IT202000004450A1

IT202000004450A1 - Composizione topica comprendente cannabidiolo

Info

Publication number: IT202000004450A1
Application number: IT102020000004450A
Authority: IT
Inventors: Barbara Pacchetti; Antonio Costanzo
Original assignee: Curaleaf International Ltd
Priority date: 2020-03-03
Filing date: 2020-03-03
Publication date: 2021-09-03
Also published as: US20230081357A1; EP4114355A1; CA3167110A1; AU2021231502A1; IL295898A; JP2023516283A; WO2021175763A1

Description

DESCRIZIONE

annessa a domanda di brevetto per BREVETTO D?INVENZIONE INDUSTRIALE avente per titolo: ?Composizione topica comprendente cannabidiolo?

CAMPO DELL?INVENZIONE

La presente invenzione riguarda una composizione topica comprendente cannabinoidi. In particolare, la presente invenzione riguarda una composizione topica comprendente cannabidiolo incorporato in vescicole idrofile (niosomi), preferibilmente aventi dimensioni inferiori a 500 nm, ed almeno un eccipiente topicamente accettabile.

STATO DELLA TECNICA

La cannabis sativa L. ? una pianta erbacea annuale appartenente alla famiglia delle Cannabaceae, nota sin dall?antichit? per i suoi usi industriali e terapeutici.

Le inflorescenze o flos della Cannabis contengono la pi? alta concentrazione di cannabinoidi, i principi attivi caratteristici ed esclusivi della pianta di Cannabis, i cui due principali sono, il delta-9-tetraidrocannabinolo (THC) e il cannabidiolo (CBD). Attualmente, pi? di 500 sostanze sono state separate dalle piante di canapa, tra le quali vi sono oltre 120 cannabinoidi, per esempio il tetraidrocannabinolo (THC), il cannabidiolo (CBD), il cannabicromene (CBC), il cannabigerolo (CBG), la cannabidivarina (CBDV), il cannabinolo (CBN) e altri, che sono presenti in quantit? variabili nelle parti aeree della pianta di canapa.

La cannabis e i suoi derivati sono attualmente accreditati per il trattamento di alcune condizioni patologiche, tra cui il dolore, la nausea e il vomito indotti dalla chemioterapia, la spasticit? associata alla sclerosi multipla e alcune epilessie (Abrams, D.I., European Journal of Internal Medicine, March 2018, Volume 49, Pages 7?11). Il ?9-THC ? uno dei principali cannabinoidi della Cannabis responsabile dei suoi effetti ed usi terapeutici, ma il suo potenziale psicoattivo e il creare dipendenza hanno limitato il suo sviluppo terapeutico. Il cannabidiolo (CBD) ? l?altro principale cannabinoide presente nella pianta di cannabis che, a differenza del ?9-THC, ? privo di attivit? psicotropa, privo di effetto cannabimimetico e privo di potenziale dipendenza (Babalonis et al., Drug Alcohol Depend.2017 March 01; 172: 9?13). La chimica e la farmacologia del CBD, nonch? i suoi target molecolari, sono stati recentemente rivisti. Infatti, a lungo trascurato, il CBD sta attualmente guadagnando attenzione per le sue propriet? terapeutiche (Pisanti et al., Cannabidiol: State of the art and new challenges for therapeutic applications, Pharmacology and Therapeutics, Volume 175, July 2017, Pages 133-150) compresi i disturbi della pelle.

Il cannabidiolo ? prevalentemente estratto dalle parti aeree della cannabis (Cannabis sativa L.), ma ? anche prodotto per via sintetica. Il cannabidiolo pu? avere effetti benefici sulla pelle e interagire con il sistema endocannabinoide della pelle, regolando, per esempio, la secrezione di sebo. Numerose ricerche scientifiche hanno confermato le capacit? rigenerative del cannabidiolo, utile anche come antinfiammatorio, antiossidante, cicatrizzante e antibatterico della pelle e degli annessi cutanei. Il cannabidiolo pu? inoltre supportare il rinnovamento cellulare naturale e funge anche da scudo protettivo contro le influenze ambientali dannose (effetto anti-inquinamento).

E' per? anche noto che il cannabidiolo sia poco adatto alla preparazione di formulati topici, in particolare prodotti cosmetici e/o dispositivi medicali e/o preparazioni farmaceutiche per applicazioni sulla cute e sulle mucose, a causa della scarsa solubilit? in acqua, ed alla conseguente instabilit? od incompatibilit? con l'alta percentuale di acqua solitamente presente in una crema, lozione, gel o altra formulazione topica. Il cannabidiolo viene quindi attualmente utilizzato in soluzioni / sospensioni oleose, con una scarsa capacit? di penetrazione attraverso la cute e gli epiteli, che impedisce o riduce l?efficacia della somministrazione per via topica del cannabidiolo.

L?uso di niosomi per migliorare la solubilit? e stabilit? nelle formulazioni topiche e la penetrazione attraverso la cute di cannabidiolo ? stato suggerito da E. Ripamonti et al., ?Evaluation of the efficacy of proprietary niosomes as enhancers of skin permeability of plant extracts: an in vitro study?, H&PC Today, vol. 13(2) March/April 2018, ma i risultati ottenuti con un modello di niosomi descritto in WO 2017168354 A1 non ha dato risultati statisticamente significativi.

Ad oggi, il settore cosmetico ? ancora alla ricerca di una composizione in grado di permettere la formulazione di cannabidiolo per applicazioni topiche ed in grado di veicolare efficacemente il cannabidiolo attraverso la cute.

SOMMARIO DELL?INVENZIONE

La Richiedente ha affrontato il problema della somministrazione topica di cannabidiolo ed ha sorprendentemente trovato una formulazione di cannabidiolo incorporato in niosomi in grado di superare gli inconvenienti noti nell?arte.

In particolare, la Richiedente ha affrontato il problema di realizzare una composizione topica comprendente cannabidiolo sotto forma di emulsione a base acquosa stabile nel tempo e che non desse luogo a fenomeni di separazione e/o precipitazione e/o alterazione dei suoi componenti.

Al contempo, la Richiedente ha affrontato il problema di realizzare una composizione topica comprendente cannabidiolo in grado di solubilizzare una quantit? maggiore di cannabidiolo.

Infine, la Richiedente ha affrontato il problema di realizzare una composizione topica comprendente cannabidiolo che migliorasse la penetrazione di cannabidiolo attraverso la cute.

Dopo una estensiva sperimentazione, la Richiedente ha trovato che una composizione topica comprendente una formulazione di cannabidiolo incorporato in niosomi comprendenti almeno un poliglicerolo lineare o ramificato, esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, (ii) almeno un polisaccaride, preferibilmente un beta-glucano, e, facoltativamente, (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio, preferibilmente caprilil glicole, permette di solubilizzare fino al 5% o pi? in peso di cannabidiolo e di migliorare la penetrazione del cannabidiolo attraverso la cute, rendendo quindi disponibile ed efficacie una quantit? maggiore di cannabidiolo a parit? di quantit? di prodotto somministrato. In particolare, la Richiedente ha trovato che la composizione dell?invenzione presentava una maggiore elasticit?, stimata attraverso misure di estrusione, favorita dalla presenza del beta-glucano che conferisce ai niosomi una migliore plasticit? e deformabilit? nell?attraversare gli spezi intercellulari della cute.

