HU225488B1 - A broad spectrum infectious bursal disease virus vaccine - Google Patents
A broad spectrum infectious bursal disease virus vaccine Download PDFInfo
- Publication number
- HU225488B1 HU225488B1 HU0102823A HUP0102823A HU225488B1 HU 225488 B1 HU225488 B1 HU 225488B1 HU 0102823 A HU0102823 A HU 0102823A HU P0102823 A HUP0102823 A HU P0102823A HU 225488 B1 HU225488 B1 HU 225488B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ibdv
- variant
- gly
- thr
- vaccine
- Prior art date
Links
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 title claims description 147
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 87
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 42
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 claims description 36
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 30
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 30
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 27
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 19
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 17
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 73
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 56
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 35
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 34
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 32
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 15
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 13
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 12
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 10
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 10
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 9
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 8
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 8
- 241001260012 Bursa Species 0.000 description 7
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 6
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 6
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 6
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- PCKRJVZAQZWNKM-WHFBIAKZSA-N Asn-Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O PCKRJVZAQZWNKM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000009526 moderate injury Effects 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DRCKHKZYDLJYFQ-YWIQKCBGSA-N Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- -1 Thr amino acids Chemical class 0.000 description 3
- IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N Thr-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- ANPFQTJEPONRPL-UGYAYLCHSA-N Asn-Ile-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ANPFQTJEPONRPL-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 2
- UBGGJTMETLEXJD-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UBGGJTMETLEXJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JEEFEQCRXKPQHC-KKUMJFAQSA-N Asn-Leu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JEEFEQCRXKPQHC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N Asp-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 2
- 101100285688 Caenorhabditis elegans hrg-7 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- GDOZQTNZPCUARW-YFKPBYRVSA-N Gly-Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GDOZQTNZPCUARW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- FDQYIRHBVVUTJF-ZETCQYMHSA-N His-Gly-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 FDQYIRHBVVUTJF-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- RGPWUJOMKFYFSR-QWRGUYRKSA-N His-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RGPWUJOMKFYFSR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- LPFBXFILACZHIB-LAEOZQHASA-N Ile-Gly-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N LPFBXFILACZHIB-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- PZWBBXHHUSIGKH-OSUNSFLBSA-N Ile-Thr-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PZWBBXHHUSIGKH-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OMHLATXVNQSALM-FQUUOJAGSA-N Leu-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N OMHLATXVNQSALM-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 2
- MNGBICITWAPGAS-BPUTZDHNSA-N Met-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O MNGBICITWAPGAS-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 2
- CSYVXYQDIVCQNU-QWRGUYRKSA-N Phe-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O CSYVXYQDIVCQNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- XZQYIJALMGEUJD-OEAJRASXSA-N Phe-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XZQYIJALMGEUJD-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N Pro-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- PVDTYLHUWAEYGY-CIUDSAMLSA-N Ser-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PVDTYLHUWAEYGY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- DJDSEDOKJTZBAR-ZDLURKLDSA-N Thr-Gly-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DJDSEDOKJTZBAR-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- PRNGXSILMXSWQQ-OEAJRASXSA-N Thr-Leu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PRNGXSILMXSWQQ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- 241000711955 Turkey rhinotracheitis virus Species 0.000 description 2
- XQYHLZNPOTXRMQ-KKUMJFAQSA-N Tyr-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O XQYHLZNPOTXRMQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 101150093578 VP2 gene Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- VNFSAYFQLXPHPY-CIQUZCHMSA-N Ala-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VNFSAYFQLXPHPY-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- JAYIQMNQDMOBFY-KKUMJFAQSA-N Arg-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JAYIQMNQDMOBFY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N Asn-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YUOXLJYVSZYPBJ-CIUDSAMLSA-N Asn-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUOXLJYVSZYPBJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N Asn-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- RYEWQKQXRJCHIO-SRVKXCTJSA-N Asp-Asn-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 RYEWQKQXRJCHIO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WSXDIZFNQYTUJB-SRVKXCTJSA-N Asp-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WSXDIZFNQYTUJB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001200922 Gagata Species 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BKMOHWJHXQLFEX-IRIUXVKKSA-N Glu-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O BKMOHWJHXQLFEX-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N Gly-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GAFKBWKVXNERFA-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 GAFKBWKVXNERFA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- SBVMXEZQJVUARN-XPUUQOCRSA-N Gly-Val-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SBVMXEZQJVUARN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- HLYBGMZJVDHJEO-CYDGBPFRSA-N Ile-Arg-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N HLYBGMZJVDHJEO-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KTNGVMMGIQWIDV-OSUNSFLBSA-N Ile-Pro-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KTNGVMMGIQWIDV-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- WCNWGAUZWWSYDG-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N WCNWGAUZWWSYDG-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- MMEDVBWCMGRKKC-GARJFASQSA-N Leu-Asp-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N MMEDVBWCMGRKKC-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N Leu-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N Leu-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KUIDCYNIEJBZBU-AJNGGQMLSA-N Leu-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KUIDCYNIEJBZBU-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- GZRABTMNWJXFMH-UVOCVTCTSA-N Leu-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZRABTMNWJXFMH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N Leu-Val-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- JPNRPAJITHRXRH-BQBZGAKWSA-N Lys-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FACUGMGEFUEBTI-SRVKXCTJSA-N Lys-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FACUGMGEFUEBTI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WGCKDDHUFPQSMZ-ZPFDUUQYSA-N Lys-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WGCKDDHUFPQSMZ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- JMEWFDUAFKVAAT-WDSKDSINSA-N Met-Asn Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HKRYNJSKVLZIFP-IHRRRGAJSA-N Met-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O HKRYNJSKVLZIFP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- MPGJIHFJCXTVEX-KKUMJFAQSA-N Phe-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MPGJIHFJCXTVEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MQVFHOPCKNTHGT-MELADBBJSA-N Phe-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O MQVFHOPCKNTHGT-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N Phe-Pro-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N Pro-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N 0.000 description 1
- PUQRDHNIOONJJN-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Met Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PUQRDHNIOONJJN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VGVCNKSUVSZEIE-IHRRRGAJSA-N Pro-Phe-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VGVCNKSUVSZEIE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101000933967 Pseudomonas phage KPP25 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N Ser-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N Thr-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- QGXCWPNQVCYJEL-NUMRIWBASA-N Thr-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QGXCWPNQVCYJEL-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- KZUJCMPVNXOBAF-LKXGYXEUSA-N Thr-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KZUJCMPVNXOBAF-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N Thr-Gly-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- SPVHQURZJCUDQC-VOAKCMCISA-N Thr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SPVHQURZJCUDQC-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- IQPWNQRRAJHOKV-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IQPWNQRRAJHOKV-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- IKUMWSDCGQVGHC-UMPQAUOISA-N Trp-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)O IKUMWSDCGQVGHC-UMPQAUOISA-N 0.000 description 1
- PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N Tyr-Gly-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- QHLIUFUEUDFAOT-MGHWNKPDSA-N Tyr-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N QHLIUFUEUDFAOT-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- WPRVVBVWIUWLOH-UFYCRDLUSA-N Tyr-Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N WPRVVBVWIUWLOH-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- UUBKSZNKJUJQEJ-JRQIVUDYSA-N Tyr-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O UUBKSZNKJUJQEJ-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- NZBSVMQZQMEUHI-WZLNRYEVSA-N Tyr-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NZBSVMQZQMEUHI-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 1
- CLEGSEJVGBYZBJ-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CLEGSEJVGBYZBJ-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- APQIVBCUIUDSMB-OSUNSFLBSA-N Val-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N APQIVBCUIUDSMB-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N Val-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- UVHFONIHVHLDDQ-IFFSRLJSSA-N Val-Thr-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O UVHFONIHVHLDDQ-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N Val-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- AYHNXCJKBLYVOA-KSZLIROESA-N Val-Trp-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N3CCC[C@@H]3C(=O)O)N AYHNXCJKBLYVOA-KSZLIROESA-N 0.000 description 1
- JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N Val-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001856 aerosol method Methods 0.000 description 1
- 238000012387 aerosolization Methods 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000012206 bottled water Nutrition 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N d-alpha-Tocopheryl acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical class O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009372 pisciculture Methods 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 229940042585 tocopherol acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/10011—Birnaviridae
- C12N2720/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A leírás terjedelme 20 oldal (ezen belül 2 lap ábra)
HU 225 488 Β1
A találmány tárgya IBDV-mutáns, amely az E-variánsú vírusgénem A-szegmensében lévő VP2-fehérje kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazza, és amely képes CEF szövettenyészetet megfertőzni és abban replikálódni. A találmány tárgya továbbá ezen mutánst tartalmazó oltóanyag és ezen mutáns alkalmazása oltóanyag gyártására.
A fertőző burzális betegség vírusa (IBDV) a birnavírusok családjának a tagja. E család vírusai nagyon hasonlóan szerveződő genommal és hasonló replikációs ciklussal rendelkeznek. E vírusok genomja két szegmensből (A- és B-szegmens) álló kétszálú RNS (dsRNS). A nagyobb A-szegmens egy poliproteint kódol, amelyből autoproteolízis révén jönnek létre az érett VP2, VP3 és VP4 jelű vírusfehérjék. VP2 és VP3 a vírusrészecske fő szerkezeti fehérjéi. A VP2 a birnavírusok jelentős, gazdaszervezet védelmét okozó immunogénje, és tartalmazza azokat az antigén hatású szakaszokat, amelyek a semlegesítő ellenanyagok termeléséért felelősek. A VP4-fehérje a vírus által kódolt proteáz, amely a VP2-, VP3- és VP4-fehérjék prekurzor poliproteinjének a feldolgozásában játszik szerepet. A nagyobbik A-szegmensen egy további nyílt leolvasási fázis (ORF) is található, megelőzve és részben átfedve a poliprotein génjét. Ezen második nyílt leolvasási fázis egy VP5 jelű, ismeretlen funkciójú fehérjét kódol, amely az IBDV-vel fertőzött sejtekben fordul elő. A kisebb B-szegmens a VP1 jelű, 90 kDa-os többfunkciós fehérjét kódolja, amely polimeráz- és sapkázó aktivitással rendelkezik.
