ITRM950273A1 - Antagonisti di interluchina-6 umana del tutto incapaci di formare un legame con gp 130, e loro uso per la preparazione di composizioni - Google Patents
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Abstract
La presente invenzione ha per oggetto antagonisti di interleuchina-6 umana che sono del tutto incapaci di formare un legame con la catena recettoriale responsabile della trasduzione del segnale associato a questa citochina, cioè con gp 130.La figura 1 mostra l'assenza di interazione degli antagonisti di interleuchina-6 umana secondo l'invenzione con la proteina gp 130.
Description
"ANTAGONISTI DI INTERLEUCHINA-6 UMANA DEL TUTTO INCAPACI DI FORMARE UN LEGAME CON GP 130, E LORO USO PER LA PREPARAZIONE DI COMPOSIZIONI FARMACEUTICHE"
L. RIASSUNTO
La presente invenzione ha per oggetto antagonisti di interleuchina-6 umana che sono del tutto incapaci di formare un legame con la catena recettoriale responsabile della trasduzione del segnale associato a questa citochina, cioè con gp 130.
La figura 1 mostra l'assenza di interazione degli antagonisti di interleuchina-6 umana secondo l'invenzione con la proteina gp 130.
"ANTAGONISTI DI INTERLEUCHINA-6 UMANA DEL TUTTO INCAPACI DI FORMARE UN LEGAME CON GP 130, E LORO USO PER LA PREPARAZIONE DI COMPOSIZIONI FARMACEUTICHE"
DESCRIZIONE
La presente invenzione si riferisce ad antagonisti di interleuchina-6 umana (hIL-6), che sono del tutto incapaci di formare un legame con la catena recettoriale (cioè con gp 130) responsabile della trasduzione del segnale associato a questa citochina.
Come è noto, negli antagonisti di hIL-6 noti il legame con gp 130 è effettivamente indebolito, ma non completamente abolito. Questa circostanza può avere l'effetto che, in alcune cellule particolarmente sensibili all'azione della citochina, gli antagonisti di hIL-6 già noti possono funzionare come deboli agonisti. Pertanto, non hanno nessuna utilità terapeutica nella formulazione di farmaci per la cura di malattie quali il mieloma multiplo, l'artrite reumatoide, il lupus eritematoso e 1Osteoporosi.
Esiste pertanto nello specifico settore l'esigenza di antagonisti di interleuchina-6 umana il cui uso non sia associato al rischio sopra menzionato .
L'adozione degli antagonisti di interleuchina-6 umana secondo la presente invenzione consente di superare tutti gli inconvenienti sopra lamentati, offrendo inoltre altri vantaggi che risulteranno chiari nel seguito .
Sono pertanto oggetto della presente invenzione antagonisti di interleuchina-6 umana (hIL-6), caratterizzati dal fatto di essere del tutto incapaci di formare un legame con gp 130 e di consistere in una sequenza amminoacidica scelta dal gruppo comprendente SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, e SEQ ID NO:6.
Sono anche oggetto della presente invenzione: molecole di DNA isolate e purificate che codificano per gli antagonisti di interleuchina-6 sopra menzionati; molecole di DNA ricombinanti che comprendono le molecole di DNA sopra menzionate operativamente legate ad una sequenza di controllo d'espressione in dette molecole di DNA ricombinante; un ospite unicellulare trasformato con le molecole di DNA ricombinante, potendo l'ospite unicellulare essere scelto dal gruppo comprendente batteri, lieviti ed altri funghi, cellule animali e cellule vegetali. Sono anche oggetto della presente invenzione l'uso degli antagonisti di interleuchina-6 umana SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO: 6 per la preparazione di composizioni farmaceutiche e l'uso degli stessi antagonisti come principi attivi nella preparazione di farmaci per la cura del mieloma multiplo, dell'artrite reumatoide, del lupus eritematoso e dell'osteoporosi.
