ITTO20120570A1 - Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc - Google Patents
Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc Download PDFInfo
- Publication number
- ITTO20120570A1 ITTO20120570A1 IT000570A ITTO20120570A ITTO20120570A1 IT TO20120570 A1 ITTO20120570 A1 IT TO20120570A1 IT 000570 A IT000570 A IT 000570A IT TO20120570 A ITTO20120570 A IT TO20120570A IT TO20120570 A1 ITTO20120570 A1 IT TO20120570A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- jcv
- monoclonal antibody
- pml
- antibody
- jcv infection
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title description 7
- 241000701460 JC polyomavirus Species 0.000 claims description 51
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 30
- 101710197658 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 claims description 30
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 claims description 30
- 101710108545 Viral protein 1 Proteins 0.000 claims description 30
- 206010036807 progressive multifocal leukoencephalopathy Diseases 0.000 claims description 26
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 21
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 21
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 5
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 101100069417 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GRE1 gene Proteins 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 101100533701 Rattus norvegicus Smad1 gene Proteins 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241001631648 Polyomaviridae Species 0.000 description 2
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960000284 efalizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 1
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 1
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000005233 tubule cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/084—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Description
Descrizione
“Anticorpo monoclonale diretto contro il virus JCâ€
DESCRIZIONE
La presente invenzione rientra nel settore dell’immunologia ed in particolare nel settore degli anticorpi neutralizzanti diretti contro antigeni di patogeni virali.
Più specificamente, l’invenzione riguarda un anticorpo monoclonale diretto contro la proteina VP1 del virus JC (JCV).
Il virus JC (JCV) à ̈ un poliomavirus umano della famiglia Polyomaviridae ed à ̈ l’agente responsabile di una patologia demielinizzante estremamente grave, spesso fatale, chiamata leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML). Il virus JC ha un capside a struttura icosaedrica privo di envelope che racchiude un genoma di DNA circolare a doppio filamento. Il componente principale del capside à ̈ la proteina virale VP1. Studi strutturali effettuati sui virioni hanno rivelato che il capside di poliomavirus à ̈ costituito da 72 pentameri formati da monomeri di VP1 connessi mediante l’estremità C-terminale. VP1 si lega ai recettori presenti sulle cellule bersaglio ed in tal modo dà inizio all’infezione.
Il virus JC infetta più dell’85% degli esseri umani adulti. Dopo l’infezione primaria, il virus JC rimane quiescente nei reni e negli organi linfoidi. Negli individui sani questo virus si può replicare nelle cellule dei tubuli renali e viene escreto nell’urina, senza causare alcuna patologia. Tuttavia, nei casi di grave immunodepressione, nei soggetti che hanno ricevuto un trapianto d’organo, nei pazienti oncologici, nei pazienti trattati con le nuove terapie immunomodulatorie basate su anticorpi monoclonali, o nelle persone affette da AIDS, il virus JC si può diffondere nel sistema nervoso centrale e causare la leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML). Nell’epoca pre-cART (combination antiretroviral therapy), l’incidenza di PML nei pazienti HIV variava fra 0,3% e 8%, ma l’ampio uso di trattamenti antiretrovirali ne ha determinato una significativa riduzione. L’infezione da HIV à ̈ ancora la causa di immunodeficienza più frequentemente associata alla PML, con circa l’80% dei casi, seguita dai tumori ematologici (circa l’8%), dai tumori solidi (circa il 3%), dai trapianti d’organo e dalle malattie autoimmuni trattate con immunomodulatori.
Tuttavia, negli ultimi dieci anni à ̈ stato riportato un numero crescente di casi di PML non correlati ad HIV/AIDS. Molti di questi nuovi casi si verificano in individui sottoposti a immunoterapie con farmaci recentemente disponibili. Al 29 febbraio 2012 sono stati documentati 212 casi di PML correlati a trattamenti con natalizumab, a fronte di 99571 pazienti affetti da sclerosi multipla trattati in tutto il mondo con questo farmaco. La PML à ̈ anche stata correlata ad altre terapie immunomodulatorie, inclusi efalizumab, micofenolato mofetile e rituximab.
Per il trattamento della PML sono state tentate diverse strategie terapeutiche, dirette contro varie fasi del ciclo replicativo virale, come ad esempio l’ingresso nella cellula bersaglio e la replicazione del genoma; nessuna di esse ha però avuto effetti benefici significativi. Sulla base dell’associazione fra PML e gravi condizioni di immunodepressione, sono stati anche tentati approcci di tipo immunologico. Ad esempio, à ̈ stato dimostrato che i pazienti affetti da PML con prognosi più favorevole erano caratterizzati da una più forte risposta cellulo-mediata e umorale specifica per JCV. La potenziale importanza di una risposta specifica anti-JCV, in particolar modo diretta contro VP1, à ̈ stata confermata dalla potente attività neutralizzante di sieri di animali (conigli) immunizzati con la proteina VP1 di JCV (Goldmann C et al. Journal of Virology, maggio 1999, pagine 4465-4469).
Una terapia alternativa basata su anticorpi anti-JCV umani potrebbe quindi trovare applicazione nel trattamento di pazienti affetti da PML. In particolare, considerando il ruolo chiave della proteina VP1 nelle fasi iniziali dell’infezione da JCV, i migliori candidati potrebbero essere anticorpi diretti contro la proteina VP1 di JCV.
