HUT50487A - Process for production of peptides - Google Patents

Description

Találmányunk szomatosztatin-jellegü hatással rendelkező gyógyhatású vegyületek, továbbá esen vegyületek valasuilyikét vagy ennek gyógyászatilag elfogadható sóját hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására irányul· A találmány szerinti vegyületek a szerveset hormonjai kiválasztásának szabályozására alkalmazhatók. Különösen előnyösek azok a ssomatoszUtin-jellegU vegyületek, amelyek egy szómatősztatin-jellegű ciklusos peptidhez kapcsolódó kationos részt tartalmaznak.

A szamatosztatin a természetben előforduló, az alábbi képlettel ábrázolható vegyületι

.................... .................... |

Ala-Qly-üys-lys-Asn-Phe-Phe-Trp-LyB-Thr-fhe-lhr-Ser-Cys-OH Ismeretes, hogy a «zamatosétatin sok szövetben hor*· monokat gátló biológiai hatást fojt ki· így például a szomatosztatin megakadályozza a növekedési hormon kiválasztódását az agyalapi mirigyből, a gyomorsav és a popszin keletkezését a gyomorban és a gluk^u illetőleg az inzulin képződését a hasnyálmirigy szigeteiben· A szamatosztatin gátolja továbbá a glükóz, az aminosavak és a zsír abszorpcióját a gyomor-bél (gaeztrointesztinális) traktusban és agyben akadályozza a gasztrointesztinális traktus mozgását is·

A természetben előforduló szomatosztatinnak a testben igen rövid ideig tartó hatása van és ezért megkíséreltek olyan vegyületeket előállítani, amelyek hatása tovább tart és hatékonyabbak is, mint a ssomatosztatin, miközben a ezamatosztatin tulajdonságait megtartják, • β

vegyes ”ssomatosstatin-sserüⁿ vegyületekrél van aaá· A szomatosstatin aminoeav-SBekvenciájának módosításai néhány esetben növelték a hatékonyságot, a hatás időtar*» témát, a relatív specifitást és máé kedvesé változásokat is okoztak·

A ssomatosstatin-sserü vegyületek növekedési hormon kiválasztást akadályozó hatásának alkalmazását Ismerteti a 4 291 022 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás} közzétéve 1981. szeptember 22. lsek a vegyülő tek a természetben előforduló szomatosztatin származékai·

Olyan ciklusos hexapeptidet tartalmazó szórnatosstatin-analógokat, amelyekben a ssomatosstatin hét gyűrű· aminosavját törölték, a 4 310 518 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti) kössétéve 1982· január 12· A vegyületek a növekedési hormon, a glukagon és az insulin képződését akadályossák·

A ciklikus hexapeptideknek és as áthidalt ciklusos ssomatosstatin analógoknak túlérzékenységi reakciók kezelésére történő alkalmazását a 0 222 578 számú európai szabadalmi leírásban ismertetik (Merek and Co· Inc·)· A ssomatosstatin-analógok dermatológiai kórtünetek esetén történő alkalmazását a 0 175 644 ssámu európai szabadalmi bejelentés ismerteti (Sandos AG).

A ssomatosstatin egy oktapeptid analógját ismerteti a Cal és munkatársait Proc· Ma ti· Acad· 80I·, Amerikai Egyesült Államok, 1896 (1986) közlemény, amely szerint e vegyület a növekedési hozmon képződésének gátlá

- 4 cukor u szuxűutosztatinlioz képest elnyújtott liutus t mutat. jx közlemény üdetokút turtulmuz u tumorok növekedését <jutló hutásra vouutkozoan is.

λ x>uuer ős munkatarsux: niie wciunces ol. ix_>j (1 9öc.} kezl emeiiy u- ezurnatúsz c.~ v m spe_u xxtus uimio^^ui t iryu le, Amelyek elnyújtott hutássül rendelkeznek és u nöYCxúQtux íiormon kivuiuoz bodcxzunAü. <_,& clu süsün. *-t szomuto— szbutxnlioz képest háromszor olyun nutÓKonyauk bizonyultuk. · -.z xemex L e ve 11 ux u·.p op txuexí ά mu lekulu. oi e z Le xn—ré— széli módost to l u származékuk, amely ek nuxouösen z ukrome— (jXxiu KczöXutt ücu mutu bzioztuk ex’tekes’noh.·

-λ. 4 ó41 u 71 számú umeixkux egyesült államokbeli szabadalmi leírás (közzétéve lyók. augusztus >.) a pepiid u x z o ily o s x^ozxGxOxü e»n £>ze 1..κ t x ve a muuu uib o b t ez oma u o s z vu· vxti™“uU—. 1 b.ue.u>t mut at ue · m modo Se t o v b zzo.tűt ο o z to* ven—analógok ugyanolyan hutást mutattuk, mint u természetes molekulák · u nuxashimu és munkatársai; xiie «ciences 41, lull (19bY) közleményben u. szoiautosztutinnuk olyun oktupeptid anuiójjuil ismertetik, amelyek u növekedése hormon, inzulin te ^luka^on kiválasztásúnak gátlása sün ie x^tn íiutc— konynak bizonyultak.

uoduing ős bchully, xtuu. kutl. /ic-ed. oci., Amerikai x,^yesult xi.llu.mok, tt« Ív jó (l>do; közlemény u szórna— Lozztutin a no.xo^omtan -*. puvmnyua utol.uxuto poxO—szurko— májúnak növekedését <_,utló hatásút ismertetik.

.mretiu és munkatársai: ^líc ^ciences 419 (19ú7) közlemény egy rövid áttekintést nyuyb a szumatosztu

tin és szomatosztatin-analógok területén folyó munkákról és ismertetik esek gyó';/á*sati előnyeit és a folyamatban lévő farmakológia! tanulmányokat·

A jelen találmány szerint a kationos lánc-rész kialakítása a hatás időtartamának meghosszabbodását és a hatás specifitárénak növekedését jelenti· A találmány kationos lánc-rész az -alkil bázikus aminosav osztályból származik és lehet természetes és nem természetes eredetű is· Mester és munkatársai szerint a természetben elő nem forduló M^-alkil-aminosavak osztályába tartozó uminosavak beépültek az 1Η-Κ1» (luteinizálÓ hormon) antagonisztikus analógjaiba, igy alkalmazásuk arra szolgál, hogy stabilizálják a feltételezett foszfolipid membrán interakciót (4* Med. Chem., 31. 65 (1966])· A kationos résznek egy szomatosztatin analóg szerkezetbe történő beépülését azonban ezelőtt nem ismertették· Tudományos feltevés szerint a ligandum-receptro interakció specifitása a ligandum foszfolipid membrán interakcióját befolyásolhatja (őchwyzer, Biochemistry 25· 6335 [1986])· Találmányunk szerint tehát a kationos résznek a szomatosztatin-szerü ciklusos peptidekhez történő hozzáadása fokozott hatékonyságot, megnövekedett időtartamot és szelektivitást eredményez·

A találmány szerinti vegyületek legfőbb jellemzője, hogy a szomatosztatin-szerü ciklusos pepiidhez közvetlenül vagy egy térköztartó részen keresztül egy kationos rész csatlakozik· A kationos rész kapcsolódásának következményeként a találmány szerinti vegyületek aktivitása növekszik, megnő a hatás kifejtésének időtartama és specifitása·

A1 wutnyimk ag ' f·...··...·,.·,,,·,». „...... |

X-Cys-JM^Trp-K-r^Cys-X (I) általános képletű vegyülőtekre - ebben a képletben

X Jelentése N-terminális csoport»

X Jelentése egy C-terminálie csoport, G-I általános képletű csoport vagy a G-I általános képletű csoport alkoholja, mimellett az X és X legalább egyike egy kátionos rését képvisel,

D Jelentése íhe, Tyr, pF-Jho, pCl-jPhe, £ Jelentése lys vagy 1<&(Η_χ), ahol jelentése rövidszénláncu alkilcsoport vagy 1-8 szénatomos fluor-alkil-csöpört, jelentése Thr, Val, Ser, mimellett G jelentése 1>- vagy L-konfigurációju Thr, Phe vagy Bal(2) és

I jelentése hidroxilcsoport vagy -NHRg általános képlett! csoport, ahol Kg jelentése hidrogénaton vagy jelentése megegyezik az K^ fent megadott Jelentésével és ezek gyógyászatilag elfogadható sóikra irányulnak· Találmányunk oltalmi körébe tartoznak a szomatosztatln-szerü

.. ...........' *' ' — ·|

X-Cye-Lys^ en-Phc-D-Jl»Trp-K-?-Phe-Thr-3er-Cy8-X (XI) általános képletű vegyületek - ebben a képletben

X jelentése Sí-terminális csoport, « ·

X jelentése ű-tersdLnális csoport, G-I általános képletű csoport vágj a G-I általános képletű csoport alkoholja, mimellett az X és Ϊ legalább egyike egy kationos részt képvisel,

D jelentése Phe, Tyr, pF-Phe, pCl-JPhe,

E jelentése Iys vagy Xys(R_x) általános képlett! csoport, ahol az Jelentése rövidszénláncu alkilcsoport vagy 1-8 szénatomos fluor-alkil-csöpört, E jelentése Thr, Val, Ser, mimellett Q jelentése D- vagy L-konfigurációju Thr, Phe, Xal(2) vagy (eiy)^ általános képlett! csoport, ahol a jelentése b-3 és

X jelentése hidroxilcsoport vagy -MHH₂ általános képletű csoport, ahol B_g jelentése hidrogénatom vagy jelentése megegyezik az fent megadott jelentésével és ezek gyógyászati szempontból elfogadható sói·

Találmányunk oltalmi köre kiterjed a találmány szerinti vegyületek és gyógyászatiig elfogadható sói előállítási eljárására is. A módszer szerint eltávolítjuk a védőcsoportokat és adott esetben a kovalensen kötött szilárd hordozót a védett polipeptidről és így olyan vegyületet kapunk, amely

a) szomatosztatin-szerü aktivitással rendelkező cik- lusos peptidj

b) a peptid egyik vagy mindkét cieztein-részéhez egy katonos rész kapcsolódik·

A találmány szerinti (1) általános képletü vegyületeket - ebben képletben -λ., i, ca 11 x t |j txk ο 1 o · a·) valamely (III) általános képletü vegyületből CJ íj

J

A .1

X x j e 1 ent α s o e_f oííxK a i <-nt megao.o t tcikiíal, χ^Λ mindegyikének jelentése védőcsőért, ahol

Jelentőse oC-amino-védőé sepert, jelentése » *T^· ύ τ hidroxil- védőé söpört, r'³ jelentése - védőcsoport jelentése £-amino-védőésöpört, és ϊ

L>

jüieiitóse kurboxil-védőcsoport és a, ü, u leltétellel; hogy az u-f közül valamennyinek a cl o’ védőéeoportok^t cl távolit juk; vu^jy b / Vixiv^í aely (IV) általános képletü vegyületből íj<.> .XJoLkri Íj ΟαίΙΙ ΠΙΟdo 11 xkkc*x j cí.· u íiixi’idO{^'xkcuek J elöntőt* c e vu-^y 1* xizíJcaI a lelté teliül, hogy az c-e közül valamennyinek a jelenté se polimex' hordozó * * ·

- 9 egyidejűleg eltávolítjuk a védŐceoportokat ős a polimer hordozót| vsjgy

c) valamely r————i

X~Cys-D-I>-Trp-.jE-y-Cys-Y-(3») (▼) általános képletű vegyületbÓl - ebben a képletben X, X, D, B, > és S* jelentése egyezik a fenti b) szakaszban megadottakkal - a polimer hordozót eltávolítjuk} vagy

d) valamely

X-CyB-D-P-Trp-8-F-Cye-Y (VI)

I I

SH UH általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, X, D, B és 9 jelentése egyezik a fonti a) szakaszban megadottakkal - oxidálunk) vagy

o) valamely (I) általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, D, B, F és ϊ jelentése egyezik a fent megadottakkal - annak gyógyássatilag elfogadható sójává alakítjuk át| vagy

f) valamely (I) általános képletű vegyület - ebben a képletben X, D, B, F és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - sóját annak valamilyen más, gyógyászatilag elfogadható sójává alakítjuk átj vagy

g) az (I) általános képletű vegyület sójából - ebben a képletben X, B, B, 9 és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - a szabad peptidet felszabadítjuk· • · — ίο —

A találmány sserlnti

ι.....^.........^. ............................................................... ...^..................ι

X-fys-tye-Asn^lhe-lM)-Txp-B-P-Phe-Thr-Ser-’CyB-X (II) általános képletű vegyületeket - ebben a képletben X, I, ű, K és f jelentése egyesik az (I) általános képletű vegyület értelmesésénél megadott jelentésekkel - és esek gyógyászatilag elfogadható sóit úgy állítjuk elő, hogy

a) valamely (VII) általános képletű vegyűletbŐl ebben a képletben

X, X, D, B és P jelentése egyezik a fent megadottakkal, p\ P², P^ és P⁴ mindegyikének a jelentése védőcsoport, ahol P* jelentése ot-amino-védőcsoport, P² jelentése hidroxil-védőé söpört, P^ jelentése K^-védőcsoport és P⁴ jelentése -amino-védőcsoport,

S Jelentése karboxil-védőcsoport és a, b, e, d, ·, f, g, h és i mindegyikének jelentése 0 vagy 1, azzal a feltétellel, hogy a-i mindegyikének jelentése egyidejűleg nem lehet 0 a védőcsoportokat eltávolitjukj vagy

b) valamely (UH) általános képletű vegyületbői

- ebben a képletben

X, Ϊ, D, Β, Ρ, Ρ¹, Ρ², P és P⁴ Jelentése egyezik az a) s

szakaszban megadott jelontóesel, a, b, c, d, e, f, g és h mindegyikének Jelentése G vagy 1, azzal a feltétellel, hogy a-h mindegyikének jelentése egyidejűleg nem lehet 0 és

S* Jelentése polimer hordozó - 11 a védócsoportokat íe a polimer hordozót egyidejűleg eltávolítjuk» vagy

o) valamely r'-—'^iM......—............-.......................................................ι

X-Cys-l<0*á8n-7he-I^B-Txp-B-7-7he-S3u>>Se3>Üys-X-(ő*) (IX) általános képletű vegyűletból - ebben a képletben

X» X, D, 1, 7 és s· jelentése egyseik a b) szakaszban megadottakkal - a polimer hordásét eltávolítjuk) vagy

d) valamely

X-6ys-lys4üm*Hie-D-D-Ixp-B-7-7he-21u>öer-Cy9»X(X)

