HUT76895A

HUT76895A - Use of hyaluronic acid for preparing pharmaceutical compns. for treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration

Info

Publication number: HUT76895A
Application number: HU9701518A
Authority: HU
Inventors: Samuel Simon Asculai; Eva Anne Turley
Original assignee: Hyal Pharma Corp
Priority date: 1994-08-24
Filing date: 1995-08-02
Publication date: 1997-12-29
Also published as: AP9500757A0; AU701014B2; ES2172589T3; DE69525349D1; ZA957056B; WO1996005845A2; JPH10506884A; DE69525349T2; CA2130762C; AU3107095A; CA2130762A1; KR970705402A; CN1131539A; IL114915A0; WO1996005845A3; EP0777487A1; EP0777487B1; AP619A; ATE212850T1; JP4111537B2

Description

A nemzet-közi bejelentés száma: PCT/CA95/00467

A nemzetközi közzététel száma: WO 96/05845

12212 KB

A találmány olyan betegségek és állapotok kezelésére vonatkozik, amelyekre az jellemző, hogy a betegség vagy az állapot által károsított területre, például az emberi testben az oxigén- és/vagy glükózhiányos szövetbe leukocyták (azaz fehérvérsejtek) szűrődnek be. A találmány szerinti megoldás felhasználható például a stroke kezelésére. A találmány szerinti megoldásnak egy másik felhasználási területe az infarktusok (szívizominfarktus) kezelése. A találmány szerinti megoldás felhasználható továbbá bármely olyan betegség vagy állapot kezelésére, amelyre az jellemző, hogy a test károsodott szövetének területére leukocyták (azaz fehérvérsejtek) szűrődnek be.

Amennyiben a szövetek (és az egyedi sejtek) oxigén- és/vagy glükózhiányosak, a sejtek és ebből következően a sejtekből felépülő szövetek károsodnak. Ennek egyik eredményeként gyulladásos válaszreakció lép fel a sérülés területén (helyén). A gyulladásos válaszreakciók közé tartozik egyebek mellett a gyulladási sejteknek (például makrofágoknak, neutrofileknek és más fehérvérsejteknek) a sérülés helyéhez történő migrációja.

Például egy bármilyen okból fellépő stroke vagy infarktus (például szívizominfarktus, szívroham) során a véredényekben károsodik és csökken a vérellátás. Az ennek következtében fellépő oxigén- és glükózhiány végső esetben az oxigén- és glükózhiányos területek károsodását eredményezi.

Ez a károsodás a gyulladási sejtek (makrofágok, neutrofilek és más fehérvérsejtek) ezt követő migrációjával a károsodott területen egyebek mellett gyulladásos válaszreakciót vált ki. A károsodás (trauma) miatt az adott helyen a prosztaglan• · dinszintézis is fokozódik.

A koraszülések esetén fellépő cerebralis oxigén- és glükózhiány ugyanilyen következményeket von maga után: az újszülött agyának oxigénhiánya gyulladásos válaszreakciót vált ki [azaz a gyulladási sejtek (például makrofágok, neutrofilek és egyéb fehérvérsejtek) migrációját vonja maga után].

A jelen találmány olyan gyógyszerkészítményekre [például injektálható (steril) gyógyszerkészítményekre], kezelési eljárásokra, valamint ismert vegyületek új felhasználásaira vonatkozik, amelyek csökkentik a szövetnek és (ha a készítményeket alkalmazzuk) a sejteknek például egy stroke, infarktus (szívizominfarktus) és/vagy bármely olyan betegség vagy állapot által okozott károsodását, amelyet egy gyulladásos válaszreakció, például makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a sérült területre történő beszűrődése vagy migrációja okoz.

A jelen találmány továbbá olyan gyógyszerkészítményekre, kezelési eljárásokra, valamint ismert vegyületek új felhasználásaira vonatkozik, amelyek a sejtek (makrofágok, neutrofilek és más fehérvérsejtek) aktivitását mérséklik (downregulate), és így módosítják (megváltoztatják) a test gyulladásellenes válasz reakció j át.

Az alábbi részletes kitanítás és a találmány kivonata alapján az ezen a területen jártas szakember képes felimerni a találmányban rejlő további lehetőségeket is.