Az IBDV-nek két szerotípusa létezik, az 1-es és a 2-es szerotípus. A két szerotípust vírussemlegesítési (VN) teszttel különböztethetjük meg. Ezenkívül az 1-es szerotípusnak altípusait is izolálták. Az 1-es szerotípus ezen úgynevezett „variáns” vírusait keresztsemlegesítési tesztekkel, monoklonális ellenanyagok sorozatával vagy RT-PCR-rel azonosíthatjuk. Az IBDV 1-es szerotípusának ezen altípusai megtalálhatók a szakirodalomban, például klasszikus, E-variáns, GLS, RS593 és DS326 törzsek [van Loon és munkatársai, „Proceedings of the International symposium on infectious bursal disease and chicken infectious anaemia”, Rauischholzhausen, Germany, 179-187. old. (1994)].
A fertőző burzális betegség (IBD), vagy más néven Gumboro-féle betegség, egy akut, erősen ragályos vírusfertőzés csirkében, amelynek elsődleges célpontja a nyirokszövet, és különösen szelektív a Fabricius-burza sejtjeire. A megbetegedések száma az érzékeny baromfiudvarokban magas, gyors súly vesztéssel és mérsékelt halálozással jár. A betegségből felgyógyuló csirkék immunhiányosak lehetnek a Fabricius-burza tönkretétele miatt, amely a csirke védekezőrendszere számára nélkülözhetetlen. Az IBD-vírus a 3 hetesnél fiatalabb csirkékben komoly immunszuppressziót okoz, valamint burzai sérüléseket idéz elő a csirkék 3 hónapos koráig.
A betegséget hosszú éveken át képesek voltak megelőzni a baromfitenyészetek magas ellenanyagszintjének előidézésével, hatástalanított vírust tartalmazó oltóanyagnak a legyengített élő IBDV-oltóanyaggal előkezelt csirkéken való alkalmazásával. Ez az IBD által okozott anyagi veszteségeket minimális szinten tartotta. Az oltott tenyészállatoktól származó csirkékben található anyai ellenanyagok megelőzik az IBDV-vel való korai fertőzést, és csökkentik az immunszuppresszióval kapcsolatos problémákat. Ezenkívül a legyengített élő vírust tartalmazó oltóanyagokat sikeresen alkalmazták kereskedelmi baromfitenyészetekben az anyai ellenanyagok szintjének csökkenése után.
Napjainkra az IBDV nagyon virulens törzsei magas halandósággal együtt járó járványokat okoztak Európában, és a jelenleg alkalmazott oltási programok nem kielégítők a csirkék védelmére. Az oltások kudarca annak tulajdonítható, hogy a legyengített élő oltóanyagok képtelenek voltak a madarakat megfertőzni a virulens valódi vírussal való találkozás előtt.
Az akut megbetegedések további oka az antigén variánsok felbukkanása az oltott baromfiak között a 80-as évek közepén, különösen az Amerikai Egyesült Államokban. Az IBDV 1-es szerotípusának legfontosabb új antigén altípusai a Delaware E-variáns és a GLS törzsek voltak. Azelőtt az oltóanyagok kizárólag a legyengített élő vagy elölt, klasszikus típusú IBDV-törzseken alapultak. Jóllehet annak ellenére, hogy a klasszikus IBDV-oltóanyagtörzsek kiváltanak egy bizonyos fokú védettséget a csirkék más altípusú törzzsel való fertőzése ellen (és viszont), jelentős anyagi károk keletkeztek annak következtében, hogy a védőoltások csak egy altípusba tartozó víruson alapuló oltóanyagokkal történtek.
Ezen változások eredményeképpen szükségessé vált mind klasszikus és variáns IBDV altípusú törzsek beépítése az IBDV-oltóanyagokba széles spektrumú védettség kialakítása érdekében.
Ahogy fent említettük, a klasszikus törzseken alapuló, mind élő, mind elölt vírusokat tartalmazó oltóanyagokat is rendszeresen alkalmazzák a gyakorlatban. Az elölt klasszikus oltóanyagokat általában injekcióval adják be, míg az élő klasszikus oltóanyagokat vagy injekcióval, vagy az olcsó, tömeges alkalmazási módszerek valamelyikével adják be, mint például permet, aeroszol és ivóvíz általi immunizálás.
Az eddig azonosított Delaware E-variáns vírusok erősen virulensek, és kizárólag elölt oltóanyagként adhatók be. Mindeddig egyetlen sikeres próbálkozás történt egy E-variáns sejttenyészetben való fenntartására és legyengítésére. Ezen - 89/03 elnevezésű - oltóanyag képes védettséget kiváltani E-variáns fertőzéssel szemben, de az a hátránya, hogy nem működik, ha valamelyik tömeges alkalmazási úton alkalmazzák. Ezt az oltóanyagot injekcióban kell beadni, bőr alá vagy izomba [Hein és munkatársai, „Proceedings of the 43th Western poultry disease conference”, 102-103. old. Sacramento, USA, (1994)].
A madarak GLS altípusú IBDV fertőzése elleni védelmére kizárólag elölt oltóanyagok kaphatók.
Mundt [J. Gén. Virology, 80, 2067-2076. old. (1999)] meghatározta azokat a molekuláris szintű szerkezeti követelményeket, amelyek lehetővé teszik, hogy az addig csak a Fabricius-burzában, in vivő fertőző- és
HU 225 488 Β1 szaporodóképes IBDV-törzsek csirke embrionális kötőszöveti (CEF) sejttenyészetben is fertőzzenek és szaporodjanak. A VP2-fehérje két aminosavának - a 253. helyen (Glu-t His-re) és a 284. helyen (Ala-t Thr-ra) cseréje szükséges és elégséges ahhoz, hogy az IBDV burzában életképes törzsei (BU) képesek legyenek megfertőzni a CEF és egyéb szövettenyészeteket. Különösen két kiméra - D78/E-variáns - szövettenyészetes fenotípusú (TC) IBDV-mutánst tárnak fel ebben a közleményben.
A fentieket figyelembe véve megállapíthatjuk, hogy szükség volt legyengített élő Delaware E-variáns IBDV-oltóanyagra, amely hatékonyan beadható tömeges alkalmazási úton. Ezenkívül igény volt egy széles spektrumú IBDV-oltóanyagtörzsre, amely megfelelő védelmet nyújt két vagy több altípusú IBDV-törzs ellen. Egy ilyen széles spektrumú oltóanyag megakadályozza, hogy minden egyes IBDV altípus ellen külön oltóanyagvírusokat kelljen gyártani, és azokat kombinált oltóanyagként kiszerelni.
A találmány szerinti megoldás egyik célja olyan IBDV-mutáns létrehozása, amely képes csirkékben védettséget kiváltani legalább két IBDV altípus virulens törzsei ellen. A találmány szerinti megoldás egy további célja olyan mutáns létrehozása, amely védettséget nyújt a virulens E-variáns IBDV-törzs ellen, és egyúttal beadható az élő IBDV-oltásoknál mindennaposán alkalmazott tömeges alkalmazási módszerekkel.
Felismertük, hogy e célokat kielégíti egy olyan IBDV-mutáns, amely - az E-variáns vírus genomjának A-szegmensében lévő - VP2-fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz, és amely képes fertőzni és szaporodni CEF szövettenyészetben, és az jellemzi, hogy az E-variáns VP2-fehérjét kódoló részében egy vagy több olyan mutációt tartalmaz, amelyben (i) a 254. helyen lévő aminosav kodonja glicint kódol és/vagy (ii) a 270. helyen lévő aminosav kodonja treonint kódol.
Megállapítottuk, hogy a Mundt és munkatársai (1999, mint fent) által közölt D78/E-variáns kiméra burza (BU) mutáns, amely az E-variáns törzs (BU) tenyésztési és immunológiai tulajdonságait hordozza, virulens, és a limfocita állomány teljes kimerülését okozza a csirkékbe való beadás után. Ezenkívül, mint ahogy a 2. példában bemutatjuk, e törzs szövettenyészetes (TC) mutánsa kevésbé virulens, és képes részleges, védő immunreakciót kiváltani, amennyiben injekcióban adjuk be. Egyúttal azonban a TC mutáns csak gyenge védettséget nyújt a fertőzés ellen, ha a szemen keresztül juttatjuk be (egy olyan beadási mód, amely az ivóvizes beadási út modellje). Meglepetéssel állapítottuk meg, hogy - a vírusok E-variánsának a VP2-génjében - a természetben előforduló, a 254. aminosav (Ser) és/vagy a 270. aminosav (Alá) kodonjainak 254(Gly) és/vagy 270(Thr) aminosavat kódoló kodonra történő további mutációk olyan legyengített élő IBDV-mutánst eredményeznek, amely:
(i) klasszikus és E-variáns altípusú IBDV-törzsek ellen körülbelül azonos mértékű vírussemlegesítési (VN) titert képes kiváltani, (ii) virulens, klasszikus és E-variáns altípusú IBDV-törzsekkel való fertőzés ellen képes védelmet kiváltani a beoltott állatokban, (iii) képes védelmet kiváltani, ha tömeges alkalmazási út alkalmazásával juttatjuk be.
Az IBDV altípusok jól meghatározottak a szakirodalomban a monoklonális ellenanyagokkal való reakcióik révén. Az E-variáns altípus specifikusan reagál a Moab67 jelű vírussemlegesítő ellenanyaggal, amelyet 1992. szeptember 14-én, HB 11122 számon Dave Snyder helyezett letétbe az ATCC-nél [lásd még Vakharia és munkatársai, Vírus Research 31, 265-273. old. (1994)].
A találmány szerinti IBDV-mutánst eredményező mutációkat az E-variáns VP2-fehérjéjének kódolószakaszában hozzuk létre a 254(Ser) és/vagy 270(Ala) aminosavak kodonjainál.
A találmány szerinti előnyös IBDV-mutáns a kívánt mutációkat vagy mindkét, vagy a 254. aminosav kodonjában tartalmazza.