II

SHSH általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, X, ö, 1 és 7 jelentése egyezik az a) szakaszban megadottakkal oxidálunk) vagy

e) valamely (II) általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, X» ΰ» B és 7 jelentése egyesit a fent megadottakkal - gyógyászatiig elfogadható sójává alakítunk át) vagy

f) valamely (II) általános képletű vegyület - ebben a képletben X» X_f fi_t B és 7 jelentése egyezik a fent megadottakkal - sóját annak valamilyen más» gyógyászatiig elfogadható sójává alakítjuk át) vagy

g) a (II) általános képletű vegyület - ebben a képletben X, X_t Ö, £ és 7 jelentése egyezik a fent megadottakkal - sójából a szabad pepiidet felszabadítjuk· • · « • ··

Találmányunk ki terjed továbbá a találmány szerinti valamely vegyület hatásos mennyiségét tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására is, amelyek a hatóanyagon kívül gytgrtMMtilAg elfogadható vivőanyagokat és segédanyagokat is tartalmazhatnak·

A találmányunk leírásakor as alábbi rövidítéseket alkalmazzuk:

A különböző aminosavak írásakor a peptidekre a IÜPAQ-IVB biokémiai Romenklatura Bizottság által általánosan elfogadott rövidítéseket alkalmazzuk (Biochem· J·

345 (19841)· Valamennyi előforduló pép tid-szekvenciát az általánosan elfogadott konvenció szerint irtuk· vagyis as N-termiuális aminosavak a bal oldalra, a G-terminális aminosavak pedig a jobb oldalra kerültek·

A rövidítések Ir-aminosavakat jelentenek· hacsak esőket D- vagy &· Ír· jelöléssel killih* nem jeleztük· Bizonyos aminosavak, így a térnészétben előforduló és a természetben elő nem forduló amlnosavak is , aklrálisak, ilyen például a glioin·

A nem természetes amínosavak írásakor a megfelelő aminosav jelölése után a szubsztituenst zárójelbe tesszük· Például a ByaUp jelölés olyan lizint jelent, amelyben az aminhoz Rj szubsztituens csatlakozik· Az Arg(R^₉Rg) és hArgCBj^Kg) jelölések olyan arginint illetőleg homo-arginint jelentenek· amelyekhez az ezubsztituens as W -nitrogénhez és as Rg szubsztituens as *-nitrogénhez kapcsolódik a guanidin-részben· β

• ·

- 13 A nem termíSMteo eredetű aminosavak Írásakor speciális rOviditáseket alkalmastunk· A tenóssetben elő nem forduló aminosavak kópvioelói as alábbiak:

Aminosav-réaz

3-( 2-naf til )*alanil

3- )p-fluor-f enil)-alanti 3-(p-klór-fenil)-alanll _fB·-guanidino-diaotil-homoarginil > 8 · -guanidlno-( die til) -hosoarginil ^,B*-guanidino-(dipropil)-homoarginil *8,B’-guanidino-(diiaopropil)—homoarginil «8 *-guanidino-( diheMll-homoarginil *8,8· -guanidin»( etan)-h<3noarginll *8,8*-guanidino-(propán)-homoarginil *8,8’-guanidino-biss(2,2,2-trifluoretil)-homoarginil *8-guanidino-(etil)-hoa»o~ axginll

BBvidító»

Bal(2) pMhe pCl-Ihe

Bah» vagy hArg(Me)₂

Doh, vagy hAxg(Bt)₂

Dph, vagy hArg(Br)₂

Dih» vagy Arg(iPr)₂

Dhh, vagy hArg(hexil)₂

Bha, vagy hArg(CH₂)₂

Pha, vagy hArg(CH₂)^

Bth» vagy hArg(CH₂O₃)₂

Moh, vagy hArg(Bt) • ··

- 14 *

^-guanidino-Cpropil )-hoao~ arginil	2xfa, vagy hArg(>r)
*B<-guanidino-( izopropil)-homo-	Xph, vagy hAxg(XPr)
•xgiadLl
^-guanidino-( buttl) -homo*	Mbh, vagy hirg(Bu)
arginll
’-guanidino-Cdlciklohejtí-l )··	öch, vagy
—hOMOBXgillil	hAxg( clkloheicll) 2
^-guanidlno-(hep 411 )-homo~	Hha, vagy hirg(hept:
aygínll
^í-guauidino-( etil )-axjglBll	Mea, vagy Axg(£t)
^S-guanidino-Chexil-eetil)·	Hah, vagy
-arginil	hArg(hexil, se til)
^-guanldlno* ( butil ,»· til )-	Bah, vagy
-arginil	hlrg(butil,aet11)
*N-isopropil-liain	Xpl, vagy l<y®(iPr)
,M *-guanidino-(diizopropil)-	Ma, vagy Arg(i£r)g
—asgiail
*IÍ ,8 ·-guanidino-( diakkloheiil )-	Bea, vagy
-arginil	Arg( ciklohexLl) %
^,H»-guanidino-biBE(3»3»3,2,2-	Bph
-pentafluor-propil)-homo-
arginil
,ii’-guanidino-( 3,3, 3, 3,3-penta~	Iph
fluor-propil)-homoarginil
^G-etiltSM 2,2,2-trifluoretil)-	£fh

-homoarginil ···· ····

- 15 ^_lN*-guanidino-(dietil)-ar- Bea ginil ^jB’-guani dino-bisz(2,2,2-tri- Bta fluoretil)-arginil

A csillaggal jelzett nem természetes eredetű aminosavak a találmány ezerinti kationos részt képviselhetik.

Az itt ismertetett nem természetes eredetű aminosavakat a szakember számára ismert eljárások szerint állíthatjuk elő, miközben akár a folyékony fázisú, akár a szilárd fázisú peptid-szintézia módszerét alkalmazhatjuk (v,ö. Bestor és munkatársai megadott közleményét [1988])·

A gyógyászatilag elfogadható só kifejezés olyan sókat jelent, amelyek az anyavegyület kívánt biológiai hatását megtartják, ugyanakkor nem kívánatos toxikus hatást nem mutatnak· Példaként említjük az ilyen sók közül az alábbiakatι

a) szervetlen savakkal képzett s^vaddiciós sók, például a klór-hidrogén-sav, bróm-hidrogén-sav, kénsav, fosztorsav, salétromsav és hasonló savakkal képzett sók} szerves savakkal alkotott sók, például ecetsav, oxálsav, borkősav, borostyánkősav, maleinsav, fumársav, glükonsav, citromsav, almasav, aszkorbinsav, benzoesav, ceersav, pamoesav, alginsav, poliglutaminsav, naftalin-szulíonsav, naftalin-diszulfonsav és poligalakturonsav szerves savakkal alkotótt eókj

- 16 ···: :··· ......

. ·. *··. ··· ......... ·..

··

b) bázikua addiciós sók, például polivalens fáz kationokkal, igy óink» kalcium, bizmut, bárium, magnézium, alumínium, rés, kobalt, nikkel, kadmium és hasonló fém kationokkal alkotott sókj vagy szerves kationokkal, például H,K*-dibcuzil-etilén-diaminnal vagy etilcn-diuminnal képeset t séfet

c) az a) illetőleg b) szakaszban felsorolt sók kombinációja, így például a cink-tonnát-só és ehhez hasonlók·

Az alkilcsoport** kifejezés egyenes vagy elágazóláncú, telített, 1*8 szénatomos szénhidrogén-csoportot jelent· Példaként említjük az alábbi alkilcsöpörtokát, ahol a megfelelő rövidítéseket zárójelben tüntettük feli metilcsoport (Me), etilcsoport (Bt), n-propil-osoport (Pr), izopropil-csoport (iPr), n-butil-csöpört (Bu), izobutil-csoport (iBu), szek-butil-csöpört (e-Bu), terc-butil-csoport (t-Bu), n-pentil-csoport (Pe), n-hexil-csoport (He) vagy 5-8 szénatomoe elágazóláncu alkilcsöpörtök és hasonlók·

A fluor-alkil-csöpört rövidszénláncu alkilcsoportot jelent, amely 1-5 fluoxatoioaal helyettesítve lehet, ilyen például a CP^CHg-, GPy, OP^CPgCHg- csoport vagy ehhez hasonlók·

As S-Ao rövidítés kifejezetten as H-acetil védő/ csoportot, például a terminális aminosav nitrogénatomjához kapcsolódó acetilcsoportot jelenti az általánosan elfogadott nomenklatúrának megfelelően·

Az acilcsoport egy szerves savból a hidroxilosoport eltávolításával levezethető szerves csoportot • η jelent· Általában az acilc söpört a terminállá aminosav-rész aminos nitrogéné teájához kapcsolódik·

A kationos rész egy biológiailag elfogadható, kovaXens-kÖtésű aminosav-részt jelent, amely az (X) és (IX) általános képletű vegyületek egyik Gye csoportjához kapcsolódik* As amlnoaav-részok származhatnak a természetben előforduló aminosavakból. Ilyenek az alanin, urginln, aszpamgln, aszparaginsav, ciszteln, glutanún, glutaminsav, glicin, hisztidin, izoleucin, lisin, metionln, íenil-alanin, prolin, szerin, treonin, triptofán, tirosin, valin és hasonlók, továbbá nem természetes előfordulású amino· savakból, ilyenek a hcmooisstein, ornltin, homoarginin, p> -alanin és a korábbiakban felsorolt nem természetes eredetű aminosavak, stb· A kationos résznek egy pozitív töltésű funkciója van, példaként említjük az H^-alkíl-bázikus amlnosavak osztályát, amelyeknél a kapcsolódás a peptidekhos vagy közvetlenül történik vagy pedig egy tértartó részen keresztül· As N -alhil-amlxiosavak közé tartozik például az arginín, homoargínín, lisin, ornitin és a fent felsorolt nem természetes eredetű aminosavak közül a csillaggal jelzett képviselők· Ha as H-terminális résshes egy kationos rész kapcsolódik, akkor egy Thr~típusu aminosav-maredék, egy hidrofób aminosav-maradék vagy egy másik kationos rész kapcsolódhat a C-terminális részhez· A hidrofób amlnosavakra példaként említendő a glicin, alanin, valin, leucin, izoleucin, triptofán, fenil-alanin, naftalin-alanin, halo-ssubsstituált fenil-alanin és hasonlók· Amennyiben a kationos réss a C-texminális részhez kapcsolódik, akkor egy • * hidrofób maradék vagy más kationos rész kapcsolódhat az R-terminális részhez.

A szoaatoeztatin-szerü ciklusos peptid olyan ciklusos peptidil-részt jelent, amelynek szórna tosztatin receptor kötő része van, vagy szomatosztatin-sserü biológiai hatással rendelkezik.

A G-X általános képletű vegyület alkoholja egy G-I általános képletű részt tartalmazó aminosavból levezethető alkoholt képviselj például ha a G-I általános képlet Tlu>»uH, vagyis r

-BH-CH-C-OH

I

HC-OH

I CH₃ képletű, akkor az alkohol képlet·

-bh-ch-ch₂oh

I

HC-OH

I «3

A találmány szerinti vegyületek előnyös csoportját képviselik az X helyén á-(B)_a-(C)_n általános képletű kationos részt - ebben a képletben

A jelentése acilcsöpört vagy hidrogénatom,

B jelentése hArgCiLpHg), Arg(B^,B₂) vagy Iys(Bp ··...... ....

. ·. ·”. ···

.........

.·% ·· • · ·· ·· általános képletű csoport, ahol Rj, jelentése rövidszénláncu alkilosoport vagy 1-8 szénatomos fluor-alkil-csöpört és R_g jelentése hidrogénatom vagy jelentése m^u^esik az R^ jelentésével vagy más u/-alkil-básikue aminosavat jelent, a jelentése 1, 2 vagy 3 egész szám,

Jelentése egy térköztartó rész, előnyösen Gly,

Alá vagy /«-Alá és n jelentése O-tól 5-ig terjedő egész szám tartalmazó (I) és (II) általános képletű vegyületek.

A fenti vegyületek közül különösen előnyösek azok, amelyekben n Jelentése 0 vagy 1.

A ciklusos szomatoaztátin-szerü peptidek a hozzájuk kapcsolódó kationos résszel együtt vagy a teljes dodekapeptid-diszulfid-gyűrü vagy a ciklusos hexapeptid és α gyűrűben szubsztituált analógjai lehetnek. A találmány szerinti vegyületek közül a legelőnyösebb képviselők az alábbiak:

Ac-D-hArg( GUgCF^) ₂-Gly-Cys-lh©-I>-Trp-iyB-Ihr-Cy o-Shr-SHg,

Γ™ ........^.......................

Ac-B-hAxg( CHgCF j) g-D-hArgC CHgCF ) g-Gly-Cys-rhe-D-Trp-Lye-

Ac-L-hArg(CH CP ) -Gly-Cys-Phfe-B-Trp-Lys-ímr-űye-Thr-IiHg, • ·

-ΙΟΙ---------------------------------------------------------1

Ac-B-hArgCSt^^J Jt^c-Thr-Cys-Thr-KH^»

I1

Ac-D-hArgCut, J t₉)“űly-Cys-the-i)-'irp-x>ys-i^;hr~Cys£_C.

-Ihr-Iiii^»

T-----------------------------------,

AG-L-hÁrg()-üly-Cy s-ihfe-D-írp-Lyε(i .e) l'hr-Cyε-Thr-EHEt és gyógyásza Ültig elí’ogudhiAtó sói· xuiálmányunk szerinti vegyületek további előnyös kép vclsöIÓx;

t1

Ac-lUrgÉLt^ ^-Gly-Uyü-l-'lie-J-lrp-x.ys-Thr-u.y e-lhr-Id^>

Ac-Jű-h/irg(i.t₂)-üly-üys-iⁱhc—u-l’rp-Lys-Thi'-Cys-lhr-iui^, ij

Ac-D-hArgCauj-üly-ö^s-lhe-E-'i'ip-^s-llir-Cys-xiir-Lüg» ’-----------------------------------------^-1 λ c-L-hArg (112) -öy s-l’he -u-lrp-Ly s- Ihr-Cy s- Thr-li^ >

1»

Ac-h-iiAi’g(h t₂ i -oy s-üie-jJ-lrp-ny β-lhr-OyE-lhr-Kií.^, .

ac-L-h^rrá υχι,-,οχ . j _Q-Cy s-rhe-L-xrp-uy t-lhr-uy s-Thr-liE,,,

1-----------------------------------------------------------------------1

Ac-liArg(CiL· jhexiD-üly-Cys-rlie-aJ-lrp-uys-Thr-Cys-llir-Kllg,

1,

H-hArg ( h exi 1₂) -oly- Gy s-lhc— 1>- x’rp-Ly b- ihr- Cy e- rhr-Eh^»

T

Aű-i-hÁrg(At₂)-Gly-Cys-lhe-b-Jrp-.uy8-i7ir-Gye-llir-2aüit,

Ij ^iC-jj-iULrgÉ^t^j-Gly-iys-ihc-o-lrp-juys-ihr-Cy ζ-χ^ζηο-χίΑ₂, «--------------^--) i'ropioxixl-J-iu₁.r_íi(E-t^;-Giy-vys-i'hu-i>-i¹rp-jjy8(iPr j-i'hr*vys- xlir-líiio,

1--------------1 xc-J-iLtl (2) -Gly-éy s-xhe-aj-i’rp-uy s-lhr-üys-üly-hArg( Et) ₂~hH₂ ac—B-uyö(iPr}-üly-Cys-Phe-lJ-Trp-Lys-i'hr-Cys-Íhr~llí₂ ée hasonlók.