Az egyik találmány szerinti megoldás értelmében, ha szövetek és így sejtek károsodnak például glükóz- és/vagy oxigénhi4 • · ány miatt, a gyulladási sejtek (például makrofágok, neutrofilek és más fehérvérsejtek) aktivitását úgy módosítjuk (például úgy csökkentjük a gyulladási sejteknek a sérült területre (helyhez) irányuló migrációját), hogy a terület sérülésével egyidejűleg (például egy stroke, infarktus vagy más olyan betegség vagy állapot fellépésével egyidejűleg, amelyet makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a betegség és/vagy állapot által károsított szövet területére történő beszűrődése jellemez) vagy röviddel ezt követően hatásos mennyiségű hialuronsavat és/vagy egy hilauronátsót (például nátrium-hialuronátot) alkalmazunk. Anélkül, hogy mereven ragaszkodnánk a találmány szerinti megoldás általunk feltételezett hatásmechanizmusához, véleményünk szerint a hialuronsavnak és/vagy valamely sójának (például nátriumsójának) a beadása — például a receptorokhoz történő hozzákapcsolódás révén — blokkolja a gyulladási sejtek (például makrofágok, neutrofilek és más fehérvérsejtek) hialuronsav-receptorait (HA receptorait), és így blokkolja a gyulladási sejteknek a károsodott szövet területéhez történő migrációját .

A hialuronsav előnyösen 750 000 daltonnái kisebb, például 10 000 - 300 000 dalton molekulatömegű nátrium-hialuronát formájában van.

A makrofágoknak, neutrofileknek és egyéb fehérvérsejteknek a károsodott területhez történő migrációját vagy beszűrődését okozó gyulladásos válaszreakció említett gátlásának (blokkolásának) kiegészítése érdekében a HA receptorokat (például kötések útján) blokkoló hialuronsav-formával nemszteroid gyulladásellenes hatóanyagokat (NSAID) is alkalmazhatunk. Ily módon a prosztaglandinszintézist is gátolhatjuk.

A hialuronsavat és/vagy sóit (előnyösen a 750 000 daltonnái kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronátot) a beadási módtól függően különböző mennyiségekben, például 1-10 mg/testtömeg-kg és 15-20 mg/testtömeg-kg közötti vagy még nagyobb, így 25 mg/testtömeg-kg mennyiségekben alkalmazhatjuk; így egy 70 kg testtömegű személy esetén a hatóanyag mennyisége elérheti vagy akár meg is haladhatja a 3000 mg-ot. Felnőtt emberek (és kifejlett patkányok) jól tolerálják a hialuronsav különböző formáinak nagy feleslegeit is, de újszülött patkányokban a felesleg károsodást okozhat, illetve okoz.

Ha egy 70 kg testtömegű személynek 200 mg-nál nagyobb mennyiségű hialuronsavval együtt egy NSAID-t, például [W-metilglükaminban (nmg) oldva] indometacint vagy más NSAID-t is beadunk 1-2 mg/testtömeg-kg mennyiségben, nem lép fel semmilyen jelentősebb toxikus mellékhatás, például gastrointestinalis rendellenesség, neurológiai abnormalitás, depresszió stb., még azokban az esetekben sem, ahol az indometacint szükséges esetben nagyobb mennyiségekben alkalmazzuk. Amennyiben a hialuronsav mennyiségét az említett érték alá csökkentjük, az NSIAD vegyületek alkalmazásakor szokásos mellékhatások ismét megjelenhetnek. Ugyanez más terápiás hatóanyagokkal kapcsolatban is elmondható, azaz ha egy 70 kg testtömegű személynek 200 mg-nál nagyobb mennyiségű hialuronsavat (például nátrium-hialuronátot) adunk be, más hatóanyagok esetén sem lép fel lényeges toxikus mellékhatás.

Szubkután, például hátba történő beadás esetén — az elvégzett tesztek alapján — a hialuronsav előnyös formájának, azaz a nátrium-hialuronátnak valamennyi előnyös dózismennyisége körülbelül 10-25 mg/testtömeg-kg közötti értékű, például egy 70 kg testtömegű személy esetén körülbelül 1800 mg. Intravénás beadásnál a hialuronsav-formának az előbb említettnél kisebb dózismennyiségeit használhatjuk. Ember esetén az előnyös mennyiségek 10-20 mg/testtömeg-kg közötti értékűek.

Az újszülött patkányokban végzett vizsgálatok alapján megállapítottuk, hogy alkalmas dózismennyiségekkel felnőtt ember vérében a választott hialuronsav-forma (például a nátrium-hialuronát) körülbelül 3 mg/ml értékű koncentrációja érhető el. Felnőtt ember esetén például a nátrium-hialuronátot körülbelül mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti mennyiségben alkalmazzuk. Az újszülött patkányokkal végzett legutóbbi vizsgálatok során, 12 órával az újszülöttek szubkután kezelését követően 10 mg/kg hialuronsav-koncentrációt értünk el az állatok vérében. A körülményeknek megfelelően az említett mennyiségeket bármely irányban módosíthatjuk.

