HUT69935A - Vaccines containing non-ionic surfactant vesicles - Google Patents
Vaccines containing non-ionic surfactant vesicles Download PDFInfo
- Publication number
- HUT69935A HUT69935A HU9402904A HU9402904A HUT69935A HU T69935 A HUT69935 A HU T69935A HU 9402904 A HU9402904 A HU 9402904A HU 9402904 A HU9402904 A HU 9402904A HU T69935 A HUT69935 A HU T69935A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antigen
- vaccine
- vesicles
- vesicle
- nisv
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 61
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 title claims description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 93
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 93
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 92
- 239000002353 niosome Substances 0.000 claims description 69
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 39
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 19
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 11
- -1 glycerol ester Chemical class 0.000 claims description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 6
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecoxyhexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCCCCCC FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 claims description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 claims description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 4
- OOWQBDFWEXAXPB-UHFFFAOYSA-N 1-O-palmitylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OOWQBDFWEXAXPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 3
- QHZLMUACJMDIAE-UHFFFAOYSA-N 1-monopalmitoylglycerol Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO QHZLMUACJMDIAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims 2
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 claims 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 claims 1
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 claims 1
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 claims 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 claims 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims 1
- RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-N glyceric acid Chemical compound OCC(O)C(O)=O RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 36
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 36
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 36
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 18
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 16
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 15
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 11
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 9
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N dicetyl hydrogen phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCC RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940093541 dicetylphosphate Drugs 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 4
- 210000000059 tachyzoite Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000010408 film Substances 0.000 description 3
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 230000016379 mucosal immune response Effects 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical group 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 208000001951 Fetal Death Diseases 0.000 description 2
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 231100000479 fetal death Toxicity 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000001592 luteinising effect Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- 230000007332 vesicle formation Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- IGACZQNUZMBGFX-AQJXLSMYSA-N 2-[[(2s)-1-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-3-hydroxy-2-[[(2s)-2-[[(2s)-3-(1h-imidazol-5-yl)-2-[[(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)p Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 IGACZQNUZMBGFX-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- HJDNZFIYILEIKR-OSUNSFLBSA-N Arg-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HJDNZFIYILEIKR-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- GWWSUMLEWKQHLR-NUMRIWBASA-N Asp-Thr-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O GWWSUMLEWKQHLR-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N Glu-Ser-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Leu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- XEUCQOBUZPQUMQ-UHFFFAOYSA-N Glycolone Chemical compound COC1=C(CC=C(C)C)C(=O)NC2=C1C=CC=C2OC XEUCQOBUZPQUMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWIULCYKVGIOPW-UHFFFAOYSA-N Glycolone Natural products CCOC1=C(CC=CC)C(=O)N(C)c2c(O)cccc12 UWIULCYKVGIOPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- UZHDGDDPOPDJGM-UHFFFAOYSA-N Stigmatellin A Natural products COC1=CC(OC)=C2C(=O)C(C)=C(CCC(C)C(OC)C(C)C(C=CC=CC(C)=CC)OC)OC2=C1O UZHDGDDPOPDJGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- DWUKDLDCVCAOSH-ZNMBFMROSA-N [(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimethyl-17-[(2R)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] dihexadecyl phosphate Chemical compound P(=O)(OCCCCCCCCCCCCCCCC)(OCCCCCCCCCCCCCCCC)O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@]2(CC1)C)C)[C@H](C)CCCC(C)C DWUKDLDCVCAOSH-ZNMBFMROSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- FXAGBTBXSJBNMD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O FXAGBTBXSJBNMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 210000004727 amygdala Anatomy 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003976 glyceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C(O[H])([H])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 108010084264 glycyl-glycyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 239000002434 gonadorelin derivative Substances 0.000 description 1
- 230000033687 granuloma formation Effects 0.000 description 1
- LPTIRUACFKQDHZ-UHFFFAOYSA-N hexadecyl sulfate;hydron Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O LPTIRUACFKQDHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/45—Toxoplasma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
- C12N2760/18422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
- Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
- Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
- Y10T428/2984—Microcapsule with fluid core [includes liposome]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Virology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
A találmány tárgya vakcinákkal kapcsolatos fejlesztések, közelebbről, új adjuváns, például szintetikus antigéneket tartalmazó vakcinákban való alkalmazásra.
Sok hatásos humán és emlős vakcinában alkalmaznak legyengített kórokozókat. A patogének okozta fertőzések teljes skálájával végzett újabb kutatásokkal megfelelően védő hatású, fajspecifikus antigéneket azonosítottak, melyek rekombináns
DNS-technikákkal és tökéletesített tenyésztési, begyűjtési és tisztítási technikákkal nagy tömegben állíthatók elő. Napjainkban teljesen szintetikus peptid antigének is előállíthatok, amelyek a természetes antigén lényeges epitópjait utánozzák. Az alegység vakcinák olyan vakcinák, amelyek a kórokozó csak bizonyos alegységeit tartalmazzák, vagyis antigén tulajdonságú proteineket vagy egyedi peptid epitőpokat foglalnak magukban. A megfelelő peptidek számítógépes modellező technikákkal tervezhetők meg. Az ilyen szintetikus antigéneknek számos előnyük van, beleértve a tisztaságot, a stabilitást, a nagyfokú védettség elérhetőségét, a specifitást és a kórokozó tulajdonságok (melyek a legyengített kórokozókat tartalmazó vakcinák esetén időnként tapasztalhatók) garantált hiányát.
A kis molekulátömegű antigének, akár kémiai szintézissel, akár rekombináns technikákkal állították elő, önmagukban alacsony antigén hatást mutatnak; általában gyenge immunreakció stimulátorok. Immunogén hatásuk gyakran még hordozó proteinnel — mint pl. a tuberkulin tisztított protein származékával (PPD) — összekapcsolva is elégtelen az adekvát reakció kiváltásához.
Ez a probléma adjuvánsok alkalmazásával megoldható, az ilyen adjuvánsok azonban további nehézségeket vetnek fel. Emberek esetében jelenleg az alumínium-hidroxid az egyetlen alkalmazásra engedélyezett adjuváns. Az alumínium-hidroxid azonban nem mindegyik antigén esetében megfelelő, mivel nem fokozza a sejt-közvetített (sejtes) immunitást (CMI), amely ahhoz, hogy egy vakcina az intracelluláris patogének (mint a Leishmania és a Toxoplasma) ellen hatásos legyen, kulcsfontosságú Jellemző. A Freund-féle komplett adjuváns (FCA) stimulálja a sejtes immunitást, de humán vagy emlős alkalmazáshoz nem megfelelő, mivel granulómák, adhéziók és más toxikus mellékhatások kialakulását okozza. Az FCA helyi gyulladásos reakciót is okoz, amely hónapokig eltarthat. Sürgősen szükség van új, nem toxikus adjuvánsokra, melyek elősegítik a sejtes immunitást (CMI), lehetőleg olyan szinten, mint amilyen az FCA-val tapasztalható. Az ilyen adjuvánsok valójában akkor kulcsfontosságúak, ha az alegység vakcinák teljes hatására szükség van.
Felfedeztük, hogy az antigént magukba záró, nem ionos felületakt ív anyagból álló vezikulák (NISV) hatásos immunológiai adjuvánsokként működnek, még olyan, rövidebb peptid antigénekkel is, amelyek önmagukban gyenge immunreakciót váltanak ki. A nem ionos felületaktív anyagból álló vezikulákat gyógyszerek, például daganat a · ellenes szerek (mint a metotrexát és a doxorubicin) vivőanyagaiként Javasolták. Nincs tudomásunk arról, hogy elismerték volna a NISV antigénekre adott immunreakciót nagymértékben elősegítő hatását (még olyan esetben is, amikor az antigén önmagában minimális reakciót vált ki, mint pl. a peptid antigének esetében).
Ilyenformán, a találmány egyik tárgya legalább egy antigént, elsősorban szintetikus vagy rekombináns eredetű peptidet nem ionos felületaktív anyagból álló vezikulába (NISV) zárva tartalmazó vakcina.
A találmány másik adott immunreakciö tárgya eljárás legalább egy antigénre elősegítésére emlősben vagy nem emlős állatban, melynek során az említett NISV-be zárt, legalább egy antigént adjuk be a páciensnek.
A találmány további tárgya eljárás vakcina előállítására, melynek során NISV-be legalább egy antigént, például szintetikus vagy rekombináns eredetű peptid antigént zárunk.
A NISV kialakításához alkalmazott nem ionos felületaktív anyag bármely, megfelelő felületaktív tulajdonsággal rendelkező, gyógyszerészetilég megfelelő anyag lehet. Ezen anyagok előnyben részesített példái a glicerin-észterek. A glicerin-észterek tartalmazhatnak egy vagy két hosszabb alifás acilcsoportot, például minden egyes acilcsoportban legalább 10 szénatomot tartalmazva. A glicerin-monoészterek az előnyben részesítettek, különösen azok, amelyek 12-20 szénatomos alkanoil vagy alkenoil csoportot, például kaproil-, lauroil-, mirisztoil-, palmitoil-, öleli- vagy sztearoilcsoportot tartalmaznak. Különösen előnyben részesített felületaktív anyag az 1-monopalmitoll-gllcerin.
