｄｕｐｌａａ Ｃ等
１９９３ Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２２９〜３
６）、コントロール核酸の共増幅及び実験結果が内挿さ
れる標準曲線を含む。多数の標本の定量化は、対象とな
るオリゴマーが様々な希釈溶液の中にあるＥＬＩＳＡフ
ォーマットでアッセイを実行すればスピード・アップで
きるし、分光測光又は熱量測定反応を利用すれば、迅速
に定量される。
【０１９７】マーカー遺伝子の発現の有無は対象となる
遺伝子の存在を示唆するが、その存在及び発現は確証さ
れるべきである。例えば、もしＰＤＥコード配列がマー
カー遺伝子配列中に挿入された場合、ＰＤＥコード領域
を含む組換え細胞は、マーカー遺伝子機能の欠落によっ
て同定される。また、マーカー遺伝子を単一プロモータ
ーのコントロール下でＰＤＥコード配列と並んで配置す
ることもできる。誘導又は選択に反応したマーカー遺伝
子の発現は、通常はＰＤＥの発現も示している。
【０１９８】また、ＰＤＥコード配列を含みＰＤＥコー
ド領域を発現する宿主細胞は、当業者の知る様々な手法
によって同定され得る。この手法には、核酸又はタンパ
ク質の検出及び／又は定量のための膜、溶液又はチップ
を利用した技術を含む、ＤＮＡ−ＤＮＡ又はＤＮＡ−Ｒ
ＮＡハイブリダイゼーション及びタンパク質バイオアッ
セイ又はイムノアッセイ技術があるが、それに限定され
るものではない。 ［抗体］本発明のアミノ酸配列はまた、標準技術の利用
等により、アミノ酸配列に対する抗体を生産するために
利用し得る。
【０１９９】この技術分野でよく知られている手法はＰ
ＤＥ１１ポリペプチドに対する抗体の製造に利用し得
る。このような抗体は、ポリクローナル抗体、モノクロ
ーナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメン
ト及びＦａｂ発現ライブラリーによって生産されたフラ
グメントを含むが、それに限定されるものではない。中
和抗体、即ちＰＤＥポリペプチドの生理活性を阻害する
抗体は、診断薬及び治療薬に特に向いている。
【０２００】抗体の製造のためにはヤギ、ウサギ、ラッ
ト、マウス等を含む様々な宿主が、阻害剤又はその一部
分、変異体、相同体、フラグメント又は誘導体、又は免
疫原性を保持するオリゴペプチドの注入によって免疫化
され得る。
【０２０１】宿主に依存して、様々なアジュバントが免
疫反応を高めるために利用され得る。このようなアジュ
バントには、フロイント、水酸化アルミニウムのような
無機ゲル及びリゾレシチン、プルロニック（ｐｌｕｒｏ
ｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性エ
マルジョン、アオガイ（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅ
ｔ）ヘモシアニン及びジニトロフェノールのような界面
活性剤があるが、それに限定されるものではない。ＢＣ
Ｇ（カルメット−ゲラニンの桿菌）及びコリネバクテリ
ウム・パルヴムは潜在的に有用なヒトアジュバントとし
て利用され得る。アミノ酸配列に対するモノクローナル
抗体は、継代培養細胞系による抗体分子の製造に供され
る技術を用いても製造され得る。これには、初めＫｏｅ
ｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５ Ｎａｔｕｒ
ｅ ２５６：４９５〜４９７）によって記載されたハイ
ブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏ
ｓｂｏｒ等（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ
４：７２；Ｃｏｔｅ等（１９８３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８０：２０２６〜２０３０）及び
ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ等（１９８５）
「モノクローナル抗体と癌治療」、アラン・アール・リ
ス社、７７〜９６頁）があるが、それに限定されるもの
ではない。また、「キメラ抗体」製造のために開発され
た技術、つまり、ヒト抗体遺伝子へマウス抗体遺伝子を
接合し、適切な抗原特異性と生理活性を持った分子を得
る技術も利用し得る（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等（１９８４）
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８１：６８５
１〜６８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ等（１９８４）Ｎａ
ｔｕｒｅ ３１２：６０４〜６０８；Ｔａｋｅｄａ等
（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２〜４５
４）。また、単鎖抗体の製造のために記載されている技
術（ＵＳ−Ａ−４９４６７７９）を採用して阻害剤特異
的な単鎖抗体を製造し得る。
【０２０２】抗体はまた、リンパ球集団におけるインビ
ボ産生を誘導すること又は、Ｏｒｌａｎｄｉ等（１９８
９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８６：３
８３３〜３８３７）及びＷｉｎｔｅｒ Ｇ及びＭｉｌｓ
ｔｅｉｎ Ｃ（１９９１；Ｎａｔｕｒｅ ３４９：２９
３〜２９９）に開示されたように、特異性の高い結合反
応物の組換え免疫グロブリンのライブラリー又はパネル
（ｐａｎｅｌ）をスクリーニングすることによって製造
され得る。
【０２０３】ＰＤＥ１１の特異的な結合部位を含む抗体
フラグメントも製造し得る。例えば、このようなフラグ
メントには、抗体分子のペプシン消化によって製造され
得るＦ（ａｂ'）2フラグメント及びＦ（ａｂ'）2フラグ
メントのジスルフィド結合を還元することによって生じ
るＦａｂフラグメントがあるが、それに限定されるもの
ではない。また、Ｆａｂ発現ライブラリーは、所望の特
異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントを迅速
かつ簡便に同定できるように構築され得る（Ｈｕｓｅ
ＷＤ等（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１２７５
〜１２８１）。
【０２０４】ＰＤＥ１１の特異抗体はＰＤＥ１１ポリペ
プチドの発現に関連した病態及び疾患の診断に有用であ
る。確立された特異性を有するポリクローナル又はモノ
クローナル抗体を用いた競合結合又は免疫放射測定アッ
セイの種々のプロトコールが本技術分野でよく知られて
いる。このようなイムノアッセイは通常ＰＤＥ１１ポリ
ペプチドとその特異抗体（又は類似のＰＤＥ１１結合性
分子）との複合体形成及び複合体形成の測定を含む。特
異的なＰＤＥ１１タンパク質上の２つの非干渉性エピト
ープに反応するモノクローナル抗体を用いた２部位のモ
ノクローナル抗体に基づいたイムノアッセイが好ましい
が、競合的結合アッセイも利用され得る。このようなア
ッセイについては、Ｍａｄｄｏｘ ＤＥ等（１９８３、
Ｊ ＥＸＰ Ｍｅｄ １５８：１２１１）に記載されて
いる。
【０２０５】抗ＰＤＥ１１抗体は炎症、造血細胞の異常
増殖による病態及びＨＩＶ感染又はＰＤＥ１１の異常発
現に特徴づけられる他の障害又は疾患の診断に有用であ
る。ＰＤＥ１１の診断アッセイは、ヒト体液、細胞、組
織又は組織の切片又は抽出物に存在するＰＤＥ１１ポリ
ペプチドを検出するために抗体及びラベルを利用する方
法を含む。本発明のポリペプチド及び抗体は修飾して又
は修飾せずに使用し得る。しばしば、ポリペプチド及び
抗体は、レポーター分子と共に、共有結合的又は非共有
結合的につなげることによって標識される。様々なレポ
ーター分子が当業者に知られている。 ［アッセイ／同定法］本発明はまた、（ａ）ＳＥＱ Ｉ
Ｄ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳ
ＥＱ ＩＤＮｏ．１８又はその対立遺伝子変異体のＤＮ
Ａ配列から決定されるような、ＰＤＥ１１特異的な一対
のポリメラーゼ連鎖反応プライマーを用いて、そのよう
な細胞由来の（全ＲＮＡのような）ＲＮＡに対し逆転写
酵素ポリメラーゼ連鎖反応を実施すること、及び（ｂ）
適切なサイズのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）フラグ
メントの出現をアガロースゲル電気泳動のような方法で
検出することを含む、（ヒト細胞のような）細胞におけ
るＰＤＥ１１の存在を検出するアッセイ法に関わる。
【０２０６】本発明はまた、ＰＤＥ１１の活性及び／又
はその発現に（阻害する又はそれ以外のやり方で修飾す
るように）影響を与える（化合物、他の物質又はそれを
含む組成物のような）薬剤を同定する方法、つまりＰＤ
Ｅ１１又はそれをコードするヌクレオチド配列を薬剤に
接触させた後にＰＤＥ１１の活性及び／又はその発現を
測定する方法に関する。
【０２０７】本発明はまた、ＰＤＥ１１の活性及び／又
はその発現に（阻害する又はそれ以外のやり方で修飾す
るように）選択的に影響を与える（化合物、他の物質又
はそれを含む組成物のような）薬剤を同定する方法、つ
まりＰＤＥ１１又はそれをコードするヌクレオチド配列
を薬剤に接触させた後にＰＤＥ１１の活性及び／又はそ
の発現を測定する方法に関する。
【０２０８】本発明はまた、ＰＤＥ１１Ａ１又はＰＤＥ
１１Ａ２又はＰＤＥ１１Ａ３又はＰＤＥ１１Ａ４の活性
及び／又はその発現に（阻害する又はそれ以外のやり方
で修飾するように）選択的に影響を与える（化合物、他
の物質又はその組成物のような）薬剤を同定する方法、
つまり関連するＰＤＥ１１又はそれをコードするヌクレ
オチド配列を薬剤に接触させた後に関連するＰＤＥ１１
の活性及び／又はその発現を測定する方法に関する。
【０２０９】本発明はまた、ＰＤＥ１１の活性及び／又
はその発現に（阻害する又はそれ以外のやり方で修飾す
るように）影響を与える（化合物、他の物質又はそれを
含む組成物のような）薬剤を同定する方法、つまりＰＤ
Ｅ１１の活性及び／又はその発現を薬剤の存在下又は薬
剤の添加後に、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又は
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１
８又はその対立遺伝子変異体のＤＮＡ配列を含む組換え
ＤＮＡが取り込まれた細胞系、又は（ｂ）ＰＤＥ１１を
自然にかつ選択的に発現する細胞集団又は細胞系、にお
いて測定する方法に関する。好ましくは、ＰＤＥ１１の
活性は上記のアッセイ法によって決定される。
【０２１０】本発明はまた、ＰＤＥ１１の活性及び／又
はその発現に（阻害する又はそれ以外のやり方で修飾す
るように）選択的に影響を与える（化合物、他の物質又
はそれを含む組成物のような）薬剤を同定する方法、つ
まりＰＤＥ１１の活性及び／又はその発現を薬剤の存在
下又は薬剤の添加後に、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１
又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１４又はＳＥＱ ＩＤＮｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１８又はその対立遺伝子変異体のＤＮＡ配列を含む
組換えＤＮＡが取り込まれた細胞系、又は（ｂ）ＰＤＥ
１１を自然にかつ選択的に発現する細胞集団又は細胞
系、において測定する方法に関する。好ましくは、ＰＤ
Ｅ１１の活性は上記のアッセイ法によって決定される。
【０２１１】本発明はまた、ＰＤＥ１１Ａ１又はＰＤＥ
１１Ａ２又はＰＤＥ１１Ａ３又はＰＤＥ１１Ａ４の活性
及び／又はその発現に（阻害する又はそれ以外のやり方
で修飾するように）選択的に影響を与える（化合物、他
の物質又はそれを含む組成物のような）薬剤を同定する
方法、つまりそれぞれのＰＤＥ１１の活性及び／又はそ
の発現を薬剤の存在下又は薬剤の添加後に、（ａ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６
又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８又はその対立遺伝子変異
体のそれぞれのＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡが取り込
まれた細胞系、又は（ｂ）それぞれのＰＤＥ１１を自然
にかつ選択的に発現する細胞集団又は細胞系、において
測定する方法に関する。好ましくは、ＰＤＥ１１の活性
は上記のアッセイ法によって決定される。
【０２１２】本発明はまたＰＤＥ１１（又はその誘導
体、相同体、変異体又はフラグメント）の活性又はそれ
をコードするヌクレオチド配列（その誘導体、相同体、
変異体又はフラグメントを含む）の発現をモジュレート
する（好ましくは、特異的モジュレーション）薬剤をス
クリーニングする方法、つまり、ａ）候補薬剤を用意す
ること、ｂ）ＰＤＥ１１（又はその誘導体、相同体、変
異体又はフラグメント）又はそれをコードするヌクレオ
チド配列（又はその誘導体、相同体、変異体又はフラグ
メント）を適切な条件下でのモジュレーションを可能に
するのに十分な時間候補薬剤と結合させること、及び
ｃ）候補薬剤のＰＤＥ１１（又はその誘導体、相同体、
変異体又はフラグメント）又はそれをコードするヌクレ
オチド配列（又はその誘導体、相同体、変異体又はフラ
グメント）へのモジュレーションを検出し、候補薬剤が
ＰＤＥ１１（又はその誘導体、相同体、変異体又はフラ
グメント）の活性又はそれをコードするヌクレオチド配
列（又はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメン
ト）の発現をモジュレートするか確かめること、という
工程を含む方法を提供する。
【０２１３】本発明はまたＰＤＥ１１（又はその誘導
体、相同体、変異体又はフラグメント）又はそれをコー
ドするヌクレオチド配列（その誘導体、相同体、変異体
又はフラグメントを含む）に対して特異的な結合親和性
を有する薬剤をスクリーニングする方法、つまり、ａ）
候補薬剤を用意すること、ｂ）ＰＤＥ１１（又はその誘
導体、相同体、変異体又はフラグメント）又はそれをコ
ードするヌクレオチド配列（又はその誘導体、相同体、
変異体又はフラグメント）を適切な条件下での結合を可
能にするのに十分な時間候補薬剤と結合させること、及
びｃ）候補薬剤のＰＤＥ１１（又はその誘導体、相同
体、変異体又はフラグメント）又はそれをコードするヌ
クレオチド配列（又はその誘導体、相同体、変異体又は
フラグメント）への結合を検出し、候補薬剤がＰＤＥ１
１（又はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメン
ト）の活性又はそれをコードするヌクレオチド配列（又
はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメント）と結
合するか確かめること、という工程を含む方法を提供す
る。
【０２１４】本発明はまたＰＤＥ１１をモジュレートす
る能力がある薬剤を同定する方法、つまり、ａ）ＰＤＥ
１１（又はその誘導体、相同体、変異体又はフラグメン
ト）又はそれをコードするヌクレオチド配列（又はその
誘導体、相同体、変異体又はフラグメント）と薬剤を接
触させること、ｂ）この工程ａ）の混合物をサイクリッ
クヌクレオチドの加水分解に適した条件下でサイクリッ
クヌクレオチドと共にインキュベーションすること、
ｃ）加水分解したサイクリックヌクレオチドの量を測定
すること、及びｄ）この工程ｃ）の加水分解したサイク
リックヌクレオチドの量を、ＰＤＥ１１（又はその誘導
体、相同体、変異体又はフラグメント）又はそれをコー
ドするヌクレオチド配列（又はその誘導体、相同体、変
異体又はフラグメント）をその薬剤非存在下でインキュ
ベーションして得られた加水分解したサイクリックヌク
レオチドの量と比較することによって、この薬剤がサイ
クリックヌクレオチドの加水分解に影響を与える（例え
ば、刺激する又は阻害する）かどうかを決定すること、
という工程を含む方法を提供する。
【０２１５】従って、本発明のある実施形態では、ＰＤ
Ｅ１１又はその変異体、相同体、フラグメント又は誘導
体及び／又はＰＤＥ１１又はその変異体、相同体、フラ
グメント又は誘導体を発現する細胞系は、ホスホジエス
テラーゼ活性又はその発現のモジュレーターとして作用
する抗体、ペプチド又は有機又は無機分子のような他の
薬剤をスクリーニングすることで、サイクリックヌクレ
オチドのレベルをモジュレートする能力がある治療薬を
同定するために利用され得る。例えば、ＰＤＥ１１の活
性を中和する能力がある抗ＰＤＥ１１抗体は、ＰＤＥ１
１によるサイクリックヌクレオチドの加水分解を阻害す
ることを介してそのレベルを高めることに利用され得
る。また、組換え体で発現されたＰＤＥ１１又はその変
異体、相同体、フラグメント又は誘導体、又は細胞系で
発現されたＰＤＥ１１又はその変異体、相同体、フラグ
メント又は誘導体を用いて、コンビナトリアル・ケミス
トリーによって合成されたペプチド・ライブラリー又は
有機物ライブラリーをスクリーニングすることは、ＰＤ
Ｅ１１によるサイクリックヌクレオチドの加水分解をモ
ジュレートすることによって機能する治療薬の同定に有
用であろう。合成化合物、天然産物及び他の潜在的に生
理活性がある物質は、当業者にはごく普通と考えられて
いる多くのやり方でスクリーニングされ得る。例えば、
ＰＤＥ１１のＮ末端をコードしているヌクレオチド配列
は、ＰＤＥ１１活性のアロステリックモジュレーター
（作動薬又は拮抗剤）のスクリーニングに利用し得る細
胞系において発現され得る。また、ＰＤＥ１１の保存さ
れた触媒ドメインをコードしているヌクレオチド配列
は、細胞系において発現され、サイクリックヌクレオチ
ドの加水分解を阻害する薬剤のスクリーニングに利用さ
れ得る。
【０２１６】被験薬がＰＤＥ１１活性又はサイクリック
ヌクレオチドの加水分解に干渉する能力があるかどうか
は、（Ｓｍｉｔｈ等、１９９３ Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４１：１８９−２１８に
開示されているように）ＰＤＥ１１のレベル又はサイク
リックヌクレオチドのレベルを測定することによって決
定される。また、ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ測定用イムノア
ッセイキットも市販されている（例えば、アマシャム・
インターナショナル社、アーリントンハイツ、ＩＬ及び
デュポン社、ボストン、ＭＡ）。ＰＤＥ１１の活性はま
たこの目的のために開発された従来技術を利用して、他
のタンパク質のリン酸化又は脱リン酸化のような他の反
応を測定することでモニターされ得る。
【０２１７】従って、 本発明は、ＰＤＥ１１又はその
変異体、相同体、フラグメント又は誘導体のサイクリッ
クヌクレオチドホスホジエステラーゼ活性をモジュレー
トする能力がある化合物を同定する方法、つまり、ａ）
ＰＤＥ１１又はその変異体、相同体、フラグメント又は
誘導体と化合物を接触させること、ｂ）工程ａ）の混合
物をサイクリックヌクレオチドの加水分解に適した条件
下でサイクリックヌクレオチドと共にインキュベーショ
ンすること、ｃ）加水分解したサイクリックヌクレオチ
ドの量を測定すること、及びｄ）工程ｃ）の加水分解し
たサイクリックヌクレオチドの量を、ＰＤＥ１１又はそ
の変異体、相同体、フラグメント又は誘導体をその化合
物非存在下でインキュベーションして得られた加水分解
したサイクリックヌクレオチドの量と比較することによ
って、この化合物がサイクリックヌクレオチドの加水分
解を刺激する又は阻害するかを決定すること、という工
程を含む方法を提供する。本方法の一実施形態では、フ
ラグメントはＰＤＥ１１のＮ末端領域由来であり、ＰＤ
Ｅ１１のアロステリックモジュレーターを同定する方法
を提供する。本発明の別の実施形態では、フラグメント
はＰＤＥ１１のカルボキシル末端領域由来であり、サイ
クリックヌクレオチド加水分解の阻害剤を同定する方法
を提供する。
【０２１８】ＰＤＥ１１ポリペプチド、その免疫原性フ
ラグメント又はそのオリゴペプチドは様々な医薬スクリ
ーニング技術のいずれにおいても治療用化合物をスクリ
ーニングするために利用され得る。このような試験にお
いて使用されるポリペプチドは溶液状態、固体支持体に
固定された状態、細胞表面に埋め込まれた状態又は細胞
内に局在化した状態にあってよい。活性の消失又はＰＤ
Ｅ１１ポリペプチドと被験薬剤との結合複合体の形成が
測定され得る。
【０２１９】それ故、本発明は、ＰＤＥ１１又はその発
現又はその一部分又はその変異体、相同体、フラグメン
ト又は誘導体のモジュレーション（好ましくは、特異的
な結合親和性のような、特異的モジュレーション）に対
して１つ又は複数の化合物をスクリーニングする方法、
つまり、１つ又は複数の化合物を用意すること、ＰＤＥ
１１又はそれをコードするヌクレオチド配列又はその一
部分又はその変異体、相同体、フラグメント又は誘導体
を、適切な条件下でのモジュレーションを可能にするの
に十分な時間、１つ又は複数の化合物の各々と結合させ
ること、及びＰＤＥ１１又はその一部分又はその変異
体、相同体、フラグメント又は誘導体と複数の化合物の
各々との結合を検出することを介して、ＰＤＥ１１又は
それをコードするヌクレオチド配列をモジュレートする
１つ又は複数の化合物を同定する、という工程を含む方
法を提供する。このようなアッセイでは、複数の化合物
は当業者に知られたコンビナトリアル・ケミストリー技
術によって製造され得る。
【０２２０】医薬スクリーニングの他の技術は、ＰＤＥ
１１ポリペプチドに対して適度な結合親和性を有する化
合物をハイスループット・スクリーニングする方法であ
り、１９８４年９月１３日に公表されたＧｅｙｓｅｎの
ヨーロッパ特許出願８４／０３５６４に詳細に記載され
た方法に基づいている。要約すると、大量の様々な小さ
なペプチド被験化合物がプラスチックピンのような固体
基質又は他の何らかの表面の上で合成される。ペプチド