A beadást előnyösen a betegség vagy állapot (például a stroke vagy a szívizominfarktus) fellépésével egyidejűleg vagy röviddel ezt követően (24 órán belül) kezdjük el, és addig folytatjuk, amíg arra szükség van. Előnyösen fenntartjuk a már elért vérkoncentrációt. Például kezdetben intravénás beadással kialakítunk egy 15 mg/testtömeg-kg értékű koncentrációt a vérben. Ezt követően ezt a koncentrációt például szubkután beadással (így szubkután injekcióval) tartjuk fenn.

Ί • · ·

Az NSAID vegyületek hatásos mennyiségeit a hialuronsavforma beadásával egyidejűleg végezzük (az indometacin esetében a hatóanyagot például 1-2 mg/testtömeg-kg mennyiségben alkalmazzuk) .

A szívizominfarktus vagy a stroke kezelésére szolgáló szerként beadhatunk például egy vérrögoldó hatóanyagot is. A vérrögoldó hatóanyagok közé tartoznak — egyebek mellett — például a következők: TPA, sztreptokináz (proteolitikus termék), urokináz stb. További alkalmas hatóanyagok például az NSAID acetil-szalicilsav (aszpirin) , a béta-blokkolók, a heparin, a plazminogénaktivátorok stb.

A hialuronsav-formával (például a 750 000 daltonnái kisebb, így 300 000 dalton molekulatömegű nátrium-hialuronáttal) az NSAID vegyületeken kívül más hatóanyagokat is alkalmazhatunk (ahol stroke zajlik vagy történt), adott esetben az NSAID vegyületek mellett. Az ilyen egyéb hatóanyagokat a szokásos alkalmazási mennyiségeikban használjuk. Ilyen hatóanyagok lehetnek például a fentiekben említettek, továbbá az olyan thrombocytaromboló (anti-platelet) hatóanyagok, amelyek megváltoztatják a thrombocyták funkcióját (megakadályozzák az aggregációt) és megelőzik a thrombus (vérrög) kialakulását.

A hialuronsavnak és/vagy sóinak (például nátriumsójának), valamint a hialuronsav homológjainak, analógjainak, származékainak, komplexeinek, észtereinek, fragmentumainak és alegységeinek, előnyösen a hialuronsavnak és sóinak a találmány szerinti megoldásban történő felhasználásra alkalmas egyik formájának egy, a Sterivet Laboratories Limited által árusított frakció felel meg. A frakció 15 ml-es fiolában lévő, 20 mg/ml koncentrációjú nátrium-hialuronát (300 mg/fiola - sorozatszám: 2F3) . Ez a frakció egy körülbelül 225 000 dalton molekulatömegű nátrium-hialuronát 2 %-os oldata. A frakció kívánt mennyiségben háromszor desztillált, az injekciós készítményekre vonatkozó amerikai egyesült államokbeli gyógyszerkönyvi (U.S.P.) előírásoknak megfelelően steril vizet tartalmaz. A hialuronsavnak és/vagy sóinak az fiolái 1. típusú bór-szilikát-üvegből készített fiolák, amelyek a fiola tartalmával nem reagáló butil-dugóval vannak lezárva.

A hialuronsavnak és/vagy sóinak (például nátriumsójának) a frakciója a következő jellemzőkkel írható le:

természetes forrásból nyert, tisztított, lényegében pirogénmentes hialuronsav-frakció, amely legalább egy, az alábbi csoportból kiválasztott jellemzővel rendelkezik:

(i) molekulatömege 150 000 és 225 000 közötti értékű;

(ii) , az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 1,25 tömeg*nál kevesebb szulfátéit mukopoliszacharidokat tartalmaz;

(iii) az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 0,6 tömeg*nál kevesebb proteint tartalmaz;

(iv) az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 150 ppm-nél kevesebb vasat tartalmaz;

(v) az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 15 ppm-nél kevesebb ólmot tartalmaz;

(vi) 0,0025 tömeg%-nál kevesebb glükózamint tartalmaz;

(vii) 0,025 tömeg%-nál kevesebb glükuronsavat tartalmaz;

(vili)	0,025 tömeg%-nál kevesebb N-acetií-glükózamint tartalmaz;
(ix)	0,0025 tömeg%-nál kevesebb aminosavat tartalmaz;
(X)	257 nm-nél körülbelül 0,275-nél kisebb UV extinkciós
(xi)	koefficienssel rendelkezik; 280 nm-nél körülbelül 0,25-nél kisebb UV extinkciós
(xii)	koefficienssel rendelkezik; és 7,3 és 7,9 közötti pH-értékkel rendelkezik.