Si è data finora della presente invenzione una descrizione di carattere generale. Con l'aiuto dei seguenti esempi, verrà ora fornita una descrizione più dettagliata di una forma di realizzazione dell'invenzione, finalizzata a farne meglio comprendere scopi, caratteristiche, vantaggi e modalità preparative.
La figura 1 mostra l'assenza di interazione degli antagonisti secondo l'invenzione con gp 130.
La figura 2 mostra l'antagonismo biologico degli antagonisti secondo l'invenzione rispetto all'interleuchina-6 di tipo selvatico su cellule di epatoma umano.
ESEMPIO 1
Generazione di mutanti della interleuchina 6 con la metodologia della presente invenzione.
Per tutte le reazioni di mutagenesi é stato usato come stampo il plasmide pT7.7/IL-6/DFRD/Hind. Questo plasmide e1 un derivato del plasmide pT7.7 (Studier, F. W. and Moffat, B. A. J. Mol . Biol . 189, 113-130, 1986) e contiene la regione codificante della IL-6 umana (hIL-6: SEQ.ID.NO.l) clonata tra siti NdeI e Clal del polylinker di pT7.7..11 gene della IL-6 umana e’ sotto il controllo del promotore della T7 RNA polimerasi, presente in pT7.7. Nella regione codificante della IL-6 umana clonata in pT7.7/IL-6/DFRD/Hind in quattro codoni sono state introdotte mutazioni {vedere SEQ ID NO:l) che determinano le seguenti sostituzioni amminoacidiche : Tyr31Asp, Gly35Phe, Serll8Arg e Vall21Asp. W095/00852 dello stesso Richiedente, con data di priorità1 italiana 23.06.93, insegna che l'introduzione delle quattro sostituzioni amminoacidiche sopra citate nella IL-6 umana naturale riduce drasticamente l'attività’ biologica della citochina cosi' modificata, senza alterare la sua capacita' di legame al recettore della stessa hIL-6, generando cosi' IL-6 DFRD {vedere SEQ ID NO:1) un efficiente antagonista recettoriale della hIL-6, Infine, siti di riconoscimento per ì seguenti enzimi di restizione sono stati introdotti senza che le sostituzioni nucleotidiche cambiassero il significato dei rispettivi codoni di hIL-6 al momento della traduzione: Sacl nella sequenza nucleotidica codificante gli amminoacidi 20-21-22; BfrI nella sequenza nucleotidica codificante gli amminoacidi 38-39-40; XhoI nella sequenza nucleotidica codificante gli amminoacidi 92-93; HindlII nella sequenza nucleotidica codificante gli amminoacidi 150-151 (vedere SEQ ID N0:1).
E' stata usata una strategia PCR (Polymerase Chain Reaction) per generare mutazioni entro i codoni selezionati nella regione codificante per 11interleuchina 6 umana. Il primer a valle é IL-6 down Not/Cla, un primer di 45 nucleotidi, corrispondente alle posizioni 530-555 (filamento antisenso) del cDNA di hIL-6 (assumendo come 1 il primo nucleotide del primo codone del polipeptide maturo) . Il sito di ibridazione del primer é nella regione del cDNA di hIL-6 che codifica per la parte carbossi-terminale della proteina. Il primer IL-6 down Not/Cla contiene anche un sito di riconoscimento per l'enzima di restrizione Noti ed un sito di riconoscimento per l'enzima di restrizione Clal, entrambi a valle del codone TAG, che specifica il termine della traduzione della proteina hIL-6.