被験化合物はＰＤＥ１１フラグメントと反応させた後洗
浄される。その後、本技術分野で良く知られている方法
を適切に用いる等して、結合したＰＤＥ１１が検出され
る。精製されたＰＤＥ１１はまた上記の医薬スクリーニ
ング技術に使用するために直接プレート上でコーティン
グされ得る。また、ペプチドを捕捉しそれを固体支持体
に固定化させるために非中和抗体が利用される。
【０２２１】本発明はまた、ＰＤＥ１１と結合し得る中
和抗体がＰＤＥ１１との結合に対して被験化合物と特異
的に競合する、競合的医薬スクリーニングアッセイの用
途について考察している。このように、この抗体は、Ｐ
ＤＥ１１と１つ又はそれ以上の抗原決定基を共有するペ
プチドの存在を検出するために利用し得る。 ［薬剤］本発明はまた本発明のアッセイ法及び同定法に
よって同定される１つ又はそれ以上の薬剤を提供する。
【０２２２】本発明の薬剤は、例えば、有機化合物又は
無機化合物である。この薬剤は、例えば、ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳＥＱ Ｉ
ＤＮｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１８として示される配列の全て又は部分
に対してアンチセンスなヌクレオチド配列で有り得る。
【０２２３】本発明はさらに、本発明の薬剤（又は製剤
的に許容されるその塩、又は製剤的に許容されるその溶
媒和物）又は上記のいずれをも含む医薬組成物を、医薬
品としての用途のために、提供する。
【０２２４】本発明はまた、脳層に存在するＰＤＥ１１
活性に影響を与える（阻害する、モジュレートする、拮
抗する、等）薬剤の用途を提供する。 ［診断薬］本発明はまたＰＤＥ１１ポリヌクレオチド配
列検出用の診断組成物を提供する。診断組成物は、ポリ
ヌクレオチド、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ Ｉ
ＤＮｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１６又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８又はそ
の変異体、相同体、フラグメント又は誘導体、又はＳＥ
Ｑ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３又はＳ
ＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６
又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８又はその対立遺伝子変異
とハイブリダイズし得る配列を含んでよい。
【０２２５】疾患の診断を基礎づけるには、ＰＤＥ１１
ポリペプチド発現の正常値又は標準値が確立されなけれ
ばならない。このことは、動物又はヒトの正常披検者か
ら採取した体液又は細胞抽出物を、本技術分野でよく知
られている複合体形成に適した条件の下で、ＰＤＥ１１
ポリペプチドの抗体と結合させることによって達成され
る。標準的な複合体形成の量は、既知量の抗体が既知濃
度の精製ＰＤＥ１１ポリペプチドと結合する陽性対象の
希釈系列に対してそれを比較すれば定量化され得る。そ
の後、正常サンプルより得られた標準値は、ＰＤＥ１１
ポリペプチド発現に関連した障害又は疾患に罹患してい
る可能性がある患者より採取した標本より得られる値と
比較される。標準値と披検者の値のズレから疾患状態の
存在が確かめられる。
【０２２６】ＰＤＥ１１ポリペプチド又はその任意の部
分は診断薬及び／又は治療化合物の基礎を提供する。診
断目的で、ＰＤＥ１１ポリヌクレオチド配列は、ＰＤＥ
１１活性が影響を与える可能性がある、男性の勃起不全
のような病態、障害又は疾患における遺伝子発現を検出
及び定量化するために利用し得る。
【０２２７】ＰＤＥ１１をコードするポリヌクレオチド
配列はＰＤＥ１１の発現より生じる疾患の診断に利用し
得る。例えば、ＰＤＥ１１をコードするポリヌクレオチ
ド配列は、ＰＤＥ１１発現における異常を検出する目的
で、生検又は剖検に由来する組織又は血清、骨液又は腫
瘍生検のような生物体液のハイブリダイゼーション又は
ＰＣＲアッセイに利用し得る。このような定性的又は定
量的方法には、サザン又はノーザン分析、ドット・ブロ
ットのような膜利用技術、ＰＣＲ技術、ディップスティ
ック、ピン又はチップ技術及びＥＬＩＳＡ等の多標本形
式技術がある。これらの技術はすべて本技術分野でよく
知られていて、事実、多くの市販診断キット製品の基礎
になっている。
【０２２８】このようなアッセイは特定の治療用薬剤の
有効性を評価するように調整可能であり、動物研究、臨
床試験又は各患者の治療モニタリングに利用され得る。
疾患の診断を基礎づけるには、ＰＤＥ発現の正常又は標
準プロフィールが確立されなければならない。このこと
は、動物又はヒトの正常披検者から採取した体液又は細
胞抽出物を、ハイブリダイゼーション又は増幅に適した
条件の下で、ＰＤＥ１１又はその一部分と結合させるこ
とによって達成される。標準的なハイブリダイゼーショ
ンは、正常披検者から得られた数値を、既知量の精製Ｐ
ＤＥ１１を用いた同一の実験において実施された陽性対
照の希釈系列と比較することによって定量化され得る。
正常サンプルより得られた標準値は、ＰＤＥのコード配
列の発現に関連した障害又は疾患に罹患している可能性
がある患者より採取した標本より得られる値と比較され
る。標準値と披検者の値のズレから疾患状態の存在が確
かめられる。疾患が確認されれば、既存の治療薬が投与
され、治療プロフィール又は数値が得られる。最終的
に、このアッセイは定期的に繰り返され、その数値が進
行するか正常又は標準パターンに戻るかどうかが評価さ
れる。継続的な治療プロフィールは、数日又は数ヶ月に
及ぶ治療の有効性を示すことに利用できる。
【０２２９】従って、本発明は、例えば病態におけるＰ
ＤＥ１１のレベルを検出及び定量化して診断に利用し得
る抗ＰＤＥ１１抗体を製造するための、ＰＤＥ１１ポリ
ペプチド又はその変異体、相同体、フラグメント又は誘
導体の用途に関する。
【０２３０】本発明はさらに細胞及び組織中のＰＤＥ１
１を検出するための、陽性対照として使用される精製Ｐ
ＤＥ１１及び抗ＰＤＥ１１抗体を含む、診断アッセイ及
びキットを提供する。このような抗体は、ＰＤＥ１１タ
ンパク質の発現、その欠失又は変異体、相同体、フラグ
メント又は誘導体の発現に関連した疾患又は病態を検出
するための、溶液、膜又は組織に基づいた技術に利用さ
れ得る。 ［プローブ］本発明の別の態様は、ゲノム配列、ＰＤＥ
コード領域又は対立遺伝子のような緊密に関連した分子
を含むポリヌクレオチド配列を検出し得る核酸ハイブリ
ダイゼーション又はＰＣＲプローブの提供である。プロ
ーブの特異性（即ち、それが高度に保存された、保存さ
れた又は保存されていない領域又はドメインのいずれか
ら由来しているかということ）及びハイブリダイゼーシ
ョン又は増幅のストリンジェンシィ（高位、中位、低
位）によって、プローブが天然に存在しているＰＤＥコ
ード配列又は関連した配列だけを同定するかどうかが決
定される。関連した核酸配列を検出するプローブは、
３'領域のような、サイクリックヌクレオチドＰＤＥフ
ァミリーメンバーの保存された又は高度に保存されたヌ
クレオチド領域から選択され、そのようなプローブは縮
重プローブのプールで使用され得る。同一の核酸配列を
検出する場合又は最大の特異性が所望される場合、核酸
プローブはＰＤＥポリヌクレオチドの非保存的なヌクレ
オチド領域又はユニーク領域から選択される。ここに用
いられている「非保存的なヌクレオチド領域」という用
語は、ここに開示されたＰＤＥコード配列特有のヌクレ
オチド領域を指し、既知のサイクリックヌクレオチドＰ
ＤＥのような関連ファミリーメンバーには出現しない。
【０２３１】ＵＳ−Ａ−４，６８３，１９５、ＵＳ−Ａ
−４，８００，１９５及びＵＳ−Ａ−４，９６５，１８
８に記載されているＰＣＲは、ＰＤＥ１１配列に基づい
たオリゴヌクレオチドの別の用途を提供する。一般に、
このようなオリゴマーは化学的に合成されるが、酵素に
よって生産されたり、組換え体から製造される場合もあ
る。オリゴマーは一般に、センス配位（５'−＞３'）及
びアンチセンス配位（３'＜−５'）という２つのヌクレ
オチド配列を含み、最適な条件下で、特異的な遺伝子又
は病態を同定するために利用される。同じ２つのオリゴ
マー、入れ子状オリゴマー又は縮重オリゴマーのプール
は、よりストリンジェンシィが緩い条件下で、緊密に関
連したＤＮＡ又はＲＮＡの配列を検出及び／又は定量化
するために利用し得る。
【０２３２】ＰＤＥ１１の核酸配列はまた、内因性ゲノ
ム配列のマッピングのために、前述したようなハイブリ
ダイゼーション・プローブを生産するのに利用し得る。
その配列は、既知の技術を利用して、ある特定の染色体
又は染色体の特異領域に対してマップされ得る。この技
術は、染色糸へのインシトゥ（生体内）ハイブリダイゼ
ーション（Ｖｅｒｍａ等（１９８８）「ヒト染色体：基
本技術マニュアル」、ペルガモン・プレス、ニューヨー
ク市）、流れソート式（ｆｌｏｗ−ｓｏｒｔｅｄ）の染
色体調製又は、ＹＡＣ、細菌性人工染色体（ＢＡＣ）、
細菌性ＰＩ構築体又は単鎖染色体ｃＤＮＡライブラリー
のような人工染色体の構築を含む。
【０２３３】染色体調製物のインシトゥ・ハイブリダイ
ゼーション及び確立された染色体マーカーを利用した連
鎖分析のような物理的マッピング技術は、遺伝子地図を
拡張する上で極めて有用である。遺伝子地図の例はＳｃ
ｉｅｎｃｅ（１９９５；２７０：４１０ｆ及び１９９
４；２６５：１９８１ｆ）に見出せる。しばしば、ある
遺伝子を別の哺乳類種の染色体に配置すると、たとえ特
定のヒト染色体の番号や腕についてわかっていなくて
も、関連するマーカーが明らかになる。物理的マッピン
グによって、新しい配列が染色体の腕又はその部分に位
置づけられる。このことは位置クローニング又は他の遺
伝子発見技術を利用して疾患遺伝子を捜している研究者
にとって貴重な情報を提供する。毛細管拡張性運動失調
（ＡＴ）のような疾患又は症候群が、例えばＡＴが１１
ｑ２２−２３に位置づけられたように（Ｇａｔｔｉ等
（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３６：５７７〜５８
０）、遺伝子連鎖によって特定のゲノム領域におおまか
に位置づけられると、その領域付近の配列マッピングは
更なる研究対象となる関連又は調節遺伝子を表わす可能
性がある。本発明のヌクレオチド配列はまた、転座、逆
位等による染色体の座における、正常人、キャリアー、
罹患者間の違いを検出するのに利用し得る。 医薬品 また、本発明は、ＰＤＥ１１の活性のために同様のもの
を必要とする個人を治療するための医薬組成物をも提供
し、該組成物は治療上有効な量の、該活性に影響を及ぼ
す（例えば、阻害する）薬剤（ａｇｅｎｔ）及び薬学的
に許容し得る担体、希釈剤、賦形剤又は補助剤を含む。
【０２３４】したがって、本発明は、本発明の薬剤（本
発明のヌクレオチド配列の発現パターン又はそれらの発
現産生物の活性を調節することが可能な薬剤及び／又は
本発明による検定によって同定される薬剤）を含む医薬
組成物も包含する。これに関して、特にヒトの治療に関
して、本発明の薬剤は単独で投与することもできるが、
一般には、意図する投与経路及び標準的な医薬実務に関
して選択された医薬担体、賦形剤又は希釈剤と混合して
投与される。
【０２３５】例として、本発明の医薬組成物において
は、本発明の薬剤を適切な結合剤（１種もしくは複
数）、滑沢剤（１種もしくは複数）、懸濁剤（１種もし
くは複数）、コーティング剤（１種もしくは複数）、又
は可溶化剤（１種もしくは複数）と混合することができ
る。
【０２３６】一般には、本発明の薬剤の治療上有効な一
日経口もしくは静脈内用量は、０．０１ないし５０ｍｇ
／治療しようとする被験者の体重ｋｇ、好ましくは０．
１ないし２０ｍｇ／ｋｇの範囲と考えられる。また、本
発明の薬剤は静脈内注入により、０．００１−１０ｍｇ
／ｋｇ／時間の範囲と考えられる用量で投与することも
できる。
【０２３７】これらの薬剤の錠剤及びカプセルは、適宜
１つずつ又は一度に２つ以上を投与することができる。
また、本発明の薬剤を徐放性製剤として投与することも
可能である。
【０２３８】本発明は、よって、ＰＤＥ１１の活性のた
めに同様のものを必要とする個人を治療するための方法
であって、該個人に有効量の本発明の医薬組成物を投与
することを包む前記方法も提供する。
【０２３９】典型的には、医師が個々の患者に最も適切
な実際の投与量を決定し、それは特定の患者の年齢、体
重及び応答に従って変化する。上述の投与量は平均的な
事例の典型的な例である。もちろん、より低い、もしく
はより高い投与量範囲に利点がある個々の事例が存在す
る可能性があり、そのようなものも本発明の範囲内にあ
る。
【０２４０】適切であるならば、この医薬組成物は吸入
により、座剤もしくは膣座薬の形態で、ローション、溶
剤、クリーム、軟膏剤もしくは粉剤の形態で局所的に、
皮膚パッチの使用により、デンプンもしくは乳糖のよう
な賦形剤を含む錠剤の形態、又は単独の、もしくは賦形
剤と混合したカプセル剤もしくは膣坐剤（ｏｖｕｌｅ）
の形態、又は香味料もしくは着色料を含むエリキシル、
溶液もしくは懸濁液の形態で経口により投与することが
でき、あるいは非経口的に、例えば、空洞内、静脈内、
筋肉内もしくは皮下に注射することができる。非経口投
与に対しては、これらの組成物は無菌の水溶液の形態で
最良に用いることができ、これは他の物質、例えば、そ
の溶液を血液と等張にするのに十分な塩もしくは単糖を
含んでいてもよい。頬もしくは舌下投与に対してはこれ
らの組成物を錠剤もしくはトローチ剤の形態で投与する
ことができ、これらは慣用された方式で処方することが
できる。
【０２４１】幾つかの適応については、好ましくは、こ
れらの組成物はデンプンもしくは乳糖のような賦形剤を
含む錠剤の形態で、又は単独の、もしくは賦形剤と混合
したカプセル剤もしくは膣坐剤の形態で、又は香味料も
しくは着色料を含むエリキシル、溶液もしくは懸濁液の
形態で経口投与する。
【０２４２】非経口投与に対しては、これらの組成物は
無菌の水溶液の形態で最良に用いられ、これは他の物
質、例えば、その溶液を血液と等張とするのに十分な塩
もしくは単糖を含んでいてもよい。
【０２４３】頬もしくは舌下投与に対しては、これらの
組成物は錠剤もしくはトローチ剤の形態で投与すること
ができ、これらは慣用ざれた方式で処方することができ
る。被験者（例えば、患者）への経口、非経口、頬及び
舌下投与については、本発明の薬剤の一日投与量は典型
的には１０ないし５００ｍｇ（一回もしくは分割用量
で）であり得る。したがって、そして例として、錠剤又
はカプセルは、適宜１個ずつの又は一度に２個以上の投
与に対して、５ないし１００ｍｇの活性薬剤を含むこと
ができる。上に示されるように、医師が個々の患者に最
も適切である実際の投与量を決定し、それは特定の患者
の年齢、体重及び応答に応じて変化する。上述の投与量
は平均的な事例の典型的な例であるが、もちろん、より
高い、もしくはより低い投与量範囲に利点がある個々の
事例が存在する可能性もあり、そのような用量範囲も本
発明の範囲内にある。
【０２４４】一般に、ヒトにおいては、本発明の薬剤の
経口投与が好ましい経路であり、これは最も好都合で、
かつ、例えば男性の勃起不全（ＭＥＤ）において、空洞
内（ｉ．ｃ．）投与に関与する公知の不利益を回避す
る。典型的な男性に対する、ＭＥＤにおける好ましい経
口投与措置は、必要なときに２５ないし１００ｍｇの薬
剤を投与するものである。レシピエントが嚥下障害を患
い、又は経口投与後の薬物吸収の障害を患う状況におい
ては、この薬物を非経口的に、例えば、舌下又は頬から
投与することができる。
【０２４５】獣医学的な使用に対しては、本発明の薬剤
は、典型的には、通常の獣医学的実務に従って適切に受
け入れられる製剤として投与され、獣医が特定の動物に
最も適切である投与措置及び投与経路を決定する。しか
しながら、ヒトの治療と同様に、獣医学的治療のために
この薬剤を単独で投与することも可能である。
【０２４６】典型的には、医薬組成物−これはヒト又は
動物に使用するためのものであり得る−は、薬学的に許
容し得る希釈剤、担体、賦形剤又は補助剤のいずれか１
種類以上を含む。医薬担体、賦形剤又は希釈剤の選択
は、意図する投与経路又は標準的な医薬実務に関して選
択することができる。上に示されるように、この医薬組
成物は、担体、賦形剤もしくは希釈剤として、又はそれ
らに加えて、適切な結合剤（１種もしくは複数）、滑沢
剤（１種もしくは複数）、懸濁剤（１種もしくは複
数）、コーティング剤（１種もしくは複数）、可溶化剤
（１種もしくは複数）を含むことができる。
【０２４７】本発明の幾つかの態様において、この医薬
組成物は下記のものの１つ以上を含む：本発明の検定に
よってスクリーニングされている薬剤；配列番号１、配
列番号２、配列番号３もしくは配列番号４もしくは配列
番号１４もしくは配列番号１５もしくは配列番号１６も
しくは配列番号１７もしくは配列番号１８もしくは配列
番号１９又はそれらの誘導体、断片、相同体もしくは変
異体のいずれか１つ以上と反応することが可能な薬剤、
あるいは配列番号１もしくは配列番号３もしくは配列番
号１４もしくは配列番号１６もしくは配列番号１８とハ
イブリダイズすることが可能な配列。
【０２４８】ＰＤＥ１１ ｍＲＮＡを不安定化し、又は
ＰＤＥ１１の翻訳を阻害するように作用するオリゴヌク
レオチド配列、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子並び
にリボザイムが本発明の範囲内に含まれる。このような
ヌクレオチド配列は、環状ヌクレオチドの濃度を高める
ことが好ましい状態、例えば炎症、において用いること
ができる。
【０２４９】ＰＤＥ１１アンチセンス分子は、例えばＰ
ＤＥ１１の活性の増加に関連する様々な異常な状態、例
えば男性の勃起不全、の治療の基礎を提供し得る。ＰＤ
Ｅ１１核酸アンチセンス分子は、環状ヌクレオチドの濃
度を上昇させることが好ましい状況において、ＰＤＥ１
１の活性を遮断するのに用いることができる。
【０２５０】レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペ
スもしくはワクチニアウイルス、又は様々な細菌プラス
ミドから誘導される発現ベクターを、組換えＰＤＥ１１
センスもしくはアンチセンス分子を標的とされる細胞集
団に送達するために用いることができる。ＰＤＥ１１を
有する組換えベクターを構築するには当業者に公知の方
法を用いることができる。あるいは、組換えＰＤＥ１１
は、リポソームに封入して標的細胞に送達することがで
きる。
【０２５１】完全長のｃＤＮＡ配列及び／又はその調節
要素は、研究者が遺伝子の機能のセンス（Ｙｏｕｓｓｏ
ｕｆｉａｎ Ｈ及びＨＦ Ｌｏｄｉｓｈ １９９３ Ｍ
ｏｌＣｅｌｌ Ｂｉｏｌ １３：９８−１０４）又はア
ンチセンス（Ｅｇｕｃｈｉら （１９９１） Ａｎｎｕ
Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６０：６３１−６５２）研
究のツールとしてＰＤＥ１１を用いることを可能にす
る。ゲノムＤＮＡから得られたｃＤＮＡ又は制御配列か
ら設計されたオリゴヌクレオチドを、イン・ビトロ又は
イン・ビボにおいて、発現の阻止に用いることができ
る。このような技術は現在当該技術分野において公知で
あり、センスもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチド
又はより大きい断片をコーディング又は制御領域に沿っ
て様々な位置から設計することができる。長さが２０ヌ
クレオチドであり得る適切なオリゴヌクレオチドを、ヒ
トライブラリーからＰＤＥ１１配列又は密接に関連する
分子を単離するのに用いることができる。
【０２５２】加えて、ＰＤＥ１１の発現は、細胞又は組
織に、ホスホジエステラーゼの活性を遮断し、それによ
り環状ヌクレオチド濃度を高めることが好ましい状態に
おいて高濃度のＰＤＥ１１断片を発現する発現ベクター
を形質移入することにより調節することができる。この
ような構築体は細胞を翻訳できないセンスもしくはアン
チセンス配列であふれさせることができる。ＤＮＡへの
組み込みが存在しない状態であっても、このようなベク
ターは、そのベクターの全てのコピーが内在性ヌクレア
ーゼによって無能化されるまで、ＲＮＡ分子を転写し続
けることができる。このような一過性の発現は、非複製
ベクターで１ヶ月もしくはそれ以上、そして適切な複製
要素がそのベクター系の一部である場合はそれよりも長
く持続し得る。
【０２５３】ＰＤＥ遺伝子の制御領域、例えば、プロモ
ーター、エンハンサー、及びイントロンに対するアンチ
センス配列を設計することにより、遺伝子の発現を変更
させることができる。
【０２５４】転写開始部位、例えば、リーダー配列の−
１０ないし＋１０領域から誘導されるオリゴヌクレオチ
ドが好ましい。アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子は、
転写物がリボソームに結合するのを妨げることにより、
ｍＲＮＡの翻訳を遮断するように設計することもでき
る。同様に、“三重らせん”塩基対形成としても知られ
るホジブーム塩基対形成法（Ｈｏｇｅｂｏｏｍ ｂａｓ
ｅ−ｐａｉｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）を用い
て阻害を達成することができる。三重らせん対形成は、
ポリメラーゼ、転写因子、又は調節分子の結合に十分な
程度に開く二重らせんの能力を危ういものにする。
【０２５５】本発明は、よって、本発明の薬剤（又はそ
れらの薬学的に許容し得る塩、又はそれらの薬学的に許
容し得る溶媒和物）を薬学的に許容し得る希釈剤、賦形
剤又は担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【０２５６】この医薬組成物は獣医学的に（すなわち、
動物に）用いるもの、又はヒトに用いるものであり得
る。したがって、本発明は、有効量のＰＤＥ１１タンパ
ク質の阻害剤又はアンタゴニスト（アンチセンス核酸配
列を含む）を薬学的に許容し得る希釈剤、担体、賦形剤