Tale necessità à ̈ stata ora soddisfatta dai presenti inventori i quali, per la prima volta, sono riusciti ad ottenere anticorpi monoclonali totalmente umani diretti contro la proteina VP1 di JCV e per di più dotati di attività neutralizzante nei confronti del virus, il che li rende potenzialmente idonei all’impiego nel trattamento terapeutico della PML.
Tali risultati sono da considerarsi originali e sorprendenti alla luce dello stato della tecnica, poiché non era stato finora descritto alcun anticorpo monoclonale umano anti-VP1 di JCV, né tantomeno un anticorpo monoclonale umano neutralizzante anti-VP1 di JCV.
Goldmann C et al. cit., avevano infatti descritto sieri iperimmuni con anticorpi anti-VP1 di coniglio suscitati con virus like particles dotati di proprietà neutralizzanti nei confronti di JCV.
La domanda di brevetto giapponese JP9067397A aveva menzionato un procedimento per ottenere un anticorpo neutralizzante anti-JCV, che comprende l’immunizzazione di ratti con un peptide sintetico corrispondente a una porzione della proteina VP1, la raccolta del siero immune dai ratti e la separazione di una frazione di gamma-globuline. In tale brevetto non era quindi menzionata la selezione di un anticorpo monoclonale, tantomeno di origine umana.
L’anticorpo monoclonale anti-VP1 di JCV denominato ab34756, distribuito commercialmente da A-bcam<®>, Regno Unito, à ̈ un anticorpo murino utilizzato per la rivelazione del virus in ELISA e Western Blot, chiaramente non idoneo per applicazioni terapeutiche, tantomeno nell’essere umano.
Pertanto, nessuno degli anticorpi anti-JCV della tecnica anteriore sarebbe potenzialmente atto ad essere impiegato in applicazioni terapeutiche o profilattiche per infezioni da JCV o patologie ad esse correlate in pazienti umani.
Un primo oggetto della presente invenzione à ̈ quindi un anticorpo monoclonale umano contro la proteina VP1 del virus JC.
Nell’ambito della presente descrizione il termine “anticorpo monoclonale†indica qualsiasi struttura peptidica atta a legare l’antigene, in questo caso la proteina VP1 di JCV. Tale termine include quindi sia immunoglobuline intere sia frammenti immunoglobulinici funzionali, che generalmente comprendono un dominio variabile di catena pesante e un dominio variabile di catena leggera, ma possono anche comprendere un singolo dominio variabile. Esempi specifici, ma non limitativi, di frammenti immunoglobulinici funzionali sono i frammenti Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv, gli anticorpi a catena singola (scFv) e gli anticorpi a singolo dominio. Anticorpi a catena singola (single chain antibodies) sono ad esempio costruiti secondo il procedimento descritto nel brevetto US 4,946,778 di Ladner et al. Gli anticorpi a catena singola comprendono le regioni variabili delle catene leggera e pesante unite da una porzione legante flessibile (linker). Il frammento anticorpale chiamato anticorpo a singolo dominio (single domain antibody) à ̈ ancora più piccolo dell’anticorpo a catena singola, in quanto comprende un singolo dominio VH isolato. Le tecniche per ottenere anticorpi a singolo dominio aventi almeno in parte la stessa capacità di legame dell’anticorpo intatto, sono descritte nella tecnica anteriore e rientrano nelle conoscenze del tecnico medio del settore. Ward, et al., in "Binding Activities of a Repertoire of Single Immunoglobulin Variable Domains Secreted from Escherichia coli, Nature 341: 544-6), descrive un procedimento di screening per ottenere la regione variabile della catena pesante di un anticorpo (VH single domain antibody) con sufficiente affinità per l’epitopo bersaglio da legarsi ad esso in forma isolata.
Il termine “immunoglobulina†come impiegato nella presente descrizione comprende IgG (incluse IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgA, IgM, IgD e IgE, sia in forma monometrica sia polimerica.
In una forma di realizzazione preferita, l’anticorpo monoclonale dell’invenzione à ̈ un anticorpo monoclonale atto a neutralizzare il virus JC, cioà ̈ a bloccarne il ciclo replicativo in una delle sue fasi, interferendone così con l’attività biologica e con almeno una delle patologie ad essa correlata.
In una forma di realizzazione maggiormente preferita, l’anticorpo monoclonale dell’invenzione comprende almeno un dominio variabile di catena pesante e un dominio variabile di catena leggera, in cui il dominio variabile di catena pesante ha la sequenza SEQ ID NO:1 (oppure à ̈ codificato dalla sequenza SEQ ID NO:3) e il dominio variabile di catena leggera ha la sequenza SEQ ID NO:2 (oppure à ̈ codificato dalla sequenza SEQ ID NO:4). Tale specifico anticorpo à ̈ anche chiamato GRE1.
Un ulteriore aspetto della presente invenzione à ̈ un anticorpo monoclonale umano diretto contro la proteina VP1 del virus JC come definito in precedenza e dotato attività neutralizzante contro il virus JC, per l’uso nel trattamento terapeutico o profilattico di un’infezione da JCV o di una patologia correlata con un’infezione da JCV, preferibilmente la leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML).
