IT201800003514A1 - Metodo di rilevazione del tumore prostatico. - Google Patents
Metodo di rilevazione del tumore prostatico. Download PDFInfo
- Publication number
- IT201800003514A1 IT201800003514A1 IT102018000003514A IT201800003514A IT201800003514A1 IT 201800003514 A1 IT201800003514 A1 IT 201800003514A1 IT 102018000003514 A IT102018000003514 A IT 102018000003514A IT 201800003514 A IT201800003514 A IT 201800003514A IT 201800003514 A1 IT201800003514 A1 IT 201800003514A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- mir
- hsa
- process according
- mirna
- expression level
- Prior art date
Links
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 title claims description 41
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 title claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 39
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 34
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 33
- 108091070521 Homo sapiens let-7a-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 23
- 108091070522 Homo sapiens let-7a-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 23
- 108091070513 Homo sapiens let-7a-3 stem-loop Proteins 0.000 claims description 23
- 108091068855 Homo sapiens miR-103a-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 22
- 108091068838 Homo sapiens miR-103a-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 22
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 13
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 claims description 11
- 108091070482 Caenorhabditis elegans miR-39 stem-loop Proteins 0.000 claims description 10
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims description 4
- 108091070514 Homo sapiens let-7b stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091070512 Homo sapiens let-7d stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091069022 Homo sapiens miR-130a stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091069045 Homo sapiens miR-15b stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091070489 Homo sapiens miR-17 stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091070496 Homo sapiens miR-20a stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091070373 Homo sapiens miR-24-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091070374 Homo sapiens miR-24-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091070372 Homo sapiens miR-26a-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 108091065428 Homo sapiens miR-26a-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 2
- 108091023403 miR-1202 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091054042 miR-1207 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- -1 miR-3656 Proteins 0.000 claims description 2
- 108091063862 miR-3679 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091069755 miR-4530 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091076085 miR-4687 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091070033 miR-4739 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091025357 miR-5739 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091023843 miR-575 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091076992 miR-6085 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 108091047242 miR-663a stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 15
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 description 12
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 description 12
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 9
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 9
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 5
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 108091070510 Homo sapiens let-7f-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070526 Homo sapiens let-7f-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 238000002790 cross-validation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091044902 Homo sapiens miR-1202 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044803 Homo sapiens miR-1207 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091056608 Homo sapiens miR-3679 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091055349 Homo sapiens miR-4530 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091023081 Homo sapiens miR-4687 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091093164 Homo sapiens miR-4739 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089754 Homo sapiens miR-5739 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063720 Homo sapiens miR-575 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091039968 Homo sapiens miR-6085 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061569 Homo sapiens miR-663a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091030146 MiRBase Proteins 0.000 description 1
- 208000025844 Prostatic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000005773 cancer-related death Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091090568 miR-39 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000012775 microarray technology Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002966 oligonucleotide array Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000001855 preneoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 208000017497 prostate disease Diseases 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Titolo: “Metodo di rilevazione del tumore prostatico”
Descrizione
Forma oggetto della presente invenzione un procedimento in vitro per la diagnosi del tumore alla prostata in un soggetto, comprendente le fasi di:
a) determinare almeno il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p e il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p in un campione biologico del soggetto;
b) combinare almeno il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p con il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p determinati nella fase precedente, per ottenere un valore combinato;
c) confrontare il valore combinato ottenuto nella fase precedente con un valore soglia predeterminato, in cui un valore combinato superiore al valore soglia è indicativo di tumore alla prostata nel soggetto.
La presente invenzione riguarda inoltre un kit di parti che fornisce l'analisi dell'espressione di combinazioni di marcatori molecolari per diagnosticare il tumore alla prostata.
Stato dell’arte
Nella popolazione maschile occidentale, il tumore alla prostata è un serio problema di salute pubblica. In molti paesi sviluppati non è solo la neoplasia più comunemente diagnosticata, ma è anche la seconda causa di decessi correlati al cancro nei maschi. Poiché l'incidenza del cancro alla prostata aumenta con l'età, il numero di casi di nuova diagnosi continua ad aumentare con l'aumentare dell'aspettativa di vita della popolazione generale. Negli Stati Uniti, circa 218.000 uomini, e in Europa circa 382.000 uomini vengono diagnosticati con cancro alla prostata ogni anno. Non ci sono opzioni terapeutiche curative per il cancro alla prostata metastatico. L'ablazione androgenica è il trattamento di scelta negli uomini con malattia avanzata. Inizialmente, dal 70 all'80% dei pazienti con malattia avanzata mostra una risposta alla terapia, ma con il tempo la maggior parte dei tumori diventa indipendente dagli androgeni. Di conseguenza la maggior parte di questi pazienti svilupperà una malattia progressiva.