Az éter kötésű felületaktív anyagok szintén alkalmazhatók a találmány szerinti NISV kialakításához való, nem ionos felületaktív anyagokként. Az ilyen anyagok előnyben részesített példái a glicerinen vagy glikolon, lehetőleg maximálisan négy szénatomot tartalmazó, kis szénatomszámú alifás glikolon, leginkább az etilén-glikolon alapuló éter kötésű felületaktív anyagok. Az ilyen glikolokon alapuló felületaktív anyagok tartalmazhatnak egynél több glikol egységet, előnyösen maximum ötöt, leginkább kettőt-hármat, például a diglikol-cetil-éter vagy a polioxi-etilén-3lauril-éter. ELőnyben részesítettek a glikol- vagy glicerinmonoéterek, különösen a 12-20 szénatomos alkanil- vagy alkenilcsoportot, például kapril-, lauril-, mirisztil-, oleil- vagy sztearilcsoportot tartalmazók.
A találmányban alkalmazható etilén-oxid kondenzációs termékek közé tartoznak a W088/06882 számú nemzetközi közrebocsátási iratban leírtak, vagyis a polioxi-etilén nagy szénatomszámú alifás éter és amin felületaktív anyagok. A különösen előnyben részesített éter kötésű felületaktív anyagok az 1-monocetil-glicerin-éter és a diglikol-cetiléter. A találmányban való alkalmazhatóság szempontjából gyógyszerészetileg megfelelő anyagok kiválasztása szükséges.
| elsősorban olyanoké, | amelyek az amlős szervezetben könnyen |
| lebonthatók. Emiatt | az injektálással (akár szubkután, |
| intramuszkulárisan, | intradermálisan vagy intra- |
peritoneálisan), illetve a nyálkahártyán keresztül (pl. orálisan, nazálisán, bronchiálisan, urogenitálisan vagy rektálisan) beadandó vezikulák kialakításához az említett glicerin-észtereket részesítjük előnyben. A beadási módok közül az orális alkalmazás a különösen előnyben részesített.
A hatékony vezikula képződéshez a nem ionos felületaktív anyagot megfelelő, nagyobb molekulatömegű hidrofób anyaggal kell keverni, amely kettősréteg kialakítására képes; elsősorban szteroiddal, pl. szterollal, mint a koleszterin. A szteroid Jelenléte elősegíti a kettősréteg kialakulását, amelytől a vezikula fizikai tulajdonságai függenek.
A NISV töltést kialakító amfifil molekulát is magában foglalhat, ami a NISV negatív töltését okozza. Ebből a célból savas anyagok, mint a nagy szénatomszámú alkar. vagy alkén savak (pl. palmitinsav, olajsav), illetve egyéb, savas csoportokat tartalmazó vegyületek, például a foszfátok, mint például a dialkil-foszfátok, előnyösen a nagy szénatcmszámú alkilcsoportokat tartalmazó dialkil-foszfátok (pl. a dicetil-foszfát, a foszfatidsav vagy a foszfatidil-szerin), valamint szolfát-monoészterek, mint a nagy szénatomszámú alkilcsoportot tartalmazó alkil-szulfátok (pl. cetilszulfát) alkalmazhatók.
A szteroid a nem ionos felületaktív anyag például 20-120 tömegszázalékát teheti ki, előnyösen 60-100 %-át. A negatív töltést eredményező amfifil anyag a nem ionos felületaktív anyag például 1-30 tömegszázalékát teheti ki.
'Λ*. yF
A töltést kialakító amfifil tulajdonságú anyag stabilizálja a vezikulák szerkezetét, és hatásos diszpergálódást biztosít.
A nem ionos felületaktív anyag és a membránképző hidrofób anyag nyiróerök alkalmazásával hidratációval alakítható nem ionos felületaktív vezikulákká. Az ilyen nyíróerők alkalmazásához való készülékek Jól ismertek, mint például a W088/06882 számú nemzetközi közrebocsátási iratban megemlített berendezés. A NISV kialakításához vagy részecskeméretének megváltoztatásához a hang- és ultrahangkezelés is hatásos módszer.
A NISV előállításának hatékony módszerét Collins és mtsi. írták le (J. Pharm. Pharmacol., 42, 53, 1990). Ez a NIS, a szteroid és (ha van) az amfifil anyag elegyének olvasztását, és vizes puffer Jelenlétében élénk keveréssel végzett hidratálását foglalja magában. A szuszpenzió ezután az olvadt állapot fenntartásához szükséges, magasabb hőmérsékleten mikropórusos polikarbonát membránon többször átpréselhető.
A NISV kialakításának másik lehetséges módja a szerves oldószerből, például szénhidrogén vagy klórozott szénhidrogén oldószerből (pl. kloroformból) történő rotációs filmlepárlás. A kapott vékony film az antigén - és tetszés szerint egy másik felületaktív anyag jelenlétében - foszfátpuff ereit sóoldatban hidratálható (Russel és Alexander, J, Immunoi., 14Q, 1274, 1988). Abban az esetben, ha az antigént a vezikulák kialakulásával egyidejűleg zárjuk a NISV-be, az extravezikuláris antigén a vezikulák szuszpenziójából ismert elválasztási technikákkal végzett mosással távolítható el, például gélfiltrálással vagy centrifugálással (ultracentrifugálással).
Az antigének az előre elkészített NISV-be a dehidratálásrehidratálás módszerrel (Kirby és Gregoriadis, Biotechnology, 2, 979, 1984) zárhatók be, melynek során a vizes fázisban lévő antigént az előre elkészített vezikulákba gyors fagyasztással, és az azt követő liofilizálással, illetve a fagyasztás-felolvasztás technikával zárják be (Pick,
Arch. Biophys., 212. 195,
1981). Ez utóbbi módszer során a vezikulákat összekeverik az antigénnel, és folyékony nitrogénben ismételten gyorsan lefagyasztják, majd 60 °C körüli hőmérsékletre melegítik (vagyis a megfelelő felületaktív anyag átmeneti hőmérséklete fölé).
A vezikulák a be nem zárt antigének eltávolítása érdekében például mosással és centrifugálással tovább kezelhetők. Meg kell jegyeznünk, eredményeink világosan mutatják, hogy a nem ionos felületaktív anyagok önmagukban nem hatásos adjuvánsok, vagyis a vezikuláris kialakítás kulcsfontosságú a kívánt hatás eléréséhez. Ha a kívánt adjuváns hatást akarjuk elérni, az antigént a NISV-be kell zárni.
Az alkalmazott antigén előnyösen szintetikus vagy rekombináns eredetű peptid, amely 8-50, lehetőleg 10-20 aminosavat tartalmaz. Az antigén például egy kórokozó organizmus egy vagy több B-seJt vagy B- és T-seJt epitópját utánozza, miáltal a vakcina a szóban forgó organizmus elleni antitestek semlegesítését váltja ki (ld. pl., a HÍV vírus szintetikus antigénjeinek leírását a W088/10267 és W091/13909 számú nemzetközi közrebocsátási iratainkban).
Más lehetőség szerint, a peptid immunreakciót válthat ki egy másik biológiailag aktív, elsősorban hormonális aktivitással rendelkező anyag ellen. Ez utóbbi kategória példája lehet az endogén luteinizáló hormont felszabadító hormon (LHRH; luteinising hormone-releasing hormoné) elleni immunreakció indukálása.
Az ilyen kezelés felhasználható például haszonállatok androgén szuppressziójához vagy immunkasztrálásához , és az androgén-érzékeny vagy ösztrogén érzékeny karcinoma kezeléséhez (ld. GB-B-2196969 számú nagybritanniai szabadalmi leírásunk). A peptid antigén NISV-be zárva gyakran önmagában elégséges immunogenitást mutat a vakcinaként való felhasználáshoz; ez főleg akkor fordul elő, ha a peptid Jól felismerhető epitópokat tartalmaz, s legalább kb. 12, előnyösen legalább 15 aminosavból áll.
Bizonyos esetekben az immunogenitás fokozása érdekében kívánatos lehet a peptidet valamilyen hordozóhoz kapcsolni. A megfelelő hordozók a tudományban jól ismertek, például a protein hordozók, mint a tuberkulin tisztított protein származéka (PPD), a tetanusz toxoid, a kolera toxin és B alegysége, az ovalbumin, a szarvasmarha szérum albumin, a szójabab tripezin inhibitor, a murami1-dipeptid és analógjai, valamint a Braun-féle lipoprotein. Hordozóként PPD-t alkalmazva magasabb antitest titer érhető el, ha az adott vakcinával kezelni kívánt páciens már tuberkulinérzékeny, például egy korábbi BCG oltás miatt.
NISV-be zárt antigén(ek) hagyományos gyógyszerészeti eljárásokkal alakítható(k) vakcinává, például steril, parenterálisan alkalmazható vizes vivőanyagban végzett szuszpendálással.
Bár a találmányban való alkalmazás szempontjából a szintetikus vagy rekombináns peptidek az előnyben részesített antigének, erős adjuváns hatás tapasztalható akkor is, ha protein antigéneket zárunk a NISV-be.
Antigénként szarvasmarha szérum albumin (BSA) alkalmazásával erősen pozitív eredményeket kaptunk, s még jelentősebb, hogy a toxoplazmózis ellen hatásos védettséget értünk el a Toxoplasma gondii feltárt sejtjeinek felülúszójával, NISV adjuváns felhasználásával végzett immunizálással.