Il tecnico medio del settore à ̈ in grado di identificare la dose efficace e formulare l’anticorpo monoclonale dell’invenzione in una composizione farmaceutica idonea all’impiego nell’ambito della presente invenzione, senza dover compiere un eccessivo sforzo inventivo.
L’anticorpo monoclonale della presente invenzione à ̈ altresì idoneo ad essere impiegato in campo diagnostico, essendo caratterizzato da elevate sensibilità e specificità . Tale anticorpo monoclonale ha mostrato un’elevata affinità (circa 1nM) verso la VP1 ricombinante del ceppo Mad1 e ad una uguale concentrazione di anticorpo murino commerciale (A-bcam<®>) mostra un segnale molto migliore in ELISA. Anche quando à ̈ stato valutato in saggio di immunofluorescenza condotto su cellule COS-7 infettate da JCV (ceppo Mad4), l’anticorpo ha mostrato maggiore sensibilità e specificità rispetto all’anticorpo commerciale Abcam<®>. Inoltre, à ̈ importante sottolineare che l’anticorpo monoclonale della presente invenzione non ha mostrato alcuna reattività nei confronti della VP1 ricombinante di BKV (virus appartenente alla famiglia Polyomaviridae come JCV; le VP1 di JCV e BKV presentano un’omologia della sequenza nucleotidica di circa il 75%) in ELISA, indicando quindi la sua elevata specificità nei confronti della sola VP1 di JCV.
Nell’ambito della presente invenzione rientrano quindi anche un procedimento diagnostico in vitro e il relativo kit per la diagnosi di infezione da JCV, in cui l’anticorpo monoclonale della presente invenzione à ̈ impiegato come reagente diagnostico specifico per JCV.
Il procedimento immunodiagnostico in vitro comprende il passaggio di porre a contatto un campione biologico di un soggetto, ad esempio un paziente, sospettato di essere infettato da JCV con l’anticorpo monoclonale dell’invenzione, in condizioni adatte affinché l’anticorpo monoclonale dell’invenzione si leghi all’antigene VP1 di JCV, se presente nel campione, ed il passaggio di rilevare qualitativamente o quantitativamente il legame fra l’anticorpo monoclonale dell’invenzione e l’antigene VP1 di JCV.
Il procedimento immunodiagnostico dell’invenzione à ̈ ad esempio realizzato come saggio immunoenzimatico ELISA oppure come saggio in immunofluorescenza o come saggio in immunoistochimica. Il campione sul quale à ̈ eseguito il saggio à ̈ ad esempio un campione di sangue, plasma, siero, urina, oppure un campione bioptico.
Il kit immunodiagnostico per l’attuazione del procedimento comprende l’anticorpo monoclonale dell’invenzione quale reagente specifico ed istruzioni per l’esecuzione del saggio, nonché opzionalmente ulteriori componenti che varieranno a seconda della tipologia del saggio e che sono di per sé noti alla persona esperta del settore. Esempi di componenti aggiuntivi che possono opzionalmente essere contenuti nel kit sono mezzi per la rivelazione qualitativa e/o quantitativa dell’avvenuto legame fra l’anticorpo e l’antigene, uno o più supporti solidi (come ad esempio piastre da microtitolazione), una soluzione bianco, una o più soluzioni standard contenenti quantità note dell’antigene di interesse, soluzioni di controllo, soluzioni di diluizione del campione da analizzare, un anticorpo di rilevazione coniugato con un marcatore rilevabile (ad esempio una molecola fluorescente) o con un enzima capace di reagire con un substrato formando un prodotto rilevabile, soluzioni tampone di lavaggio, soluzioni contenenti il substrato dell’enzima, soluzioni di stop, etc.
La parte sperimentale che segue illustra l’identificazione e la caratterizzazione di un anticorpo monoclonale umano rientrante nell’ambito della presente invenzione. Tale parte sperimentale à ̈ fornita puramente a scopo illustrativo e senza alcun intento limitativo della portata dell’invenzione come definita nelle annesse rivendicazioni.
Parte sperimentale
Una libreria combinatoriale di espressione fagica (phage display) di frammenti anticorpali umani (Fab monovalenti), di isotipo IgG1/k e con dimensioni stimate di 2x10<7>elementi, à ̈ stata costruita nel vettore fagemidico pPD con metodi simili a quelli precedentemente descritti (Plaisant, P., et al., Human monoclonal recombinant Fabs specific for HCV antigens obtained by repertoire cloning in phage display combinatorial vectors. Res Virol, 1997. 148(2): p. 165-9). Previo ottenimento del consenso informato, il midollo osseo di un uomo di 60 anni il cui siero era risultato positivo per la presenza di anticorpi anti-VP1/JCV in ELISA à ̈ stato utilizzato per generare la libreria. L’ELISA à ̈ stato effettuato rivestendo una piastra da 96 pozzetti con 100 ng/pozzetto di proteina VP1 di JCV ricombinante (Mad1, Abcam<®>) in tampone fosfato salino (PBS). Differenti diluizioni del siero sono state aggiunte in duplicato su una piastra rivestita con VP1. La piastra à ̈ stata incubata a 37°C per 1 ora e poi lavata con PBS/ TWEEN 20 0,1%. Gli anticorpi legati sono stati rilevati con anticorpo anti-IgG1 umane coniugato con perossidasi (HRP) (Sigma-Aldrich<®>).