Nel primo caso, il primer mutagenetico a monte é IL-6 160R/157WR, un primer di 60 nucleotidi le cui sequenza é SEQ.ID.N0.2. Il primer IL-6 160R/157WR si estende dalla posizione 440 alla posizione 499 (filamento senso) del cDNA di hIL-6 ed introduce mutazioni nei codoni che codificano per 1'amminoacido 157 (triptofano nella hIL-6 naturale) e 160 (aspartato nella hIL-6 naturale) . Un frammento di DNA di 135 paia di basi viene amplificato mediante PCR secondo protocolli standard di amplificazione PCR. L'amplificazione viene eseguita in 35 cicli. Ciascun ciclo consiste di incubazione per 2 minuti a 94 °C per la denaturazione dello stampo, 2 minuti a 50 °C per l'ibridazione dell'oligonucleotide e 3 minuti a 72 °C per l'estensione della catena. Il frammento amplificato viene digerito con HindlII e con Clal e purificato su gel di agarosio al 2%. Il frammento generato per PCR e digerito dai due enzimi viene ligato nel vettore pT7.7/IL-6/DFRD/Hind, digerito con gli stessi due enzimi, purificato su gel di agarosio allo 0,8 %.
Nel secondo caso, il primer mutagenetico a monte é IL-6 T162D, un primer di 64 nucleotidi le cui sequenza é SEQ.ID.N0.3. Il primer IL-6 160R/157WR si estende dalla posizione 441 alla posizione 503 (filamento senso) del cDNA di hIL-6 ed introduce mutazioni nel codoni che codificante per 1'amminoacido 162 (treonina nella hIL-6 naturale) . Un frammento di DNA di 134 paia di basi viene amplificato mediante PCR secondo protocolli standard di amplificazione PCR. L'amplificazione viene eseguita in 35 cicli, ciascun ciclo consiste di incubazione per 2 minuti a 94 °C per la denaturazione dello stampo, 2 minuti a 50 °C per l'ibridazione dell1oligonucleotide e 3 minuti a 72 °C per l'estensione della catena. Il frammento amplificato viene digerito con HindiII e con CIal e purificato su gel di agarosio al 2%. Il frammento generato per PCR e digerito dai due enzimi viene ligato nel vettore pT7.7/lL-6/DFRD/Hind, digerito con gli stessi due enzimi, purificato su gel di agarosio allo 0,8 %.
L'identità' dei mutanti ottenuti con entrambe le reazioni di PCR e' stata verificata tramite analisi di sequenza di singoli isolati. Le sostituzioni amminoacidiche presenti nel mutante IL-6 DFRD/D160R sono descritte in SEQ ID NO:4, le sostituzioni amminoacidiche presenti nel mutante IL-6 DFRD/W157R/D160R sono descritte in SEQ ID NO:5 e le sostituzioni amminoacidiche presenti nel mutante IL-6 DFRD/T162D sono descritte in SEQ ID NO:6 .
ESEMPIO 2
Dimostrazione che il legame al r.enettore_specifico degli antagonisti secondo l'invenzione è immutato rispetto all'interleuchina-6 di tipo selvatico Le proteine IL-6 DFRD/D160R {codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:4), IL-6 DFRD/W157R/D160R (codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:5) e IL-6 DFRD/T162D {codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:6) sono state prodotte secondo lo stato della tecnica, come descritto (Arcone, R., Pucci, P., Zappacosta, F., Fontaine, V., Malorni, A., Marino, G., e Ciliberto, G., Eur. J. Biochem. 198, 541-547, 1991). La capacita' dei mutanti di legare il recettore della hIL-6 e1 stata misurata secondo lo stato della tecnica, come descritto (Savino, R., Lahm, A., Salvati, A.L., Ciapponi, L., Sporeno, E., Altamura, S., Paonessa, G., Toniatti, C., Ciliberto, G., EMBO J.
13, 1357-1367, 1994). Nella seguente tabella 1 vengono riportati i valori di legame al recettore per la IL-6 naturale e per le forme mutanti ottenute come descritto nell'esempio 1.
