ITMI20082015A1 - Acido ialuronico a basso contenuto di endotossine e ad elevata capacita' di assorbimento di acqua. - Google Patents
Acido ialuronico a basso contenuto di endotossine e ad elevata capacita' di assorbimento di acqua.Info
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Description
Descrizione dell'invenzione industriale dal titolo:
"ACIDO IALURONICO A BASSO CONTENUTO DI ENDOTOSSINE E AD ELEVATA CAPACITA' DI ASSORBIMENTO DI ACQUA."
CAMPO DELL' INVENZIONE
La presente invenzione riguarda acido ialuronico a basso contenuto di endotossine, il relativo processo di preparazione e l'uso di tale prodotto oltre che per la preparazione di composizioni farmaceutiche iniettabili per gli usi terapeutici già noti, anche come intermedio per la preparazione di acido ialuronico reticolato ad elevata capacità di assorbimento. La presente invenzione riguarda anche composizioni intradermiche riempitive contenenti come principio attivo l'acido ialuronico a basso contenuto di endotossine e ad elevata capacità di assorbimento d'acqua.
STATO DELLA TECNICA
L'acido ialuronico è un polimero lineare di tipo polisaccaridico composto da unità ripetitive alternate di acido β-D-glucuronico e β-D-N-acetylglucosammina ed è un componente presente in molti tessuti animali. Ad esempio è contenuto nel tessuto connettivo dei mammiferi, nella cresta di gallo, nell'involucro dello Streptococco.
L'acido ialuronico, essendo una delle componenti del tessuto animale, è quindi una delle sostanze tra le più innocue sicure ed a minor impatto sensibilizzante.
Attualmente esistono due strade diverse per preparare industrialmente l'acido ialuronico, il primo è essenzialmente un metodo estrattivo da tessuti animali come creste di gallo, bulbi oculari di bestiame, mentre la seconda prevede un processo di fermentazione batterica. Tuttavia l'acido ialuronico, ottenuto con tali processi, contiene elevate quantità di impurezze quali le proteine ed in particolare quelle di natura endotossinica . Tale problematica riveste carattere di estrema importanza, ad esempio nel caso di composizioni intradermiche riempitive, ovvero i cosiddetti filler, in quanto più bassa sarà la concentrazione di endotossine batteriche nel prodotto finito iniettabile, più basso sarà il rischio di insorgenza di reazioni irritativoimmunologiche nel tessuto dermico del ricevente, che possono dar luogo a reazioni infiammatorie e di tipo granulomatoso di significativa severità, tanto che la Comunità Europea ha dovuto imporre per tali tipi di prodotti nei capitolati tecnici una soglia di endotossine inferiore a 0.5 EU/ml.(Direttive 2007/47/EC 93/42 e 93/42/EEC Medicai Device classe III)
Sono noti nello stato dell'arte molti processi che hanno come scopo principale la riduzione di proteine, ma che tuttavia consentono di arrivare a dei limiti di purezza ben al di sotto dei suddetti standard europei.
Ad esempio in US 3,396,081 si descrive un metodo per purificare l'acido ialuronico da proteine, antigeni e pirogeni, che comprende l'ottenimento di un grezzo in forma di polvere, contenente acido ialuronico, da organi di animali, la fase successiva contempla la formazione di una sospensione di tale polvere in soluzione acquosa alcalina ed il relativo riscaldamento in modo da ottenere la denaturazione delle proteine. Infine la proteina così denaturata,per mezzo di fermenti proteolitici, viene decomposta ai corrispondenti amminoacidi, che vengono rimossi ad opera di resine a scambio ionico.
US4141973 prevede una fase di deproteinizzazione dell'acido ialuronico mediante trattamento con cloroformio. Con questo processo si ottiene acido ialuronico con un quantitativo di proteine residue pari 0,5%.
In WO86/06728 si descrive un metodo per deproteinizzare acido ialuronico, che comprende la precipitazione dell'acido ialuronico e della proteina da una soluzione acquosa proteinacea, la successiva denaturazione con alcol, la dissoluzione dell'acido ialuronico e della proteina in un solvente in cui è solubile l'acido ialuronico e la proteina viene digerita. Anche con questo metodo ai ottiene acido ialuronico con un contenuto residuo proteinico di 0,5%.