Általánosabban a találmány szerinti

I--------------------------------:1

Λ-G'y s-s-L-Trp-E-P-Cy s- ϊ (1) általános képletű vegyületek közül előnyösek azok, amelyekben α pepiidet egy ciklusos hexüpeptid képviselj. ebuen a képletben

A jelentése L-tenalnális rész, ϊ jelentése C-terminális rész, G-l általános képletű csoport vagy ennek egy alkoholja, előnyösen a G-I helyén i'hr, treouinol-, fenil-ulaninol-osoportot tur-üulmuzé csoport, oimellett

A és x legalább egyikének jelentésé kationos rész, u julentuse ihe, iyr, pl-xhe, pul-Phe, • · ♦ · ··« ·· · k jelenté·· Lys vagy lys(Kp általános képletű csoport, ahol as jelenté·· rOvidssénláncu alkilosoport vagy 1-8 ssénatomos fluor-alkil~csöpört, előnyösen Iys vagy Jys(ll·) csoport,

F jelentése Thr, Tál, Ser, mimellett 0 jelentése 0 vagy I» konfigurációjú Húr, Ihe vagy fial(2) és

I jelentése hidroxiloeoport vagy -®HB₂ általános képletű csoport, ahol az &₂ jelentése hidrogénatom vagy megegyezik as jelentésénél megadottakkal továbbá gyógyáesatilag elfogadható sóik·

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek még általánosabb példái ások a képviselők, amelyekben a kationos részhez ciklusos hezapeptidek kapcsolódnak, beleértve a szubsztituált származékokat is· Ilyen vegyületek például as alábbiak:

X-Cye-Phe-D-Trp-Iys-fhr-Cys-X,

X-Cys-Phe-D-Trp-Lys-fhr-Cys-Thr-ol,

- 23 Ac-D-Phe-Cye-fhe-D-'lxp-xys-Thr-Cys-X 4e hasonlók· ahol X jelenté·· kationos rész·

A találmány szerinti vegyületek közé tartóénak a

ι.......^r1........~......¹ ' ............................... '

X-Cys-üys-Asn-Phe-I>-D-Tr_v-E-i^I-Phe-Thr-Ser-Cye-Y (II) általános képletű vegyületek - ebben a képletben

X jelentése N-texminális rész,

Ϊ jelentése C-tertainális rése, G-I általános képle tü csoport vagy ennek alkoholja, mimellett az X és X legalább egyike egy kationos részt képvisel,

D jelentése Éhe, Tyr, pk-íhe-pCl-Jhe,

E jelentése lys vagy l^rs(K^) általános képletű csoport, ahol az jelentése rövidszénláncu alkilcsöpört vagy 1-8 szénatomos fluor-alkll-c söpört,

Ϊ jelentése Thr, Val, Ser, mimellett G jelentése D vagy L konfigurációjú Thr, Phe, Nal(2) vagy (Gly)_m, ahol m jelentése O-tól 3-ig terjedő egész szám és

I jelentése hidroxilcsoport vagy -NHR^ általános képletű csoport, ahol Rg jelentése hidrogénatom vagy megegyezik az fent megadott jelentésé vei továbbá ezek gyógyászatilag elfogadható sói·

Szórnatosztatinból (ciklusos dodekapeptid) levezethető, kationos részhez kapcsolódó találmányunk szerinti (II) általános képletű szórnatosztatin-jellegű vegyületekre az alábbi példákat említjük:

— „„ ....................

Ac-B-hAi^CBtgJ-Gly-Cys-J^s-Asn-Phe-Phe-D-Txp-Ays-Thr-Plie—......-1

Thr-Ser-Cyo-UH,

Ac-D-hArg( CHgCP^ Jg-Gly-Cyo-lye-Asn-Jíhe-Phe-D-Trp-Xtye-

1' LI >n,r >11 ml n,..»,,». Nini

Ac-hArg(CH gGí j ) g-Gly-Cys-ly s-Asn—Phs-PhQ-I>-Trp-l<ys—η íhi^j?he-öir-SexM)-Uyö-fi^ éo l· ' ·’ ^Τ ' ^{l niJr}'^{m ln}'^ir ' ¹

Ac—D—hArgC CHgCP j) g—Gly—Cy s—Ő—Phe**Asn—Phs—^is—D—Txp—

—................................................_t l<e-Thi>Pbe-Thr-Sa>D-Cys-GH éo .ρ—............... ...............................................

Ac-D-hArg( CügCP-j ) g-Gly-Cy 0-Ly8-Aβn?-Phe-Phe-D-Trp1^8(Me)-2hr-Phe-Thr-'ber-ö-Cye-Bi₂ és

Ac-D-hArgf Prg) - Vy o-i)-l^rs-Aen-Ph©-lhe-l>-Trp- J^s-Tlu^ihe1

Thr-ösr-Cys-üö,

Γ...........................................................-.......Ac-D-hArg(ide ,hexil j-Gly-Lyo-Aen-rhö-Phe-D-írp-Xy s-Thr-

Általánosabban, a szórnatosztatin-jellegű ciklusos peptidek vagy a teljes dodekapeptid szórnatésztatin-gyürüt vagy pedig ezeknek a gyűrűben szubsztituált analógjait jelentik, amelyek találmányunk szerint a kationos részhez kapcsolódnak· Ilyenek például az alábbiak:

r—........................................... .................................................ι·

X-Cys-Lys-Afin-Phe-Ihe-Trp-Lys-Thr-lhe-Thr-Sor-Cys-üH,

X-Cys-lys-Asn-Phe-Phe^D-'Trp-lye-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH, »-------------------------^- —......—.............. n

X-Cy s-ly s-Asn-Phe-Phe-D-Trp-ly s-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-KHg, ¹ ' ’ ^{Γ Ί} ·”^ΊΙί'............. ' ^{1 1} ......¹ ' I Ί'·^{11 1}..... ¹ ' ¹¹ |

X-Cys-lys-Aijn-Phe-PhG-D-Txp-Iye-Thr-PhG-Thr-Ser-D-Cys-OH,

I—....................................................................................................

χ-Cys-Phe-ui sn-Phc>-Phe-D-Trp-Iy s-Thr-Phe-Thr-Ser-Cy s-OH és hasonlók, amely képletekben X jelentése egy kationos rész·

Számos, a gyűrűben szubsztituált analóg ismeretes és találmányunk oltalmi körébe tartoznak mindazok, amelyek a fentiekben meghatározott kationos részt tartalmazzák· A találmány szerinti vegyületek körébe tartoznak a megfelelő redukált gyűrűk, vagyis a diszulfhidrilek is·

A ciklusos dodekapeptid illetőleg hemapeptid részeken történő szubsztitúció aktív analógokhoz vezet. Ilyen módon szubsztituált szórnatosztátin-jellegű analógok a fent ismertetett kationos részhez kapcsolódva olyan analógokat eredményeznek, amelyek nem várt kiváló biológiai hatással és szelektivitással rendelkeznek.

A fent ismertetett módosításokat valamennyi iámért ssomatosztatin-jellegű analógok osztályánál alkalmazhatjuk· Az adatokból arra lehet következtetni, hogy a találmány szerinti kationos réez a peptidek biológiai aktivitását elősegíti· Találmányunk oltalmi kőre ezért nem csupán azokat em analógokat öleli fel, amelyeket név szerint megemlítünk, hanem valamennyi szomatosztatin analógot» amelyek a peptid analógon kationos részt tartalmaznak·

A fenti vegyületek azok gyógyászatilag elfogadható megfelelő sóik alakjában is előállithatók·

A találmány szerinti vegyületek tehát meglepő módon hatékonynak és hosszú ideig tartó hatásúnak mutatkoznak, továbbá a növekedési hozmon képződésének gátlásában és a glukagon illetőleg az inzulin kiválasztódásának gátlásában jelentős aktivitást mutatnak. A nagyobb vegyületek, vagyis a hexapeptideknél hosszabb peptidek a gyomorsav kiválasztását nagyobb mértékben gátolják·

A szomatosztatin aktivitásának megközelítő mérésére szolgál, hogy a testben as inzulin, a növekedési hozmon és/vagy a glukagon termelését mérsékli·

A szomatosztatlnnak a test hormonjaira kifejtett szabályozó hatásának mérésére szolgáló biológiai tesztek során a glukoz-indukálta inzulin képződés, az inzulin-indukálta glukagon képződés és a nembutái- vagy klonidin-indukálta növekedési hozmon képződés gátlását mérjük, özeknek a teszteknek a részletes ismertetését a 4.» 5· és 6· példák tartalmazzák·

99^999999 ^9

- .·.· ’

..is./.- 'aSLi-A.Λ . ‘ * .

« · <

• 4

- 27 A találmány szerinti szórnatosztátin-jellegű analógokat a szomatosztatin által szabályozott humán kórképek kezelésére alkalmazzuk· Szék között említendők a karcinoid szindróma, a gyomorfekélyek, a XX tipusu cukorbetegség (nem-inzulin függő diabétesz), a csipőbélsipoly (ileosztomla) okozta hasmenés (diaxxhea), az endokrin termék keletkezésének elfojtása az apudomas-ból, továbbá a glukagon és növekedési hormon nem megfelelő kiválasztása diabétesznél, a glükóz és aninosav gyomor-bél-traktusból történő felvételének megváltozása a diabétesz különböző komplikációi során, beleértve a recehártya-bántalom (retinopatia), vesebaj (nophropatia), magas vérnyomás és a szivkoszoru-verőér betegségeket is·

A találmány szerinti vegyületek tumor-regresszió előidézésére alkalmazhatók, különösen olyan tumoroknál, amelyek az epidemálie növekedési faktor receptorokkal vannak Összefüggésben, például az agyfüggelék mirigy, agytumorok (agyhártyadaganat), hasi (abdaminális) tumorok, endokrin és pankreász tumorok (v.ö· Lamberts, XSX Atlas of Sciences Phaxmaoology, 179-184« oldalak (1988))· felhasználhatók más kórtüneteknél isi gyomor-bél-traktussal összefüggő betegségek, igy a felső gyomor-bél-traktus vérzések, gyomom és nycmbélfekóly, stressz okozta fekély és nyelőcsővi csomóképződés* További indikációs területeks akromegália, hasnyálmirigy-vérzés és sipoly, hasi műtét»* kot követő sebgyógyulás és komoly trauma illetőleg nagyon magas vércukor-érték okozta stressz tüneteinek ceiUapitása·

A találmány szerinti vegyületek az ismert szomatosztatin analógokkal in vivő kísérletekben történő összehasonlítás során hatékonyabbnak és hosszabb Iáéig ható anyagoknak mutatkoztak· Anélkül, hogy rugaszkodnánk a fenti megfigyelés bármilyen elméletéhez vagy magycixázatához, feltételezzük, hogy a membrán kötésű rósz kapcsolódása a szórnatosztatin-jellegű ciklusos pepiidhez olyan vegyülőteket eredményez, amelyek membrán affinitása nagy és ez a szövetekben elváltozást okozhat· «izek a tulajdonságok a test foszfolipid membránjaiban történő lerakódást okoznak és Így lehetővé válik, hogy az analógok hosszabb ideig a testben maradjanak· feltételezhető, hogy ezek a módosítások a receptor affinitás növekedéséhez is vezetnek a receptor terhelés elősegítése révén (v.ö. őchsyzer fent ajánlott modelljével).

A gyakorlatban a találmányunk szerinti vegyületeket illetőleg az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítményeket hatékony mennyiségben alkalmazzuk* Ezen vegyületeket vagy készítményeket az igényektől függően bármilyen kezelési mód, igy orális, parenterális - beleértve a ssubkután, intramuszkuláriB és intravénás kezelést is - txanszdermális vagy intxanazális kezelés utján alkalmazhatjuk· A legmegfelelőbb kezelési mód az adott esetekben a kérdéses hatóanyagtól és a kezelni kívánt betegtől függ· A vegyületet vagy a készítményt elhúzódó hatású, implantációs vagy injekciózható készítmények alakjában is alkalmazhatjuk·

Találmányunk szerint a hatóanyagot általában 0,001 és 10,0 yug/kg testtömeg· előnyösen 0,01 és 5,0 yug/kg testtömeg mennyiségben alkalmazzuk· A humán terápiában a hatóanyagot 0,01 és 2,0 yUg/kg napi adagolásban alkalmazzuk· A kezelés egyszeri alkalommal vagy pedig több alkalommal elosztva történhet vagy pedig a legjobb hatás elérése céljából elhúzódó hatású készítményt is alkalmazhatunk· Ha csak egyetlen adagot használunk a kezeléshez, akkor a mennyiség mintegy 0,01 és 0,10 yug/kg között van·

A találmány szerinti vegyülő tekkel illetőleg esőket a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó készítményekkel történő kezeléshez használt adag a kezelni kívánt betegtől, a kezelés módjától és a betegség súlyosságától függ· Általában a parentorális késeléshez kisebb adag szükségéé, mint a többi késelési módhoz, amelyek as abszorpciótól jobban függenek·

Találmányunk oltalmi körébe tartozik a hatóanyagként a fenti vegyületeket, továbbá gyógysseréssetileg elfogadható nem-toxikus vivőanyagokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása is· Ahogy a korábbiakban említettük, ilyen készítményeket parentexális kezelésre - beleértve a szubkután, intxamuszkuláris és intravénás késelési módokat is - folyékony oldatok vagy ssusapenziók alakjában készítjük» orális kezeléshez előnyösen tablettákat vagy kapszulákat alkalmasunk! intranazális kezelési módhoz pádig porokat, orrcseppsket vagy aeroszolokat használunk* • · · · • 30 ▲ készítményeket adagolási egységek alakjában alkalmazzuk és a gyógyászatban jóliamert módszerek bármelyike szerint készítjük el ezeket» v.ö. kemington’s Phazaaceutical Sciences, 17« kiadás· Maok Publishing Gompany, Baston, PA·, 1965· A parenterálls kezeléshez alkalmazott készítmények szokásos segédanyagként steril vizet vagy nátrium-klorid-oldatot, alkilén-glikolt, például propilén-glikolt, polialkilén-glikolt, például polietllén-gUkolt, növényi eredetű olajokat, hidrogénezett naftalinokat és hasonlókat tartalmazhatnak. Orális kezeléshez a készítményekhez epesavas sókat és acilkarnitinókét is adhatunk (Am· J. Physiol·, 251. 332 [1966])· Hazálls kezelésre alkalmas készítmény lehet szilárd és segédanyagként például laktózt vagy dextránt tartalmazhat, vagy «vizes illetőleg olajos oldat lehet orrcsepp vagy spray· Bukális kezeléshez alkalmas készítmények a szokásos segédanyagokat, Így cukrot, kalcium-sztearátot, magnézium-sztearátot, előzselatinozott kmnényitft és hasonlókat tartalmazzák·