TABELLA 1
Proprietà1 di legame al recettore della IL-_6e_ dai mutanti ottenuti come descritto nell'esempio .1 IL-6 naturale 100% IL-6 DFRD/D160R (SEQ ID NO:4) 137% IL-6 DFRD/W157R/D160R (SEQ ID NO:5) 130% IL-6 DFRD/T162D (SEQ ID NO:6) 39% ESEMPIO 3
Dimostrazione_ che gli_ antagonisti_ secondo. l'invenzione sono del tutto incapaci di legare .QP Idi!
I mutanti IL-6 DFRD (codificata dal cDNA descritto in SEQ ID N0:1), IL-6 DFRD/W157R/D160R (codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:5) e IL-6 DFRD/T162D (codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:6) sono stati testati per la capacità di legare gpl30. A questo scopo il sistema sperimentale usato è rappresentato da una serie di immunoprecipitazioni in presenza dei due componenti recettoriali: il recettore specifico IL-6Ra e la subunita' trasducente gpl30. Questi due recettori sono stati prodotti in cellule di insetto con il sistema di espressione denominato di Baculovirus. Sia IL-6Ra che gpl30 sono stati espressi come molecole solubili (indicate dal prefisso s prima del nome del recettore, per esempio sgpl30 o sIL-6Ra), cioè prive dei domini di membrane ed intra-citoplasmatico. Inoltre, nel caso di gpl30, al COOH terminale, immediatamente prima del codone di terminazione, sono stati aggiunti alcuni amminoacidi che rappresentano dei siti di riconoscimento (epitopi) da parte di specifici anticorpi monoclonali. Sono stati aggiunti due tipi di epitopi, denominati "myc" (costituito da 10 amminoacidi) e l'altro "FLAG" (costituito da 8 amminoacidi), in modo da generare due tipi di molecole: sgpl30-myc e sgpl30-FLAG.
Anche nel caso del sIL-6Ra si sono generati due tipi di recettori, uno senza alcuna aggiunta, chiamato semplicemente sIL-6Ra, ed un'altro con l'epitopo aggiuntivo myc, denominato sIL-6Ra-myc.
Questi recettori ricombinanti sono stati prodotti in cellule di insetto (denominate High Five) come molecole solubili e quindi secrete nel mezzo di coltura delle cellule. L'uso di un mezzo di coltura con metionina marcata con zolfo radiattivo (35S) ha permesso la produzione di recettori radiattivi che sono stati usati negli esperimenti .
L 'IL-6 naturale ed i mutanti sono state prodotti secondo lo stato della tecnica, come descritto (Arcone, R., Pucci, P., Zappacosta, F., Fontaine, V., Malorni, A., Marino, G., e Ciliberto, G., Eur. J. Biochem. 198, 541-547, 1991) .
Il primo saggio di legame, denominato di legame diretto a gpl30, dei mutanti dell'IL-6 a gpl30 è stato il seguente. Il recettore sIL-6Ramyc è stato immobilizzato su delle sferette di Sepharosio rivestite di Proteina A (protein A Sepharose beads) attraverso 1'anticorpo monoclonale anti-myc ed incubato con l'IL-6 o con i succitati muanti in presenza di sgpl30-FLAG marcato con 35S. Poiché quest'ultima molecola non è immunoprecipitata dall'anticorpo anti-myc, la sua immunoprecipitazione può essere spiegata solamente con il suo legame diretto al complesso IL-6/sIL-6Ra-myc formatosi sulle sferette. Dopo l'incubazione, le sferette {con i complessi immobilizzati) sono state lavate per eliminare l'eccesso di 35S-sgpl30-FLAG non legato. Le sferette sono state incubate poi con una soluzione contenente SDS in cui le proteine vengono denaturate ed il complesso recettoriale formatosi dissociato. Il tutto poi viene caricato su di un gel di SDS-poliacrilammide da cui si può valutare la quantità di 35S-sgpl30-FLAG legato e quindi la capacità dei mutanti di IL-6 di legare gpl30.
