HUT75469A - Drug targeting system, method for preparing same and its use - Google Patents

Drug targeting system, method for preparing same and its use Download PDF

Info

Publication number
HUT75469A
HUT75469A HU9602356A HU9602356A HUT75469A HU T75469 A HUT75469 A HU T75469A HU 9602356 A HU9602356 A HU 9602356A HU 9602356 A HU9602356 A HU 9602356A HU T75469 A HUT75469 A HU T75469A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
agents
nanoparticles
agent
drug
nano
Prior art date
Application number
HU9602356A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9602356D0 (en
Inventor
Renad N Aljautdin
Dimitri A Karkevich
Joerg Kreuter
Bernhard Sabel
Original Assignee
Medinova Med Consulting Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medinova Med Consulting Gmbh filed Critical Medinova Med Consulting Gmbh
Publication of HU9602356D0 publication Critical patent/HU9602356D0/hu
Publication of HUT75469A publication Critical patent/HUT75469A/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6933—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained by reactions only involving carbon to carbon, e.g. poly(meth)acrylate, polystyrene, polyvinylpyrrolidone or polyvinylalcohol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5161—Polysaccharides, e.g. alginate, chitosan, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Description

A találmány tárgya új eljárás hatóanyagok és diagnosztikai szerek célzott agyba történő bejuttatására és hasonló készítmény. Részletesebben a találmány tárgya nano-méretű gömb alakú hatóanyag célzott bejuttatásra alkalmas készítmény, amely lehetővé teszi, hogy a hatóanyagot („a hatóanyag elnevezés alatt a leírásban bármely olyan anyagot értünk, amely terápiás és/vagy diagnosztikai célra szolgál”) vér-agy gáton (bbb) történő átjuttatását biztosítjuk, és egy vagy több alábbi előnyös jellemzővel rendelkezik: a perifériásán adott hatóanyag vagy diagnosztikum dózisát csökkenti, lehetővé teszi olyan hatóanyag áthaladását illetve bejutását az agyba, amely egyébként a bbb gáton keresztül nem haladna át, továbbá csökkenti a perifériás mellékhatásokat, mivel megnöveli az agyat elérő hatóanyag relatív mennyiségét.
A BBB általános farmakológiai elve
Az idegrendszeri rendellenességek kezelését úgy oldhatjuk meg, hogy olyan hatóanyagokat alkalmazunk, amelyek az idegrendszeri funkcióit vagy rendellenes működését állatokban vagy emberekben módosítják. Jellemzően az ilyen hatóanyagokat perifériás úton, vagy orális vagy szisztémás módon adagolják.
Még számos hatóanyag át haladhat a bbb gáton, egyéb hatóanyagok ezen a bbb gáton nem haladnak át megfelelő módon vagy egyáltalán nem tudnak áthaladni, és csak úgy fejtik ki hatásukat, amennyiben ezeket közvetlenül az agyba adagoljuk. A „vér-agy gát” vagy „bbb” elnevezés alatt a bbb gátat értjük, továbbá a vér-gerinc velő gátat is ebbe a körbe soroljuk. A vér-agy gát, amely az agyi erek endotheliumából, az alap membránból és az idegsejtekből áll, korlátozza az egyes hatóanyagok agyba történő bejutását. A bbb szerkezetét két komponensre osztják: az endothelium vagy kapilláris gátra és az epindimális gátra Banks, W.A., • ·
- 3 Kastin, A.J., Barrera, „Delivering peptidek adagolása a központi idegrendszer számára: Problémák és stratégiák Pharm. Rés. 8:1345-1350 (1991). A bbb gáton keresztül az egyes anyagok átjutási mechanizmusa nem ismert, azonban az közismert, hogy számos agy funkciót szabályozó anyag, mint példul a citokinok, a transzferrin, az encefalinok és endorfinok, átjutnak a véredényekből a bbb gáton keresztül az agyba; (Raeissi, S., Audus, J., „In vitro charac-terization of blood-brain barrier permeability to delta sleep-inducing peptide. („Vér-agy gát permeabilitás in vitro jellemzése a delta alvást indukáló peptiddel szemben”) J. Pharm. Phy. 41:848-852 (1989); Zlokovich, B., Susie, V.T., Davson, H. Begley, D.J., Jankov, R.M., Mitrivic, B.M., Lipovac, M.N., „Saturable mechanism fór delta sleep-inducing peptide (DSIP) at the blood-brain barrier of the vasculary refused guinea pig brain.” („A delta alvást indukáló peptid (DSIP) telíthető mechanizmusa az érrendszerben visszaömlesztett tengerimalac agy vér-agy gátnál) Peptides 10:249-254 (1989); és Zlokovich, B., „In vivő approaches fór studying peptide interaction at the blood-brain barrier. (In vivő vizsgálat a vér-agy gátnál a peptid kölcsönhatással kapcsolatosan”) J. Control. Rel. 13:185-201 (1990)). Azonban számos hatóanyag, amely a központi idegrendszert (CNS) befolyásolja, mint például az adenozin, a β-endorfin, az endogén peptidek szintetikus analógjai (Houghten, R.A. Swann, R. W., Li, C.H., „β-Endorphin: Stability, clearance behaviour and entry intő the Central nervous system after intravenous injection of the tritiatd peptide in rats and rabbits.” („β-Endorfin: Stabilitás, kiürülési viselkedés és intravénás injekció után a központi idegrendszerbe történő bejutás, amennyiben patkányokban és nyulakban triciummal jelzett pepiidet intravénásán injektálunk.”) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4588-4591 (1980); Levin, E.R., Frank,
H.J.K., Weber, M.A., Ismail, M., Mills M., „Studies on penetration of the blood. 4 -brain barrier by atrial natriuretic factor.” („A pitvari nátriuretikus faktor vér-agy gáton történő áthaladása.”) Biochem. Biophys. Rés. Commun. 147:1226-1231 (1987) Sakane, T., Tanaka, C., Yamamoto, A., Hashida, M., Sesaki, H., Ueda, H., Takagi, H., „The effect of polysorbate 80 on brain uptake and analgetic effect of D-kyoto.„ („80 poliszorbát hatása a D-kyoto agybani felvételére és fájdalomcsillapító hatására.”) Int. J. Pharm. 57:77-83 (1989)), továbbá néhány izgató és inhibiáló aminosav és trophicus faktor a bbb gáton egyáltalán nem jut át, vagy csak igen kismértékben halad keresztül. A jelenlegi kezelési gyakorlatban az olyan hatóanyagok, amelyek a bbb gáton nem haladnak át vagy a bbb gáton áthaladásuk igen kismértékű, csak úgy adagolhatok, hogy közvetlenül a központi idegrendszeri infúziót végeznek vagy szabályozott hatóanyag kibocsátású polimerek beültetésével alkalmazzák a hatóanyagokat (lásd például Sabel és munkatársai, 4,883,666 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentést). Ebből eredően számos potenciálisan igen hatékony anyag nem alkalmazható klinikai kezelésekben, mivel nem képes a bbb gáton áthaladni.
Ezen túlmenően számos hatóanyag, amely ugyan az agyra kívánatos hatást fejt ki, nem alkalmazható klinikai kezelésben, mivel súlyos mellékhatással rendelkezik, és például hatást fejt ki a testben a perifériás szervekre és/vagy a perifériás idegrendszerre. Ebből eredően nagy szükség lenne olyan kifejlesztésére, amely a központi idegrendszerbe bejuttatandó hatóanyag mellékhatását, valamint a hatóanyag aktivitását a perifériás szervekben csökkenti, ugyanakkor megnöveli az idegrendszerben kifejtett hatását.
• ·
- 5 A BBB gát megszüntetésének különféle megvalósításai
Az egyik eljárás szerint a szokásos hatóanyag terápiának limitált mértékét úgy küszöbölhetjük ki, hogy a bbb gáton áthaladó hatóanyag mennyiségét megnöveljük. Ezt úgy valósíthatjuk meg, hogy miközben a bbb gáton áthaladó hatóanyag mennyiségét megnöveljük, a hatóanyag vagy diagnosztikus anyag perifériás dózisát csökkentjük. így a perifériás mellékhatások a hatóanyag esetében csökkennek ugyanakkor az agyban a kívánt hatást fenntartjuk.
Számos megvalósítást leírtak a szakirodalomban, amelyek a segítségével a bbb gáton áthaladó hatóanyag mennyiséget növelték.
Az egyik megoldás a bbb gát funkciójának megváltoztatása. Például amennyiben ozmotikus reagenseket adagolunk perifériás úton (mint például intravénás injekció formában) ez a bbb gát kinyílását eredményezi. Ezen túlmenően a központi idegrendszerre ható néhány hatóanyag megváltoztatja a bbb gát permeabilitását más hatóanyagok számára; például kolinomimetikus arecolinokat állítottak elő és ezekről kimutatták, hogy a bbb gáton keresztüli hatóanyag áthaladás változását indukálják (Saija, A., Princi, P., De Rasquale, R., Costa, G., „Arecoline bút nőt haloperidol produces changes in the permeability of the blood-brain barrier in the rat.” („Az arecoline változást okoz a vér-gát agy gát permeabilitásában patkányokban, ugyanezt a haloperidol nem idézi elő.”) J. Pharm. Pha. 42:135-138(1990)).
Más, a bbb gát permeabilitását megváltoztató hatóanyagokat írtak le E.A. Neuwelt. az 5,059,415 számú és az 5,124,146 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben. Egyik ilyen hatóanyag, amely a fenti hatást kifejti a bradikinin (Malfroy-Camine, 5,112,596 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés). Más eljárás során permeabilitást előidéző peptideket, ···· ····
- 6 mint például a A-7 pepiidet, vagy ennek konformációs analógjait alkalmazzák (J.W. Kozarich és munkatársai, WO 92/18529 számú szabadalmi bejelentés).
Egy viszonylag invazív eljárást írt le A. Tornász és E. Tuomanen a WO 91/16064 számú szabadalmi bejelentésben, amely eljárás során az eubacteria, mint például a Streptococcus pneumoniae tisztított sejtfalát vagy sejt fragmenseit parenterálís injekció formában adagolják és így a bbb gátat nyitják.
L.L. Rubin és munkatársai az 5,260,210 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírtak egy eljárást, amelynek során a vér-agy gát permeabilitását úgy növelik meg, hogy olyan hatóanyagot adagolnak, amely a ciklusos AMP koncentrációt csökkenti vagy ezt módosítja, illetve megnöveli a ciklusos GMP koncentrációkat.
Bármely eljárás, amelynek során a bbb gát permeabilitását megváltoztatják, káros jellemzővel is rendelkezik, mivel a bbb gáton olyan molekulák is áthaladhatnak, amelyek egyébként az agyban nem kívánatosak és normál helyzetben ezek behatolása az agyba nem történhetne meg. Továbbá így nem kívánatos mellékhatások léphetnek fel. Ezen túlmenően a fenti hatás nem specifikus és így ezekkel az eljárásokkal nem oldjuk meg a problémát, mivel az eljárások hatása előre nem jelezhető és nem szabályozható az idegszövetre kifejtett hatás.
A másik eljárás a hatóanyag molekulák módosítása. A makromolekulák, mint például a fehérjék nem haladnak át a bbb gáton. Például megoldható ez a probléma úgy, hogy először a makromolekula aktív helyzetét izoláljuk, azaz a molekula azon részét különítjük el, amely a biológiailag kívánatos hatást kifejti, és ezután csak ezt az aktív helyet alkalmazzuk a kezelésben. Mivel az így nyert molekula mérete megfelel a bbb gáton történő áthaladás faktor méreteinek, a csökkentett méretet annak reményében alkalmazzák, hogy a kisebb molekula, így ···· ····
- 7 áthaladhat a bbb gáton. Más makromolekula módosítást végezhetnek abból a célból, hogy a bbb gáton történő áthaladást biztosítsák. A proteinek glükonszármazékká történő átalakítását végzik el, amely javítja a bbb gáton történő permeabilitásukat, vagy valamely prodrug képzését. J.F. Podusio és G.L. Curran az 5,260,308 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben glükonná alakított fehérjéket írt le, ugyanakkor V.E. Shashoua a 4,933,324 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben illetve a WO 89/07938 számú szabadalmi bejelentésben prodrug előállítását írta le. Ezeket a prodrug vegyületeket valamely zsírsav hordozóanyagból és egy neuroaktív hatóanyagból képezték, amely utóbbi nem képes egyedül a bbb gáton áthaladni. Hasonló rendszert írtak le a WO 89/07938 számú szabadalmi bejelentésben.
Egy további eljárás a szabályozott hatóanyag kibocsátású polimerek beültetése, amely készítmény az aktív hatóanyagot valamely mátrix rendszerből közvetlenül az idegszövetbejuttatja. Azonban ez az eljárás invazív jellegű és sebészeti beavatkozást igényel, hogy a beültetést közvetlenül az agyba vagy a gerincvelőbe végezhessék (lásd Sabel és munkatársai 4,883,666 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentést: és Sabel és munkatársai 07/407,930 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentést).
A fenti korlátokat úgy kívánták kiküszöbölni, hogy egy úgynevezett új hatóanyag hordozórendszert dolgoztak ki, amely liposzómákat, erythrocita mimikáló anyagokat, antitest-konjugátumokat és monoklón antitest-konjugátumokat tartalmazott. A célzott hatóanyag bevitel eljárásának egyik alapvető problémája az, hogy az injektált hordozóanyagok gyors opsonizációt szenvednek illetve ezek gyors felvétele történik a reticuloendotheliális rendszerben (RÉS), különösen a máj és a lép makrofágjai révén. Ez a hátrányos jellemző a liposzómák esetében
9 • · · · 9 999 · ··· 9 9 9 9 9
9 99 9 9999
- 8 részben kiküszöbölhető úgy, hogy a hordozóba úgynevezett titkos lipideket építenek be, amelyek lehetnek például foszfatidil-inozitál, illetve mono-sialogangliozid vagy szulfo-galaktozil-ceramid. Azonban valamennyi fenti rendszer nem rendelkezik megfelelő módosíthatósággal és így nem teszi lehetővé, hogy a gyógyászatban széles körben felhasználják. A fenti rendszerek általában egy adott célra, vagy adott hatóanyagra, vagy adott diagnosztikai hatóanyagra specifikusak, amint ezt a szakirodalomban korábban leírták:
P.M. Friden az 5,182,107 számú és az 5,154,924 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben leírta, hogy valamely hatóanyagot antitesttel konjugál, ahol az antitest a transferrin receptorral szemben reaktív. A transferrin receptorok az agy kapilláris endothelialis sejtjeiben helyezkednek el, amely ebből eredően a hatóanyagot, mint például az idegnövekedési faktort a bbb gáton át szállítja. A Pardridge által benyújtott 5,004,697 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírták, hogy ezt az antitest-konjugátum eljárást javítani lehet úgy, hogy egy specifikus izoelektromos ponttal rendelkező kationos antitestet adagolnak (lásd még Pardridge WO 89/01343 számú szabadalmi bejelentést).
Más eljárás szerint kimer peptideket állítanak elő és ehhez konjugálják az aktív hatóanyagokat (Pardridge, 4,801,575 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés). Ugyanilyen rendszert írtak le Pardridge és Schimmel a 4,902,505 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, ahol egy kimer peptidet, mint például histont alkalmaztak, amely transzcitozis révén a bbb gáton áthalad.
N.S. Bodor az 5,187,158 számú és az 5,017,566 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírt egy agy specifikus hatóanyag átviteli • · · · · · ·· · ··· ····· ·· · ·· · · · · ·
- 9 eljárást, amelyben egy központi idegrendszerre ható hatóanyagot redukált biológiailag oxidálható lipoid dihidro-piridin rekreáció-piridin só redox hordozóanyaggal, mint például dopaminnal együtt adagolnak (lásd továbbá Bodor 4,880,816 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentést).
Más eljárásban egy invazív eljárást írtak le, amelynek során genetikus anyagot juttatnak az agyba. Az eljárás során a bbb gátat kémiailag lebontják, majd ezután vírusokat alkalmaznak és ezek segítségével juttatják át a géneket a bbb gáton (lásd E.A. Neuwelt, 4,866,042 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentést). Az eljárás során korrektív genetikus anyagot építenek a vírusba és ezután a vírust a véráramba injektálják.
Végül leírtak egy másik hordozóanyag rendszert, amelynek segítségével a bbb gáton a hatóanyagokat liposzómák alkalmazásával juttatják keresztül (F.D. Collins és R.C. Thompson WO 91/04014 számú szabadalmi bejelentés). Az eljárás során a liposzómák specifikus endogén agy átviteli rendszerhez kapcsolódnak, amelyen bbb gát specifikus ligandumokat juttatnak keresztül. Azonban ez a rendszer nem teszi lehetővé az úgynevezett „nem behatoló” hatóanyagok bbb gáton történő áthaladását és ebből eredően a jelen találmány szerinti rendszertől eltér.
Összefoglalva a fent leírt hordozó rendszerek közül csupán egyetlen biztosítja a bbb gáton a molekula érintetlen formában történő áthaladását és a korábban leírt rendszerek korlátozottak, mivel csak specifikus körülmények között, specifikus hatóanyagok esetében alkalmazhatók. A liposzómák a valószínűleg a legkevésbé invazív jellegű eljárást biztosítják arra a célra, hogy a hatóanyagokat a bbb gáton keresztül juttassák, ugyanakkor számos probléma merül fel ezekkel a rendszerekkel kapcsolatban, amelyeket a korábbi szakirodalomban nem oldot-10tak meg. Számos korábban leírt megoldás nem elfogadható astabilitást mutat. Például a liposzómák stabilitása nem megfelelő és ebből eredően klinikai kezelésben csak korlátozottan alkalmazhatók.
A jelen kutatások eredménye alapján eddig egyedül a liposzómák képesek arra, hogy a hatóanyagok bbb gáton történő jobb áthaladását biztosítsák. Mivel a liposzómák előnytelenül kis stabilitással rendelkeznek, ezen túlmenően számos hatóanyaggal, mint például az ampifilin típusú hatóanyagokkal vagy szerekkel illetve a proteinekkel és a glükoproteinekkel nem kompatibilisek. Ezek az anyagok klinikai felhasználásban csak igen korlátozottan használhatók.
A találmány leírása
A fenti kísérleti eredmények alapján nagy igény mutatkozott arra, hogy egy olyan rendszert és eljárást dolgozzunk ki, amely lehetővé teszi olyan hatóanyagok számára, amelyek a bbb gáton nem tudnak áthaladni (a továbbiakban „nem behatoló hatóanyagok”), hogy olyan módon legyenek képesek ezt a gátat leküzdeni, amely a korábbi ilyen célra alkalmazott eszközök hátrányaival, különösen a liposzómák hátrányos jellemzőivel nem rendelkező rendszert alkalmazzuk. Ezen túlmenően kívánatos, hogy az olyan hatóanyagok behatolási arányát javítsuk, amelyek normál esetben áthaladnak a bbb gáton (A továbbiakban „behatoló hatóanyagok”) abból a célból, hogy csökkentsük a perifériás mellékhatásokat, de ugyanakkor fenntartsuk az idegrendszerben kifejtett kívánatos hatást vagy hatásokat.
A találmány tárgya eljárás, készítmény és hatóanyagot szállító rendszer, amely hatóanyag hordozóanyagként (vagy célba juttató molekulaként) felületaktív anyaggal bevont nano-részecskéket tartalmaz és a hatóanyagok széles kő• «· *·«« • · · · · » • ····»*· · • · · ····· ·· · ·· · · · · ·
-11re esetében használható arra a célra, hogy a hatóanyagok vagy diagnosztikai szerek bbb gáton történő áthatolását javítsa.
A találmány tárgya eljárás és készítmény az idegrendszerre ható hatóanyagok adagolására, abból a célból, hogy fiziológiai vagy farmakológiai hatást fejtsünk ki, vagy az adott anyagokat diagnosztikai célra alkalmazzuk, amely eljárás a fent leírt hátrányos jellemzőkkel nem rendelkezik, amely hátrányokat a korábbi szakirodalomban leírt eljárások és eszközök magukban hordoznak.
A találmány tárgya eljárás és készítmény, amely lehetővé teszi, hogy a nem behatoló és behatoló hatóanyagok könnyebben áthaladjanak a bbb gáton.
A találmány tárgya megbízhatóbb és könnyen alkalmazható eljárás és készítmény az idegrendszeri betegségek kezelésére, amelynek során hatóanyagot abszorbeált nano-részecskéket szisztémás injekció formájában vagy orális úton adagolunk.
A találmány tárgya továbbá eljárás hatóanyagok szállításának javítására, amelynek során ezeket közvetlenül az idegrendszerbe injekció formában adagoljuk.
A találmány tárgya továbbá eljárás a találmány szerinti nano-részecskék előállítására.
A találmány egyéb jellemzői és tárgya az alábbi leírásból és az ábrákból részletesen kitűnik.
A találmány összefoglalása
A találmány tárgya eljárás, amelynek során gyógyszerészetileg aktív ható anyagokat szállítunk a vér-agy gáton keresztül, továbbá egy hatóanyag szállító rendszer, amely alkalmas hatóanyagok bbb gáton keresztül történő szállítására.
-12·· «··· «· «.· ·» * · « · · * « · ··· · ·· ·
A találmány azon a kísérleti eredményen alapszik, hogy hatóanyagot abszorbeált nano-részecskékkel végzett kezelés vagy ilyen részecskékbe befoglalt hatóanyaggal végzett kezelés, amely részecskék megfelelő felületaktív bevonattal is rendelkeznek, lehetővé teszi, hogy az abszorbeált hatóanyag a bbb gáton áthaladjon. Elméletileg ugyan feltételezhető, hogy a nano-részecskék áthaladnak a bbb gáton, majd az áthaladás után a hatóanyag a nano-részecskékből deszorbeálódik, azonban ez a lépés nem szükséges része a találmány szerinti eljárásnak és rendszernek mindaddig ameddig a hatóanyag áthalad a bbb gáton és így farmakológiai hatását kifejti. A „gyógyszerészetileg aktív” elnevezés alatt nemcsak a hatóanyag farmakológiai aktivitását értjük, hanem ebbe a körbe beleértjük a diagnosztikai aktivitást is.
Az alap hatóanyagot célba vivő rendszert az alábbi eljárással állítjuk elő.
Az eljárás az alábbi lépéseket tartalmazza:
a. nano-részecskék szuszpenziójának képzése polimerizáció vagy diszperzió segítségével,
b. az aktív hatóanyag szorpciója a nano-részecskére, és
c. a fenti nano-részecskék bevonattal történő ellátása, amely bevonat egy vagy több megfelelő felületaktív anyag rétegből áll.
Részletesebben a találmány szerinti eljárás során a farmakológiailag aktív hatóanyagot, mint például hatóanyagot a nano-részecskére visszük, majd a hatóanyagot tartalmazó nano-részecskét felületaktív anyaggal bevonjuk, amely felületaktív anyag alkalmas a hatóanyag a bbb gáton keresztül történő átvitelére. Ezután a bevont nano-részecskéket emlősöknek adagoljuk olyan módon, amely lehetővé teszi, hogy a hatóanyag a bbb gátat elérje és ezen áthaladjon, továbbá lehetővé teszi, hogy a hatóanyag a nano-részecskéből kibocsátásra kerüljön és * ··« ·*ς ····
-13így kívánt farmakológiai hatását kifejtse. A vizsgálatokból nem derül ki, hogy a nano-részecske önmaga áthalad-e a bbb gáton vagy csak a hatóanyag halad át ezen úgy, hogy a nano-részecskéből kibocsátásra kerül. A pontos folyamat ismerete abból a szempontból nem jelentős, hogy a készítmény illetve eljárás biztosítja, hogy a megfelelő farmakológiai hatást kifejtsük.
A nano-részecskére, amely egy körülbelül 1-1000 nm átmérőjű szintetikus polimer részecske, a hatóanyagot bármely ismert eljárással rávihetjük. Általában szilárd nano-részecskéket alkalmazunk és ezek a hatóanyagot felületére szorpció segítségével visszük. Például az előre elkészített nano-részecskéket a hatóanyag oldatával mossuk. Bizonyos esetekben azonban a hatóanyagot a polimerizációs oldathoz adagoljuk és így a nano-részecske előállítása során foglaljuk a hatóanyagot a nano-részecskébe. A találmány szerinti kritikus lépés során miután a hatóanyagot a nano-részecskébe foglaltuk vagy abszorbeáltuk, a részecskéket felületaktív anyagokkal bevonjuk úgy, hogy a részecskéket megfelelő körülmények között felületaktív anyag oldatban inkubáljuk. A felületaktív anyag lehetővé teszi a hatóanyag bbb gáton történő áthatolását anélkül, hogy a nano-részecskét vagy a hatóanyagot bármely fizikai módosításnak vetnénk alá. Előnyösen alkalmazható felületaktív anyag a Poliszorbát 80.
A találmány szerinti új eljárás kritikus és új lépése, valamint a készítmény alapvető jellemzője, hogy szabályozzuk azt az időt, amit arra biztosítunk, hogy a felületaktív anyag a nano-részecske felületével kapcsolatba kerüljön és ahhoz tapadjon. Az egyszerű elegyítés nem elegendő ahhoz, hogy biztosítsuk a hatóanyag bbb gáton történő áthaladását. A találmány szerinti készítmény és eljárás fő előnye az, hogy alkalmazható olyan hatóanyagok szállítására, amelyek egyébként nem haladnának át a bbb gáton a központi idegrendszerbe, vagy nem tud···· ···· • · · · · • · · · · • · · · · ··· •· · ·* ···
- 14nának a központi idegrendszerbe a bbb gáton keresztül más módon megfelelő mennyiségben bejutni csak olyan mennyiségben haladnának ezen keresztül, amely nem biztosítaná a farmakológiai hatást vagy ez a hatás a kívántnál kisebb lenne.
A találmány szerinti hatóanyag szállító rendszer megfelelően biztosítja a találmány szerinti eljárás végrehajtását. A találmány szerinti hatóanyag szállító rendszer egy hatóanyaggal telített nano-részecske tömeget tartalmaz, amelyeket megfelelő felületaktív anyaggal vonunk be, és kívánt esetben megfelelő pufferben vagy más fizilógiailag elfogadható hordozó oldatban készítjük. A hordozóanyag típusa és ennek jellemzői attól függnek, hogy a nano-részecskéket milyen módon kívánjuk adagolni. Például ez az adagolás lehet orális, intravénás, intramuszkuláris vagy egyéb út. A hatóanyagok igen széles köre szállítható ezzel a rendszerrel és a szállítás optimális megvalósítását a választott rendszer függvényében határozzuk meg.
A találmány egyéb tárgya és jellemzői, valamint előnyei a szakember számára a találmány részletes leírásából kitűnnek, amely leírást az alábbiakban adunk meg, továbbá a táblázatok, az ábrák és a szabadalmi igénypontok adataiból is világossá válnak.
Az ábrák rövid leírása
Az ábrákat nem méretszerűen készítettük. Az ábrák a találmány szerinti megvalósítások illusztrálására, az elért eredmények bemutatására szolgálnak és az alábbi referencia ábrákat csatoljuk:
1. ábra: A nano-részecske sematikus ábrája, amely ennek molekula szerkezetét is bemutatja. Az 1. ábrán az 1A. ábra bemutat egy (N) monolitikus nano• ·
-15-részecskét, amelyben a hatóanyag a (D) mátrixban diszpergált vagy oldott és amely részecske a (S) felületaktív anyaggal bevont. Az 1B. ábrán bemutattunk egy kapszula típusú nano-részecskét, amelyben a hatóanyag a belső területben foglalt és amely részecske felületaktív bevonattal rendelkezik. A 1C. ábrán bemutatunk egy nano-részecskét, amelyben a hatóanyag a felületre abszorbeált vagy adszorbeált és amely ezentúlmenően felületaktív bevonattal rendelkezik. Ez a három bemutatott forma nem korlátozó jellegű, mivel ezek bármely kombinációja is alkalmazható. Ezen túlmenően a bevonatok eltérő számban is alkalmazhatók.