Azt találtuk, hogy az injektálásos beadás gyakran leghatékonyabb módja a szubkután oltás, b főleg, hogy gyakran hatékonyabb lehet, mint az intraperitoneális beadás. Az intramuszkuláris és intradermális injektálás hatásos, talán azért, mert az injektálás helyén antigén raktár kialakulását eredményezi. Az injektálás helyén azonban nem tapasztalható gyulladásos reakció, ami az FCA alkalmazásával állandóan előfordul. Az injektálással történő beadás az egész szervezetre kiterjedő immunreakciót indukál, vagyis humorális és sejtes immunitást egyaránt. Az egy nyálkahártya felületen elvárható, (pl. orrnyálkahártyán) végzett immunizálástól hogy más nyálkahártya felületen (pl. a hörgők nyálkahártyáj án) okozzon nyálkahártya immunreakciót. A találmány szerinti vakcina nyálkahártyán keresztül is beadható.
A találmány egy másik meglepő és értékes jellegzetessége értelmében a NISV-be zárt antigének orálisan beadva gyakran eredményeznek megfelelő szintű immunreakciót, ögy tűnik, a NISV a béltraktusban képes megvédeni az antigént a megemésztéstől, legalábbis bizonyos mértékben, s képes azt változatlan formában átjuttatni a belek falán, miáltal olyan eredményeket biztosit, amilyenek korábban csak parenterális beadással voltak elérhetők.
A találmány tárgya ilyenformán eljárás antigén orális beadással aktív vakcinaként való kialakítására, melynek során az említett antigént NISV-be zárjuk.
A találmány szerinti vakcinák különösen előnyös tulajdonsága az a képesség, hogy pl. szintetikus peptid orális beadásával adjuváns hatás valósítható meg. Korábban a tudományban ezzel a Jellemzővel nem foglalkoztak. Az orális beadási mód a korábbi, injektálásos beadási módokhoz képest számos előnyökkel rendelkezik.
Elkerülhetők az injekciót kísérő fertőzések veszélyei, melyek például nem steril tűk használatából származnak. Azonkívül, hogy az egész szervezetre kiterjedő immunreakciót indukál, az orális alkalmazás nyálkahártya immunreakciót is indukálhat. Az nyálkahártya immunreakcióról úgy tartjuk, hogy sok kórokozó (pl. HÍV, Toxoplasma) elleni immunológiai védettség kialakításában Játszik fontos szerepet. Az orális alkalmazáshoz való készítmények alkalmazhatósága (a páciensek szempontjából) is nagyobb.
A specifikusan orális alkalmazáshoz való vakcinákként felhasznált vezikulák kialakításához az észter kötésű felületaktív anyagok az előnyben részesítettek, bár az éter kötésű felületaktív anyagok, különösen az 1-monocetilglicerin-éter és a diglikol-cetil-éter is alkalmazhatók. Az éterkötések savállóbbnak bizonyultak, mint a megfelelő észterkötések, s úgy tartjuk, hogy Jobban ellenállnak az emlősök gyomrában uralkodó savas környezetben történő lebomlásnak.
A találmány szerinti új vakcina által kiváltott immunreakció további vizsgálata meglepő módon azt mutatta, hogy az antitestek nagy hányada az IgG2a típusba tartozik, s IL-2 és IFN-gamma felszabadulásával kapcsolatos. Ezeket a citokineket a CD4+ T limfociták Thl alegysége ezekretálja. Úgy tartjuk, a magas IgG2a szint sejtes immunitás (CMI) kialakulásával áll kapcsolatban. Az alumínium-hidroxid elsősorban a Th2 sejteket serkenti, ami IgGl antitestek termelését eredményezi, a Freund-féle komplett adjuváns pedig - bár általában emelt szintű sejtes immunitással áll kapcsolatban - szintén magas és hosszan tartó IgGl titereket biztosít. A Th2 sejtek (IL-4 szekréció útján) nemcsak az IgGl, de az IgE szintézisének is primer szabályozói. Ilyenformán, a magas szintű, folyamatos IgGl termelés nem kívánatos a plazmában, mivel ez az IgE túltermelését is jelentheti. Újabb in vitro vizsgálatokkal megállapították, hogy a Thl és Th2 sejtek különböző antigén feldolgozási feltételekkel rendelkeznek. A Thl sejtek makrofágok által történő antigén prezentációt igényelnek, míg a Th2 sejteket a B-sejtek antigén prezentálása serkenti optimálisan (Gajewski és mtsi., Immunoi. Rév., III. 79, 1989; és Gajewski és mtsi., J. Immunoi., 146, 1750, 1991). Ögy tűnik, a makrofágok képesek elfogyasztani a liposzómákat, így ha a vezikula belsejébe antigént zárunk, az a Thl aktiválást és az IgG2a antitestek szintézisét fogja elősegíteni, miközben a CMI magas szintjét eredményezi.
Eredményeink azt mutatják, hogy a találmány szerinti új vakcinák képesek IgG2a titerek indukálására, melyek kezdetben magasabbak az FCA-val indukáltnál, de bizonyos
.... ... ...J • ·♦ · * · · · · · ·· w ··
- 14 idő elteltével végül összehasonlítható mértékűek az FCA-val indukálttal. Ogy tűnik, a találmány szerinti vakcinára adott kezdeti reakció - az FCA hatásával összehasonlítva - a Thl limfociták (Th2 limfocitákhoz képest) elsődleges serkentése. Eredményeink továbbá azt mutatják, hogy a találmány szerinti vakcinák alkalmazásával indukált IgGl titerek az FCA alkalmazásával elért titerekkel azonos nagyságrendűek, s ennek megfelelően, a találmány szerinti vakcinák a humorális immunitás közvetítésében is hatásosak.
Ilyenformán, a találmány további tárgya eljárás legalább egy antigént tartalmazó készítmény előállítására a Thl Tlimfocita úton keresztül történő antitest termelés serkentéséhez, melynek során az említett, legalább egy antigént NISV-be zárjuk.
A találmány szerinti antigénkészítmények a Th2 T-limfocita úton keresztül is serkentik az antitest termelést. Az antigénkészítmények kialakíthatók úgy, hogy elsősorban a Thl T-limfocita úton, s ne a Th2 T-limfocita úton keresztül serkentsék az antitestek termelését, különösen az FCA adjuváns alkalmazásával előállított antitest szintekkel összehasonlítva.
A NISV-be zárt antigénekkel végzett immunizálással kiváltott antitest titerek bizonyos esetekben magasabbak lehetnek, mint az FCA alkalmazásával elérhetők, miközben az FCA erősen toxikus mellékhatásai teljes mértékben kiküszöbölhetők.
Ilyenformán, a találmány további tárgya eljárás legalább egy antigén immunogenitásának legalább a Freund-féle komplett adjuváns alkalmazásával elérhető szintre történő fokozására, melynek során az említett, legalább egy antigént NISV-be zárjuk.
Ogy tűnik, a NISV ideális adjuváns a sejtes vagy humorális immunitást igénylő betegségek elleni vakcinákban való felhasználásban. A — különösen az éter kötésű felületaktív anyagokat tartalmazó — NISV adjuvánsként való felhasználásának másik nagy előnye az általános környezeti feltételek közötti stabilitása, nevezetesen, hogy nem bomlanak le autooxidációs reakciókkal, mint a tojás lecitinen alapuló liposzómák.
A korábbi adjuvánsokkal szemben a NISV, mint vakcinákban alkalmazható adjuváns, további fontos előnye, hogy gyakorlatilag nem toxikus. Azt találtuk, hogy az 1-monopalmitoil-glicerin-észtert tartalmazó vezikulákba zárt LHRH analóg, az LHRH-Gly-Gly (ld. EP-A-0293530 számú európai közrebocsátási iratunk) patkányokba történő intraperitoneális injektálása semmilyen toxikus mellékhatást nem okoz, s különösen olyanokat nem, mint amilyenek a Freund-féle komplett adjuváns, vagy méginkább, az alumínium gélek alkalmazása esetén gyakran előfordulnak. A tesztelt állatokban semmilyen kimutatható kóros elváltozást nem figyeltünk meg.
A fentebb említett EP-A-0293530 számú európai közrebocsátást iratban a pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-X-Leu-Arg-Pro-Gly-Y-Z képlet (melyben X vagy több jelentése Gly vagy D-aminosav, Y jelentése egy aminosav, melyek lehetnek egyformák vagy különbözők, és
Z jelentése Cys vagy Tyr) szerinti LHRH analógot írtunk azonos a natív azonosítási számú le, melynek oldat-szerkezete lényegében
LHRH-éval. Az LHRH-Gly-Cys analógot a 2.
szekvenciaként tüntetjük fel.
A találmány tárgyát képező vakcinák elsősorban emlősök számára alkalmazhatók, s így a humán és állatgyógyászat terén használhatók fel. A NISV hatásos adjuváns lehet bizonyos nem emlős vakcinák esetében is, mint például halak és szárnyasok vakcinálása esetén.
Az alábbi példákkal a NISV adjuváns tulajdonságait jellemezzük.
1. példa: Patkányok immunizálása IHRH-Gly-Cys-PPD NISV ké sz ítmennye1
A vezikulákat a nem ionos felületaktív anyag, koleszterin és dicetil-foszfát (Sigma, Poole, Dorset, UK) 5:4:1 moláris arányú elegyéből készítettük. Az összetevők anyagmennyiségét (Lanol) és tömegét (mg) az alábbi táblázatban mutatjuk be.