La Richiedente ha inoltre trovato che la composizione topica cos? ottenuta era stabile nel tempo, non provocava alcun fenomeno di irritazione, e presentava un?adeguata resistenza anti-microbica.

La Richiedente ha infine trovato che la composizione topica cos? ottenuta, oltre a fornire un?efficacie protezione da agenti inquinanti presenti nell?atmosfera, come per esempio il particolato, era anche in grado di migliorare la vitalit? cellulare della cute ed il trofismo cellulare e di esplicare una notevole capacit? antiinfiammatoria, in parte collegabile alla migliore penetrazione del componente cannabidiolo, ed in parte collegabile alla presenza del beta-glucano.

Ulteriori valutazioni tuttora in corso fanno presagire una notevole attivit? cutanea antidolorifica, lenitiva e antipruriginosa della composizione dell?invenzione, accompagnata da uno stimolo alla mitogenesi su cellule del bulbo pilifero.

La Richiedente ritiene inoltre che i risultati ottenuti con il cannabidiolo, in termini di stabilit? e capacit? di penetrazione, possano estendersi anche ad altri cannabinoidi, quali, per esempio, i sopracitati cannabigerolo (CBG) e cannabinolo (CBN).

Pertanto, un primo oggetto della presente invenzione riguarda una composizione topica comprendente una composizione a base acquosa comprendente cannabinoidi, in particolare cannabidiolo, in vescicole idrofile (niosomi) aventi dimensioni inferiori a 500 nm, ed almeno un eccipiente topicamente accettabile, caratterizzata dal fatto che dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (i) almeno un poliglicerolo lineare o ramificato, esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, (ii) almeno un polisaccaride, e, facoltativamente, (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio.

Un secondo aspetto della presente invenzione riguarda una composizione a base acquosa, in particolare una dispersione o soluzione acquosa, comprendente cannabinoidi, in particolare cannabidiolo, incorporato in vescicole idrofile (niosomi), caratterizzata dal fatto che dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (i) almeno un poliglicerolo lineare o ramificato esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, (ii) almeno un polisaccaride, e, facoltativamente, (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio.

Un terzo aspetto della presente invenzione riguarda un metodo per la preparazione di una composizione a base acquosa comprendente vescicole idrofile (niosomi) contenenti cannabinoidi, in particolare cannabidiolo, comprendente l'utilizzo di tecniche di agitazione manuale (hand shaking) o ad ultrasuoni, caratterizzata dal fatto che dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (i) almeno un poliglicerolo lineare o ramificato, esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, (ii) almeno un polisaccaride, e, facoltativamente, (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio.

BREVE DESCRIZIONE DELLE FIGURE

La presente invenzione sar? meglio illustrata nella seguente descrizione dettagliata, esposta qui di seguito con riferimento agli uniti disegni, forniti a solo scopo indicativo e, pertanto, non limitativo, nei quali:

la Figura 1 mostra una microfotografia delle vescicole della dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 osservate in microscopia elettronica a trasmissione TEM utilizzando un metodo di colorazione negativa,

la Figura 2 mostra il grafico di diffusione dinamica della luce (Dynamic Light Scattering ? DLS) ottenuto analizzando lo stesso campione di CBD-S5 dell?esempio 1 con uno strumento Brookhaven 90Plus-Particle Size Analyzer,

la Figura 3 mostra il grafico della vitalit? cellulare relativa di un modello di epidermide umana ricostruita trattata con la dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 nei confronti di un controllo positivo (PC) e un controllo negativo (NC) come descritto nell?esempio 5A,

la Figura 4 mostra il grafico della vitalit? cellulare relativa di un modello di epidermide umana ricostruita trattata con la dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1, in presenza o meno di PM2,5, nei confronti di un controllo positivo (PC) e un controllo negativo (NC) come descritto nell?esempio 8, e

la Figura 5 mostra il grafico del rilascio percentuale di IL-1? relativo di un modello di epidermide umana ricostruita trattata con la dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1, in presenza o meno di PM2,5, nei confronti di un controllo positivo (PC) e un controllo negativo (NC) come descritto nell?esempio 8.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL?INVENZIONE

La presente invenzione riguarda in un primo aspetto una composizione topica comprendente una composizione a base acquosa comprendente cannabinoidi, in particolare cannabidiolo, in vescicole idrofile (niosomi) aventi dimensioni inferiori a 500 nm, ed almeno un eccipiente topicamente accettabile, caratterizzata dal fatto che dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (i) almeno un poliglicerolo lineare o ramificato esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, (ii) almeno un polisaccaride, e, facoltativamente, (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio.

L'espressione "topicamente accettabile" utilizzata nella presente descrizione intende definire sostanze riconosciute prive di effetti collaterali negativi (irritazione, tossicit?, e cos? via) se applicate sulla cute, epiteli e/o sulle mucose.

Vantaggiosamente, i niosomi utilizzati nella presente invenzione hanno diametro inferiore a 400 nm, pi? preferibilmente inferiore a 300 nm, e ancora pi? preferibilmente inferiore a 200 nm.

Preferibilmente, i niosomi utilizzati nella presente invenzione hanno diametro superiore a 10 nm, pi? preferibilmente superiore a 20 nm, e ancora pi? preferibilmente superiore a 40 nm.

Vantaggiosamente, i niosomi utilizzati nella presente invenzione hanno diametro compreso tra 50 nm e 180 nm, preferibilmente tra 70 nm e 150 nm.

Il poliglicerolo lineare o ramificato esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi utile nella presente invenzione viene ottenuto per esterificazione di un poliglicerolo lineare o ramificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi.

Il cannabidiolo utile nella presente invenzione pu? essere di origine naturale e/o sintetica, preferibilmente con purezza uguale o superiore al 95%, uguale o superiore al 96%, uguale o superiore al 97%, uguale o superiore al 98%, o uguale o superiore al 99%. Vantaggiosamente, il cannabidiolo utile nella presente invenzione ha una purezza di circa il 100%.

Il cannabidiolo di origine naturale pu? contenere percentuali minoritarie di altri cannabinoidi, come per esempio, cannabicromene, cannabigerolo e cannabinolo, generalmente complessivamente uguali o inferiori al 5%, uguali o inferiori al 4%, uguali o inferiori al 3%, uguali o inferiori al 2%, o uguali o inferiori all?1%.

Esempi preferiti di poligliceroli sono triglicerolo, tetraglicerolo, esaglicerolo, ottaglicerolo, decaglicerolo. I poligliceroli lineari o ramificati utili nella presente invenzione sono disponibili in commercio.

Esempi di prodotti commerciali sono i poligliceroli distribuiti dalla

con il nome commerciale Polyglycerol-3, dalla societ? Spiga Nord S.p.A. con il nome commerciale Vegetable Polyglycerine-3, Vegetable Polyglycerine-4, Vegetable Polyglycerine-6, e Vegetable Polyglycerine-10, e dalla societ? Solvay Chemicals, Inc. con il nome commerciale Polyglycerol-3 e Polyglycerol-4.