又は補助剤（それらの組み合わせを含む）と混合された
状態で含む医薬組成物にも関する。
【０２５７】本発明は、ＰＤＥ１１ポリヌクレオチド配
列、ＰＤＥ１１アンチセンス分子、ＰＤＥ１１ポリペプ
チド、タンパク質、ペプチド、又はＰＤＥ１１生理活性
の有機修飾因子、例えば阻害剤、アンタゴニスト（抗体
を含む）もしくはアゴニスト、の全てもしくは一部を単
独で、又は少なくとも１種類の他の薬剤、例えば安定化
化合物、との組み合わせで含むことができ、かつ生理食
塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、及び水を含む
がこれらに限定されるものではないあらゆる無菌の生体
適合性医薬担体中で投与することができる医薬組成物に
関する。要約 要約すると、本発明は、とりわけ、以下のものを提供す
る： １． 新規アミノ酸。
【０２５８】２． 新規ヌクレオチド配列。 ３． 前記新規配列を用いる検定。 ４． 前記検定を用いることにより同定される化合物／
組成物。
【０２５９】５． 前記新規配列を含み、又はそれを発
現する発現系。 ６． 前記新規配列に基づく治療方法。 ７． 前記新規配列に基づく医薬組成物。寄託 以下の試料を、ブダペスト条約に従い、ＡＢ２ １Ｒ
Ｙ、英国スコットランド、アバディーン、マハルドライ
ブ，２３ストリートの認定寄託機関ザ・ナショナル・コ
レクション・オブ・インダストリアル・アンド・マリー
ン・バクテリア・リミッテッド（Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉ
ａｌ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｌｉ
ｍｉｔｅｄ）（ＮＣＩＭＢ）に、１９９８年３月６日に
寄託した。 大腸菌ｐＰＤＥ１１Ａ１ ＮＣＩＭＢ番号ＮＣＩＭＢ ４０９２５ 大腸菌ｐＰＤＥ１１Ａ２ ＮＣＩＭＢ番号ＮＣＩＭＢ ４０９２６ ＮＣＩＭＢ ４０９２５はＨＳＰＤＥ１１Ａ１を含む。
【０２６０】ＮＣＩＭＢ ４０９２６はＨＳＰＤＥ１１
Ａ２を含む。 以下の試料を、ブダペスト条約に従い、ＡＢ２ １Ｒ
Ｙ、英国スコットランド、アバディーン、マハルドライ
ブ，２３ストリートの認定寄託機関ザ・ナショナル・コ
レクション・オブ・インダストリアル・アンド・マリー
ン・バクテリア・リミッテッド（ＮＣＩＭＢ）に、１９
９９年２月９日に寄託した。 大腸菌ｐＭｍＰＤＥ１１Ａ３ ＮＣＩＭＢ番号ＮＣＩＭＢ ４１００７ ＮＣＩＭＢ ４１００７はＭｍＰＤＥ１１Ａ３を含む。 また、本発明は、これらの寄託物から誘導可能及び／又
は発現可能である配列並びにそれらを含む態様をも包含
する。また、本発明は、これらの寄託物から誘導可能及
び／又は発現可能である部分的な配列並びにそれらを含
む態様をも包含し、これらの部分的な配列は活性酵素部
位をコードするものである。また、本発明は、これらの
寄託物から誘導可能及び／又は発現可能である配列を含
むタンパク質並びにそれらを含む態様をも包含する。ま
た、本発明は、これらの寄託物から誘導可能及び／又は
発現可能である部分的な配列を含むタンパク質並びにそ
れらを含む態様をも包含し、これらの部分的な配列は活
性酵素部位をコードするものである。
【０２６１】また、本発明は、これらの寄託物から誘導
可能及び／又は発現可能である配列並びにそれらを含む
態様をも包含する。実験の部及び図面の序文 本発明を、例のみとして、添付の図面を参照して説明す
る。添付の図面において：図１は模式図を示し；図２は
ノーザンブロットの写真画像を示し；図３は模式図を示
し；図４はヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を示し；
図５はヌクレオチド配列、アミノ酸配列及びタンパク質
配列の整列を示し；図６はグラフを示し；図７はヘイン
ズプロットを示し；図８は顕微鏡写真を示し；図９は写
真を示し；図１０は配列の整列を示し；及び図１１は配
列の整列を示す。
【０２６２】多少詳細には、図１はウシＰＤＥ５、ＩＭ
ＡＧＥクローン２９８９７５及びＰＤＥ１１Ａ１の模式
的整列であり、ＰＤＥ１１Ａ１が他のホスホジエステラ
ーゼと共有する様々な関連機能的ドメイン及びＩＭＡＧ
Ｅクローン２９８９７５に存在する部分的なＰＤＥ１１
Ａ１配列が含む領域を示す。
【０２６３】多少詳細には、図２はＰＤＥ１１Ａの発現
の組織分布を示すノーザンブロットである。多少詳細に
は、図２はＰＤＥ１１Ａ１の完全長ｃＤＮＡのクローン
化に用いられる戦略を示す模式図であり、バーは一定の
比率ではなく、ＣＮは尾状核を指す。
【０２６４】多少詳細には、図４Ａは配列番号１であっ
て、これはＰＤＥ１１Ａ１をコードするヌクレオチド配
列であり、ＡＴＧ翻訳開始が二重下線で示されている。
多少詳細には、図４Ｂは配列番号２であり、これはＰＤ
Ｅ１１Ａ１のタンパク質配列である。
【０２６５】多少詳細には、図５Ａは配列番号３であっ
て、これはＰＤＥ１１Ａ２をコードするヌクレオチド配
列であり、ＡＴＧ翻訳開始コドンが二重下線で示されて
いる。
【０２６６】多少詳細には、図５Ｂは配列番号４であ
り、これはＰＤＥ１１Ａ２のタンパク質配列である。多
少詳細には、図５ＣはＰＤＥ１１Ａ１及びＰＤＥ１１Ａ
２のアミノ末端の整列であり、この２つのスプライス変
異体の間で相違する領域を示す。
【０２６７】多少詳細には、図６は、ＰＤＥ１１感染も
しくは疑似感染のいずれかのＳｆ９細胞におけるｃＡＭ
ＰもしくはｃＧＭＰに対するＰＤＥ１１の相対加水分解
活性を示すグラフである。
【０２６８】多少詳細には、図７は、ｃＡＭＰもしくは
ｃＧＭＰのいずれかに対するＰＤＥ１１Ａ１のＫｍ及び
Ｖｍａｘ値を算出するのに用いられるヘインズプロット
を示す。
【０２６９】多少詳細には、図８は、ＰＤＥ１１の発現
を示す様々な組織のＰＤＥ１１発現顕微鏡写真インサイ
ツハイブリダイゼーション分析のインサイツ分析を示
す。より詳細には、図８は様々な組織におけるＰＤＥ１
１の発現を示す顕微鏡写真であって、左側は明視野で撮
影された顕微鏡写真であり、かつ右側は発現部位周辺の
銀粒子の検出を可能にするために暗視野で撮影された顕
微鏡写真である。パネルＡは前立腺内の上皮細胞のサブ
セットにおけるＰＤＥ１１の発現を示し、領域１は前立
腺管におけるＰＤＥ１１の発現を、領域２は発現のない
前立腺管を示す。パネルＢはヒト脳の線条体領域におけ
るＰＤＥ１１の発現を示す。発現は明らかに灰白質（領
域１）に存在するニューロン核に限定され、これに対し
て白質（領域２）にはＰＤＥ１１の発現はない。パネル
Ｃは食道括約筋の神経節細胞におけるＰＤＥ１１の発現
を示す。パネルＤは海綿体血管内の内皮細胞のサブセッ
トにおけるＰＤＥ１１の発現を示す。矢印は発現の正確
な領域を示す役目を果たす。
【０２７０】多少詳細には、図９は、ＰＤＥ１１抗体が
ＰＤＥ１１タンパク質を検出できることを示す写真を提
示する。ＰＤＥ１１バキュロウイルスに感染した昆虫細
胞又は非感染細胞からの粗製溶解物をＰＡＧＥで電気泳
動した。次に、ゲル上のタンパク質をニトロセルロース
膜にブロットした。このブロットを、２種類のＰＤＥ１
１抗体の相対特異性の研究に用いた。Ａｂ−１はペプチ
ド配列番号８から誘導し、Ａｂ−２はペプチド配列番号
９から誘導した。
【０２７１】
【実施例】実施例 実験の部 材料及び方法 ノーザンハイブリダイゼーション及びプローブの調製 クローンテック（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）（Ｃｌｏｎｔｅｃ
ｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１０２０ Ｅａｓｔ
Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，
Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ， ９４３０３， ＵＳＡ）か
ら入手したノーザンブロットを１時間、エクスプレスハ
イブ（Ｅｘｐｒｅｓｓｈｙｂ）ハイブリダイゼーション
溶液（クローンテック−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ，１０２０ Ｅａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ
Ｃｉｒｃｌｅ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒ
ｎｉａ， ９４３０３， ＵＳＡ）中において５５℃で
予備ハイブリダイズさせた後、放射標識ＰＤＥ１１Ａ１
断片（ＤＮＡを、メガプライム（Ｍｅｇａｐｒｉｍｅ）
ランダム標識システム（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ）｛Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｌａｃｅ， Ｌｉｔｔｌｅ
Ｃｈａｌｆｏｎｔ，Ｂｕｃｋｓ， ＨＰ７ ９ＮＡ
ＵＫ｝を製造者の指示に忠実に従って用いて、５０μＣ
ｉの32Ｐ−ｄＡＴＰで標識した）を新鮮なエクスプレス
ハイブに添加し、５５℃で一晩、穏やかに攪拌しながら
ブロットにハイブリダイズさせた。次に、ブロットを室
温で各々１０分間、２×ＳＳＣ（１５０ｍＭ ＮａＣ
ｌ、３０ｍＭクエン酸Ｎａ）中で３回洗浄した後、０．
２×ＳＳＣ（１５ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭクエン酸Ｎ
ａ）中、５５℃で各々２０分間、２回洗浄した。その
後、ブロットをオートラジオグラフィーフィルムに露出
した。 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ） ＰＣＲを標準的な試薬及び条件を用いて行った。簡単に
述べると、全ての反応バッファー及び酵素はキットの体
裁でクローンテック｛Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ，１０２０ Ｅａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃ
ｉｒｃｌｅ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， Ｃａｌｉｆｏｒｎ
ｉａ， ９４３０３， ＵＳＡ｝（ｃＤＮＡ末端（ＲＡ
ＣＥ）反応の急速増幅用）又はライフ・テクノロジーズ
（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（３ Ｆｏｕ
ｎｔａｉｎ Ｄｒｉｖｅ， Ｉｎｃｈｉｎｎａｎ Ｂｕ
ｓｉｎｅｓｓ Ｐａｒｋ， Ｐａｉｓｌｅｙ， ＰＡ４
９ＲＦ ＵＫ）（標準ＰＣＲ用）のいずれかから入手し
た。オリゴヌクレオチドは市場供給者（ＯＳＷＥＬ Ｄ
ＮＡ ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｌａｂ ５００５， Ｍｅ
ｄｉｃａｌ Ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ，Ｂｏｌｄｅｒｗｏｏ
ｄ，Ｂａｓｓｅｔｔ Ｃｒｅｓｃｅｎｔ Ｅａｓｔ，Ｓ
ｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ，ＳＯ１６ ７ＰＸ ＵＫ）から
入手し、４００ｎＭの濃度で用いた。反応はＭＪリサー
チ（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）ＰＴＣ−２００サーマル
サイクラーで、用いるキットの製造者が推奨するサイク
リングパラメータを用いて行った。 ＰＣＲ産生物のクローン化 ＰＣＲ誘導ＤＮＡ断片を、インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）（ＤｅＳｃｈｅｌｐ １２， ９３５１
ＮＶ Ｌｅｅｋ， Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）
によって供給されるＴＯＰＯクローニングシステム（カ
タログ番号Ｋ３００１−０−１）を用いて、製造者の手
法本に略述される方法に従い、かつ供給される試薬を用
いて単離した。 粗製昆虫細胞溶解物に対するホスホジエステラーゼ検定 粗製溶解物を、［3Ｈ］−ｃＧＭＰ又は［3Ｈ］−ｃＡＭ
Ｐ（アマシャム−Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｌａｃｅ， Ｌ
ｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ， Ｂｕｃｋｓ， ＨＰ
７ ９ＮＡ ＵＫ）を用いてホスホジエステラーゼ活性
について検定した。２５μｌの粗製溶解物に１５μｌの
バッファーＣ（２０ｍＭ トリスＨＣＬ（ｐＨ９．
４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ）及び２５μｌのバ
ッファーＤ（バッファーＣ＋ＢＳＡ＠２ｍｇ／ｍｌ）を
添加した。５０μｌの基質を用いて反応を開始させ、管
を振盪しながら３０℃で１５分間インキュベートした。
次に、これらの管を沸騰水浴に２分間移した後、氷上に
１０分間移した。次いで、ヘビ毒（オフィオファグス・
ハンナ（Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓ ｈａｎｎａｈ）、シ
グマ（Ｓｉｇｍａ）｛Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ， Ｆａｎｃｙ Ｒｏａ
ｄ， Ｐｏｏｌｅ， Ｄｏｒｓｅｔ， ＢＨ１２４ＱＨ
ＵＫ｝、Ｖ−０３７６）の１．５ｍｇ／ｍｌ水溶液２
５μｌを添加して混合し、攪拌しながらさらに１０分間
３０℃まで戻した。次に、管を氷に戻して５分後に５０
０μｌの樹脂スラリーを添加し、完全に混合して氷上に
さらに１５分間静置した。次いで管を２０００ｒｐｍで
１０分間遠心し、その後、１５０μｌの上清を取り除い
て２ｍｌのスターシント（Ｓｔａｒｓｃｉｎｔ）（パッ
クハード（Ｐａｃｋｈａｒｄ））を添加し、混合して液
体シンチレーション計数に処した。
【０２７２】存在するホスホジエステラーゼの活性を以
下の式によりピコモル／分／ｍｌの割合で表す： ｛（試料のＤＰＭ−ブランクのＤＰＭ）／（合計の平均
ＤＰＭ−バックグランドの平均ＤＰＭ）｝×（６２５／
１５０）×（５０ピコモル／１０分）×１００ その後、活性粗製溶解物をドライアイスエタノール浴に
おいてフラッシュ凍結し、−８０℃で保存した。 粗製溶解物からのタンパク質の精製 発現したタンパク質−ＦＬＡＧ融合体を含む粗製Ｓｆ９
溶解物を、ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ＦＰＬ
Ｃシステム（ＬＫＢ．ＵＶ−ＭＩＩ）｛Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２３ Ｇｒｏｓｖｅｎｏｒ Ｒ
ｏａｄ， ＳｔＡｌｂａｎｓ， Ｈｅｒｔｓ， ＡＬ１
３ＡＷ．ＵＫ｝を用いて、ＦＬＡＧ抗体アフィニティ
カラム（精製ＩｇＧ１モノクローナル抗ＦＬＡＧ抗体が
ヒドラジド結合により結合しているアガロースＭ２アフ
ィニティゲルビーズ）に流した。精製されたタンパク質
を厳密にアフィニティビーズの製造者によって指定され
る条件下で溶出し、等量に分割して続く分析のために−
８０℃で保存した。 アフィニティ精製タンパク質に対するホスホジエステラ
ーゼ検定 １４．７μｌの［3Ｈ］−ｃＧＭＰ（アマシャム−Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ ｐｌａｃｅ， Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌ
ｆｏｎｔ， Ｂｕｃｋｓ， ＨＰ７ ９ＮＡＵＫ）を２
０μｌのバッファーＣ（上述の通り）に添加することに
より基質を調製した。９６ウェルの構成において、２５
μｌのバッファーＤ（上を参照）を全てのウェルに添加
した。２５μｌの試料を全てのウェルに添加した後、５
０μｌの基質を添加して反応を開始させた。試料を３０
℃で３０分間インキュベートした後、５０μｌのＳＰＡ
ビーズを添加し、２０分間放置した後シンチレンショー
ンカウンターで読み取った。 ウェスタンブロット 昆虫細胞を遠心によりペレット化し、溶解バッファー
（５０ｍＭ トリスＨＣＬ（ｐＨ６．８）、１００ｍＭ
ジチオトレイトール、２％ＳＤＳ、０．２％ブロモフ
ェノールブルー、２０％グリセロール）に再懸濁し、超
音波処理し、沸騰水浴に１０分間入れて、還元条件下に
おいてＳＤＳ ＰＡＧＥ（ノベックス（Ｎｏｖｅｘ）Ｎ
ｕＰＡＧＥ ４−１２％ Ｂｉｓ−ＴＲＩＳ還元ゲル、
キットＮＰ００００）で電気泳動した。次に、これらの
タンパク質を、ノベックスＮｕＰＡＧＥウェスタン移行
システムを用いてニトロセルロース膜に移した。次い
で、このウェスタンブロットをＰＢＳ／０．１％ツィー
ン２０／５％乾燥ミルク中、４℃で一晩インキュベート
した。その後、このブロットをＰＢＳ／０．１％ツィー
ン２０／５％乾燥ミルク／一次抗体の１／５００希釈液
中で１時間インキュベートした。次に、ＰＢＳ／ツィー
ン２０で３×１分及び１×１０分洗浄した後、ＰＢＳ／
ツィーン２０／５％乾燥ミルクで３×１分及び１×１０
分洗浄した。次いで、二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ
（Ｈ＋Ｌ）−アルカリホスファターゼ結合体（バイオ−
ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）１７０６５１８）をこの溶液
に添加し、室温で４５分間、振盪しながらインキュベー
トした。次に、ブロットをＰＢＳ／ツィーン２０中で３
×１分及び１×１０分洗浄し、その後５−ブロモ−４−
クロロ−３−インドリルホスフェート及びニトロブルー
テトラゾリウム（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、シグマＢ１９１１
｛Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌｉ
ｍｉｔｅｄ， Ｆａｎｃｙ Ｒｏａｄ， Ｐｏｏｌｅ，
Ｄｏｒｓｅｔ， ＢＨ１２ ４ＱＨ ＵＫ｝）を用い
て検出した。実施例１ ＰＤＥ１１Ａ１の同定 クローン（ＩＭＡＧＥクローン ｉｄ ２９８９７５）
をリサーチ・ジェネティクス（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ）（２１３０， Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｐｋ
ｗｙ，ＳＷ Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ３５８８０
１，ＵＳＡ）からＬ−寒天中の穿刺培養として入手し
た。穿刺培養からの細菌を、１００ｍｇ／ｍｌの濃度の
アンピシリンの存在下において、３７ｍｍ Ｌ−寒天プ
レート上に画線した。３７℃で一晩成長させた後、１つ
のクローンを無菌技術を用いて、アンピシリンを１００
ｍｇ／ｍｌの濃度で含む５ｍｌのＬＢ−ブロスに摘み入
れ、振盪（２２０ｒｐｍ）しながら３７℃で一晩成長さ
せた。標準的な市販のミニプレップキット（キアゲンTM
（ＱｉａｇｅｎTM））を用い、製造者の指示に厳密に従
って細菌からプラスミドＤＮＡを単離した。次に、単離
したＤＮＡを、標準的なキット及び試薬及びＡＢＩ（Ｐ
Ｅアプライド・バイオシステムズ社（ＰＥ Ａｐｐｌｉ
ｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅ
ｄ））自動シーケンサーを用いて、完全長配列決定に処
した。
【０２７３】完全長配列決定で、ＩＭＡＧＥクローン２
９８９７５は１７７９ｂｐのヌクレオチドインサートを
有することが明らかになった。ＢＬＡＳＴ（ベーシック
・ローカル・アラインメント・サーチ・ツール（Ｂａｓ
ｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ
Ｔｏｏｌ）（Ａｌｔｓｈｕｌ ＳＦ （１９９３）
Ｊ． Ｍｏｌ． Ｅｖｏｌ． ３６：２９０−３００；
Ａｌｔｓｈｕｌ， ＳＦら （１９９０） Ｊ． Ｍｏ
ｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３−４１０）を用いる
データベース相同性検索を行い、このＩＭＡＧＥクロー
ン２９８９７５中のＤＮＡインサートがＥＳＴ（発現し
た配列（発現した配列タグ））データベースに存在する
配列を有し、この配列が既知ＰＤＥと相同であり、かつ
２９８９７５がＥＳＴの５’側に追加ＤＮＡ配列の大き
な伸長をも有し、これも既知ＰＤＥと相同であることが
示された。読取り枠、ＡＴＧ翻訳開始コドン及びＴＧ
Ａ、ＴＡＡ、ＴＡＧ終止コドンの存在を決定するため、
この配列のさらなる分析を行った。これにより、クロー
ン２９８９７５が、ＡＴＧイニシエーターの塩基対位置
＋１３からこの配列の３’側限界まで全てにわたって伸
びる推定ＯＲＦ（読取り枠）を有することが明らかにな
った。このクローンの３’側にはターミネーターコドン
を示すものがなく、このｃＤＮＡが３’末端で完全では
ないことが示唆される。 ＰＤＥの潜在的な新規クラスの断片を有するＩＭＡＧＥ
クローン２９８９７５ ２９８９７５のインサートと既知ＰＤＥとの配列を比較
する詳細な生命情報科学分析により、２９８９７５の配
列がＰＤＥｓの新規集団のメンバーの断片をコードする
可能性があることが示される。その理由は、例えばＰＤ
Ｅ６ＡとＰＤＥ６Ｂとが比較的類似するのと比較して、
２９８９７５と他のＰＤＥとの類似性が比較的欠如して
いることである。２９８９７５と他のＰＤＥとの類似性
は、例えばＰＤＥ５とＰＤＥ６Ａとの類似性により匹敵
する。これは表１（下記）に示されており、この表は２
９８９７５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ及びＰＤＥ５の間
の、２９８９７５からの配列を利用することができる領
域（同様に以下を参照）全体にわたる類似性のパーセン
テージを示す。
【０２７４】
【表４】 表１ ＰＤＥ６Ａ ＰＤＥ６Ｂ ＰＤＥ５ ＰＤＥ１１ ＰＤＥ６Ａ １００ ７７．７ ３９．７ ３４．１ ＰＤＥ６Ｂ １００ ４１．１ ３４．１ ＰＤＥ５ １００ ３５．５ ＰＤＥ１１ １００ 表１はＰＤＥ１１と他のＰＤＥ遺伝子集団のメンバーと