Il biopanning della libreria anticorpale combinatoriale di espressione fagica per la selezione dell’anticorpo anti-VP1 à ̈ stato effettuato come descritto in precedenza (Williamson, R.A., et al., Human monoclonal antibodies against a plethora of viral pathogens from single combinatorial libraries. Proc Natl Acad Sci U S A, 1993. 90(9): p. 4141-5). In breve, una preparazione di fagi (0,1 mL/pozzetto) ad una concentrazione di 10<12>fagi per millilitro à ̈ stata usata in ciascun ciclo di biopanning per la selezione dell’anticorpo su piastre ELISA high-binding (Costar<®>) rivestite con VP1 del ceppo Mad1. E’ stato realizzato un totale di 5 cicli di biopanning ed i fagi ottenuti dagli ultimi 3 cicli sono stati convertiti in un sistema fagemidico esprimente Fab solubili.
Cellule di Escherichia coli del ceppo XL-1-blue (Agilent Technologies<®>), trasformate con un vettore di espressione dei Fab, sono state impiegate per produrre le molecole Fab selezionate per ulteriore caratterizzazione. In breve, preparazioni di Fab sono state ottenute con procedure di congelamentoscongelamento da una coltura. Cinque mL di SB(super broth) contenente ampicillina (50 ug/mL; Sigma-Aldrich<®>) sono stati inoculati con i batteri trasformati e sono stati fatti crescere per 7 ore a 37°C in un agitatore rotante. Isopropil-β-D-tiogalattopiranoside (IPTG, 1mmol/L; Sigma-Aldrich<®>) à ̈ stato aggiunto ai batteri in crescita, che sono stati ulteriormente incubati overnight a 30°C. Poi le cellule sono state centrifugate, risospese in 1 mL di PBS/1% sieroalbumina bovina (BSA), e sottoposte a una procedura di congelamentoscongelamento (3 cicli). I detriti cellulari sono stati ridotti in pellet mediante centrifugazione a 13000 g a temperatura ambiente in una micro centrifuga, e il sovranatante à ̈ stato usato in un saggio ELISA senza ulteriore processamento. L’ELISA à ̈ stato effettuato come descritto in precedenza.
I cloni che hanno dato una OD450> 0,8 in ELISA contro la VP1 di JCV sono stati considerati positivi e sono stati ulteriormente caratterizzati.
Sono stati analizzati 105 cloni, 11 cloni sono risultati positivi (10,5%). Non à ̈ stata dimostrata alcuna reattività contro BSA.
Per confermare la specificità dei cloni positivi in ELISA, questi sono stati testati in un saggio in immunofluorescenza su cellule COS-7 (Transformed African Green Monkey Kidney Fibroblast Cells) infettate con il ceppo Mad4 di JCV (nell’ELISA à ̈ stata usata la proteina VP1 ricombinante del ceppo Mad1). Come anticorpo secondario à ̈ stato usato un antisiero anti-Fab umano di capra coniugato con fluoresceina isotiocianato (Sigma-Aldrich<®>). E’ stato confermato che tutti i cloni positivi in ELI-SA erano capaci di legarsi alle cellule infettate, mentre non à ̈ stata osservata alcuna reattività con le cellule non infettate. I cloni negativi in ELISA non erano capaci di legarsi alle cellule infettate.
L’acido nucleico dei cloni positivi in ELISA à ̈ stato ottenuto con il kit Spin Miniprep (Qiagen<®>) ed à ̈ stato sequenziato su un sequenziatore 373A (PerkinElmer<®>). Per il sequenziamento della catena pesante à ̈ stato usato il primer SEQGz (5’-GTCGTTGACCAGGCAGCCCAG-3’) (SEQ ID NO:5) che si ibrida al filamento (+). Per la catena leggera à ̈ stato usato il primer SEQKb (5’-ATAGAAGTTGTTCAGCAGGCA-3’) (SEQ ID NO:6) che si lega al filamento (+). L’analisi della sequenza à ̈ stata effettuata con gli strumenti BLAST e IMGT ed ha mo strato che tutti i cloni derivano dalla stessa sottofamiglia di geni VH per la catena pesante, e Vk per la catena leggera e condividono la stessa sequenza. Inoltre, la sequenza di DNA dell’anticorpo à ̈ originale. E’ anche importante sottolineare che in letteratura non à ̈ stato finora descritto nessun anticorpo umano diretto contro la proteina VP1 di JCV. Pertanto, questo à ̈ il primo anticorpo monoclonale umano anti-VP1 di JCV descritto. Tale anticorpo à ̈ stato identificato con il nome GRE1.
Per poter testare l’attività neutralizzante dell’anticorpo umano anti-VP1 GRE1, in una piastra da 24 pozzetti (Corning<®>), sono state seminate 5x10<4>cellule COS-7 per pozzetto in terreno DMEM completo. COS-7 sono cellule permissive all’infezione da parte di JCV.
Il giorno successivo circa 100 unità formanti foci di JCV (ceppo Mad4) sono stati aggiunti a 100 µL di diluizioni progressive di GRE1 (diluizioni in base 2, da circa 20 µg/mL a 0,3 µg/mL). La miscela à ̈ stata incubata per 1 ora a 37°C ed à ̈ poi stata aggiunta alle cellule COS-7. In seguito, esse sono state incubate per 2 ore a 37°C. Dopo un lavaggio con PBS, sono stati aggiunti 500 µL di terreno fresco ad ogni pozzetto e le cellule sono state incubate per 6 giorni a 37°C.