2. ábra: Az ábrán bemutatjuk farok pöccentéses tesztvizsgálatban az analgetikus hatást a maximálisan lehetséges hatás (MPE) %-ában Dalargin 10 mg/kg intravénás injektálás után. A Dalargint vagy oldatban adagoltuk (telített körök) vagy a hatóanyag a nano-részecskék és a felületaktív anyag egyszerű keverékében adagoltuk (üres körök) vagy úgy adagoltuk, hogy a nano-részecskékhez a hatóanyagot szorpció segítéségével kötöttük, majd a részecskéket Poliszorbát 80 bevonattal láttuk el (a dózis 7,5 mg dalargin/kg volt). Az adatokat az 1. táblázatban is bemutatjuk és ezeket az adatokat az injektálást követő különböző időpontokban mértük.
3. ábra: Az ábrán bemutatjuk a nano-részecskék agyszövetben mért elektromikrográfiás képét. A gráf nyilvánvalóan mutatja, hogy a nano-részecskék a kapilláris lumenben találhatók.
A találmány részletes leírása
A találmány részletes leírása és az adott példák a találmány előnyös megvalósítását mutatják, azonban ezek csak illusztratív jellegűek, mivel a találmány tárgykörén belül maradva számos változtatás és módosítás is végrehajtható, • ·
-16amint ezt a szakember felismeri, ezért ezek nem jelentik a találmány tárgykörének korlátozását.
Mi a nano-részecske?
A „nano-részecske” elnevezés alatt egy olyan hordozó szerkezetet értünk, amely biokompatibilis és megfelelően ellenálló kémiai és/vagy fizikai lebontással szemben az alkalmazás környezetében és ebből eredően biztosítja, hogy a nano-részecskék elegendő mennyisége érintetlen és változatlan marad a véráramba történő injektálás után vagy az intraperitoneális vagy orális adagolást követően és így képes a bbb gátnál az agyat elérni. Amennyiben a hatóanyag a bbb gáton olyan formában jut át, hogy még eközben a nano-részecskékben abszorbeált, akkor a hatóanyag is megfelelően érintetlen maradjon, miközben a bbb gáton áthalad. Általában a nano-részecskék szilárd kolloid részecskék, amelyek mérete
1-1000 nm közötti. A hatóanyagok vagy egyéb átjuttatandó anyagok (például a nukleáris gyógyászatban diagnosztikai célra alkalmazott anyagok vagy a radioterápiában alkalmazott anyagok) a nano-részecskékben oldottak lehetnek, ezekbe foglaltak lehetnek, ebben kapszulázottak lehetnek és/vagy a részecskékhez abszorbeáltak vagy kapcsoltak lehetnek.
A nano-részecskék előállításának általános szempontjai
Nano-részecskék az anyagok széles köréből előállíthatók, amelyek lehetnek például akrilátok, metakrilátok, metil-metakrilátok, ciano-akrilátok, akrilamidok, poliacetátok, poliglikolátok, polianhidrátok, poliortoészterek, zselatin, poliszaccharidok, albumin, polisztirolok, polivinilek, poliakrolein vegyületek, poliglutataldehidek és származékaik, kopolimerek és származékaik. Folyamatos vizes • · · · · · • · ··· ··· · • · · ·· · ····
- 17fázisú emulziós polimerizáció segítségével előállítható biológiailag lebontható nano-részecskék előállításában különösen előnyösen alkalmazható monomerek például a metil-metakrilátok, a polialkil-ciano-akrilátok, a hidroxi-etil-metakrilátok, a metakrilát-sav, az etilén-glikol-dimetakrilát, az akrilamid, az N,N’-bisz-metilén-akrilamid és a 2-dimetil-amino-etil-metakrilát. Más nano-részecskéket állíthatunk elő eltérő eljárásokkal N,N-L-lizin-diil-tereftalátból, alkil-ciano-akrilátból, polilaktonsavból, politejsav-poli-glikolsav-kopolimerből, polianhidrátokból, poliortoészterekből, zselatinból, albuminból és deszolvatált makromolekulákból vagy szénhidrátokból. Ezen túlmenően biológiailag nem lebontható anyagokat is alkalmazhatunk, mint például polisztirolt, polivinil-piridint, poliakroleint és poliglutáraldehidet.
A nano-részecskék előállítási eljárását és alkalmazott kiindulási anyagait korábban szakirodalomban leírták lásd Kreuter, J. (1991) „Nanoparticles-preparation and applications.” („Nano-részecskék előállítása és alkalmazása.”) In: M.
Donbrow (Ed.) „Microcapsules and nanoparticles in medicine and pharmacy. („Mikrokapszulák és nem-részecskék a gyógyászatban és a gyógyszerészeiben.”) CRC Press, Boca Ranton, Florida, pp. 125-148, közleményét.
Az előállítás általános eljárása
A nano-részecskéket szokásos eljárásokkal állíthatjuk elő, amely lehet folyamatos vizes fázisú emulziós polimerizáció, folyamatos szerves fázisú emulziós polimerizáció, érintkező felületi polimerizáció, oldószer leválasztás, oldószer elpárologtatós, szerves polimer oldat deszolvatálása, vízben oldható polimerek térhálósítása emulzióban, makromolekulák deszolvatálása és szénhidrát térhálósítás. Ezeket az előállítási eljárásokat a fent leírt polimer anyagok széles körében végrehajthatjuk.
········ ·· ·· ·· • · · · · · • · · ·· ··· · • · · ····· •· ο ·· · ····
-18Α találmány szerinti bevont nano-részecskék előállítási eljárása az alábbi lépéseket tartalmazza:
a. nano-részecskék szuszpenziójának előállítása például polimerizáció vagy diszpergálás segítségével,
b. valamely aktív hatóanyag szorpciója vagy befoglalása a nano-részecskébe, és
c. a fenti nano-részecskék bevonása egy vagy több réteg megfelelő felületaktív anyaggal.
A hatóanyag vagy a diagnosztikai szer vagy adszorbeált (vagy abszorbeált) lehet, az előre elkészített nano-részecskére, vagy a nano-részecskébe foglalható annak előállítási eljárása során. Az abszorpciós, adszorpciós és befoglalás! eljárások a szakirodalomban jól ismert módszerek.
A nano-részecskék bevonására alkalmazható anyagok például felületaktív anyagok, amelyek lehetnek zsírsavak, zsírsav glicerol észterek, szorbitol és egyéb többfunkciós alkoholok, mint például glicerol-monosztearát, szorbitán-monolaureát vagy szorbitán-monooleát; poliszorbátok, mint például poliszorbát 80 és poliszorbát 60; poloxamerek, mint például poloxamer 188, 338 vagy 407; poloxaminok, mint például poloxamin 904 vagy 1508; poloxi-etilén-éterek és polioxi-etilén-észterek; etoxílezett trigliceridek; etoxílezett fenolok és etoxílezett difenolok; Genapol TM és Bauki típusú felületaktív anyagok; zsírsavak fémsói, zsírsav alkohol-szulfátok fémsói, nátrium-lauril-szulfát; és szulfoszukcinátok fémsói. Egyéb ismert felületaktív anyagokat, amelyek ugyancsak alkalmazhatók a nano-gömbök bevonó anyagaként leírtak a H. Sucker és munkatársai (Pharmazeutische Technologie, George Thieme Verlag, 1978) közleményben.
········ ·· ·· · · • · · · · · • · ··· ··· · ··· ····· • · · ·· · ····
-19A monomer és/vagy polimer, az oldószer, az emulzifikálószer és a felületaktív anyag vagy bármely más segédanyag megválasztása az adott nano-részecske függvénye, amelyet előállítunk és a szakember ezeket könnyen megválaszthatja. Az egyetlen korlátozó szempont az, hogy az alkalmazott kombináció lehetővé tegye a hatóanyag bbb gáton történő áthaladását.
A hatóanyag és a polimer aránya széles határértékeken belül változhat. Ezen túlmenően az oldószer vagy emulzifikálószer eltávolítását számos eltérő eljárással megvalósíthatjuk.
Hatóanyag hordozó nano-részecskék
A biológiailag aktív hatóanyag (mint például gyógyászati hatóanyag), amely a találmány szerint megfelelően alkalmazható lehet melegvérű állatoknak, különösen emlősöknek, az embert is beleértve, adagolt hatóanyag, állatgyógyászati hatóanyag, illetve háziállatoknak adagolt hatóanyag, amely minden esetben az idegrendszeren belül fejti ki hatását, illetve abban kimutatható, amely idegrendszeri szövetbe beleértjük az idegrendszerben elhelyezkedő tumor szöveteket is. Ezen túlmenően diagnosztikai hatóanyagok alkalmazása is lehetséges a találmány szerinti eljárással. A hatóanyag típusa illetve az egyéb alkalmazható alkotó elem típusa nem limitált.
A találmány szerinti eljárást és készítményt alkalmazhatjuk bármely hatóanyag átvitelére, amely hatóanyagot az idegrendszer betegségeinek kezelésében alkalmazhatunk, továbbá az eljárás alkalmazható diagnosztikumok átvitelére is. Előnyösen alkalmazható illetve központi idegrendszeri betegségek kezelésére alkalmazott hatóanyagok az alábbiak:
···· ···· • -20Szinaptikus és neuroeffektor csatlakozási helyekre ható hatóanyagok: általános és lokális fájdalomcsillapítók és érzéstelenítők, mint például opioid analgetikumok és antagonisták; hipnotikumok és nyugtatok; pszichiátriai betegségek, mint például depressziós skizofrénia kezelésében alkalmazható hatóanyagok; antiepileptikumok és görcsoldók: Huntington betegség, öregedés és Alzheimer kór kezelésére alkalmas hatóanyagok; neuroprotektív szerek (mint például izgató vagy ingerlő aminosav antagonisták és neurotropikus faktorok) és neuroregeneratív hatóanyagok: szövet táplálási faktorok, mint például agyból származó neurotrophikus faktor, csillós neurotrophikus faktor, vagy idegnövekedési faktor; központi idegrendszeri trauma vagy gutaütés kezelésében alkalmazható hatóanyagok; és addikt, valamint kábítószer túlfogyasztás kezelésében alkalmazható hatóanyagok, autacoidok és gyulladásellenes hatóanyagok; parazita fertőzés ellenes és mikroba által okozott betegség ellenes kemoterápiás hatóanyagok; immunoszupresszív hatóanyagok és rákellenes hatóanyagok; hormonok és hormon antagonisták; nehéz fémek és nehéz fém antagonisták; nem fémes toxikus szerekkel szembeni antagonisták; rákkezelésében alkalmazott citosztatikus szerek; radioaktív kezelésben alkalmazott diagnosztikai szerek és radioterápiában alkalmazott immunoaktív és immunoreaktív szerek; számos egyéb hatóanyag, mint például átviteli anyagok illetve ezeknek megfelelő receptor agonisták és antagonisták, ezek adott prekurzorai és metabolitjai; antibiotikumok és görcsoldók, antihisztaminok, hányás ellenes szerek, izom relaktánsok, stimulánsok, „irányban működő” és „iránnyal ellentétesen működő” oligonukleotidok, agyi tágítok, pszichotróp anyagok, mánia ellenes szerek, értágítók és érszűkítők, magas vérnyomás ellenes hatóanyagok, migrén kezelésben alkalmazható hatóanyagok, hipnotikumok, hiper- vagy hipo-glicémiás hatóanyagok, ásványi vagy tápláló se···· ···· • · • · ··· ··· • · · · · · · • · · · · · • -21 gédanyagok, elhízás ellenes hatóanyagok, anabolitikumok és asztma kezelésében alkalmazható hatóanyagok.
A jellemzően alkalmazható aktív hatóanyag (például hatóanyag) lehet bármely olyan hatóanyag, amely az idegrendszerre fejti ki hatását vagy az idegrendszerben diagnosztikai célra alkalmazzák. Ezeket leírták a Gilman és munkatársai (1990), „Goodman és Gilman - The Pharmacological Basis of Therapeutics”, Pergamon Press, New York, közleményben. A fenti anyagok az alábbi hatóanyagok lehetnek:
acetilkolin és szintetikus kolin észterek, természetesen előforduló kolinomimetikus alkaloidok és ezek szintetikus szinerg vegyületei, antikolinészteráz hatóanyagok, ganglion stimulánsok, atropin, szkopolamin és hasonló antimuszkarin hatóanyagok, katekolaminok és szimpatomimetikus hatóanyagok, mint például epinefrin, norepinefrin és dopamin, adrenerg agonisták, adrenerg receptor antagonisták, transzmitterek, mint például GABA, glicin, glutamát, acetil-kolin, dopamin, 5-hidroxi-triptamin és hisztamin, neuroaktív peptidek;
fájdalomcsillapítók és érzéstelenítők, mint például opioid fájdalomcsillapítók és antagonisták; érzéstelenítés előtt és érzéstelenítésben alkalmazott hatóanyagok, mint például benzodiazepinek, barbiturátok, antihisztaminok, fenotiazinok és butil-fenonok; opioidok; hányásellenes hatóanyagok; antikolinerg hatóanyagok, mint például atropin, szkopolamin vagy glikopirrolát; kokain; klorál-származékok; etil-klór-vinol; glutetimid; metiprilon; meprobamát; paraldehid; diszulfirám; morfin, fentanil és naloxon;
központi idegrendszerre ható köhögéscsillapító szerek;
pszichiátriai hatóanyagok, mint például fenotiazinok, tioxantének és egyéb heterociklusos vegyületek (például haloperjodol); triciklusos antidepresszánsok,
-22mint például desimipramin és imipramin; atípusos antidepresszánsok (például fluoxetin és trazodon), monoamin oxidáz inhibitorok, mint például izokarboxazid; lítium sók; szorongásellenes szerek, mint például klór-diazepoxid és diazepám;
anti-epileptikumok, mint például hidantoinok, görcsoldó barbiturátok, immunostilbének (mint például karbamazepin), szukcinimidek, valproin sav, oxazolidin-dionok és benzodiazepinek, anti-Parkinson hatóanyagok, mint például L-DOPA/CARBIDOPA, apomorfin, amatadin, ergolinok, szelegelin, ropinorol, bromokriptin-mezilát és antikolinerg hatóanyagok;
görcsellenes szerek, mint például baclofen, diazepám és dantrolén; neuroprotektív szerek, mint például izgató aminosav antagonisták, neurotropikus faktorok és agyból származó neurotropikus faktor, csillos neurotropikus faktor vagy idegnövekedési faktor; neurotrofin(NT)3 (NT3); NT4 és NT5; gangliozidok; neuroregeneratív hatóanyagok;
addikt és kábítószer túlfogyasztás kezelésében alkalmazható hatóanyagok, mint például opioid antagonisták és anti depresszánsok;
autocoidok és gyulladásellenes hatóanyagok, mint például hisztamin, bradikinin, kallidin és ezek antagonistái illetve agonistái;
parazita fertőzésekkel és mikrobás betegségekkel szemben alkalmazható kemoterápiás szerek;