Esempi utili di acidi grassi lineari saturi comprendono acidi monocarbossilici aventi da 4 a 32 atomi di carbonio, come acido butirrico, acido valerico (valerianico), acido capronico, acido enantico, acido caprilico, acido pelargonico, acido caprico, acido laurico, acido miristico, acido palmitico, acido margarico, acido stearico, acido arachico, acido beenico, acido lignocerico, acido cerotico, acido montanico, acido melissico, e acido laceroico.

Acidi grassi lineari saturi preferiti comprendono acidi monocarbossilici aventi da 12 a 22 atomi di carbonio, come acido laurico, acido miristico, acido palmitico, acido margarico, acido stearico, acido arachico, e acido beenico.

Esempi utili di acidi grassi lineari monoinsaturi comprendono acidi monocarbossilici aventi da 14 a 24 atomi di carbonio, come per esempio acido miristoleico, acido palmitoleico, acido oleico, acido gadoleico e acido erucico.

Esempi utili di miscele di acidi grassi sono rappresentati dagli oli vegetali ottenibili dalla spremitura od estrazione di semi o frutti, come per esempio, olio di oliva, olio di arachidi, olio di cocco, olio di palma, e olio di colza. Per il ridotto contenuto di acidi polinsaturi, sono preferiti gli oli di oliva e di cocco, ed in particolare l'olio di oliva. Gli esteri di poligliceroli lineari o ramificati con acidi grassi lineari saturi o mono insaturi, o loro miscele, utili nella presente invenzione sono disponibili in commercio. Esempi di prodotti commerciali sono gli esteri di poliglicerolo realizzati e distribuiti dalla societ? Lonza con il nome commerciale Polyaldo, come per esempio Polyaldo? 6-2-S [Polyglyceryl-6 Disterate], Polyaldo?10-1-S [Polyglyceryl-10 Stearate], Polyaldo? 10-1-O [Polyglyceryl-10 Oleate], Polyaldo? 10-2-P [Polyglyceryl-10 Dipalmitate], dalla societ? con il nome commerciale Hydriol, come per esempio HYDRIOL<? >PGO (Polyglycerol-4-oleate), HYDRIOL<? >PGD (Polyglycerol-3-diisostearate) dalla societ? con il nome commerciale Soavirol, come per esempio Soavirol OV6 (olive oil polyglyceryl6 ester), Soavirol OV4 (olive oil polyglyceryl-4 ester), e dalla societ? con il nome commerciale Nikkol Hexaglyn, come per esempio Nikkol Hexaglyn 1-L (polyglyceryl-6 laurate) e Nikkol Hexaglyn PR-15 (polyglyceryl-6 polyricinoleate). Ulteriori fornitori di esteri di poliglicerolo per applicazioni cosmetiche possono essere trovati al sito https://cosmetics.specialchem.com/selectors?q=polyglyceryl.

Il polisaccaride utile nella presente invenzione ? preferibilmente scelto nel gruppo che consiste di polisaccaridi di origine naturale, come per esempio pullulani, glucani, alginati, amilosio, glicogeno, inulina, e cos? via.

Vantaggiosamente, il polisaccaride utile nella presente invenzione ? scelto nel gruppo che consiste di alfa e beta-glucani, pi? preferibilmente beta-glucani.

I beta-glucani sono dei polisaccaridi lineari costituiti da molecole di glucosio unite insieme mediante legami glicosidici ?(1-3). I beta-glucani sono prodotti naturali presenti nei cereali, nei batteri e nei funghi. L?avena e l?orzo sono particolarmente ricchi di beta-glucani, e la loro produzione deriva principalmente dall?estrazione da questi cereali. Beta-glucani ottenuti da funghi sono anche ampiamente disponibili in commercio. I beta-glucani ottenuti da funghi e lieviti contengono ramificazioni unite con legami glicosidici e ?(1-6), mentre i beta-glucani ottenuti da cereali hanno legami glicosidici e ?(1-3) e ?(1-4). I beta-glucani derivati da cereali sono maggiormente solubili in acqua, e sono pertanto preferiti per gli scopi della presente invenzione.

Beta-glucani particolarmente utili per gli scopi della presente invenzione sono i beta-glucani distribuiti dalla societ? con il nome commerciale Ohly-GO<? >Glucan, dalla societ? con il nome commerciale Chitoglucan<?>, dalla societ? con il nome commerciale Lynside<? >Wall Glucan, e dalla societ? con il nome commerciale Beta Glucan. Ulteriori fornitori di beta-glucani per applicazioni cosmetiche possono essere trovati al sito https://cosmetics.specialchem.com/inci/beta-glucan.

Il glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio utile nella presente invenzione ? preferibilmente scelto nel gruppo che consiste di 1,2-butandiolo, 1,2-pentandiolo, 1,2-esandiolo, 1,2-eptandiolo, 1,2-ottandiolo (caprilil glicole), 1,2-decandiolo (capril glicole), 1,2-dodecandiolo (lauril glicol), e 1,2-esadecandiolo.

1,2-esandiolo, 1,2-eptandiolo, 1,2-ottandiolo (caprilil glicole), 1,2-decandiolo (capril glicole) sono particolarmente preferiti. Per gli scopi della presente invenzione viene vantaggiosamente utilizzato l?1,2-ottandiolo (caprilil glicole).

Prodotti commerciali comprendenti glicoli utili per gli scopi della presente invenzione sono distribuiti dalla societ?

con il nome commerciale Lexgard<?>, dalla societ?

Fornitori di poligliceroli e loro esteri, beta-glucani e glicoli utili alla presente invenzione sono inoltre reperibili su Internet, per esempio al sito https://www.foodingredients.com/english/, al sito http://www.buyersguidechem.com/ e al sito https://cosmetics.specialchem.com/.

Nella realizzazione dei niosomi utilizzati per gli scopi della presente invenzione sono preferibilmente utilizzati ulteriori componenti adatti a stabilizzare e preservare la soluzione / dispersione acquosa di niosomi, come per esempio antiossidanti naturali idrosolubili come acido ascorbico e suoi derivati, e polifenoli.

La composizione a base acquosa comprendente niosomi della presente invenzione pu? essere preparata secondo le tecniche note nell'arte, per esempio, con la tecnica di agitazione manuale (hand shaking) o con la tecnica ad ultrasuoni.

La tecnica di agitazione manuale comprende una prima fase di solubilizzazione dei componenti in un solvente organico volatile, come per esempio, etere etilico, cloroformio o metanolo, condotta in un pallone in vetro, una seconda fase di evaporazione, condotta in un evaporatore rotante a temperatura ambiente (20?-25?C) che lascia un sottile strato dei componenti depositato sulle pareti del pallone, ed infine una terza fase di reidratazione con una fase acquosa comprendente gli estratti vegetali a temperatura compresa tra 0? e 60?C sotto lieve agitazione.

La tecnica ad ultrasuoni comprende la sonicazione a temperatura compresa tra 0? e 60?C di una dispersione ottenuta mescolando una fase organica comprendente i tensioattivi e una fase acquosa comprendente gli estratti vegetali.

Questi ed altri metodi di preparazione di composizioni comprendenti niosomi sono descritti in letteratura, per esempio nell'articolo di Madhav et al., "Niosomes: a novel drug delivery system"; International journal of research in pharmacy and chemistry, IJRPC 2011, 1(3), 498-5.11.