Nazális kezelési módhoz az orr nyálkahártyájának membránján történő áthatolás elősegítésére felületi feszültséget csökkentő savakat, például glikokolsavat, kóleavat, taurokólsavat, etokólsavat, dezoxikálsavat, kenodezoxíkólsavat, dehidrokólsavat, glukodeoxi-kőlsavat és hasonlókat alkalmazunk (Β. H· Vickery: Ltü-lí and Its Analogs-Contraception and Therapeutic Applications, Pt· 2, Β· H. Vickexy és é· J· Bestor, MTI Prése, luncastér, Nagy-isritannia, 1967)·

- 31 A találmány szerinti vogyülotekhss egy vagy több felületi feszülteéget csökkenté savat vagy sót, előnyösen egyetlen gyógyászatilag elfogadható savat vagy sót adhatunk· Gyógyászatilag elfogadható felületi feszültséget csökkentő sók közé tartoznak azok a sók, amelyek a pepiid abszorpcióját elősegítő tulajdonságot és a felületi feszültséget csökkentő sajátságot is megtartják, továbbá káros hatással nem rendelkeznek és más szempontból sem kontralndikáltak· Ilyen sók például a szervetlen bázisokból levezethető sók, így a nátrium-, kálium-· lítium-, aomónium-· kalcium-· magnézium-, vas(II)-, cink-· réz-, mangán(Il)-, alumínium-, vas(III)-, mangántIV)-sók és hasonlók· Különösen előnyösek as ammónium-, kálium*· nátrium-, kalcium- és magnéziua-sók. A gyógyászatilag elfogadható szerves, nem-toxikus bázisokból levezethető sók primer, szekunder és tercier aminok, szubsztituált aminek, igy természetben előforduló szubsztituált aminok, ciklusos aminek és bázikus ioncserélő gyanták, például izopropil-amin, trimetil-amin, dietil-amin, trietil-amin, tripropil-amin, etanol-amin, 2-dimetil-amino-etanol, 2-dietil-amino-etanol, trometamin, diciklohaxil-amin, lizin, arginln, hisztidin, koffein, prókáin, hidrabsmin· kólin, bétáin, etllén-diamin, glükozamin, metil-glükamin, teobromin, purinok, piperazin· piperidin, B-etil-piperidin· poliamin-gyanták és hasonlók· Különösen előnyös szerves nem-toxikus bázisok as izopropil-amin, dietil-amin, etanol-amin, trietil-amin, diciklohexil-amin, kólin és koffein* • 32 A találmány gyakorlati kivitelesé·· során as alkalmazott felületaktív anyag mennyi ságit úgy választjuk meg, hogy a szamatosztatin analógok abszorpcióját jobban növelje, mint más olyan felületaktív anyagok, amelyek a peptidek abszorpcióját bizonyos mértékben növelik· azt találtuk, hogy ez a mennyiség gyakran 0,2-15 még gyakrabban 0,2-5 tömeg/téri ogat#· A felületaktív anyag előnyösen 0,5-4 tömeg/ térfogat#, célszerűen 1 tömeg/térfogat#, előnyösen tömeg/térfogét# mennyiségben von jelen·

A találmány szerinti vegyületeket kívánatos hosszabb időközönként adagolni, igy például egyetlen kezeléssel egy hét és egy év közötti időtartamra· Különböző elhúzódó hatású, implantált vagy injektálható adagolási formákat alkalmazhatunk* As adagolási fosnák például a vegyületek olyan gyógyássatilag elfogadható nen-toxikus sóit tartalmazhatják, anoly a testnedvekben rosszul oldódnak* ilyenek például az a) savaddiciós sók, igy foszforsavas, kénsavas, citromsavas, borkősava·, csorsává·, panoeeavae, algineava·, poliglutaninsavas, naftalin-nono- vagy - i ysulfoneavae, polighlakturonsavas és hasonló sók* b) többértékű fém-kationokkal alkotott «ók, ilyenek például a cink-, kalcium-, bizmut-, bárium-, magnézium-, alumínium-, rés-, kobalt-, nikkel-, kadmium-aék és hasonlók vagy szerves kationnal képezett sók, például k,S*-dlbensil-etilén-diamin vagy etilén-dlamini vagy c) as a) és b) ssakass alatt felsorolt sók kombinációi, például a cink-tonnát só· A találmány szerinti vegyületek vagy előnyösen esek valamilyen viszonylag rosszul oldódó sói, mint a fent csali tettek, gól forrná jóban is elkészíthetők, igy az aluminium-sztearát gól például szezámolajjal elkészítve injekciósáéra alkalmas· Különösen előnyös sók a cink-sók, igy a cink-tannát-sók, pamoát-sók és hasonlók· A lassan kioldódó injekciós vagy implantációs formák a vegyületet vagy annak sóját diszperz vagy kapszulázott alakban tartalmazzák egy lassan le boaló, nem-» toxikus, nem-antigén polimerben, például politej eavas/poliglikolsavas polimerben· A vegyületeket vagy el&ayösen ezek viszonylag rosszul oldódó sóit, például a fent említetteket koleszterol mátrix pelletek vagy szilasztomer mátrix implantumok alakjában is foxmuláshatjuk, különösen állatgyógyászati alkalmazás esetén· A lassan kioldódó, depó inplantumok vagy injekciózható formáik, például a liposzómák az irodalomból jól ismertek} v.ö· Sustained and üontrolled kelease Drug Pelivexy Systems c. könyvet (4· &· Robinson kiadó, Karcéi Pekker, Inc·, Kew Xoxk, 1978)·

A találmány szerinti vegyületek bármilyen módszerrel előáll! thatók, amelyek a peptid-kémiában jártas szakemberek számára ismertek· A számos módszer kiváló összefoglalását tartalmazza 4· M· öteeart és J· fi· Xounga Solíd Phase Peptide öynthesis” című könyvének 2« kiadása (Pierce Chemical Co·, Rockford, Illinois, 1984) és J. Meienhofers Hosmonal Proteiné and Peptides című könyvének 2· kötetében a 46· oldalon (Academic Press, Üew Xork, 1973) a szilárd fázisú peptid-szintézisre és 1· öchroder és K· Lubkei The Peptides^ 1« kötet (Academic Press, Bew Xork, 196$ a klasszikus, oldatokban történő szintézisre· • ·♦· · ·♦ · • · · · · · · ·· ··· ♦ ·· ··

Általában a módszerek egy vagy több amínosav vagy megfelelően védett amínosav szekvenciáinak összeadását jelentik növekvő peptid-lánccá· A szokásos eljárás szerint az első aminosav amino- vagy karboxilcsoportját megfelelő védőcsoporttal védjük· A védett vagyderivatizált aminossvat ezután vagy egy inért szilárd hordozóhoz kapcsoljuk vagy pedig a reakciót oldatban végezzük el oly módon» hogy az amid-képződésre alkalmas körülmények között hozzáadjuk a következő aminosavat» amely a megfelelő» alkalmasan védett amino- vagy karboxilcsoportot tartalmazza· A védőcsoportot ezután az újonnan hozzáadott aminosav-maradékről eltávolítjuk, majd a következő» megfelelően védett aminoemvat adjuk hozzá és így folytatjuk tovább· Ha már valamennyi kívánt aminosavat hozzákapcsoltuk megfelelő szekvenciában, akkor a gegmaradt védőcsoportokat illetőleg szilárd hordozókat egymásután eltávolítjuk» így a nyers» redukált polípeptidet kapjuk· A pepiidet híg vizes közegben történő oxidativ ciklizálásnak vetjük alá» például a levegő oxigénjével, kálium-vas(III)-cíaniddal, jóddal, ICMgüHgl vegyülettel vagy hasonlókkal j előnyösen kálium-vas(III)-cianidot alkalmazunk· A diszulfid-köt sok kialakítását a peptíd-lánc oxidációja utján végezhetjük el» miközben a peptid még a gyantán van (kívánt esetben a tiol-védőcsoport lehasitása után)· Végül a pepiidet sójából felszabadítjuk» majd kromatográfiás tisztítás utján a végtermékhez jutunk·

A természetben élő nem forduló fenti aminosavak előállítása a szakember számára ismert és történhet folyadék-fázisu vagy szilárd-fázisú poptid-szintézis utján·

Λ · ·· ·· *

- 35 A találmány szerinti vegyületek előállítását előnyösen szilárd-fázisú poptid-ssintézissel folytatjuk le·

Az eljárás szerint as aminosavak oC-amino funkciós csoportját egy savra vagy bázisra érzékeny csoporttal védjük. Ezeknek a védőésöpörtoknak a peptid-kötés létrehozásának körülményei között stabilaknak kell lenniük, miközben a növekvő peptid-lánc megsértése nélkül vagy a peptidben lévő bármelyik kixúlis centrum racemizálódása nélkül eltávolítás tók legyenek. Ilyen alkalmas védőcsoportok a tero-butil-oxi-karbonil-, benzil-oxi-karbonil-, o-klór-benzil-oxi-karbonil-, bifenil-iso-psspil-oxL-karbonil-, terc-«uail-oxi-karbonil-, izoboxnil-oxi-karbonil-, <X. , ot-dimotil-3,5-dimotoxi-bonsil-oxi-karbonll-· o-nitro-íonil-szulfenil-, 2-ciano-terc-butil-oxi-karbonil-, pgfluorenil-me til-oM-karbonil-csoport és hasonlók, előnyösen terc-butil-oxi-karbonil-csöpört.

Az oldalláncot védő csoportok közül különösen előnyösek a lizin esetént bensil-oxi-karbonll· 9-fluorsnil-metil-oxi-karbonil-, ρ-toluol-szulfonil-, toro-butil-oxi-karbonil-csoport ós adsuaanti 1-oxL-karbonil-c söpört | a tirozin esetébent benzil-, o-bróa-benzil-oxi-karbonil-, 2,6-diklór-benzil-, izopropil-, ciklohexil-, ciklopentil- és acstilcsoporti széria vagy treonin esetében! bensü- és tetrahidropimnilesöpört| cisztein esetében: 4-metoxi-benzil-,

4-metil-bensil-, benzil-, acetamido-metil-, etil-karbaaoil-, ö-ssulfonát-csöpört) triptofán osetébont B^-foxmil-csöpört vagy nem szükséges a védőé söpört.

« · » · · · · · • ··« ··· ·· · • · · · · » · ·♦ ·»· »-·-· ·· ··

- 36 A C-tominális aminosav egy megfelelő szilárd hordozóhoz kapcsolódik· Alkalmas szilárd hordozók a fenti szintézishez azok az anyagok, amelyek a reagensekkel és a lépésenként! kondenzációs illetőleg a védőcsoportot eltávolító reakciók körülményei között inertek, továbbá az alkalmazott regkcióközegben nem oldódnak· Ilyen alkalmas hordozók a klór-awtil-polisztirol- illetőleg divinil-benzol polimerbe, hidroxL-metil-polisztirol és divinil-benzol polimerbe és hasonlók, különösen a klór-metil-polisztirol és 1 % divinil-benzol polimerbe· Ha a vegyület C-terminális csoportja egy amidcsoport - vagyis az (X) általános képletben az X jelentése ü-HHkg “ akkor igen előnyös hordozó a p-metil-benzhidril-amino-polisztirol és divinil-benzol polimerbe (Kivaille és munkatársait Holv. Chim· Aota·, 54· 2772 [1971]).

A klór-metil-polisztirol és divinil-benzol-polimer tipusu gyantához történő kapcsolódást úgy folytatjuk le, hogy az előnyösen tarc-butil-oxi-karbonil-csöpörttál védett HoC-védett aminosavból cézium-, tetxwaotil-ammónium-, trietil-ammónium-, l,5-diazabiciklo[5,4,ölundok-5*ón vagy hasonló sóinak alakjában etanollal, acetonitrillái, N,H-dimetiWoxoamiddal és hasonlókkal elegyet készítünk, előnyösen a cézium-só dimetil-formamiddal készített elegyét használjuk, majd est magas hőmérsékleten, például 40-60 °C-on, előnyösen 50 °C-on, 12-48 óra hosszat, előnyösen 24 óra hosszat klór-metil-gyantával reagáltatjuk. Az U<^-terc-butil-oxi-karbonil-aeinooavat a benzhidril-amin-gyantához úgy kapcsoljuk, hogy például egy Β,Β'-όί• ♦ • · · · · • ··· ··· »· · **«·

- 37 izopropil-karbodiiaid és 1-hidroxi-benzotriazol révén létrejövő kapcsolást 2-24 óra hosszat, előnyösen 2 éra hosszat tartó 10-50 °C között, előnyösen 25 °C-on egy oldószerben, például diklór-metánban vagy dimetil-foxmamidban, előnyösen diklór-metánban végzett reakció utján folytatjuk le. ás egymás után védett aminosavak kapcsolását egy, a szakember számára ismert automata polipeptid szintetizátorban is végrehajthatjuk, ás h’«L-védőcsoportok eltávolítását végrehajthatjuk például trifluor-ecetsavnak metilén-kloriddal, hidrogén-kloridnak dioxánnal, hidrogén-kloridnak ecetsavval, hidrogén-kloridnak izopropil-alkohollal készített oldatában vagy más erős savas Oldatban, például 50 %-os trifluor-ecetsavnak diklór-metánml készített oldatában a környezeti hőmérsékleten, á trimetil-aminnal vagy sás hasonló bázissal végzett semlegesítés után mindegyik védett aminosavat előnyösen 2,5 mólnyi feleslegben alkalmazzuk és a kapcsolást diklór-metátiban, diklór-metán és dimetil-formamid «legyében, dlmetil-fonMusidban vagy hasonlókban, előnyösen metilén-kloridban környezeti hőmérsékleten folytatjuk le. á kapcsoló ágens általában l.B’-diciklo-hexil-karbodiimid diklór-metánnal készített elegye, de lehet B.M’-diizo-propil-karbodiimld vagy más karbodiimid egyedül vagy 1-hidrozi-bensotriazol, K-hidroxt-szukciuimid, más S-hidroxi-iaidek vagy oximok jelenlétében. Más módszer szerint védett aminosav aktív észtereket, például p-nitro-fenilt, pentafluor-fenílt és hasonlókat vagy szimmetrikus anhidrldeket is alkalmazhatunk ·