Poiché non esistono opzioni terapeutiche efficaci per il carcinoma della prostata avanzato, la diagnosi precoce di questo tumore è cruciale e può aumentare il tasso di successo curativo. Sebbene l'uso routinario del test dell'antigene specifico della prostata (P.S.A.) nel siero abbia indubbiamente aumentato il rilevamento del cancro alla prostata, uno dei suoi principali inconvenienti è da ricercarsi nella mancanza di specificità. Il test del P.S.A., laddove per valori superiori a 16 ng/ml è considerato un valido indicatore di tumore prostatico, è però poco sensibile perché non è in grado di identificare i tumori alla prostata che hanno bassi livelli di P.S.A., laddove circa il 15% degli uomini con P.S.A. sotto il valore soglia di 4ng/ml sono falsi negativi.
Il P.S.A. del siero è un eccellente marker per le malattie della prostata e anche i rialzi modesti riflettono quasi sempre una malattia o una perturbazione della ghiandola prostatica tra cui l’iperplasia prostatica benigna (BPH) e la prostatite. L’aumento della frequenza di esecuzione del test del P.S.A. negli ultimi 20 anni ha determinato una diminuzione della specificità del P.S.A. per il cancro a causa della selezione di un gran numero di uomini che hanno un P.S.A. elevato per meccanismi non tumorali. Ciò si traduce in un alto tasso di falsi positivi, e quindi nell’esecuzione di molte biopsie negative.
Mitchell et al., PNAS, 105: 10513-10518 (2008) descrive metodi che utilizzano miRNA nel siero come biomarker per confrontare i pazienti affetti da tumori alla prostata con controlli sani, senza tuttavia descrivere un gruppo di miRNA capaci di identificare in maniera specifica il tumore alla prostata.
WO2016127998 descrive un metodo in vitro per monitorare il rischio di tumore alla prostata in un soggetto, dove detto metodo comprende misurare nelle urine di un soggetto il livello di espressione di almeno due miRNA selezionati in una lunga lista che comprende hsa-let-7a-5p. WO2016127998 non tiene in considerazione i livelli di P.S.A.
Test molecolari in grado di identificare accuratamente e in fase precoce soggetti con carcinoma prostatico clinicamente localizzato e che otterrebbero una sopravvivenza prolungata e una qualità della vita migliorate con un intervento radicale precoce sono urgentemente necessari.
Descrizione dell’invenzione
È uno scopo della presente invenzione fornire un procedimento per stabilire o diagnosticare in vitro un tumore alla prostata, aiutando così nello sviluppo di una strategia clinica efficace per trattare il tumore alla prostata.
La portata della presente invenzione è definita dalle rivendicazioni che seguono.
Si descrivono qui un metodo ed un kit per l’esecuzione del test che consente di rilevare il tumore alla prostata con una maggiore sensibilità / specificità rispetto alle metodiche oggi disponibili.
Definizioni:
Le espressioni "microRNA", "miRNA" e "miR" sono usati come sinonimi per riferirsi a RNA non codificanti di circa 8-25 nucleotidi (nt) derivati da geni endogeni. I microRNA vengono processati da precursori a forcina più lunghi (circa 75 nt) definiti pre-miR. I microRNA si riuniscono in complessi definiti miRNP e riconoscono i loro target mediante complementarità antisenso. Se i microRNA corrispondono al 100% al loro target, cioè la complementarità è completa, l'mRNA target viene scisso e il miR agisce come un siRNA. Se la corrispondenza è incompleta, cioè la complementarità è parziale, allora la traduzione dell'mRNA target viene bloccata. In generale, la nomenclatura dei miR fa riferimento alla nomenclatura di miRBase (versione 21).
Il termine "espressione", come qui usato, si riferisce alla trascrizione e/o all'accumulo di molecole di RNA all'interno di una cellula o in un fluido biologico privo di cellule.
Il termine "RT-qPCR" si riferisce alla reazione di PCR quantitativa, che è un metodo altamente sensibile per quantificare le quantità di specifici DNA e RNA in un campione di prova. Poiché la quantificazione dell'RNA mediante la tecnica di PCR richiede che l'RNA venga retrotrascritto, "RT-qPCR" indica che la PCR quantitativa viene utilizzata per quantificare specifici RNA.
Nel presente contesto i termini "livello di espressione di un miR", "espressione di un miR" e "livello di un miR" sono utilizzati come misura della "quantità di un miR specifico" rilevata nel campione. La "quantità di un miR specifico" può essere espressa in misure assolute, relative o normalizzate e si riferisce a valori ottenuti sia con metodi quantitativi che qualitativi. Una misura particolarmente preferita, usata per calcolare la "quantità di un miR specifico", è il valore del ciclo soglia (Ct) ottenuto mediante RT-qPCR.
Le espressioni "soggetto sano", "donatore sano" e “controllo sano" sono usate come sinonimi per riferirsi a individui apparentemente sani senza un'indicazione manifesta del cancro alla prostata, per differenziarli dai soggetti con cancro alla prostata.
Si descrive l’uso di una combinazione di marcatori che sono almeno due miRNA, hsa-miR-103a-3p e hsa-let-7a-5p e, opzionalmente, P.S.A. (antigene prostatico specifico), per la diagnosi in vitro di tumore alla prostata.
Il metodo secondo la presente invenzione è eseguito su un fluido biologico, preferibilmente su un campione di sangue.