Un lieve miglioramento nella eliminazione delle proteine da acido ialuronico viene conseguito con il processo descritto in EP239995 che prevede i seguenti stadi:si separa mediante precipitazione l'acido ialuronico da un grezzo, si procede a denucleotidizzazione per aggiunta di DNase e Rnase e si lascia sotto incubazione sino a che il nucleotide viene completamente digerito quindi si deproteinizza con protease 1% e si lascia incubare sino a che la proteina viene completamente digerita.
Si lava quindi l'acido ialuronico denucleitidizzato e deproteinizzato con un sale di ammonio quaternario di tipo alchilico o arilico mediante formazione del relativo complesso, si procede alla decomplessazione di acido ialuronico per aggiunta di un eccesso di sodio dodecilsolfato e si fa precipitare acido ialuronico.
L'acido ialuronico così ottenuto ha un quantitativo residuo di proteine compreso tra 0,2 e 0,3%.
Un altro problema molto sentito nell'ottenimento degli impianti riassorbibili a base di acido ialuronico, è la capacità del medesimo ad assorbire acqua, proprietà molto importante soprattutto nel campo dei cosiddetti filler, ovvero delle formulazioni intradermiche in grado di attenuare le rughe.
Infatti maggiore sarà la capacità di assorbimento di acqua, maggiore sarà la sua capacità di aumentare il proprio volume a contatto con i fluidi corporei, maggiore sarà la sua capacità di riempire i solchi cutanei causati dalle rughe o da altri inestetismi della pelle.
E' d'altronde noto che è possibile aumentare la capacità di assorbimento dell'acqua trasformando chimicamente l'acido ialuronico in modo da renderlo più prono ad assorbire acqua ad esempio mediante reticolazione o crosslinking dell'acido ialuronico.
WO 86/00079, US 5,827937 e W002/06350 descrivono dei processi di reticolazione dell'acido ialuronico condotti a 40-50°C in soluzione acida e/o basica con un agente reticolante quale il butandioldiglicidiletere (BDDE) e successiva neutralizzazione della miscela di reazione. Questi processi di reticolazione presentano una serie di svantaggi, causati principalmente dal fatto che la temperatura piuttosto elevata di reticolazione può provocare la rottura e la degradazione dell'acido ialuronico, ciò a scapito delle proprietà del prodotto finale .
Inoltre non è possibile con i processi dell'arte nota modulare il grado di reticolazione, per cui si può ottenere con lo stesso tipo di processo un prodotto con un basso grado di reticolazione oppure con un grado di reticolazione troppo elevato.
In CN1259363 si descrive un acido ialuronico con una capacità di assorbimento d'acqua da 350 a 650 volte ottenuto con una metodica che prevede le seguenti fasi (1)Trattamento di deproteinizzazione con un agente di deproteinizzazione non specificato,
(2) reazione di reticolazione a temperatura ambiente con glicidileteri .
Per quanto concerne la fase (1), dalle informazioni contenute nel brevetto Cinese non è dato di capire quale sia l'agente deproteinizzante effettivamente impiegato, inoltre sempre per quanto concerne la fase (1) non viene fornito alcun dato quantitativo circa la purezza finale del prodotto che ha subito deproteinizzazione. Inoltre il prodotto finale reticolato risulta essere inquinato dai suddetti agenti reticolanti, che inevitabilmente rimangono inglobati nel prodotto finale e che sono difficili da rimuovere.
SOMMARIO DELL'INVENZIONE
La Richiedente ha ora trovato che è possibile ottenere acido ialuronico contenente un residuo in proteine di almeno un ordine di grandezza più basso del contenuto imposto per tali impurezze dalle suddette direttive europee. Oggetto della presente invenzione è pertanto acido ialuronico a basso contenuto di proteine (endotossine)<0,05 preferibilmente ≤ 0,025 EU/ml.
Ulteriore oggetto della presente invenzione è il processo che consente di ottenere l'acido ialuronico oggetto della presente invenzione.
Tale processo in particolare comprende i seguenti stadi:
a) una prima deproteinizzazione costituita da un trattamento di una soluzione acquosa di acido ialuronico con un alchilalogenuro,
b) una seconda deproteinizzazione costituita dal trattamento di una soluzione acquosa dell'acido ialuronico isolato proveniente dallo stadio (a) con un solfato di un metallo bivalente biologicamente accettabile.
La Richiedente ha inoltre trovato che, con l'acido ialuronico oggetto della presente invenzione, modulando opportunamente il grado di reticolazione, è possibile ottenere una vasta gamma di prodotti a differente capacità di assorbimento dell'acqua generalmente compresa tra 300 e 1000.