Valutazione dell’attività neutralizzante L’attività neutralizzante degli anticorpi à ̈ stata valutata tramite immunofluorescenza. Brevemente, l’immunofluorescenza à ̈ stata eseguita a 6 giorni dall’infezione. I vetrini sono stati preparati fissando le cellule per 15’ con una miscela di Metanolo/Acetone (rapporto 1:1) a temperatura ambiente e utilizzando come anticorpo primario l’anticorpo commerciale murino anti-VP1 dell’Abcam<®>(10 µg/mL), e come secondario l’anti-Fab murino coniugato FITC (Sigma-Aldrich<®>), seguendo le linee guida del produttore.
La valutazione à ̈ effettuata confrontando il numero di cellule positive presenti nei pozzetti in cui il virus à ̈ stato addizionato a GRE1, con le cellule infettate in assenza dell’anticorpo (100% d’infezione).
Il dato osservato tramite microscopio a fluorescenza à ̈ stato confermato anche tramite un sistema di lettura di fluorescenza robotizzato (IN Cell Analizer Sistem 1000, GE Healthcare), in grado di distinguere automaticamente le cellule positive dal background, che ha indicato come l’anticorpo come frammento Fab à ̈ in grado di inibire l’infezione da JCV di oltre il 50% ad una concentrazione di 1 ng/µL.
Immunofluorescenza e immunoistochimica su campioni bioptici
Utilizzando l’anticorpo anti-VP1 di JCV GRE1 della presente invenzione in saggio di immunofluorescenza e immunoistochimica si può determinare la presenza di JCV in campioni bioptici. Questo anticorpo ha mostrato infatti una elevata sensibilità e specificità per la proteina VP1 di JCV, mentre al contrario non ha mostrato alcuna reattività nei confronti della VP1 di BKV.
I campioni bioptici possono essere freschi o fissati e paraffinati. Nel caso di campioni fissati e paraffinati, si procede se necessario con la deparafinizzazione del campione e ripristino dell’antigenicità secondo le procedure standard. Il campione viene successivamente incubato a 37°C per 30’ con GRE1 (10 µg/mL in PBS). Dopo il periodo di incubazione, il campione viene lavato 5 volte in PBS e poi incubato per 30’ a 37°C con l’anti-Fab umano coniugato FITC o coniugato con perossidasi di rafano (Sigma-Aldrich<®>), seguendo le linee guida del produttore. Nel caso in cui si utilizzi l’anticorpo coniugato con perossidasi di rafano à ̈ necessario aggiungere il substrato (diaminobenzidine, DAB substrate kit, Thermo Scientific), che in presenza di perossidasi produce un precipitato marrone che permette di visualizzare l’eventuale legame dell’anticorpo.
La valutazione del saggio viene eseguita osservando il campione ad un microscopio a fluorescenza o ad un sistema automatizzato di rilevazione della fluorescenza nel caso in cui venga utilizzato l’anticorpo coniugato FITC, oppure tramite microscopio ottico o sistema automatizzato di rilevazione di immagine nel caso in cui venga utilizzato l’anticorpo coniugato con perossidasi di rafano.
Capture ELISA per la rilevazione di JCV in campioni biologici
Per l’esecuzione di un saggio ELISA con l’anticorpo umano anti–VP1 di JCV, GRE1, della presente invenzione, una piastra per ELISA (Costar<®>) viene ricoperta con 25 µL per pozzetto di una soluzione contenente 40 ng dell’ anticorpo di pecora anti-Fd umano in PBS (concentrazione finale 1,6 µg/mL) ed incubata a 4°C per tutta la notte. Il giorno successivo la piastra viene lavata con acqua e bloccata con PBS-BSA 1% (w/v) per 1 ora a 37°C.
In seguito, vengono aggiunti 40 µL per pozzetto di GRE1 (concentrazione finale di circa 4 ng/uL in PBS/BSA1%) e la piastra à ̈ poi incubata per 1 ora a 37°C. Dopo aver effettuato, mediante lavatore automatico per micropiastre ELISA (ETI-System Kasher, DiaSorin), 5 lavaggi con PBS-Tween20 0,1% (Sigma-Aldrich<®>), si aggiungono 40 µL per pozzetto di diverse diluizioni del campione biologico da saggiare (diluizioni partendo dal toto fino a diluzioni di 1:1000, seriali in base 10). La piastra viene quindi incubata 1 ora a 37°C. Dopo aver effettuato dei lavaggi, come precedentemente descritto, vengono aggiunti 40 uL per pozzetto di una diluizione 1:1000 di un anticorpo commerciale murino anti-VP1 (Abcam<®>diluito in PBS/BSA). La piastra viene lasciata 1 ora a 37°C. Dopo ulteriori lavaggi, vengono aggiunti 40 uL per pozzetto di una preparazione policlonale di anticorpi di capra che legano la porzione Fc di IgG murino, coniugati con perossidasi di rafano (Anti-Human IgG (Fc specific)-Peroxidase antibody produced in goat, Sigma-Aldrich<®>). La piastra viene incubata per 45 minuti a 37°C. Dopo 5 lavaggi con PBS-Tween20 effettuati come precedentemente descritto, ad ogni pozzetto vengono aggiunti 40 µL di substrato (soluzione 1:1 di H2O2e di 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina, TMB substrate kit, Thermo Scientific) affinché avvenga la reazione enzimatica. Dopo circa 15 minuti, l’attività enzimatica viene bloccata mediante l’aggiunta di 40 µL per pozzetto di H2SO41N (Carlo Erba) e la reazione colorimetrica viene misurata con lo spettrofotometro (Model 680 Microplate Reader, Bio-Rad) ad una lunghezza d’onda di 450 nm.