の類似性のパーセンテージを示し、かつ、互いに高い程
度の類似性を有するＰＤＥ６とは対照的に、ＰＤＥ１１
がＰＤＥ５、ＰＤＥ６Ａ及びＰＤＥ６Ｂから等しく隔た
っていることを示す。これは、ＰＤＥ１１が既知集団の
サブタイプではなく、新たなＰＤＥ遺伝子集団を構成す
ることを示唆する。
【０２７５】このような理由から、ＩＭＡＧＥクローン
２９８９７５内に含まれるこの部分配列を、ＰＤＥ命名
法の現行ガイドライン（Ｂｅａｖｏら Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ４６：３９９−４０
５）に従ってＰＤＥ１１Ａ１と命名した。
【０２７６】他のＰＤＥにおいて観察される機能的ドメ
インの存在を、それが存在するのであれば、決定するた
め、クラスタル（Ｃｌｕｓｔａｌ）プログラム（Ｔｈｏ
ｍｐｓｏｎら （１９９４） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２：４６７３−４６８０）
を用いて、ＰＤＥ１１Ａ１配列断片とウシＰＤＥ５（Ｐ
ＤＥ５は、これが機能的に最も十分に特徴付けられてい
る既知ＰＤＥのうちの１つであることから選択した）と
の整列化を行った。これは図１（パネルＢ）に模式的に
示され、２９８９７５に含まれるＰＤＥ１１Ａ１の配列
断片が実質的にＰＤＥ５と重なるが、ＰＤＥ５配列の残
基６６９で終止することを示している。これは、２９８
９７５内に含まれるものに加えて、ＰＤＥ１１Ａ１の実
質的な３’配列が存在する可能性があることを示す。Ｐ
ＤＥ１１Ａ１における２つの推定亜鉛結合モチーフ（Ｈ
ＸＸＸＨＸ8-20Ｄ）の存在は、ＰＤＥ１１Ａ１が機能的
ホスホジエステラーゼ酵素をコードするという仮説を支
持する。実施例２ ＰＤＥ１１Ａ１の推定完全長ｃＤＮＡクロー
ンの単離 コーディング領域の３’末端及びターミネーターコドン
を含むＰＤＥ１１Ａ１の完全長ｃＤＮＡの単離を容易に
するため、ノーザンハイブリダイゼーションを用いて一
続きの組織においてＰＤＥ１１Ａ１の発現を決定した。
このデータ（図２に示される）は、ＰＤＥ１１Ａ１とハ
イブリダイズする伝令ＲＮＡ（長さ９．５ｋｂ）が幾つ
かの組織に存在するものの、それが脳の尾状核及び被殻
領域において特に高度に発現することを示す。したがっ
て、尾状核ｃＤＮＡ（クローンテック−Ｃｌｏｎｔｅｃ
ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１０２０ Ｅａｓｔ
Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，
Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，９４３０３，ＵＳＡ）を、余分
の３’配列を生成するためのＰＣＲベースのアプローチ
（方法を参照）のテンプレートとして用いた。３’ＲＡ
ＣＥでの最初の試みが不成功であったため、代わりの方
策を工夫してさらなる３’配列を生成させた。これは、
以下のオリゴヌクレオチドを用いることにより達成し
た： ＲＰ１： ５’−TCNCCYTGRTCRTARAAYTC−３’ （配列番号５） これは、ＰＤＥ５及び６の整列において観察される保存
配列に基づくものであり、３’プライマーとして用い
た。
【０２７７】以下の第２オリゴヌクレオチド、５’プラ
イマーも用いた： ＧＳＰ１： ５’−TACTTCAGAACAATCACACG−３’ （配列番号６） これは既知ＰＤＥ１１Ａ１配列に基づくものである。こ
れらのプライマーを用いて行われたＰＣＲ（このＰＣＲ
は、ＰＣＲリエージェント・システム（ＰＣＲＲｅａｇ
ｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ）キット（ライフ・テクノロジー
ズ−３ Ｆｏｕｎｔａｉｎ Ｄｒｉｖｅ， Ｉｎｃｈｉ
ｎｎａｎ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｐａｒｋ， Ｐａｉｓｌ
ｅｙ， ＰＡ４ ９ＲＦ ＵＫ）から入手した試薬を用
い、製造者の指示に従って、標準的なサイクリングパラ
メータを用いて設定した）により断片が生成され、これ
は、ＴＯＰＯベクターにクローン化して完全長配列決定
を行うことにより、ＩＭＡＧＥクローン２９８９７５か
ら誘導されるＰＤＥ１１Ａ１配列とその５’末端が重な
り、かつＰＤＥ１１Ａ１の３’末端に向かってさらに４
００ｂｐ ３’側に伸びることが立証された。しかしな
がら、この断片はターミネーターコドンを含んでおら
ず、これは単離しなければならないさらなるＰＤＥ１１
Ａ１が３’末端に残ることを示していた。
【０２７８】この仮説を試験するため、３’ＲＡＣＥ
を、配列番号６（上を参照）を有する尾状核マラトン・
レディTM（Ｍａｒａｔｈｏｎ ＲｅａｄｙTM）ｃＤＮＡ
（クローンテック−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ，１０２０ Ｅａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉ
ｒｃｌｅ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉ
ａ，９４３０３，ＵＳＡ）及び３’ＲＡＣＥキットと共
に供給される３’プライマー（クローンテック｛Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１０２０ Ｅ
ａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ，Ｐａｌｏ Ａｌ
ｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，９４３０３，ＵＳＡ｝、
製造者が推奨する試薬及び方法を用いる）で行った。こ
れらのＲＡＣＥ産物を用いて、２０００クローンのミニ
ライブラリーをＴＯＰＯベクター（インビトロゲン−Ｄ
ｅ Ｓｃｈｅｌｐ １２，９３５１ＮＶ Ｌｅｅｋ，Ｔ
ｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）中に作製した。このミ
ニライブラリーを、上で誘導される伸長断片の３’末端
から誘導されるプローブとのハイブリダイゼーションに
よりスクリーニングした。５つのクローンが同定され、
これらは、配列決定によりさらなる３’ＰＤＥ関連配列
を有することが立証された。また、これらのクローンは
枠内ターミネーターコドンをも有しており、これはこの
ｃＤＮＡ内の推定コーディング配列の３’限界を示して
いた。完全長ＰＤＥ１１Ａ１ ｃＤＮＡの単離に用いら
れる手順が図３に模式的にまとめられている。３つの断
片の全てを分析することで２５５７ｂｐの隣接配列を組
み立てることが可能となり、これは７８９残基のＯＲＦ
を含む。ＰＤＥ１１Ａ１の完全長ｃＤＮＡ配列が図４Ａ
（配列番号１）に示され、このｃＤＮＡ内の最大読取り
枠の翻訳が図４Ｂ（配列番号２）に示されている。
【０２７９】現在までに配列決定されている全ての哺乳
動物ホスホジエステラーゼと同様に、ＰＤＥ１１Ａ１
は、触媒活性に必須であるものと考えられるこのタンパ
ク質のカルボキシル末端側半分の約２５０アミノ酸の保
存触媒ドメイン配列を有する。このセグメントは配列番
号４のアミノ酸４９９ないし７３１を含み、図１（パネ
ルＣ）に模式的に示され、かつ他のＰＤＥの対応領域と
同じ配列保存を示す。実施例３ ＰＤＥ１１Ａ１の５’スプライス変異体の単
離 図４Ａに示される翻訳開始コドンであるＡＴＧがＰＤＥ
１１Ａ１における最も５’側のＡＴＧである可能性から
守るため、５’ＲＡＣＥを尾状核マラトン・レディTMｃ
ＤＮＡ（クローンテック−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ， １０２０ Ｅａｓｔ Ｍｅａｄｏ
ｗ Ｃｉｒｃｌｅ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， Ｃａｌｉ
ｆｏｒｎｉａ，９４３０３，ＵＳＡ）に対して行い、さ
らに上流の配列を単離した。用いた５’プライマーは
５’ＲＡＣＥキット（クローンテック−Ｃｌｏｎｔｅｃ
ｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， １０２０ Ｅａｓｔ
Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，
Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，９４３０３，ＵＳＡ）内に供給
されるアダプタープライマーであり、用いた３’プライ
マーは以下のオリゴヌクレオチドであった： ＧＳＰ３： ５’−TCTCCAAGGAAATACAGTGC−３’ （配列番号７） 反応条件は製造者の指示によって指定される通りであっ
た。生じた５’ＲＡＣＥ産生物をＴＯＰＯベクター（イ
ンビトロゲン−Ｄｅ Ｓｃｈｅｌｐ １２，９３５１
ＮＶ Ｌｅｅｋ， Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）
にクローン化し、ＰＤＥ１１Ａ１の５’末端から誘導し
たプローブを用いるハイブリダイゼーションスクリーニ
ングによりＰＤＥ１１Ａ１関連配列の存在について分析
した。この分析により、上流１９０ｂｐコーディング配
列の存在が明らかになった。図４Ａに示されるＡＴＧが
ＰＤＥ１１Ａ１の真の翻訳開始コドンを表し得るものと
結論付けられる。幾つかの５’ＲＡＣＥクローンの配列
解析により、ＰＤＥ１１Ａ２と命名されるＰＤＥ１１Ａ
１のスプライス変異体の存在が明らかになり、これはコ
ーディング領域が異なり、それによりＰＤＥ１１Ａ２に
おいては末端２３コドンが代わりの２５コドンで置換さ
れている。図５Ｃは、比較のため、ＰＤＥ１１Ａ１及び
Ａ２のアミノ末端の整列を示す。完全なｃＤＮＡ配列及
び翻訳は図５Ａ及び５Ｂに示されている。ＰＤＥ１１Ａ
１とＰＤＥ１１Ａ２とは既知ＡＴＧ開始コドンに対して
５’側の配列においても異なる。興味深い観察の１つ
は、プロサイト（ｐｒｏｓｉｔｅ）プログラム（Ｂａｉ
ｒｏｃｈら，Ｔｈｅ ＰＲＯＳＩＴＥ ｄａｔａｂａｓ
ｅ， ｉｔｓ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ １９９７．Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：２１７−２２１
（１９９７））を用いて検出した場合、ＰＤＥ１１Ａ２
がプロテインキナーゼＡ潜在的リン酸化部位を持たない
可能性があることである。実施例４ ＰＤＥ１１Ａ１は、バキュロウイルス系で発
現した場合、環状ヌクレオチド加水分解活性を示す スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ
ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）昆虫細胞（Ｓｆ９細胞）のオー
トグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ
ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）核多角体病ウイルス（ＡｃＮ
ＰＶ）感染に基づくバキュロウイルス発現系を用いて、
ＰＤＥ１１Ａ１タンパク質を産生した。簡単に述べる
と、ＰＤＥ１１を、ミニ−Ｔｎ７転移要素を有するドナ
ープラスミドｐＦＡＳＴＢＡＣ−ＦＬＡＧにクローン化
した。この組換えプラスミドを、親バクミド（ｂａｃｍ
ｉｄ）ｂＭＯＮ１４２７２（ＡｃＮＰＶ感染性ＤＮＡ）
及びヘルパープラスミドを有するＤＨ１０ＢＡＣ適格細
胞に形質転移した。ｐＦＡＳＴＢＡＣドナー上のミニ−
Ｔｎ７要素はこのバクミド上でａｔｔＴｎ７付着部位に
置き換わることが可能であり、それによりＰＤＥ１１が
ウイルスゲノムに導入される。組換えバクミドを含むコ
ロニーをｌａｃＺ遺伝子の破壊により同定する。その
後、ＰＤＥ１１／バクミド構築体を単離して昆虫細胞
（Ｓｆ９細胞）に感染させ、それにより感染性組換えバ
キュロウイルス粒子を産生させて組み換えＰＤＥ１１Ａ
１−ＦＬＡＧ融合タンパク質を発現させることができ
る。
【０２８０】粗製細胞抽出物のホスホジエステラーゼ活
性を、Ｍａｒｔｉｎｓら， Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅ
ｍ．， ２５７：１９７３−１９７９にｃＧｓ−ＰＤＥ
について記載される検定手順の変法（材料及び方法も参
照）を用いて測定した。細胞を回収し、形質移入の２
４、４８及び７２時間後に抽出物を調製した。それらの
検定の結果が図６に示され、ここで示される結果は３回
の別々の感染の平均である。昆虫Ｓｆ９細胞の感染によ
り、ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰホスホジエステラーゼ活性の
両者の、疑似感染細胞よりも約１０−１５倍高い水準の
発現が生じた。これらの結果は、ＰＤＥ１１Ａ１ ｃＤ
ＮＡが、ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰの両者を加水分解するこ
とが可能なホスホジエステラーゼをコードすることを確
証する。
【０２８１】この粗製溶解物質を、精製ＩｇＧ1モノク
ローナル抗ＦＬＡＧ抗体がヒドラジド結合により結合し
ているアガロースビーズ（Ｍ２アフィニティゲル）を収
容するカラム（イーストマン・コダック（Ｅａｓｔｍａ
ｎ Ｋｏｄａｋ））を用いるＦＰＬＣにより精製した。
これは、内在性昆虫タンパク質は溶出液中に洗い流しな
がら、組換え物質（これがＦＬＡＧエピトープに融合す
るため）をカラムに特異的に保持させる。次に、この組
換え物質を低ｐＨ条件下で洗い流す。この精製物質は詳
細な酵素及び阻害物質研究により適する。この物質の純
度を、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）後のクーマシー染色又
は非染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（組換えＰＤＥ１１Ａ１を含
む）のニトロセルロース膜へのウェスタンブロット及び
ＩｇＧ１モノクローナル抗ＦＬＡＧエピトープ抗体を用
いる分析により検定する。ＰＤＥ１１Ａ１−ＦＬＡＧ融
合タンパク質は、抗ＦＬＡＧ抗体とＰＤＥ１１Ａ１タン
パク質に融合するＦＬＡＧエピトープとの相互作用によ
り検出される。
【０２８２】精製したＰＤＥ１１Ａ１−ＦＬＡＧ融合タ
ンパク質のホスホジエステラーゼ活性を、市販のＳＰＡ
（シンチレーション近接検定）キット（アマシャム−Ａ
ｍｅｒｓｈａｍ ｐｌａｃｅ， Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａ
ｌｆｏｎｔ，Ｂｕｃｋｓ，Ｈｐ７ ９ＮＡ ＵＫ）を用
いて、ｃＡＭＰ又はｃＧＭＰのいずれかについて検定し
た。これは、酵素の近似Ｖｍａｘ値の算出を可能にする
所定の範囲の基質濃度での酵素活性を決定することによ
りｃＡＭＰ及びｃＧＭＰに対するＰＤＥ１１Ａ１のＫｍ
値の決定を可能にするために用いた。これらの実験の結
果が図７に示されており、ＰＤＥ１１Ａ１のＫｍはｃＡ
ＭＰに対しては４００ｎＭ、ｃＧＭＰに対しては約４ｍ
Ｍであることが示され、これはこの酵素がｃＡＭＰに対
してｃＧＭＰよりも高い親和性を有することを示す。こ
のように、本発明のＰＤＥ１１酵素はｃＡＭＰ及びｃＧ
ＭＰに対する親和性を有するが、ｃＧＭＰよりもｃＡＭ
Ｐに対して高い親和性を有する。好ましくは、この酵素
は、ｃＧＭＰよりもｃＡＭＰに対して少なくとも約５の
オーダーの親和性、より好ましくはｃＧＭＰよりもｃＡ
ＭＰに対して少なくとも約６のオーダーの親和性、より
好ましくはｃＧＭＰよりもｃＡＭＰに対して少なくとも
約７のオーダーの親和性、より好ましくはｃＧＭＰより
もｃＡＭＰに対して少なくとも約８のオーダーの親和
性、より好ましくはｃＧＭＰよりもｃＡＭＰに対して少
なくとも約８のオーダーの親和性、より好ましくはｃＧ
ＭＰよりもｃＡＭＰに対して約１０（もしくはそれ以
上）のオーダーの親和性を有する。実施例５ ＰＤＥ１１Ａ１を用いるインサイツハイブリ
ダイゼーション研究 この分析は、ＰＤＥ１１Ａ１の潜在機能を研究するため
に、及びこの酵素を阻害することによりどのような治療
機会を開拓することができるのかに関して行った。した
がって、ＰＤＥ１１Ａ１リボプローブ（方法を参照）を
生成し、３５Ｓで放射標識した。この種の分析の例が図
８に示されており、海綿体の内皮細胞、腸における神経
節、前立腺の上皮細胞及び脳の線条体領域のニューロン
核における発現が示されている。これらのデータは、Ｐ
ＤＥ１１の活性の阻害が表し得る多くの機会を説明する
のに役立ち得る。実施例６ ＰＤＥ１１抗体の産生 ２種類の抗ペプチドＰＤＥ１１抗体が、これらの試薬の
商業供給者（ゼネカＣＲＢ（Ｚｅｎｅｃａ ＣＲＢ）−
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｃａｌｓ， Ｇａｄｂｒｏｏｋ Ｐａｒｋ， Ｎｏ
ｒｔｈｗｉｃｈ， Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，ＣＷ９ ７Ｒ
Ａ．ＵＫ）により生成されている。
【０２８３】第１のペプチドの配列は： MEDGPSNNASC （配列番号８） であり、ＰＤＥ１１Ａ１の残基０１ないし１２に対応す
る。
【０２８４】第２のペプチドの配列は： EDESAPKEVSRYC （配列番号９） であり、ＰＤＥ１１Ａ１の残基６４−７７に対応する。
【０２８５】これらの配列をゼネカＣＲＢ（Ｃａｍｂｒ
ｉｄｇｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ， Ｇａｄｂｒｏｏｋ Ｐａｒｋ， Ｎｏｒｔｈｗｉ
ｃｈ， Ｃｈｅｓｈｉｒｅ， ＣＷ９ ７ＲＡ． Ｕ
Ｋ）による標準手順を用いて生成し、標準的な抗原注射
措置を用いてウサギに注射した。抗体が血清として供給
され、これを組換えにより生じたＰＤＥ１１Ａ１タンパ
ク質に対するウェスタンブロットにより特徴付けた。こ
の実験からのデータが図９に示され、両抗体（Ａｂ−１
及びＡｂ−２）が、粗製溶解物中に存在する昆虫タンパ
ク質のバックグランド内に存在する場合、組換えＰＤＥ
１１タンパク質の検出が可能であることが示されてい
る。実施例７ ＰＤＥ１１Ａ１の完全なコーディング配列を含むｃＤＮ
Ａを、ヒト尾状核ｃＤＮＡ（クローンテックカタログ番
号７１９１−１｛Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ， １０２０ Ｅａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉ
ｒｃｌｅ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉ
ａ，９４３０３，ＵＳＡ｝から、ポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）及び以下のオリゴヌクレオチド： ５’プライマー： TTCGGATCCGACATGGAAGATGGACC （配列番号１０） 及び３’プライマー： GGTGACTAGTGCTCAATCTTCAGATGC （配列番号１１） を用い、ＰＣＲ試薬システム（ライフ・テクノロジー
ズ、カタログ番号１０１９８−０１８｛３ Ｆｏｕｎｔ
ａｉｎ Ｄｒｉｖｅ， Ｉｎｃｈｉｎｎａｎ Ｂｕｓｉ
ｎｅｓｓ Ｐａｒｋ， Ｐａｉｓｌｅｙ， ＰＡ４ ９
ＲＦ ＵＫ｝）を１００μｌの反応容積で用いて、又は
通常のハイブリダイゼーションスクリーニングを用いる
ことにより得た。
【０２８６】ＰＤＥ１１Ａ１の完全な配列は本明細書中
に提供されている。また、我々は、アミノ末端がここに
示されるものとは異なるＰＤＥ１１Ａ１のスプライス変
異体、すなわちＰＤＥ１１Ａ２も単離している。ＰＤＥ
１１Ａ２の配列の残部はＰＤＥ１１Ａ１と同一である。
ＰＤＥ１１Ａ２も、尾状核ｃＤＮＡから、適切なプライ
マー及びＰＣＲプロトコルを用いて、又はハイブリダイ
ゼーションスクリーニングにより得ることができる。
【０２８７】ＰＤＥ１１Ａ１ ｃＤＮＡのコーディング
配列は７８９アミノ酸残基のタンパク質をコードする。
ＰＤＥ１１Ａ２ ｃＤＮＡのコーディング配列は７９１
アミノ酸残基のタンパク質をコードする。
【０２８８】配列番号１はＰＤＥ１１Ａ１ ｃＤＮＡの
完全な配列である。配列番号２はＰＤＥ１１Ａ１の翻訳
されたタンパク質の配列である。配列番号３はＰＤＥ１
１Ａ２ ｃＤＮＡの完全な配列である。配列番号４はＰ
ＤＥ１１Ａ２の翻訳されたタンパク質の配列である。実施例８ マウスの配列 ＰＤＥ１１のマウス相同体がクローン（ＩＭＡＧＥクロ
ーン７６０８４４）中に見出された。この相同体を、ヒ
トＰＤＥ１１Ａ１について上に提示されるプロトコルに
従って分析した。このクローン内のインサートの完全長
配列決定により、それが１０６８ ｂｐのインサートを
含み、その内部９００ ｂｐがヒトＰＤＥ１１に非常に
密接に対応することが明らかになった。
【０２８９】以下のものはＩｍａｇｅクローン７６０８
４４から誘導される部分的ヌクレオチド配列である。下
線を付した配列は、ヒトＰＤＥ１１と高い相同性を有す
るこのクローンのインサートの領域を示す。 配列番号１２ ATTTGCACTGTACTTTCCTTGGAGAGTGCAATAATAGCCTGTGTGTGTTC
ATACCACCCGGGATGAAGGAAGGCCAACCCCGGCTCATCCCTGCGGGGCC
CATCACCCAGGGTACCACCATCTCTGCCTACGTGGCCAAGTCTAGGAAGA
CGTTGTTGGTAGAGGATATCCTTGGGGATGAGCGATTTCCTCGAGGTACT
GGCCTGGAATCAGGAACCCGCATCCAGTCTGTTCTTTGCTTGCCCATTGT
CACTGCCATTGGAGACTTGATTGGCATCCTTGAACTGTACAGGCACTGGG
ACAAAGAGGCCTTCTGCCTCAGCCATCAGGAGGTTGCAACAGCCAATCTT
GCTTGGGCTTCCGTAGCAATACACCAGGTGCAGGTGTGTAGAGGTCTCGC