Előnyösen a hialuronsav vízzel van összekeverve, és a hialuronsav-frakció molekula-tömege 150 000 és 225 000 közötti értékű. Még előnyösebben a hialuronsav-frakció legalább egy, az alábbi csoportból kiválasztott jellemzővel rendelkezik:

(i)	az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 1 tömeg%-nál kevesebb szulfátéit mukopoliszacharidokat tartalmaz;
(ii)	az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 0,4 tömeg%- nál kevesebb proteint tartalmaz;
(iii)	az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 100 ppm-nél
(iv)	kevesebb vasat tartalmaz; az össztömegre vonatkoztatva körülbelül 10 ppm-nél kevesebb ólmot tartalmaz;
(V)	0,00166 tömeg%-nál kevesebb glükózamint tartalmaz;
(vi)	0,0166 tömeg%-nál kevesebb glükuronsavat tartalmaz;
(vii)	0,0166 tömeg%-nál kevesebb N-acetil-glükózamint tartalmaz;
íviii)	0,00166 tömeg%-nál kevesebb aminosavat tartalmaz;
(ix)	257 nm-nél körülbelül 0,23-nál kisebb UV extinkciós

koefficienssel rendelkezik;

- 10 (χ) 280 nm-nél körülbelül 0,19-nál kisebb UV extinkciós koefficienssel rendelkezik; és (xi) 7,5 és 7,7 közötti pH-értékkel rendelkezik.

A hialuronsavnak és/vagy sóinak (például nátriumsójának), valamint a hialuronsav homológjainak, analógjainak, származékainak, komplexeinek, észtereinek, fragmentumainak és alegységeinek, előnyösen a hialuronsavnak és sóinak más forgalmazóktól beszerezhető egyéb formáit is választhatjuk, például amelyeket a technika állásának vonatkozó részében ismertetnek. Javasolhatjuk például a LifeCore^. Biomedical, Inc. által előállított és forgalmazott nátrium-hialuronátot, amely a következő jellemzőkkel rendelkezik:

Jellemző kinézet szag viszkozitási átlag molekulatömeg

UV/látható spektrum (190-820 nm) optikai sűrűség (OD) (260 nm)

Részletes leírás fehér-krémszínű szemcsék nincs észrevehető szag < 750 000 dalton az ismert spektrumnak megfelelő < 0,25 OD egység hialuronidáz érzékenység pozitív válaszreakció

IR spektrum pH (10 mg/g oldat) víztartalom proteintartalom (1 mg nátrium-hialuronátban) acetáttartalom (1 mg nátrium-hialuronátban) maximális nehézfém-tartalom

As Cd Cr Co Cu

2,0 5, 0 5, 0 10, 0 10,0 mikróbás terhelés endotoxin-tartalom (1 mg nátrium-hialuronátban) biológiai biztonsági tesztelés

A beadást szubkután módon, ján hajthatjuk végre.

az ismert spektrumnak megfelelő

6,2-7,8 legfeljebb 8 % < 0,3 gg < 0,3 gg (ppm)

Fe Pb Hg Ni

25, 0 10, 0 10,0 5,0 nincs megfigyelhető mennyiségben < 0,07 EU eleget tesz a nyúlszem toxicitási vizsgálatnak intravénásán vagy injekció út

Az alábbiakban példákon keresztül ismertetjük részleteseb ben a találmány szerinti megoldást.

- 12 1. kísérlet

Hétnapos Fischer-patkány újszülöttek hátába 30 perccel a műtét előtt 0,6 mg nátrium-hialuronát/60 μΙ/állat mennyiségben 300 000 dalton molekulatömegű nátrium-hialuronátot adtunk be szubkután injekcióval. A műtét után hét napon keresztül napi egy alkalommal injekcióztuk az állatokat, majd a műtétet követő

14. napon fájdalommenetesen leöltük a kísérleti alanyokat. A jobb oldali nyaki verőeret egy órán keresztül elkötöttük (stroke-ot indukáltunk). Az állatokat ezt követően 8 % oxigént tartalmazó , inkubátorba helyeztük. (A bal oldalt nem kötöttük le, ami így megfelelő kontrollt biztosított.) A kontroll állatokban a 4. és 7. napra agykárosodás lépett fel, amit az idegek és a gliosis Nissl-festésével határoztunk meg; az agykárosodást a GFAP, a connexin 43 és a makrofágok (ED-1 epitop) fokozott festése mutatta. Ezenkívül a makrofágokban és az astrocytákban fokozott CD44, valamint az idegsejtekben és a makrofágok részhalmazaiban megnövekedett RHAMM mellett a hialuronan receptorok esetén is fokozott festést tapasztaltunk. Nyilvánvaló idegsejtveszteség és az agy jobb felének kollapszusa formájában morfológiai károsodást is megfigyeltünk. A 7 napon keresztül HA-val kezelt állatokat a 14. napon fájdalommenetesen leöltük. Ebben az esetben a fenti paraméterek közül egy sem volt pozitív, azaz agyi kollapszust, idegsejtvesztést, illetve a gliotikus proteinek vagy a hialuronan receptorok vonatkozásában makrofág beáramlást vagy növekedést nem észleitünk. A hialuronannal kezelt állatok agya morfológiailag normálisnak tűnt, bár a neuranalis aktivitással kapcsolatos funkcionális teszteket még nem végez- 13 tűk el. Tekintettel arra, hogy nyilvánvaló morfológiai elváltozásokat nem tapasztaltunk, feltehető, hogy lényeges funkciós károsodás sem történt.