Ulteriore oggetto della presente invenzione è quindi un acido ialuronico a basso contenuto di endotossine secondo la reticolato con capacità di assorbimento dell'acqua compresa tra 300 e 1000.
Ulteriore oggetto della presente invenzione è un processo, che permette di ottenere il suddetto prodotto reticolato, e che comprende i seguenti stadi:
c) l'acido ialuronico isolato dallo stadio (b) viene sciolto in una soluzione acquosa basica oppure in una soluzione acquosa acida e si aggiunge un agente reticolante biologicamente costituito dal un derivato epossidico a concentrazioni comprese tra 1 e 10% in peso rispetto all'acido ialuronico e a temperatura compresa tra 15 e 35°C;
d) si procede alla purificazione del prodotto proveniente dallo stadio (c) mediante dialisi. Con questo tipo di purificazione è infatti possibile rimuovere in maniera completa l'agente reticolante non reagito, quindi adatto per essere somministrato per via intradermica .
Ulteriore oggetto della presente invenzione sono inoltre composizioni iniettabili contenenti come principio attivo l'acido ialuronico secondo la presente invenzione avente un contenuto in endotossine inferiore a 0,05 EU/ml, in combinazioni con adatti eccipienti o diluenti. Infine ulteriore oggetto della presente invenzione sono composizioni intradermiche riempitive contenenti come principio attivo l'acido ialuronico a contenuto basso di endotossine e reticolato, con capacità di assorbimento dell'acqua compresa tra 300 e 1000, in combinazione con adatti eccipienti e diluenti.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL'INVENZIONE.
L'acido ialuronico secondo la presente invenzione generalmente presenta peso molecolare medio compreso tra 500000 e 2000000 di Da e, preferibilmente, tra 1000000 1500000 Da.
L'acido ialuronico oggetto della presente invenzione ha un contenuto in endotossine preferibilmente≤0.025 EU/ml. Il contenuto di endotossine è stato valutato con la metodica descritta in US licence No.1197 SINGLE TEST Vial for Endotoxin (Pyrogen) Detection.
Per gli scopi della presente invenzione l'acqua impiegata nei processi di preparazione sia del prodotto deproteinizzato che di quello reticolato è sempre acqua deionizzata per preparazioni iniettabili.
L'acido ialuronico utilizzato come reagente nel processo per preparare l'acido ialuronico con il suddetto basso contenuto di endotossine secondo la presente invenzione, può essere di natura estrattiva o può essere preparato mediante processi di fermentazione batterica.
La concentrazione di acido ialuronico nella soluzione acquosa da sottoporre alle deproteinizzazioni degli stadi (a) e (b)del processo dell'invenzione è preferibilmente compresa tra 0,1 e 2 % in peso sul peso totale della soluzione .
L' idrocarburo alogena to impiegato come agente deproteinizzante è preferibilmente scelto tra cloruro di metilene e cloroformio e, secondo una soluzione particolarmente preferita, è cloroformio e viene aggiunto alla soluzione acquosa di acido ialuronico in quantitativi compresi tra 0,01 e 3% in peso sul peso di acido ialuronico.
Nello stadio (b) il solfato di metallo bivalente è preferibilmente scelto tra solfato di calcio, solfato di magnesio e solfato di zinco.
Secondo una soluzione particolarmente preferita detto sale è il solfato di zinco e viene aggiunto alla soluzione acquosa in quantitativo compresi tra 0,01 e 3% in peso sul peso dell'acido ialuronico.
Il prodotto proveniente dallo stadio (a) viene preferibilmente isolato dalla miscela di reazione secondo le seguenti modalità operative:
si recupera il precipitato mediante filtrazione, si lava il precipitato filtrato con alcol, si filtra il prodotto lavato, ed infine si procede alla filtrazione finale sotto vuoto.
Il prodotto proveniente dallo stadio (b) viene preferibilmente isolato dalla miscela di reazione secondo modalità operative del tutto identiche con l'unica differenza che come solvente di lavaggio del prodotto precipitato e separato dalla miscela di reazione dello stadio (b) può essere impiegata acqua deionizzata.
Come solvente alcolico di lavaggio si può impiegare metanolo, etanolo al 95% o etanolo assoluto.
Per gli scopi della presente invenzione si intende con capacità di assorbimento dell'acqua un numero adimensionale calcolato secondo la seguente formula:
Q= (m2-ml)/ml
in cui Q = capacità di assorbimento dell'acqua, m2 è il peso dell'acido ialuronico reticolato dopo assorbimento dell'acqua ed mi è il peso dell'acido ialuronico reticolato prima dell'assorbimento.