A szilárd-fázisú szintézis végén az összes védett polipepüdét eltávolítjuk a gyantáról· Ha a gyanta-hordozóhoz kialakított kötés benzil-észteres típusu, akkor a hasítást alkil-amlnnal vagy fluor-alkil-aminnal történő aminolizis utján folytatjuk le C-texminális alkil-amidot tartalmazó peptidek «Hetében, míg helyettesitetlen C-terminálie amldokat tartalmazó peptidek esetében az aminolizis például ammónia és metanol vagy attaónia és etanol elegyével történik -10 és 50 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 25 °C körüli hőmérsékleten 12-24 óra alatt, előnyösen 18 óra alatt· A (^terminális szabad karboxilcsoporttal rendelkező peptideket hidrogén-fluoriddal vagy más erős savval történő reakció utján vagy pedig elszappanositás révén kapjuk» A peptideket eltávolíthatjuk a gyantáról például metanollal történő átészterezés, majd ezt követő aminolizis, elszappanositás vagy litium-bór-hidriddel történő C-terminális alkoholos redukció utján is· Egy másik módszer szerint a C-terminális pepiidet még a gyantán közvetlenül is alkohollá redukálhatjuk. A védett pepiidet ezen a ponton ssilikagéles kromatografálással tisztiihatjuk· A polipeptid oldallánci vódőcsöpörtjainak eltávolítását úgy folytatjuk le, hogy az aninolizis után kapott terméket például vízmentes folyékony hidrogén-fluoriddal kezeljük anizol vagy más szén-megkötő jelenlétében, hidrogén-fluorid és piridin komplexével kezeljük, trisz(trifluor-acetil)boronnal és trifluor-ecetsawal kezeljük, hidrogénnel és palládiumos szénnel vagy polivinil-pirrolidonnal redukálunk vagy folyékony ammóniában nátriummal redukálunk, ·»·« előnyösen folyékony hidrogén-íluoriddal végezzük a redukciót anizol jelenlétében -lu és *10 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 0 °C körüli hőmérsékleten, 15 perc és 2 óra közötti ideig, előnyösen 1 óra hosszat tartó reakció során· Beuzhidril-amin gyantához kötött peptidek esetében a gyantáról történő lehasitást és a védőcsoportok eltávolítását egyetlen reakciólépésben is elvégezhetjük oly módon, hogy folyékony hidrogén-fluoridot alkalmazunk anizol jelenlétében· Á védőcsoportoktül teljesen felszabadított poüpeptidet ezután oxidativ ciklizálásnak vetjük alá híg vizes vagy vizes és szerves oldószeres elegyben, miközben oxidálószerként a levegő oxigénjét, kálium-vas(1XX) -cianidot, Jódot, ICHgCHgl vegyületet és hasonlókat, előnyösen ekvivalens mennyiségű kálium-vas(XXX)-cianidot alkalmazunk· Az oldatot például Blofíad AG-3 anionos ioncserélő gyantával sótalanitjuk és az alábbi kromatográfiás lépésekkel tisztítjuk, miközben bármelyik vagy mindegyik kromatográfiás típust alkalmazhatjuk* acetát-foxmában jelenlévő gyenge bázikus ioncserélő gyanta$ hidrofób adszorpcióé kromatográfia polisztirol-divinil-benzolon, például Amberlite XA£j szilikagéles adszorpcióé kromatográfiai ioncserélő kromatográfia karboxi-metil-cellulózonj megoszlásos kromatográfia, például Sephadex G-25 tölteten vagy ellenáramú króm t ograf álás j magasnyomású folyadék-kromatográfia (HPLG), különösen ellenáramú HPLC oktil- vagy oktadecil-szllil-szilika töltetű oszlopon· * ··· ·

- 40 A C-terminális alkoholos funkciójú peptidek előállítását a megfelelő metil-észter-csoport vagy peptid gyanta észter litium-bőr-hidriddel történő redukciója utján folytatjuk le·

A fentiek értelmében a találmány szerinti vegyületek és ezek gyógyászatilag elfogadható sói a találmány szerinti eljárással as alábbi módszerekkel állíthatók élőt a védőcsoportokat és adott esetben a védett polipé? tidet a kovalensen kötött szilárd hordozóról eltávolítjuk és igy a találmány szerinti (I) vagy (XI) általános képletű vegyültteket vagy ezek gyógyászatilag elfogadott sóit kapjuk - ezek a vegyületek

a) ciklusos szomatosztatin-szerü peptldet és

b) a peptid egyik vagy mindkét Cys gyökéhez kapcsolódó kationos részt tartalmaznak.

Találmányunkat az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül azonban, hogy találmányunkat ezen példákra korlátoznánk·

Példák

A tezmóssetben elő nem forduló hArg(H₂) aminosav osztály szintézisére szolgáló szintetikus módszerre általános példákat ismertet a Sostor Ós munkatársait 4· Mód· Chem.» 65 (1988) közlemény és a 4 667 014 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (közzétéve 1987· május 19·)·

Az (I) és (XX) általános képletű vegyületek előállítása as alábbiakban ismertetett kiindulási vegyűlotekből történik· <X -terc-butil-oxi-karbonil-B® ,B^*bisz-l,1,1-trifluor-etil-D-homoarglnin-hidroklorid előállítása:

»33 g toluolszulfonaavas benzil-B-benzil-oxi-karbonil-P-lisin-éester (B· Bezus és 1·· Zervas: J· Am· Chem· Soc.í JU» 719 £1961]) ős 3,60 g 1,1,1-trif luor-die til-tio-urea (M· Uher és J· Jendrichovsky, Coll» Czech: 289 £19731) 50 ml metil-cianiddal ős 50 ml tetrahidrofuránnal késeitett elegyéhez 2,06 g higany(II)-kloridot ób 3,3 g trietil-amint adunk· A reakcióelegyet 80-90 °C-ra melegítjük és esen a hőmérsékleten tartjuk 8 óra hosszat· Bst követően 20 %-os higany(II )-kloridot, triotll-amlnt ős tio-ureát adunk hozzá· A melegítést 15 óra hosszat folytatjuk· Bzután a reakcióelegyet ssobahőmőrsőkletro lehűtjük, celliten keresztül szűrjük ős vákuumban szárazra pároljuk· A maradékot szilikagőllel töltött oszlopon karomat cgrafáljuk, miközben eluálószerként metilén-klorid ős metil-alkohol 19:1 arányú elegyét alkalmazzuk, amelyet fokozatosan 9:1 arányú eleggyő hígítunk» majd utána a metilén-klorid és metil-alkohol 4:1 arányú el egyé vé hígítjuk· A terméket tartalmasé frakciókat vékony ró tegkroaatográfiáuan követjük» utána egyesítjük és szárazra pároljuk· Termékként 7,6 g sárga habos anyagot kapunk· A habot egy ssllikagéllel töltött másik oszlopon kromatografáljuk, miközben az eluálószerként használt metilén-klorid és metil-alkohol elegyének gradiense 9:1 arányról 4il arányra csökken» ·»

- 42 majd a metilén-klorid és metil-alkohol 4H arányú izokratikue elegyét alkalmazzuk· A terméket tartalmazó frakciókat vékonyrétegkromatográfíásan követjük, majd a frakciókat egyseitjük és szárazra pároljuk. Termékként 7,0 g toluol-ezulfonoavae benzil-NoL -b^zil-oxí-karbanil-N^,^*bisz-2,2,2-trifluor-etil-XPhomoarginineav-észtert kapunk» (oCJ^ . 10,2 ° (0 · 1,5 metil-alkohol).

g fenti termék és 1 g 10 % palládiumot tartalmazó aktivesén 150 ml etil-alkohollal készített elegyéhez 3 óra hosszat atmoszférikus nyomáson hidrogén-gázt vezetünk· Ezután további 0,4 β 10 % palládiumot tartalmazó aktivszenet adunk az elegyhez ée a hidrogénezéat 3 óra hosszat folytatjuk· A reakcióelegyet celliten keresztül szűrjük, szárazra bepároljuk, igy 4 g K^G,K^G*-biez-(2,2,2-triíluor-etil>D-homoarginin-toluol-szulfonátot kapunk» [o( Jn⁵ - -7.76 ⁰ (C · 0,4 metil-alkohol).

A fenti termékből 1,96 g-ot 8 ml 1 n nátrium-hidroxid és 8 ml dioxán «legyében oldunk, majd a kapott elegyhez 0 °C-on 160 mg magnózium-oxLdot és 1,05 g di-terc-butil-dikarbcnátot adunk· Az elegyet o °C-on 1 óra hosszat keverjük, majd a keverést szobahőmérsékleten további 3 óra hosszat folytatjuk· A magnézium-sót ezután leszűrjük és a szürletet vákuumban bepároljuk· A bázikua oldatot vízmentes dietil-étőrrel mossuk, majd 0 °C-on 1 n sósav-oldattal pM 3,5-ig megsavanyitjuk* A terméket a savas vizes oldatból etil-acetáttal extraháljuk, majd vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk· A szárítóséért leszűrjük és a szürletet szárasra pároljuk, igy fehér habos terméket ···· ♦·»· ···· ·· • · · » · · • ··· «*· ·· · • · · · * · ·

- 43 kapunk· A habos anyaghoz AG-3 Cl~ gyöngyöt adunk, Így a vegyületet kloriddá alakítjuk át· Texmékként 1,4 g

S <£ -t erc-bu ti l-oxi-karbonil-K^ö ,H® ’ -bisz2,2,2-trif luor-etil-JJ-homoargiuin-hidrokloridot kapunk· [o(]|⁵ - -2,19 ⁰ (C · 5 nmtil-alkohol).

1· példa (X) általános képletű vegyületek szintézise

Beckman 990 tipusu peptid-szintetizátor reakcióedényébe 11,11 g (4 araól) 4-a til-benzhidril-amin-gyantát helyezünk· Ezt követően a gyantához egy szintézis-program segítségével egymás után hozzáadjuk az aminosavakat. Tipikus szintézis-programot ismertet a 4 667 014 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (közzétéve 1987« május 19) 21· oszlopa· Hasonló peptid-szintézis programokat is lehet alkalmazni máé, a kereskedelemben hozzáférhető péptld-szintetizátorokhoz·

A) Az (X) általános képletű vegyület előállításakor a gyantához kötjük egymás után a 2,0-2,5 mólekvivalens mennyiségben feleslegben vett mindegyik aminosavat és az E,ü’-diciklohexil-karbodiimidet·

A gyantához az egymást követő kapcsolási ciklusok alatt az alábbi vegyületeket adjuk* «09 g terc-butil-oxl-karbonil-Thr(benzil)-OH és 4 g 1-hidroxL-benzotriazol

3*09 g terc-bu til-oM-karbonil-Cys(benzil-OMe) -OH *·*? i··· !··· ·· ·· • · * · · · • ·. ···. ··· ·· · • · - * · · · · ·· «·· ·»· _<a .»

- 44 3,09 g terc-butil-oxi-karbonil-Thr(benzil)-OH

4,14 g terc-butil-oxi-karbonil-lys(o-klór-benzil-oxi-karbonil) és

3,04 g terc-butil-oxi-karbonil-D-Trp-OH.

A D-lrp kapcsolódása után 0,5 % indolt adunk az oldathoz* A gyantához ezután egymás után az alábbi vegyületeket adjuk:

2,65 g terc-butil-oxi-karbonil-PheOH

3,42 g terc-butil-oxi-karbonil-Cys(b©nzil-UMe)-OH és

1,75 g terc-butil-oxi-karbonil-Gly-OH· finnél a pontnál a kapott hepapeptid gyantát kisebb részekre osztjuk· 3,37 g (0,75 mmól) részhez egymás utáni ciklusokban további vegyületeket kötünk, igy 1 g terc-butil-oxi-karbonil-D-hArg(CH2C®^)₂-üH és 1 g 1-hidroxi-benzotriazol, majd 2 ml ecstsav-anhidxld 12,4 ml dimetil-f ortaaraiddal készített elegye kerül sorra·

A gyantát a reakcióedényből eltávolítjuk, diklór-metilénnel mossuk, majd vákuumban szárítjuk, igy 3,07 g védett polipeptid-gyontát kapunk· A pepiidről a védőcsoportokat eltávolítjuk és a peptidet eltávolítjuk a gyantáról oly módon, hogy 30 ml vízmentes folyékony hidrogén-fluorldot adunk a gyantához 3 ml anizol Jelenlétóban 0 °U-on 1 óra hosszat. A hidrogén-fluoridot vákuumban elpárolog tatjuk és az B-Ac-ÜhArgCCHgCppg-Gly-Cys-Phe-B-Txp-tys-Thr-Cys-Thr-lÜLg vegyületet hidrogén-fluorld-sÓ alakjában éterrel mossuk· A maradékot ezután mintegy 1 1 különlegesen tisztított vízzel (nanoviz) mossuk· Az extraktumokat ···· *···

- 45 a 4 I teljes mennyiség eléréséig nagyon tiszta vízzel azonnal hígítjuk· Az oldat pH-ját híg ammóniw«hidroxíd-oldattal 7,5-8-ra állítjuk be. A pepiidet 80 ml 0,01 mólos Κ^ΡΒ(ΟΝ)^ oldat lassú hozzáadásával ciklizáljuk* A híg peptid-oldatot 10 %-os ecetsav-oldattal pH 4,5-re magsavanyitjük és egy protonált Biorex 70 oszlopba öntjük, amely vizet tartalmaz (Biorad Laboratörlés, Hercules, CA). A feltöltés után a megmaradt sókat 2 liter vízzel kimossuk az oszlopból· A pepiidet az oszlopból eluáljuk, miközben az eluálószer gradiensei 1 1 5 í HOAc és 1 1 50 % HuAc, majd 1 liter 50 %-os HüAe-vel folytatjuk· 190 frakciót gyűjtünk Össze (20-Jv ml) egy 1800 automata frakció-gyűjtővel· A -Λ 280 nm-nél mért abszorbclót egy Hewlett-Packard 845QA UV/VIS spektrofotométerrel mérjük minden ötödik frakciónál* Az eredményeket gráf ikusan ábrázoljuk és a 30-55» 56-90 illetőleg a 91-120 frakciókat egyesítjük, majd szárazra pároljuk és mindegyiket 100 ml vízben eloszlatjuk· A nyers terméket ecetsavas sóvá álalaki tjük úgy, hogy acetát-formává átalakított AGjX, gyenge bázikus tercier amixwgyantával töltött oszlopon átengedjük. A frakciók liofilizálása utján 250 mg, 350 mg illetőleg 125 mg terméket kapunk· Az egyesített frakciókat Spectra Physica magasnyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) rendszerrel Vydac kP-18 oszlopon értékeljük ki. A 250 mg-os és a 350 mg-os részeket HPLC kromatogrufálással 200 g Vydac 0-18 ( 20-30 mikron) oszlopon tisztítjuk, puff érként 28 #-os metil-cianid és 72 > viz ©legyét alkalmazzuk

- 46 (0,03 »41 HH^OAc-ban, pH » 4,5)· A legnagyobb W-abszoxpciós (2Bto nm) csuceot esszegyUjtjUk 4b szárazra pároljuk, majd nagyon tiszta vízzel háromszor liofilizáljuk, igy termékként 135 mg tiszta, ciklizált SAc-B-haigíCHgC^igI ·' ^{1 1 1 LlJl 1 r 1 1}1

-Gly-Cys-Bhe-BTxp-I<s-^>z^Cys-Thr-MHg vegyületet kapunk* (oq25 _e ._18>ö ° (c « 0,3 HUAc)·

B) Az 1· példa A) szakasza szerinti eljárást alkalmazzuk, azonban kiindulási anyagként a megfelelő védett aminosavat használjuk, igy az alábbi vegyületeket kapjuk*

I ......η

B-Ac-D-hArg(kt₂ ^Gly-^s-Bho^BTrp-I^s-Th^Cys-Thr-HHg r ....................................................p !PAc-D-hArg(Bu)-Gly-Cye-Ihe-BTrp-l^B-®3r-€ys-Thr-BH₂

I ¹¹¹'^r'.......¹...... ¹ '^r' ^,llLI ~_f

S-Ac-B-hArg(me til ,hexLl )-Gly-Cys-fhe-DIrp-lys-Thr-Cys-Thr-BHg l'¹···'·'*·'* _WN—.·η

H-Ac-D-hArg(me til, butil) -Gly-Cy β-fhe-DTrp-l^s-'fhr-Cy s-Thr-BHg r--------------------------------------------------------Ί

K-Ac-D-hArg(Bt₂ )-Gly-C^8-Phe-DTrp-J^s-Thi>Űys-Thr-líH₂

H-Ac-D-hArgCBtgJ-Giy-Gly-Cys-Phe-DTrp-lye-íEhr-Cys-Thl'-NHg ·· • ·. ···. ···. ... . ·· ···* ...· ·..· ·,.