Per ogni esperimento viene introdotto l’antigene BSA o un altro appropriato antigene come controllo negativo, la cui OD450viene utilizzata per rilevare un’eventuale reattività aspecifica.
Claims (10)
- RIVENDICAZIONI 1. Anticorpo monoclonale umano contro la proteina VP1 del virus JC.
- 2. Anticorpo monoclonale secondo la rivendicazione 1, che à ̈ un anticorpo neutralizzante il virus JC.
- 3. Anticorpo monoclonale secondo la rivendicazione 1 o 2, che à ̈ una immunoglobulina intera oppure un frammento immunoglobulinico funzionale, il frammento immunoglobulinico funzionale essendo preferibilmente scelto nel gruppo che consiste di Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv, anticorpi a catena singola (scFv) e anticorpi a singolo dominio.
- 4. Anticorpo monoclonale secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 3, comprendente almeno una regione variabile di catena pesante e una regione variabile di catena leggera, in cui la regione variabile di catena pesante ha la sequenza SEQ ID NO:1 e la regione variabile di catena leggera ha la sequenza SEQ ID NO:2, oppure la regione variabile di catena pesante à ̈ codificata dalla sequenza SEQ ID NO:3 e la regione variabile di catena leggera à ̈ codificata dalla sequenza SEQ ID NO:4.
- 5. Anticorpo monoclonale secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 4, per l’uso nel trattamento terapeutico o profilattico di un’infezione da JCV o di una patologia correlata con un’infezione da JCV, preferibilmente della leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML).
- 6. Composizione farmaceutica comprendente una quantità efficace di un anticorpo monoclonale secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 4.
- 7. Composizione farmaceutica secondo la rivendicazione 6, per l’uso nel trattamento terapeutico o profilattico di un’infezione da JCV o di una patologia correlata con un’infezione da JCV, preferibilmente della leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML).
- 8. Procedimento in vitro per la diagnosi di una infezione da JCV o di una patologia correlata a infezione da JCV, preferibilmente della leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML), il procedimento comprendendo il passaggio di porre a contatto un campione biologico di un soggetto sospettato di essere infettato da JCV con l’anticorpo monoclonale secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 4, in condizioni adatte affinché l’anticorpo monoclonale leghi l’antigene VP1 di JCV, se presente nel campione, ed il passaggio di rilevare qualitativamente o quantitativamente il legame dell’anticorpo monoclonale all’antigene VP1 di JCV, tale legame essendo indicativo di infezione da JCV o patologia correlata a infezione da JCV, preferibilmente leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML).
- 9. Procedimento secondo la rivendicazione 8, che à ̈ un saggio immunologico ELISA o un saggio immunologico in fluorescenza o un saggio immunoistochimico.
- 10. Kit immunodiagnostico per la diagnosi di una infezione da JCV o di una patologia correlata a infezione da JCV, preferibilmente della leucoencefalopatia multifocale progressiva (PML), il kit comprendendo un anticorpo monoclonale secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 4 ed istruzioni per l’esecuzione di un procedimento secondo la rivendicazione 8 o 9.
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT000570A ITTO20120570A1 (it) | 2012-06-27 | 2012-06-27 | Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc |
| JP2015519447A JP6320375B2 (ja) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | Ｊｃウイルスのｖｐ１タンパク質に対するヒトモノクローナル抗体 |
| EA201590111A EA029346B1 (ru) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | Моноклональное антитело человека против белка vp1 вируса jc |
| BR112014032682-7A BR112014032682B1 (pt) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | anticorpo monoclonal humano contra a proteína vp1 do vírus jc, composição farmacêutica, método de diagnóstico in vitro de uma infecção por jcv ou de uma doença associada a uma infecção por jcv e kit imunodiagnóstico para o diagnóstico de uma infecção por jcv ou de uma doença associada a uma infecção por jcv |
| PCT/IB2013/055257 WO2014002035A2 (en) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | A human monoclonal antibody against the vp1 protein of jc virus |
| CN201380034401.2A CN104520318B (zh) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | 针对jc病毒的vp1蛋白的人单克隆抗体 |