rákellenes hatóanyagok, mint például alkilezőszerek (például nitro-karbamidok) és antimetabolitok; nitrogén-mustárok, etilénaminok és metil-melaminok; alkil-szulfonátok; folsav analógok; pirimidin analógok, purin analógok, vinka alkaloidok; és antibiotikumok.
-23A találmány szerinti készítmény illetve eljárás továbbá alkalmas az alábbi hatóanyagok szállítására: hányás ellenes szerek, relaxánsok, stimulánsok, „irányban” és „irány ellen” működő oligonukleotidok, agyi tágítok, pszichotróp anyagok, értágítók és érszűkítők, magas vérnyomás ellenes szerek, migrén kezelésében alkalmas hatóanyagok, hiper- vagy hipo-glicémiás hatóanyagok, ásványi- vagy tápanyagok, elhízás ellenes hatóanyagok, anabolitikumok és anti-aszthmatikus szerek, gyulladás ellenes szerek, mint például fenilbutazon, indometacin, naproxen, ibuprofén, fluorbiprofen, diclofenac, dexamethason, prednizon és prednizolon; agyi értágítók, mint például soloctidilum, vinkamin, naftidrofuril-oxalát, ko-dergocrin-mezilát, ciklandelát, papverin, nikotin sav, fertőzés ellenes szerek, mint például eritromicin-sztearát és cephalexin.
A nano-részecskék bbb gát áthaladásának mechanizmusa
A találmány szerint a nano-részecskék képesek arra, hogy hatóanyagokat és diagnosztikumokat a bbb gáton keresztül szállítsanak vagy hordozzanak. Ugyan nem dolgoztunk ki semmilyen elméletet a bbb gáton történő átvitel mechanizmusára, ez a folyamat önmagában is meglepő, és általában a szokásos elméletekkel nem magyarázható. A mai vizsgálataink alapján nem tudunk adott mechanizmust kidolgozni a bbb gáton történő peptid áthaladás magyarázatára, azonban néhány feltételezést kidolgoztunk.
Banks és munkatársai (1991) kidolgoztak egy mechanizmust az agyba történő peptid átvitelre, amelyet esetleg alkalmazni lehet a nano-részecskékre vagy a nano-részecskék által hordozott anyagokra is. Az átvitelt nem telíthető és telíthető eszközökkel is végrehajthatják és intakt molekulákat vagy ezek metabolitjait szállíthatnak. A bbb gáton történő áthaladás mértéke elsősorban a molekula
-24lipidben való oldhatóságának függvénye, lásd Banks, W.A., Kastin, A.J., „Peptides and blood-brain barrier: Lipophilicity as a predictor of permeability.” („Peptidek és vér-agy gát: A lipofilicitás, amely meghatározza a permeabilitást.'j Brain Rés. Bull., 15:287-292 (1985) közleményét. Egyéb tényezők, amelyek az agyba történő behatolást befolyásolhatják a molekula tömege, a molekula töltése, a szérumban a protein kötődés mértéke, azonban ezek kisebb szerepet játszanak, mint a lipo- filicitás (Banks és munkatársai, 1991). A Banks által javasolt mechanizmus azonban csak bizonyos korlátozott számú szerkezetileg hasonló peptidek átvitelére alkalmazható, mint például a met-encefalin és néhány hasonló peptid esetére. Ez a mechanizmus nem alkalmazható például a β-endorfinokra és a ciotorfinekre. A telített transzport sebessége különféle tényezők által módosított lehet. Ezek a tényezők például lehetnek bizonyos anyagok, mint például a leucin és az alumínium (Banks, W.A., Kastin, A.J., „Editorial review: Peptide transport system fór opiates across the blood-brain barrier. („Szerkesztői áttekintés: Opiatok peptid transzport rendszere a vér-agy gáton.”) Am. J. Physiol., 259:E1-E10 (1990)). A mai kutatások alapján nem ismeretes, hogy a nano-részecskék transzport mechanizmusa hasonló-e a peptidek transzport mechanizmusához. Amint ezt a találmány szerinti leírásban ismertetjük valamely biológiailag aktív hatóanyag transzportja történik nano-részecske révén a központi idegrendszerben, azonban erről az átvitelről további információk nem állnak rendelkezésünkre.
I
-25Az anyagok leírása és a készítmény előállítása
1. példa
A találmány szerinti előnyös megvalósítás esetében a nano-részecskéket poliacil-ciano-akrilátokból készítjük (a továbbiakban „poli-butil-ciano-akrilát”), amelyek az (I) általános képletű vegyületek:
CN
-[C-C-]n- (I) = C-O-C4H9
A találmány szerinti előnyös eljárás során a nano-részecskéket úgy állítjuk elő, hogy savas polimerizációs közeget alkalmazunk, amely dextrán 70000 stabilizálószert tartalmaz (dextrán 70000 1% 0,1 normál HCI oldatban). Az in vitro vizsgálatban butil-ciano-akrilátot alkalmazunk olyan mennyiségben, hogy 1%-os nano-részecske szuszpenziót nyerjük. Az elegyet mágneses keverővei 500 ford/ /perc sebességgel keverjük 4 óra időtartamon át és így a nano-részecske képződést biztosítjuk. A kapott szuszpenziót 0,1 n nátrium-hidroxid oldattal semlegesítjük, majd zsugorított üvegszűrőn (pórus méret 10 pm) szűrjük, és az elegyhez 1%-os vízmentes glükóz oldatot adagolunk abból a célból, hogy a llofilizálás után a nano-részecskék újbóli diszpergálhatóságát elősegítsük. A részecske méret meghatározást foton korrelációs spektroszkópia segítségével BO 20 Goniometer (Brookhaven Instr. Corporation, Holtsville, New York) alkalmazásával végezzük. Az átlagos részecske átmérő 230 nm. A nano-részecske szuszpenziót ezután Lyovac GT 2 fagyasztva szárító segítségével (Leybold AG Köln, Germany) liofilizáljuk.
-26•·· ···
2. példa
Más eljárás szerint nano-részecskét állítunk elő úgy, hogy ebbe a hatóanyagot befoglaljuk: Az eljárásban nano-részecskéket állítunk elő savas polimerizációs közeg alkalmazásával, amely dextrán 70000 stabilizálószert (dextrán 70000 1% 0,2 n HCI oldatban) és 5 mg dalargint tartalmaz. Az in vitro vizsgálatban butil-ciano-akrilátot alkalmazunk, amelyet olyan mennyiségben használunk, hogy 1 %-os nano-részecske szuszpenziót nyerjünk. Az elegyet mágneses keverővei 500 ford/perc sebességgel 4 órán át keverjük és így nano-részecske képzést biztosítunk. A kapott szuszpenziót 0,1 n nátrium-hidroxid segítségével semlegesítjük, majd zsugorított üvegszűrőn (pórus méret 10 pm) leszűrjük, és 1% vízmentes glükózt adagolunk a szűrlethez abból a célból, hogy a nano-részecskék liofilizálás utáni újra diszpergálhatóságát elősegítsük.
3. példa
A példában egy másik eljárást mutatunk be nano-részecske előállításra, amelyben a hatóanyag szorpció segítségével kerül a részecskébe. Poli-tejsav-poliglikol-savat (PLGA) oldunk 10 ml acetonban (20,0 mg/ml), az elegyhez majd ionmentes víz és metanol 1:1 elegyét csepegtetjük (25G fecskendő tű segítségével) a keverékhez. A kopolimer oldatot eközben mágneses keverővei (Ika-Labortechnik, Germany) keverjük, amíg a kopolimer kiválásra jellemző opálosodást szemmel is megfigyelhetjük. Az előre készített nano-gömbök szuszpenzióját ezután 15 ml 1 tömeg/térfogat%-os 50 ml térfogatú üveg edénybe helyezett vizes felületaktív anyag oldathoz adagoljuk. A keveréket mágneses keverővei szobahőmérsékleten keverjük, amíg a szerves oldószer elpárolgása megtörténik.
·«·· ··«· ·· « < · a · • « · ·« • * · · · · ·· « ·«
-274. példa
A példában bemutatjuk egy albumin nano-részecske előállítását, amelybe a hatóanyag szorpció segítségével kerül. Nano-részecskéket állítunk elő víz olajban emulzifikáló eljárás szerint a Widder, K.J., Fluret, G., és Senyei, A.E., „Magnetic microspheres: Synthesis of a növel parenteral drug carrier.” („Mágneses mikrogömbök: Új parenterális hatóanyag hordozó előállítása.”) J. Pharm. Sci. 68:79-82 (1979) közleményben leírt eljárásnak megfelelően. Mágneses keverő alkalmazásával 0,5 ml 25%-os vizes marhaszérum albumin oldatot elegyítünk 30 ml jegesen hűtött (4 °C ) gyapotmag olajjal. Az emulziót ezután ultrahangos keverésnek (125 W, 1 h, Bransonic 220, Branson, Geneva, CH) vetjük alá, miközben jeges hűtést alkalmazunk. Ezt követően 100 ml gyapotmag olajat 145 °C ± 10 °C hőmérsékletre melegítünk (fűtőköpeny 200 W/220 V, Heraeus-Wittmann, Heidelberg, GER) 500 ml térfogatú háromnyakú gömblombikban (Schott, Mainz, Germany). A melegítést keverés közben végezzük 1500 ford/perc érték alkalmazásával (keverő motor típus IKA, RW 18, Staufen i. Br., Germany: keverő fej MRK1 NS 29/32 Buddeberg, Mannheim, Germany).
Az előre elkészített vizes albumin olajos emulziót ezután az előmelegített, gyorsan kevert gyapotmag olajhoz csepegtetjük (100 ± 10 csepp/perc) egy injekciós tű segítségével (24G x 3/4 Terumo, Frankfurt, Germany) (20 ml Luer, Braun Melsungen, Germany). A kapott albumin gömböket ezt követően a melegítés fenntartása mellett térhálósítjuk. 10 perc elteltével az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni, miközben a keverést fenntartjuk. A lehűtött elegyet (25 °C) ezután 100 ml dietil-éterrel hígítjuk, majd 2500 ford/perc alkalmazásával centrifugáljuk (asztali centrifuga, GPR model, Beckman, München, Germany), a centrifugálást 15 percen át végezzük. Ezt követően a felúszót eldobjuk, majd a mosási * ·»»»
-28eljárást háromszor megismételjük. Az oldószert ezután elpárologatjuk és szabadon folyó porszerű anyagot kapunk, amelyet felhasználásig 4 °C hőmérsékleten tárolunk.
5. példa
Más eljárás szerint albumin nano-részecskét állítunk elő, amelyre a hatóanyag szorpció segítségével kerül. Az alábbi lépéseket hajtjuk végre: Albumin nano-részecskéket állítunk elő deszolvatálási eljárással, kissé módosított Marty,
J.J. és Oppenheim, R.C. „Colloidal Systems fór drug delivery.” Australian J. Pharm. Sci. 6:65-76 (1977) közleményben leírt eljárás segítségével. 500 mg albumint (BSA) oldunk 40 ml tisztított vízben. Körülbelül 60 ml száraz etanolt adagolunk az elegyhez, amíg a protein deszolvatálás vizuálisan is megfigyelhető, mivel az oldat zavarosodik. Az elegyet ezután 0,1 ml 25%-os glutár-aldehid adagolásával, és a keverék mágneses keverővei történő 1 órán át végzett keverésével (IKA, Heidelberg, Germany) térhálósítjuk. A maradék el nem reagált glutár-aldehidet lebontjuk úgy, hogy az elegyhez óvatosan 0,5 ml 12%-os vizes nátrium-metabiszulfát oldatot adagolunk. Az elegyet 3-4 órán át reagáltatjuk, majd a felesleg etanolt vákuumban elpárologtatjuk. A kapott készítményt ezután oszlopgél szűrés segítségével (Sephacryl G 1000, Pharmacia, Sweden) tovább tisztítjuk. Ezután az elegyhez 100 mg glükózt adunk, majd a kapott részecske szuszpenziót körülbelül 16 órán át liofilizáljuk (Lyovac, Heraeus, Hanau, Germany), így a termék újra diszpergálhatóságát javítjuk.
• · · ·
-296, példa
A példában kísérletsorozatot írunk le és bemutatjuk a találmány szerinti eljárás in vivő aktivitását. A bemutatott kísérletekben, amelyek a találmány előnyös eljárását képviselik, az in vivő vizsgálatokban dalargin hatóanyagot alkalmazunk abból a célból, hogy a találmány hatékonyságát bemutassuk és a nano-részecskéket az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően állítjuk elő. A dalargin hexapeptid, amely leu-enkefalin analóg és a második helyzetben D-Ala egységet tartalmaz abból a célból, hogy az enzim által végzett lebontást megakadályozzuk (Tyr-DAIa-Gly-Phe-Lei-Arg).
Általában a dalargint perifériás fekélyek kezelésében alkalmazzák és ebből az alkalmazásból kitűnik, hogy a dalargin a véráramban stabil anyag. Másrészt bármely metabolitjának injekciója semmilyen hatást nem fejt ki. Ezen túlmenően a dalargin a fekélyellenes hatáson kívül hatásos fájdalomcsillapító, amennyiben agykamrában az agyban injektálás segítségével adagolják. Azonban fájdalomcsillapító hatást nem fejt ki, amennyiben perifériás úton adagolják (Kalenikova és munkatársai, Farmakokinetika dalargina, Vopr. Med. Khim. 34:75-83 (1988). Ebből a tényből az következik, hogy a dalargin amennyiben a véráramba adagolják, nem hatol át a bbb gáton semmilyen mértékben vagy áthatolásának mértéke olyan kicsi, hogy a központi idegrendszerre hatást nem tud kifejteni. Mint a találmány szerinti eljárásban kimutattuk a dalarginnel adszorbeált nano-részecskék perifériás injektálása után fájdalomcsillapító hatás jelentkezik, és ez azt mutatja, hogy a nano-részecskék képesek a nem behatoló hatóanyagokat a bbb gáton átvinni, és így az agy irányába új hatóanyag transzport eljárásként alkalmazhatók.
Az alábbi eljárást a „hatóanyag terhelés” megvalósítására alkalmazhatjuk nano-részecskéken. Ugyanezt az eljárást alkalmazhatjuk olyan nano-részecské-30ken, amelyeket a 3-5. példák bármelyike szerinti eljárással állítottunk elő: 100 mg liofilizált nano-részecskét újra szuszpendálunk 5 ml foszfát puffereit fiziológiás sóoldatban (PBS), amely binátrium-foszfát/monobázisos kálium-foszfát/nátrium-klorid (7,6/1,45/4,8 tömeg/tömeg/tömeg) oldat és ezen túlmenően 0,09% dalargint tartalmaz. A peptid abszorpcióját a nano-részecskék felületén hagyjuk megtörténni és ezt az abszorbciót 3 órán át végezzük. Az abszorbeált peptid teljes mennyiségét úgy számítjuk, hogy a szuszpenziót egy 10 nm pórus méretű membránon leszűrjük (Minisart; Sartorius AG Göttingen, Germany), majd a szűrletben a szabad peptid mennyiséget UV spektrofotometria segítségével 220 nm hullámhossz mellett mérjük. Azt találjuk, hogy a peptid 30%-a (1,35 mg) abszorbeálódik a nano-részecskéken. A szuszpenziót ezután PBS oldattal hígítjuk és így 0,25 - 0,75 mg/ml közötti peptid koncentrációt nyerünk, majd az elegyet 5 percen át ultrahangos keverésnek vetjük alá. Ezt követően a nano-részecskéket megfelelő bevonattal látjuk el.