Az egyes állatok esetén alkalmazott dózis nagysága 23 grammos állatokat figyelembe véve 0,6 mg 300 000 dalton molekulatömegű nátrium-hialuronát volt, ami egy 70 kg testtömegű ember esetén személyenként 1,8 grammos szubkután dózisnak felelne meg. Az intravénás dózis kisebb volna.

Az emberi szervezet egy kilogrammnyi tömegében hozzávetőlég 85 cm vér van. Ennek megfelelően egy átlagos (70 kg-os testtömegú) felnőtt körülbelül 6000 cm verrel rendelkezik. A vérben az elérendő nátrium-hialuronát-koncentráció nagyjából 0,3 mg/ml, illetve 0,3 mg/cm . így emberek esetén testtömeg-kgként körülbelül 25 mg mennyiségben kell beadni a hatóanyagot az adott koncentráció eléréséhez.

2. kísérlet

Gyakorlatolag megismételtük az 1. kísérletet, de ebben az esetben az agy nagyobb mértékű elhalása érdekében három órán keresztül (azaz az 1. kísérletben alkalmazott egy óránál két órával -hosszabb ideig) kötöttük le a jobb oldali nyaki verőeret. A 2. kísérletben valamennyi újszülött patkánynak ugyanazt a nátrium-hialuronát (HA) mennyiséget (0,6 mg nátrium-hialuronát) adtuk be, függetlenül az újszülöttek tényleges testtömegétől, és valamennyi állat szubkután injekció formájában a műtétkor kapta meg a nátrium-hialuronátot.

A szubkután beadás után 12 órával 15-20 mg/kg HA vérkon- 14 centrációkat észleltünk. A vérkoncentrációk folyamatos elemzése során azt tapasztaltuk, hogy a HA koncentrációja 24 óra elteltével is 15 mg/kg értéken maradt.

A műtét után hét napon keresztül, minden 24. órában, azonos dózismennyiségekkel folytattuk a HA injektálását. A hétnapos időtartam alatt egyetlen alkalommal sem csökkent a HA koncentráció 15 mg/kg alá.

Az állatok (köztük a kontroll állatok) agyát két hét elteltével vizsgáltuk.

A HA-val kezelt három állat agya ugyanolyan állapotban volt, mint az 1. kísérletben HA-val kezelt újszülöttek agya. A kontroll állat agya súlyosan károsodott. Ezeknek a vizsgálatoknak az egyik eredményeként azt a következtetést vontuk le, hogy az állat egy testtömeg-kg-jára vonatkoztatott 1 mg-os dózismennyiség már terápiás hatású (azaz blokkolja a makrofágoknak, neutrofileknek és más fehérvérsejteknek a stroke területére (helyéhez) történő beszűrődését). Ez a dózismennyiség állat (ember) esetén előnyösen 10 mg HA/testtömeg-kg vagy ennél nagyobb értékű, például 10-20 mg/testtömeg-kg.

3. kísérlet

Jóllehet az emberek és a kifejlett patkányok a nátrium-hialuronát (HA) feleslegeit is képesek elviselni, az újszülött patkányok kevésbé toleránsak. A 3. kísérletben a korábbiaknál kisebb újszülött patkányokat alkalmaztunk. A 3. kísérlet során beadott 25 mg/kg értékű nátrium-hialuronát dózismennyiség az újszülött állatok agykárosodását okozta.

'· · * ·’ ♦ * · · * ·*

- 15 4. kísérlet

Négy patkányt.isoprotenarollal kezeltünk annak érdekében, hogy az állatok mindegyikében szívizominfarktust (szívrohamot) váltsunk ki. Az isoproteranolnak infarktus indukálása céljából történő beadása nem képezi a jelen találmány tárgyát; a művelet az ezen a területen jártas szakember számára jól ismert módszer. Két patkánynak közvetlenül az infarktus után injekció formájában beadtunk 15 mg/kg mennyiségű, 300 000 dalton molekulatömegű nátrium-hialuronátot (HA) . A szubkután injekciózást hét napon keresztül folytattuk, amelynek során minden nap egy szubkután injekciót kaptak az állatok. Az első injekció után 24 órával mindkét állat vérrendszerében 10 mg/testtömeg-kg volt a nátrium-hialuronát vérkoncentrációja.