A 890. nukleotid (A-ról G-re) és a 938. nukleotid (G-ről A-ra) kicserélése sorrendben a 254. aminosav (Ser-ről Gly-re) és a 270. aminosav (Ala-ról Thr-ra) helyettesítését eredményezi. Mint fent feltártuk, az IBD-vírusok genomiális szerveződése jól ismert; az IBDV genomja egy nagy A-szegmenst és egy kisebb B-szegmenst tartalmaz. Az IBDV A-szegmense egy nagy nyílt leolvasási fázist (ORF) tartalmaz, amely egy körülbelül 110 kDa-os poliproteint (VP2-VP3-VP4,
I. ábra) kódol. Az A-szegmens és a B-szegmens teljes nukleotidszekvenciáját számos IBDV-törzsben meghatározták. Ezenkívül az E-variáns VP2-fehérjéjét kódoló résznek a nyílt leolvasási fázison belüli helyét és nukleotidszekvenciáját, valamint az E-variáns VP2-fehérjéjének az aminosavszekvenciáját is meghatározták [Vakharia és munkatársai, Avian Dlsease, 36, 736-743. old. (1992); Vakharia és munkatársai, Vírus Rés. 31, 265-273. old. (1994); Heine és munkatársai,
J. Gén. Virol., 22, 1835-1843. old. (1991)]. Az E-variáns VP2-fehérjéjét kódoló szekvenciát tartalmazó DNS-fragmens nukleotidszekvenciáját (647-1725. nukleotidok), valamint a poliprotein ennek megfelelő aminosavszekvenciáját (175-532. aminosavak) - amelyeket a találmány szerinti IBDV-mutáns előállításánál alkalmaztunk a példákban leírt módon - az 1. és 2. azonosító számú szekvencia mutatja be.
Az aminosavhelyek jelzésére alkalmazott sorszámok az IBDV-poliprotein szakirodalomban elterjedt sorszámozására utal. A nukleotidhelyek sorszámai az IBDV genom A-szegmensének teljes nukleotidszekvenciáján alapul [Mundt és Müller, J. Gén. Virol. 77, 437-443. old. (1995); NCBI azonosító: X 84034],
Mundt (1999, mint fent) feltárta, hogy egy klasszikus vagy E-variáns fenotípusú IBDV-törzs CEF szövettenyészetben való fertőzésének és szaporodásának a szükséges feltétele a 253. His-t és a 284. Thr-t kódoló kodonok jelenléte a megfelelő törzsek VP2-génjében. Ezért a találmány szerinti - a CEF szövettenyészetben fertőzés és szaporodás tulajdonságát mutató IBDV-mutáns előnyösen tartalmazza a 253. His és a
HU 225 488 Β1
284. Thr aminosavakat. Egy ilyen mutáns IBDV-törzshöz Mundt (1999, mint fent) által feltárt eljárások alkalmazásával juthatunk. Ezenkívül ilyen eljárást bemutatunk az 1. példában.
A genetikai kód degeneráltsága miatt számos lehetőség létezik a találmány szerinti IBDV-mutáns poliproteinjének a 254. His és 270. Thr aminosavakat kódoló kodonokra. A VP2 kódolószakaszában a 254. Gly kodonja lehet GGA, GGC, GGG vagy GGT, előnyösen GGC, míg a 270. Thr kodonja ACT, ACC, ACA vagy ACG, előnyösen ACG lehet.
Olyan E-variánsú IBDV-törzsek, amelyek (i) fertőznek és szaporodnak CEF szövettenyészetben, és (ii) tömeges alkalmazási út alkalmazásával széles spektrumú immunválaszt váltanak ki, előállítható a fent említett megfelelő specifikus kodonoknak a természetben előforduló E-variánsú törzsbe való beépítésével.
Ugyanezt az eredményt érhetjük el másképpen az E-variáns VP2 kódolószakasza egy részének egy ismert, (klasszikus) IBDV-törzs genomiális szekvenciájának olyan megfelelő részével való helyettesítésével, amely már tartalmazza kívánt kodonokat a megfelelő helyeken. A klasszikus törzsek genomiális szekvenciáját az 5 871 744 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat (Vakharia és Mundt) és a 98201704.8 számú európai szabadalmi bejelentés (AKZO Nobel NV) tárja fel.
A találmány szerinti IBDV-mutáns előnyösen a klasszikus D78-törzs VP2-fehérjéjét kódoló részeit tartalmazza, amely egy olyan VP2-fragmentet kódol, amely a fent meghatározott kívánatos kodonokat tartalmazza a 253-284. aminosavhelyeken.
Egy találmány szerinti előnyös IBDV-mutáns a D78 VP2-t kódoló részt tartalmazza, amely a 884-985. helyeket felölelő nukleotidokat tartalmazza, és amelynek a nukleotidszekvenciáját a 3. azonosító számú szekvencia mutatja be. Ez a nukleotidfragmens helyettesíti az E-variáns VP2-t kódoló megfelelő fragmensét, és többek között tartalmazza az alábbi aminosavakat: 253. His, 254. Gly, 270. Thr és 284. Thr (4. azonosító számú szekvencia).
A találmány szerinti IBDV-mutáns tartalmazhatja az E-variánsú IBDV-törzs A-szegmensének a genetikai anyagát, beleértve a mutáltatott VP2 kódolószakaszt is, ahogy fent feltártuk. Azonban a találmány szerinti IBDV-mutáns egy más IBDV-törzs genetikai anyagán is alapulhat, mint például egy klasszikus vagy GLS törzs, egy klasszikus törzs különösen előnyös esetben a D78-törzs.
Egy ilyen „kiméra” IBDV-mutánsban az első típusú IBDV-törzs A-szegmensének genetikai anyagában a VP2-t kódoló szekvenciákat helyettesítjük az E-variáns VP2-t kódoló szekvenciájával, amely ezenkívül tartalmazza azokat a kívánt mutációkat, amelyek az új IBDV-mutáns előnyös tulajdonságaiért felelnek.
Azok a VP2 kódolószekvenciák, amelyek egy E-variáns VP2-fehérjét kódolnak, tartalmazhatják a teljes E-variáns VP2-fehérjét kódoló (mutáltatott) genetikai információt (131-1666. nukleotidhelyek), vagy tartalmazhatják annak egy olyan VP2-fehérjét kódoló fragmensét, amely képes E-variánsú vírust neutralizáló ellenanyagokat termeltetni. Az utóbbi esetben az E-variáns VP2-t kódoló szekvenciáit kiegészíthetjük egy másik IBDV altípus VP2-t kódoló szekvenciáival úgy, hogy az IBDV-mutáns egy teljes VP2-fehérjét expresszáljon.
Egy ilyen IBDV-mutáns előnyösen tartalmazhat legalább egy (mutáltatott) E-variáns VP2-t kódoló fragmenst, amely a VP2-gén úgynevezett változékony szakaszát öleli fel. Bayliss és munkatársai [J. Gén. Virol. 71, 1303-1312. old. (1990)] meghatározták, hogy ez a szakasz a 745. És 1182. nukleotidok között található.
Az IBDV-mutáns előnyösen tartalmazza az E-variáns VP2-t kódoló szekvenciáknak a 647-1666. nukleotidjait, beleértve a fent leírt kívánt mutációkat.
A (kiméra) IBDV-mutánsok előállítása a közelmúltban felállított fertőző cRNS rendszerrel [Mundt és Vakharia, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 11 131-11 136. old. (1996)] érhető el. Ez a fordított genetikai rendszer lehetővé teszi, hogy az IBDV RNS-genomjában mutációkat hozzunk létre. A legfontosabb lépés ebben a fordított genetikai rendszerben, hogy előállítjuk az IBD-vírus A- és B-szegmensének teljes cDNS-klónjait, beleértve a mindkét szegmens 5’- és 3’-végén található nukleotidokat. A klónozási eljárás után az A- és B-szegmens teljes hosszúságú szekvenciáit működőképesen kapcsoljuk egy promoterhez, amely DNS-függő RNS-polimerázt képes kötni, mint például T7-, SP6- vagy T3-polimeráz, előnyösen T7-polimeráz. A DNS-függő polimeráz képes a vírus teljes cRNS-ét átírni az A- és B-szegmens teljes hosszúságú cDNS-klónjairól. Ez a cRNS képes kiváltani a vírus replikációját és az életképes vírus kialakulását. Ez az eljárás mindegyik természetes IBDV-vel végrehajtható.
Fordított genetikai rendszereket számos IBDVtörzsre leírtak, mint például a D78-ra [Yao és munkatársai, J. Virol. 72, 2647-2657. old. (1998)], a HK46 törzsre [Lim és munkatársai, J. Virol. 73, 2854-2862. old. (1999)] és a CEF94-re [Boot és munkatársai, Virology 265, 330-341. old. (1999)].
A találmány szerinti IBDV-mutáns B-szegmense bármely IBDV-törzsből származhat, előnyösen a D78vagy P2-törzsből (5 871 744 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat és 98201704.8 számú európai szabadalmi bejelentés).
Az előzőekben feltárt, a P2-törzs B-szegmensét tartalmazó IBDV-mutánsok különösen előnyös legyengítési és védőtulajdonságokat mutatnak, különösen a 254. Gly vagy a 254. Gly és 270. Thr aminosavakat tartalmazó mutánsok.
A kívánt mutációkat a szakirodalomban az erre a célra általánosan ismert eljárásokkal építhetjük be az IBDV-genomba. A mutációkat különösen helyspecifikus mutagenezissel építjük be. A mutációknak az IBDV-genomba való bevitelére szolgáló eljárásokat bemutatunk a leírásban, de azok általánosan elterjedtek a szakirodalomban is [Mundt és Vakharia, (1996), mint fent; Yao és munkatársai, J. Virol. 72, 2647-2654. old. (1998); Mundt és munkatársai, (1999), mint fent; 98201704.8 számú európai szabadalmi bejelentés;
HU 225 488 Β1 „Current Protocols in Molecular Biology”, 8.5.1-8.5.9. old. szerk.: F. M. Ausubel és munkatársai, kiad.: Wiley N. Y., (1995); valamint Kunkel és munkatársai, „Methods in Enzymology” 154, 376-382. old. (1987)].
Mint ahogy a példákban feltárjuk, a találmány szerinti IBDV-mutáns nagyon előnyös tulajdonságokat mutat, amelyek egy új típusú IBDV-oltóanyaghoz vezethetnek. Ezért a találmány egy másik megvalósítási módja baromfik - azok IBDV-fertőzésből eredő betegségei ellen való - védelmére alkalmazható oltóanyag. Az oltóanyag a fent meghatározott IBDV-mutánst tartalmazza gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy oldószerrel együtt.
Az IBDV-mutánst legyengített élő vagy inaktivált vírusként is felhasználható az oltóanyagban, azonban az élő forma előnyös, mivel lehetővé teszi a találmány szerinti IBDV-mutáns összes előnyös tulajdonságának az alkalmazását. A találmány szerinti oltóanyagot hagyományos eljárásokkal állíthatjuk elő, mint amelyeket például a kereskedelmi forgalomban kapható élő és inaktivált IBDV-oltóanyag előállítására szokásosan alkalmaznak. Röviden, egy érzékeny hordozót beoltunk találmány szerinti IBDV-mutánssal, és addig tenyésztjük, amíg a vírus egy kívánt fertőző titerre felszaporodik, majd ezután az IBDV-t tartalmazó anyagot begyűjtjük.