La dispersione / soluzione di niosomi della presente invenzione comprende preferibilmente le quantit? di componenti descritte qui di seguito ed espresse come percentuale in peso rispetto al peso totale della dispersione / soluzione di niosomi (% p/p).

Il cannabidiolo ? compreso nella dispersione / soluzione di niosomi fino ad una quantit? del 10% p/p. Preferibilmente, il cannabidiolo ? presente in quantit? compresa tra 1% e 8% p/p, pi? preferibilmente tra 2% e 7% p/p, e ancora pi? preferibilmente tra 3% e 6% p/p. Vantaggiosamente, la quantit? di cannabidiolo ? compresa tra il 4% e il 5% p/p.

La dispersione / soluzione di niosomi comprende una quantit? di esteri di poligliceroli compresa tra il 40% ed il 90% p/p, preferibilmente tra il 50% e l?80% p/p. La quantit? di beta-glucano compresa nella dispersione / soluzione di niosomi ? compresa tra 1% e 5% p/p, preferibilmente tra l?1% ed il 3% p/p.

La quantit? di glicole compresa nella dispersione / soluzione di niosomi ? compresa tra 0,1% e 5% p/p, preferibilmente tra 0,5% ed il 3% p/p.

La dispersione / soluzione di niosomi risultante comprende acqua in quantit? compresa tra il 10% e 40% p/p, preferibilmente tra il 20% e il 30% p/p.

La dispersione / soluzione di niosomi pu? comprendere altri componenti, come per esempio stabilizzanti e conservanti, fino alla quantit? dell?1% p/p.

La composizione topica della presente invenzione pu? essere liquida o semi-solida. In particolare, la composizione topica della presente invenzione consiste in una composizione cosmetica e/o un dispositivo medicale e/o preparazione farmaceutica, per applicazione sulla cute, sugli epiteli e sulle mucose.

La composizione topica della presente invenzione vantaggiosamente comprende composizioni liquide o semi-solide all'interno della quale la composizione a base acquosa di niosomi ? dispersa in quantit? compresa tra 0,5% e 10% in peso, preferibilmente compresa tra 1% e 5% in peso, rispetto al peso totale della composizione topica.

Le composizioni liquide della presente invenzione comprendono soluzioni, emulsioni, microemulsioni, lozioni, gel, schiume, latti, acque micellari, olii, tensioliti o sospensioni con una ampia variazione di viscosit?.

Le composizioni liquide comprendono, per esempio, le soluzioni acquose, le soluzioni idro-alcoliche, le soluzioni oleose, le emulsioni ottenute per dispersione di una fase oleosa in una fase acquosa (olio-in-acqua) o, viceversa, di una fase acquosa in una fase oleosa (acqua-in-olio), e le sospensioni, ottenute per dispersione di una fase dispersa, costituita da particelle solide, in un mezzo disperdente rappresentato generalmente da un liquido acquoso o oleoso di una certa viscosit?.

Le composizioni semi-solide della presente invenzione comprendono creme, geli, balsami, unguenti, paste, creme-gel, stick e cere.

Inoltre, le composizioni per uso topico della presente invenzione possono comprendere diversi additivi o veicoli topicamente accettabili utili alla preparazione di prodotti cosmetici e/o dispositivi medicali e/o preparazioni farmaceutiche noti al tecnico del ramo, come, per esempio, emulsionanti, idratanti, solventi, emollienti, stabilizzanti, viscosizzanti, conservanti, lubrificanti, sequestranti o chelanti, riempitivi, polveri, fragranze, profumi, assorbenti, coloranti e opacizzanti, antiossidanti, vitamine, estratti naturali, polisaccaridi, sostanze schermanti, filtri UV, olii essenziali, sostanze cheratino-attive, e aminoacidi.

Adatti additivi solventi comprendono, per esempio, acqua, alcoli, chetoni (come acetone e metilisobutilchetone), glicoli (come glicole etilenico, glicole propilenico e glicole butilenico), polietilen glicoli (come PEG-40, PEG-50, PEG-60), acetati di alchile (come acetato di amile, acetato di isopropile, acetato di butile), paraffine e isoparaffine, cicloalchili (come cicloesano), glicerina, oli naturali e sintetici, trigliceridi naturali e sintetici, olii essenziali.

Vantaggiosamente, le composizioni topiche della presente invenzione sono composizioni acquose.

Nelle composizioni acquose l'acqua rappresenta il componente principale della composizione raggiungendo anche una quantit? fino al 99% in peso rispetto al peso della composizione totale. Le composizioni acquose contengono una quantit? di acqua preferibilmente compresa tra il 25% ed il 99%, preferibilmente tra il 35% ed il 95%, e pi? preferibilmente tra il 50% ed il 90% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Le composizioni acquose della presente invenzione possono preferibilmente comprendere una quantit? totale di solventi non-acquosi compresa tra circa 0,1% e circa 60%, pi? preferibilmente tra 1% e 40%, e ancor pi? preferibilmente tra 5% e 35% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di adatti additivi emulsionanti sono i tensioattivi non-ionici, cationici, anionici e anfoteri, o una loro combinazione. Esempi di emulsionanti utili nella presente invenzione sono sorbitani, alcoli a lunga catena etossilati, alchil poliglicosidi, saponi, alchil solfati, come, per esempio, cetilstearilsolfato sodico, monoalchil e dialchil fosfati, alchil sulfonati, olio di ricino idrogenato, acil isotionati, esteri del saccarosio, betaine, lecitine, sali di ammonio quaternari, alchiloleati, gliceridi, come, per esempio, caprylocaproyl polyoxylglycerides (caprylocaproyl macrogolglycerides) ed emulsionanti da olio di oliva.

Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di emulsionanti compresa tra circa 0,1% e circa 60%, pi? preferibilmente tra 0,5% e 25%, e ancor pi? preferibilmente tra 0,5% e 10% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Tipici additivi viscosizzanti utili nella presente invenzione sono, per esempio, gomma xantano, idrossipropilcellulosa, idrossietilcellulosa, carbopol, carragenani, polossameri, e gomma di acacia.

Vantaggiosamente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di viscosizzanti compresa tra circa 0,1% e circa 25%, pi? preferibilmente tra 0,5% e 10%, e ancor pi? preferibilmente tra 0,5% e 5% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di additivi con azione idratante utili nella presente invenzione sono, per esempio, urea, allantoina, acido ialuronico e suoi derivati, glicerina, amminoacidi, acetilmonoetanolammide, butossipropanolo, glicole butilico, polietilenglicoli a basso peso molecolare (come PEG-40, PEG-50, PEG-60), aloe, malva, trealosio e sorbitolo.

Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di idratanti compresa tra circa 0,05% e circa 25%, pi? preferibilmente tra 0,5% e 10%, e ancor pi? preferibilmente tra 0,1% e 5% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di adatti additivi emollienti utili nella presente invenzione includono, per esempio, lanolina, olio di mandorle, olio di oliva, oli vegetali, olio di jojoba, olio di argan, olio di ricino idrogenato, estratti naturali lipofilici, cera microcristallina, polidimetilsilossano (dimeticone), polimetilfenilsilossano, polimeri di glicole e silicone, oli minerali, paraffina, ozocherite, ceresina, esteri trigliceridi, monogliceridi acetitati, gliceridi etossilati, esteri alchilici di acidi grassi, acidi grassi, alcoli a lunga catena, steroli, cera d'api, alcoli poliidrici, poliesteri, e ammidi di acidi grassi.

Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di emollienti compresa tra circa 0,1% e circa 25%, pi? preferibilmente tra 0,5% e 10%, e ancor pi? preferibilmente tra 0,5% e 5% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di fragranze utili nella presente invenzione sono, per esempio, oli essenziali naturali o frazioni o concentrati di oli essenziali, quali ad esempio olio di limone, olio di bergamotto, olio di lavanda, limonene, linalolo. Preferibilmente la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di fragranze compresa tra circa 0,001% e circa 0,1%.

Esempi di adatti additivi conservanti utili nella presente invenzione includono, per esempio, alcoli, come etanolo, fenossietanolo e alcol benzilico, metile e propile paraidrossibenzoato, idrossianisolo butilato (BHA), sorbati, derivati dell'urea, e isotiazolinoni, conservanti naturali, come ad esempio acido ascorbico e derivati, tocoferolo e derivati, polifenoli. Altri esempi di coloranti utilizzabili nella composizione topica della presente invenzione possono essere trovati nell'allegato V del regolamento (CE) n.1223/2009 del 30 novembre 2009.

Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di conservanti compresa tra circa 0,01% e circa 2,00%, pi? preferibilmente tra 0,05% e 1,00%, e ancor pi? preferibilmente tra 0,1% e 0,5% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di additivi sequestranti o chelanti utili nella presente invenzione sono EDTA, HEDTA, ossalati di alchile, ossalato di litio o di potassio, pirofosfato di sodio o potassio. Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di additivi sequestranti o chelanti compresa tra circa 0,01% e circa 20%, pi? preferibilmente tra 0,05% e 10%, e ancor pi? preferibilmente tra 0,1% e 5% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di adatti additivi stabilizzanti utili nella presente invenzione sono alcoli a lunga catena (come alcol cetilico, alcol stearilico) e loro miscele, polietilenglicoli ad alto peso molecolare (come PEG-9000 e PEG 14000) e polivinilpirrolidoni (come povidone).

La composizione della presente invenzione preferibilmente comprende una quantit? totale di stabilizzanti compresa tra circa 0,1% e circa 25%, pi? preferibilmente tra 0,5% e 15%, e ancor pi? preferibilmente tra 1% e 10% in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di adatti additivi in polvere utili nella presente invenzione sono siliconi elastomerici come crosspolimeri di dimeticone/vinildimeticone (DC 9506, Dow-Corning), miscele di crosspolimeri di ciclometicone e dimeticone (DC 9040, Dow Corning), crosspolimeri di dimeticone e vinil dimeticone trattati con silice (DC 9701, Dow Corning), miscele di crosspolimeri di ciclometicone e dimeticone/vinildimeticone (SFE 839, GE Bayer Silicones).

La composizione della presente invenzione preferibilmente comprende una quantit? totale di additivi in polvere compresa tra circa 0,1% e circa 5%, pi? preferibilmente tra 0,2% e 1%, in peso rispetto al peso della composizione totale.

Esempi di agenti opacizzanti utili nella presente invenzione sono ossido di zinco o di alluminio, biossido di titanio o di zinco, allumina, mica, sali di acidi grassi con alluminio, e gesso.

Esempi di coloranti preferibilmente impiegati nella presente invenzione sono coloranti idrosolubili facilmente lavabili che non macchiano la pelle e non lasciano residui come, per Esempio, Blu Acido 3 C.I.42051, Blu Acido 9 C.I.42090, Blu Acido 74 C.I.73015, Blu Pigmento 15 C.I.74160, Giallo Acido 3 C.I.47005, Giallo Alimentare 3 C.I.15985, Giallo Acido 23 C.I.19140, Giallo Acido 73 C.I.45350, Rosso Acido 14 C.I.14720, Rosso Acido 18 C.I.16255, Rosso Acido 27 C.I.16185, Rosso Acido 51 C.I.45430, Verde Acido 1 C.I.10020, Verde Acido 25 C.I.61570, e loro miscele. Altri esempi di coloranti utilizzabili nella composizione topica della presente invenzione possono essere trovati nell'allegato IV del regolamento (CE) n.

1223/2009 del 30 novembre 2009.

Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di agenti opacizzanti e coloranti compresa tra circa 0,01% e circa 15%, pi? preferibilmente tra 0,05% e 5% in peso rispetto al peso della composizione totale. Preferibilmente, la composizione della presente invenzione pu? comprendere filtri UV in grado di schermare la pelle dall'azione delle radiazioni ultraviolette. Esempi di filtri UV sono, per esempio, acrilati come 2-etilesil 2-ciano-3,3-difenilacrilato (PARSOL 340) e etil 2-ciano-3,3-difenilacrilato, derivati della canfora come canfora 4-metil benzilidene (PARSOL 5000), e canfora 3-benzilidene, cinnammati come octil metossicinnamato (PARSOL MCX), etossietil metossicinnamato, dietanolammina metossicinnamato (PARSOL Hydro), triazone derivati come etilesil triazone (UVINUL T-150), dietilesil butammido triazone (UVASORB HEB), derivati del dibenzoilmetano come 4-tert-butil-4'-metossidibenzoilmethane (PARSOL 1789), dimetossidibenzoilmetano, derivati del benzotriazolo come 2,2'-metilene-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-i1)-4-(1,1,3,3,-tetrametilbutil)-fenolo (TINOSORB M), derivati della triazina come bis-ethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine (TINOSORB S). Altri esempi di filtri UV utilizzabili nella composizione topica della presente invenzione possono essere trovati nell'allegato VI del regolamento (CE) n. 1223/2009 del 30 novembre 2009.

Preferibilmente, la composizione della presente invenzione comprende una quantit? totale di filtri UV compresa tra circa 0,1% e circa 20%, pi? preferibilmente tra 0,5% e 15% in peso rispetto al peso della composizione totale.

La seguente parte sperimentale illustra almeno un modo di eseguire l'invenzione, senza comunque restringere in alcun modo l'estensione della protezione come definita nelle rivendicazioni allegate alla presente descrizione.

PARTE SPERIMENTALE ESEMPIO 1 ? Preparazione dei niosomi

Una dispersione di niosomi (CBD-S5) comprendenti cannabidiolo (CBD) ? stata preparata con la composizione riportata nella seguente Tabella 1. La composizione risultante aveva l'aspetto di un gel viscoso uniforme di colore giallo pallido. Per ciascun componente ? espressa la percentuale in peso relativa al peso della composizione totale.

TAABELLA 1

Componente CBD-S5

Cannabidiolo 5

Poligliceril-6 oleate 30

Poligliceril-10 caprate 20

Poligliceril-4 caprate 20

Beta-glucano 2

Caprilil glicol 1

Acqua q.b. a 100

ESEMPIO 2

La morfologia delle vescicole della dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 ? stata esaminato in microscopia elettronica a trasmissione TEM (JEM-1200EX, JEOL Co., Tokyo, Giappone) utilizzando un metodo di colorazione negativa.