• · · · · • ·· · · • · · ·· · <* «
1. táblázat
| NISV Ö88Z8etétel | Mólarány | Anyagmenny. (tano 1) | Tömeg (mg) |
| 1-monopalmitoil- | 5 | 10 | 3,32 |
| glicerin | |||
| Koleszterin | 4 | 8 | 3,09 |
| Dicetil-foszfát | 1 | 2 | 1,09 |
| Összesen | 10 | 20 | 7,5 |
A vezikulákat Collins és mtsi. (ld. fentebb) technikájával alakítottuk ki, majd a vezikula készítményeket 5 percig 20’-on Mettler Electronics vízfürdős szonikátorban hangkezeltük (50 Hz, Pasadena, CA). Az antigént, a luteinizáló hormont felszabadító hormon (LHRH) analógját EP-A-0293530 számú európai közrebocsátási iratunkban írtuk le. Az antigén előre kialakított vezikulákba történő becsapdázását a Kirby és Georgiadis (Biotechnology, 2, 979, 1984) által leírt dehidratálás-rehidratálás technikával hajtottuk végre. Röviden; a vezikulák oldatának 5 ml-ét (150 umol) 1 ml, PBS-ben oldott antigénnel (0,5 mg/ml) polipropilén centrifugáló csövekben (Elkay Products Inc., Shreásbury, MA) elegyítettük, s folyékony nitrogénben keverve vékony héj formájában gyorsan lefagyasztottuk. A készítményeket ezután fagyasztva szárító berendezésben, 0,1 Hgmm nyomáson, egy éjszakán át liofilizáltuk, majd 0,5 ml desztillált vízben rehidratáltuk. A mintákat 30 percen
V.
keresztül állni hagytuk, majd desztillált vízzel 6 ml-re egészítettük ki.
a) Immunizálás LHRH-Glv-Cvs-PPD-vel. BCG immunmozgősítás és ad.iuvánsok .jelenlétében és anélkül
Hím Copenhagen Fisher Fi hibrid patkányokat intraperitoneálisan 0,2 ml, foszfát puffereit sóoldatban oldott LHRH-Gly-Cys-PPD-vel, NISV-be zárt LHRH-Gly-Cys-PPDvel, LHRH-Gly-Cys-PPD FCA-val készített emulziójával, és alumínium-hidroxidon abszorbeált LHRH-Gly-Cys-PPD-vel injekcióztunk. Az LHRH-Gly-Cys mennyisége valamennyi injekcióban, a sóoldat, az FCA/FIA és az alumínium-hidroxid esetében 50 gg, a NISV esetében pedig 5 ug volt.
Az LHRH-Gly-Cys-PPD konjugátummal végzett oltás előtt négy héttel a patkányok négy csoportjának BCG oltást adtunk. A konjugátummal két hetes időközönként összesen négy injekciót adtunk.
Anti-LHRH antitest meghatározás
A két hetes időközönként vett vérplazma mintákat ELISA módszerrel vizsgáltuk az anti-LHRH antitestekre. A 96 üregű, szövettenyészeti minőségű mikrotiter lemezeket 0,1 pg/üreg mennyiségben LHRH-Gly-Cys-BSA-val (PBS-ben; pH = 7,2) fedtük be, és 37 “C-on egy órán keresztül inkubáltuk. Az üregeket háromszor PBS/0,1 % Tween pufferrel mostuk, majd 37 ’C-on
egy órán keresztül 200 pl %-os
Marve1/Tween eléggyel rögzítettük. Az üregeket a fentiek szerint mostuk, és
PBS-ben hígított pl-es mintákat adtunk hozzájuk (két példányban). A mintákat 37 ’C-on egy órán keresztül inkubáltuk, majd az üregeket a fentiek szerint mostuk.
·*' '«A-.··
Minden üregbe PBS-ben 1:5000 arányban hígított, 50 μΐ torma peroxidáz/kecske anti-patkány IgG konjugátum alikvotot adtunk, 37 °C-on 45 percig inkubáltuk, majd ismét a fentiek szerint mostuk. A szubsztrát oldatot úgy készítettük, hogy 25 ml 0,1 M acetát-citrát pufferhez (pH = 5,5) 4 pl hidrogén-peroxidot, és 250 pl, dimetil-szulfoxidban készített tetrametil-benzidin törzsoldatot (6 mg/ml) adtunk.
Minden üregbe 100 pl szubsztrátot adtunk, majd szobahőmérsékleten, sötétben 5 percig inkubáltuk. A reakciót 10 V/V %-os kénsav hozzáadásával állítottuk le, s 450 nm-nél mértük az abszorbanciát. Az ELISA vizsgálat eredményeit a pozitív kontoll százalékaként fejezzük ki. A vizsgálatok alatt konstans standardot használtunk, hogy lehetővé tegyük a minták közötti és mintákon belüli összehasonlításokat. A konstans standardot számos, FCA-ban LHRH-Gly-Cys-PPD-vel immunizált patkányból származó összegyűjtött szérum alkotja.
A pozitív kontroll értékét önkényesen 100 %-nak választottuk.
Eredmények
Az ELISA vizsgálat eredményeit az 1. és 2. ábrán mutatjuk ···: .··, ···: *··; ·«·*· ♦
be. Az 1. ábrán a sóoldatban (A), nioszómákban (B), Freund-féle komplett és inkomplett adjuvánsban (C), illetve alumínium-hidroxidban (D) adott LHRH-Gly-Cys-PPD konjugátummal immunizált Copenhagen Fisher hím patkányok antitest reakcióit mutatjuk be. Bár az LHRH-Gly-Cys-re adott antitest reakciók az FCA/FIA vagy az alumínium-hidroxid alkalmazása esetén nagyobbnak tűnnek, az ezen adjuvánsokkal beadott peptid mennyisége a NISV-be zártnak tízszerese, ilyenformán, úgy látszik, a NISV kisebb mennyiségű peptid konjugátum hatásfokozásában hatékonyabb, mint akár az alumínium-hidroxid, akár az Freund-féle komplett adjuváns. A
2. ábrán a BCG immunmozgósítás LHRH-Gly-Cys-PPD konjugátumra adott antitest reakcióra gyakorolt hatását mutatjuk be.
Immunmozgósítással és anélkül hasonló nagyságú immunreakció tapasztalható. Az FCA és az alumínium-hidroxid alkalmazása esetén ismét magasabb antitest szintek láthatók, az ezen adjuvánsokkal beadott immunogén mennyisége azonban ebben a vizsgálatban is tízszerese a NISV-vel beadottnak.
b) A NISV adjuváns hatásának pontosabb bizonyítása érdekében FCA-ban és a fentiek szerint előállított vezikulákba zárva LHRH-Gly-Cys-PPD-vei injekciózott BALB/c egerekben az azonos mennyiségű antigénre adott antitest reakciót mértük.
LHRH--Gig-Cya-PPD-vel végze.tt immunizálás
Három nőstény BALB/c egeret FCA-ban 0,2 ml LHRH-Gly-Cys-PPDvel (1:1 térfogat arányú konjugátum PBS:FCA-ban) szubkután injekcióztunk. Az egereknek két hét múlva FCA-ban 0,2 ml LHRH-Gly-Cys-PPD-vel (1:1 térfogat arányú konjugátum PBS:FIA-ban) szubkután emlékeztető oltást adtunk.
öt nőstény BALB/c egeret 0,2 ml, NISV-be zárt LHRH-Gly-CysPPD-vel hasonlóan szubkután oltottunk, majd ezeknek két hét múlva további 0,2 ml-rel emlékezetető oltást adtunk. BCG immunmozgósítást nem alkalmaztunk. Valamennyi injekcióban 100 yg LHRH-Gly-Cys-PPD ekvivalensét adtuk be.
Anti-LHRH antitest meghatározás
Az egerek farki vénájából a második immunizálás után egy héttel vért vettünk, szérummmintákat gyűjtöttünk, s a teljes antitest reakciót lényegében a fenti módon, ELISA vizsgálattal mértük, a végpont antitest titer megállapításához azonban sorozathigítást alkalmaztunk.
Eredmények
Az eredményeket a 3. ábrán mutatjuk be. Jól látható, hogy azonos immunológiai inger esetén a NISV hatásos adjuváns, és képes az FCA alkalmazása esetén elértnél nagyobb LHRHspecifikus antitest szintet indukálni.
Az 1. és 2. ábrán használt rövidítések jelentése a következő:
A: adjuváns nélkül (sóoldat);
···* '« ·*·· • 9 · · • ♦ ·*··
Β: nioszómák;
C: FCA és FIA;
D: alumínium-hidroxid.
A nyilak az immunizálás idejét jelzik.
1. ábra: LHRH-Gly-Cys-PPD
2. ábra: BCG + LHRH-Gly-Cys-PPD
3. ábra: LHRH-Gly-Cys-PPD
2. példa: Az egerek immunizálása szarvasmarha szérum albuminnal (BSA)
A vezikulákat az 1. példában leírt összetevőkkel és módszerekkel, vagy más módon, kloroformból történő rotációs filmlepárlással állítottuk elő. A kapott filmet PBS és antigén elegyében (5 mg/ml), vagy (a liposzómák esetében Russell és Alexander [ld. fentebb] által leírtak Bzerint PBS-ben detergenssel (1 % n-oktil-G-D-glükopiranozid; Sigma) és antigénnel hidratáltuk. A detergens (amennyiben használtuk) és a be nem zárt antigén eltávolítása érdekében a készítményeket 84000 x g-vel 40-45 percig centrifugáltuk, s a pelletet PBS-ben reszuszpendáltuk. A mosást kétszer ismételtük.