·

N-Ac-ö-hArg(Bt₂ )-Űye-fhe4lTip-I<e-lhi^Cye-Thx^MH2

N-Ac-Ir-Mrg(Et₂)-Cy»-lh8-DTip-í<f8-Thx*-0y6-Thl>SH₂

Ií-Ac-D~hArg( CHgCy 3) ₂-Gye-ftie-02zp-l<6~2iix^y8-Xhr~W_{2 T}.—,,

S-Ac-D-hAxg(£t₂)-Gly-CyB-Kie-DTrp-Ly6-'i’lu>-Cyö-Hie-Iüi₂

S-Ac-D-hArg( CHgCX ) ₂-Gly-u>s-Iho-OTip-Lys-2hr-Cy6-Phe-hII₂

3-Ac-IMiArg( CHgCP-j) g-Gly-CyB-Phe-Círp-ly s(Mo ) -®hr-Cy e-ShT-liHg

Γ^{T r}.....'”'’ ^l*^r'“^t’'' ...............'¹ i

N-Ac-D-hArg( CH₂C1’₃ ) g-Oly-Oye-fhe-^xp-I? s(Me )-Thr-Cya-Ifce-SHg p——-—J

B-Ac^D-hAre(Bt₂)-eiy-Cy8-2yr-»Txp-I<8-Xhr*Cyii-íhr-HM₂

E-Ac-J^g(Et₂)-Gly-0ye-I^,he-DTTp-ly8-T]ir-Cye-Thr-’NH₂

D-hArgCEtg J-Gly-Cye-lTie-DTrp-lys-Thr-Cye-Thr-SHg

K-Ac-D-hArg(£t₂ )-Gly-Cy0-Phe-PTrp-Iiy©-Tlix>-Cy8-Eal( 2)-Eli₂ r·' ................-............

E-Ac-D-hArgC GHgGl^) ₂-D-hArg( CHgCf^ ) ₂-Gly-Cy a-íhe-S>$ip——η

-lys-Thr-üye-ílie-EHg

- 48 · _r..—— W ................ |

Ac-D-hArgC Stg) -B-hArg(1t _g í-Gly-Gys-PhevDTxp-íy s-Thr-Cys-Thr-BHg és hasonlók·

2· példa

C-terminálie alkil-amid fűnkelőa csoportot tartalmazó (I) általános képletü vegyületek szintézise

C-terminálie alkil-amid-csoportot, vagyis az X helyén G—I általános képletü csoportot - ebben a képletben X jelentése -SHRg általános képletü csoport, ahol az Rg jelentése alkilcsoport - tartalmazó vegyületeket a gyantáról lehasitva állítunk elő a megfelelő alkil-aminnal történő aminolizis utján· Az 1* példa szerinti reakcióedénybe 1,24 g terc-butil-oxí-karbonil-Thr(benzil)-0-gyantát teszünk, amelyet úgy állítunk elő, hogy a terc-butil-oxi-kar* bonil-2hr(benzil)-0H száraz cézium-sójónak 20 mól%-os feleslegét 50 °C-on dimetil-formamidban 24 óm hosszat reagálta tjük klór-metil-polieztirol - 1 % divinil-benzoll&l (mintegy 1 mmól szabad Cl/g gyanta» BioRad labs)· A reakció eredményeként a védett aminosavat egy benzil-észter-tipusu kötéssel a gyantához kapcsoltuk, amely kötést később aminolizálhatjuk.

Az aminosev-O-gyanta kötés létrehozásához fokozatosan 2-2,5 mólnyi feleslegben lévő megfelelő védett aminosavat és diizopropil-karbodiimidet alkalmaztunk* Az aminosav-gyantához az egymás utáni kötési ciklusokban az alábbi vegyületeket adjuk» • · ♦

- 45 0,857 g törc-butil-oxi-karboxiil-Cys(bensil40Me)-0H

0,77 g tero-butil-oxi-karbonil-Shr(benzil)-OH

1,04 g terc-butil-oxi-karbonil-lys-Co-klór-benail-oxi-karbonil)

0,76 g terc-butil-oxi-karbonil-Í)-lrp-OH és

0,1 % indolt adunk a CP^COgB védőcsoportot eltávolító oldathoz a későbbi védőcsoport-lehasítás folyamiéhoz,

0,66 g terc-butil-oxi-karbonil-l’he-OH

0,85 g terc-butil-oxi-karbonll-Cys(b«izil-GMe)*OH

0,44 g terc-butil-oxi-karbonil-Gly-UH

0,55 g terc-butil-oxi-karbonil-ö-hAxg(St₂)-0H és g l-hidroxi-benzotriazol, ml ecetsav-anhidrid 8,2 ml dlmetil-formaiddal készített elegye·

A peptid-gyantát eltávolítjuk a reakcióedényből, majd metilén-kloriddal mossuk és vákuumban szárítjuk, így 2,15 g védett peptid-O-gyantát kapunk· A védett pollpeptidet 50 ml etil-amlnnal 0 °C-on 8 óra hosszat végrehajtott aminolizis ujtán leválasztjuk a gyantáról· Az etll-amint elpárologtatjuk és a gyantát metanollal extraháljuk· 1,7 g száraz gyantát kapunk, amelyet ismét etil-aminnal kezelünk, így további 400 mg védett pepiidet kapunk· A védett pepiidet 2 ml anizollal és 20 ml CoP^-ról ledesstlllált vízmentes folyékony hidrogín-íluoríddal elegyítjük 0 °C-on 1 óra hosszat egy Kel-k reakcióedényben· A hidrogén-fluoridot vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot vízmentes dietil- 50

-éterrel mossuk· A peptidet 4 liter vízben elegyítjük. Az oldat pH—ját 7,5-8,0-ra állítjuk be és a vegyületet oxidativ ciki1 sálásnak vetjük alá 3o ml *,01 mólos K^7e(C3S)& oldat lassú hozzáadásával. A pH-t 4,5-ro állítjuk be és a híg peptíd-oldatot protonált BioRex 70 vizes oszlopba töltjük· A vas-sók átfolynak az oszlopon. A peptidet eluáljuk az oszlopról, mímellett as eluálőszer gradiense 1 liter 5 %-os HOAc és 1 liter 50 $é*os UQAe között mozog, majd 1 liter 50 K-os HOAc-val folytatjuk az eluálást· a frakciókat egyesítjük és tisztítjuk optikai sűrűségűk alapján ( X · 280 nm) és RP-HPLC analitikai értékelés révén. A nyers termék vizes oldatát egy acetátoo egy anionos ioncserélő gyantán (AG3X, BioBad) átengedjük és így AcO*-sővá alakítjuk· Az eluátumot liofilezve 175 mg nyers peptidet kapunk·

A peptidet HF-HPLC módszerrel tisztítjuk egy

2,5 x 100 cm Vydao BP-18 (20-30 mikron) oszlopon, miközben 25 % estil-cianid és 75 % víz elegyét alkalmazzuk pufféiként (0,03 mól KH^OAo-ban, pH 4,5)· A nagy UT abszorbciós csúcsokat (280 nm) összegyűjtjük, szárazra pároljuk és nagyon tiszta vízből háromszor liofilizáljuk, igy 35 mg ciklizált terméket kapunkι r- ,—..,—.,.—,, —,—....·.,·,,

H-Ac—D—hAxg( B tg )-Gly-Cye-Bhe-BTxp-I<s~Thr-Cy8-©ir-®HBt í « -14,1 ⁰ (C · 0,4, HOAo)·

További, etil-amid-terminális analógok szintézise hasonló módon történik·

3. példa

Redukált 0-terminális csoportot tartalmazó (I) általános képlett! vegyületek előállítása

Redukált C-terminális csoportot, azaz az X helyén a G-I általános képletű csoport alkoholját tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előállítása a peptid-O-gyanta észter-kötésének litium-bór-hidriddel történő redukciója utján történik· A peptíd szintézisét az oldallánc megvédés· nélkül - kivéve a Lys és Cys aminosavakat - is történhet· így 1 g (1 mól) terc-butíl-oxl-karbonil-2hr-0-gyaata részt egymás után, az 1· példában ismertetett módon as alábbi vegyűletekkel reagáltatjuki

0,73 g terc-butil-oxi-karbcnil-Cys(acetamido-®etil)-OH

0,55 g terc-butil-oxi-karbonil-Thr-OH,

1,17 g terc-butil-ojtíL-karboull-lys)9-fluorenil-metil-oxi-karboxiil)-OH és 1 g 1-hidroxi-benzotriazol

0,76 g texc-butil-oxl-karbonil-D-Trp-OK, amely után 0,1 % indolt adunk a védőcsoportot lehasító Cf^OOgH oldathoz,

0,66 g terc-butil-oxL-karbonil-Phe-QH

0,73 g terc-butil-oxi-Jíafflrbonil-Cys(acetamido-metil)-0H

0,94 g tsrc-butil-oxi-karbonil-Gly-OH

0,99 g terc-butil-oxi-karbonil-D-hArg(Et₂)-01í és g 1-hidroxi-benzotriazol ml eoetsav-aahidrid 7,2 ml dímetíl-fórásaidban*

A parciálisam védett peptid-O-gyantát az edényből eltávolítjuk* aetilén-kloriddal mossuk, majd vákuumban szárítjuk· A peptid-ü-gyantát 75 ml száraz totxuhidrofuránban eloszlatjuk, majd 145 mg lltium-bór-hidridet adunk hozzá négy részletben szobahőmérsékleten, ezután 1 éra elteltével 2,5 ml AcOH-t csepegtetünk hozzá, hogy a visszamaradt litium-bór-hidridet elbontsuk· A reakcióelegyet szűrjük, a maradékot jégecettel mossuk és a szűrletet bepároljuk· A redukált, részlegesen védett peptid-alkoholt a jégecetből liofilezés utján kapjuk meg· A £ys)9-fluorenil-metil-oxi-karbonil) gyantát plperidin 20 ^-os diaetil-foxmamidos oldatával 3u percig történő reagáltatás utján távoli tjük el* Az oldatot ocetsawal semlegesítjük és Amberlite XAÜ-2 (Mohm és Haas, Philadelphia, PA) töltetű hidrofób kromatografálás utján sótalanitjuk, mimellett eluálószerként víz és 50 % etil-alkohol gradiensü elegyet alkalmazunk· A nagy, W abszorpciós csúcsokat ( Λ · aax 280) összegyűjtjük, a védőcsoportokat eltávolítjuk és a ciklizálást jód motll-alkoholoe oldatának hozzácsepegtetésével végezzük mindaddig· estig a szín már nem tűnik el·

A nyers terméket BP-HPliC módszerrel tisztítjuk

2,5 x 100 cm Vydac 0-18 (20-Jv mikron) oszlopon, miközben eluálószerként 30 %-oe metil-cianidot alkalmazunk (0,04 mól HH^OAc-ban, pH · 4,5)· A nagy UV abszorbciós csúcsokat egyesítjük, szárazza pároljuk és vízből háromszor liofilizáljuk, igy • *

- 53 ...................... ........—........ -_t

Ac-X)-hArg(Bt₂ )-Gly-(^s-Phe-J>-Trp-Ly6-Thr-Cys-Thr*-ol terméket kapunk·

4· példa

Xnzulin-indukálta glukagon teszt

Több napig tartó akklimatizáció után a patkányokat tömegük alapján csoportokba osztottuk és 1-3 napig vizsgáltuk· A patkányokat szubkután 40 mg/kg pentobarbitollal (Nembutái) kezeltük* Mintegy 30 perccel az injekciózás után a juguxális (nyaki) és a májkapu vénákba marha-szérum albumin 0,1 j4-os sóoldattal készített oldatát injekciózzuk vagy 1 nemzetközi egység/1 ml/kg porcin inzulint ugyanazon vivőanyagban készített oldatát injekciózzuk a juguláris vénába. Az intravénás injekciózás után pontosan 15 perccel 1 ml vérmintát veszünk a májkapu vénából és a patkányt szén-dioxid-gázzal leöljük·

A vérmintát egy fecskendőbe gyűjtjük, amely egy mg Na-SDTA-t, 0,1 mg Aprótinin-1, egy, a kereskedőim»ben kapható pro teás-inhibitort tartalmaz 0,1 ml 0,9 %-os só-oldatban· A vérmintát a fecskendőben összekeverjük, majd áttesszük egy műanyagból készült mikrokonténer szérum-szeparátor csőbe és sötétben jégen tartjuk. A plamaát 6 órán belül centrifugálj ük és -20 °C-on tartjuk· Az állatokat az inzulinnal történő intravénás injekció zás előtt intramuszkulárísan kezeljük a vizsgálati anyaggal· A plasma-minták glukagon-szintjánek analízisét a kereskedelemben kapható, az állati eredetű glukagon vizsgálatára szolgáló

- 54 radioimmun kitek segítségévei végezzük (Cambridge Medical Technology)·

A glukagon keletkezésének százalékos gátlását a vizsgálati anyaggal kezelt mindegyik állatnál kiszámítottuk, oly módon, hogy a pozitív kontrollok*' közepes glukagon-szintjóból (ahol a pozitív kontrollok azokat az állatokat jelentik, amelyek intravénásán inzulint kaptak, azonban vizsgálati anyaggal nem kezeltük őket) levontuk a vizsgálati állatok glukagon-szintjét és az igy kapott értéket 100-zal beszoroztuk, majd ezt elosztottuk a pozitív kontrollok közepes glukagon-szin tjének és a negatív kontrollok közepes glukagon-szintjének (ahol a negatív kontrollok azokat az állatokat jelentették, aodyek intravénásán csupán vivőanyagot kaptak, de vizsgálati anyagot u®) különbségével· A közepes százalékos gátlást ábrázoltuk a vizsgálati anyag dózisának függvényében, igy megkaptuk az értéket· Az azt a dózist jelenti, amely az inzulin-indukálta glukagon képződésének 50 %-os gátlásához szükséges·

Γ'-—··'·'*·.....—......