Una piccola aliquota (5,0 ml) della dispersione di CBD-S5 ? stata centrifugata a 4?C per 30 minuti a una velocit? in grado di sviluppare circa 80000xg. Il pellet ? stato essiccato e successivamente diluito con una soluzione di acetato di uranile all?1%. Una goccia della sospensione ? stata direttamente utilizzata per caricare un retino rivestito in carbonio per microscopia elettronica. La quantit? in eccesso di campione ? stata rimossa per assorbimento utilizzando della semplice carta da filtro. Il retino cos? preparato ? stato incubato a 30?C per 10 minuti in modo da asciugarlo perfettamente e osservato in TEM a 80 kV. In Figura 1 ? mostrata una microfotografia delle vescicole osservate. Le vescicole numerate presentavano il diametro come riportato nella seguente Tabella 2.

TABELLA 2

Vescicola No. Diametro

1 321 ? 16

2 198 ? 10

3 191 ? 9

4 188 ? 9

5 185 ? 8

L?analisi ultrastrutturale eseguita per microscopia elettronica a trasmissione ha dimostrato l?esistenza di strutture vescicolari di forma sferoidale della dimensione media di circa 200 nm.

La Figura 2 mostra il grafico di diffusione dinamica della luce (Dynamic Light Scattering ? DLS) ottenuto analizzando lo stesso campione di CBD-S5 con uno strumento Brookhaven 90Plus-Particle Size Analyzer. La misura ha confermato un diametro medio di 190,4 nm con un indice di poli-disperdibilit? di 0,137.

ESEMPIO 3

L?elasticit? ? una delle caratteristiche pi? importanti dei niosomi. L?elasticit? viene stimata attraverso misure di estrusione. Le vescicole della dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 sono state estruse attraverso un filtro di policarbonato con pori di diametro 100 nm a pressione costante. L?elasticit? viene espressa in termini di indice di deformabilit? (D) calcolato usando la seguente formula:

dove J rappresenta il rapporto di sospensione estrusa in 5 minuti, rv ? la dimensione delle vescicole dopo l?attraversamento del filtro misurata con DLS, e rp rappresenta il diametro dei pori del filtro.

Si dimostra una buona deformabilit? quando l?indice di deformabilit? ? maggiore di 80. La prova ? stata condotta con lo strumento LiposoFast Avestin misurando le particelle con lo strumento Brookhaven 90Plus-Particle Size Analyzer.

I risultati hanno evidenziato un rapporto di sospensione estrusa in 5 minuti (J) dell?87% con dimensioni delle vescicole rv pari a 141 nm. L?indice di deformabilit? (D) ? risultato quindi essere 172,96, confermando l?ottima deformabilit? dei niosomi, caratteristica predittiva di una ottima capacit? di penetrazione attraverso la cute, gli epiteli e gli annessi cutanei. Caratteristiche di elasticit? e deformabilit? sono essenziali per l?interazione con gli strati superficiali della cute e degli annessi cutanei, favorendo l?assorbimento e la penetrazione non solo attraverso interazioni di tipo chimico.

ESEMPIO 4

Le vescicole della dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 e una soluzione di cannabidiolo al 5% in MCT (CBD-5%) sono state valutate per la loro capacit? di diffondere attraverso una membrana artificiale, usando come controllo negativo un tampone fosfato (PBS). Gli oli trigliceridi a catena media (MCT) utilizzati per il confronto sono tra i pi? diffusi sistemi di solubilizzazione di cannabidiolo anche ad uso topico.

Il saggio comprendeva la valutazione della diffusione di cannabidiolo con celle di Franz attraverso una membrana artificiale Strat-M<? >(Sigma-Aldrich) usate per test di diffusione trans-membrana, che simulano la diffusione nell?epidermide umana di diversi tipi di composti e formulazioni.

La membrana artificiale Strat-M<? >? costituita da due strati di polieteresulfone (PES, pi? resistente alla diffusione) posti sulla superficie e uno strato di poliolefina (pi? diffusivo). Questi strati polimerici creano una struttura porosa con un gradiente di diffusione. Inoltre questa struttura porosa ? impregnata con una miscela di lipidi sintetici che gli conferisce propriet? simili a quelle della cute.

La cella di diffusione ? costituita da una camera donatrice e una camera ricevente in mezzo alle quali viene posta la membrana. Nella camera ricevente ? presente tampone fosfato con il 5% di albumina di siero bovino (BSA) e un magnete per un?adeguata miscelazione della soluzione. La superficie disponibile per l?applicazione del campione ? di 0,2 cm<2>.

I campioni CBD-S5 e CBD-5% sono stati applicati sulla membrana (1g/cm<2>) tramite pipetta speciale per liquidi densi P100 Gilson a spostamento positivo. Il controllo negativo ? rappresentato da membrane trattate con solo tampone fosfato (PBS). I campioni ed i controlli sono stati incubati a 32?C, 5% CO2 e l?esposizione ? stata effettuata per 16, 24 e 48 ore. Il campione ? stato testato in triplicato. Ai diversi tempi di esposizione sono stati effettuati dei prelievi di parte del liquido ricevente con una siringa. I campioni cos? recuperati sono stati immediatamente congelati a ?20?C e scongelati successivamente per le analisi cromatografiche quantitative.

Un?aliquota del quantitativo diffuso sotto le membrane ad ogni tempo di valutazione ? stato diluito con una soluzione di metanolo acidificato con lo 0,3% di acido fosforico (v/v). Il sottonatante ? stato analizzato tramite HPLC-DAD con lo strumento WATERS 2695, con le seguenti condizioni analitiche.

Lunghezza d?onda : 212 nm

Iniezione: 10 ?l

Colonna : Eclipse XDB-C183.5?m 3,0x150mm Temperatura colonna : 35?C

Flusso : 0,6 ml/min

Fase mobile A : 0,3% H3PO4 in H2O milliQ Fase mobile B : 0,3% H3PO4 in ACN Gradiente : Come da Tabella 3

TABELLA 3

I risultati sono riassunti nella seguente Tabella 4.

TABELLA 4

18,77 20,87 28,49

I risultati della Tabella 4 hanno dimostrato un significativo incremento della diffusione di cannabidiolo del campione CBD-S5 della presente invenzione rispetto al campione CBD-5%.

I risultati della prova permettono di prevedere una maggiore capacit? di penetrazione e rilascio di principio attivo nella cute.

ESEMPIO 5

Il potere irritante della dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 ? stato valutato attraverso una prova in vitro su epidermide ricostituita ed una prova in vivo su un campione di venti soggetti. La determinazione dell?eventuale potere irritante dei prodotti topici e cosmetici ? una valutazione importante per stabilire le procedure per il corretto e sicuro utilizzo.

A. Prova in vitro

La prova in vitro consiste in una esposizione topica della sostanza in esame su epidermide umana ricostituita (RHE) seguito da un test di vitalit? cellulare.