Come si può1 notare nella parte destra della figura 1 (delimitata dalla scritta "Legame diretto a gpl30") in questo tipo di saggio il mutante IL-6 DFRD riesce ancora a legare gpl30. Al contrario i mutanti DFRD/157R/160R e DFRD/162D sono completamente incapaci di legare gpl30.
Il secondo saggio di legame a gpl30 ha lo scopo di testare la capacità dei mutanti di formare un complesso recettoriale in cui gp!30 è presente come dimero. Il dimero di gpl30 è strettamente correlato alla capacità del complesso recettoriale di trasdurre il segnale all'interno della cellula. Questo saggio è stato realizzato immobilizzando sgpl30-myc sulle sferette di Sepharosio (sempre tramite 1'anticorpo monoclonale anti-myc) ed incubandolo con la IL-6 (naturale o mutante) in presenza di sIL-6Ra e 35S-sgpl30-FLAG. Come nel precedente saggio, quest'ultima molecola non può essere immunoprecipitate dall'anticorpo anti-myc e la sua immunoprecipitazione può essere spiegata solamente con la formazione di un complesso recettoriale con il sgp!30-myc presente sulle sferette. In questo caso, dopo il periodo di incubazione ed i successivi lavaggi (per eliminare l'eccesso di 35S-sgpl30-FLAG), la presenza del 35S-sgpl30-FLAG nel complesso recettoriale sta ad indicare la formazione di un dimero di gpl30. Come nel caso precedente, le sferette sono state incubate poi con una soluzione contenente SDS in cui le proteine vengono denaturate ed il complesso recettoriale formatosi dissociato. Il tutto poi viene caricato su di un gel di SDS-poliacrilammide da cui si può valutare la quantità di 3^S-sgpl30-FLAG legato e quindi la capacità dei mutanti di IL-6 di indurre la formazione di un dimero di gpl30. Come si può’ notare nella parte sinistra della figura 1 (delimitata dalla scritta "Dimerizzazione di gpl30"), in questo caso solo la IL-6 naturale è in grado di indurre la formazione del dimero di gpl30. Il risultato conferma che nessuno dei mutanti è capace di dimerizzare gpl30 e quindi formare un complesso recettoriale in cui due molecole di gpl30 possano scatenare il segnale all'interno della cellula.
Esempio 4.
Dimostrazione che le proteine modificate secondo l'invenzione sono antagonisti funzionali dell'interleuchina-6 umana in cellule di epatoma Le proteine IL-6 DFRD/W157R/D160R {codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:5) e IL-6 DFRD/T162D (codificata dal cDNA descritto in SEQ ID NO:6) sono state scelte per l'analisi dell'attività' agonistica. L'attività' biologica dei due mutanti su cellule umane di epatoma e' stata misurata secondo lo stato della tecnica, come descritto (Gregory, B., Savino, R. e Ciliberto, G., J. Immunol . Methods, 170, 47-56, 1994) . Nella seguente tabella 2 vengono riportati i valori di attività' biologica della IL-6 naturale e delle due forme mutanti ottenute come descritto nell'esempio 1
TABELLA 2
Proprietà’ di legame al recettore della IL-6 e dei mutanti ottenuti come descritto nell'esemplo 1 IL-6 naturale 100%
IL-6 DFRD/W157R/D160R (SEQ ID NO:5) 0%
IL-6 DFRD/T162D (SEQ ID NO:6)
Le due varianti IL-6 DFRD/W157R/D160R (SEQ ID NO:5) e IL-6 DFRD/T162D (SEQ ID NO:6) non mostrano nessun segno di attività biologica in cellule di epatoma umano, preservano ancora la capacità di legare il recettore gp80, mentre hanno perso completamente la capacita' di legare gpl30, come descritto nell'esempio 3. Esse sono state quindi usate in esperimenti di competizione dell'attività biologica dell'interleuchina 6 naturale in cellule di epatoma umano. Le cellule vengono stimolate con interleuchina 6 naturale a 4 nanogrammi per millilitro (ng/ml) di mezzo di cultura, in presenza di concentrazioni crescenti dei due mutante. Come illustrato nella figura 2 (in cui l'attività biologica della interleuchina 6 selvatica é espressa in unità arbitrarie), concentrazioni crescenti del mutante riescono ad antagonizzare efficacemente gli effetti della interleuchina 6 selvatica sulle cellule di epatoma umano .