A két másik patkány (kontroll állatok) közvetlenül az infarktus kiváltása után szubkután fiziológiás sóoldat injekciót kapott. A szubkután injekciózást hét napon keresztül folytattuk, amelynek során minden nap egy szubkután injekciót kaptak az állatok. Ezt követően az állatokat leöltük. A fiziológiás sóoldattal kezelt állatokban a szívszövet nagy mennyiségű akkumulálódott fehérvérsejt jelenléte mellett elhalt. A nátrium-hialuronáttal kezelt patkányok szívszövetében nem tapasztaltunk károsodást, és a fagyasztott szekció E0-1 festésével vizsgálva fehérvérsejtek jelenlétét sem észleltük.

A fentiek alapján azt a következtetést vontuk le, hogy emberek esetén a 10-25 mg/testtömeg-kg értékű dózismennyiségek beadása megfelelő. Jóllehet még az ennél kisebb mennyiségek is «· * » ·

- 16 ·· · · · *· terápiás hatásúak, azonban az utóbbi esetben nem érünk el-optimális eredményt. A stroke és a szívizominfarktus kezelésében az optimális eredmények elérése a kívánatos.

A HA kívánt vérkoncentrációjának kialakításához előnyösen úgy járunk el, hogy kezdetben intravénás úton juttatjuk be a szervezetbe a HA választott dózismennyiségét. Ezt követően az így kialakított vérkoncentárciókat például szubkután beadással (szubkután injekciókkal) tartjuk fenn. Előnyösen a kezdeti vérkoncentráció nagyságrendileg 10 mg/testtömeg-kg értékű.

A fentiekben ismertetett előnyös, találmány szerinti megoldásokban számos változtatás eszközölhető a találmány oltalmi körén belül. Hangsúlyozni kívánjuk, hogy a fentiekben ismertetett megoldásokban alkalmazott anyagok csak illusztratív jellegűek, amelyek a találmány terjedelmét semmilyen szempontból sem korlátozzák.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak felhasználása olyan betegségtől vagy állapottól szenvedő humán beteg kezelésére, amely betegséget vagy állapotot makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a betegség vagy állapot által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy a felhasználás során szükséges időtartamban hialuronsavnak és/vagy sójának hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
2. Az 1. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a betegség vagy állapot stroke.
4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a betegség vagy állapot szívizominfarktus .
5. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a felhasználást a betegség vagy állapot észlelését követő 24 órán belül kezdjük meg.
6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
7. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, • · ·

- 18 azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója körülbelül 300 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
8. Az 1. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy emberben a beadás után a hialuronsav-formának a vérben lévő koncentrációja legalább 3 mg/ml.
9. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségben egy, a következő csoportból kiválasztott további hatóanyagot is beadunk: nemszteroid gyulladásellenes hatóanyag, azaz NSAID; stroke-ellenes hatóanyag; vérrögoldó hatóanyag; béta-blokkoló; acetil-szalicilsav; sztreptokináz; thrombocytaromboló hatóanyag; heparin; plazminogénaktivátor; vagy az előbbiek kombinációi.
10. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma vérkoncentrációja 10 mg/testtömeg-kg-nál nagyobb értékű.
11. Injektálható, steril gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy injektálható dózisformában a gyógyszerkészítménnyel kezelendő személy 1 testtömeg-kilogrammjára vonatkoztatva legalább 10 mg mennyiségben egy 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű hialuronsavat és/vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját, például nátrium-hialuronátot tartalmaz egy alkalmas vivőanyagban.
12. A 11. igénypont szerinti injektálható gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma molekulatömege körülbelül 300 000 dalton.
13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti injektálható gyógy- 19 szerkészítmény, azzal jellemezre, hogy a készítmény tartalmaz továbbá egy nemszteroid gyulladásellenes hatóanyagot, azaz NSAID-t, egy stroke-ellenes hatóanyagot, egy vérrögoldó hatóanyagot, egy béta-blokkolót, acetil-szalicilsavat, sztreptokinázt, egy thrombocytaromboló hatóanyagot, heparint, egy plazminogénaktivátort vagy az előbbiek kombinációit.
14. A 11. vagy 12. igénypont szerinti injektálható gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-formának az injektálható.gyógyszerkészítménnyel kezelendő személy 1 testtömeg-kilogrammjára vonatkoztatott mennyisége körülbelül 25 mg.
15. Eljárás olyan betegségtől vagy állapottól szenvedő humán beteg kezelésére, amely betegséget vagy állapotot makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a betegség vagy állapot által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy az eljárás során szükséges időtartamban hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
16. A 15. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti

értékű. 17. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal je1 le - me z v e , hogy a betegség vagy állapot stroke. 18. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 11 e - me z v e , hogy a betegség vagy állapot szívizominfarktus. 19. A 15. vagy 16. igénypont szerinti eljárás, azzal

- 20 jellemezve, hogy a kezelést a betegség vagy állapot észlelését követő 24 órán belül kezdjük meg és szükséges ideig folytatjuk.
20. A 15-18. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
21. A 15-18. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója körülbelül 300 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
22. A 15. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy emberben a beadás után a hialuronsav-formának a vérben lévő koncentrációja legalább 3 mg/ml.
23. A 15-20. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségben egy, a következő csoportból kiválasztott további hatóanyagot is beadunk: nemszteroid gyulladásellenes hatóanyag, azaz NSAID; stroke-ellenes hatóanyag; vérrögoldó hatóanyag; béta-blokkoló; acetil-szalicilsav; sztreptokináz; thrombocytaromboló hatóanyag; heparin; plazminogénaktivátor; vagy az előbbiek kombinációi.
24. A 15-18. igénypontok bármelyike szerinti el-járás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma elért vérkoncentrációja humán beteg esetén 10 mg/testtömeg-kg-nál nagyobb értékű.
25. Hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak felhasználása olyan betegségtől vagy állapottól szenvedő • ·

- 21 humán beteg kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény dózismenynyiségének előállítására, amely betegséget vagy állapotot makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a betegség vagy állapot által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy a felhasználás során a hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
26. A 25. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
27. A 25. vagy 26. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a betegség vagy állapot stroke.
28. A 25. vagy 26. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a betegség vagy állapot szívizominfarktus.
29. A 25-28. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója 750 000 daltonnái kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
30. A 25-28. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója körülbelül 300 000 daltonnái kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
31. A 25. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy emberben a beadás után a hialuronsav-formának a vérben lévő koncentrációja legalább 3 mg/ml.

- 22
32. A 25-29. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségben egy, a következő csoportból kiválasztott további hatóanyagot is beadunk: nemszteroid gyulladásellenes hatóanyag, azaz NSAID; stroke-ellenes hatóanyag; vérrögoldó hatóanyag; béta-blokkoló; acetil-szalicilsav; sztreptokináz; thrombocytaromboíó hatóanyag; heparin; plazminogénaktivátor; vagy az előbbiek kombinációi.
33. A 25-28. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma vérkoncentrációja 10 mg/testtömeg-kg-nál nagyobb értékű.
34. Hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak felhasználása olyan stroke-tól szenvedő humán beteg kezelésére, amely stroke-ot makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a stroke által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy a felhasználás során szükséges időtartamban hialuronsavnak és/vagy sójának hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
35. A 34. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
36. Hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak felhasználása olyan szívizominfarktustól szenvedő humán beteg kezelésére, amely szívizominfarktust makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a szívizominfarktus által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy a felhasználás során szükséges időtartam- 23 bán hialuronsavnak és/vagy sójának hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
37. A 36. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
38. A 34. vagy 36. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a felhasználást a betegség vagy állapot észlelését követő 24 órán belül kezdjük meg.
39. A 34-37. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
40. A 34-37. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav és/vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója körülbelül 300 000 daltonnál kisebb molekulafömegű nátrium-hialuronát.
41. A 34. vagy 36. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy emberben a beadás után a hialuronsav-formának a vérben lévő koncentrációja legalább 3 mg/ml.
42. A 34-41. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségben egy, a következő csoportból kiválasztott további hatóanyagot is beadunk:

nemszteroid gyulladásellenes hatóanyag, azaz NSAID; stroke-ellenes hatóanyag; vérrögoldó hatóanyag; béta-blokkoló; acetil-szalicilsav; sztreptokináz; thrombocytaromboló hatóanyag; heparin; plazminogénaktivátor; vagy az előbbiek kombinációi.

- 24
43. A 34. vagy 36. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezre, hogy a hialuronsav-forma vérkoncentrációja 10 mg/testtömeg-kg-nál nagyobb értékű.
44. Egy hialuronsav-forma felhasználása humán beteg kezelésére szolgáló injektálható, steril gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az injektálható, steril gyógyszerkészítmény injektálható dózisformában a kezelendő beteg 1 testtömeg-kilogrammjára vonatkoztatva hatóanyagként legalább 10 mg mennyiségben egy 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű hialuronsavat és/vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját, például nátrium-hialuronátot tartalmaz egy alkalmas vivőanyagban, egy stroke-ellenes hatóanyaggal, egy vérrögoldó hatóanyaggal, egy nemszteroid gyulladásellenes hatóanyaggal, azaz egy NSAID-vel, egy béta-blokkolóval, acetil-szalicilsavval, sztreptokinázzal, thrombocytaromboló hatóanyagokkal, heparinnal, egy plazminogénaktivátorral vagy ezek kombinációival kombinálva.
45. A 44. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma molekulatömege körülbelül