Az M-Ac-D-hArg(Btg)-Gly-(^s-Ihe-D2xp-ly s-Thx^-Cys-Thr-HHg vegyület AD^y értéke 0,15 /ug/kg·

A fenti vizsgálat szerint az ................................- | H^c^MB^MhArg(Bt₂)-Gly-Cys-fhe-üTrP^MAys-Thf^M0ys-SluMIH2 vegyület relatív aktivitása összehasonlítva a szomatosztatixmal és a

.....................- — .>!

I^Phe-(^s-Phe-X>-Trp-I^s-Thr-CyB-Su>-Oii képletű Sandostatinnal, az eredmény 50-sserss illetőleg ékszeres·

5· példa

Glükoz-indukálta inzulin-teszt

Néhány napi akkümatisálódás után a patkányokat tömegűk szerint csoportokba osztottuk és 1-3 napig tartó vizsgálatokat végeztünk velük· A patkányokat 60 og/kg pentobarbitollal (Neabutol) ssubkután kezeltük· Mintegy 40 perccel az injekciósás után, a juguláris vénába 0,1 % marha-szérum albumint tartalmazó só-oldatot vagy 0,5 mg/2 ml/kg glükózt injekcióztunk ugyanazon oldószerben a juguláris vénába· Az intravénás injekciósás után pontosan 5 perccel 1 ml az orbitális szinuszon keresztül ml vérmintát vettünk és a patkányokat szén-dioxiddal leöltük.

A vérmintákat 72 USP egység litium-heparint tar*· talmasó üvegcsövekbe tettük és jégbe hűtöttük· A plazmát óm alatt oentrüugálással elkülönítettük és -20 °G-on tartottuk· As állatokat az intravénásén glukós-inj akciósán előtt 10 perccel kezeltük a vizsgálati anyaggal· A -minták inzulin-szintjét a kereskedelemben kapható, az állati eredetű inzulin mérésére alkalmas rádioimmun kitek segítségével végeztük el (Cambridge Medical Technology).

Az inzulin képződésének százalékos gátlását a vizsgálati anyaggal kezelt mindegyik állatnál kiszámítottuk oly módon, hogy a pozitív kontrollok (vagyis a glükózzal Intravénásán kazalt, de vizsgálati anyagot nem kapott állatok) közepes inzulin-szintjóból levontuk a vizsgálati állatok inzulin-szintjét és az így kapott értéket 100-zal beszoroztuk, majd ezt elosztottuk a pozitív kontrollok* közepes inzulin-szintjének és a negatív kontrollok közepes inzulin-szintjének (ahol a negatív kontrollok* azokat az állatokat jelentették, amelyek csupán vivőanyagot kaptak intravénáson, azonban vizsgálati anyagot nem) különbségével. A közepes százalékos gátlást ábrázoljuk a vizsgálati anyag dózisának függvényében, így magkapjuk az értéket· Az az inzulin keletkezésének 50 %-os gátlásához szükséges dózist jelenti·

1·-*........... ............. |

Az S-Ac-D-hArgíEtg )-Gly-Cys-Ehe-DTrp-Ly s-Kir-Cys-Thr-SH^ vegyület értéke 20 yUg/kg·

A fent ismertetett teszt szerint az í‘— ^{Γ Ί}'·.......... k

H-Ac-D-hAxgÍBtgí-Öly-Cys-fhe-ÖTrp-igrs-Thr-Cys-lhr-BHg vegyület relatív aktivitás 6-szor illetőleg 3-szór akkora, mint a szórnatosztatiné illetőleg a Sandostatiné.

6· példa

Sembutál-indukálta növekedési hormon teszt Sóhány napi akklimatizálódás után him patkányokat tömegük szerint csoportokba oszottunk és a vizsgálatot 1-3 napig végeztük· A patkányokat a kísérlet megkezdése előtt 1 nappal rögzítettük. A vizsgálati anyagot vagy az oldőszert (0,1 % marhaszérumot tartalmazó só-oldat) latra57 muszkulárisan as állatok jobboldali hátsó lábába injektáltuk·

As intramuszkuláris injekció után 60 mg/kg Bambi»tállal törtónó koselés után 30 perccel mindegyik patkányt 2 percig éterrel anesstetisáltuk» majd a szemüregen keresztül 1 ml vóxaintát vettunk· A szérum-szeparátorral a vérmintákból eséruaot készítettünk. A szénás-mintákat -20 °C-on raktároztuk mindaddig» amíg a zádioinaun tesztre sor nem került· A vizsgálati vegyületek növekedési hormonra kifejtett százalékos gátlását a 4· és 5» példában ismertetett módon határoztuk meg» majd megállapítottuk as ^50 értékót·

,.,,..,.,.,,,1-,,.,,,-,,,., „ , .....|.

As K-Ac-D-hArgCktgJ-Gly-Cys-Phe-DTxp-I^rs-íöir-Cye-Thr-HHg vegyület BD^₀ értéke 0,025 g/kg·

A fenti vizsgálat szerint as

I—...............................................................I

B-Ao-B-hAxg(Bt₂ )-Gly-0ys-?he-I)Txp-Igra-Thr-Cy»-Thr-BH₂ vegyület relatív aktivitása a ssomatoos tatinnal illetőleg a Sondostatinnal összehasonlítva 265-ször illetőleg 3-szor nagyobb·

A glukagon/inzulinra és a növekedési hormon/inzulinra vonatkozó relatív szelek ti vitás as » ¹ ' ^{11 11 1 J} ' '«.--ι

K-Ac-I>-hArg(Bt₂)-Gly-Cyí»-Phe-Dfrp-I^»-Thr-Cye-Ihr-M₂ vegyület vonatkozásában 133 ée 769» míg a Sandostatin esetében ezek as értékek 11 és 103·

Ha az r··¹—............... -.................ι

K-Ác-D-hArg(Et₂)-Gly-CyB-Phe-ÜTrp-Ly8-^íI!hr-Cya-Thr-NH₂ vegyülettel és az intravénásán adott glükózzal, intravénásán adott inzulinnal illetőleg szubkután módon adott nerabutállal történő kezelések közötti időtartamot növeljük, akkor az analóg ebben az esetben is igen hosszú ideig hat a szomatosztatinnal összehasonlítva·

7. példa

Toriéitás

Két szórnatoszirtin analógot, vagyis az

I¹ ‘^,'·¹¹·¹¹ ............................ ¹¹ ........ί

UAc-D-hArg( CH₂Cf₃ ) g-Gly-Cy s-Phe-BTrp-Ly β-Thr-Cy s-Thr-BMg és B-Ac-D-hArgCtítgí-Gly-Cye-Phe-DTrp-Iys-Thr-Cys-Tha^-HHg vegyületeket 2,42 mg/kg dózisban intramuszkulárisun adagoltunk patkányoknak a glükoz-lndukálta inzulin tesztben, miközben mellékhatást nem tapasztaltunk. A vizsgálat során him patkányokat pentobarbitállal elaltattunk és intravénás glükóz-injekciót adtunk be· A glükózzal történt injekciózés után 5 perccel vérmintát vettünk az inzulin-szint későbbi meghatározására* A vérvétel előtt 15 perccel, 1 órával és 2 órával az állatokat a szoaaiosztatin analóggal kezeltük· 24 patkány 2,43 mg/kg 0-45917-298 dózist kapott és másik 24 patkány 2,43 mg/kg 0-10962-298 dózist kapott* 8 patkányt a vérvétel előtt 15 perccel mindegyik vegyülettel kezeltünk és 16 patkány • · · · · .

• ··< · · · ·, · • · · ♦ ♦ · · * * ♦ · · · · ·· ·«

- 59 nál a vérvétel előtt 2 órával végeztük a kezelést· A patkányok egyike sem mutatott semmilyen mellékreakciót egyik vegyülőtnél ama·

A fenti leírás és példák teljes mértékben ismertetik a találmányt, beleértve annak előnyös megvalósítását is· Nyilvánvaló, hogy a módszerek változtatása, módosítása lehetséges, ezek a psptid-kémiában jártas szakember számára jól ismertek· Az ilyen jellegű módosításokat és változtatásokat ezért a találmány oltalmi körébe tartozónak tekintjük.

Claims (17)

1. Szabadalmi igénypontok

   1· kijárás fⁱ-’'*^{rT 1,11}......“ ·..... |

   X-Cys-fi-D-Trp-B-P-Cye-X (I) általános képletű vegyületek - ebben a képletben

   X jelentése ü-teminális rész,

   X jelentése G-terminális rész, G-l általános képletű csoport, vagy a G-I általános képletű csoport alkoholja, ahol az X és X legalább egyike egy kationos rész,

   D jelentése Phe, Tyr, pF-Phe vagy pCl-Phe, fi jelentése Ιφβ vagy általános képletű csoport, ahol jelentése rövidszénláncu alkilcsoport vagy 1-8 szénatomos fluor-alkil-csöpört, f jelentése Thr, Val vagy Ser, mimellett

   G jelentése D vagy 1» konfigurációjú Thr, Phe vagy

   Sal(2) és

   1 jelentése hidroxilcsoport vagy -MEQRg általános képletű csoport, ahol az Bg jelentése hidrogénatom vagy jelentése megegyezik az fenti jelentésével és ezek gyógyászatilag elfogadható sói előállítására· azzal jellemezve, hogy

   a) valamely (III) általános képletű vegyülétből ebben a képletben * ·

   - 61 X, X, S, Ε és Ρ jelentése egyezik a fent megadottakkal,

   P², P és P⁴ mindegyikének jelentése védőé söpört, ahol

   P¹ jelentése eC -amino-védőcsoport, P² jelentése hidroxil-védőcsoport, P^ jelentése fi^-védőcsoport és P⁴ jelentése S-amino-védőésöpört,

   S jelentése karboxil-védőosoport és a, b, c, d, e és f mindegyikének jelentése 0 vagy 1, azzal a feltétellel, hogy az a-f közül valamennyinek a jelentése nem lehet o a védőcsoportokat eltávolítjuk» vagy

   b) valamely (IV) általános képletű vegyületbői ebben a képletben

   X, X, 1), B, P, p\ P², P^ és l⁴ jelentése egyezik a fenti a) szakaszban megadottakkal, a, b, c, d és e mindegyikének jelentése ü vagy 1, aszal a feltétellel, hogy az a-e közül valamennyinek a jelentése nem lehet 0 és

   S’ jelentése polimer hordozó egyidejűleg eltávolítjuk a védőcsoportokat és a polimer hordozót» vagy

   c) valamely

   X-Cys-D-J>Trp-B-f-Cya-X-(b·) (V) általános képletű vegyülőtből - ebben a képletben X, X, D, E, F és S* Jelentése egyezik a fenti b) szakaszban megadottakkal - a polimer hordozót eltávolítjuk» vagy • · · · · « · ·· ··« ·♦· ·· ··

   d) valamely

   X-Üys-D-D-Trp-B-F-Cys-X (VI)

   SH SH általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, X, D, K ée F jelentése egyezik a fenti a) szakaszban megadottakkal - oxidálunk} vagy

   e) valamely (I) általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, D, 1, F és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - annak gyógyászatilag elfogadható sójává alakítjuk át} vagy

   f) valamely (I) általános képletű vegyület - ebben a képletben X, P, B, F és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - sóját annak valamilyen más, gyógyászatilag elfogadható sójává alakítjuk át} vagy

   g) az (I) általános képletű vegyület sójából - ebben a képletben X, P, E, F ée X jelentése egyezik a fent megadottakkal - a szabad peptidet felszabadítjuk·
2. 2· As 1· igénypont szerinti eljárás az X helyén a Gye részhez közvetlenül vagy térköztartó részen keresztül kapcsolód* X-alkil-bázikus aminosav csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek - ebben a képletben P, B, F és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1· igénypont szerinti eljárásban·

   - 63
3. 3· Az 1· igénypont szerinti eljárás az X helyén *~^(B)m~^(C)n általános képlett! csoportot - ahol as

   A jelentés· acilcsöpört vagy hidrogénatom,

   B jelentés· hAxg(R^,Bg), ArgCkpRg) vagy tys(Rp csoport, mimellett jelentése rövidssénláncu alkilcsoport vagy 1-8 szénatomos fldoxvulkil-csoport és Rg jelentése hidrogénatom vagy megegyezik az R^ szubsztituens jelentésével, m jelentése 1, 2 vagy 3 egész szám,

   C jelentése Gly, Alá, |b -Alá Ós n jelentése G-5-ig terjedő egész szám tartalmazó (X) általános képlett! vegyületek- ebben a képletben ©, 2, > és X jelentése egyezik a fent megadottakkal -azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1· igénypont szerinti eljárásban·
4. 4· Az 1· igénypont szerinti eljárás az X helyén A-(B)_a-(C)_a általános képletű csoportot - ahol as

   A jelentése acilcsöpört vagy hidrogénatom,

   B jelentése hArg(R^g), Arg(KpRg) vagy Lys(R^) általános képletű csoport, mimé llett R^ jelentése rövidszénláncu alkilcsoport vagy 1-8 szénatomos fluor-alkil-csoport és &₂ jelentése hidrogénatom vagy megegyezik as R^ jelentésével, m jelentése 1-3-Xg terjedő egész szám.

   ♦ »· ····

   64 C jelentése Oly, Alu, fi -Üa vagy hArgUpt^) - ahol éa Bg jelentése egyezik a fent megadottakkal ée n jelentése 0 vagy 1 tartalmazó (I) általános képlett! vegy Jetek - ebben a képletben £>, E, P és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1· igénypont szerinti eljárásban·
5. 5· Az 1· igénypont szerinti eljárás az X helyén A-(B)_m-(C)_n általános képlett! U-tezhinális reszt - ahol az A, B, C, m és n jelentése egyezik a 3· igénypontban megadottakkal - tartalmazó (I) általános képlett! vegyületek - ebben a képletben X, ΰ, B és Ϊ jelentése egyezik a fent megadottakkai -fa~z z a 1 j e 1 1 e m e z v e, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1· igénypont szerinti eljárásban.
6. 6· Az 1. igénypont szerinti eljárás az (I) általános képletű

   ......... .........—.........ι

   I............... ...........