Il metodo secondo la presente invenzione comprende:
a) determinare almeno il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p e il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p in un campione biologico del soggetto;
b) combinare almeno il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p con il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p determinati nella fase precedente, per ottenere un valore combinato;
c) confrontare il valore combinato ottenuto nella fase precedente con un valore soglia predeterminato, in cui un valore combinato superiore al valore soglia è indicativo di tumore alla prostata nel soggetto.
In una forma di realizzazione preferita, il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p e il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p vengono entrambi normalizzati mediante l’impiego di un controllo interno costituito da una quantità nota predeterminata di un miRNA esogeno che, in una forma di realizzazione, è cel-miR-39-3p.
Detto hsa-miR-103a-3p, Accession number MIMAT0000101, ha la SEQ ID no. 1 che è AGCAGCAUUGUACAGGGCUAUGA.
Detto hsa-let-7a-5p, Accession number MIMAT0000062, ha la SEQ ID no. 2 che è UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU.
Detto cel-miR-39-3p, Accession number MIMAT0000010, ha la SEQ ID no. 3 che è UCACCGGGUGUAAAUCAGCUUG. In una forma di realizzazione, detto procedimento comprende altresì la determinazione dei livelli di P.S.A. nel campione biologico del soggetto.
In una forma di realizzazione, i livelli di espressione di detti miRNA sono determinati mediante RT-qPCR e calcolati a partire dai valori Ct.
Preferibilmente, detti valori Ct sono normalizzati mediante la misura di detto controllo interno a ottenere Ctn, laddove la normalizzazione corregge eventuale variabilità introdotta nelle fasi di estrazione dell’RNA, di retrotrascrizione e di qPCR, sapendo che detto controllo interno deve al termine delle misurazioni risultare uguale per tutti i campioni.
In una forma di realizzazione, Ctn_103a = -Ct103a + Ct39 + K; Ctn_let7a = -Ctlet7a + Ct39 + K; Ctn_39 = K, laddove K è uguale per tutti i campioni e Ct103a Ctlet7 e Ct39 sono specifici per ciascun campione. In una forma di realizzazione, detto valore combinato è ottenuto, per ogni campione, secondo la formula che segue: (Ctn_103a * coefficiente103a) (Ctn_let7a * coefficientelet7a) (log2P.S.A. * coefficienteP.S.A.).
In una forma di realizzazione, detto coefficiente103a è 0,20, detto coeffiecientelet7a è 0,13, detto coefficienteP.S.A. è 0,04.
In una forma di realizzazione, detto coefficiente103a è 0,1994, detto coeffiecientelet7a è 0,1294, detto coefficienteP.S.A. è 0,0385.
In una forma di realizzazione, la determinazione di detti livelli di P.S.A. e la determinazione dei livelli di espressione di detti miRNA è effettuata in un campione di sangue. Preferibilmente, dopo l’isolamento del plasma detto normalizzatore, che è preferibilmente cel-miR-39-3p, viene aggiunto in un quantitativo noto in detto plasma e si procede con l’estrazione di RNA.
In una forma di realizzazione, detto soggetto ha un’età compresa tra i 50 e gli 80 anni.
In una forma di realizzazione, detto valore soglia è compreso nell’intervallo 0 - 4, preferibilmente nell’intervallo 1,5 - 2,5, ancor più preferibilmente detto valore soglia è pari a 2,02. In una forma di realizzazione preferita, il procedimento secondo la presente invenzione comprende:
- la determinazione dei livelli di P.S.A. in un campione di sangue ottenuto da un soggetto e, laddove detti livelli siano inferiori a 16 ng/ml, l’isolamento del plasma da detto campione di sangue e l’aggiunta in detto plasma di un quantitativo noto di un miRNA che è un normalizzatore, preferibilmente detto miRNA è cel-miR-39-3p;
- la determinazione, mediante RT-qPCR, in detto campione di plasma dei Ct di hsa-miR-103a-3p, hsalet-7a-5p e di detto normalizzatore;
- la normalizzazione di detti Ct rilevati per hsamiR-103a-3p e hsa-let-7a-5p miRNA mediante inversione del segno di detti Ct, somma del Ct rilevato per il normalizzatore e l’applicazione di un fattore di correzione K a dare Ctn, dove detto fattore di correzione K è compreso nell’intervallo 5,7 – 6,7, preferibilmente nell’intervallo 6 – 6,5, ancor più preferibilmente K = 6,2024;
- la combinazione di detto livello di P.S.A. con detti Ctn hsa-miR-103a-3p e Ctn hsa-let-7a-5p a dare un valore combinato secondo la formula: (Ctn hsa-miR-103a-3p * 0,1994) (Ctn hsa-let-7a-5p * 0,1294) (log2P.S.A. * 0,0385) = X;
- il confronto di detto valore combinato X con un valore soglia predeterminato, in cui un valore combinato superiore al valore soglia è indicativo di tumore alla prostata nel soggetto, dove detto valore soglia è compreso nell’intervallo 0 - 4, preferibilmente nell’intervallo 1,5 - 2,5, ancor più preferibilmente pari a 2,02.