Minden csoportban négy-öt, 8-10 hetes BALB/c egeret alkalmaztunk. Az első napon az egereket szubkután vagy intraperitoneálisan NISV-be zárt BSA-val (NISV/BSA) vagy FCA-ban emulgeált BSA-val (FCA + BSA; Sigma) oltottuk be.
Valamennyi injekcióban a BSA végkoncentráciőja 0,5 mg/ml volt, s mindegyik egérnek 100 jug BSA dózist adtunk. Az első injektálás után 14 nappal az egereket másodlagosan immunizáltuk. A 4. ábrán a hisztogramokon feltüntetett napok (14., 28., stb.) a második immunizálás után eltelt időre vonatkoznak.
Az anti-BSA antitestek szintjét ELISA módszerrel határoztuk meg. A 4/A ábrán az IgGl antitest titerek, a 4/B ábrán az IgG2 titerek láthatók. A ferdén csíkozott oszlopok a NISV/BSA-val, a sötét oszlopok a BSA + FCA-val immunizált egerekkel kapott eredményeket jelzik. Mind az A, mind a B ábra esetében, a hisztogram bal oldalán az intraperitoneális injektálással, míg a jobb oldalán a szubkután injektálással nyert eredmények láthatók.
Látható, hogy intraperitoneális oltással az FCA + BSA nagyon magas IgGl titer kialakulását eredményezte, amely egészen a 70. napig fennmaradt; NISV/BSA-val végzett oltás esetén a titerek időfüggő csökkenését tapasztaltuk. Szubkután oltással a NISV/BSA immunizálás kezdetben magasabb antitest titereket eredményezett, mint az FCA, de a 70. napra ez a szint jóval az FCA + BSA-val nyert szint alá csökkent.
Ezzel szemben, a 4/B ábrán az IgG2a kimutatási vizsgálatának eredményei azt mutatják, hogy a NISV/BSA-val végzett intraperitoneális és szubkután immunizálás egyaránt jóval az
V
- 24 FCA + BSA alkalmazásával kapottnál magasabb kezdeti antitest ti tért eredményez, de a 70. napra - az FCA + BSA által kialakított IgG2a szint időfüggő növekedésének köszönhetően a két adjuváns-készítmény alkalmazásával kapott antitest titer hasonló volt.
Figyelemre méltó, hogy az FCA-val végzett szubkután injektálás után tapasztalt granuloma képződés az NISV-el végzett injektálás után teljes mértékben hiányzik.
3. példa: Különböző felületaktív anyagokból készített NISV adjuvánsként való működése
A NISV-t az 1. és 2. példához hasonlóan, (a)
1-monopalmitoil-glicerinből (MPG), illetve (b) polioxietilén-3-lauril-éterből (POE) készítettük, felületaktív anyag koleszterin dicetil-foszfát
5:4:1 arányú alkalmazásával, amint azt az
1. példában leírtuk.
A 8-10
BALB/c egerekből álló csoportokat a 2.
példában leírt módon
NISV-be zárt, illetve PBS-ben oldott
BSA-val oltottuk be.
Az összes lg, az IgGl és az IgG2a szintjét a másodlagos immunizálás után 14, 35 és 70 nappal
ELISA módszerrel mutattuk ki. A vérplazmát a teljes antitest titer kimutatásához 1/8000-re, az IgGl titer kimutatásához
1/15000-re, az IgG2a kimutatásához pedig 1/1000-re hígítottuk, s az egyes egerek vérplazmájában található antitest titereket ELISA vizsgálattal kimutatott abszobanciáként fejeztük ki. A kapott eredmények az 5. ábrán láthatók; az 5/A ábrán a másodlagos oltás után különböző idővel kimutatott összes immunglobulin mennyiségét, az 5/B és 5/C ábrán pedig az IgGl, illetve az IgG2a szintjét mutatjuk be.
Látható, hogy az adjuváns nélkül alkalmazott BSA-hoz viszonyítva mindkét felületaktív anyagból készített NISV fokozta a bezárt BSA hatására kialakuló antitest titert. A vizsgált antitest alosztályok esetében az MPG alapú vezikulákba zárt BSA a másodlagos immunizálás után magasabb antitest titereket eredményezett, mint a POE alapú vezikulákba zárt BSA. A második injektálás utáni 35. napon az lg és IgGl titerek az MPG esetében magasabbak voltak, mint a POE esetén, miközben az IgG2a szintek hasonlóak voltak. A 70. napon sem az összes antitest, sem a vizsgált immunglobulin alosztályok esetében nem volt Jelentős különbség a kétféle vezikula készítménnyel elért antitest titerek között.
A fentiek értelmében érthető, hogy a NISV adjuvánsként való működése széles körben alkalmazható, 8 ezen működése nem függ egy bizonyos felületaktív anyagtól.
4. példa: A NISV adjuvánsként való működése azonos genetikai hátterű egértörzsekben
Bizonyos korábbi adjuvánsokról ismert, hogy az egyes egyedekben az immunreakció genetikailag meghatározott különbségeit illetően korlátozott alkalmazhatósággal rendelkeznek. Annak bizonyítása érdekében, hogy a NISV adjuvánsként való működése genetikailag nem korlátozott, három BALB egértörzsben (BALB/c, BALB/B és BALB/K) vizsgáltuk az önmagában alkalmazott (vagyis PBS-ben oldott), NISV-be zárt, illetve Freund — féle komplett adjuvánsban emulgeált BSA-ra adott antitest reakciót. A NISV-t az 1. és 2. példában leírtak szerint készítettük, illetve injektáltuk (szubkután) az egerekbe. Az antitest szintet ELISA vizsgálattal mértük, s az eredményeket a 6/A, 6/B és 6/C ábrán mutatjuk be. A 6/A ábrán a második beoltás után 14 nappal (a); 35 nappal (b) és 70 nappal (c) vett vérből készített plazmában kimutatott összes, BSA-ra specifikus antitest szintje látható, ahol az eredményeket a 450 nm-en mért átlagos abszorbancia (+ standard hiba) értékekként fejezzük ki. Hasonló adatokat mutatunk be az IgGl (6/B ábra) és az IgG2a (6/C ábra) esetében. Az ELISA vizsgálatokhoz a vérplazma mintát, illetve a konjugátumot a 6/A ábrán bemutatott kísérletben 1/15000, illetve 1/1000 hígításban, a 6/B ábrán bemutatott kísérletben 1/30000, illetve 1/8000, a 6/C ábrán bemutatott kísérletben pedig 1/1000, illetve 1/800 hígításban alkalmaztuk.
Látható, hogy a NISV/BSA valamennyi egértörzs esetében magas antitest titer termelődését eredményezte, mind az összes
| antitestet, mind | a | |
| illetően. | Bár a | BSA |
| antitest | titerek | a i |
specifikus IgGl és IgG2a izotípusokat + FCA-val összehasonlítva a relatív második immunizálás után eltelt idővel és a különböző törzsekkel változnak, a NISV mindhárom tesztelt törzsben képes adjuváns hatást kifejteni, miközben a BSA + FCA-val elértnél nagyobb szintű, vagy legalább azzal összehasonlítható nagyságú antitest reakciót eredményez.
5. példa: Öröklött toxoplasmosis elleni vakcina előállítása
A toxoplasmosis madarak és emlősök betegsége, melyet a Toxoplasma gondii protozoa okoz. Nem védett állatok esetén ez a betegség képes az anyáról magzatára öröklődni, ami a magzat elpusztulását okozhatja. Megelőző fertőzéssel, és bizonyos mértékben vakcinálással azonban védő immunitás alakítható ki. Ögy tartják, hogy ez a CDS* T-sejtek és a Thl CD4* alcsoport közötti szinergia eredménye. A NISV-be zárt antigének vakcina tulajdonságait, különösen az említett T-sejt alcsoportok aktiválását illetően - laboratóriumi modellként - BALB/c és BALB/K egértörzsekben vizsgáltuk.
Egerek
Beltenyésztett BALB/c és BALB/K egereket, valamint Stathclyde A törzsbe tartozó, nem beltenyésztett egereket hagyományos körülmények között tartottunk. Az egereket 8-10 hetes korukban használtuk a kísérletekhez (minden kísérleti csoport 5-10 állatból állt).
Megfertőzés héttel korábban RRA törzsbe (Beverly) tartozó T. gondiival fertőzött, A törzsbe tartozó egerek agyát használtuk szöveti ciszták forrásaként, amelyeket egy korábbi leírás (Roberts és Alexander, Párásítói, 104. 19-23, 1992) szerint gyűjtöttünk és értékeltünk. A kísérleti fertőzéseket szájon keresztül, illetve az öröklött fertőzés modell (Roberts és Alexander, 1992) szerint végeztük. Röviden; BALB/c egereket vemhességük 11-12. napján 20 szöveti cisztával fertőztünk. A túlélő utódokat fertőzött nevelőanyákkal tartottuk, s az örökölt fertőzés gyakoriságát a születés után 8-9 héttel ELISA módszerrel vizsgáltuk. A fertőzés súlyosságát, alkalmas módon, a mortalitás szintje, illetve az agyban az összes ciszták száma alapján értékeltük.