   X-Cys-Bhe-D-Trp-Ays-Thr-Cys-Phe-KHg f ¹ ‘ ^; ' ............V

   X-Cys-Hiö-B-Trp-lys-Thr-Cys-Thr-ol

   1' ^{1 r J 1 r}’ ^T............ Ί

   X-öys-íhe-D-Trp-Ays-Xhr-Cys-X és

   - 65 r—— .....^L~..........^{11 1} ’ ι

   Ac-P-Hie-Cy s-Üie-B-TTp-Áy s-Thi*-Cy s-X _r.„ ........„„,

   Ac-P-Jíal-Cys-l’he-B-Trp-lys-Thr-Cys-X

   I............................... ......- '1

   X-Gy s-íhe-D-Trp-I^e-Thr-Cy s-Ac-B-Nal ( 2) NHg vegyületek - aholaz

   X jelentése egy kationos rése,

   X Jelentése egy C-terminális részés

   D Jelentése egyezik a fent megadottakkal előállítására, aszal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1. igénypont szerinti eljárásban.
7. 7· As 1· igénypont szerinti eljárás az (1) általános képletű

   Γ——η

   Ac-hArg( Xtg )-Gly-Cy s-íhe-I>-Trp- ^ys-thr-Cy s-Thr-NHg, r ........................... ι

   Ac-D-hArgCltgi-Gly-Cye-íhe-D-Xxp-Itfs-Thr-Cye-Thr-liHg, r^{i T u}' ............ ^11IJ·’ ^Tt

   Ac-D-hArg(Bu) -Gly-Gy s-íhe-D-írp-jkí 0*Thr-Gy s-ISir-UHg , _f .....——

   Ac-P-hArg(Et ₂ )-Cy e-fhe-B-l’rp-Iflrs-Thr-Cys-Thr-filíg,

   ·., II 111.1' IJ T -n -nn—₍

   Ac-L-hArg(Et₂)-Cys-Phe-B-Trp-üys-ThívCys-Thr-NHg,

   Ac-B-hArg( GHgCF-j) ₂«Cy »-Phe-l>-Trp-üya-Ihr-Cy»-Thr-NH₂,

   - 66 ♦ ··· ·ν·

   Γ-............. ,

   Ac-lMkArgC g-Gly-cys-lTie-D-Trp-ly e-Thx^Cye-Thr-NHBt, l· ......' ¹ ' ^Ti

   Ac-»V-hAxg< CHgGf .j) ₂-Gly-Cy e-Phe-I^Trp-ly β-ΏΐΓ-Cy e-Thr-HHg, pMMM—I4MH—MMMMWMM——

   Ac-D~hArg(CHgCI* j)g-Gly-Cye-Phe-D-Trp-lye(Me)-Thr-Cye-Thr-BHg, • ^{11 1} ' ¹ ~......''^{11 1}' í

   Ac-ö-hArgCCHgCy^ ) ₂-GXy-Cy e-Phe-D-Txp-Ly s(M· )-Thr-Cy b-Thr-ilHEt,

   Γ··¹——.............-........— ^......

   Ac-hArgC CH^ ,hexLl )-Gly-Cys~Ilie-I>-Trp~X<y B-Thr-Cys-ThjMÍHg, r——........... ---,-.--.-1

   H-hArgChaxiXg )-Gly-Cy e-Phe-D-Txp-Lye-Thr-Cy o-TluSKHg, » ' ^Ll ~ ' ' .....^r' ¹ ' í

   Ac-£~hAx*g( JSt₂ J-Gly-CyB-Phe-D-Trp-jLyB-Thr-tíy e-Thr-BHJBt ,

   I.....................................¹ ........|

   Ac-D-hArg(£tg J-Gly-Cys-Phö-D-Trp-iye-Thr-CyB-Phe-NHg, ι ......................... ^; ' ¹¹ ·

   Propionil-D-hArg(fit_g)-Gly-CyB-Phe-D-Trp-lye(lPr )-Thr~Cy e-ThWJHg, * · ··· · ♦*»» ·· • · · · ♦ • ♦ · · »·« «· • · · · · • *

   Ac-B-hal( 2 )-Gly-Gys-Phe-Í)-Trp-l^ö-Thr-Cy s-Gly-hArgCktg )-bH₂ ,

   Ac-D-Ay e ( iPr )-Gly-Gy e-Phe-D-Irp-Lye-í’hr-Cye-Thr-NHg, r- ......................................π

   Ac-ö-hArg( CH₂Ci\ ) ₂-D-hArg( CHgGP ₃ ) ₂-Gly-tíys-Phe-P-ííxp-Ay s——1

   2hr-Cys-Thr-iűi₂,

   Γ—— - ....^.............^.

   N-Ac-»-hArg( CH₂ ^CP3 ^} GHgGP^ ^> ₂~Gly-Gys-Phe-DTrp------T

   -lys-Thr-öye-Phe-hiíg és

   I ^{1 11}....... ^{1 1} ............‘~k

   J»-Ac-D-hArg(Et₂ j-D-hArgCütg )-Gly-Cye-Phe-Dirp-uye-2hx-Cys-Thr-NH₂ vegyületek - ahol D jelentése egyezik a fent megadottakkal és ezek gyógyászatilag elfogadható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfeleld kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1· igénypont szerinti eljárásban.
8. 8· Az 1. igénypont szerinti eljárás az

   Γ............................ '“—'·— 1

   Ac-£MiArg( CiigCP-j) ₂-Gly-Cy ö-Phe-ű-Trp-üy e-Thr-üy e-'A'hr-NHg (1) általános képletű vegyület - ahol 1) jelentése egyezik a fent megadottakkal - és gyógyászatilag elfogadható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1. igénypont szerinti eljárásban· ··♦· ···· ···· «· • · · · * • ·♦· ··· ·· • · · · · ·
9. 9· Az 1· igénypont szerinti eljárás az

   ........

   Ac-D-hArg( Btg )-Gly-Cy e-Phe-D-Txp-ly s-Thr-Cy s-Thr-NHg (I) általános képletü vegyület - ahol ö jelentése egyezik a fent megadottakkal - és gyógyássatilag elfogadható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk az 1· igénypont szerinti eljárásban·
10. 10· Síjárás a

    X-Gys-lys-Asn-íhe-D-D-Trp-B-f-fhe-öir-Ser-Cya-X (II) általános képletü vegyületek - ebben a képletben

    X jelentése 1-terminális csoport,

    X jelentése C-texainália csoport, G-I általános képletü csoport, vagy a G-Z általános képletü csoport alkoholja, mimellett X és X legalább egyike egy kationos részt képvisel, » jelentése Phe, Tyr, pf-lhe, pCl-Phe, £ jelentése lya vagy hys(kj) általános képletü csoport, ahol az Aj jelentése rövidszénláncu alkilcsoport vagy 1-8 szénatomos fluor-alkil-csöpört, f jelentése Thr, Val, Ser, mimellett G jelentése D- vagy Ir-konfiguráoióju Thr, ihe, Nal(2) vagy (Gly)_a általános képletü csoport, ahol m jelentése 0-3 és I jelentése hidroxLlcsöpört vagy -SHKg általános képletü csoport, ahol az λ₂ jelentése hidrogénatom vagy megegyezik az Ej fent megadott jelentésével ···· ♦ ««·· « • · · · • *·· ··· » · · * ·

    - 69 és gyógyászatilag elfogadható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy

    a) valamely (VII) általános képletű vegyűletből ebben a képletben

    X, X, D, & és P jelentése egyezik a fent megadottakkal, P¹, _?2* p3 p4 aiu^egyikének a jelentése védőcsoport· ahol P^ jelentése pt -amino-védőosoport, P² jelentése hídroxil-védőcsoport, P^ jelentése N^-védőcsoport és P⁴ jelentése &-amino-védőcsoport,

    8 jelentése karboxil-védőcsoport és a, b, c, d, ·, f, g, h és i mindegyikének jelentése 0 vagy 1, azzal a feltétellel, hogy a-i mindegyikének jelentése egyidejilleg nem lehet 0 a védőcsoportokat eltávolítjuk) vagy

    b) valamely (VIII) általános képletű vegyűletből

    - ebben a képletben

    X, X, ©, k, >, i¹, p², P³ és P⁴ jelentése egyezik az a) szakaszban megadott jelentéssel, a, b, c, d, e, f, g és h mindegyikének jelentése 0 vagy 1, azzal a feltétellel, hogy a-h mindegyikének jelentése egyidejűleg nem lehet 0 és

    8* jelentés· polimer hordozó a védőésöpörtokát és a polimer hordozót egyidejűleg eltávolítjuk ) vagy

    c) valamely

    X-Cys-Xye-<sn-Phe-D-ü-Txp-B-P-Phe-Shr-Sex*-Cys-X-(S*) (IX) általános képletű vegyűletből - ebben a képletben • · k*

    - 70 X, ϊ, B, E, 9 és S’ jelentése egyezik a b) szakaszban megadottakkal a polimer hordozót eltávolítjuk} vagy

    d) valamely

    X-Cy B-l^r s-isn-Phe-IM>-Trp-E-F-%e-^ir-üer-Q}f s-X (X)

    SH sa általános képletű vegyületet - ebben a képletben X, X, B, Jt és 9 jelentése egyezik az a) szakaszban megadottakkal oxidálunk) vagy

    e) valamely (IX) általános képletű vegyületet ebben a képletben X, X, B, B és 9 jelentése egyosik a fent megadottakkal - gyógyászatilag elfogadható sójává alakítunk átj vagy

    f) valamely (IX) általános képletű vegyület ebben a képletben X, X, B, B és 9 jelentése egyezik a fent, megadottakkal - sóját annak valamilyen más, gyógyászatilag elfogadható sójává alakítjuk át) vagy

    g) a (XX) általános képletű vegyület - ebben a képletben X, X, B, B és 9 jelentése egyezik a fent megadottakkal - sójából a szabad peptidet felszabadítjuk·
11. 11· X 10· igénypont szerinti eljárás az X helyén a Cys-részhes közvetlenül vagy térköztartó részen keresztül kapcsolódó NV-alkil-básikus aminosav-csöpörtót tartalmazó (XX) általános képletű vegyületek - ebben a képletben B, ó, F és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - előáll!tására, azsal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk a 10· igénypont szerinti eljárásban·

    I * « ·· • · ► ·
12. 12» A 10. igénypont szerinti eljárás az X helyén A-ÍB^-ÍC)^ általános képletű csoportot - ahol az

    A jelentése acilcsoport vagy hidrogénatom,

    B jelentése hArg(R_x,B₂), Arg(R_x,B₂) vagy Ιφβ(Κ_χ) általános képletű csoport, ahol az Β_χ jelentése rövidazénláncu alkilcsoport vagy 1-8 ezénatomos fluor-alkil-csoport és Kg jelentése hidrogénatom vagy jelentésével megegyező, m jelentése 1, 2 vagy 3 egész szám

    C jelentése Gly, Ala_T (5 -Alá és n jelentése 0-5-ig terjedő egész szám tartalmazó (II) általános képletű vegyületek - ebben a képletben P, B, F és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk a 10· igénypont szerinti eljárásban·
13. 13· A 10· igénypont szerinti eljárás az X helyén általános képletü csoportot - ahol az

    A jelentése bcilcsoport vagy hidrogénatom,

    B jelentése hArg(k_x,Kg), ArgíR^Kg) vagy iys(K^) általános képletű csoport, ahol az κ_χ jelentése rövidszénláncu alkilcsoport vagy 1-8 ezénatomos fluor-alkil—c söpört és K₂ Jelentése hidrogénatom vagy megegyezik az Κ_χ fent megadott Jelentésével, m jelentése 1, 2 vagy 3, ***· ·*·* !*** ·· ·« , ., :.., :.. ·..· . · ·· ... ·.»* *.«· ·«,

    - 72 C jelentése Gly, Alá, -Alá és n jelentése 0 vagy 1 tartalmazó (XI) általános képletű vegyületek - ebben a képletben 1), ü, F éa X jelentése egyezik a fent megadottakkal előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk a 10· igénypont szerinti eljárásban·
14. 14· A 10. igénypont szerinti eljárás az X helyén A-(B)_a-(C)_n általános képletű C-terminális részt - ebben a képletben A, B, C, m és n jelentése egyezik a 10· igénypontban megadottakkal - tartalmazó (XX) általános képletű vegyületek ebben a képletben 0, B, f és X jelentése egyezik a fent megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk a 10· igénypont szerinti eljárásban·
15. 15· A lu· igénypont szerinti eljárás a (IX) általános képletű í^{M Ί} '^LL' ™¹' ^{r 1,11 11}.....'·^{Γ r}.....'' ' '^im 1

    X-ttys-lys-AsnHPhe-fhe-Si^tys-Thr-Jfoe-Thr-Ser-Oys-OH·

    ...... —................................. ..................- —,, )

    X-Cys-lys-Asn-fhe-Bho-B-$rp-lys-Shr-Bhe-$hr-Sor-űys-OH,

    I------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1

    X-Cys-lys-Asn-Phe-íhe-B-Trp-Lys-Ihx^-Phe-ThT-Ser-D-Cye-OH és i ¹........'.......... ' '^{Ill Tri r}’ⁿ’^{T iriJ}...... ......... ^r'^{Tr _:}.....·

    X-Cye-rhe-Asn-Phe-fhe-D-Trp-Xys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH ···; ···· ···· ·· «.

    . < ί... ·..· . · ··· ...· ...· ·..· ·..

    dodekapeptid-analógok - ahol as X jelentése egy kationos rész és D jelentése egyezik a fent megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk a 10· igénypont szerinti eljárásban·
16. 16« Kijárás az (I) általános képletü vegyületeket

    - ebben a képletben D, E, F, X és X jelentése egyezik az 1· igénypontban adott mégha tarozás vagy a 2-9. igénypontok bármelyikében adott szükebbkörü meghatározások szerintivel - vagy ezek sóit hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely az 1-9· igénypontok bármelyike szerint előállított (I) általános képletü vegyületet - ahol a 0, B, F, X és X jelentése g fentivel egyező - vagy annak gyógyászati szempontból elfogadható sóját valamely gyógyszerészeti vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverve gyógyászati alkalmazásra - előnyösen gyomorfekély, tumorok és cukorbetegség kezelésére alkalmas - megfelelő készítménnyé alakítjuk·
17. 17· Eljárás a (II) általános képletü vegyületeket ebben a képletben P, E, F, X és X jelentése egyezik a 10· igénypontban adott meghatározás vagy a 11-15· igénypontok bármelyikében adott szükebbkörü meghatározások szerintivel vagy ezek sóit hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely a 10-15· igénypontok bármelyike szerint előállított (IX) általános képletü vegyületet - ahol a D, a, F, X és X jelentése a fentivel egyező - vagy annak gyógyászati ···! ···· ···· . ·. ^!··. ^!·· · •· ... ··.* · szempontból elfogadható sóját valamely gyógyszerészeti vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverve gyógyászati alkalmazásra - előnyösen gyomorfekély, tumorok és cukorbetegség kezelésére alkalmas - megfelelő készítménnyé alakítjuk.