Minden olyan hordozó, amely az IBDV-mutáns replikációját képes elősegíteni, alkalmazható a találmány szerinti oltóanyag előállítására, beleértve az elsődleges (madár) sejttenyészeteket, mint például csirke embrionális kötőszöveti sejtek (CEF) vagy csirke embrionális májsejtek (CÉL), emlőssejtvonalak, mint például a VERŐ vagy BGM-70 sejtvonal, vagy madársejtvonalak, mint például a QT-35, QM-7 vagy LMH sejtvonal. Általában a sejtek beoltása után a vírust 3-10 napig tenyésztjük, majd ezután a sejttenyészet felülúszóját begyűjtjük, és szükség esetén szűrjük vagy centrifugáljuk a sejttörmelékek eltávolítása érdekében.
Az IBDV-mutánst másképpen megtermékenyített csirketojásokban tenyésztjük. Előnyösen megtermékenyített SPF-csirketojás az a hordozó, amelyen ezeket az IBDV-mutánsokat tenyésztjük. A megtermékenyített csirketojásokat például beolthatjuk 0,2 ml IBDV-mutánst tartalmazó, tojásonként legalább 102 TCID50 szuszpenzióval vagy homogenizátummal, és ezután 37 °C-on inkubáljuk azokat. Körülbelül 2-5 nap elteltével az IBD-vírusterméket az embrió és/vagy a membránok és/vagy a húgytömlőfolyadék összegyűjtésével gyűjtjük be, majd ezt az anyag megfelelő homogenizálása követi. Ezután a homogenizátumot 10 percig 2500 g-vel centrifugáljuk, és a felülúszót szűrőn átszűrjük (100 pm).
A találmány szerinti, élő vírust tartalmazó oltóanyagot olyan szuszpenzió vagy liofilizátum formájában állíthatjuk elő és forgalmazhatjuk, amely az ilyen készítményekben általánosan alkalmazott gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy oldószert is tartalmaz. Hordozók közé tartoznak stabilizátorok, tartósítószerek és pufferek. Megfelelő stabilizátorok például az SPGA, szénhidrátok (mint például szorbitol, mannitol, keményítő, szukróz, dextrán, glutamát és glükóz), fehérjék (mint például tejpor, albumin vagy kazein) vagy ezek lebontási termékei. Megfelelő pufferek például az alkálifém-foszfátok. Megfelelő tartósítószerek timerozál, mertiolát és gentamicin. Oldószerek közé tartoznak víz, vizes pufferek (mint a puffereit sóoldat), alkoholok, poliolok (mint például glicerin).
Ha kívánjuk, a találmány szerinti élő oltóanyagok adjuvánst is tartalmazhatnak. A megfelelő adjuváns aktivitású vegyületek és készítmények példái megegyeznek a később említettekkel.
Habár a találmány szerinti élő oltóanyag injekcióban, például intramuszkulárisan, szubkután vagy in ovo történő beadása lehetséges, az oltóanyagot előnyösen IBDV-védőoltásra szokásosan elterjedt tömeges alkalmazási úton adjuk be. IBDV-védőoltásra ez ivóvíz-, porlasztásos vagy aeroszolimmunizáció lehet.
Az ivóvizes beadási úthoz az állatokat szokás szerint 2-4 óráig szomjaztatjuk, mielőtt az oltóanyagot tartalmazó vizet eléjük tesszük, és fontos, hogy elegendő ivóhely legyen az összes madár egyenletes vízhez jutásához. Az oltóanyagot olyan számított koncentrációban alkalmazzuk a friss ivóvízben, hogy minden madárnak elegendő dózist adjunk.
Azért, hogy az életképes oltóanyagvírusok számának - az ivóvízben nagy mennyiségben jelen lévő klór-, vas-, cink- vagy rézionok miatti - drámai csökkenését megakadályozzuk, előnyösen védőszert, mint például sovány tejet (tejport) adunk az oltóanyagot tartalmazó vízhez.
A porlasztásos eljárás - amely a durva permetes és az aeroszolos beadást tartalmazza - az élő IBDV-oltóanyag kisméretű folyadékrészecskékben való beadását jelenti. A durva permetes eljárásban a részecskék kezdeti cseppmérete 10-100 pm, és az aeroszolos eljárásban a cseppméret általában kisebb, mint 1 pm és 50 pm között van.
Mivel a (csap)vízrészecskék beszáradása miatt az oldott sók koncentrációja megnövekszik, az élő oltóanyagvírusok inaktiválódásának megakadályozására fehérje védőszert, mint például sovány tejet, sovány tejport vagy zselatint adunk a vizes fázishoz.
A kis részecskék előállítására hagyományos porlasztókészülékeket vagy aeroszolgenerátorokat alkalmazhatunk, mint például a kereskedelmi forgalomban kapható hátizsák porlasztó, haltenyésztő porlasztó vagy atomizáló porlasztó. Az ivóvizes védőoltást szintén hagyományos készülékkel végezhetjük. A hagyományos porlasztásos, aeroszolos és ivóvizes védőoltást érintő részleteket megtalálhatjuk a „Compendium, administration of poultry vaccines” című könyvben [van Eck és munkatársai, VI—VII, kiad.: Gezondheidsdienst voor Pluimvee, Doorn, The Netherlands, (1988)].
A találmány egy más megvalósítási módja szerinti oltóanyag az IBDV-mutánst inaktivált formában tartalmazza. Az inaktivált oltóanyag legnagyobb előnye a hosszú életű ellenanyagok magas szintje, amelyet mind klasszikus, mind E-variáns IBDV-törzsek ellen elérhetünk.
A tenyésztés után begyűjtött vírusok inaktiválásának a célja a vírusok szaporodásának megszüntetése.
HU 225 488 Β1
Általában ezt szakirodalomban jól ismert kémiai vagy fizikai eljárásokkal érhetjük el.
Egy inaktivált IBDV-mutánst tartalmazó oltóanyag például egy vagy több, az erre a célra megfelelő és fent említett, gyógyszerészetileg elfogadott hordozót vagy oldószert is tartalmazhat.
A találmány szerinti inaktivált oltóanyag előnyösen egy vagy több adjuváns aktivitású vegyületet tartalmaz. Az erre a célra megfelelő vegyületek vagy készítmények közé tartoznak az alumínium-hidroxid, -foszfát vagy -oxid, ásványi olaj (mint például Bazol F® vagy Marcol 52®) vagy növényi olaj (mint például E-vitamin-acetát) alapú olaj-víz vagy víz-olaj emulziók.
A találmány szerinti oltóanyag IBDV-mutáns hatékony dózisát tartalmazza hatóanyagként, azaz egy olyan mennyiségű IBDV-anyagot, amely a beoltott madarak immunitását eredményezi egy virulens vírussal való fertőzés esetén. Immunitás alatt azt értjük, hogy az oltás után a madarakban jelentősen nagyobb védelem alakul ki a nem oltott csoporthoz képest.
A találmány szerinti élő oltóanyag tipikusan állatonként 102-109 TCID50 (fertőző dózis50) dózisban adható, amely dózis előnyösen a 104·0—1O7·0 TCID50 tartományban van. Az inaktivált oltóanyagok állatonként 105—109 TCID50 antigénekvivalenst tartalmazhatnak.
Inaktivált oltóanyagokat általában parenterálisan adunk be, például intramuszkulárisan vagy szubkután.
Habár a találmány szerinti IBDV-oltóanyag hatásosan alkalmazható csirkékben, egyéb baromfik, mint például pulykák, gyöngytyúkok és foglyok is sikeresen olthatok lehetnek az oltóanyaggal. A csirkék lehetnek húscsirkék, szaporítófajták vagy tojófajták.
A találmány szerinti oltóanyagot kapó állatok életkora ugyanaz, mint azoké, amelyek a hagyományos, élő vagy inaktivált IBDV-oltóanyagot kapják. Például a húscsirkéket (amelyek anyai ellenanyagtól - MDA mentesek) olthatjuk 1-2 napos korban vagy in ovo, míg a magas MDA-szinttel bíró húscsirkéket előnyösen 2-3 hetes korban oltjuk. Alacsony MDA-szintű tojófajtákat és szaporítófajtákat 1-10 napos korban olthatjuk, majd ezt követően inaktivált oltóanyaggal megerősítő oltásokat adhatunk, 6-12 és 16-20 hetes korban.
A találmány tárgyát képezik kombinált oltóanyagok is, amelyek a fent leírt IBDV-mutáns mellett - egy vagy több - más, baromfikat fertőző kórokozótól származó immunogént tartalmaznak.
A kombinált oltóanyag még előnyösen tartalmaz egy vagy több oltóanyagtörzset a Marek-féle betegség vírus (MDV), fertőző bronchitis vírus (IBV), Newcastleféle betegség vírus (NDV), tojás-csepp szindróma (EDS) vírus, pulyka rinotracheitis vírus (TRTV) vagy reovírus ellen.
1. példa
Széles spektrumú klasszikus/E-variáns IBDV-mutáns előállítása Anyagok és eljárások Vírus és sejtek
Az 1-es szerotípusú D78-törzset (Intervet International BV, Boxmeer, Netherlands) csirkeembriósejtekben (CEC) tenyésztettük. A megtermékenyített SPF-tojásokból származó CEC-et 10% magzati borjúszérummal (FCS) kiegészített Dulbeccos minimál/esszenciális tápközegben (DMEM) növesztettük, és ezt alkalmaztuk a kinyert vírus tenyésztésére és a fertőzésre való felülúszók továbboltására. A transzfekciós kísérleteket és floureszcenciás immunológiai vizsgálati eljárásokat 10% FCS-sel kiegészített 199-es tápközegben növesztett fürjizomsejtekben (QM-7, ATCC) hajtottuk végre.