Il procedimento secondo la presente invenzione si è rivelato sorprendentemente capace di effettuare diagnosi precoce di tumore alla prostata in campioni nei quali il valore di P.S.A. misurato è inferiore a 4 ng/ml, ovvero in campioni che sarebbero stati letti come falsi negativi dal test del P.S.A.
Si descrive altresì un kit di parti per stabilire in vitro la presenza di tumore alla prostata, dove detto kit comprende:
- mezzi di analisi del livello di espressione per determinare i livelli di espressione almeno dei miRNA hsa-miR-103a-3p e hsa-let-7a-5p;
- istruzioni per l'uso.
In una forma di realizzazione, detto kit comprende altresì un miRNA esogeno che è preferibilmente celmiR-39-3p e mezzi di analisi del livello di espressione dello stesso.
In una forma di realizzazione, detti mezzi di analisi comprendono mezzi di analisi quantitativi del livello di espressione dei miRNA per RT-qPCR.
In una forma di realizzazione, detto kit comprende altresì mezzi di analisi del valore del P.S.A., preferibilmente con la metodica ELISA.
Esempi
Raccolta campioni
Campioni di plasma di pazienti affetti da tumore della prostata (PCa) o iperplasia prostatica benigna (BPH) e di donatori sani (HD) sono stati raccolti prima del campionamento bioptico. Ciascun soggetto ha firmato consenso informato per la raccolta del campione.
Sono stati selezionati donatori sani nella stessa fascia di età dei pazienti, esplorazione digitorettale negativa, P.S.A. < 4 ng/ml, che non fossero sotto trattamenti antiinfiammatori, antidepressivi o antibiotici e non avessero avuto patologie prostatiche pregresse.
Isolamento e conservazione del plasma
I campioni di sangue sono stati raccolti con una procedura standard per prevenire l’emolisi, in provette BD Vacutainer contenenti EDTA e processati per la separazione del plasma entro un’ora dal prelievo. Il plasma è stato conservato in crioprovette da 4,5 ml a -80°C.
Valutazione dello score di emolisi
Per la valutazione dell’emolisi, 10 μl di plasma sono stati centrifugati a temperatura ambiente, a 1000 g per 5 minuti ed è stata misurata l’assorbanza a 385 e 414 nm. Il valore di emolisi è stato calcolato secondo Appierto et al. (Bioanalysis 2014 6:1215-26). Solo i campioni con il valore di emolisi inferiore a 0,057 e/o rapporto tra le assorbanze 414nm/385nm inferiore a 2 sono stati sottoposti al successivo processamento.
Isolamento dell’RNA circolante
L’estrazione dell’RNA totale circolante è stata eseguita con il kit miRNeasy serum/plasma (Qiagen) seguendo il protocollo Exiqon che prevede l’aggiunta di un RNA carrier (RNA del batteriofago MS2, Roche Diagnostics) per promuovere la precipitazione dell’RNA e la purificazione su membrane dell’RNA isolato. Inoltre, è stato aggiunto un RNA di controllo esogeno (C. elegans miR-39-3p miR mimic). L’RNA è stato eluito in 30 μl di acqua priva di nucleasi.
Profilo di espressione del microRNA (miRNA)
Il profilo di espressione dei miRNA in 120 campioni di plasma (60 PCa e 60 BPH+HD) è stato valutato con la tecnologia microarray utilizzando array ad oligonucleotidi con sequenze di 2006 miRNA umani.
Marcatura, ibridazione, lavaggi e scansione del vetrino sono stati eseguiti seguendo i protocolli Agilent Technologies.
I dati sono stati processati considerando l’intensità di fluorescenza osservata come la somma di 2 variabili casuali, una distribuita normalmente – il rumore di fondo – e l’altra esponenzialmente – il segnale - e sottraendo dal segnale il rumore di fondo. E’ stato aggiunto il valore 20 di default a tutti i segnali, per non avere segnali netti negativi e il segnale finale è stato trasformato in logaritmo in base 2 (log2). La normalizzazione inter-array è stata eseguita con un metodo che rende sovrapponibili le distribuzioni di segnale di array diversi. Le intensità normalizzate delle sonde replicate sono state mediate ed il segnale finale è stato modellizzato usando un modello lineare. E’ stato applicato un t-test modificato che tiene conto della varianza del segnale di tutti i miRNA analizzati. Per selezionare i miRNA differenzialmente espressi, è stato imposto che il log2Ratio (differenza tra la media delle intensità logaritmiche di PCa e di controlli) in valore assoluto fosse superiore a 0,2 e che il p-value grezzo del t-test modificato fosse inferiore a 0,05.
RT-qPCR
L’espressione dei miRNA potenzialmente interessanti è stata valutata seguendo il protocollo Exiqon, a partire da 4 μl di RNA totale e utilizzando il celmiR-39-3p come normalizzatore, l’UniSp6 come controllo interno per la reazione di retrotrascrizione e l’UniSp3 come calibratore tra le piastre e come controllo positivo di real time. Ciascun miRNA, così come i controlli negativi, è stato analizzato in triplicato. Per l’analisi dei dati è stato utilizzato il metodo del delta Ct (DCt), con
Ct miR = media dei Ct dei tre replicati e
DCt = Ct miR d’interesse – Ct cel-miR-39.