300 000 dalton értékű.
46. A 44. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy az injektálható készítménnyel kezelendő humán beteg 1 testtömeg-kilogrammjára vonatkoztatva a hialuronsav-forma mennyisége körülbelül 25 mg.
47. A 45. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy az injektálható készítménnyel kezelendő humán beteg 1 testtömeg-kilogrammjára vonatkoztatva a hialuronsav- 25 -forma mennyisége körülbelül 25 mg.
48. Eljárás olyan stroke-tól szenvedő humán beteg kezelésére, amely stroke-ot makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a stroke által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy az eljárás során szükséges időtartamban hatóanyagként hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
49. A 48. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
50. Eljárás olyan szívizominfarktustól szenvedő humán beteg kezelésére, amely szívizominfarktust makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a szívizominfarktus által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy az eljárás során szükséges időtartamban hatóanyagként hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
51. Az 50. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
52. A 48-51. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kezelést a betegség vagy állapot észlelését követő 24 órán belül kezdjük meg és szükséges ideig folytatjuk.

• ·

- 26
53. A 48-51. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
54. A 48-51. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója körülbelül 300 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
55. A 48. vagy 50. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy emberben a beadás után a hialuronsavformának a vérben lévő koncentrációja legalább 3 mg/ml.
56. A 48-53. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségben egy, a következő csoportból kiválasztott további hatóanyagot is beadunk:

nemszteroid gyulladásellenes hatóanyag, azaz NSAID; stroke-ellenes hatóanyag; vérrögoldó hatóanyag; béta-blokkoló; acetil-szalicilsav; sztreptokináz; thrombocytaromboló hatóanyag; heparin; plazminogénaktivátor; vagy az előbbiek kombinációi.
57. A 48-51. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma elért vérkoncentrációja humán beteg esetén 10 mg/testtömeg-kg-nál nagyobb értékű.
58. Hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatóanyagként történő felhasználása olyan stroke-tól szenvedő humán beteg kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény dózismennyiségének előállítására, amely stroke-ot makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a stroke által

- 27 károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy a felhasználás során a hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
59. Az 58. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
60. Hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatóanyagként történő felhasználása olyan szívizominfarktustól szenvedő humán beteg kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény dózismennyiségének előállítására, amely szívizominfarktust makrofágoknak, neutrofileknek vagy más fehérvérsejteknek a szívizominfarktus által károsított területre történő beszűrődése jellemez, azzal jellemezve, hogy a felhasználás során a hialuronsavnak és/vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóinak hatásos mennyiségét alkalmazzuk.
61. A 60. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma hatásos mennyisége körülbelül 10 mg/testtömeg-kg és körülbelül 25 mg/testtömeg-kg közötti értékű.
62. Az 58-61. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav és/vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható sója 750 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
63. Az 58-61. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav vagy ennek

- 28 gyógyszerészetileg elfogadható sója körülbelül 300 000 daltonnál kisebb molekulatömegű nátrium-hialuronát.
64. Az 58. vagy 60. igénypont szerinti félhasználás, azzal jellemezve, hogy egy 70 kg testtömegű emberben a beadás után a hialuronsav-formának a vérben lévő koncentrációja legalább 3 mg/ml.
65. Az 58-62. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségben egy, a következő csoportból kiválasztott további hatóanyagot is alkalmazunk: nemszteroid gyulladásellenes hatóanyag, azaz NSAID;

stroke-ellenes hatóanyag; vérrögoldó hatóanyag; béta-blokkoló; acetil-szalicilsav; sztreptokináz; thrombocytaromboló hatóanyag; heparin; plazminogénaktivátor; vagy az előbbiek kombinációi.
66. Az 58-65. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma vérkoncentrációja 10 mg/testtömeg-kg-nál nagyobb értékű.
67. A 34-43. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma nátrium-hialuronát, és a nátrium-hialuronátot intravénás beadással, szubkután injekcióval vagy ezek kombinációinak alkalmazásával adjuk be.
68. A 44-47. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma nátrium-hialuronát, és a nátrium-hialuronátot intravénás beadással, szubkután injekcióval vagy ezek kombinációinak alkalmazásával adjuk be.

- 29
69. A 48-57. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma nátrium-hialuronát, és a nátrium-hialuronátot intravénás beadással, szubkután injekcióval vagy ezek kombinációinak alkalmazásával adjuk be.
70. Az 58-66. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav-forma nátrium-hialuronát, és a nátrium-hialuronátot intravénás beadással, szubkután injekcióval vagy ezek kombinációinak alkalmazásával adjuk be.