IBDV-törzsek B-szegmensének teljes hosszúságú cDNS-klónjának előállítása
Az 1-es szerotípusú D78-törzs B-szegmensének teljes hosszúságú cDNS-ének klónozásához a vírust CEC-ben tenyésztettük és ultracentrifugálással tisztítottuk. A D78-törzs vírusgenomjának RNS-ét megtisztítottuk és cDNS-sé írtuk vissza, és polimeráz-láncreakció (PCR) alkalmazásával amplifikáltuk, a szokványos műveletek követésével és a Mundt és Vakharia (1996, mint fent) által leírt oligonukleotidok alkalmazásával. Az amplifikációs termékeket tompa véggel klónoztuk, és a megfelelő PCR-fragmenseket tartalmazó plazmidokat szekvenáltuk. A T7-RNS-polimeráz promoterének szabályozása alatt álló, a B-szegmens teljes hosszúságú cDNS-ét tartalmazó plazmid (pUC18BD78) előállítására szolgáló klónozási eljárás megfelelt Mundt és Vakharia (1996, mint fent) által a P2-törzs B-szegmensének előállítására leírt műveleti sorral.
Intergenerikus IBDV-plazmidok előállítása
Az IBDV-specifikus szekvenciák helyettesítésére az E-variáns teljes kódolórégióját tartalmazó E/Del-plazmidot [Vakharia, Biotechnology Annual Review 3, 151-168. old. (1997)] alkalmaztuk. A pEDEL22Bacll-plazmidot Nde I és Sál I restrikciós enzimekkel emésztettük, sorrendben a 647. és 1725. nukleotidoknál (1. azonosító számú szekvencia), a P2-törzs teljes hosszúságú szekvenciájával (NCBI azonosító: X 84034) megegyezően. A kapott 1078 bp hosszúságú fragmens a VP2 változékony szakaszának (Bayliss és munkatársai, 1990, mint fent) kódolószekvenciáját és az E/Del-törzs VP4-ének szekvenciáit tartalmazza. Az Nde I és Sál I enzimekkel felnyitott pD78A/ÁNB (Mundt, 1999, mint fent) plazmidba történő ligálás után a létrejött teljes hosszúságú kiméra plazmid (pD78A-E/Del) a D78-törzs és E/Del A-szegmensének szekvenciáit is tartalmazta. A pD78A-E/Del plazmid volt a helyspecifikus mutagenezis kiindulópontja.
Ebből a célból a pD78A-E/Del plazmidot Sac I és Sál I restrikciós enzimekkel emésztettük a 868. és 1725. nukleotidoknál (a P2-törzs teljes hosszúságú szekvenciájával megegyezően), és a megfelelően hasított pBS- (Stratagene) plazmidba klónoztuk (pBSD78-E/Del). A helyspecifikus mutagenezist korábban leírt módon (Kunkel és munkatársai, 1992, mint fent) végeztük. Az (nt 941-985) nukleotidszekvencia helyspecifikus mutagenezise a D78-E/Delmut12-1 oligonukleotid (1. táblázat, 5. azonosító számú szekvencia) és a pBSD78-E/Del plazmid alkalmazásával történt. Az érdekelt szekvenciát szekvenálással ellenőriztük, és a megváltozott szekvenciát tartalmazó plazmidot második helyspecifikus mutagenezis kísérletben al6
HU 225 488 Β1 kalmaztuk. Ebből a célból a kapott plazmid (pBSD78E/Delmut1) szekvenciáját a D78-E/Delmut12-2 oligonukleotid (1. táblázat, 6. azonosító számú szekvencia) alkalmazásával mutáltattuk. A kapott plazmidokat szekvenáltuk, és egy megfelelő plazmidot (pBSD78- 5 E/Delmut12) Sac I és Spe I enzimekkel emésztettünk a 868. és 1181. nukleotidoknál (a P2-törzs teljes hosszúságú szekvenciájával megegyezően). A kapott - mutáltatott szekvenciát tartalmazó - fragmenst a megfelelően felnyitott pD78-E/Del plazmidba ligáltuk. A kapott 10 pD78A-E/Delmut12 plazmidot szekvenálással ellenőriztük. A plazmid a 253., 254., 270., és 284. aminosavak megváltozott kodonjait tartalmazta. Ezeken a helyeken az E/Del-szekvencia aminosavainak kodonjai a D78 aminosavainak kodonjaival lettek helyettesítve (Q 15 253 H, S 254 G, A 270 T, A 284 T). A pD78A, pD78A-E/Del és pD78A-E/Delmut12 plazmidokat az
1. ábrán mutatjuk be. A rendelkezésre álló plazmidokat további intergenerikus plazmidok előállításához alkalmaztuk. Ebből a célból a fent leírt pD78A-E/Delmut12 és a pD78A-E/Del-QH-AT (Mundt, 1999, mint fent) plazmidokat Nde I és Nar I enzimekkel emésztettük, és mindegyik plazmid mindkét fragmensét eluáltuk. A pD78A-E/Delmut12 plazmid Nde VNar I fragmensét a pD78A-E/Del-QH-AT plazmid felnyitott gerincébe ligáltuk (pDA78-E/DelMut1). Ezen stratégia alkalmazásával az E/Del-szekvencia következő aminosavkodonjait helyettesítettük a D78-szekvencia megfelelő kodonjaival (Q 253 H, S 254 G, A 284 T). A pDA78E/DelMut2 plazmid - amelyben az E/Del-szekvencia következő aminosavkodonjait helyettesítettük a D78-szekvencia megfelelő kodonjaival: Q 253 H, A 270 T, A 284 T - előállításához a pD78A-E/DelQH-AT plazmid Nde VNar I fragmensét a pD78A-E/Delmut12 plazmid felnyitott gerincébe ligáltuk. A pD78A-E/Delmut12, pD78A-E/Delmut1, pD78AE/Delmut2 és pD78A-E/Del-QH-AT plazmidok térképét a 2. ábrán mutatjuk be.
1. táblázat
Az IBDV A-szegmensének teljes hosszúságú cDNS-klónjának előállításához alkalmazott aminosavhelyettesítéseket tartalmazó oligonukleotidok *
| Megnevezés | Nukleotidszekvencia | Irány | Aminosavhelyet- tesítés | Nukleotidsorszám |
| D78-E/Del- mut12-1 | GCCGGtCGTCAGCCCATTGTTTGCGGCCACAGCcCTGGTGAT TAC | Antiszensz | A284T | 941-985 |
| D78-E/Del- mut12-2 | TACCGtGTCCCATCAAAGCCTATgAGGTAGATGGTGGCGCC CAGTACAAGGCcgTGGAC | Antiszensz | Q253H S254G A270T | 884-943 |
* A helyspecifikus mutagenezishez alkalmazott oligonukleotid láncindítók szerkezete és elhelyezkedése. A mutagenezis során megváltozott nukleotidokat kisbetűk jelzik, és a megváltozott kódoló nukleotidtriplettek félkövér betűtípussal vannak kiemelve. A láncindítók kötődési helye (nukleotidsorszám) és az aminosavak számozása a P2-törzs publikált szekvenciájával (Mundt és Müller, 1995, mint fent) egyezik meg.
Vírus kinyerése cRNS alkalmazásával szövettenyészetből
Az RNS in vitro transzkripciójához az A-szegmenst 40 tartalmazó plazmidokat (pD78A-E/Delmut1, pD78AE/Delmut2, pD78A-E/Delmut12) és a pD78B-plazmidot felnyitottuk BsrGI vagy Pst I enzimes emésztéssel.
A felnyitott DNS-ek további kezelését és a transzkripciót Mundt és Vakharia (1996, mint fent) leírása alapján 45 végeztük, két kivétellel: i) a transzkripciós reakcióelegyeket nem tisztítottuk fenol/kloroform extrakcióval, és ii) a transzkripciós kísérletekben CEC-et alkalmaztunk Mundt és Vakharia (1996, mint fent) leírása alapján.
Két nappal a transzfekció után a sejtek fagyasztót- 50 tuk/felolvasztottuk, 700 g-vel centrifugáltuk a sejttörmelékek eltávolítására, és a keletkezett felülúszót tovább derítettük 0,45 pm-es szűrőn keresztül való szűréssel és -70 °C-on tároltuk. A fluoreszcenciás immunológiai vizsgálatokhoz a sejteket steril fedőlemezeken növesz- 55 tettük. A P2 B-szegmensét tartalmazó mutánsokat a fenti leírás szerint készítettük.
IBDV-antigének detektálása
Az IBDV-antigént közvetett fluoreszcenciás immunológiai vizsgálati eljárással (IFA) határoztuk meg. 60
Transzfektált CEC felülúszóit CEC-re oltottuk tovább. Az IFA céljára a fedőlemezeken növesztett CEC-et együtt inkubáltuk a továbboltási kísérletekből származó felülúszókkal. 16 óra elteltével a sejteket acetonnal rögzítettük, és az IFA-t elvégeztük.
Eredmények
Transzfekciós kísérletek kiméra cRNS-sel A transzfekciós kísérletekhez a kiméra A-szegmens teljes hosszúságú cDNS-klónjait (pD78A-E/Delmut1, pD78A-E/Delmut2, pD78A-E/Delmut12) szintetikus cRNS-sé írtuk át, és a B-szegmens teljes hossszúságú cRNS-ével (pD78B vagy pP2B) együtt CEC-be transzfektáltuk. A transzfekció után két nappal a sejteket fagyasztottuk/felolvasztottuk, és a kapott felülúszót egyszer továbboltottuk CEC-ben. A fagyasztás/felolvasztás és továbboltás után a felülúszókat IBDV-antigénre teszteltük IFA és CEC alkalmazásával. Vírus keletkezett a pD78B- vagy pP2B-plazmidról való cRNS-sel történő transzfekció után, a pD78A-E/DelMut1-gyel a mutáns D78A-E/DelMut1 vírust eredményezve [klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//D78B], a pD78A-E/DelMut2-vel a mutáns D78A-E/DelMut2 vírust eredményezve [klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//D78B], és
HU 225 488 Β1 a pD78A-E/DelMut12-vel a mutáns D78A-E/DelMut12 vírust eredményezve [klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//D78B], illetve a P2-törzs genomiális B-szegmensét tartalmazó megfelelő mutánsok a pP2B-vel (Mut1//P2B, Mut2//P2B, Mut12//P2B).
2. példa
A) Az IBDV D78/E-variáns (BU) és (TC) mutánsainak a tulajdonságai
Meghatároztuk a szakirodalomban korábban Mundt (1999, mint fent) által leírt két IBDV-mutáns D78/E-variáns (BU) (D78A-E/Del névvel jelölve) és D78/E-variáns (TC) (D78A-E/Del-QH-AT-SR névvel jelölve) - biológiai tulajdonságait.