La vitalit? cellulare ? determinata dalla conversione di MTT (bromuro di 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) in un sale blu di formazano che viene quantitativamente misurato dopo l'estrazione dai tessuti. La conversione avviene per mezzo dell?enzima mitocondriale succinato deidrogenasi, attivo solo nelle cellule vive, che provoca l?apertura dell?anello di tetrazolo dell?MTT con formazione di formazano. La valutazione della vitalit? dei tessuti esposti alla sostanze in esame rispetto al controllo negativo (trattato con tampone fosfato Dulbecco - DPBS) e al controllo positivo (trattato con dodecilsolfato di sodio - SDS) viene utilizzato per predire il potenziale di irritazione cutanea.

Il modello di epidermide umana ricostruita ? formata da normali cheratinociti epidermici di derivazione umana, posti in coltura per ricreare un? epidermide umana multistrato altamente differenziata. Si compone di uno strato basale, uno strato spinoso e granulari e uno strato corneo multiplo contenente strati lipidici lamellari intercellulari disposti in modo analogo a quelle presenti in vivo.

Il campione di pelle ricostruita copre una superficie di 0,63 cm?. La prova ? eseguita in triplicato. Ogni campione ? trattato con 25 ?g di CBD-S5. Parallelamente, si esegue la prova di controllo positivo (PC) applicando al campione di pelle 30 ?L di soluzione SDS 5% e la prova di controllo negativo (NC) applicando al campione di pelle 30 ?L di DPBS. Il trattamento dura 60 minuti, quindi i campioni vengono lavati per rimuovere le sostanze testate ed incubati per 24 ore prima di eseguire il saggio MTT.

il saggio MTT viene eseguita trasferendo i campioni in piastre da 24 pozzetti contenenti una soluzione di MTT (1 mg/ml). Il sale formazano blu prodotto dai mitocondri cellulari viene estratto con 2,0 ml isopropanolo per campione.

La densit? ottica del formazano estratto viene determinata spettrofotometricamente ad una lunghezza d?onda di 570 nm utilizzando lo strumento Microplate Spectrophotometer ?QUANT BIO TEK. La vitalit? cellulare relativa viene calcolata per ciascun tessuto come % della densit? ottica media dei tessuti del controllo negativo. I risultati sono riassunti nella seguente Tabella 5 e nella Figura 3.

TABELLA 5

La dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 ? quindi risultata essere non irritante.

B. Prova in vivo

La prova in vivo consisteva nell'applicare la dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 con l'ausilio di Finn Chambers (cellette con volume di 20 microlitri) sulla schiena e/o sull'avambraccio dei soggetti selezionati. Il potenziale irritante del prodotto ? stato valutato mediante controlli effettuati a tre tempi distinti. Il potenziale irritante cutaneo immediato ? stato valutato applicando il prodotto per 60 minuti (T1). Il potenziale irritante cutaneo ? stato valutato applicando il prodotto per 48 ore (T2) e dopo 24 ore dalla rimozione del prodotto (T3). La valutazione ? stata distinta su quattro livelli di irritazione come descritto nella seguente Tabella 6.

TABELLA 6

/- reazione dubbia (lieve eritema non uniforme)

eritema roseo-rosso uniforme di grado lieve

+ eritema rosso acceso molto evidente, di grado

moderato, limiti netti, possibile edema non uniforme

++ eritema di grado severo con edema diffuso, possibili

vescicole e/o pustole a livello follicolare

La seguente Tabella 7 riassume i risultati ottenuti sui soggetti indagati alla fine della prova.

TABELLA 7

Soggetti irritati al tempo

T1 T2 T3

/- 0 0 0

0 0 0

+ 0 0 0

++ 0 0 0

La prova in vivo ha confermato la non irritabilit? della dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1.

ESEMPIO 6 - Prova di resistenza anti-microbica (challenge test)

La prova consiste nello "sfidare" la preparazione con un determinato inoculo di microrganismi adatti, lasciando la preparazione inoculata ad una temperatura prescritta e ritirando campioni dal contenitore a intervalli specifici di tempo e contando il numero di organismi presenti nei campioni prelevati.

La prova ? stata condotta seguendo le raccomandazioni indicate nella Farmacopea Italiana - Edizione IX ed equivalente European Pharmacopeia 5.1.3. ed utilizzando le colture batteriche dei seguenti ceppi di microorganismi.

? Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

? Escherichia coli ATCC 8739

? Staphylococcus aureus ATCC 6538

? Candida albicans ATCC 10231

? Aspergillus brasiliensis ATCC 16404

La dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 ? stata inoculata con i diversi microorganismi con un inoculo comprendente un numero di batteri compreso tra 10<5 >e 10<6 >e un numero di funghi o lieviti compreso tra 10<4 >e 10<5>. Il prodotto inoculato ? stato conservato a temperatura ambiente (20?-25?C) al riparo dalla luce. Un campione di prodotto ? stato prelevato al tempo t0 (valore basale) e a distanza di 2 (t2), 7 (t7), 14 (t14), e 28 (t28) giorni, per la determinazione del numero di microorganismi presenti.

I risultati sono riassunti nella seguente Tabella 8, dove sono stati riportati i valori riscontrati, espressi su base logaritmica, per ciascun microorganismo ai vari tempi di osservazione. I dati esprimono le unit? formanti colonia (ufc) relative ad 1 gr di prodotto.

TABELLA 8

Sulla base dei risultati ottenuti, la dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 ha superato il challenge test, mostrando attivit? inibenti nei confronti di tutti i microorganismi secondo i criteri di accettabilit? che prevedono una riduzione pari al 99,9% dei batteri e del 90% delle muffe o funghi inoculati entro 7 giorni dall'inoculazione, ed una ulteriore riduzione nel periodo successivo (CTFA M-3 e M4, ISO 11930:2012, e Ph Eu 5.3.1).

ESEMPIO 7 - Prova di stabilit? tramite invecchiamento accelerato

La dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1 ? stata sottoposta ad una serie di prove di stabilit? ed invecchiamento accelerato in diverse condizioni:

(A) Temperatura ambiente (25 ?C) con esposizione alla luce per 90 giorni (B) Temperatura di 40?C per 90 giorni

(C)Temperatura di 4?C per 90 giorni

(D)Shock termico: 15 giorni a 4?C e 15 giorni a 40 ?C (3 cicli)

I parametri di interesse (aspetto, colore, pH, densit?) sono stati controllati con frequenza bisettimanale per un periodo totale di 90 giorni.

I risultati sono stati riassunti nella seguente Tabella 9.

TABELLA 9

Dopo 90 giorni di invecchiamento accelerato in diverse condizioni stressanti i parametri relativi al prodotto non hanno subito variazioni significative, ed in particolare la densit? quale indice di stabilit? della vescicola niosomica, ad eccezione del colore che da giallo diventa rosso. Tale variazione ? dovuta alla nota instabilit? del cannabidiolo al calore e alla luce. Le condizioni di conservazione della preparazione niosomica includono confezionamenti in imballi impermeabili a luce e aria e mantenuti a temperatura ambiente.