Antigén készítmények
A vakcinálási vizsgálatokhoz fagyasztással/olvasztással elölt tachizoitokat (kp), tachizoit kiválasztó/elválasztó antigéneket (ESAg), membrán antigéneket és szolubilis antigéneket (STAg) használtunk. Az RH törzsbe tartozó
T. gondii tachizoitokat fertőzött patkányok hasüregi váladékából nyertük, és sóoldatban háromszor mostuk. Az
ESAg-t úgy kaptuk, hogy 5 x 1010 tachizoitot egy éjszakán keresztül 40 ml
PBS-ben inkubáltunk. A tachizoitokat 1000 gvei végzett centrifugálással távoolítottuk el, s a felülúszót összegyűj töttük.
Valamennyi protein koncentrációját a Bradford módszerrel határoztuk meg (Bradford, Analyt. Biochem., 72. 248-254, 1976). A szolubilis és membrán trachizoit antigén frakciókat 5 x 1010 parazita hipotőniás pufferben (40 ml 10 mM Tris-HCl, 2 mM EDTA, pH =7,8) Braun homogenizátor alkalmazásával végzett feltárásával, majd 4 °C-on 30 percig 10000 x g-vel végzett centrifugálásával nyertük. A felülúszó a STAg-t, a pellet a membrán frakciót tartalmazta. A membrán antigéneket 1 %-os oktil-glükozid alkalmazásával, majd 100000 g-vel végzett centrifugálással tovább tisztítottuk. A felülúszót összegyűjtöttük, és a detergens eltávolítása érdekében egy éjszakán keresztül, 4 ’C-on PBS-sel szemben dializáltuk.
Vakcina készítmények
A vakcina készítmények beadásához a megfertőzés előtt 2 és 4 héttel valamennyi állatot 50 pg tachizoit antigénnel szubkután oltottuk. A védőoltáshoz való antigént szabad formában, Freund-féle komplett adjuvánsban emulgeálva vagy nem ionos felületaktív anyagból álló vezikulákba zárva alkalmaztuk.
A vezikulák kialakítása
A STAg 1-monopalmitol-glicerin alapú NISV-be történő becsapdázását az 1·. példában leírt eljárásokkal végeztük.
Eredmények
A kapott eredményeket a 7/A-7/D ábrákon mutatjuk be. A 7/A ábrán a BALB/K egerek agyában a 20 cisztával végzett orális fertőzés (amely előtt 2 és 4 héttel NISV-be zárt STAg-vel, STAg-vel önmagában vagy NISV-vel keverve, szubkután oltást végeztünk) után 4 héttel a ciszták átlagos számát (+ standard hiba) ábrázoljuk. Amint látható, a NISV-be zárt STAg a többi csoporthoz képest jelentősen csökkent mennyiségű cisztát eredményezett.
A 7/B ábrán a 20 cisztával végzett orális fertőzés után Θ héttel a BALB,zc anyaegerek átlagos szérum antitest szintjét, a 7/C ábrán pedig az agyban található ciszták átlagos számát mutatjuk be. Az egereket vemhességük 11-12. napján fertőztük meg. A vakcinával kezelt csoportot a fertőzés előtt 2 és 4 héttel NISV-be zárt STAg-vel (50 £?g) szubkután oltottuk be. Amint látható, a NISV-be zárt antigénnel végzett védőoltás a kontrolihoz képest .jelentősen csökkentette mind az agyban lévő ciszták számát, mind az antitestek szintjét.
A 7/D ábrán a vakcinával oltott, illetve nem oltott egerek utódainak fertőzöttségét és életbenmaradását mutatjuk be. Amint látható, a vakcinával oltott egerek utódai közül magzati korban egy sem pusztult el, míg a vakcinával nem oltott egerek utódainak több, mint a fele elpusztult a születéskor (vagy azt követően 24 órán belül), annak ellenére, hogy a vakcinával kezelt egerek utódainak több, • · · · · • ·· « · mint 50 %-a fertőzött volt.
Ilyenformán, bebizonyítottuk, hogy a NISV-be zárt szolubilis antigén adjuváns hatást fejt ki, amely fokozza a kifejlett egerek antigénre vonatkozó védettségét, s teljesen megszünteti a magzati elhullást.
6. ábra: A NISV szintetikus T-seJt epitópok adjuvánsaként való működésének képessége
A pepiid előállítása
A Giles peptidet, amelyet a kanyaró F protein 258-277.
aminosavai alkotnak, hagyományos Fmoc védőcsoportos eljárással szintetizáltuk. A peptid szekvenciája a következő:
GILESRGIKARITHVDTESY (1. azonosítási számú szekvencia), és T- és B-seJt epitópokat egyaránt tartalmaz.
NISV-t
Collins eljárása szerint (ld.
fentebb)
1-monopalmitol-glicerin-észterből állítottuk antigéneket pedig
Pick fagyasztásos-olvasztásos technikájával be a vezikulákba.
Immunizálás
A négy 8-10 hetes nőstény egérből álló csoportokat 25 pg pepiiddel (PBS-ben, NISV-be zárva vagy FCA-ban emulgeálva) szubkután immunizáltuk. Egy hét múlva az egerek lépét eltávolítottuk, és a peptid-specifikus T-sejt proliferatív reakciót timidin beépüléses vizsgálattal (Corradin és mtsi, J. Immunoi., 119. 1048-1053, 1977) mértük.
Eredmények
Az eredményeket a 8. és 9. ábrán mutatjuk be. A kísérlet során valamennyi vizsgált peptid-koncentrációnál a NISV-be zárt antigénnel immunizált egerekből származó lépsejtek a PBS-ben vagy FCA-ban adott pepiiddel immunizált egerekből származó sejtekhez képest nagyobb mértékű proliferációt mutatott (8. ábra).
Az 50 Ltg/ml GILES peptiddel stimulált tenyészetek felülúszóit a stimulálás után 48 órával eltávolítottuk, s ELISA módszerrel IFN-gamma Jelenlétére vizsgáltuk. Amint a 9. ábrán látható, a valamilyen adjuvánssal együtt adott GILES peptiddel oltott egerekből származó lépsejtek lényegesen több IFN-gammát termeltek, mint a PBS-ben adott GILES peptiddel oltott egerekből származó sejtek, és a NISVbe zárt antigén több IFN-gamma termelődését eredményezte, mint az FCA-ban adott antigén. A NISV tehát képes adjuvánsként működni nagyobb virális proteineknek megfelelő peptidek, illetve hormonok esetén.
Sőt, a NISV nagyobb mértékben mozgósítja az egerek antigén-specifikus T-seJt proliferációját. mint az FCA. A tenyészet felülúszókban az IFN-gamma jelenléte a CD4+ Thl és,''vagy CD8+ T-sejtek aktiválását vonja maga után.
7. példa: Orális beadási kísérlet
NISV-be zárt BSA orális beadása egerekbe
A vezikulákat diglikol-cetil-éterből (DGCE) vagy 1monopalmitoil-glicerin-észterből (MPG), felületaktív anyag : koleszterin : dicetil-foszfát 5:4:1 arányban való alkalmazásával az 1. példában leírt módon állítottuk elő. A vezikulákat kloroformból végzett rotációs filmlepárlással készítettük, Russel és Alexander (ld. fentebb) leírása szerint. A vékony filmmé alakított 150 jjmól felületaktív anyagot 100 mg BSA-t tartalmazó 5 ml karbonát pufferben hidratáltuk. Az elegyet 60 ’C-on 2 óráig ráztuk, majd 5 percig, szintén 60 °C-on vízfürdős szonikátorban hangkezeltük.
Minden vizsgálati csoportban öt 8-10 hetes, nőstény BALB/c egeret alkalmaztunk. Valamennyi csoportot a következőkkel kezeltük:
a) BSA, karbonát pufferben;
b) BSA, DGCE alapú NISV-ben;
c) BSA, MPG alapú NISV-ben.
Az egereknek az 1. napon gyomorszondán keresztül első, 0.1 ml orális dózist (egerenként 240 ug BSA), majd a 12. napon
egy második orális dózist (egerenként 500 pg) adtunk. A vérmintákat a 20. és 24. napon gyűjtöttük össze, és vizsgáltuk a minták IgG titerét.
♦ · 4 · * • ·· 4 ·
SZEKVENCIALISTA
Szekvenciák száma: 2 (1) Tudnivalók az 1. számú szekvenciához (i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 20 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (xi) SZEKVENCIA LEÍRÁS: 1. számú szekvencia
Gly Ile Leu Glu Ser Arg Gly Ile Lys Alá Arg Ile Thr His Val
10 15
Asp Thr Glu Ser Tyr (1) Tudnivalók az 2. számú szekvenciához (i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 20 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (xi) SZEKVENCIA LEÍRÁS: 2. számú szekvencia pGlu His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly Gly Cys
Claims (42)
- Szabadalmi igénypontok1. Vakcina, azzal jellemezve, hogy nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárva legalább egy, önmagában gyenge immunválaszt kiváltó antigént tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy antigénként egy peptidet tartalmaz.
- 3. A 2. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy szintetikus vagy rekombináns eredetű peptidet taralmaz.
- 4. A 3. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy 8-50 aminosav-egységböl álló peptidet taralmaz.