Il Ct finale (Ctn) si è ottenuto invertendo il segno di DCt e sommando una costante K in modo che il Ct finale del cel-miR-39 risultasse uguale a K in tutti i campioni. E’ stato scelto il valore di 6,2024.
Costruzione del classificatore dai dati di microarray
Poiché la distribuzione del P.S.A. mostra una netta discesa in corrispondenza di 16 ng/ml, i campioni con P.S.A. > 16 ng/ml sono stati direttamente classificati come PCa. Dei 15 campioni con P.S.A. > 16 ng/ml, 12 sono stati classificati correttamente mentre 3 erano BPH.
Il confronto tra le classi PCa e (BPH+HD) con P.S.A. < 16 ng/ml sui rimanenti 105 campioni ha identificato 11 miRNA differenzialmente espressi che sono: hsa-miR-103a-3p, hsa-let-7a-5p, hsa-let-7d-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7f-5p, hsa-let-7b-5p, hsa-miR-24-3p, hsa-miR-26a-5p, hsa-miR-20a-5p, hsamiR-130a-3p and hsa-miR-15b-5p, tutti sovraespressi nei tumori.
Detto hsa-miR-130a-3p, Accession number MIMAT0000425, ha la SEQ ID no. 23 che è CAGUGCAAUGUUAAAAGGGCAU.
Detto hsa-let-7d-5p, Accession number MIMAT0000065, ha la SEQ ID no. 4 che è AGAGGUAGUAGGUUGCAUAGUU. Detto hsa-miR-17-5p, Accession number MIMAT0000070, ha la SEQ ID no. 5 che è CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG. Detto hsa-let-7f-5p, Accessione number MIMAT0000067, ha la SEQ ID no. 6 che è UGAGGUAGUAGAUUGUAUAGUU.
Detto hsa-let-7b-5p, Accessione number MIMAT0000063, ha la SEQ ID no. 7 che è UGAGGUAGUAGGUUGUGUGGUU.
Detto hsa-miR-24-3p, Accessione number MIMAT0000080, ha la SEQ ID no. 8 che è UGGCUCAGUUCAGCAGGAACAG.
Detto hsa-miR-26a-5p, Accessione number MIMAT0000082, ha la SEQ ID no. 9 che è UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU.
Detto hsa-miR-20a-5p, Accessione number MIMAT0000075, ha la SEQ ID no. 10 che è UAAAGUGCUUAUAGUGCAGGUAG.
Detto hsa-miR-15b-5p, Accessione number MIMAT0000417, ha la SEQ ID no. 11 che è UAGCAGCACAUCAUGGUUUACA.
Detto hsa-miR-1207-5p, Accessione number MIMAT0005871, ha la SEQ ID no. 12 che è UGGCAGGGAGGCUGGGAGGGG.
Detto hsa-miR-575, Accessione number MIMAT0003240, ha la SEQ ID no. 13 che è GAGCCAGUUGGACAGGAGC.
Detto hsa-miR-4530, Accessione number MIMAT0019069, ha la SEQ ID no. 14 che è CCCAGCAGGACGGGAGCG.
Detto hsa-miR-4739, Accessione number MIMAT0019868, ha la SEQ ID no. 15 che è AAGGGAGGAGGAGCGGAGGGGCCCU.
Detto hsa-miR-1202, Accessione number MIMAT0005865, ha la SEQ ID no. 16 che è GUGCCAGCUGCAGUGGGGGAG. Detto hsa-miR-3679-5p, Accessione number MIMAT0018104, ha la SEQ ID no. 17 che è UGAGGAUAUGGCAGGGAAGGGGA.
Detto hsa-miR-6085, Accessione number MIMAT0023710, ha la SEQ ID no. 18 che è AAGGGGCUGGGGGAGCACA.
Detto hsa-miR-3656, Accessione number MIMAT0018076, ha la SEQ ID no. 19 che è GGCGGGUGCGGGGGUGG.
Detto hsa-miR-663a, Accessione number MIMAT0003326, ha la SEQ ID no. 20 che è AGGCGGGGCGCCGCGGGACCGC. Detto hsa-miR-4687-3p, Accessione number MIMAT0019775, ha la SEQ ID no. 21 che è UGGCUGUUGGAGGGGGCAGGC.
Detto hsa-miR-5739, Accessione number MIMAT0023116, ha la SEQ ID no. 22 che è GCGGAGAGAGAAUGGGGAGC.