CAAACAGACCGAACTGAATGACTTCCTACTCGACGTATCAAAGACATACT
TTGATAACATAGTTGCCATAGACTCTCTACTTGAACACATCATAATATAT
GCAAAAAATCTAGTGAACGCCGACCGCTGCGCGCTCTTCCAGGTGGACCA
CAAGAACAAGGAGCTGTACTCGGACCTGTTTGACATTGGGGAGGAGAAGG
AGGGGAAGCCCATCTTCAAGAAGACCAAGGAGATCAGATTTTCCATTGAG
AAAGGGATTGCTGGTCAAGTGGCAAGAACAGGCGAAGTCTTGAACATTCC
CGATGCCTACGCGGACCCTCGCTTTAACAGGGAGGTGGACCTGTACACAG
GCTACACCACGAGGAACATTCTGTGTATGCCCATAGTGAGCCGAGGCAGC
GTGATTGGCGTGGTGCAGATGGTGAACAAGATCAGCGGTAGCGCCTTCTC
CAAGACAGACGAGAACAACTTCAAGATGTTTGCTGTCTTCTGCGCACTGG
CCTTGCACTGTGCTAACGCCAGATGGAAAAGCCTAGCTTCTCTCCCCTGG
GTCAGCTGGGAAGGTTTGCTAGCTTGCCTGCACTGTGGCAAAGACCTGAG
GACCTGGAATGGTGACCACTGTCTGACGTGCACAGTCTTTCCTGCCTCTG
TGACACCCGCTTGGGATA 以下のものは上で下線を付した配列のタンパク質翻訳物
であり、これは３００残基の長さであって、ＡＴＧ翻訳
イニシエーターコドン又はＴＧＡ、ＴＡＡもしくはＴＡ
Ｇターミネーターコドンのいずれをも含まない。したが
って、我々は、これがマウスＰＤＥ１１ ｃＤＮＡの断
片を表すものと確信した。 配列番号１３ FLGECNNSLCVFIPPGMKEGQPRLIPAGPITQGTTISAYVAKSRKTLLVE
DILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTAIGDLIGILELYRHWDKEAF
CLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQTELNDFLLDVSKTYFDNIV
AIDSLLEHIIIYAKNLVNADRCALFQVDHKNKELYSDLFDIGEEKEGKPI
FKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDAYADPRFNREVDLYTGYTTR
NILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKMFAVFCALALHCA 図１０はヒトＰＤＥ１１Ａ１の残基１２６ないし４２５
に対する配列の整列を示す。これは、ヒトＰＤＥ１１Ａ
１タンパク質配列及びマウスＰＤＥ１１タンパク質配列
のＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いて作成した整列であ
る。
【０２９０】このように、我々は、ＩＭＡＧＥクローン
７６０８４４が、その大部分がヒトＰＤＥ１１と非常に
密接に関連し、したがって、ヒトＰＤＥ１１遺伝子のマ
ウス相同体を表すＤＮＡ配列を含むものと確信した。こ
のｃＤＮＡがマウス遺伝子の断片のみを含む可能性もあ
るが、これはヒトＰＤＥ１１ ｃＤＮＡ配列の変異体を
表す。
【０２９１】この信念に基づき、次にマウスＰＤＥ１１
及びそのコーディング配列を完全に配列決定した。これ
に関して、クローン化マウスＰＤＥ１１の完全なｃＤＮ
Ａ配列がここに配列番号１４として提供されている。マ
ウスＰＤＥ１１配列それ自体は配列番号１５として示さ
れている。このマウスの配列は時折ＭＭＰＤＥ１１Ａ３
と呼ばれる。
【０２９２】図１１はヒトＰＤＥ１１配列（ＨＳＰＤＥ
１１Ａ１、ＨＳＰＤＥ１１Ａ２）とマウスＰＤＥ１１配
列（ＭＰＤＥ１１Ａ３）との配列の比較を示す。見てわ
かるように、これらの配列の間にはほぼ完全な一致が存
在する。
【０２９３】インサイツハイブリダイゼーション研究に
より、ＭＭＰＤＥ１１Ａ３コーディング配列がマウスの
線条体に高水準で局在することが示された。実施例９ ラットの配列 ＰＤＥ１１のラット相同体が見出され、これを我々はＰ
ＤＥ１１Ａ４と命名している。我々はこの相同体の一部
を配列決定することが可能である。これに関して、２種
類のヌクレオチド配列が配列番号１６及び配列番号１８
に示されている。２種類の、それらのそれぞれのアミノ
酸配列は配列番号１７及び配列番号１９である。データ
解析により、ここに示されるヒト及びラットの配列に関
する非常に高い相同性が明らかになる。要約 要約すると、とりわけ以下のものを本発明が提供し、か
つ実施例が示す： １． 新規アミノ酸。
【０２９４】２． 新規ヌクレオチド配列。 ３． 前記新規配列を用いる検定。 ４． 前記検定を用いることにより同定される化合物／
組成物。
【０２９５】５． 前記新規配列を含み、又はそれを発
現する発現系。 ６． 前記新規配列に基づく治療方法。 ７． 前記新規配列に基づく医薬組成物。 上記明細において言及される全ての刊行物は参考文献と
して本明細書中に援用される。記載される本発明の方法
及びシステムの様々な変更及び変形は、本発明の範囲及
び精神から逸脱することなく、当業者に明らかであろ
う。本発明を特定の好ましい態様に関して記載している
が、請求される発明はそのような特定の態様に過度に限
定されるべきでないことは理解されるべきである。実
際、生化学及び生物工学又は関連分野における熟練者に
明白である、記載される本発明の実施様式の様々な変更
が以下の請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【０２９６】
【配列表】 SEQUENCE LISTINGS SEQ ID NO. 1 (Nucleotide sequence coding for PDE11A1) TTCGGCTCCGACATGGAAGATGGACCTTCTAATAATGCGAGCTGCTTCCGAAGGCTGACC 60 GAGTGCTTCCTGAGCCCCAGTTTGACAGATGAAAAAGTGAAGGCATATCTTTCTCTTCAC 120 CCCCAGGTATTAGATGAATTTGTATCTGAAAGTGTTAGTGCAGAGACAGTAGAGAAATGG 180 CTGAAGAGGAAGAACAACAAATCAGAAGATGAATCAGCTCCTAAGGAAGTCAGCAGGTAC 240 CAAGATACGAATATGCAGGGAGTTGTATATGAACTAAACAGCTATATAGAACAACGGTTG 300 GACACAGGAGGAGACAACCAGCTACTCCTCTATGAACTGAGCAGCATCATTAAAATAGCC 360 ACAAAAGCCGATGGATTTGCACTGTATTTCCTTGGAGAGTGCAATAATAGCCTGTGTATA 420 TTCACGCCACCTGGGATAAAGGAAGGAAAACCCCGCCTCATCCCTGCTGGGCCCATCACT 480 CAGGGCACCACCGTCTCTGCTTATGTGGCCAAGTCCAGGAAAACACTGCTAGTAGAAGAC 540 ATCCTTGGAGATGAACGATTTCCAAGAGGTACTGGACTGGAATCAGGGACTCGTATCCAG 600 TCTGTTCTTTGCTTACCAATTGTCACTGCAATTGGTGACTTGATTGGTATTCTCGAGCTG 660 TATCGGCACTGGGGCAAAGAAGCCTTCTGTCTTAGTCACCAGGAGGTTGCAACAGCAAAT 720 CTTGCCTGGGCTTCAGTAGCAATACATCAGGTGCAGGTATGCAGAGGCCTTGCCAAACAG 780 ACAGAATTGAATGACTTCCTACTCGACGTATCAAAAACATATTTTGATAACATAGTTGCA 840 ATAGATTCTCTACTTGAACACATAATGATATATGCAAAAAACCTGGTGAATGCCGATCGT 900 TGTGCACTTTTCCAGGTGGACCATAAGAACAAGGAGTTATATTCAGACCTTTTTGATATT 960 GGAGAGGAAAAGGAAGGAAAACCTGTCTTCAAGAAGACCAAAGAGATAAGATTTTCAATT 1020 GAGAAAGGAATTGCTGGCCAAGTAGCAAGAACAGGGGAAGTCCTGAACATTCCAGATGCC 1080 TATGCAGACCCACGCTTTAACAGAGAAGTAGACTTGTACACAGGCTACACCACGCGGAAC 1140 ATCCTGTGCATGCCCATCGTCAGCCGAGGCAGCGTGATAGGTGTGGTGCAGATGGTCAAC 1200 AAAATCAGTGGCAGTGCCTTCTCTAAAACAGATGAAAACAACTTCAAAATGTTTGCCGTC 1260 TTTTGTGCTTTAGCCTTACACTGTGCTAATATGTATCATAGAATTCGCCACTCAGAGTGC 1320 ATTTACCGGGTAACGATGGAAAAGCTGTCCTACCATAGCATTTGTACTTCAGAAGAGTGG 1380 CAAGGTCTCATGCAATTCACCCTTCCCGTGCGTCTCTGCAAAGAAATTGAATTATTCCAC 1440 TTTGACATTGGTCCTTTTGAAAACATGTGGCCTGGAATTTTTGTCTACATGGTTCATCGG 1500 TCCTGTGGGACATCCTGCTTTGAGCTTGAAAAGTTGTGTCGTTTTATTATGTCTGTGAAG 1560 AAGAACTATCGGCGGGTTCCTTATCACAACTGGAAGCATGCGGTCACTGTAGCACACTGC 1620 ATGTATGCCATACTTCAGAACAATCACACGCTTTTCACAGACCTTGAGCGCAAAGGACTG 1680 CTGATTGCGTGTCTGTGTCATGACCTGGACCACAGGGGCTTCAGTAACAGCTACCTGCAG 1740 AAGTTCGACCACCCTCTGACCGCTCTCTACTCCACTTCCACCATGGAGCAGCACCACTTC 1800 TCCCAGACTGTGTCCATCCTTCAGTTGGAAGGGCACAATATCTTCTCCACTCTGAGCTCC 1860 AGTGAATATGAGCAGGTGCTTGAGATCATCCGCAAAGCCATCATTGCCACAGACCTTGCT 1920 TTATACTTTGGAAACAGGAAGCAGTTGGAAGAGATGTACCAGACCGGATCACTAAACCTT 1980 AATAATCAATCACATAGAGACCGTGTAATTGGTTTGATGATGACTGCCTGTGACCTTTGT 2040 TCTGTGACAAAACCGTGGCCCGTTACAAAATTGACGGCAAATGATATATATGCAGAATTC 2100 TGGGCTGAGGGTGATGAAATGAAGAAATTGGGAATACAGCCTATTCCTATGATGGACAGA 2160 GACAAGAAGGATGAAGTCCCCCAAGGCCAGCTTGGGTTCTACAATGCCGTGGCCATTCCC 2220 TGCTATACAACCCTTACCCAGATCCTCCCTCCCACGGAGCCTCTTCTGAAAGCATGCAGG 2280 GATAATCTCAGTCAGTGGGAGAAGGTGATTCGAGGGGAGGAGACTGCAACCTGGATTTCA 2340 TCCCCATCCGTGGCTCAGAAGGCAGCTGCATCTGAAGATTGAGCACTGGTCACCCTGACA 2400 CGCTGTCCCACCTACAGATCCTCATCTTGCTTCTTTGACATTCTTTTCCTTTTTTGGGGG 2460 GGGTGGGGGGAACCTGCACCTGGTAACTGGGGTGCAAACCTCTTCAAGAAGGTAACATCA 2520 AATAAATAAGTCAAGCAGAAAAAAAAAAAAAAAA 2557 SEQ ID NO. 2 (Amino acid sequence of PDE11A1) MEDGPSNNASCFRRLTECFLSPSLTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRK 60 NNKSEDESAPKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNQLLLYELSSIIKIATKAD 120 GFALYFLGECNNSLCIFTPPGIKEGKPRLIPAGPITQGTTVSAYVAKSRKTLLVEDILGD 180 ERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTAIGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWA 240 SVAIHQVQVCRGLAKQTELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALF 300 QVDHKNKELYSDLFDIGEEKEGKPVFKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDAYADP 360 RFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKMFAVFCAL 420 ALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSEEWQGLMQFTLPVRLCKEIELFHFDIG 480 PFENMWPGIFVYMVHRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAI 540 LQNNHTLFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLTALYSTSTMEQHHFSQTV 600 SILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATDLALYFGNRKQLEEMYQTGSLNLNNQS 660 HRDRVIGLMMTACDLCSVTKPWPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKKD 720 EVPQGQLGFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLSQWEKVIRGEETATWISSPSV 780 AQKAAASED 789 SEQ ID NO. 3 (Nucleotide sequence coding for PDE11A2) ACATAGCTGGGTGCAATGTAAGTGCCTGGCTGAAGTTTGACACGCGAACGGACGGCCCGC 60 TGGAATTCTGTGCTATGAGCCGGAGTAGAAAGAGAGATTTGGACTCTGCAACACCAAGGT 120 AGTCGTTGAAGCCACAGTCGTGAATGGAGACCAGGAGTGAATAGTGGGAGTGAGCAGAAG 180 TCGGAGGATAGGACAGAAGAAGGCAGAGCCATGGAGCACCCTGGAGAGGTGTGACCCGGC 240 AAGATCCTGAGATGGAAGGTAGCACGGCCTGGAGTTCAGAAGCGGAGCCTCAAGAGGGAA 300 GAAGCCAGATGCTCCAGAGAGCAGGTTTGACAGATGAAAAAGTGAAGGCATATCTTTCTC 360 TTCACCCCCAGGTATTAGATGAATTTGTATCTGAAAGTGTTAGTGCAGAGACAGTAGAGA 420 AATGGCTGAAGAGGAAGAACAACAAATCAGAAGATGAATCAGCTCCTAAGGAAGTCAGCA 480 GGTACCAAGATACGAATATGCAGGGAGTTGTATATGAACTAAACAGCTATATAGAACAAC 540 GGTTGGACACAGGAGGAGACAACCAGCTACTCCTCTATGAACTGAGCAGCATCATTAAAA 600 TAGCCACAAAAGCCGATGGATTTGCACTGTATTTCCTTGGAGAGTGCAATAATAGCCTGT 660 GTATATTCACGCCACCTGGGATAAAGGAAGGAAAACCCCGCCTCATCCCTGCTGGGCCCA 720 TCACTCAGGGCACCACCGTCTCTGCTTATGTGGCCAAGTCCAGGAAAACACTGCTAGTAG 780 AAGACATCCTTGGAGATGAACGATTTCCAAGAGGTACTGGACTGGAATCAGGGACTCGTA 840 TCCAGTCTGTTCTTTGCTTACCAATTGTCACTGCAATTGGTGACTTGATTGGTATTCTCG 900 AGCTGTATCGGCACTGGGGCAAAGAAGCCTTCTGTCTTAGTCACCAGGAGGTTGCAACAG 960 CAAATCTTGCCTGGGCTTCAGTAGCAATACATCAGGTGCAGGTATGCAGAGGCCTTGCCA 1020 AACAGACAGAATTGAATGACTTCCTACTCGACGTATCAAAAACATATTTTGATAACATAG 1080 TTGCAATAGATTCTCTACTTGAACACATAATGATATATGCAAAAAACCTGGTGAATGCCG 1140 ATCGTTGTGCACTTTTCCAGGTGGACCATAAGAACAAGGAGTTATATTCAGACCTTTTTG 1200 ATATTGGAGAGGAAAAGGAAGGAAAACCTGTCTTCAAGAAGACCAAAGAGATAAGATTTT 1260 CAATTGAGAAAGGAATTGCTGGCCAAGTAGCAAGAACAGGGGAAGTCCTGAACATTCCAG 1320 ATGCCTATGCAGACCCACGCTTTAACAGAGAAGTAGACTTGTACACAGGCTACACCACGC 1380 GGAACATCCTGTGCATGCCCATCGTCAGCCGAGGCAGCGTGATAGGTGTGGTGCAGATGG 1440 TCAACAAAATCAGTGGCAGTGCCTTCTCTAAAACAGATGAAAACAACTTCAAAATGTTTG 1500 CCGTCTTTTGTGCTTTAGCCTTACACTGTGCTAATATGTATCATAGAATTCGCCACTCAG 1560 AGTGCATTTACCGGGTAACGATGGAAAAGCTGTCCTACCATAGCATTTGTACTTCAGAAG 1620 AGTGGCAAGGTCTCATGCAATTCACCCTTCCCGTGCGTCTCTGCAAAGAAATTGAATTAT 1680 TCCACTTTGACATTGGTCCTTTTGAAAACATGTGGCCTGGAATTTTTGTCTACATGGTTC 1740 ATCGGTCCTGTGGGACATCCTGCTTTGAGCTTGAAAAGTTGTGTCGTTTTATTATGTCTG 1800 TGAAGAAGAACTATCGGCGGGTTCCTTATCACAACTGGAAGCATGCGGTCACTGTAGCAC 1860 ACTGCATGTATGCCATACTTCAGAACAATCACACGCTTTTCACAGACCTTGAGCGCAAAG 1920 GACTGCTGATTGCGTGTCTGTGTCATGACCTGGACCACAGGGGCTTCAGTAACAGCTACC 1980 TGCAGAAGTTCGACCACCCTCTGACCGCTCTCTACTCCACTTCCACCATGGAGCAGCACC 2040 ACTTCTCCCAGACTGTGTCCATCCTTCAGTTGGAAGGGCACAATATCTTCTCCACTCTGA 2100 GCTCCAGTGAATATGAGCAGGTGCTTGAGATCATCCGCAAAGCCATCATTGCCACAGACC 2160 TTGCTTTATACTTTGGAAACAGGAAGCAGTTGGAAGAGATGTACCAGACCGGATCACTAA 2220 ACCTTAATAATCAATCACATAGAGACCGTGTAATTGGTTTGATGATGACTGCCTGTGACC 2280 TTTGTTCTGTGACAAAACCGTGGCCCGTTACAAAATTGACGGCAAATGATATATATGCAG 2340 AATTCTGGGCTGAGGGTGATGAAATGAAGAAATTGGGAATACAGCCTATTCCTATGATGG 2400 ACAGAGACAAGAAGGATGAAGTCCCCCAAGGCCAGCTTGGGTTCTACAATGCCGTGGCCA 2460 TTCCCTGCTATACAACCCTTACCCAGATCCTCCCTCCCACGGAGCCTCTTCTGAAAGCAT 2520 GCAGGGATAATCTCAGTCAGTGGGAGAAGGTGATTCGAGGGGAGGAGACTGCAACCTGGA 2580 TTTCATCCCCATCCGTGGCTCAGAAGGCAGCTGCATCTGAAGATTGAGCACTGGTCACCC 2640 TGACACGCTGTCCCACCTACAGATCCTCATCTTGCTTCTTTGACATTCTTTTCCTTTTTT 2700 GGGGGGGGTGGGGGGAACCTGCACCTGGTAACTGGGGTGCAAACCTCTTCAAGAAGGTAA 2760 CATCAAATAAATAAGTCAAGCAGAAAAAAAAAAAAAAA 2799 SEQ ID NO. 4 (Amino acid sequence of PDE11A2) MEGSTAWSSEAEPQEGRSQMLQRAGLTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLK 60 RKNNKSEDESAPKEVSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNQLLLYELSSIIKIATK 120 ADGFALYFLGECNNSLCIFTPPGIKEGKPRLIPAGPITQGTTVSAYVAKSRKTLLVEDIL 180 GDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTAIGDLIGILELYRHWGKEAFCLSHQEVATANLA 240 WASVAIHQVQVCRGLAKQTELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCA 300 LFQVDHKNKELYSDLFDIGEEKEGKPVFKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDAYA 360 DPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKMFAVFC 420 ALALHCANMYHRIRHSECIYRVTMEKLSYHSICTSEEWQGLMQFTLPVRLCKEIELFHFD 480 IGPFENMWPGIFVYMVHRSCGTSCFELEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMY 540 AILQNNHTLFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQKFDHPLTALYSTSTMEQHHFSQ 600 TVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATDLALYFGNRKQLEEMYQTGSLNLNN 660 QSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKPWPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDK 720 KDEVPQGQLGFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLSQWEKVIRGEETATWISSP 780 SVAQKAAASED 791 SEQ ID No. 5 TCNCCYTGRTCRTARAAYTC SEQ ID No. 6 TACTTCAGAACAATCACACG SEQ ID No. 7 TCTCCAAGGAAATACAGTGC SEQ ID No. 8 MEDGPSNNASC SEQ ID No. 9 EDESAPKEVSRYC SEQ ID No. 10 TTCGGATCCGACATGGAAGATGGACC SEQ ID No. 11 GGTGACTAGTGCTCAATCTTCAGATGC SEQ ID No. 12 ATTTGCACTGTACTTTCCTTGGAGAGTGCAATAATAGCCTGTGTGTGTTCATACCACCCGGGATGAAGGAAG GCCAACCCCGGCTCATCCCTGCGGGGCCCATCACCCAGGGTACCACCATCTCTGCCTACGTGGCCAAGTCTA GGAAGACGTTGTTGGTAGAGGATATCCTTGGGGATGAGCGATTTCCTCGAGGTACTGGCCTGGAATCAGGAA CCCGCATCCAGTCTGTTCTTTGCTTGCCCATTGTCACTGCCATTGGAGACTTGATTGGCATCCTTGAACTGT ACAGGCACTGGGACAAAGAGGCCTTCTGCCTCAGCCATCAGGAGGTTGCAACAGCCAATCTTGCTTGGGCTT CCGTAGCAATACACCAGGTGCAGGTGTGTAGAGGTCTCGCCAAACAGACCGAACTGAATGACTTCCTACTCG ACGTATCAAAGACATACTTTGATAACATAGTTGCCATAGACTCTCTACTTGAACACATCATAATATATGCAA AAAATCTAGTGAACGCCGACCGCTGCGCGCTCTTCCAGGTGGACCACAAGAACAAGGAGCTGTACTCGGACC TGTTTGACATTGGGGAGGAGAAGGAGGGGAAGCCCATCTTCAAGAAGACCAAGGAGATCAGATTTTCCATTG AGAAAGGGATTGCTGGTCAAGTGGCAAGAACAGGCGAAGTCTTGAACATTCCCGATGCCTACGCGGACCCTC GCTTTAACAGGGAGGTGGACCTGTACACAGGCTACACCACGAGGAACATTCTGTGTATGCCCATAGTGAGCC GAGGCAGCGTGATTGGCGTGGTGCAGATGGTGAACAAGATCAGCGGTAGCGCCTTCTCCAAGACAGACGAGA ACAACTTCAAGATGTTTGCTGTCTTCTGCGCACTGGCCTTGCACTGTGCTAACGCCAGATGGAAAAGCCTAG CTTCTCTCCCCTGGGTCAGCTGGGAAGGTTTGCTAGCTTGCCTGCACTGTGGCAAAGACCTGAGGACCTGGA ATGGTGACCACTGTCTGACGTGCACAGTCTTTCCTGCCTCTGTGACACCCGCTTGGGATA SEQ ID No. 13 FLGECNNSLCVFIPPGMKEGQPRLIPAGPITQGTTISAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQS VLCLPIVTAIGDLIGILELYRHWDKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQTELNDFLLDVSKT YFDNIVAIDSLLEHIIIYAKNLVNADRCALFQVDHKNKELYSDLFDIGEEKEGKPIFKKTKEIRFSIEKGIA GQVARTGEVLNIPDAYADPRFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKM FAVFCALALHCA SEQ ID No. 14 (Nucleotide sequence of PDE11A3) ACGCGTCCGCTCCTCATCTGCCTTCCACCTCCCCGCGCGTCTCCCGAGAAGGGAGGGCGCAGCGGCGGCTGG AGGAGGAGGAGGCGGCGGCGGCGATGCTGGCGGCGGCGGCGGAGGAGGAGGACAAGAGGCAGCTCCCTTGAG CGTCCCCCCAGGCAGTAGTCACCGCAGCAGCGGTGGCAGCAGCGGTGGCAGCGGCGGGCGGCGGCGGCTCTT CCTCTCGCCTGCGATTCAAGGCTTGCTGCTCCCTGCCCGCGCCGGGCCCCGGCCATCTCCGCCGCCGCGGCT TCCCCTACACCCGGGTGCACGCCGCGCGGACTCCTCGGATTTTCCGGGCGCCGGCGGGGGCTGCCCTGGCCT CGGCCCCGGCTCTGCCGCCGGTGGCCGAACTCTTTGGCGGCCCCGAGGCGCCGCCTTCCCCCTTGCCACCGT TTGGCCGCTGCCCTTCGGCTCCGACATGGAAGATGGACCCTCTAACAATGCGAGTTGCTTCCGAAGGCTGAC CGAGTGTTTCCTCAGCCCCAGTTTGACGGATGAAAAGGTGAAGGCCTATCTTTCTCTCCATCCCCAGGTATT AGATGAATTTGTTTCTGAAAGTGTTAGTGCAGAGACTGTGGAAAAGTGGCTGAAGAGGAAAACCAACAAAGC AAAAGATGAACCATCTCCCAAGGAAGTCAGCAGGTACCAGGATACGAATATGCAGGGAGTCGTGTACGAGCT GAACAGCTACATAGAGCAGCGCCTGGACACGGGCGGGGACAACCACCTGCTCCTCTATGAGCTCAGCAGCAT CATCAGGATAGCCACAAAAGCCGACGGATTTGCACTGTACTTCCTTGGAGAGTGCAATAATAGCCTGTGTGT GTTCATACCACCCGGGATGAAGGAAGGCCAACCCCGGCTCATCCCTGCAGGGCCCATCACCCAGGGTACCAC CATCTCTGCCTACGTGGCCAAGTCTAGGAAGACGTTGTTGGTAGAGGATATCCTTGGGGATGAGCGATTTCC TCGAGGTACTGGCCTGGAATCAGGAACCCGCATCCAGTCTGTTCTTTGCTTGCCCATTGTCACTGCCATTGG AGACTTGATTGGCATCCTTGAACTGTACAGGCACTGGGGCAAAGAGGCCTTCTGCCTCAGCCATCAGGAGGT TGCAACAGCCAATCTTGCTTGGGCTTCCGTAGCAATACACCAGGTGCAGGTGTGTAGAGGTCTCGCCAAACA GACCGAACTGAATGACTTCCTACTCGACGTATCAAAGACATACTTTGATAACATAGTTGCCATAGACTCTCT ACTTGAACACATCATGATATATGCAAAAAATCTAGTGAACGCCGACCGCTGCGCGCTCTTCCAGGTGGACCA CAAGAACAAGGAGCTGTACTCGGACCTGTTTGACATTGGGGAGGAGAAGGAGGGGAAGCCCATCTTCAAGAA GACCAAGGAGATCAGATTTTCCATTGAGAAAGGGATTGCTGGTCAAGTGGCAAGAACAGGCGAAGTCTTGAA CATTCCCGATGCCTACGCGGACCCTCGCTTTAACAGGGAGGTGGACCTGTACACAGGCTACACCACGAGGAA CATTCTGTGTATGCCCATAGTGAGCCGAGGCAGCGTGATTGGCGTGGTGCAGATGGTGAACAAGATCAGCGG TAGCGCCTTCTCCAAGACAGACGAGAACAACTTCAAGATGTTTGCTGTCTTCTGCGCACTGGCCTTGCACTG TGCTAACATGTACCACAGGATCCGCCACTCAGAATGCATCTACAGGGTTACCATGGAGAAGCTTTCCTACCA CAGCATCTGCACCTCCGAGGAGTGGCAAGGCCTCATGCGCTTCAACCTACCAGCACGCATCTGCCGGGACAT CGAGCTATTCCACTTTGACATTGGTCCTTTCGAGAACATGTGGCCTGGGATCTTTGTCTACATGATCCATCG GTCTTGTGGGACATCCTGTTTTGAACTTGAAAAATTGTGCCGTTTTATCATGTCTGTGAAGAAGAACTATCG GCGGGTTCCTTACCACAACTGGAAGCATGCAGTCACGGTGGCACACTGCATGTATGCCATACTTCAAAACAA CAATGGCCTCTTCACAGACCTCGAGCGCAAAGGCCTGCTAATTGCGTGTCTGTGCCATGACCTGGACCACAG GGGCTTCAGTAACAGCTACCTGCAGAAGTTCGACCACCCCCTGGCGGCGCTGTACTCCACCTCCACCATGGA GCAACACCACTTCTCCCAGACGGTGTCCATCCTTCAGCTGGAAGGGCACAATATCTTCTCCACCCTGAGCTC CAGCGAGTACGAGCAGGTGCTGGAGATCATCCGCAAAGCCATCATCGCCACCGACCTCGCCCTATACTTTGG GAACAGGAAGCAGTTGGAGGAGATGTACCAGACAGGGTCGCTGAACCTCCACAACCAGTCCCATCGAGACCG TGTCATCGGCTTGATGATGACTGCCTGTGATCTTTGCTCTGTGACCAAACTATGGCCAGTTACAAAATTGAC AGCGAATGATATATATGCAGAATTCTGGGCTGAGGGTGATGAGATGAAGAAGCTGGGCATACAGCCCATTCC TATGATGGACAGAGACAAGCGAGATGAAGTCCCTCAAGGGCAGCTCGGATTCTACAATGCTGTGGCCATTCC CTGCTATACCACCTTGACGCAGATCCTCCCACCCACAGAGCCTCTGCTGAAGGCCTGCAGGGATAACCTCAA TCAGTGGGAGAAGGTAATTCGCGGGGAAGAGACAGCAATGTGGATTTCAGGCCCAGGCCCGGCGCCTAGCAA GAGCACACCTGAGAAGCTGAACGTGAAGGTTGAAGACTGATCCTGAAGTGACGTCCTGATGTCTGCCCAGCA ACCGACTCAACCTGCTTCTGTGACTTCGTTCTTTTTGTTTTCAAGGGGTGAAAACCCCCTGTCAGAAGGTAC CGTCGCATATCCATGTGAAGCAGACGACTCCCTGCTTGCCGCACACACCTCGGACAGTGAGCAACCCAGGCT CTGCCGTGTTCAGACGTCGGCTACTCCGTGGCTCCACCTGACCTCCGAATGCTATTTGCTCCCAGGCCAGCA CTGCACTGTCTGGAGGGGGCAGAGACCACAGGAGAGGTTCTTGCCTGCATCCTCCCATGAGGGTGTGGCCAG TTCCCTGGTTCTGTGCCATGCTGCTGCTTGGTGGCATTGGTTAGGAATGGGACACACGCCCCTTGTTGTGAA GTTTACATGTGACCTTCTTATAGGTTAACTGAGTTTGTGGCCTGGGACACATGTAATGAAGGTCACAGTCCA CAGGTGACAGAGAAATCCAAACTGTTGATTACAGGTGCACTACAGGTATGCTCTTTCAGTCTATCTGGGGGC ACATAGGTGAGTCTGCTCCACTCAGAAGGAAGCATACCTCTGCCCTCATCCAGGGGACACAGGGTACATCCC AGGCATCGGGGAACTGAAGCTCTCACTTCAAACCATGTCAAAGAATTAAAACACCTCCCCTCCCCCTCACTG TAGCCTTCGGCAACTGCGCCAATCCCTTTATACAAAGAAAATAAAAGTAAGGCATATAAATTTAAAAAAAAA AAAAAA SEQ ID No. 15 (Amino acid sequence of PDE11A3) MEDGPSNNASCFRRLTECFLSPSLTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKTNKAKDEPSPKE VSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNHLLLYELSSIIRIATKADGFALYFLGECNNSLCVFIPPGMKE GQPRLIPAGPITQGTTISAYVAKSRKTLLVEDILGDERFPRGTGLESGTRIQSVLCLPIVTAIGDLIGILEL YRHWGKEAFCLSHQEVATANLAWASVAIHQVQVCRGLAKQTELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYA KNLVNADRCALFQVDHKNKELYSDLFDIGEEKEGKPIFKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDAYADP RFNREVDLYTGYTTRNILCMPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKMFAVFCALALHCANMYHRIR HSECIYRVTMEKLSYHSICTSEEWQGLMRFNLPARICRDIELFHFDIGPFENMWPGIFVYMIHRSCGTSCFE LEKLCRFIMSVKKNYRRVPYHNWKHAVTVAHCMYAILQNNNGLFTDLERKGLLIACLCHDLDHRGFSNSYLQ KFDHPLAALYSTSTMEQHHFSQTVSILQLEGHNIFSTLSSSEYEQVLEIIRKAIIATDLALYFGNRKQLEEM YQTGSLNLHNQSHRDRVIGLMMTACDLCSVTKLWPVTKLTANDIYAEFWAEGDEMKKLGIQPIPMMDRDKRD EVPQGQLGFYNAVAIPCYTTLTQILPPTEPLLKACRDNLNQWEKVIRGEETAMWISGPGPAPSKSTPEKLNV KVED SEQ ID No. 16 Partial sequence obtained from a rat clone representing the first 1250 b p of rat PDE11. CCTTATGGAAGATGGACCCTCTAACAATGCGAGTTGCTTCCGAAGGCTGACCGAGTGTTTCCTCAGCCCCAG TTTGACGGATGAAAAGGTGAAGGCCTATCTTTCCCTCCATCCCCAGGTATTAGACGAGTTTGTTTCTGAAAG TGTTAGTGCGGAGACCGTGGAGAAGTGGCTGAAGAGGAAAAACGACAAAGCAGAAGATGAACCATCTCCTAA GGAAGTCAGCAGGTACCAGGACACGAACATGCAGGGAGTCGTGTACGAGCTGAACAGCTACATAGAGCAGCG CCTGGACACCGGCGGGGACAACCACCTGCTCCTGTACGAGCTAAACAGTATCATCAGGATAGCCACAAAAGC CGACGGATTTGCACTGTACTTCCTTGGAGAGTGCAATAATAGTCTGTGTGTCTTCACACCACCCGGAATGAA GGAAGGTCAACCCCGTCTCATCCCCGCAGGGCCCATCACCCAGGGCACCACCATC SEQ ID No. 17 MEDGPSNNASCFRRLTECFLSPSLTDEKVKAYLSLHPQVLDEFVSESVSAETVEKWLKRKNDKAEDEPSPKE VSRYQDTNMQGVVYELNSYIEQRLDTGGDNHLLLYELNSIIRIATKADGFALYFLGECNNSLCVFTPPGMKE GQPRLIPAGPITQGTT SEQ ID No. 18 Partial sequence obtained from a rat clone containing rat PDE11. AATCTCGCTTGGGCTTCCGTAGCAATACACCAGGTGCAGGTGTGCAGAGGTCTCGCCAAGCAGACCGAACTG AATGACTTCCTGCTCGATGTATCAAAGACATACTTTGATAACATAGTCGCCATAGACTCTCTACTTGAACAC ATCATGATATATGCAAAAAATCTAGTGAACGCCGACCGCTGCGCGCTCTTCCAGGTGGACCACAAGAACAAG GAGCTGTACTCGGACCTGTTTGACATTGGGGAGGAGAAGGAGGGGAAGCCCGTCTTCAAGAAGACCAAGGAG ATCAGATTTTCCATTGAGAAAGGGATTGCTGGTCAAGTGGCAAGAACGGGAGAAGTCCTGAACATTCCTGAT GCCTACGCAGACCCGCGCTTTAACAGGGAGGTGGACCTGTACACAGGCTATACCACGCGGAACATTCTGTGT ATGCCCATAGTGAGCCGCGGCAGCGTGATCGGTGTGGTGCAAATGGTTAACAAGATCAGCGGCAGCGCCTTC TCCAAGACGGATGAGAACAACTTCAAGATGAAGGGC SEQ ID No. 19 NLAWASVAIHQVQVCRGLAKQTELNDFLLDVSKTYFDNIVAIDSLLEHIMIYAKNLVNADRCALFQVDHKNK ELYSDLFDIGEEKEGKPVFKKTKEIRFSIEKGIAGQVARTGEVLNIPDAYADPRFNREVDLYTGYTTRNILC MPIVSRGSVIGVVQMVNKISGSAFSKTDENNFKM
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は模式図を示す。
【図２】図２はノーザンブロットの写真画像を示す。
【図３】図３は模式図を示す。
【図４】図４はヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を示
す。
【図５】図５はヌクレオチド配列、アミノ酸配列及びタ
ンパク質配列の整列を示す。
【図６】図６はグラフを示す。
【図７】図７はヘインズプロットを示す。
【図８】図８は顕微鏡写真を示す。
【図９】図９は写真を示す。
【図１０】図１０は配列の整列を示す。
【図１１】図１１は配列の整列を示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/00 ６２６ Ａ６１Ｋ 31/00 ６２６Ｌ ６４３ ６４３Ｄ 45/00 45/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 5/10 9/16 Ｃ 9/16 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ 33/50 33/573 Ａ // Ｇ０１Ｎ 33/573 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (31)優先権主張番号 ９９０８２４７．１ (32)優先日 平成11年４月９日(1999．4．9) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号 ９９１０８０１．１ (32)優先日 平成11年５月10日(1999．5．10) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (72)発明者 ニコラ・メラニー・ロバス イギリス国シーティー13・９エヌジェイ, ケント，サンドウィッチ，ラムズゲート・ ロード，ファイザー・セントラル・リサー チ