- 5. A 4. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy 10-20 aminosav-egységből álló peptidet taralmaz.
- 6. A 3-5. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy a peptidet hordozóhoz kapcsolt formában tartalmazza.
- 7. Az 1. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy antigénként Toxoplasma gondii protozoa antigént vagy luteinizáló hormon felszabadító hormont vagy ennek analógját tartalmazza, melynek képlete pGlu-His-T rp- Ser-Tyr-X-Leu-Arg-Pro-GIy-Y-Z ahol X jelentése Gly vagy D-aminosav-maradék, Y jelentése egy vagy több azonos vagy eltérő aminosav-maradék, és Z jelentése Cys vagy Tyr, és az analóg oldatbeli konformációja lényegében véve hasonló a natív LHRH konformációjához.
- 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy nemionos felületaktív anyagként egy glicerin-észtert tartalmaz.
- 9. A 8. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy glicerin-észterként egy 12-20 szénatomos alkanoil- vagy alkenoilcsoportot tartalmazó glicerin-monoésztert tartalmaz.
- 10. A 9. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy glicerin-észterként glicerin-1-monopalmitátot tartalmaz.
- 11. az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy a vezikulumok glicerin- vagy (rövidszénláncú alifás glikol)-éterekből állnak.
- 12. A 11. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy éterekként glicerin- vagy (rövidszénláncú alifás glikol)-( 12-20 szénatomos alkil- vagy alkenil)-monoétereket tartalmaz.
- 13. A 12. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy legfeljebb 5 glikolegységet tartalmazó monoétereket tartalmaz.
- 14. A 12. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy glicerin-éterként 1-monocetil-glicerin-étert, illetve (rövidszénláncú alifás glikolj-éterként diglikol-cetil-étert tartalmaz
- 15. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy a vezikulumok töltésképző amfifil molekulákból állnak.
- 16. A 15. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy töltésképző amfifil molekulaként karboxilát-, foszfát vagy szulfátcsoportot tartalmazó molekulát tartalmaz.
- 17. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy szubkután, intramuszkuláris vagy intradermális adagolásra alkalmas formában van elkészítve.
- 18. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy nyálkahártyán át történő adagolásra alkalmas formában van elkészítve.X
- 19. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy orális adagolásra alkalmas formában van elkészítve.
- 20. Orális adagolásra alkalmas vakcina, azzal jellemezve, hogy nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárva legalább egy antigént tartalmaz.
- 21. A 20. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy antigénként valamely az 1-7. igénypontok bármelyikében meghatározott antigént tartalmaz.
- 22. A 20. vagy 21. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy vezikulumként valamely a 8-16. igénypontok bármelyikében meghatározott vezikulumot tartalmaz.
- 23. Nyálkahártyán át történő adagolásra alkalmas vakcina, azzal jellemezve, hogy nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárva legalább egy antigént tartalmaz.
- 24. A 23. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy antigénként valamely az 1-7. igénypontok bármelyikében meghatározott antigént tartalmaz.
- 25. A 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy vezikulumként valamely a 8-16. igénypontok bármelyikében meghatározott vezikulumot tartalmaz.
- 26. Eljárás vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy legalább egy, önmagában gyenge immunválaszt kiváltó antigént nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárunk.
- 27. Eljárás antigén formálására orálisan aktív vakcina formájában, azzal jellemezve, hogy az antigént nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárjuk.
- 28. A 26. vagy 27. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az 1-25. igénypontok bármelyike szerinti vakcinát állítunk elő.β • · · · * • ·· « · • · · · * · « • ·· ·» ··
- 29. Eljárás legalább egy antigén formálására a Thl T limfocita útvonalon történő antitesttermelés stimulálására, azzal jellemezve, hogy legalább egy antigént nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárunk.
- 30. Eljárás legalább egy antigén immunogenitásának a Freund-féle komplett adjuváns használatával legalább megegyező szintre történő potencírozására, azzal jellemezve, hogy az antigént nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárjuk.
- 31. A 29. vagy 30. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy antigénként valamely az 1-7. igénypontok bármelyikében meghatározott antigént és vezikulumként valamely a 8-16. igénypontok bármelyikében meghatározott vezikulumot alkalmazunk.
- 32. A 26-31. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigént előre elkészített vezikulumokba zárjuk.
- 33. Nemionos felületaktív anyag vezikulumok alkalmazása - az azokba zárt legalább egy antigénnel együtt - sejtközvetítette vagy humorális immunitás stimulálására.
- 34. A 33. igénypont szerinti alkalmazás orálisan adagolható immunológiai adjuvánsként.
- 35. A 33. vagy 34. igénypont szerinti alkalmazás, melyben az antigén valamely az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti antigén.
- 36. A 34. vagy 35. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vezikulumok észterrel kapcsolt felületaktív molekulák.
- 37. Nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárt legalább egy antigén alkalmazása emlősöknek vagy nem-emlősöknek az antigénre adott immunválasza potencírozására szolgáló készítmény előállítására.
- 38. A 37. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a termék az antigénre adott sejtközvetítette és humorális immunválasz stimulálására szolgál emlősök vagy nem-emlősök esetén.
- 39. A 37. vagy 38. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a termék az antigénre adott válaszként az antitesttermelés Thl T limfocita útvonalon végbemenő stimulálására szolgál emlősök vagy nem-emlősök esetén.
- 40. A 37-39. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás emlősök esetén.
- 41. A 37-40. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az antigén valamely az 1-7. igénypontok bármelyikében meghatározott antigén és a vezikulum valamely a 8-16. igénypontok bármelyikében meghatározott vezikulum.
- 42. Legalább egy antigént nemionos felületaktív anyag vezikulumokba zárva tartalmazó termék por, tabletta, szirup, kapszula vagy granulátum formájában.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB929207731A GB9207731D0 (en) | 1992-04-07 | 1992-04-07 | Improvements in or relating to vaccines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9402904D0 HU9402904D0 (en) | 1995-01-30 |
| HUT69935A true HUT69935A (en) | 1995-09-28 |
Family
ID=10713695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9402904A HUT69935A (en) | 1992-04-07 | 1993-04-06 | Vaccines containing non-ionic surfactant vesicles |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5679355A (hu) |
| EP (1) | EP0634937B1 (hu) |
| JP (1) | JP2690620B2 (hu) |
| KR (1) | KR950700758A (hu) |
| CN (1) | CN1085449A (hu) |
| AT (1) | ATE158185T1 (hu) |
| AU (1) | AU3899793A (hu) |
| CA (1) | CA2132547C (hu) |
| DE (1) | DE69314020T2 (hu) |
| FI (1) | FI944676A0 (hu) |
| GB (1) | GB9207731D0 (hu) |
| HU (1) | HUT69935A (hu) |
| NO (1) | NO943739D0 (hu) |
| NZ (1) | NZ251402A (hu) |
| WO (1) | WO1993019781A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA932491B (hu) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995003035A1 (en) * | 1993-07-23 | 1995-02-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery |
| US5919466A (en) * | 1993-10-01 | 1999-07-06 | Gerbu Biotechnik Gmbh | Method for improving the yield of immunoantibodies in the vaccination of animals and humans |
| GB9320597D0 (en) * | 1993-10-06 | 1993-11-24 | Proteus Molecular Design | Improvements in and realting to vaccines |
| EP0734251B1 (en) * | 1993-12-17 | 2009-10-14 | Novavax, Inc. | Method of transmitting a biologically active material to a cell |
| US5688506A (en) | 1994-01-27 | 1997-11-18 | Aphton Corp. | Immunogens against gonadotropin releasing hormone |
| GB9515868D0 (en) * | 1995-08-02 | 1995-10-04 | Proteus Molecular Design | Therapeutic method |
| GB9600471D0 (en) * | 1996-01-10 | 1996-03-13 | Univ London Pharmacy | Drug delivery system |
| HUP0101619A3 (en) * | 1998-04-09 | 2003-11-28 | Smithkline Beecham Biolog | Adjuvant compositions |
| US6494865B1 (en) * | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
| FR2802422B1 (fr) * | 1999-12-21 | 2002-08-09 | Capsulis | Structures mixtes resultant de l'incorporation d'une macromolecule biologique, en particulier d'adn, dans une phase structuree d'amphiphiles et vesicules obtenues a partir de ces structures |