Anyagok és eljárások
A különféle oltóanyagok hatását próbafertőző vírus (virulens IBDV E-variáns) beadására kialakult ellenálló képesség mérésével határoztuk meg, 14 nappal az oltás után. A vizsgált oltóanyagok a D78/E-variáns (BU) és (TC), valamint a kereskedelmi forgalomban kapható klasszikus D78 Nobilis oltóanyagtörzs (Intervet International BV, the Netherlands) voltak. A (BU) oltóanyagot (10(ii) * * * * * * * * 20 EID50/állat) a szemcsepp úton alkalmaztuk 2 hetes korban. A (TC) oltóanyagot (105·5 EID50/állat szemcsepp úton vagy 103·5 EID50/állat intramuszkuláris injekcióval) 2 hetes korban alkalmaztuk. A kereskedelmi forgalomban kapható klasszikus D78 Nobilis oltóanyagottörzset (103·3 EID50/állat) a szemcsepp úton alkalmaztuk 2 hetes korban. Csoportonként 5 állatban vizs10 gáltuk az IBDV és mikroszkopikus sérülések jelenlétét a Fabricius-burzában, 3, 7, 10 és 13 nappal az oltás után, valamint 3 nappal a próbafertőzést követően.
A próbafertőzés elleni védelmet - ebben és az ezt követő kísérletekben - a következők alapján határoztuk meg: i) akut sérülések 3 nappal a próbafertőzés után, ii) vírusantigén a burzában 3 nappal a próbafertőzés után, és iii) 5-ös fokú sérülés (100%-os limfocitakimerülés).
Eredmények (i) Mikroszkopikus sérülések átlagos foka a burzában 3, 7, 10 és 13 nappal az oltás, valamint 3 és 10 nappal a próbafertőzés után
Mint ahogy a 2. táblázatból láthatjuk, a (BU) IBDV-törzs teljes limfocitakimerülést okozott már 7 nappal az oltás után. A TC-adaptált IBDV-törzs nem okozott sérüléseket az oltás után. A kereskedelmi forgalomban kapható oltóanyag gyengétől közepesig terjedő fokú sérüléseket indukál. További adatok azt mutatták, hogy a D78/E-variáns (BU) mutánssal vagy a D78-cal oltott állatok védettek a próbafertőzéssel szemben. Azonban a D78/E-variáns (TC) mutáns - a szemen keresztül és intramuszkulárisan adva - (különböző mértékű) akut sérüléseket okozott a próbafertőzés után, azt mutatva, hogy csak gyenge és részleges védettség alakult ki.
A kontrollállatok nem lettek védettek, mivel minden állat akut sérüléseket és 100%-os limfocitakimerülést mutatott 3 nappal a próbafertőzés után.
2. táblázat
Burzasérülések átlagos foka
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | |||||
| Vírus | 3 | 7 | 10 | 13 | 3 | 10 |
| D78/E var. (BU) | 3,2 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 4,4C | 4,7 |
| D78/E var. (TC) (oc.) | 0 | 0 | 0 | 0 | 3,0A | 4,1 |
| D78/E var. (TC) (im.) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1,0A | 2,8 |
| D78 Nobilis | 0,2 | 2,2 | 2,0 | 1,8 | 2,8C | 1,9 |
| Kontroll | 5,0A |
(oc.)=szemen át; (im.)=intramuszkuláris; C=krónikus sérülések; A=akut sérülések.
(ii) IBDV kimutatása enzimes immunológiai vizsgálati 50 eljárással a burzában 3, 7, 10 és 13 nappal az oltás, valamint 3 nappal a próbafertőzés után
Mint ahogy a 3. táblázatból láthatjuk, a D78/E-variáns (BU) vírus izolálható volt 3 és 7 nappal az oltás után. Nem lehetett vírust kimutatni 3 nappal a próbatér- 55 tőzés után, ami azt mutatja, hogy az állatok védettek lettek a próbafertőzés ellen. Ezzel ellentétben a szövettenyészet-adaptált D78/E-variáns (TC) törzzsel oltott állatokból nem tudtuk az oltóanyagvírust izolálni. Három nappal a próbafertőzés után az 5 szemen keresztül im- 60 munizált állat közül 4 hordozta a vírust. Három nappal a próbafertőzés után az 5 intramuszkulárisan oltott állat közül 2 hordozta a vírust. Ez azt mutatja, hogy a szemen keresztül, illetve izomba oltással immunizált állatok sorrendben 20, illetve 60%-ban lettek védettek. A kereskedelmi forgalomban kapható oltóanyag vírusa izolálható volt 3, 7 és 10 nappal az oltás után. Nem lehetett vírust kimutatni 3 nappal a próbafertőzés után, ami azt mutatja, hogy az állatok védettek lettek a próbafertőzés ellen.
Minden kontrollállat hordozta a vírusantigént a burzában.
HU 225 488 Β1
3. táblázat
IBDV jelenléte a Fabricius-burzában
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | |||||
| Vírus | 3 | 7 | 10 | 13 | 3 | % védettség |
| D78/E var. (BU) | 4/5* | 5/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| D78/E var. (TC) (oc.) | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 4/5 | 20 |
| D78/E var. (TC) (im.) | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 2/5 | 60 |
| D78 Nobilis | 1/5 | 2/5 | 1/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| Kontroll | 8/8 | 0 |
(oc.)=szemen át; (im.)=intramuszkuláris; ‘vírusantigént hordozó pozitív állatok száma per az összes vizsgált állat száma.
B) A széles spektrumú klasszikus/E-variáns (TC)
IBDV-mutáns tulajdonságai
Anyagok és eljárások
IBDV-oltóanyagok előállítása
Elsődleges csirke embrionális kötőszöveti (CEF) sejteket készítettünk 2x106/ml végkoncentrációban. A sejteket 5% magzati borjúszérumot tartalmazó Eagles minimál/esszenciális tápközegben tenyésztettük. Ezen szuszpenzió 15 ml-éhez 0,1 ml klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (=Mut12) IBDV-törzset adtunk annak 2. átoltásából. 3-6 nap magas páratartalmú 37 °C-os inkubáció után a felülúszót (3. átoltás) levettük az 1. állatkísérlet végrehajtásához. A felülúszót úgy hígítottuk, hogy 1O3’°, 1O4·0 vagy 1O5·0 TCID50/állat oltóanyagdózist eredményezzen.
A 2. állatkísérlethez a klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) IBDV-törzset tovább tisztítottuk, plakktisztítást hajtottunk végre háromszor egymás után. Ezután a vírust a fent leírt módon tenyésztettük. A kilencedik átoltást (P9) alkalmaztuk a 2. állatkísérletben, valamint a kereskedelmi forgalomban kapható klasszikus D78 Nobilis oltóanyagtörzset (Intervet International BV, the Netherlands).
1. kísérlet
Állatkísérletet hajtottunk végre a széles spektrumú klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) IBDV-oltóanyagtörzs biztonságosságának és hatékonyságának tanulmányozására 14 napos SPF madarakban. Az oltóanyagvírust a szemcseppentős vagy intramuszkuláris úton adtuk be. Az oltás után IBDV-antigént tartalmazó burzákból újra izoláltuk a vírust CEF-en. A széles spektrumú klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) oltóanyag hatékonyságát az oltás után 14 nappal - virulens E-variáns IBDV-törzzsel - történő próbafertőzéssel szembeni szerológiai reakció és ellenálló képesség mérésével állapítottuk meg. Csoportonként 5-15 állat Fabricius-burzájában található IBDV és mikroszkopikus sérülések jelenlétét vizsgáltuk 3 és 14 nappal az oltás, valamint 3 és 10 nappal a próbafertőzés után. Meghatároztuk a próbafertőzés elleni védettséget. Ezenkívül a klasszikus és E-variáns vírusok elleni szerológiai reakciót VN-teszttel határoztuk meg, 14 nappal az oltás után.
2. kísértet
Egy második hatásossági kísérletben az oltóanyag hatását a klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) Gumboro oltóanyagtörzs szemcseppentős úton való oltása után 14 nappal történő próbafertőzéssel szembeni szerológiai reakció és ellenálló képesség mérésével állapítottuk meg.
napos csirkéket 3 csoportba osztottunk. Egy csoportot a klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (P9) mutánssal, egy csoportot a kiindulási klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (P3)-mal, és az utolsó csoportot a kereskedelmi forgalomban kapható klasszikus D78 Nobilis Gumboro oltóanyaggal oltottunk be.
Az oltás után 3, 7 és 14 nappal csoportonként 3-15 csirkének a burzáját kivettük. A burzákat sérülések és a vírusantigén jelenlétére vizsgáltuk. 14 nappal az oltás után négy - azonos korú és eredetű - SPF csirkét adtunk minden csoporthoz. Minden állattól vért vettünk, és az állatokat a szemcseppentős úton próbafertőztük virulens F52/70 IBDV-törzzsel. 10 napon keresztül rögzítettük a klinikai tüneteket és a halálozást. Három nappal a próbafertőzés után izoláltuk a burzát csoportonként 5 állatból. Megvizsgáltuk a burzákat sérülések és a vírusantigén jelenlétére. 10 nappal a próbafertőzés után a túlélő állatok burzáját mikroszkopikus sérülések jelenlétére vizsgáltuk.
Eredmények
1. kísértet (i) Mikroszkopikus sérülések átlagos foka a burzában 3 és 14 nappal az oltás, valamint 3 és 10 nappal a próbafertőzés után.
Az eredményeket a 4. táblázatban mutatjuk be. Az oltatlan kontrollállatok nem voltak védettek, a próbafertőző vírus akut sérüléseket és teljes limfocitakimerülést okozott 3 és 10 nappal a próbafertőzés után. Ezzel ellentétben a széles spektrumú klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) oltóanyag az oltás után csak gyengétől közepesig terjedő fokú sérüléseket okozott.
HU 225 488 Β1
Ezenkívül 3 nappal a próbafertőzés után csak gyengétől közepesig terjedő fokú krónikus sérüléseket figyeltünk meg, ami azt mutatja, hogy az állatok védettek lettek a virulens E-variáns IBDV-próbafertőzéssel szemben. 10 nappal a próbafertőzés után a sérülések mértéke tovább csökkent.