Számos bevonóanyagot alkalmazhatunk és a kívánt hatást nyerhetjük, azonban a bemutatott előnyös megvalósítás során az alábbi bevonóanyagokat alkalmaztuk: poloxamer 184, 188, 338, 407 (POE-POP-blokk-kopolimerek, amelyek a C.H. Erbsloeh, Düsseldorf, Germany terméke), poloaxamin 908 (etilén-diamin-POE-POP-blokk-kopolimer, amely a C.H. Erbesloeh terméke), poliszorbát 20 és 80 (amely az Atlas Chemie, Essen, Germany terméke) és Brij 35 (polietilén 23 lauril-éter, amely a Fluka, Buchs, CH terméke).
A hatóanyagot abszorbeált nano-részecskék bevonását úgy végezzük, hogy a nano-részecske szuszpenzióhoz 1% felületaktív anyagot adagolunk, majd az elegyet 30 percen át inkubáljuk és ezt követően azonnal egérbe injektáljuk. A szuszpendálás időtartamát változtathatjuk, és változtathatjuk a szuszpenzióban ···· · · · ·
-31 található felületaktív anyag mennyiségét is. Valamennyi alkalmazott felületaktív anyag a részecskéket megfelelően bevonta.
Az eljárás bizonyítása
A hatóanyag nano-részecskékre történő abszorbeálás utáni biológiai aktivitásának értékelését illetve a felületaktív anyaggal történő bevonás utáni készítmény biológiai aktivitását in vivő tesztvizsgálatban határoztuk meg.
In vivő tesztvizsgálat:
Abból a célból, hogy a találmány szerinti eljárás farmakológiai alkalmasságát kimutassuk, a nano-részecskékre olyan hatóanyagot abszorbeáltunk, amely egyébként a bbb gáton szisztémás adagolás során nem halad át (ez a hatóanyag a leu-enkefalin analóg a dalargin volt). A dalargin igen hatásos fájdalomcsillapító, amennyiben közvetlenül az agyba injektálják, azonban amennyiben perifériás úton adagolják semmilyen hatást nem fejt ki. A dalargint poli(butil-ciano-akrilát)nano-részecskékre abszorbeáltuk és vizes poliszorbát 80 oldatban 30 percen át inkubáltuk. Ezt követően a készítményt intravénásán egerekbe injektáltuk 2,5, 5,0 és 7,5 mg/kg dalargin dózis alkalmazásával. A készítmények az alábbiak voltak: tiszta dalargin oldat, nem bevont dalargin tartalmú nano-részecske, frissen előállított nano-részecske elegy hatóanyag és felületaktív anyag, anélkül hogy a hatóanyag vagy a felületaktív anyag szorpciós idejét biztosítanánk, továbbá tiszta felületaktív anyag vagy nano-részecske oldat, mint kontroll vizsgálat. Az aktivitás határértéket farok rángatás tesztvizsgálattal határoztuk meg. Amennyiben dalargint oldunk PBS oldatban, ez i.v. injektálás után egészen 10 mg/kg dózis értékig nem fejt ki semmilyen fájdalomcsillapító hatást (2. ábra). A kísérletek alapján csak ···· · · · ·
-32a nano-részecskékre abszorbeált dalargin, majd a részecskék poliszorbát 80 segítségével történő bevonása után nyert készítmény fejtett ki statisztikusan jelentős fájdalomcsillapító hatást 5 mg/kg dalargin dózis esetében, amennyiben ezt a farok húzási tesztvizsgálatban vizsgáltuk. Valamennyi egyéb készítmény még akkor is, ha a dalargint 10 mg/kg dózisban tartalmazta, nem fejtett ki fájdalomcsillapító hatást. A megfelelő kontroll vizsgálatok céljából az alábbi vizsgálati csoportokat alkalmaztuk:
1. csoport: üres nano-részecskék szuszpenziója (200 mg/kg).
2. csoport: Poliszorbát 80 oldat PBS közegben.
3. csoport: dalargin oldat PBS közegben.
4. csoport: dalargin oldat és Poliszorbát 80 elegye.
5. csoport: dalargin oldat és üres nano-részecskék elegye.
6. csoport: dalargin és üres részecskék, valamint Poliszorbát 80 elegye keverés után,amely keverés során a kiegyenlítési idő alkalmazása nélkül a hatóanyagot, a felületaktív anyagot és a részecskéket elegyítjük.
7. csoport: dalargin hatóanyaggal terhelt részecskék, amelyeket 3 órán át üres nano-részecskékre végzett inkubálással állítottunk elő, majd Poliszorbát 80 bevonat nélkül injektáltunk.
8-10. csoportok: dalarginnal terhelt nano-részecskék (2,5, 5,0 és 7,5 mg/kg dózis sorrendben) Poliszorbát 80 bevonattal.
11. csoport: dalarginnal terhelt nano-részecskék (7,5 mg/kg) Poliszorbát 20 bevonattal.
12. csoport: dalarginnal terhelt nano-részecskék (7,5 mg/kg) Poloxamine
908 bevonattal.
········ ·· ·· ·· • · · · · · • ······· · ··· ····· ·· · ·· · ····
-33A kapott eredményeket az 1. táblázatban és a 2. ábrán mutatjuk be. A kontroll csoportok közül (1-7. csoportok) egyik sem fejtett ki fájdalomcsillapító hatást egérben, amennyiben injekció formában adagoltuk. Különösen érdekes a
11. csoport és a 12. csoport, amely ugyancsak nem fejt ki analgetikus hatást. A kísérletekből kitűnik, hogy bár ezek a felületaktív anyagok bevonják a nano-részecskéket, és az agyszövetben koncentrálódhatnak, ezek mégsem könnyítik meg a hatóanyag áthatolását a bbb gáton.
1. táblázat
Idő (perc)
5 15 30 45 90
Csoport Átlag SD Átlag SD Átlag SD Átlag SD Átlag SD
1. csoport 2,3 2,5 3,8 1,8 1,5 9,0 0,75 3,0 4 4,2
2. csoport 5,0 3,9 7,0 3,3 8,0 3,6 12,0 3,1 9,0 9,1
3. csoport 2,0 6,6 2,2 8,6 10,0 9,8 9,3 8,7 2,0 6,0
4. csoport 4,6 1,2 4,8 1,7 8,3 2,3 7,8 2,3 6,4 2,6
5. csoport 2,5 3,0 1,3 4,6 7,5 6,2 1,5 5,4 0,25 3,3
6. csoport 2,8 3,3 2,8 3,7 6,3 4,9 12,5 2,0 5,5 5,8
7. csoport 1,2 1,1 2,3 1,6 4,1 1,0 3,7 1,1 4,9 1,1
8. csoport 0,25 3,5 1,7 2,8 9,3 7,0 11,6 9,7 1,6 5,3
9. csoport 1,8 9,3 2,7 18,4 42 30 36,8* 21,5 21,0 12,4
10. csoport 3,5 2,6 8,6 6,2 35,0* 11 51,8* 20,2 12,8 18,4
11. csoport - - 7,5 3,3 - - 7,8 3,4 6,5 2,9
12. csoport - - 6,8 2,8 - 6,4 3,0 3,2 3,1
* statisztikusan jelentős eltérés • · • ·
-341. csoport: üres nano-részecskék szuszpenziója (200 mg/kg).
2. csoport: Poliszorbát 80 oldat PBS közegben.
3. csoport: dalargin oldat PBS közegben.
4. csoport: dalargin oldat és Poliszorbát 80 elegye.
5. csoport: dalargin oldat és üres nano-részecske elegy.
6. csoport: dalargin, üres részecske és Poliszorbát 80 elegye, miután a hatóanyagot és a felületaktív anyagot a részecskékkel a kiegyenlítési időnél kisebb ideig elegyítettük.
7. csoport: üres nano-részecskékre felvitt dalargin 3 óra inkubálási idővel, majd Poliszorbát 80 bevonat nélkül injektált formában.
8. csoport: Poliszorbát 80 bevonattal ellátott és dalarginnal terhelt nano-részecskék (2,5 mg/kg).
9. csoport: Poliszorbát 80-nal bevont és dalarginnal terhelt nano-részecskék (5,0 mg/kg).
10. csoport: Poliszorbát 80-nal bevont és dalarginnal terhelt nano-részecs kék (7,5 mg/kg).
11. csoport: Poliszorbát 20 bevonattal ellátott és dalarginnal terhelt nano-részecskék (7,5 mg/kg).
12. csoport: Polioxamin 908-al bevont és dalarginnal terhelt nano-részecs kék (7,5 mg/kg).
Az agyban kifejtett analgetikus hatás fajlagosságát opiod antagonista alkalmazásával vizsgáltuk. A Nalaxone (0,1 mg/kg) csökkentette a Poliszorbát 80 bevonattal ellátott nano-részecskékhez kötött dalargin aktivitását.
• ·
-35A nano-részecskék előrehaladásának útját úgy határoztuk meg, hogy hisztológiai vizsgálatot végeztünk fluoresceinnel terhelt Poliszorbát 80 segítségével bevont nano-részecskék alkalmazásával. A vizsgálatok azt mutatták, hogy a bevont nano-részecskéket az agy-vér kapillárisokban található endotheliális sejtek veszik fel, majd ezekből ezek később felszabadulnak és a belső agy területekre jutnak (lásd 3. és 4. ábra).
A fenti eredmények alapján kimondhatjuk, hogy amennyiben a hatóanyagot megfelelő bevonattal ellátott nano-részecskéhez kötjük, a hatóanyag az agyban biológiai hatást fejt ki (a vizsgált esetben fájdalomcsillapító hatást). Ez amiatt történik, mivel megvalósíthatjuk a korábban lehetetlen hatóanyag áthaladást a bbb gáton keresztül, amely áthaladás az alábbi mechanizmusok valamelyikével történhet: a hatóanyag bbb gáton történő áthaladásának javítása diffúzió révén vagy az endocitotikus felvétel aktiválásával az endotheliális sejtek révén a vér edényeiben.
Elméletileg néhány lehetőség van arra, hogy a hatóanyagok bbb gáton történő áthaladását javítsuk aktív transzport révén vagy passzív úton.
Ebből a szempontból a Poliszorbát 80 igen érdekes hatóanyag, mivel biztosítja az agyba juttatást illetve bizonyos hatóanyagok agybani felvételét. Tröster,
S.D., Muller, U., Kreuter, J., „Modification of the body distribution of poly (metil methacrylate) nanoparticles in rats by coating with surfactants. („A poli-(metil-metakrilát)-nano-részecskék testbeni eloszlásának módosítása patkányokban, felületaktív anyagokkal történő bevonás révén.”) Int. J. Pharm. 61:85-100 (1990). A vizsgálatok során az agyban a nano-részecske radioaktivitás megnövelt akkumulációját mutatták ki, miután Poliszorbát 80 bevonattal ellátott 14C-poli-(metil-36···· ···· ·· ·· • · · ·
-metakrilát)-nano-részecskéket injektáltak. A közleményben azonban hasonló felvételt mutattak ki más felületaktív anyagok alkalmazása esetében is az agyban. Mivel ezek a polimerek biológiai úton csak igen kismértékben lebonthatók, ez az akkumulálás az adott időtartamon belül talán az érintetlen részecskék mennyiségéből származik.
Azonban, mint a korábbiakban leírtuk és a 2. ábrán és az 1. táblázatban bemutattuk, a nano-részecskék és a felületaktív anyagok (amelyeket a Tröster vizsgálatban alkalmaztak) egyszerű keveréke nem vezet a hatóanyag bbb gáton történő áthaladásához. Korábbi vizsgálatban Kreuter, J., Hartmann, H.R., „Comparative study on the cytostatic effects and the tissue distribution of 5-fluorouracil in a free form and bound to polybutylcyanoacrylate nanoparticles in sarcoma 180-bearing mice.” („5-fluor-uracil szabad forma és poli-butil-ciano-akrilát nano-részecskékhez kötött forma, összehasonlító vizsgálata citosztatikus hatásban és szövet eloszlásban szarkóma 180 fertőzött egerekben.”) Oncoloqy 40:363-366 (1983) közleményben kimutatták, hogy az 5-fluor-uracil agybani megnövelt koncentrációja biztosítható, amennyiben ezt a koncentrációt összehasonlítják a hatóanyag szabad oldatának alkalmazásával és a hatóanyagot Poliszorbát 20-tartalmú közegben előállított nano-részecskékkel szállítják a kívánt helyre. A közlemény közzététele időpontjában az eredmények nem vonták magukra a szakemberek figyelmét, mivel a nano-részecskékhez való kötődés egy valamennyi szervben megnövelt 5-fluor-uracil koncentrációt eredményezett. Ezen túlmenően ugyanolyan esetben, mint a Tröster vizsgálat valószínűleg a részecskék az agy véráramában is felgyülemlettek anélkül, hogy a bbb gáton áthaladtak volna. Mint korábban leírtuk a találmány szerinti eljárásban a dalargin aktivitás indukálása csak akkor lehetséges, amennyiben a hatóanyagot nano-részecskékhez kötjük, • ·
-37majd ezután a hatóanyaggal kapcsolt nano-részecskéket egyensúlyi állapotig a hatóanyaggal érintkeztetjük. Ezt a hatóanyagot Poliszorbát 80-nal és nano-részecskékkel elegyítve, majd közvetlenül az elegyítés után i.v. injektálással adagolva nem találtunk semmilyen hatóanyag aktivitást. Ez nyilvánvalóan bizonyítja, hogy az aktivitás csakis az érintetlen részecskékhez kötődő hatóanyagból eredhet.
Az áthaladás indukálásának mechanizmusa számos változat lehet. Először a nano-részecskék kötődhetnek az agy kapillárisok belső endotheliális borításához. Ezt követően a nano-részecskék a hatóanyagot hatásosabban kijuttathatják az agysejtek számára, és így nagy koncentráció gradienst biztosíthatnak és egyszerűbb diffúziót eredményezhetnek. A második lehetőség az, hogy fagociták által agy endotheliális felvétel történik. Mint korábban in vitro vizsgálatokban bemutattuk a Poliszorbát 80 megnövelt nano-részecske szövet felvételt biztosít az agy véredény endotheliumában. Ezen túlmenően ezután a hatóanyag az endotheliális sejtekből diffúzió révén az agy sejtekbe kerülhet. Más elképzelés szerint, amely kevésbé valószínű a nano-részecskék, amelyek a hatóanyagot tartalmazzák, exocitózis révén kerülhetnek a körülvevő agyszövetekbe.
Fenn áll az a lehetőség is, hogy a Poliszorbát 80 bbb felnyitó jellemzőkkel rendelkezik. Sakane és munkatársai (1989) kimutatták, hogy 6%-os Poliszorbát 80 oldat megnövelt inzulin és megnövelt dipeptid b-kiotorfin áthaladást eredményezett az agyban a bbb gáton keresztül. A kutatócsoportunk által végzett in vivő kísérletek alapján, amelyeket a fentiekben közöltünk, azonban ez mint lehetséges mechanizmus kizárható. Mivel a 4. csoport esetében (dalargin oldat keverék és Poliszorbát 80 elegy) nem mutatott analgetikus hatást a farok húzási tesztvizsgálatban, feltehető, hogy a poliszorbát önmagában nem eredményezi a dalargin át9··· ···· ·· ·· ·· • · · · · · • ······· · • · · ····· ·· * ·· · ····
-38 haladást. A fenti eredmények alapján a találmány szerinti eljárás specifikus bbb gát áthaladást eredményez, amely a korábbi szakirodalomhoz képest nem várt javulást jelent. A mechanizmus nem döntő befolyású és az biztos, hogy ez nem jelenti a bbb gát feltétel nélküli felnyitását a központi idegrendszerben az aktív hatóanyag számára.