Partendo dai suddetti miRNA e aggiungendo il log2P.S.A. e il log2Età, come variabili di partenza, è stato applicato un modello di regressione logistica penalizzato (con penalizzazione LASSO), per creare un classificatore capace di discriminare tra PCa e BPH/HD, seguendo la metodologia proposta da Zhang JX (Zhang JX et al., Lancet Oncol. 2013 14(13):1295-306). Per identificare il migliore parametro di tuning è stata applicata una crossvalidazione (convalida incrociata) e la procedura è stata ripetuta 10 volte. Le variabili più ricorrenti con coefficiente diverso da zero sono risultate essere: hsa-miR-103a-3p, hsa-let-7a-5p e log2P.S.A., tutte associate ad un coefficiente positivo. Per ogni paziente è stato calcolato uno score moltiplicando, per ogni variabile selezionata, il coefficiente ottenuto dal modello di regressione per l’intensità logaritmica dei miR o per log2P.S.A. per il P.S.A.,) e sommando tali prodotti. I campioni sono poi stati ordinati in base allo score così ottenuto ed è stato stabilito un cut-off oltre il quale classificare i campioni come tumorali. È stato selezionato un valore di soglia compreso nell’intervallo (0 - 4), preferibilmente nell’intervallo (1,5 - 2,5), e preferibilmente pari a 2,02, per ottimizzare l’accuratezza del classificatore.
Il classificatore finale è stato quindi costruito secondo due step:
- campioni con P.S.A. > = 16, tumori;
- campioni con P.S.A. < 16: tumori, se score superiore al cut-off altrimenti non tumori.
Si sono ottenuti i seguenti valori di sensibilità, specificità, accuratezza, AUC, valori predittivi positivo e negativo: 87%, 35%, 61%, 68%, 57% e 72%. Il P.S.A. da solo, con cut-off a 4 ng/ml, dà invece i seguenti valori di sensibilità, specificità, accuratezza, AUC, valori predittivi positivo e negativo: 85%, 28%, 57%, 62%, 54%, 65%.
Tutti i tumori ad alto rischio sono stati classificati correttamente. Solo tre tumori a rischio intermedio e cinque a basso rischio sono stati classificati erroneamente dal classificatore finale, mentre il PSA non ne ha individuati nove. Inoltre, la specificità è aumentata notevolmente rispetto al PSA da solo, portando ad un risparmio del 12.5% di biopsie non necessarie. Tra i campioni con P.S.A. compreso tra 4 e 16 ng/ml, intervallo in cui il P.S.A. non è in grado di discriminare tra PCa e non-PCa, il classificatore ha individuato correttamente l’84% dei tumori e il 77% delle BPH. È stato inoltre fatto un confronto tra BPH e PCa utilizzando solo i campioni con P.S.A. nell’intervallo 4 – 16 e ottenendo i seguenti miRNA differenzialmente espressi: miR-1207-5p, miR-575, miR-4530, miR-4739, miR-1202, miR-3679-5p, miR-6085, miR-3656, miR-663a, miR-4687-3p, miR-5739.
Applicazione del classificatore ad una coorte indipendente analizzata con RT-qPCR
169 campioni di plasma raccolti consecutivamente e prospetticamente, di cui 68 PCa, 93 BPH e 8 lesioni preneoplastiche, oltre a 73 campioni HD sono stati utilizzati per la fase di validazione. 14 dei 242 campioni hanno mostrato un valore di P.S.A. > 16 ng/ml e sono stati direttamente classificati come tumori: 10 erano veri positivi (tumore ad alto o altissimo rischio) e 4 falsi positivi.
I rimanenti 228 campioni sono stati classificati applicando la metodica secondo la presente invenzione, ovvero moltiplicando i valori di Ctn per hsa-miR-103a-3p e hsa-let-7a-5p per gli stessi coefficienti e usando lo stesso intervallo per il valore soglia dello score generati nella fase di discovery.
È stato poi applicato il classificatore a due step secondo la presente invenzione, ottenendo i seguenti valori di sensibilità, specificità, accuratezza, AUC, valori predittivi positivo e negativo: 82%, 57%, 64%, 76%, 43%, 89%.
In particolare, il classificatore secondo la presente invenzione ha identificato correttamente tutti i tumori classificati erroneamente dal P.S.A.
eccetto uno (8 su 9), inclusi 2 tumori ad alto rischio e 4 a rischio intermedio. Il classificatore ha individuato correttamente l’89% dei tumori non identificati dal P.S.A. in pazienti con P.S.A. inferiore a 4 ng/ml. Tra i campioni con P.S.A. compreso tra 4 e 16 ng/ml, intervallo in cui il P.S.A. non è in grado di discriminare tra PCa e non-PCa, il classificatore ha individuato correttamente il 78% dei tumori, il 32% delle BPH e il 50% delle lesioni precancerose.
Claims (19)
- RIVENDICAZIONI 1. Procedimento in vitro per la diagnosi del tumore alla prostata in un soggetto, comprendente le fasi di: a) determinare almeno il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p, SEQ ID no. 1, e il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p, SEQ ID no. 2, in un campione biologico del soggetto; b) combinare almeno il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p con il livello di espressione del miRNA hsa-let-7a-5p determinati nella fase precedente, per ottenere un valore combinato; c) confrontare il valore combinato ottenuto nella fase precedente con un valore soglia predeterminato, in cui un valore combinato superiore al valore soglia è indicativo di tumore alla prostata nel soggetto.
- 2. Procedimento secondo la rivendicazione 1, in cui il livello di espressione del miRNA hsa-miR-103a-3p e il livello di espressione del miRNA hsalet-7a-5p vengono entrambi normalizzati mediante l’impiego di un controllo interno costituito da una quantità nota predeterminata di un miRNA esogeno.