4. táblázat
Burzasérülések átlagos foka klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (P3) hatására
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | ||||
| Beadási út | Dózis | 3 | 14 | 3 | 10 |
| ED. | 2,7 | 0 | 3,6 | 3,0C | 2,3 |
| ED. | 3,7 | 2,8 | 3,4 | 4,0C | 1,5 |
| ED. | 4,7 | 2,6 | 2,8 | 3,0C | 1,9 |
| ΙΜ. | 2,5 | 0 | 2,2 | 1,6C | 1,4 |
| IM. | 3,5 | 0 | 3,2 | 1,0C | 1,0 |
| IM. | 4,5 | 0,8 | 1,8 | 2,0C | 1,3 |
| Kontroll | 5,0A | 5,0 |
(ED.)=szemen át; (IM.)=intramuszkuláris; C=krónikus sérülések; A=akut sérülések.
(ii) IBDV elleni szerológiai reakció
Klasszikus és E-variáns törzseket alkalmaztunk mint VN-IBDV-vírusok. Mint ahogy az 5. táblázatból látható, a klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (P3) jó szerológiai reakciót adott mind a klasszikus, mind az E-variánsú IBDV-törzsekkel, mutatva a vírus széles spektrumú természetét.
5. táblázat
Szerológiai reakció 14 nappal az oltás után (A VN-titer a hígítás 2-alapú logaritmusában kifejezve)
| Klasszikus VN vírus | E-variáns VN vírus | ||
| Beadási út | Dózis | ||
| ED. | 2,7 | 8,2±1,3 | 8,3±1,1 |
| ED. | 3,7 | 8,0±1,4 | 7,7±1,5 |
| ED. | 4,7 | 7,6±1,4 | 8,0±1,7 |
| IM. | 2,5 | 7,6±1,1 | 7,4±1,8 |
| IM. | 3,5 | 7,5±1,7 | 7,2±2,0 |
| IM. | 4,5 | 8,1 ±0,9 | 7,1±1,4 |
| Kontroll | <4,0±0,0 | <4,0±0,0 |
(ED.)=szemen át; (IM.)=intramuszkuláris.
(iii) IBDV kimutatása enzimes immunológiai vizsgálati eljárással a burzában 3 és 14 nappal az oltás, valamint 3 nappal a próbafertőzés után
Mint ahogy a 6. táblázatból láthatjuk, a vírus izolálható volt 3 nappal áz oltás után a magasabb dózissal oltott állatokban. Egyetlen oltott állatban sem lehetett vírust kimutatni 3 nappal a próbafertőzés után, ami azt mutatja, hogy minden állat védett lett a próbafertőzés ellen. Ezzel ellentétben minden kontrollállat hordozta a vírusantigént a burzában a próbafertőzés után.
6. táblázat
IBDV jelenléte a Fabricius-burzában
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | ||||
| Beadási út | Dózis | 3 | 14 | 3 | % védettség |
| ED. | 2,7 | 0/5* | 1/5 | 0/5 | 100 |
| ED. | 3,7 | 4/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
HU 225 488 Β1
6. táblázat (folytatás)
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | ||||
| Beadási út | Dózis | 3 | 14 | 3 | % védettség |
| ED. | 4,7 | 3/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| IM. | 2,5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| IM. | 3,5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| IM. | 4,5 | 2/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| Kontroll | 12/12 | 0 |
(ED.)=szemen át; (IM.)=intramuszkuláris; ‘vírusantigént hordozó pozitív állatok száma per az összes vizsgált állat száma.
2. kísérlet (i) Mikroszkopikus sérülések átlagos foka a burzában 3 és 14 nappal az oltás, valamint 3 és 10 nappal a próbafertőzés után
Mint ahogy a 7. táblázatból láthatjuk, az oltatlan 20 kontrollállatok nem voltak védettek, és a próbafertőző vírus teljes limfocitakimerülést okozott 3 és 10 nappal a próbafertőzés után, és akut sérüléseket eredményezett. Ezzel ellentétben a széles spektrumú klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) oltóanyag az ol- 25 tás után csak gyengétől közepesig terjedő fokú sérüléseket okozott. Ezenkívül 3 nappal a próbafertőzés után gyengétől közepesig terjedő fokú krónikus sérüléseket figyeltünk meg, ami azt mutatja, hogy az állatok védettek lettek a virulens klasszikus F52/70 IBDV-törzzsel történő próbafertőzéssel szemen. A klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (P9) mutánssal oltott csoportban egy állat súlyos akut sérüléseket mutatott 3 nappal a próbafertőzés után, jelezve, hogy nem védett. 10 nappal a próbafertőzés után a sérülések mértéke a klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) mutánssal oltott állatokban tovább csökkent, és mind gyengétől közepesig terjedő fokú volt, jelezve, hogy a vizsgált állatok mindegyike védett.
7. táblázat
Burzasérülések átlagos foka Nobilis Gumboro D78 és klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) törzs (3. és 9. átoltás) hatására
| Védettség | Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | ||||
| Oltóanyag | Dózis | (%) | 3 | 14 | 3 | 10 |
| 9. átoltás | 3,6 | 95 | 2,8 | 4,3 | 3,3 | 1,9 |
| 3. átoltás | 4,1 | 100 | 2,6 | 4,0 | 3,5 | 2,3 |
| Nobilis D78 | 5,1 | 74 | 0 | 3,3 | 2,5 | 2,5 |
| Kontroll | 0 | 5,0 | 5,0 |
(ii) IBDV elleni szerológiai reakció
Klasszikus és E-variáns törzseket alkalmaztunk mint VN-IBDV-vírusok. Mint ahogy a 8. táblázatból láthatjuk, a klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr) (P3 és P9) jó szerológiai reakciót adott mind a klasszikus, mind az E-variánsú IBDV-törzsekkel, mutatva a ví45 rus széles spektrumú természetét. Ezzel ellentétben a D78-cal oltott (dózis 5,1, 10-es alapú logaritmusban kifejezve) csoport átlagos szerológiai reakciót adott klasszikus és E-variáns vírus ellen, sorrendben 8,8 (Iog2) és 5,9 (Iog2) értékkel, világosan mutatva az oltóanyag klasszikus természetét.
8. táblázat
Szerológiai reakció 14 nappal az oltás után
| Klasszikus VN vírus | E-variáns VN vírus | ||
| Oltóanyag | Dózis | ||
| 9. átoltás | 3,6 | 7,3±1,8 | 7,3±1,5 |
| 3. átoltás | 4,1 | 8,4±1,7 | 7,8±1,8 |
HU 225 488 Β1
8. táblázat (folytatás)
| Klasszikus VN vírus | E-variáns VN vírus | ||
| Oltóanyag | Dózis | ||
| Nobilis D78 | 5,1 | 8,8±3,4 | 5,9±1,8 |
| Kontroll | <4,0±0,0 | <4,0±0,0 |
(A VN-titer a hígítás 2-alapú logaritmusában kifejezve.) (iii) IBDV kimutatása enzimes immunológiai vizsgálati eljárással a burzában 3, 7 és 14 nappal az oltás, valamint 3 nappal a próbafertőzés után
Mint ahogy a 9. táblázatból látható, a vírus izolálható 3 nappal az oltás után a magasabb dózissal oltott állatokban. Egyetlen klasszikus/E-variáns (TC)254(Gly)/270(Thr) (P9)-cel oltott állatban lehetett csak vírust kimutatni 3 nappal a próbafertőzés után, ami azt mutatja, hogy ezen állat nem lett védett a próbafertőzés ellen. Az összes többi állat védett lett a próbafertőzés ellen.
9. táblázat
IBDV jelenléte a Fabricius-burzában
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | |||||
| Oltóanyag | Dózis | 3 | 7 | 14 | 3 | % védettség |
| 9. átoltás | 3,6 | 0/5* | 2/3 | 0/3 | 1/4 | 75 |
| 3. átoltás | 4,1 | 0/5 | 2/3 | 0/3 | 0/4 | 100 |
| Nobilis D78 | 5,1 | 1/5 | 2/3 | 1/3 | 0/4 | 100 |
| Kontroll | 9/9 | 0 |
‘Vírusantigént hordozó pozitív állatok száma per az összes vizsgált állat száma.
3. példa
A széles spektrumú IBDV-mutáns biztonságossága és hatékonysága Anyagok és eljárások
Egy további állatkísérletet hajtottunk végre különböző széles spektrumú vírusoltóanyag-törzsek biztonságosságának és hatékonyságának vizsgálatára. A széles spektrumú vírustörzsek a D78 vagy P2 Gumboro vírustörzsből származó B-szegmens tekintetében különböztek. Ezenkívül olyan Gumboro törzseket is vizsgáltunk, amelyek A-szegmensében a 2 változtatás (a 254. és 270. hely) közül csak az egyik volt jelen. Ebben a kísérletben az oltóanyag hatását Gumboro oltóanyag beadása után 14 nappal - F52/70 IBDV-törzzsel - történő próbafertőzéssel szembeni szerológiai reakció és ellenálló képesség mérésével állapítottuk meg. A vizsgált oltóanyagok a széles spektrumú oltóanyagvírus-törzsek voltak:
klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//D78B klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//P2B klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//D78B klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//P2B klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//D78B klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//P2B A különböző széles spektrumú oltóanyagokat 103’4 * * * és 104·8 TCIDS0/állat közötti dózisban - a szemcseppentős úton adtuk be 3 hetes korban. Csoportonként 5 állat Fabricius-burzájában található IBDV és mikroszkopikus sérülések jelenlétét vizsgáltuk 3 és 14 nappal az oltás, valamint 3 és/vagy 10 nappal a pró40 bafertőzés után. Meghatároztuk a próbafertőzés elleni védettséget. Ezenkívül a klasszikus és E-variáns vírusok elleni szerológiai reakciót VN-teszttel határoztuk meg, 14 nappal az oltás után.
Eredmények (i) Mikroszkopikus sérülések átlagos foka és IBDV-antigén kimutatása a burzában
Az eredményeket a 10. és 11. táblázatban mutatjuk be. Minden IBDV-mutáns csökkent virulenciát mutat. A D78-törzs B-szegmensét tartalmazó mutánsok köze50 pes sérüléseket okoznak, míg a P2-törzs B-szegmensét tartalmazó mutánsok legyengített tulajdonságai még enyhébb hatást mutatnak. A klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//D78B 40%-os védettséget nyújtott. A többi törzs teljes védettséget okozott 3 nap55 pal a próbafertőzés után (csak krónikus sérülések voltak jelen), a klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//P2B kivételével, amely nem volt hatásos a szemcseppentős úton beadva. Az összes többi csoport gyengétől közepesig terjedő fokú sérüléseket okozott 10 nappal a pró60 bafertőzés után.