Claims (27)

1. Célzott hatóanyag szállításra alkalmas készítmény, amely emlősök számára való adagolására alkalmas, azzal jellemezve, hogy polimer anyagból készült nano-részecskéket tartalmaz, amely nano-részecskék a szállítandó hatóanyagot tartalmazzák, amely hatóanyagot a fenti emlősnek kell eljuttatni, továbbá egy felületaktív anyag bevonatot tartalmaznak, amelyet erre a részecskékre választottunk le; és fiziológiailag elfogadható hordozó- és/vagy hígítóanyagot tartalmaznak, amely az adott emlősön belül az adagolás után lehetővé teszi a fenti nano-részecskék áramlását a cél területre.
2. Az 1. igénypont szerinti hatóanyag szállító rendszer, ahol a fenti nano-részecskék szintetikus polimer részecskék, amelyeknek átlagos átmérője
1-1000 nm.
3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti hatóanyag célzott bejuttatását biztosító rendszer, ahol a szintetikus polimer nano-részecskéket úgy állítjuk elő, hogy ezeket valamely alábbi vegyületekből képezzük: ofakrilátok, metakrilátok, ciano-akrilátok, akril-amidok, polilaktátok, poliglikolátok, polianhidrátok, poli-orto-észterek, zselatin, albumin, polisztirolok, polivinil vegyületek, poliakrolein vegyületek, poli-glutár-aldehid vegyületek és ezek származékai, valamint a fentiek kopolimer származékai és keverékei.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti célzott hatóanyag kibocsátást biztosító rendszer, ahol a nano-részecskék a szállítandó hatóanyagot tartalmazzák abszorbeált, adszorbeált és/vagy bevont vagy befoglalt formában.
• ·
-405. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti célzott hatóanyag szállító rendszer, ahol a felületaktív anyag lehet olyan felületaktív anyag, amely a nano-részecskék esetében biztosítja a vér-agy gát áthaladás a fenti emlősben, továbbá amely biztosítja a fenti hatóanyag fent leírt nano-részecskéből való kibocsátását és áthaladását a vér-agy gáton, amely hatóanyag ezután a fenti nano-részecskéktől eltávozik.
6. Az 5. igénypont szerinti célzott hatóanyag beviteli rendszer, ahol a felületaktív anyag olyan anyag, amely biztosítja az adott hatóanyag vér-agy gáton történő átmenetét anélkül, hogy a fenti hatóanyag kémiai változása megtörténne.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti hatóanyag szállítási rendszer, ahol az alkalmazott felületaktív anyag Poliszorbát 80.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti célzott hatóanyag átviteli rendszer, ahol a hatóanyag lehet olyan anyag, amely a központi idegrendszerre fejt ki hatást, egyéb esetekben nem képes a vér-agy gáton áthaladni anélkül, hogy az anyagot módosítanánk vagy hordozóanyagot alkalmaznának.
9. Hatóanyagot célba juttató készítmény, amely az 1-8. igénypontok bámne lyike szerinti, ahol az adagolható hatóanyag lehet a szinaptikus és a neuroeffektor kapcsolódási pontokon ható anyag; általában lehet általános és lokális fájdalomcsillapító és érzéstelenítő; hipnotikum és nyugtató; pszichiátriai betegségek kezelésére alkalmas hatóanyag, mint például depresszió és skrizofrénia kezelésében alkalmazható hatóanyag; anti-epileptikum és görcsoldó; Huntington betegség, öregedés és Alzheimer kór kezelésében alkalmazható hatóanyag; izgató aminosav antagonista és neurotropikus faktor, valamint neuroregeneratív hatóanyag; trophikus faktor; központi idegrendszerbeni trauma vagy gutaütés kezelésében alkalmazható hatóanyag; addikt vagy kábítószer túlfogyasztás kezelésé«·····«· ·· ·· ·· • · · · · • ······· · ·· · ·· · · · ·
-41 ben alkalmazható hatóanyag; autacoid és gyulladásgátló hatóanyag; parazita fertőzések és mikrobás betegségek kezelésében alkalmazható kemoterápiás hatóanyag; immunoszupresszív hatóanyag és rákellenes hatóanyag; hormon, valamint hormon antagonista; nehéz fém és nehéz fém antagonista; nem fémes toxikus szerek antagonista anyagon; citosztatikus szer, amely rák kezelésében alkalmazható; diagnosztikus anyag, amelyet a nukleáris gyógyászatban alkalmazhatnak, immunoaktív illetve immunoreaktív hatóanyag; transzmitter anyag és ezek receptor antagonistái és agonistái, valamint ezek prekurzorai vagy metabolitjai; antibiotikum, görcsellenes hatóanyag, antihisztamin, hányingert gátló hatóanyag, relaxáns, stimuláns, „irányban” illetve „iránnyal szemben” ható oligonukleotid, agyi tágító, pszichotropikum, mánia ellenes szer, értágító és érszűkítő, magas vérnyomás kezelésében alkalmazható hatóanyag, migrén kezelésében alkalmazható hatóanyag, hipnotikumok, hiper- vagy hipo-glicémiás hatóanyag, ásványi vagy táplálási anyagok, elhízás ellenes kezelésben alkalmazható hatóanyagok, anabolitikum és anti-asztmatikus hatóanyag, valamint ezek keverékei.
10. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti hatóanyagot célba juttató rendszer, ahol a hatóanyag valamely diagnosztikus szer.
11. Az 1-10. igénypontik bármelyike szerinti hatóanyagot célba juttató rendszer, ahol a hordozó- és hígítóanyag lehet víz, fiziológiailag elfogadható vizes oldat, amely sókat és/vagy puffereket tartalmaz, vagy bármely más oldat, amely emlős kezelésében elfogadható.
12. Eljárás hatóanyag célba juttatására alkalmas rendszer előállítására, amely készítmény alkalmas egy vagy több gyógyszerészetileg aktív hatóanyag emlős számára történő adagolásra, azzal jellemezve, hogy az alábbi lépéseket hajtjuk végre:
-42alkalmas polimerizációs eljárással polimert előállító monomer vagy oligomer anyagból kiindulva nano-részecskéket állítunk elő; a fenti gyógyszerészetileg aktív hatóanyagot vagy hatóanyagokat a fenti nano-részecskékre vagy részecskékbe foglaljuk; a fenti hatóanyaggal terhelt nano-részecskéket felületaktív anyaggal bevonjuk; és kívánt esetben a fenti hatóanyaggal terhelt és bevont nano-részecskéket valamely olyan közegbe visszük, amely alkalmas arra, hogy az adagolás után a fenti emlősben a fenti nano-részecskéket a megfelelő helyre szállítsa.
13. A 12. igénypont szerinti eljárás, ahol a polimerizációs lépést például emulziós polimerizáció, határfelületi polimerizáció, oldószerben! leválasztás, oldószer elpárologtatás, agy oldatbani polimer térhálósítás eljárással hajtjuk végre.
14. A 12. vagy 13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a fenti polimerizációs lépésben a képződött polimer, illetve a fenti nano-részecske lehet akrilát, metakrilát, ciano-akrilát, akril-amid, polilaktát, poliglikolát, polianhidrát, poliortoészter, zselatin, albumin, polisztirol, polivinil vegyület, poliakrolein, poliglutáraldehid és származékai, kopolimer, valamint ezek keverékei.
15. A 12-14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a hatóanyag terhelési lépésben a gyógyszerészetileg aktív vegyületet a fenti nano-részecskékre visszük úgy, hogy a fenti nano-részecskéket a fenti farmakológiailag aktív vegyület jelenlétében képezzük.
16. A 12-14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a fenti hatóanyag terhelési lépésben a fenti gyógyszerészetileg aktív vegyületet és a fenti nano-részecskéket oldatban elegyítjük és megfelelő időt biztosítunk arra, hogy a fenti ···· ···· *« ·· ·· * -43gyógyszerészetileg aktív hatóanyag elegendő mennyisége adszorbeálódjon és/vagy abszorbeálódjon a fenti nano-részecskéken.
17. A 12-16. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a fenti bevonat előállítási lépés során a fenti hatóanyaggal terhelt nano-részecskéket a fenti felületaktív anyag oldatával elegyítjük és megfelelő időt biztosítunk ahhoz, hogy a fenti felületaktív anyag a fenti nano-részecskéket bevonja.
18. A 17. igénypont szerinti eljárás, ahol az alkalmazott felületaktív anyag lehet, olyan felületaktív anyag, amely a kezelt emlősben lehetővé teszi a fenti nano-részecskék áthaladását a vér-agy gáton és olyan anyag, amely lehetővé teszi a fenti hatóanyag kibocsátását a fenti nano-részecskékből, valamint lehetővé teszi a fenti nano-részecskéktől elvált fenti hatóanyag áthaladását a vér-agy gáton.
19. A 18. igénypont szerinti eljárás, ahol felületaktív anyagként olyan anyagot alkalmazunk, amely lehetővé teszi a hatóanyag áthaladását a vér-agy gáton anélkül, hogy a hatóanyagot bármily módon kémiailag módosítanánk.
20. A 12-19. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol felületaktív anyagként poliszorbát 80 vegyületet alkalmazunk.
21. A 12-20. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a gyógyszerészetileg aktív hatóanyagként az alábbi anyagokat alkalmazzuk: előnyösen szinaptikus és neuroeffektor kapcsolat helyeken ható anyagok: általános és lokális érzéstelenítők és fájdalomcsillapítók: hipnotikumok és nyugtatok; pszichiátriás betegségek, mint például depresszió és skrizofrénia kezelésében alkalmazható hatóanyagok; antiepileptikumok és antikonvulzáns szerek; Huntington betegség, öregedés és Alzheimer kór kezelésében alkalmazható hatóanyagok; izgató aminosav antagonisták és neurotropikus faktorok, valamint neuroregeneratív szerek,
-44trophikus faktorok; központi idegrendszer trauma vagy gutaütés kezelésében alkalmazható hatóanyagok; addikt betegség és kábítószer túlfogyasztás kezelésében alkalmazható hatóanyagok; autacoidok és gyulladásgátló szerek; parazita fertőzés és mikrobás betegség kezelésében alkalmazható kemoterápiás szerek; immunoszupresszív szerek és rákellenes hatóanyagok; hormonok és hormon antagonisták; nehéz fémek és nehéz fém antagonisták; nem fémes toxikus szerek antagonistái; rákos megbetegedés kezelésében alkalmazható citosztatikumok; diagnosztikus szerek, amelyek a radiokémiái gyógyászatban alkalmazhatók, immunoaktív és immunoreaktív hatóanyagok; transzmitter vegyületek és ezek megfelelő receptor agonista és antagonista formái, ezek megfelelő prekurzorai és metabolitjai, antibiotikumok, antiszpazmodikumok, antihisztaminok, hányást gátló szerek, relaxánsok, stimulánsok, „irányban” és „iránnyal szemben” ható oligonukleotidok, agyi értágítók, pszichotropikumok, mánia ellenes szerek, értágítók és érszűkítők, magas vérnyomást kezelő hatóanyagok, migrént kezelő hatóanyagok, hipnotikumok, hiper- vagy hipo-glicémiás hatóanyagok, ásványi vagy tápanyagok, elhízás ellenes hatóanyagok, anabolitikumok és asztma kezelésében alkalmazható hatóanyagok, valamint ezek keverékei.
22. A 12-20. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol gyógyszerészetileg aktív hatóanyagként diagnosztikus szert, előnyösen olyan diagnosztikumot alkalmazunk, amely a radiokémiái kezelésben alkalmazható, illetve radioterápiában felhasználható.
···· »»·» · ·· « · · · * · • «·«···* · «·· · · · · · ·· · ·· » ·»··
-4523. A 12-22. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a fenti nano-részecskék cél helyre történő áramlásának közegeként a kezelt emlősben az adagolás után vizet, fiziológiailag elfogadható vizes oldatokat, amelyek sókat és/vagy puffereket tartalmazó vagy bármely más emlős kezelésében alkalmazható oldatot alkalmazunk.
24. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti hatóanyag célba juttatására alkalmas rendszer, amelyet gyógyszerészeiben alkalmazunk.
25. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti hatóanyagot célba juttató rendszer alkalmazása, amelyet egy vagy több gyógyszerészetileg aktív hatóanyag szállítására a vér-agy gáton keresztül emlősben, előnyösen emberben alkalmazunk.
26. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti hatóanyag célba juttatására alkalmas rendszer, amelyet gyógyszer előállítására, amely gyógyszer valamely emlős központi idegrendszerében valamely farmakológiai hatást fejt ki alkalmazunk.
27. A 26. igénypont szerinti alkalmazási eljárás gyógyszer előállítására, amely emlősökben a központi idegrendszerben farmakológiai hatást fejt ki úgy, hogy az egyébként a vér-agy gáton át nem jutó farmakológiailag aktív vegyületet a megfelelő helyre juttatja, ahol ez hatását kifejti alkalmazunk.
28. A 26. igénypont szerinti alkalmazási eljárás gyógyszer előállítására, amely valamely emlős központi idegrendszerében farmakológiai hatást fejt ki úgy, hogy az egyébként farmakológiailag nem elegendő hatású mennyiségben a vér-agy gáton áthaladó farmakológiailag aktív vegyület megfelelő mennyiségének hatását biztosítja.
aaaa aaaa aa «a aa « a a · · · • aaaa ··« a aa a ·· · aaaa
-4629. A 26-28. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás gyógyszer előállí tására, amely orális vagy intravénás adagolásra alkalmas.
30. A 26-29. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a kezelt emlős ember.
HU9602356A 1994-02-28 1995-02-28 Drug targeting system, method for preparing same and its use HUT75469A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US20332694A 1994-02-28 1994-02-28