Claims (25)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式Ｉとして示される配列又はその変異
    体、相同体、フラグメント又は誘導体を含むアミノ酸配
    列。
  2. 【請求項２】 式Ｉとして示される配列を含むアミノ酸
    配列。
  3. 【請求項３】 請求項１又は請求項２に記載のアミノ酸
    配列をコードするヌクレオチド配列。
  4. 【請求項４】 ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ Ｉ
    Ｄ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４として示さ
    れる配列又はその変異体、相同体、フラグメント又は誘
    導体を含むヌクレオチド配列。
  5. 【請求項５】 ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１又はＳＥＱ Ｉ
    Ｄ Ｎｏ．３又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４として示さ
    れる配列を含むヌクレオチド配列。
  6. 【請求項６】 請求項３〜請求項５のいずれかに記載の
    ヌクレオチド配列とハイブリダイズし得るヌクレオチド
    配列。
  7. 【請求項７】 請求項６に記載のヌクレオチド配列とハ
    イブリダイズし得るヌクレオチド配列。
  8. 【請求項８】 請求項３〜請求項７のいずれかに記載の
    ヌクレオチド配列を含むベクター。
  9. 【請求項９】 請求項３〜請求項７のいずれかに記載の
    ヌクレオチド配列が取り込まれた宿主細胞。
  10. 【請求項１０】 ＰＤＥ１１の活性又は発現に影響を及
    ぼし得る薬剤を同定するアッセイ方法であって、前記ア
    ッセイ方法は、 前記薬剤を、請求項１又は請求項２に記載のアミノ酸又
    は請求項３〜請求項７のいずれかに記載のヌクレオチド
    配列と接触させ、 ＰＤＥ１１の活性又は発現を測定することを含み、 ａ）前記薬剤の非存在下でのＰＤＥ１１活性又は発現と
    ｂ）前記薬剤存在下でのＰＤＥ１１活性又は発現の差
    を、前記薬剤がＰＤＥ１１活性又は発現に影響を及ぼす
    ことの指標とするアッセイ方法。
  11. 【請求項１１】 前記アッセイが性機能障害の治療に有
    用な薬剤をスクリーニングすることを目的とする請求項
    １０に記載のアッセイ方法。
  12. 【請求項１２】 （ａ）請求項１０又は請求項１１に記
    載のアッセイを実施し、 （ｂ）ＰＤＥ１１の活性又は発現に影響を及ぼす１つ又
    はそれ以上の薬剤を同定し、 （ｃ）１つ又はそれ以上の同定された薬剤を大量に製造
    する工程を含む方法。
  13. 【請求項１３】 請求項１０又は請求項１１に記載のア
    ッセイ方法であるインビトロのアッセイ方法において、 ＰＤＥ１１の活性又は発現に影響を及ぼし得る薬剤によ
    って、 インビボのＰＤＥ１１活性又は発現に影響を及ぼす方
    法。
  14. 【請求項１４】 ＰＤＥ１１に関連した疾患又は病態を
    治療する医薬組成物の製造における、請求項１０又は請
    求項１１に記載のアッセイ方法によってインビトロでア
    ッセイされたときＰＤＥの活性又は発現に効果を及ぼし
    得る薬剤の用途。
  15. 【請求項１５】 ＰＤＥ１１に対する抗体と免疫反応し
    得る酵素。
  16. 【請求項１６】 ＰＤＥをコードする、ＮＣＩＭＢ４０
    ９２５又はＮＣＩＭＢ４０９２６又はＮＣＩＭＢ４１０
    ０７より得られるヌクレオチド配列。
  17. 【請求項１７】 ＮＣＩＭＢ４０９２５又はＮＣＩＭＢ
    ４０９２６又はＮＣＩＭＢ４１００７より得られるヌク
    レオチド配列から発現されるＰＤＥ。
  18. 【請求項１８】 ＰＤＥ１１に関連した疾患又は病態を
    治療する医薬組成物の製造における、ＰＤＥ１１の活性
    又は発現に効果を及ぼし得る薬剤の用途。
  19. 【請求項１９】 ＰＤＥ１１の不均衡又は障害に関連し
    た障害を治療及び／又はモジュレートする薬剤の製造に
    おける、ＰＤＥ１１の遺伝子及び／又はその発現産物の
    用途。
  20. 【請求項２０】 ＰＤＥ１１及び／又はその発現産物が
    ＰＤＥ１１及び／又はその発現産物の活性をモジュレー
    トし得る薬剤をスクリーニングするのに使われる、請求
    項１９に記載の用途。
  21. 【請求項２１】 ＰＤＥ１１が請求項１に記載のもので
    あるか又はそれをコードするヌクレオチド配列であるＰ
    ＤＥ１１作動薬。
  22. 【請求項２２】 ＰＤＥ１１が請求項１に記載のもので
    あるか又はそれをコードするヌクレオチド配列であるＰ
    ＤＥ１１拮抗薬。
  23. 【請求項２３】 組換えＰＤＥ１１酵素。
  24. 【請求項２４】 ＰＤＥ１１酵素をコードする組換えヌ
    クレオチド配列。
  25. 【請求項２５】 実質的にここに記載されるようなＰＤ
    Ｅ１１酵素。
JP11150423A 1998-05-28 1999-05-28 ホスホジエステラ―ゼ酵素 Pending JP2000023682A (ja)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9811500.9 1998-05-28
GBGB9811500.9A GB9811500D0 (en) 1998-05-28 1998-05-28 Enzyme
GB9823882.7 1998-10-30
GBGB9823882.7A GB9823882D0 (en) 1998-10-30 1998-10-30 Enzyme
GB9826777.6 1998-12-04
GBGB9826777.6A GB9826777D0 (en) 1998-12-04 1998-12-04 Enzyme
GB9908247.1 1999-04-09
GBGB9908247.1A GB9908247D0 (en) 1999-04-09 1999-04-09 Enzyme
GBGB9910801.1A GB9910801D0 (en) 1999-05-10 1999-05-10 Enzyme
GB9910801.1 1999-05-10