| US14/410,896 US10011648B2 (en) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | Human monoclonal antibody against the VP1 protein of JC virus |
| EP13785909.6A EP2867257B1 (en) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | A human monoclonal antibody against the vp1 protein of jc virus |
| MX2014015850A MX356745B (es) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | Anticuerpo monoclonal humano contra la proteina vp1 del virus jc. |
| ES13785909.6T ES2673230T3 (es) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | Anticuerpo monoclonal humano contra la proteína VP1 del virus JC |
| CA2877598A CA2877598C (en) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | A human monoclonal antibody against the vp1 protein of jc virus |
| KR1020157002126A KR102085305B1 (ko) | 2012-06-27 | 2013-06-26 | Jc 바이러스의 vp1 단백질에 대한 인간 단클론 항체 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT000570A ITTO20120570A1 (it) | 2012-06-27 | 2012-06-27 | Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITTO20120570A1 true ITTO20120570A1 (it) | 2013-12-28 |
Family
ID=46690644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT000570A ITTO20120570A1 (it) | 2012-06-27 | 2012-06-27 | Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10011648B2 (it) |
| EP (1) | EP2867257B1 (it) |
| JP (1) | JP6320375B2 (it) |
| KR (1) | KR102085305B1 (it) |
| CN (1) | CN104520318B (it) |
| BR (1) | BR112014032682B1 (it) |
| CA (1) | CA2877598C (it) |
| EA (1) | EA029346B1 (it) |
| ES (1) | ES2673230T3 (it) |
| IT (1) | ITTO20120570A1 (it) |
| MX (1) | MX356745B (it) |
| WO (1) | WO2014002035A2 (it) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITTO20120570A1 (it) * | 2012-06-27 | 2013-12-28 | Pomona Ricerca Srl | Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc |
| EP3517545A1 (en) * | 2012-12-31 | 2019-07-31 | Neurimmune Holding AG | Recombinant human antibodies for therapy and prevention of polyomavirus-related diseases |
| US9862760B2 (en) | 2015-09-16 | 2018-01-09 | Novartis Ag | Polyomavirus neutralizing antibodies |
| JP2018203632A (ja) * | 2017-05-30 | 2018-12-27 | 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | モノクローナル抗体及び測定キット |
| JP2021508439A (ja) * | 2017-12-01 | 2021-03-11 | ノバルティス アーゲー | ポリオーマウイルス中和抗体 |
| US20220356228A1 (en) * | 2019-06-19 | 2022-11-10 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Monoclonal antibodies against jc virus |
| CN111732654B (zh) * | 2020-06-19 | 2021-05-25 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 一种抗SARS-CoV-2的单克隆抗体1E10 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0967397A (ja) * | 1995-06-23 | 1997-03-11 | Eisai Co Ltd | 抗ｊｃウイルス抗体 |
| WO1997019174A1 (de) * | 1995-11-22 | 1997-05-29 | Deutsches Primatenzentrum Gmbh | Vp-antigene des jc-virus |
| US20040259767A1 (en) * | 2001-11-22 | 2004-12-23 | Kazuo Nagashima | Treatment of pml targeting jc virus agno |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
| CA2867902C (en) * | 2012-03-20 | 2023-09-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Jcv neutralizing antibodies |
| WO2013142300A2 (en) * | 2012-03-20 | 2013-09-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Jcv neutralizing antibodies |
| ITTO20120570A1 (it) * | 2012-06-27 | 2013-12-28 | Pomona Ricerca Srl | Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc |
| EP3517545A1 (en) * | 2012-12-31 | 2019-07-31 | Neurimmune Holding AG | Recombinant human antibodies for therapy and prevention of polyomavirus-related diseases |
-
2012
- 2012-06-27 IT IT000570A patent/ITTO20120570A1/it unknown
-
2013
- 2013-06-26 EP EP13785909.6A patent/EP2867257B1/en active Active
- 2013-06-26 WO PCT/IB2013/055257 patent/WO2014002035A2/en active Application Filing
- 2013-06-26 JP JP2015519447A patent/JP6320375B2/ja active Active
- 2013-06-26 CA CA2877598A patent/CA2877598C/en active Active
- 2013-06-26 KR KR1020157002126A patent/KR102085305B1/ko active IP Right Grant
- 2013-06-26 US US14/410,896 patent/US10011648B2/en active Active
- 2013-06-26 BR BR112014032682-7A patent/BR112014032682B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-06-26 EA EA201590111A patent/EA029346B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-06-26 CN CN201380034401.2A patent/CN104520318B/zh active Active
- 2013-06-26 ES ES13785909.6T patent/ES2673230T3/es active Active
- 2013-06-26 MX MX2014015850A patent/MX356745B/es active IP Right Grant
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0967397A (ja) * | 1995-06-23 | 1997-03-11 | Eisai Co Ltd | 抗ｊｃウイルス抗体 |
| WO1997019174A1 (de) * | 1995-11-22 | 1997-05-29 | Deutsches Primatenzentrum Gmbh | Vp-antigene des jc-virus |