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9602356D0 HU9602356D0 (en) 1996-10-28
HUT75469A true HUT75469A (en) 1997-05-28

Family

ID=22753510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9602356A HUT75469A (en) 1994-02-28 1995-02-28 Drug targeting system, method for preparing same and its use

Country Status (10)

Country Link
US (1) US6117454A (hu)
EP (1) EP0740548B1 (hu)
JP (1) JP2930421B2 (hu)
AT (1) ATE228832T1 (hu)
AU (1) AU1947395A (hu)
CA (1) CA2184242C (hu)
DE (1) DE69529054T2 (hu)
ES (1) ES2188652T3 (hu)
HU (1) HUT75469A (hu)
WO (1) WO1995022963A1 (hu)

Families Citing this family (115)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5827819A (en) 1990-11-01 1998-10-27 Oregon Health Sciences University Covalent polar lipid conjugates with neurologically active compounds for targeting
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
US7425543B2 (en) * 1992-11-16 2008-09-16 The Corporation Of Mercer University Microencapsulated materials and method of making same
WO1996020698A2 (en) * 1995-01-05 1996-07-11 The Board Of Regents Acting For And On Behalf Of The University Of Michigan Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US6143037A (en) * 1996-06-12 2000-11-07 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for coating medical devices
AU3739697A (en) * 1996-07-09 1998-02-02 Johns Hopkins University, The Gene delivery system
DE19648663A1 (de) * 1996-11-14 1998-05-28 Schering Ag Flüssigkeitsgefüllte Mikropartikel mit neuem Wirkungsprinzip und deren Verwendung als Diagnostika und Therapeutika
DE19648664A1 (de) * 1996-11-14 1998-05-28 Schering Ag Wirkstoffhaltige Mikropartikel, diese enthaltende Mittel, deren Verwendung zur ultraschallgesteuerten Freisetzung von Wirkstoffen sowie Verfahren zu deren Herstellung
US7025991B2 (en) * 1997-06-13 2006-04-11 Nanodel Technologies Gmbh Drug targeting system, method of its preparation and its use
FR2771929B1 (fr) * 1997-12-09 2001-02-23 Biovector Therapeutics Utilisation dans une composition pharmaceutique pour l'administration par voie nasale de particules hydrophiles pour la delivrance d'agents actifs au systeme nerveux central
WO2000074658A1 (en) * 1999-06-02 2000-12-14 Medinova Medical Consulting Gmbh Use of drug-loaded nanoparticles for the treatment of cancers
KR20080003945A (ko) * 1999-12-23 2008-01-08 뉴로겜 인터내셔널 리미티드 대뇌 아밀로이드 혈관병증을 조절하는 화합물 및 방법
US20030152636A1 (en) * 2000-02-23 2003-08-14 Nanopharm Ag Method of treating cancer
US7640062B2 (en) 2000-05-08 2009-12-29 Brainsgate Ltd. Methods and systems for management of alzheimer's disease
US20030195707A1 (en) * 2000-05-25 2003-10-16 Schork Nicholas J Methods of dna marker-based genetic analysis using estimated haplotype frequencies and uses thereof
US20020077775A1 (en) * 2000-05-25 2002-06-20 Schork Nicholas J. Methods of DNA marker-based genetic analysis using estimated haplotype frequencies and uses thereof
CA2309575A1 (en) * 2000-05-26 2001-11-26 James E. Guillet Internally cross-linked macromolecules
DE10118852A1 (de) * 2001-04-17 2002-10-31 Fricker Gert Bdellosomen
US20030049320A1 (en) * 2000-12-18 2003-03-13 Wockhardt Limited Novel in-situ forming controlled release microcarrier delivery system
DE10164871B4 (de) * 2001-02-23 2006-08-10 Umarex Sportwaffen Gmbh & Co Kg Handfeuerwaffe
US6867275B2 (en) * 2001-03-30 2005-03-15 Rohm And Haas Company Solid media
DE10121982B4 (de) * 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
US20030096748A1 (en) * 2001-06-04 2003-05-22 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the treatment of diseases associated with signal transduction aberrations
WO2002098364A2 (en) 2001-06-06 2002-12-12 The General Hospital Corporation Magnetic-nanoparticle conjugates and methods of use
JP2005511012A (ja) * 2001-08-10 2005-04-28 セローノ ジェネティクス インスティテュート ソシエテ アノニム ヒトｃＤＮＡおよびタンパク質およびその使用
AU2002364701B8 (en) * 2001-11-20 2006-06-22 Alkermes, Inc. Compositions for sustained action product delivery
US7763663B2 (en) * 2001-12-19 2010-07-27 University Of Massachusetts Polysaccharide-containing block copolymer particles and uses thereof
EP1498116A1 (en) * 2002-03-20 2005-01-19 Hosokawa Micron Corporation Method of manufacturing chemical-containing composite particles
US7684859B2 (en) 2002-04-25 2010-03-23 Brainsgate Ltd. Stimulation of the OTIC ganglion for treating medical conditions
JP4668611B2 (ja) * 2002-05-31 2011-04-13 タイタン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ブプレノルフィンの持続放出のための埋め込み型ポリマー製装置
US7074893B2 (en) * 2002-06-03 2006-07-11 Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the treatment of diseases associated with signal transduction aberrations
JP2006500015A (ja) * 2002-07-29 2006-01-05 ナノデル テヒノロギーズ ゲーエムベーハー 標的器官へのｄｎａ投与のためのナノ粒子の使用
US7112620B2 (en) * 2002-10-18 2006-09-26 Albright Robert L Hemocompatible polymer systems & related methods
AU2003283786A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Brainsgate Ltd. Surgical tools and techniques for stimulation
PL1610791T3 (pl) * 2003-03-31 2011-07-29 Titan Pharmaceuticals Inc Wszczepialne urządzenie polimerowe do przedłużonego uwalniania agonisty dopaminy
FR2854072B1 (fr) * 2003-04-23 2006-08-04 Centre Nat Rech Scient Vecteur pour administration par voie orale
US20050074506A1 (en) * 2003-10-02 2005-04-07 Brainsgate Ltd. Targeted release of nitric oxide in the CNS circulation for modulating the BBB and treating disorders
US20050084513A1 (en) * 2003-10-21 2005-04-21 Board Of Regents Nanocoating for improving biocompatibility of medical implants
US8642455B2 (en) * 2004-02-19 2014-02-04 Matthew R. Robinson High-throughput printing of semiconductor precursor layer from nanoflake particles
US8372734B2 (en) 2004-02-19 2013-02-12 Nanosolar, Inc High-throughput printing of semiconductor precursor layer from chalcogenide nanoflake particles
US8846141B1 (en) 2004-02-19 2014-09-30 Aeris Capital Sustainable Ip Ltd. High-throughput printing of semiconductor precursor layer from microflake particles
US8309163B2 (en) * 2004-02-19 2012-11-13 Nanosolar, Inc. High-throughput printing of semiconductor precursor layer by use of chalcogen-containing vapor and inter-metallic material
US8623448B2 (en) * 2004-02-19 2014-01-07 Nanosolar, Inc. High-throughput printing of semiconductor precursor layer from chalcogenide microflake particles
US7306823B2 (en) * 2004-09-18 2007-12-11 Nanosolar, Inc. Coated nanoparticles and quantum dots for solution-based fabrication of photovoltaic cells
US8329501B1 (en) 2004-02-19 2012-12-11 Nanosolar, Inc. High-throughput printing of semiconductor precursor layer from inter-metallic microflake particles
US8010189B2 (en) * 2004-02-20 2011-08-30 Brainsgate Ltd. SPG stimulation for treating complications of subarachnoid hemorrhage
US8055347B2 (en) 2005-08-19 2011-11-08 Brainsgate Ltd. Stimulation for treating brain events and other conditions
US9233245B2 (en) 2004-02-20 2016-01-12 Brainsgate Ltd. SPG stimulation
ITTO20040124A1 (it) * 2004-03-01 2004-06-01 Medestea Internaz Srl Nuovi impieghi in terapia di derivati di n-piperidina particolarmente per il trattamento di patologie neurodegenerative
RU2363493C2 (ru) * 2004-04-05 2009-08-10 Басф Акциенгезельшафт Содержащие действующие вещества полимерные частицы
WO2006010083A2 (en) * 2004-07-08 2006-01-26 Molecular Therapeutics, Inc. Biodegradable nanoparticles
ATE419842T1 (de) * 2004-09-14 2009-01-15 Nanodel Technologies Gmbh Abgabevehikel mit nanoteilchen
EP1661559A1 (en) * 2004-11-25 2006-05-31 NanoDel Technologies GmbH Delivery vehicle manufactured by the miniemulsion method
CN101090711A (zh) * 2004-10-29 2007-12-19 哈佛学院校长同事会 治疗肺部感染的颗粒
WO2006056362A2 (en) * 2004-11-25 2006-06-01 Nanodel Technologies Gmbh Delivery vehicle manufactured by the miniemulsion method
ES2326724B1 (es) * 2005-07-15 2010-05-11 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Nuevas formulaciones de compuestos de pirazolina sustituidos.
EP1743643A1 (en) * 2005-07-15 2007-01-17 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. New formulations of substituted pyrazoline compounds
JP5295769B2 (ja) 2005-08-31 2013-09-18 ティツー・バイオシステムズ・インコーポレーテッド 分析物を検出するためのｎｍｒ装置
US9486408B2 (en) 2005-12-01 2016-11-08 University Of Massachusetts Lowell Botulinum nanoemulsions
US8197258B2 (en) 2005-12-15 2012-06-12 Posit Science Corporation Cognitive training using face-name associations
US8215961B2 (en) 2005-12-15 2012-07-10 Posit Science Corporation Cognitive training using visual sweeps
DE102006013531A1 (de) * 2006-03-24 2007-09-27 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Polylactid-Nanopartikel
US20070231360A1 (en) * 2006-03-28 2007-10-04 Minu, L.L.C. Neural conduit agent dissemination
US20080019921A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-24 Invitrogen Corporation Uniform fluorescent microsphere with hydrophobic surfaces
US20080090897A1 (en) 2006-08-11 2008-04-17 The Johns Hopkins University Compositions and methods for neuroprotectin
US7773097B2 (en) 2006-10-05 2010-08-10 Posit Science Corporation Visual emphasis for cognitive training exercises
US8946200B2 (en) * 2006-11-02 2015-02-03 Southwest Research Institute Pharmaceutically active nanosuspensions
US8849372B2 (en) * 2006-11-22 2014-09-30 The General Hospital Corporation Method for magnetic resonance imaging using stimulus induced rotary saturation with a contrast agent
US7540615B2 (en) 2006-12-15 2009-06-02 Posit Science Corporation Cognitive training using guided eye movements
US9114127B2 (en) * 2007-05-15 2015-08-25 Richard C. K. Yen Biologic devices for hemostasis
US8802184B2 (en) * 2007-05-30 2014-08-12 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Medical devices containing biobeneficial particles
WO2009026164A1 (en) 2007-08-17 2009-02-26 The General Hospital Corporation Magnetic resonance-based viscometers and methods
US20090061009A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Joseph Schwarz Composition and Method of Treatment of Bacterial Infections
US7860569B2 (en) 2007-10-18 2010-12-28 Brainsgate, Ltd. Long-term SPG stimulation therapy for prevention of vascular dementia
EP2070521A1 (en) 2007-12-10 2009-06-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Surface-modified nanoparticles
TW200932223A (en) * 2007-12-13 2009-08-01 Univ Kyushu Nat Univ Corp Drug-containing nanoparticles
US8404850B2 (en) * 2008-03-13 2013-03-26 Southwest Research Institute Bis-quaternary pyridinium-aldoxime salts and treatment of exposure to cholinesterase inhibitors
AU2009245783A1 (en) * 2008-05-06 2009-11-12 Glaxo Group Limited Encapsulation of biologically active agents
WO2009137109A1 (en) * 2008-05-08 2009-11-12 Rutgers, The State University Endorphin therapy compositions and methods
US20120114706A1 (en) * 2008-05-08 2012-05-10 Dipak Kumar Sarkar Endorphin Therapy Compositions and Methods of Use Thereof
US8722706B2 (en) * 2008-08-15 2014-05-13 Southwest Research Institute Two phase bioactive formulations of bis-quaternary pyridinium oxime sulfonate salts
US10004790B2 (en) 2008-09-29 2018-06-26 The Corporation Of Mercer University Nanospheres encapsulating bioactive material and method for formulation of nanospheres
US11524058B2 (en) 2008-09-29 2022-12-13 The Corporation Of Mercer University Oral dissolving films containing microencapsulated vaccines and methods of making same
US9149441B2 (en) 2008-09-29 2015-10-06 The Corporation Of Mercer University Nanospheres encapsulating bioactive material and method for formulation of nanospheres
US10463608B2 (en) 2008-09-29 2019-11-05 The Corporation Of Mercer University Microneedle-based transdermal delivery system and method of making same
US8309134B2 (en) * 2008-10-03 2012-11-13 Southwest Research Institute Modified calcium phosphate nanoparticle formation
WO2010040173A1 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation A method of delivering functional agents across the blood-brain barrier
DK2419732T3 (da) * 2009-04-15 2019-12-16 Abraxis Bioscience Llc Prionfrie nanopartikelsammensætninger og fremgangsmåder
AU2010254551B2 (en) 2009-05-27 2016-10-20 Selecta Biosciences, Inc. Immunomodulatory agent-polymeric compounds
US9028873B2 (en) * 2010-02-08 2015-05-12 Southwest Research Institute Nanoparticles for drug delivery to the central nervous system
CA2798739A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Selecta Biosciences, Inc. Nanocarrier compositions with uncoupled adjuvant
BRPI1002601E2 (pt) * 2010-06-01 2020-06-30 Embrapa Pesquisa Agropecuaria composição nanoestruturada de uso veterinário para administração de fármacos
WO2012039979A2 (en) * 2010-09-10 2012-03-29 The Johns Hopkins University Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain
RU2475233C2 (ru) * 2010-12-01 2013-02-20 Учреждение Российской академии наук Институт кристаллографии им. А.В. Шубникова РАН Фармакологическая композиция, предназначенная для интраназального введения с целью доставки в мозг фармакологически активного компонента, и способ ее получения
JP5725884B2 (ja) * 2011-01-27 2015-05-27 理研ビタミン株式会社 経口用製剤
JP6422773B2 (ja) 2011-04-29 2018-11-14 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＳｅｌｅｃｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． 細胞傷害性ｔリンパ球応答を低下させる寛容原性合成ナノキャリア
JP2014521687A (ja) 2011-07-29 2014-08-28 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 体液性および細胞傷害性ｔリンパ球（ｃｔｌ）免疫応答を生成する合成ナノキャリア
US9149426B2 (en) * 2012-02-15 2015-10-06 University Of Tennessee Research Foundation Nanoparticle composition and methods to make and use the same
WO2013166487A1 (en) 2012-05-04 2013-11-07 Yale University Highly penetrative nanocarriers for treatment of cns disease
JP6182540B2 (ja) * 2012-12-21 2017-08-16 株式会社 先端医療開発 組成物及び飲食物
US9308446B1 (en) 2013-03-07 2016-04-12 Posit Science Corporation Neuroplasticity games for social cognition disorders
CA2904143A1 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Cephalon, Inc. Nanoparticulate and macroparticulate formulations
US9561192B2 (en) * 2013-06-28 2017-02-07 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Compositions and methods for diagnosing or treating neutrophil-mediated inflammatory disease
WO2015042170A1 (en) 2013-09-17 2015-03-26 Wayne State University Compositions and uses of combinations of dim-related indoles and selected anti-androgen compounds
US9675796B2 (en) 2013-11-10 2017-06-13 Brainsgate Ltd. Implant and delivery system for neural stimulator
KR101576204B1 (ko) * 2014-03-04 2015-12-09 서울대학교산학협력단 PoP 나노구조체 및 이를 이용한 약물 전달 방법
KR101635373B1 (ko) * 2014-08-20 2016-07-04 연세대학교 산학협력단 공액 고분자 나노 입자 및 이의 제조 방법
PT3229843T (pt) 2014-11-25 2020-03-06 Curadigm Sas Composição farmacêutica, a sua preparação e as suas utilizações
US10271907B2 (en) 2015-05-13 2019-04-30 Brainsgate Ltd. Implant and delivery system for neural stimulator
TW201705977A (zh) 2015-05-28 2017-02-16 奈諾生技公司 作為治療疫苗之奈米顆粒
US11628208B2 (en) 2015-10-05 2023-04-18 The Corporation Of Mercer University System and method for microneedle delivery of microencapsulated vaccine and bioactive proteins
WO2017062463A1 (en) 2015-10-05 2017-04-13 The Corporation Of Mercer University Nanospheres encapsulating bioactive material and method for formulation of nanospheres
CN117731591A (zh) 2016-11-21 2024-03-22 艾里奥治疗公司 大试剂的透皮递送
US20220041595A1 (en) 2020-07-28 2022-02-10 Jazz Pharmaceuticals Ireland Limited Chiral synthesis of fused bicyclic raf inhibitors
CA3187514A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Andrew BELFIELD Fused bicyclic raf inhibitors and methods for use thereof