LISTA DI- SEQUENZE
INFORMAZIONI GENERALI:
(i) DEPOSITANTE: ISTITUTO DI RICERCHE DI BIOLOGIA MOLECOLARE P.
ANGELETTI S.p.A.
(li) TITOLO DELL'INVENZIONE: ANTAGONISTI DI
INTERLEUCHINA-6 UMANA DEL TUTTO INCAPACI DI
FORMARE UN LEGAME CON GP 130, E LORO USO PER LA PREPARAZIONE DI COMPOSIZIONI FARMACEUTICHE
(iii) NUMERO DI SEQUENZE: 6
(iv) FORMA LEGGIBILE AL CALCOLATORE:
(A) TIPO DI SUPPORTO: Floppy disk 3.5" 1.44 MBYTES
(B) IBM PC compatibile
(C) SISTEMA DI ELABORAZIONE: PC-DOS/MS-DOS <R) 6.20
(D) SOFTWARE: Microsoft Word per Windows 6.0 (v) INDIRIZZO DI CORRISPONDENZA:
(A) DESTINATARIO: Società Italiana Brevetti S.p.A.
(B) INDIRIZZO: Piazza di Pietra 39
(C) CITTÀ': Roma
(D) PAESE: Italia
(E) CODICE POSTALE: 1-00186
(viii) INFORMAZIONI SULL'AGENTE
(A) Nome: (Dott.)
(B) RIFERIMENTO:
(ix) INFORMAZIONI PER TELECOMUNICAZIONI
{A) TELEFONO:
(B) TELEFAX:
(C) TELEX: 612287 ROPAT
(1) INFORMAZIONI SULLA SEQ ID NO:1
(i) CARATTERISTICHE DELLA SEQUENZA
(A) LUNGHEZZA: 555 paia di basi (B) TIPO: nucleotidica
(C) NUMERO CATENE : doppia
(D) CONFORMAZIONE: lineare
(ii) TIPO DI MOLECOLA: cDNA
(iii) IPOTETICA: no
(iv) ANTISENSO : no
(v) TIPO DI FRAMMENTO: interno
(vii) FONTE IMMEDIATA
(A) SINTESI: produzione in E.coli K12 (ix) CARATTERISTICHE ULTERIORI:
(A) NOME: pT7.7/IL-6/DFRD/Hind (C) METODO DI IDENTIFICAZIONE: gel di poliacrilammide
(xi) DESCRIZIONE DELLA SEQUENZA SEQ ID NO:1
(2) INFORMAZIONI SULLA SEQ ID NO:2
(i) CARATTERISTICHE DELLA SEQUENZA
(A) LUNGHEZZA: 60 nucleotidi
(B) TIPO: nucleotidica
(C) NUMERO CATENE : singola
(D) CONFORMAZIONE: lineare
(ii) TIPO DI MOLECOLA: DNA sintetico
(iii) IPOTETICA: no
<iv) ANTISENSO : no
(v) TIPO DI FRAMMENTO: interno
(vii) FONTE IMMEDIATA
(A) SINTESI: sintetizzatore di oligonucleotidi
(ix) CARATTERISTICHE ULTERIORI:
(A) NOME: IL-6160R/157WR
(C) METODO DI IDENTIFICAZIONE: gel di poliacrilammide
(xi ) DESCRIZIONE DELLA SEQUENZA SEQ ID NO : 2
CGCTGACGAA GCTTCAGGCA CAGAACCAGY GGCTGCAGCG TATGACAACT CATCTCATTC 60 In cui Y può essere una base scelta tra C e T (2 ) INFORMAZIONI SULLA SEQ ID NO : 3
( i ) CARATTERISTICHE DELLA SEQUENZA
(A) LUNGHEZZA: 64 nucleotidi
(B) TIPO : nucleotidica
(C) NUMERO CATENE : singola
(D) CONFORMAZIONE: lineare