| GB9930591D0 (en) * | 1999-12-23 | 2000-02-16 | Univ London | Component for vaccine |
| FI112825B (fi) * | 2001-07-11 | 2004-01-15 | Antti Nissinen | Menetelmä alkoholinkulutuksen osoittamiseksi, menetelmässä käytettäviä välineitä sekä niiden valmistus |
| EP1528915A2 (en) * | 2002-07-03 | 2005-05-11 | Aphton Corporation | Liposomal vaccine |
| CN1711074B (zh) * | 2002-11-15 | 2010-10-06 | 尼普洛株式会社 | 脂质体 |
| FR2850872A1 (fr) * | 2003-02-12 | 2004-08-13 | Ethypharm Sa | Composition vaccinale destinee a induire une reponse immunitaire contre le virus responsable du sida |
| BRPI0414021B1 (pt) | 2003-08-28 | 2023-09-26 | Becton, Dickinson And Company | Dispositivo de injeção intradérmica |
| CA2623197A1 (en) * | 2005-09-22 | 2007-03-29 | Prosci Incorporated | Glycosylated polypeptides produced in yeast mutants and methods of use thereof |
| BRPI0914224A2 (pt) | 2008-06-19 | 2019-09-24 | Variation Biotechnologies Inc | composições e métodos para tratar a gripe |
| WO2010014686A1 (en) | 2008-07-30 | 2010-02-04 | Aleva Neurotherapeutics, S.A. | Apparatus and method for optimized stimulation of a neurological target |
| EP2783727B1 (en) | 2008-11-12 | 2016-11-09 | Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne | Microfabricated neurostimulation device |
| US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| CA2767392C (en) | 2009-07-06 | 2017-03-14 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| WO2011067297A1 (en) | 2009-12-01 | 2011-06-09 | ECOLE POLYTECHNIQUE FéDéRALE DE LAUSANNE | Microfabricated neurostimulation device and methods of making and using the same |
| EP2552536B1 (en) | 2010-04-01 | 2016-06-08 | Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) | Device for interacting with neurological tissue |
| US9238796B2 (en) | 2010-06-04 | 2016-01-19 | Toagosei Co. Ltd. | Cell growth-promoting peptide and use thereof |
| CA2840079C (en) | 2010-07-06 | 2018-07-03 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| WO2012093706A1 (ja) * | 2011-01-07 | 2012-07-12 | 東亞合成株式会社 | 抗疎水性ペプチド抗体を得るための抗原調製方法 |
| JP5855583B2 (ja) * | 2011-01-07 | 2016-02-09 | セイコーエプソン株式会社 | 抗シグナルペプチド抗体の製造方法 |
| US20130323280A1 (en) | 2011-01-13 | 2013-12-05 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| MX359103B (es) | 2011-01-13 | 2018-09-14 | Variation Biotechnologies Inc | Composiciones y sus usos en el tratamiento de infecciones virales. |
| WO2013104995A2 (en) | 2012-01-12 | 2013-07-18 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
| WO2013111012A2 (en) * | 2012-01-27 | 2013-08-01 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for therapeutic agents |
| JP6066222B2 (ja) | 2012-05-28 | 2017-01-25 | 東亞合成株式会社 | 抗菌ペプチド及びその利用 |
| WO2014061749A1 (ja) | 2012-10-18 | 2014-04-24 | 東亞合成株式会社 | ２型ｔｎｆ受容体の発現を抑制する合成ペプチド及びその利用 |
| US11311718B2 (en) | 2014-05-16 | 2022-04-26 | Aleva Neurotherapeutics Sa | Device for interacting with neurological tissue and methods of making and using the same |
| CN110585588A (zh) | 2014-05-16 | 2019-12-20 | 阿莱瓦神经治疗股份有限公司 | 可植入式微电极装置 |
| US9403011B2 (en) | 2014-08-27 | 2016-08-02 | Aleva Neurotherapeutics | Leadless neurostimulator |
| US9474894B2 (en) | 2014-08-27 | 2016-10-25 | Aleva Neurotherapeutics | Deep brain stimulation lead |
| EP3411111A1 (en) | 2016-02-02 | 2018-12-12 | Aleva Neurotherapeutics SA | Treatment of autoimmune diseases with deep brain stimulation |
| GB201612108D0 (en) * | 2016-07-12 | 2016-08-24 | Univ Strathclyde | Preperation of non-ionic surfactant vesicles and variants |
| US10702692B2 (en) | 2018-03-02 | 2020-07-07 | Aleva Neurotherapeutics | Neurostimulation device |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2408387A2 (fr) * | 1975-06-30 | 1979-06-08 | Oreal | Compositions a base de dispersions aqueuses de spherules lipidiques |
| FR2571963B1 (fr) * | 1984-10-24 | 1987-07-10 | Oreal | Composition a usage cosmetique ou pharmaceutique contenant des niosomes et au moins un polyamide hydrosoluble et procede de preparation de cette composition. |
| SE8405493D0 (sv) * | 1984-11-01 | 1984-11-01 | Bror Morein | Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel |
| FR2597346B1 (fr) * | 1986-04-22 | 1989-08-18 | Oreal | Procede pour faciliter la formation de niosomes en dispersion dans une phase aqueuse et pour ameliorer leur stabilite et leur taux d'encapsulation, et dispersions correspondantes. |
| US4855090A (en) * | 1987-03-13 | 1989-08-08 | Micro-Pak, Inc. | Method of producing high aqueous volume multilamellar vesicles |
| AU603659B2 (en) * | 1987-03-13 | 1990-11-22 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Lipid vesicles formed of surfactants and steroids |
| GB8713240D0 (en) * | 1987-06-05 | 1987-07-08 | Proteus Biotech Ltd | Hormones |
| LU87449A1 (fr) * | 1989-02-09 | 1990-09-19 | Oreal | Procede de fabrication de mousses utilisables dans les domaines cosmetique et pharmaceutique et mousses obtenues par ce procede |
| IT1238343B (it) * | 1989-10-16 | 1993-07-13 | Cesalpino Andrea Fond | Procedimento per la preparazione di vaccini capaci di generare non solo la risposta immune dei linfociti t helper,ma anche un'efficace risposta di linfociti t citotossici,e vaccini con queste caratteristiche |
| AU654858B2 (en) * | 1991-03-28 | 1994-11-24 | Novavax, Inc. | Lipid vesicle containing water-in-oil emulsions |
-
1992
- 1992-04-07 GB GB929207731A patent/GB9207731D0/en active Pending
-
1993
- 1993-04-06 AU AU38997/93A patent/AU3899793A/en not_active Abandoned
- 1993-04-06 DE DE69314020T patent/DE69314020T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-06 JP JP5517269A patent/JP2690620B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-06 NZ NZ251402A patent/NZ251402A/en unknown
- 1993-04-06 AT AT93908000T patent/ATE158185T1/de active
- 1993-04-06 WO PCT/GB1993/000716 patent/WO1993019781A1/en active IP Right Grant
- 1993-04-06 CA CA002132547A patent/CA2132547C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-06 HU HU9402904A patent/HUT69935A/hu unknown
- 1993-04-06 US US08/302,915 patent/US5679355A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-06 EP EP93908000A patent/EP0634937B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-07 CN CN93105224A patent/CN1085449A/zh active Pending
- 1993-04-07 ZA ZA932491A patent/ZA932491B/xx unknown
-
1994
- 1994-10-05 NO NO943739A patent/NO943739D0/no unknown
- 1994-10-06 FI FI944676A patent/FI944676A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1994-10-07 KR KR1019940703545A patent/KR950700758A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0634937A1 (en) | 1995-01-25 |
| CA2132547C (en) | 2000-06-06 |
| AU3899793A (en) | 1993-11-08 |
| KR950700758A (ko) | 1995-02-20 |
| CN1085449A (zh) | 1994-04-20 |
| NO943739L (no) | 1994-10-05 |
| ATE158185T1 (de) | 1997-10-15 |
| JP2690620B2 (ja) | 1997-12-10 |
| US5679355A (en) | 1997-10-21 |
| CA2132547A1 (en) | 1993-10-14 |
| EP0634937B1 (en) | 1997-09-17 |
| ZA932491B (en) | 1993-11-02 |
| GB9207731D0 (en) | 1992-05-27 |
| FI944676A (fi) | 1994-10-06 |
| NZ251402A (en) | 1996-10-28 |
| WO1993019781A1 (en) | 1993-10-14 |
| HU9402904D0 (en) | 1995-01-30 |
| DE69314020T2 (de) | 1998-08-06 |
| DE69314020D1 (de) | 1997-10-23 |
| JPH07505389A (ja) | 1995-06-15 |
| NO943739D0 (no) | 1994-10-05 |
| FI944676A0 (fi) | 1994-10-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT69935A (en) | Vaccines containing non-ionic surfactant vesicles | |
| US5876721A (en) | Vaccines | |
| JP7095053B2 (ja) | 免疫原性化合物 | |
| JP5775451B2 (ja) | インフルエンザを処置するための組成物および方法 | |
| Altman et al. | Immunomodifiers in vaccines | |
| US8653049B2 (en) | Normuramyl glycopeptide compounds | |
| JP2502234B2 (ja) | リポソ―ム含有ワクチン組成物 | |
| IL175573A (en) | Pharmaceutical compositions comprising vaccine antigen(s) other than a coding dna and phosphoric ester derivative(s) of phosphatidylcholine and their use for preparing a vaccine adjuvant | |
| US8758763B2 (en) | Archaeal polar lipid aggregates for administration to animals | |
| WO2010033812A1 (en) | Compositions and methods for treating hepatitis a. | |
| PL206260B1 (pl) | Immunogenna kompozycja liposomowa, jej zastosowanie, sposoby jej wytwarzania i kompozycja szczepionki | |
| KR100326938B1 (ko) | 지방산이 결합된 합성 펩타이드를 인지질 막에 재조합하여 제조한 조합물 및 그 제조방법 | |
| Alving | Theoretical basis for development of liposomes as carriers of vaccines | |
| De Haan et al. | Liposomes and antiviral mucosal immunity | |
| US20110097418A1 (en) | Compositions and methods for treating influenza | |
| Pietrobon et al. | Lipopeptides and Their Effects on the Immune System Use as Vaccine Components | |
| Stewart-Tull | The choice and mechanism of action of adjuvants |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFD9 | Temporary protection cancelled due to non-payment of fee |