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3957662A (en) * 1972-08-08 1976-05-18 Hoffmann-La Roche Inc. Pharmaceutical lubricants
US4107288A (en) * 1974-09-18 1978-08-15 Pharmaceutical Society Of Victoria Injectable compositions, nanoparticles useful therein, and process of manufacturing same
JPS5756423A (en) * 1980-09-19 1982-04-05 Akio Hagiwara Agent for local administration
US4880816A (en) * 1982-05-18 1989-11-14 University Of Florida Brain-specific delivery of dopamine utilizing dihydropyridine/pyridinium salt-type redox carriers
US5187158A (en) * 1982-05-18 1993-02-16 University Of Florida Brain-specific drug delivery
GB8601100D0 (en) * 1986-01-17 1986-02-19 Cosmas Damian Ltd Drug delivery system
US4801575A (en) * 1986-07-30 1989-01-31 The Regents Of The University Of California Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US4902505A (en) * 1986-07-30 1990-02-20 Alkermes Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
AU610083B2 (en) * 1986-08-18 1991-05-16 Clinical Technologies Associates, Inc. Delivery systems for pharmacological agents
US5320906A (en) * 1986-12-15 1994-06-14 Vestar, Inc. Delivery vehicles with amphiphile-associated active ingredient
FR2634397B2 (fr) * 1986-12-31 1991-04-19 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une proteine sous forme de nanoparticules
US4883666A (en) * 1987-04-29 1989-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery system for treatment of neural disorders
US5004697A (en) * 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
AU2800689A (en) * 1987-11-18 1989-06-14 State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon Health Sciences University Differential delivery of therapeutic agents across the blood brain barrier
US4866042A (en) * 1987-11-18 1989-09-12 Neuwelt Edward A Method for the delivery of genetic material across the blood brain barrier
US5017566A (en) * 1987-12-30 1991-05-21 University Of Florida Redox systems for brain-targeted drug delivery
US4933324A (en) * 1988-02-26 1990-06-12 Shashoua Victor E Fatty acid-neuroactive drug conjugate as a prodrug
US4939174A (en) * 1988-02-26 1990-07-03 Shashoua Victor E Appetite suppression with dopamine-fatty acid conjugates
US5271945A (en) * 1988-07-05 1993-12-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Sustained release microcapsule for water soluble drug
US5059415A (en) * 1989-02-21 1991-10-22 The State Of Oregon Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon Health Method for diagnostically imaging lesions in the brain inside a blood-brain barrier
US5019400A (en) * 1989-05-01 1991-05-28 Enzytech, Inc. Very low temperature casting of controlled release microspheres
US5154924A (en) * 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US5182107A (en) * 1989-09-07 1993-01-26 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
CA2025907A1 (en) * 1989-09-21 1991-03-22 Franklin D. Collins Method of transporting compositions across the blood brain barrier
US5260210A (en) * 1989-09-27 1993-11-09 Rubin Lee L Blood-brain barrier model
CA2080376A1 (en) * 1990-04-13 1991-10-14 Alexander Tomasz Methods and compositions for reversibly permeabilizing the blood brain barrier
US5268164A (en) * 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
US5112596A (en) * 1990-04-23 1992-05-12 Alkermes, Inc. Method for increasing blood-brain barrier permeability by administering a bradykinin agonist of blood-brain barrier permeability
GB9016885D0 (en) * 1990-08-01 1990-09-12 Scras Sustained release pharmaceutical compositions
GB2246514B (en) * 1990-08-01 1993-12-15 Scras Sustained release pharmaceutical compositions and the preparation of particles for use therein
IT1243390B (it) * 1990-11-22 1994-06-10 Vectorpharma Int Composizioni farmaceutiche in forma di particelle atte al rilascio controllato di sostanze farmacologicamente attive e procedimento per la loro preparazione.
US5260308A (en) * 1991-11-06 1993-11-09 Mayo Foundation For Medical Education And Research Method to increase permeability of the blood-nerve/brain barriers to proteins
GB9216082D0 (en) * 1992-07-28 1992-09-09 Univ Nottingham Lymphatic delivery composition

Also Published As

Publication number Publication date
WO1995022963A1 (en) 1995-08-31
DE69529054D1 (de) 2003-01-16
JP2930421B2 (ja) 1999-08-03
ES2188652T3 (es) 2003-07-01
CA2184242A1 (en) 1995-08-31
DE69529054T2 (de) 2003-08-21
EP0740548A1 (en) 1996-11-06
EP0740548B1 (en) 2002-12-04
JPH09506109A (ja) 1997-06-17
ATE228832T1 (de) 2002-12-15
HU9602356D0 (en) 1996-10-28
CA2184242C (en) 2000-05-02
AU1947395A (en) 1995-09-11
US6117454A (en) 2000-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT75469A (en) Drug targeting system, method for preparing same and its use
US7025991B2 (en) Drug targeting system, method of its preparation and its use
Kumar Malik et al. Recent advances in protein and peptide drug delivery systems
US5543158A (en) Biodegradable injectable nanoparticles
US7550441B2 (en) Controlled release polymer nanoparticle containing bound nucleic acid ligand for targeting
Bala et al. PLGA nanoparticles in drug delivery: the state of the art
Gupta et al. Albumin microspheres I: physico-chemical characteristics
US20030059465A1 (en) Stabilized nanoparticle formulations of camptotheca derivatives
JP2008513363A (ja) ナノ粒子を含む送達媒体
EP1353701A2 (en) Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules
AU2002220002A1 (en) Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules
EP1423095A1 (en) Lipidated glycosaminoglycan particles and their use in drug and gene delivery for diagnosis and therapy
PL196159B1 (pl) Matryca polimeryczna do dostarczania środka terapeutycznego albo profilaktycznego, sposób wytwarzania matrycy polimerycznej do dostarczania terapeutycznego albo profilaktycznego czynnika i sposób przygotowania terapeutycznego albo profilaktycznego środka z wykorzystaniem matrycy polimerycznej
WO2003000237A2 (en) Biodegradable polymer coompositions
JP2009525298A (ja) 薬物送達用に設計されたナノ粒子
Periyasamy et al. Nanomaterials for the local and targeted delivery of osteoarthritis drugs
US20030152636A1 (en) Method of treating cancer
Thakur et al. Recent trends in targeted drug delivery
Lobenberg Smart materials: applications of nanotechnology in drug delivery and drug targeting
AU9725898A (en) Drug targeting system, method for preparing same and its use
Dube et al. Nanocarriers for drug targeting to macrophages: emerging options for a therapeutic need
KR20010013745A (ko) 약물 전달 시스템, 그의 제조방법 및 그의 용도
WO1995000126A1 (en) Surface-modified albumin microspheres and pharmaceutical compositions containing them
Manikkavasagan Formulation and evaluation of polymeric nanoparticles of felodipine
Gaikwad et al. A DETAILED REVIEW ON TARGETED DRUGS DILIVERY SYSTEM

Legal Events

Date Code Title Description
DFD9 Temporary protection cancelled due to non-payment of fee