ESEMPIO 8 ? Prova di resistenza al particolato e vitalit? cellulare

La prova consiste nel trattare un tessuto di epidermide umana ricostituita (Reconstituted Human Epidermis - RHE), protetta o meno con la dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1, con un campione di particolato con un diametro aerodinamico inferiore a 2,5 ?m (PM2,5) scelto per essere rappresentativo del particolato di inquinamento ambientale. In parallelo, il tessuto di epidermide umana ricostituita ? stato trattato con tampone fosfato Dulbecco (DPBS - controllo negativo NC), con dodecilsolfato di sodio (SDS - controllo positivo PC), e con la sola dispersione di niosomi (CBD-S5) dell?esempio 1.

In particolare, sono stati predisposti in triplicato dei pozzetti contenenti RHE (EpiDerm? EPI-200, MakTek Corporation) nel proprio terreno di coltura (EpiDerm? EPI-100-NMM, MakTek Corporation) trattati con (1) 30 ?l DPBS (NC), (2) 30 ?l di SDS 5% (PC), (3) 20?g PM2,5 dissolti in 30 ?l PBS, (4) 30 ?l di CBD-S5, e (5) 30 ?l CBD-S5 con with 20?g PM2,5.

Dopo incubazione a 37?C per 24 ore in atmosfera controllata al 5% di CO2, la vitalit? cellulare del campione di RHE ? stata valutata tramite il saggio MTT, come descritto nell?esempio 5A, mentre il terreno di coltura ? stato raccolto ed analizzato per valutare il rilascio di IL-1? tramite saggio ELISA, utilizzando un kit EMIL1ALPHA (Invitrogen-Thermo Scientific) con la seguente procedura.

100 ?l di terreno di ogni trattamento sono stati trasferiti in pozzetti rivestiti con IL-1? antiumano e incubati per 2 ore a temperatura ambiente. Al termine dell'incubazione, il terreno ? stato rimosso e i pozzetti sono stati lavati 4 volte con il tampone di lavaggio 1X Wash Buffer. 100?l di anticorpo biotinilato ? stato aggiunto a ciascun pozzetto e incubato per 1 ora a temperatura ambiente. Al termine, i pozzetti sono stati lavati 4 volte con il tampone di lavaggio 1X Wash Buffer, trattati con 100 ?l di soluzione di Streptavidina-HRP per 45 minuti a temperatura ambiente e infine lavati 4 volte con il tampone di lavaggio 1X Wash Buffer. 100 ?l di substrato TMB sono stati aggiunti ad ogni pozzetto e lasciati in incubazione per 10 minuti al buio. Infine, ad ogni pozzetto sono stati aggiunti 100 ?l di soluzione di arresto ed ? stata eseguita la lettura spettrofotometrica alle lunghezze d'onda di 450nm e 550nm utilizzando lo strumento Microplate Spectrophotometer ?QUANT BIO TEK.

Le variazioni dei livelli di IL-1? rilasciati dal tessuto RHE dopo ogni trattamento sono stati espressi come valori % rispetto al RHE non trattato (NC) utilizzato come controllo (100%).

Nella seguente Tabella 10 sono riassunti i risultati delle prove, illustrati anche nelle Figure 4 e 5.

TABELLA 5

La prova in vitro MTT ha dimostrato che il PM2,5 riduceva la vitalit? cellulare al 28,51%, mentre il co-trattamento con CBD-S5 proteggeva l'epidermide umana ricostituita (RHE) contro l'effetto tossico del PM2,5. I dati hanno mostrato che CBD-S5 ? stato in grado di aumentare la vitalit? cellulare da 28,5% a 71,25%. Al contempo i risultati della prova con solo CBD-S5 ha sorprendentemente dimostrato un incremento della vitalit? cellulare rispetto al controllo, portandola al 110,86%, indicando pertanto una sorprendente attivit? rigenerante. Si ritiene che tale incremento possa essere dovuto ad un?azione rivitalizzante operata dalla presenza del polisaccaride beta-glucano.

Il saggio ELISA ha dimostrato che (i) il PM2,5 ad una concentrazione di 20?g/pozzetto ha indotto un aumento del rilascio di IL-1?, e che (ii) il trattamento con CBD-S5 ? stato in grado di ridurre sia il rilascio di IL-1? nei tessuti non trattati sia in quelli trattati con 20?g/pozzetto di PM2,5. Anche in questo caso si ? osservata una sorprendente riduzione del rilascio di IL-1? nel campione trattato con solo CBD-S5, indicando quindi una notevole attivit? antiinfiammatoria.

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Composizione topica comprendente una composizione a base acquosa comprendente cannabinoidi, in particolare cannabidiolo, in vescicole idrofile (niosomi) aventi dimensioni inferiori a 500 nm, ed almeno un eccipiente topicamente accettabile, caratterizzata dal fatto che dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (i) almeno un poliglicerolo lineare o ramificato, esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, e (ii) almeno un polisaccaride.
2. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detti cannabinoidi, in particolare cannabidiolo, sono di origine naturale o sintetica.
3. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detto polisaccaride ? scelto nel gruppo che consiste di polisaccaridi di origine naturale, preferibilmente pullulano, glucano, alginato, amilosio, glicogeno, e inulina
4. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detto polisaccaride ? scelto nel gruppo che consiste di alfa-glucano e beta-glucano, preferibilmente beta-glucano.
5. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detto poliglicerolo lineare o ramificato ? scelto nel gruppo che consiste di triglicerolo, tetraglicerolo, esaglicerolo, ottaglicerolo, decaglicerolo.
6. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detti acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi sono scelti nel gruppo che consiste di acidi monocarbossilici aventi da 4 a 32 atomi di carbonio.
7. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detti acidi grassi lineari saturi sono scelti nel gruppo che consiste di acido butirrico, acido valerico (valerianico), acido capronico, acido enantico, acido caprilico, acido pelargonico, acido caprico, acido laurico, acido miristico, acido palmitico, acido margarico, acido stearico, acido arachico, acido beenico, acido lignocerico, acido cerotico, acido montanico, acido melissico, e acido laceroico.
8. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove detti acidi grassi lineari monoinsaturi sono scelti nel gruppo che consiste di acido miristoleico, acido palmitoleico, acido oleico, acido gadoleico e acido erucico.
9. Composizione topica secondo la rivendicazione 1, dove dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio.
10. Composizione topica secondo la rivendicazione 9, dove detto glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio ? scelto nel gruppo che consiste di 1,2-butandiolo, 1,2-pentandiolo, 1,2-esandiolo, 1,2-eptandiolo, 1,2-ottandiolo (caprilil glicole), 1,2-decandiolo (capril glicole), 1,2-dodecandiolo (lauril glicol), e 1,2-esadecandiolo.
11. Composizione a base acquosa, comprendente cannabidiolo incorporato in vescicole idrofile (niosomi), caratterizzata dal fatto che dette vescicole idrofile (niosomi) comprendono (i) almeno un poliglicerolo lineare o ramificato esterificato con acidi grassi lineari saturi o monoinsaturi, (ii) almeno un polisaccaride, e, facoltativamente, (iii) almeno un glicole avente da 4 a 16 atomi di carbonio.
12. Composizione secondo la rivendicazione 11, dove detta composizione ? una dispersione o soluzione acquosa.
13. Un metodo per la preparazione di una composizione a base acquosa come definita nella rivendicazione 11 o 12, comprendente l'utilizzo di tecniche di agitazione manuale (hand shaking) o ad ultrasuoni.