Il prodotto reticolato oggetto della presente invenzione ha preferibilmente una capacità di assorbimento d'acqua preferibilmente compresa tra 320 e 480 che è l'intervallo ottimale per uso umano.
In questo caso nel processo secondo la presente invenzione nello stadio (c) l'agente reticolante viene aggiunto in quantitativi compresi tra 5 e 7,5% in peso sul peso dell'acido ialuronico.
Gli agenti reticolanti impiegati nello stadio (c) del processo secondo la presente invenzione sono scelti tra epossicloropropano e glicidil eteri. Secondo una soluzione particolarmente preferita l'agente reticolante è il butandioldiglicidiletere (BDDE).
Lo stadio (c) viene preferibilmente condotto in una soluzione acquosa di un acido scelto tra acido cloridirico e acido acetico o di una base scelta tra idrossido di sodio, idrossido di potassio a concentrazioni comprese tra 0,1 e 1M.
Quando nello stadio (c) la reazione di reticolazione viene condotta in soluzione acquosa acida, al termine della reazione viene aggiunta una soluzione acquosa basica, per portare la miscela di reazione ai valori di pH desiderato, viceversa quando la reazione viene condotta in soluzione acquosa acida, si aggiunge una soluzione acquosa basica. Le concentrazioni di tali soluzioni sono le medesime di quelle adoperate prima della reazione di reticolazione ovvero sono comprese tra 0,1 e 1M.
La dialisi condotta nello stadio (d) del processo dell'invenzione può essere di tipo dinamico o statico. Il dializzato viene preferibilmente preparato con acqua e sali minerali scelti tra Na2HP04, NaH2P04e cloruro di sodio .
Il processo per preparare l'acido ialuronico reticolato secondo la presente invenzione preferibilmente prevede uno stadio ulteriore (e) in cui il prodotto isolato dallo stadio (d) viene sottoposto a classificazione, mediante applicazione di pressione esterna.
Le dimensioni delle particelle a seguito di questa classificazione hanno dimensioni generalmente comprese tra 50 e 2000 μπι preferibilmente tra 200 e 1000 μτη.
Le composizioni iniettabili oggetto della presente invenzione sono destinate agli usi terapeutici già noti per questo principio attivo
Le composizioni intradermiche particolarmente preferite sono quelle contenenti l'acido ialuronico reticolato e avente il suddetto basso contenuto in endotissine con capacità di assorbimento d'acqua compresa tra 320 e 480. Si riportano a scopo illustrativo, ma non limitativo, alcuni esempi di preparazione dell'acido ialuronico a basso contenuto di endotossine e dell'acido ialuronico reticolato ottenuto dall'acido ialuronico così purificato.
Esempio 1
Deproteìnizzazione (STEP 1)
20 g di acido ialuronico dopo isolamento e caratterizzazione, viene idratato in acqua demineralizzata e tamponata a pH 7,0 con soluzione di tampone fosfato in agitatore planetario e a temperatura di 40°C così da ottenere una soluzione di sodio ialuronato allo 0,25% p/p (20 g di acido ialuronico in 7,98 Kg di acqua demineralizzata e tamponata). Il gel così ottenuto viene trasferito in altro miscelatore di acciaio inox preventivamente sanitizzato e asciugato e aggiunto di un volume pari a 0,6 g di cloroformio (Sigma-Aldrich) pari al 3% p/p dell'acido ialuronico. La miscela di reazione viene posta sotto agitazione vigorosa (agitazione meccanica con asta centrale) per almeno 30 minuti e preferibilmente per 60 minuti e successivamente la miscela di reazione viene filtrata così da separare il precipitato dalle acque madri. Il precipitato viene lavato con Etanolo 95% per 3 volte consecutive con pompa a vuoto e successivamente asciugato in stufa ventilata a 30°C fino a costanza di peso.
Deproteinizzazione (STEP 2)
La soluzione di sodio ialuronato ottenuta reidratando il sodio ialuronato (15 g) ottenuto dopo deproteinizzazione con cloroformio (STEP 1) come da procedimento descritto nello STEP 1 (soluzione allo 0,25% p/p) viene posta sotto agitazione meccanica in miscelatore planetario di acciaio inox e alla soluzione vengono aggiunti 4,5 g di una soluzione acquosa di zinco solfato eptaidrato 10% p/p (Sigma Aldrich). La miscela viene posta sotto agitazione per almeno 30 minuti e preferibilmente per 60 minuti e successivamente la soluzione-gel viene addizionata con miscela di cloroformio ed etanolo 95% (miscela 1:1) e la miscela viene filtrata. Il precipitato ottenuto e raccolto sul filtro viene lavato con etanolo 95% per 3 volte consecutive e filtrato da ultimo con pompa a vuoto. Il precipitato così lavato viene poi asciugato in stufa ventilata a 30°C fino a costanza di peso.