(ii) TIPO DI MOLECOLA: DNA sintetico
(iii) IPOTETICA: no
(iv) ANTISENSO : no
(v) TIPO DI FRAMMENTO: interno
(vii) FONTE IMMEDIATA
(A) SINTESI: sintetizzatore di oligonucleotidi
(ix) CARATTERISTICHE ULTERIORI:
(A) NOME: IL-6 T162D
(C) METODO DI IDENTIFICAZIONE: gel di poliacrilammide
(xi) DESCRIZIONE DELLA SEQUENZA SEQ ID NO : 3
GCTGACGAAG CTTCAGGCAC AGAACCAGTG GCTGCAGGAC ATGGACACTC ATCTCATTCT GO
GCGC 64 ( 1 ) INFORMAZIONI SULLA SEQ ID NO : 4
(i) CARATTERISTICHE DELLA SEQUENZA
(A) LUNGHEZZA: 555 paia di basi
(B) TIPO: nucleotidica
(C) NUMERO CATENE : doppia
<D) CONFORMAZIONE: lineare
(ii) TIPO DI MOLECOLA: cDNA
(iii) IPOTETICA: no
(iv) ANTISENSO : no
(v) TIPO DI FRAMMENTO: interno
(vii) FONTE IMMEDIATA
(A) SINTESI: produzione in E.coli K12 (ix) CARATTERISTICHE ULTERIORI:
(A) NOME: IL-6 DFRD/D160R
(C) METODO DI IDENTIFICAZIONE: gel di poliacrilammide
(xi) DESCRIZIONE DELLA SEQUENZA SEQ ID NO:4
(1) INFORMAZIONI SULLA SEQ ID NO:5
(i) CARATTERISTICHE DELLA SEQUENZA
(A) LUNGHEZZA: 555 paia di basi
(B) TIPO: nucleotidica
(C) NUMERO CATENE : doppia
(D) CONFORMAZIONE: lineare
<ii) TIPO DI MOLECOLA: cDNA
(ili) IPOTETICA: no
(iv) ANTISENSO : no
(v) TIPO DI FRAMMENTO: interno
(vii) FONTE IMMEDIATA
(A) SINTESI: produzione in E.coli K12 (ix) CARATTERISTICHE ULTERIORI:
(A) NOME: IL-G DFRD/W157R/D160R
(C) METODO DI IDENTIFICAZIONE: gel di poliacrilammide
(xi) DESCRIZIONE DELLA SEQUENZA SEQ ID NO:5
(1) INFORMAZIONI SULLA SEQ ID NO:6
(i) CARATTERISTICHE DELLA SEQUENZA
(A) LUNGHEZZA: 555 paia di basi
(B) TIPO: nucleotidica
(C) NUMERO CATENE : doppia
(D) CONFORMAZIONE: lineare
(ii) TIPO DI MOLECOLA: cDNA
(iii) IPOTETICA: no
(iv) ANTISENSO : no
(v) TIPO DI FRAMMENTO: interno
(vii) FONTE IMMEDIATA
(A) SINTESI: produzione in E.coli K12 (ix) CARATTERISTICHE ULTERIORI:
(A) NOME: IL-6 DFRD/T162D
(C) METODO DI IDENTIFICAZIONE: gel di poliacrilammide
(xi) DESCRIZIONE DELLA SEQUENZA SEQ ID NO:6
Claims (8)
- RIVENDICAZIONI 1. Antagonisti di interluchina-6 umana (hIL-6), caratterizzati dal fatto di essere del tutto incapaci di formare un legame con gp 130 e di consistere in una sequenza amminoacidica scelta dal gruppo comprendente SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO:6.