- 3. Procedimento secondo la rivendicazione 2, in cui il miRNA esogeno è cel-miR-39-3p, SEQ ID no. 3.
- 4. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 3, in cui i livelli di espressione di hsa-miR-103a-3p, hsa-let-7a-5p e del miRNA esogeno sono determinati mediante RT-qPCR e calcolati a partire dai valori Ct.
- 5. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 4, comprendente altresì la determinazione del valore del P.S.A. nel campione biologico del soggetto.
- 6. Procedimento secondo la rivendicazione 5, laddove detto procedimento è effettuato su campioni nei quali detto valore di P.S.A. < 16 ng/ml.
- 7. Procedimento secondo una delle rivendicazioni 5 o 6, in cui detto valore combinato è ottenuto mediante la seguente formula: (Ctn hsa-miR-103a-3p * coefficiente103a) (Ctn hsa-let-7a-5p * coefficientelet7a) (log2P.S.A. * coefficienteP.S.A.).
- 8. Procedimento secondo una delle rivendicazioni da 4 a 7, in cui per ogni campione detta normalizzazione dei Ct di hsa-miR-103a-3p e hsalet-7a-5p avviene secondo le formule: Ctn_103a = -Ct103a + Ct39 + K; Ctn_let7a = -Ctlet7a + Ct39 + K.
- 9. Procedimento secondo la rivendicazione 8, in cui detto K è compreso nell’intervallo 5,7 – 6,7, preferibilmente nell’intervallo 6 – 6,5, ancor più preferibilmente K = 6,2024.
- 10. Procedimento secondo la rivendicazione 7, in cui detto coefficiente103a è 0,20, detto coeffiecientelet7a è 0,13, detto coefficienteP.S.A. è 0,04, preferibilmente detto coefficiente103a è 0,1994, detto coefficientelet7a è 0,1294, detto coefficienteP.S.A. è 0,0385.
- 11. Procedimento secondo una delle rivendicazioni da 1 a 10, dove detto valore soglia è compreso nell’intervallo 0 - 4, preferibilmente nell’intervallo 1,5 - 2,5, ancor più preferibilmente è 2,02.
- 12. Procedimento secondo una delle rivendicazioni da 1 a 11, dove in detto passaggio a) viene determinato altresì il valore di uno o più dei miRNA compresi nel gruppo: hsa-let-7d-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7f-5p, hsa-let-7b-5p, hsa-miR-24-3p, hsa-miR-26a-5p, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-130a-3p and hsa-miR-15b-5p, miR-1207-5p, miR-575, miR-4530, miR-4739, miR-1202, miR-3679-5p, miR-6085, miR-3656, miR-663a, miR-4687-3p, miR-5739.
- 13. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 12, in cui il campione biologico è sangue.
- 14. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 13, in cui il soggetto è di età compresa tra i 50 e gli 80 anni.
- 15. Kit per la determinazione in vitro di tumore alla prostata, comprendente: - mezzi di analisi del livello di espressione almeno dei miRNA hsa-miR-103a-3p e hsa-let-7a-5p; - istruzioni per l'uso.
- 16. Kit secondo la rivendicazione 15, comprendente altresì un miRNA esogeno che è cel-miR-39-3p e mezzi di analisi del livello di espressione dello stesso.
- 17. Kit secondo la rivendicazione 15 o 16, dove detti mezzi di analisi comprendono mezzi di analisi quantitativi del livello di espressione dei miRNA per RT-qPCR.
- 18. Kit secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 15 a 17, comprendente altresì mezzi di analisi del valore del P.S.A.
- 19. Kit secondo la rivendicazione 18, in cui detti mezzi di analisi comprendono mezzi di analisi del valore del P.S.A. con la metodica ELISA.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102018000003514A IT201800003514A1 (it) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Metodo di rilevazione del tumore prostatico. |
| PCT/IB2019/052023 WO2019175786A1 (en) | 2018-03-13 | 2019-03-13 | An in vitro diagnostic method for prostate cancer and related kit |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102018000003514A IT201800003514A1 (it) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Metodo di rilevazione del tumore prostatico. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| IT201800003514A1 true IT201800003514A1 (it) | 2019-09-13 |
Family
ID=62530357
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT102018000003514A IT201800003514A1 (it) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Metodo di rilevazione del tumore prostatico. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| IT (1) | IT201800003514A1 (it) |
| WO (1) | WO2019175786A1 (it) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111118165B (zh) * | 2020-03-04 | 2023-04-07 | 朱伟 | 一种与前列腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用 |