Esempio 2 -reticolazione del prodotto deproteìnizzato ottenuto nell'esempio 1.
L'acido ialuronico ottenuto dopo deproteinizzazione (STEP 1 e 2) viene idratato in miscelatore meccanico planetario alla temperatura di 40°C con acqua demineralizzata e tamponata per tampone fosfato così da ottenere un gel allo 0,25% p/p. 6,7 Kg di gel (0,25% p/p in sodio ialuronato) viene posto in altro agitatore meccanico ad asta centrale e posto sotto agitazione meccanica energica; In seguito ad acidificazione con soluzione di HC1 1 M fino ad assestare il pH a 3,5 al gel viene aggiunto 1 g di BDDE e la miscela viene posta sotto agitazione per almeno 1 ora e mezza scaldando la miscela in bagno-maria di acqua a 70°C.
Al termine della reazione la miscela di reazione viene neutralizzata con soluzione di Sodio Idrato 1 M e successivamente estratta con una miscela di etanolo 95% e clorformio in rapporto 1:1 (in tutto 2 Litri).
Il precipitato viene raccolto per filtrazione e lavato con etanolo 95% per 3 volte consecutive e successivamente viene filtrato sotto vuoto e asciugato in stufa ventilata a 30°C fino a costanza di peso. La polvere di acido ialuronico viene idratata in tampone fosfato così da ottenere una soluzione allo 0,25% p/p e 6,8<pH<7,2 e la soluzione così ottenuta viene sottoposta a processo dialitico dinamico.
L'ultima operazione consiste nella caratterizzazione dimensionale del Sodio ialuronato tramite membrana filtrante a decrescenti sensibilità di estrusione.
Claims (23)
- RIVENDICAZIONI 1.Acido ialuronico avente un contenuto in endotossine inferiore a 0,05EU/ml.
- 2. Acido ialuronico secondo la rivendicazione 1 in cui detto contenuto in endotossine è< 0,025 EU/ml.
- 3.Acido ialuronico secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-2 avente peso molecolare compreso tra: 1000000 e 1500000 Da.
- 4 . Acido ialuronico secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-3, in forma reticolata ed avente una capacità di assorbimento d'acqua compresa tra 300 e 1000.
- 5 . Acido ialuronico in forma reticolata secondo la rivendicazione 4, avente capacità di assorbimento d'acqua compresa tra 320 e 480.
- 6. Processo per preparare l'acido ialuronico secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-3, comprendente i seguenti stadi: a) una prima deproteinizzazione costituita da un trattamento di una soluzione acquosa di acido ialuronico con un alchilalogenuro, b) una seconda deproteinizzazione costituita dal trattamento di una soluzione acquosa dell'acido ialuronico isolato proveniente dallo stadio (a) con un solfato di un metallo bivalente biologicamente accettabile.
- 7. Processo secondo la rivendicazione 6, in cui la concentrazione di acido ialuronico nella soluzione acquosa da sottoporre alle deproteinizzazioni degli stadi (a) e (b) è compresa tra 0,1 e 3 % in peso sul peso totale della soluzione.
- 8. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 6 e 7, in cui detto idrocarburo alogenato impiegato nello stadio (a) è scelto tra cloroformio e cloruro di metilene .
- 9. Processo secondo la rivendicazione 8, in cui detto agente deproteinizzante è il cloroformio e viene aggiunto alla soluzione acquosa di acido ialuronico in quantitativi compresi tra 0,01 e 3% in peso sul peso di acido ialuronico.
- 10. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 6-9, in cui nello stadio (b) il solfato di metallo bivalente è scelto tra solfato di calcio, solfato di magnesio e solfato di zinco.
- 11. Processo secondo la rivendicazione 11, in cui detto solfato di metallo bivalente è il solfato di zinco e viene aggiunto alla soluzione acquosa in quantitativo compresi tra 0,01 e 3% in peso sul peso dell'acido ialuronico .