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2004368108A Division JP2005198652A (ja) 1998-05-28 2004-12-20 ホスホジエステラーゼ酵素

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2000023682A true JP2000023682A (ja) 2000-01-25

Family

ID=27517461

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP11150423A Pending JP2000023682A (ja) 1998-05-28 1999-05-28 ホスホジエステラ―ゼ酵素
JP2004368108A Pending JP2005198652A (ja) 1998-05-28 2004-12-20 ホスホジエステラーゼ酵素

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2004368108A Pending JP2005198652A (ja) 1998-05-28 2004-12-20 ホスホジエステラーゼ酵素

Country Status (3)

Country Link
US (2) US20020115176A1 (ja)
EP (1) EP0967284A1 (ja)
JP (2) JP2000023682A (ja)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9922124D0 (en) * 1999-09-17 1999-11-17 Pfizer Ltd Phosphodiesterase enzymes
US6673564B2 (en) 1999-10-18 2004-01-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for using 22045, a human cyclic nucleotide phosphodiesterase
JP2004500818A (ja) * 2000-01-28 2004-01-15 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド ホスホジエステラーゼ
EP1297115A2 (en) * 2000-06-26 2003-04-02 Bayer Aktiengesellschaft Regulation of human phosphodiesterase-like enzyme
GB0204227D0 (en) * 2002-02-22 2002-04-10 Pfizer Ltd Modulation of pde11a activity
EP1281771B1 (en) * 2001-07-31 2006-03-22 Pfizer Products Inc. Phosphodiesterase 10A cell-based assay and sequences
WO2004029617A2 (en) * 2002-09-24 2004-04-08 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human phosphodiesterase 11a (pde11a)
EP1604034A2 (en) * 2002-11-08 2005-12-14 Bayer HealthCare AG Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human phosphodiesterase 11a1 (pde11a1)
US20060166316A1 (en) * 2003-04-03 2006-07-27 Memory Pharmaceuticals Corporation Phosphodiesterase 10a7 isoforms and methods of use
EP2214018B1 (en) * 2004-04-27 2013-06-26 Galapagos N.V. Methods, agents, and compound screening assays for inducing differentiation of undifferentiated mammalian cells into osteoblasts
JP4192136B2 (ja) * 2004-09-30 2008-12-03 株式会社小松製作所 画像表示システムおよび画像表示プログラム
DK2949668T3 (da) 2005-05-18 2019-11-11 Ablynx Nv Forbedrede nanobodies tm mod tumornekrosefaktor-alfa
EP2444424B1 (en) 2005-05-20 2018-08-08 Ablynx N.V. Improved nanobodies tm for the treatment of aggregation-mediated disorders
EP2377530A3 (en) 2005-10-21 2012-06-20 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by PDE inhibition
AU2007336242B2 (en) 2006-12-19 2012-08-30 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against GPCRs and polypeptides comprising the same for the treatment of GPCR-related diseases and disorders
WO2008074840A2 (en) 2006-12-19 2008-06-26 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against a metalloproteinase from the adam family and polypeptides comprising the same for the treatment of adam-related diseases and disorders
WO2009068630A1 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Immunoglobulin constructs
CA2717015A1 (en) 2008-03-05 2009-09-11 Ablynx Nv Novel antigen binding dimer-complexes, methods of making and uses thereof
CA2720763A1 (en) 2008-04-07 2009-10-15 Ablynx Nv Amino acid sequences directed against the notch pathways and uses thereof
US8405484B2 (en) * 2008-09-29 2013-03-26 Avaya Inc. Monitoring responsive objects in vehicles
US10005830B2 (en) 2009-03-05 2018-06-26 Ablynx N.V. Antigen binding dimer-complexes, methods of making/avoiding and uses thereof
AU2010233658B2 (en) 2009-04-10 2013-11-28 Ablynx Nv Improved amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of IL-6R related diseases and disorders
WO2011045079A1 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Intercell Ag Hepatitis b virus specific human antibodies
MX343085B (es) 2010-11-08 2016-10-24 Novartis Ag Polipeptidos que se enlazan a cxcr2.
EP2723772A1 (en) 2011-06-23 2014-04-30 Ablynx N.V. Immunoglobulin single variable domains directed against ige
EP2804603A1 (en) 2012-01-10 2014-11-26 President and Fellows of Harvard College Beta-cell replication promoting compounds and methods of their use
US9328174B2 (en) 2012-05-09 2016-05-03 Novartis Ag Chemokine receptor binding polypeptides
NL1040254C2 (en) 2013-05-17 2014-11-24 Ablynx Nv Stable formulations of immunoglobulin single variable domains and uses thereof.
ES2699576T3 (es) 2013-06-12 2019-02-11 Pharis Biotec Gmbh Péptidos con actividades antagonistas contra CXCR4 natural
NL2013661B1 (en) 2014-10-21 2016-10-05 Ablynx Nv KV1.3 Binding immunoglobulins.
RU2018122255A (ru) 2015-11-27 2019-12-19 Аблинкс Нв Полипептиды, ингибирующие cd40l
WO2018050833A1 (en) 2016-09-15 2018-03-22 Ablynx Nv Immunoglobulin single variable domains directed against macrophage migration inhibitory factor
JP7222888B2 (ja) 2016-11-16 2023-02-15 アブリンクス エン．ヴェー． Ｃｄ１２３及びｔｃｒアルファ／ベータに結合することが可能なｔ細胞動員ポリペプチド
US11603401B2 (en) 2017-06-02 2023-03-14 Ablynx N.V. Aggrecan binding immunoglobulins
CA3063293A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Merck Patent Gmbh Adamts binding immunoglobulins
BR112019025097A2 (pt) 2017-06-02 2020-07-28 Merck Patent Gmbh imunoglobulinas de ligação a mmp13
TWI826376B (zh) 2017-06-02 2023-12-21 德商麥克專利有限公司 與ａｄａｍｔｓ５、ｍｍｐ１３及聚集蛋白聚醣結合的多肽
WO2020050722A1 (en) * 2018-09-05 2020-03-12 Universiteit Van Amsterdam Use of a pde11 or pde2 inhibitor for the treatment of parkinson's disease
CN115433733A (zh) 2021-06-04 2022-12-06 生物岛实验室 环状RNA Circ-ACE2翻译的多肽及其应用
CN114369162B (zh) 2021-12-28 2023-05-30 合肥天港免疫药物有限公司 抗体及其应用
US20240132624A1 (en) 2022-07-27 2024-04-25 Ablynx N.V. Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor
WO2024133935A1 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Ablynx Nv Protein-based conjugation carriers

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9311920D0 (en) * 1993-06-09 1993-07-28 Pfizer Ltd Therapeutic agents
GB9514464D0 (en) * 1995-07-14 1995-09-13 Glaxo Lab Sa Medicaments
US5798246A (en) * 1996-03-25 1998-08-25 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Cyclic nucleotide phosphodiesterase
US5932465A (en) * 1997-10-16 1999-08-03 Icos Corporation Phosphodiesterase 8A

Also Published As

Publication number Publication date
US20020115176A1 (en) 2002-08-22
EP0967284A1 (en) 1999-12-29
US20040018542A1 (en) 2004-01-29
JP2005198652A (ja) 2005-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2000023682A (ja) ホスホジエステラ―ゼ酵素
US7063971B2 (en) Phosphodiesterase enzymes
US6303765B1 (en) Human extracellular matrix proteins
JP2001501444A (ja) Ｏｂ受容体ならびに体重障害の診断および治療の方法
EP1092727A2 (en) G-protein receptor
US20040077046A1 (en) Histone deacetylase-related gene and protein
US7091024B2 (en) Enzyme PDE XVI
US6660485B2 (en) Antibodies to human goose-type lysozyme
US20020160499A1 (en) Human serine carboxypeptidase
US7517957B2 (en) Human SLAP-2: a novel SH2/ SH3 domain-containing human SLAP homologue having immune cell-specific expression
JPH09509319A (ja) Ｒｎａ修正酵素およびその使用方法
JP2008154583A (ja) インターロイキン−１関連遺伝子およびタンパク質
AU762392B2 (en) Methods and materials relating to novel CD39-like polypeptides
US7052895B2 (en) Phosphodiesterase enzymes
US20030130485A1 (en) Novel human genes and methods of use thereof
JP4205630B2 (ja) ホスホジエステラーゼ酵素
US20030027308A1 (en) Novel human protein phosphatases identified from genomic sequencing
US7101686B1 (en) Polynucleotides encoding human SLAP-2:a novel SH2/SH3 domain-containing human SLAP homologue having immune cell-specific expression
CA2224247A1 (en) Human homolog of the mouse rab18 gene
MXPA97007852A (en) Homologo de fosfolipas
JP2005509418A (ja) 哺乳動物蛋白質ホスファターゼ

Legal Events

Date Code Title Description
A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20031211

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20040309

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20040820

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20041220

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20041221

A911 Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20050208

A912 Removal of reconsideration by examiner before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912

Effective date: 20050318