| KR102497196B1 (ko) | 2020-09-08 | 2023-02-07 | (주)유로테크 | 전립선암 진단 점수 계산 방법 및 그 용도 |
| EP4212632A1 (en) * | 2020-09-08 | 2023-07-19 | Urotech. Co., Ltd. | Method for calculating prostate cancer diagnostic score, and uses thereof |
-
2018
- 2018-03-13 IT IT102018000003514A patent/IT201800003514A1/it unknown
-
2019
- 2019-03-13 WO PCT/IB2019/052023 patent/WO2019175786A1/en active Application Filing
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| # NORGEN BIOTEK CORP: "microRNA (cel-miR-39) Spike-In Kit Product Insert", 1 January 2015 (2015-01-01), XP055520551, Retrieved from the Internet <URL:https://norgenbiotek.com/sites/default/files/resources/cel-miR-39-Spike-In-Kit-Insert-PI59000-1.pdf> [retrieved on 20181031] * |
| A GORDANPOUR ET AL: "MicroRNAs in prostate cancer: from biomarkers to molecularly-based therapeutics", PROSTATE CANCER AND PROSTATIC DISEASE, vol. 15, no. 4, 14 February 2012 (2012-02-14), BASINGSTOKE, GB, pages 314 - 319, XP055520060, ISSN: 1365-7852, DOI: 10.1038/pcan.2012.3 * |
| ALI A DABAJA ET AL: "Possible germ cell-Sertoli cell interactions are critical for establishing appropriate expression levels for the Sertoli cell-specific MicroRNA, miR-202-5p, in human testis", BASIC AND CLINICAL ANDROLOGY, BIOMED CENTRAL LTD, LONDON, UK, vol. 25, no. 1, 3 March 2015 (2015-03-03), pages 2, XP021213555, ISSN: 2051-4190, DOI: 10.1186/S12610-015-0018-Z * |
| BRITTANY L. MIHELICH ET AL: "Elevated Serum MicroRNA Levels Associate with Absence of High-Grade Prostate Cancer in a Retrospective Cohort", PLOS ONE, vol. 10, no. 4, 14 April 2015 (2015-04-14), pages e0124245, XP055363266, DOI: 10.1371/journal.pone.0124245 * |
| YUSUKE GOTO ET AL: "Functional significance of aberrantly expressed microRNAs in prostate cancer : miRNA in prostate cancer", INTERNATIONAL JOURNAL OF UROLOGY., vol. 22, no. 3, 20 January 2015 (2015-01-20), JP, pages 242 - 252, XP055520043, ISSN: 0919-8172, DOI: 10.1111/iju.12700 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019175786A1 (en) | 2019-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Silakit et al. | Circulating mi R‐192 in liver fluke‐associated cholangiocarcinoma patients: a prospective prognostic indicator | |
| Wu et al. | Circulating microRNA-21 is a potential diagnostic biomarker in gastric cancer | |
| Wang et al. | Serum microRNA-29a is a promising novel marker for early detection of colorectal liver metastasis | |
| Liu et al. | A five-microRNA signature identified from genome-wide serum microRNA expression profiling serves as a fingerprint for gastric cancer diagnosis | |
| Fan et al. | Branched rolling circle amplification method for measuring serum circulating micro RNA levels for early breast cancer detection | |
| CN102776185B (zh) | 由血浆microRNA组合成的肝癌诊断标志物及一种诊断肝癌的新方法 | |
| KR101987358B1 (ko) | 신규한 간암 진단용 바이오 마커 및 이의 용도 | |
| Tang et al. | Different normalization strategies might cause inconsistent variation in circulating microRNAs in patients with hepatocellular carcinoma | |
| Li et al. | microRNA-146 up-regulation predicts the prognosis of non-small cell lung cancer by miRNA in situ hybridization | |
| Basati et al. | Elevated level of microRNA-21 in the serum of patients with colorectal cancer | |
| JP5753905B2 (ja) | 血漿ｍｉｃｒｏＲＮＡの組合せからなる肝細胞がん診断マーカーを含む、肝細胞がんの診断キット | |
| JP2013509169A (ja) | 前立腺癌の診断および病期分類のための非侵襲的マーカーとなる血中ｍｉＲＮＡ | |
| IT201800003514A1 (it) | Metodo di rilevazione del tumore prostatico. | |
| CN105518154B (zh) | 脑癌检测 | |
| Sauter et al. | Body fluid micro (mi) RNAs as biomarkers for human cancer | |
| TWI571514B (zh) | 評估罹患大腸直腸癌風險的方法 | |
| CN112941185B (zh) | miR-29a作为标志物在制备恶性间皮瘤检测试剂盒中的应用 | |
| O'Brien et al. | Circulating plasma microRNAs in colorectal neoplasia: A pilot study in assessing response to therapy | |
| CN109825597B (zh) | 食管癌前病变miRNAs标志物组、应用与诊断系统 | |
| US20150018230A1 (en) | PLASMA miRNA SIGNATURE FOR THE ACCURATE DIAGNOSIS OF PANCREATIC DUCTAL ADENOCARCINOMA | |
| Zhao et al. | Serum microRNA-155 as a potential biomarker for breast cancer screening | |
| CN108728439A (zh) | 小rna组成的指纹图谱及其在膀胱癌诊断中的应用 | |
| US20150141342A1 (en) | BLOOD BORNE miRNA SIGNATURE FOR THE ACCURATE DIAGNOSIS OF PANCREATIC DUCTAL ADENOCARCINOMA | |
| ITUB20150652A1 (it) | Nuovo metodo diagnostico e kit | |
| TW201418472A (zh) | 由血漿ｍｉｃｒｏＲＮＡ組合成之肝癌診斷標誌物及診斷肝癌之新方法 |