| US20040259767A1 (en) * | 2001-11-22 | 2004-12-23 | Kazuo Nagashima | Treatment of pml targeting jc virus agno |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ATWOOD WALTER J: "A combination of low-dose chlorpromazine and neutralizing antibodies inhibits the spread of JC virus (JCV) in a tissue culture model: Implications for prophylactic and therapeutic treatment of progressive multifocal leukencephalopathy", JOURNAL OF NEUROVIROLOGY, vol. 7, no. 4, August 2001 (2001-08-01), pages 307 - 310, XP002692862, ISSN: 1355-0284 * |
| GOLDMANN C ET AL: "MOLECULAR CLONING AND EXPRESSION OF MAJOR STRUCTURAL PROTEIN VP1 OF THE HUMAN POLYOMAVIRUS JC VIRUS: FORMATION OF VIRUS-LIKE PARTICLES USEFULE FOR IMMUNOLOGICAL AND THERAPEUTIC STUDIES", JOURNAL OF VIROLOGY, THE AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 73, no. 5, 1 May 1999 (1999-05-01), pages 4465 - 4469, XP001154106, ISSN: 0022-538X * |
| RANDHAWA PARMJEET ET AL: "Identification of species-specific and cross-reactive epitopes in human polyomavirus capsids using monoclonal antibodies", JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY, vol. 90, no. Part 3, March 2009 (2009-03-01), pages 634 - 639, XP002692861, ISSN: 0022-1317 * |
| YOUSSEF LYLA ET AL: "Anti-JCV Neutralizing Antibodies as a Potential Therapy for the Treatment of PML", JOURNAL OF NEUROVIROLOGY, vol. 18, no. Suppl. 1, May 2012 (2012-05-01), & 11TH INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON NEUROVIROLOGY/CONFERENCE ON HIV IN THE NERVOUS SYSTEM; NEW YORK, NY, USA; MAY 29 -JUNE 02, 2012, pages 125, XP008160414 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104520318A (zh) | 2015-04-15 |
| JP6320375B2 (ja) | 2018-05-09 |
| WO2014002035A3 (en) | 2014-02-27 |
| CN104520318B (zh) | 2017-12-15 |
| KR20150023893A (ko) | 2015-03-05 |
| CA2877598C (en) | 2021-10-19 |
| US20150191530A1 (en) | 2015-07-09 |
| KR102085305B1 (ko) | 2020-03-05 |
| BR112014032682B1 (pt) | 2020-10-27 |
| EA201590111A1 (ru) | 2015-04-30 |
| EP2867257B1 (en) | 2018-03-14 |
| CA2877598A1 (en) | 2014-01-03 |
| WO2014002035A2 (en) | 2014-01-03 |
| US10011648B2 (en) | 2018-07-03 |
| JP2015524389A (ja) | 2015-08-24 |
| ES2673230T3 (es) | 2018-06-20 |
| EP2867257A2 (en) | 2015-05-06 |
| MX2014015850A (es) | 2015-08-20 |
| MX356745B (es) | 2018-06-12 |
| BR112014032682A2 (pt) | 2017-08-01 |
| EA029346B1 (ru) | 2018-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Seydoux et al. | Analysis of a SARS-CoV-2-infected individual reveals development of potent neutralizing antibodies with limited somatic mutation | |
| ITTO20120570A1 (it) | Anticorpo monoclonale diretto contro il virus jc | |
| Seydoux et al. | Characterization of neutralizing antibodies from a SARS-CoV-2 infected individual | |
| CN101092456B (zh) | 人源中和性抗禽流感病毒h5n1基因工程抗体 | |
| JP2012517017A (ja) | Ｊｃポリオーマウイルスの検出のための方法 | |
| WO2013032404A1 (en) | Human enterovirus specific antibodies and their uses in diagnostics | |
| WO2013043125A1 (en) | Enterovirus 71 specific antibodies and uses thereof | |
| Cao et al. | Identification of one novel epitope targeting p54 protein of African swine fever virus using monoclonal antibody and development of a capable ELISA | |
| KR20080012449A (ko) | 뉴클레오캡시드 또는 스파이크 단백질을 이용한 사스진단방법 | |
| CN114057868A (zh) | 猪δ冠状病毒抗体、含有猪δ冠状病毒抗体的试剂盒及应用 | |
| Byrnes et al. | A SARS-CoV-2 serological assay to determine the presence of blocking antibodies that compete for human ACE2 binding | |
| CN105866422B (zh) | 用于评估机体发生人巨细胞病毒活动性感染风险的方法及相关的试剂盒 | |
| KR102623999B1 (ko) | SARS-CoV-2의 N 단백질 특이적인 항체 및 그 응용 | |
| US11307202B1 (en) | Antibody binding detection method for detecting MERS-CoV | |
| CN101538328B (zh) | 一种人源中和性抗禽流感病毒h5n1基因工程抗体 | |
| WO2014070109A1 (en) | An enterovirus 71 specific antibody | |
| WO2021229561A1 (en) | Anti-sars-cov-2 antibodies | |
| WO2012072516A1 (en) | Barf1 a diagnostic and prognostic marker for epstein-barr virus (ebv)-associated lymphoma | |
| CN114560929B (zh) | 针对冠状病毒np蛋白的单克隆抗体及其应用 | |
| CN112079917B (zh) | 一种h7n9病毒特异性识别抗体p51h08及检测试剂盒 | |
| CN109891246B (zh) | 包括汉城病毒与普马拉病毒来源的重组核衣壳蛋白及汉坦病毒来源的重组糖蛋白的肾综合症出血热诊断用组合物及包括其的诊断试剂盒 | |
| KR102202082B1 (ko) | 치쿤군야 바이러스의 외피단백질 도메인 ⅱ에 대해 특이적으로 결합하는 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도 | |
| WO2012072515A2 (en) | Lmp1 a diagnostic and prognostic marker for epstein-barr virus (ebv)-associated lymphoma | |
| KR101876535B1 (ko) | 소바이러스성 설사병 바이러스의 탐지용 항체, 이를 이용한 항원 검출 방법, 및 이를 포함하는 탐지키트 | |
| CN116693674A (zh) | 一种与SARS和SARS-CoV-2广谱性结合的纳米抗体及其方法与应用 |