- 12. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 6-11, in cui prodotto proveniente dallo stadio (a) viene isolato dalla miscela di reazione secondo le seguenti modalità operative: si recupera il precipitato mediante filtrazione, si lava il precipitato filtrato con alcol, si filtra il prodotto lavato, ed infine si procede alla filtrazione finale sotto vuoto.
- 13. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-12, in cui il prodotto ottenuto nello stadio (b) viene isolato dalla miscela di reazione con le seguenti modalità operative: si recupera il precipitato mediante filtrazione, si lava il precipitato filtrato con alcol o acqua deionizzata si filtra il prodotto lavato, ed infine si procede alla filtrazione finale sotto vuoto.
- 14. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 6-13 per preparare l'acido ialuronico in forma reticolata secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4-5, comprendente inoltre i seguenti stadi: c) l'acido ialuronico isolato dallo stadio (b) viene sciolto in una soluzione acquosa basica oppure in una soluzione acquosa acida e si aggiunge un agente reticolante costituito dal un derivato epossidico a concentrazioni comprese tra 1 e 10% in peso rispetto all'acido ialuronico e a temperatura compresa tra 15 e 35°C. d) si procede alla purificazione del prodotto proveniente dallo stadio (c) mediante dialisi.
- 15. Processo secondo la rivendicazione 14, in cui l'agente reticolante viene aggiunto in quantitativi compresi tra 5 e 7,5% in peso rispetto al peso di acido ialuronico .
- 16 . Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 14 e 15, in cui l'agente reticolante è scelto tra epossicloropropano e glicidil eteri.
- 17. Processo secondo la rivendicazione 16 in cui l'agente reticolante è butandioldiglicidiletere .
- 18. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 14-17, in cui la dialisi condotta nello stadio {c)è condotta in modo dinamico o statico.
- 19. Processo secondo la rivendicazione 18 in cui il dializzato viene preparato utilizzando acqua e sali minerali scelti tra Na2HP04, NaH2P04e cloruro di sodio.
- 20. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 14-19, in cui il prodotto isolato dallo stadio (d) viene sottoposto a classificazione, mediante applicazione di una pressione esterna.
- 21. Composizioni iniettabili contenenti come principio attivo l'acido ialuronico secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-3 in combinazione con adatti eccipienti e diluenti.
- 22 .Composizioni intradermiche riempitive contenenti come principio attivo l'acido ialuronico secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4 o 5, in combinazione con adatti eccipienti e diluenti .
- 23. Composizioni intradermiche secondo la rivendicazione 22, contenenti l'acido ialuronico secondo la rivendicazione 5.
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018138221A1 (en) | 2017-01-26 | 2018-08-02 | Beauty System Pharma S.R.L. | Hyaluronic acid cross-linked with natural or semi-synthetic crosslinking agents |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5632421A (en) * | 1979-08-27 | 1981-04-01 | Green Cross Corp:The | Fractionation of plasma protein |
| EP0239335A2 (en) * | 1986-03-21 | 1987-09-30 | International Pharmaceutical Products, Inc. | Non-inflammatory hyaluronic acid fraction and process for preparing it |
| EP0320164A2 (en) * | 1987-12-10 | 1989-06-14 | Biomatrix, Inc. | Method for preparing hylan and novel hylan product |
| EP0867453A2 (en) * | 1997-03-27 | 1998-09-30 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | A method of purifying sodium hyaluronate |
| US20020143171A1 (en) * | 2001-03-30 | 2002-10-03 | Chisso Corporation | Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof |
-
2008
- 2008-11-13 IT IT002015A patent/ITMI20082015A1/it unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5632421A (en) * | 1979-08-27 | 1981-04-01 | Green Cross Corp:The | Fractionation of plasma protein |
| EP0239335A2 (en) * | 1986-03-21 | 1987-09-30 | International Pharmaceutical Products, Inc. | Non-inflammatory hyaluronic acid fraction and process for preparing it |
| EP0320164A2 (en) * | 1987-12-10 | 1989-06-14 | Biomatrix, Inc. | Method for preparing hylan and novel hylan product |
| EP0867453A2 (en) * | 1997-03-27 | 1998-09-30 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | A method of purifying sodium hyaluronate |
| US20020143171A1 (en) * | 2001-03-30 | 2002-10-03 | Chisso Corporation | Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018138221A1 (en) | 2017-01-26 | 2018-08-02 | Beauty System Pharma S.R.L. | Hyaluronic acid cross-linked with natural or semi-synthetic crosslinking agents |
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