- 2. Molecole di DNA isolato e purificato che codificano per gli antagonisti di interleuchina-6 umana della rivendicazione 1.
- 3 . Molecole di DNA ricombinante che comprendono molecole di DNA secondo la rivendicazione 2 operativamente legate ad una sequenza di controllo d'espressione in dette molecole di DNA ricombìnante .
- 4. Ospite unicellulare trasformato con una molecola di DNA ricombinante secondo la rivendicazione 3.
- 5. Ospite unicellulare secondo la rivendicazione 4, selezionato dal gruppo comprendente batteri, lieviti ed altri funghi, cellule animali e cellule vegetali.
- 6. Uso di SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO:6 per la preparazione di composizioni farmaceutiche.
- 7. Uso di SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO:6 come principi attivi nella preparazione di farmaci per la cura del mieloma multiplo, dell'artrite reumatoide, del lupus eritematoso e dell'osteoporosi .
- 8 . Antagonisti di ìnterluchina-6 umana del tutto incapaci di formare un legame con gp 130, molecole di DNA che codificano per questi antagonisti e di DNA ricombinante che comprendono il DNA che codifica per questi antagonisti e uso di detti antagonisti per la preparazione di composizioni farmaceutiche per la cura del mieloma multiplo, dell'artrite reumatoide, del lupus eritematoso e dell 'osteoporosi come precedentemente descritto, esemplificato e rivendicato.
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| IT95RM000273A IT1276555B1 (it) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | Antagonisti di interluchina-6 umana del tutto incapaci di formare un legame con gp 130, e loro uso per la preparazione di composizioni |
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| DE69626387T DE69626387T2 (de) | 1995-04-28 | 1996-04-26 | Antagonisten von humanem interleukin-6, welche zur bindung mit gp 130 unfähig sind und ihre verwendung in der herstellung von pharmazeutische zusammensetzungen |
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| AT96912205T ATE233320T1 (de) | 1995-04-28 | 1996-04-26 | Antagonisten von humanem interleukin-6, welche zur bindung mit gp 130 unfähig sind und ihre verwendung in der herstellung von pharmazeutische zusammensetzungen |
| DK96912205T DK0822986T3 (da) | 1995-04-28 | 1996-04-26 | Antagonister af human interleukin-6, der er fuldstændig ude af stand til at binde GP 130, og deres anvendelse til fremstilling af farmaceutiske forbindelser |
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| PCT/IT1996/000084 WO1996034104A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-04-26 | Antagonists of human interleukin-6 that are totally incapable of binding gp 130, and their use in the preparation of pharmaceutical compounds |
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| DE19704979A1 (de) * | 1996-02-07 | 1997-08-14 | Max Delbrueck Centrum | Retroviraler Vektor für den Gentransfer eines IL6-Antagonisten in humane hämatopoetische Stammzellen |
| ES2312184T3 (es) | 1997-03-21 | 2009-02-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Agentes preventivos terapeuticos para el tratamiento de esclerosis multiple, que contienen anticuerpos anti-receptores de il-6 antagonistas. |
| IT1291932B1 (it) * | 1997-06-20 | 1999-01-21 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Composizioni farmaceutiche antitumorali capaci anche di ridurre la farmacoresistenza in cellule tumorali, in particolare di carcinoma |
| ES2241583T3 (es) | 2000-03-06 | 2005-11-01 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Uso de antagonistas de interleuquina 6 para el tratamiento de tumores dependientes de estrogenos. |
| IL161968A0 (en) * | 2001-11-14 | 2005-11-20 | Centocor Inc | Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses |
| US20050100550A1 (en) * | 2003-11-10 | 2005-05-12 | Mohit Trikha | Anti-angiogenic uses of IL-6 antagonists |
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