HU 225 488 Β1
10. táblázat
Burzasérülések átlagos foka
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | |||
| Vírus | 3 | 14 | 3 | 10 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//D78B | 0,0 | 3,4 | 3.6A/C | 1,5 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//D78B | 0,0 | 3,0 | 3,8C | 2,7 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//D78B | 0,4 | 4,2 | 4,6C | 3,0 |
| Klasszikus/E variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//P2B | 0,8 | 2,0 | 1,4C | 1,5 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//P2B | 0,8 | 2,0 | 2,6C | 1,6 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//P2B | 0,0 | 0,0 | 5,0A | 5,0 |
| Kontroll | NA | 0,0 | 5,0A | 5,0 |
C=krónikus sérülések; A=akut sérülések; NA=nincs adat.
11. táblázat
IBDV jelenléte a Fabricius-burzában
| Napok oltás után | Napok próbafertőzés után | |||
| Vírus | 3 | 14 | 3 | % védettség |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//D78B | 0/5* | 0/5 | 3/5 | 40 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//D78B | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//D78B | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| Klasszikus/E variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//P2B | 2/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//P2B | 1/5 | 0/5 | 0/5 | 100 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//P2B | 0/5 | 0/5 | 8/8 | 0 |
| Kontroll | NA | NA | 13/13 | 0 |
‘Vírusantigént hordozó pozitív állatok száma per az összes vizsgált állat száma; NA=nincs adat.
(ii) IBDV elleni szerológiai reakció
Klasszikus és E-variáns törzseket alkalmaztunk 40 mint VN-IBDV-vírusok. A 12. táblázatból láthatjuk, hogy az IBDV-oltóanyagtörzsek jó szerológiai reakciót adtak mind a klasszikus, mind az E-variánsú IBDV-törzsekkel. A klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//P2B mutáns nem működött a szemcseppentős beadási út alkalmazásával.
12. táblázat
Szerológiai reakció 14 nappal az oltás után (A VN-titer a hígítás 2-alapú logaritmusában kifejezve.) x=25-ből 4 nem reagált, y=25-ből 1 nem reagált, z=25-ből 2 nem reagált
| Vírus | Klasszikus VN vírus | E-variáns VN vírus |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//D78B | 7,9±2,2X | 6,5±1,9X |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//D78B | 8,0±1,5Y | 8,2±1,4 |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//D78B | 9,0±1,6Y | 8,8±1,4 |
| Klasszikus/E variáns (TC)-254(Gly)/270(Thr)//P2B | 7,7±1,6Y | 6,7±1,5Z |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-254(Gly)//P2B | 7,5+1,82 | 6,8±1,7Y |
| Klasszikus/E-variáns (TC)-270(Thr)//P2B | <4,0±0,0 | <4,0±0,0 |
| Kontroll | <4,0±0,0 | <4,0±0,0 |
HU 225 488 Β1 <z alábbiakban röviden ismertetjük a leíráshoz tarábrákat:
iz1. ábrán az IBDV A-szegmensének kiméra cDNS-klónjainak a szerkezetét mutatjuk be. Az ábra felső részén az IBDV A-szegmensének genomiális szerveződésének a térképét láthatjuk. A D78törzs A-szegmensének kódolórégióit üres mezők mutatják. Az E/Delszekvenciákat árnyékolt mezők jelölik. A mutáltatott aminosavak helyét egybetűs kód jelöli. A nukleotidok és az aminosavak számozása a P2-törzs publikált szekvenciájával (Mundt és Müller, 1995, mint fent) egyezik meg. nt, nukleotid
2. ábrán az IBDV A-szegmensének kiméra cDNS-klónjainak a szerkezetét mutatjuk be. Az ábra felső részén az IBDV A-szegmensének genomiális szerveződésének a térképét láthatjuk. A pD78AE/DelMut12 kiméra cDNS-klón A-szeg5 mensének kódolórégióit üres mezők mutatják. A pD78A-E/Del-QH-AT (Mundt, 1999, mint fent) kiméra cDNSklón szekvenciákat fekete mezők jelölik. A klónozáshoz alkalmazott restrikciós enzimeket és hasítási helyeiket is feltüntetjük. A mutáltatott aminosavak helyét egybetűs kóddal jelöljük. A nukleotidok és az aminosavak számozása a P2-törzs publikált szekvenciájával (Mundt és Müller, 1995, mint fent) egyezik meg. nt, nukleotid
SZEKVENCIALISTA <210> 1 <211> 1078 <212> DNS <213> Fertőző burzális betegség vírusa <220>
<221 > CDS <222> (1)...(1077) <223> Az E/Del A-szegmensének 647-1725 nukleotidjaival azonos <400> 1
| tat Tyr 1 | gat Asp | ctt Leu | ggg Gly | tat Tyr 5 | gtg Val | agg Arg | ctt Leu | ggt Gly | gac Asp 10 | CCC Pro | ata Ile | CCC Pro | get Alá | ata Ile 15 | ggg Gly | 48 |
| ctt | gac | cca | aaa | atg | gta | gca | aca | tgt | gac | agc | agt | gac | agg | ccc | aga | 96 |
| Leu | Asp | Pro | Lys | Met | Val | Alá | Thr | Cys | Asp | Ser | Ser | Asp | Arg | Pro | Arg | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| gtc | tac | acc | ata | act | gca | gcc | gat | aat | tac | caa | ttc | tea | tea | cag | tac | 144 |
| Val | Tyr | Thr | Ile | Thr | Alá | Alá | Asp | Asn | Tyr | Gin | Phe | Ser | Ser | Gin | Tyr | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| caa | aca | ggt | ggg | gta | aca | atc | aca | ctg | ttc | tea | gcc | aac | att | gat | gcc | 192 |
| Gin | Thr | Gly | Gly | Val | Thr | Ile | Thr | Leu | Phe | Ser | Alá | Asn | Ile | Asp | Alá | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| atc | aca | agt | ctc | agc | gtt | ggg | gga | gag | ctc | gtg | ttc | aaa | aca | agc | gtc | 240 |
| Ile | Thr | Ser | Leu | Ser | Val | Gly | Gly | Glu | Leu | Val | Phe | Lys | Thr | Ser | Val | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| caa | agc | ctt | gta | ctg | ggc | gcc | acc | atc | tac | ctt | ata | ggc | ttt | gat | ggg | 288 |
| Gin | Ser | Leu | Val | Leu | Gly | Alá | Thr | Ile | Tyr | Leu | Ile | Gly | Phe | Asp | Gly | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| act | gcg | gta | atc | acc | aga | get | gtg | gcc | gca | aac | aat | ggg | ctg | acg | gcc | 336 |
| Thr | Alá | Val | Ile | Thr | Arg | Alá | Val | Alá | Alá | Asn | Asn | Gly | Leu | Thr | Alá | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| ggc | atc | gac | aat | ctt | atg | cca | ttc | aat | ctt | gtg | att | cca | acc | aat | gag | 384 |
| Gly | Ile | Asp | Asn | Leu | Met | Pro | Phe | Asn | Leu | Val | Ile | Pro | Thr | Asn | Glu |
115 120 125
HU 225 488 Β1 ata acc cag cca atc aca tcc atc aaa ctg gag ata gtg acc tcc aaa 432
Ile Thr Gin Pro Ile Thr Ser Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys
130 135 140 agt gat ggt cag gca ggg gaa cag atg tea tgg tcg gca agt ggg agc 480
Ser Asp Gly Gin Alá Gly Glu Gin Met Ser Trp Ser Alá Ser Gly Ser
145 150 155 160 cta gca gtg acg atc cat ggt ggc aac tat cca gga gcc ctc cgt ccc 528
Leu Alá Val Thr Ile His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Alá Leu Arg Pro
165 170 175 gtc aca cta gta gcc tac gaa aga gtg gca aca gga tet gtc gtt acg 576
Val Thr Leu Val Alá Tyr Glu Arg Val Alá Thr Gly Ser Val Val Thr
180 185 190 gtc get ggg gtg agc aac ttc gag ctg atc cca aat cet gaa cta gca 624
Val Alá Gly Val Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Alá
195 200 205 aag aac ctg gtt aca gaa tac ggc cga ttt gac cca gga gcc atg aac 672
Lys Asn Leu Val Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Alá Met Asn
210 215 220 tac acg aaa ttg ata ctg agt gag agg gac cac ctt ggc atc aag acc 720
Tyr Thr Lys Leu Ile Leu Ser Glu Arg Asp His Leu Gly Ile Lys Thr
225 230 235 240 gtc tgg cca aca agg gag tac act gac ttt cgt gag tac ttc atg gag 768
Val Trp Pro Thr Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu
245 250 255
| gtg Val | gcc Alá | gac Asp | ctc Leu 260 | aac Asn | tet Ser | ccc Pro | ctg Leu | aag Lys 265 | att Ile | gca Alá | gga Gly | gca Alá | ttt Phe 270 | ggc Gly | ttc Phe | 816 |
| aaa | gac | ata | atc | egg | gcc | ata | agg | agg | ata | get | gta | ccg | gtg | gtc | tet | 864 |
| Lys | Asp | Ile | Ile | Arg | Alá | Ile | Arg | Arg | Ile | Alá | Val | Pro | Val | Val | Ser | |
| 275 | 280 | 285 | ||||||||||||||
| aca | ttg | ttc | cca | cet | gcc | get | cet | cta | gcc | cat | gca | att | ggg | gaa | ggt | 912 |
| Thr | Leu | Phe | Pro | Pro | Alá | Alá | Pro | Leu | Alá | His | Alá | Ile | Gly | Glu | Gly | |
| 290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
| gta | gac | tac | cta | ctg | ggc | gat | gag | gca | cag | get | get | tea | gga | acc | get | 960 |
| Val | Asp | Tyr | Leu | Leu | Gly | Asp | Glu | Alá | Gin | Alá | Alá | Ser | Gly | Thr | Alá | |
| 305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||||
| cga | gcc | gcg | tea | gga | aaa | gca | agg | get | gcc | tea | ggc | ege | ata | agg | cag | 1008 |
| Arg | Alá | Alá | Ser | Gly | Lys | Alá | Arg | Alá | Alá | Ser | Gly | Arg | Ile | Arg | Gin | |
| 325 | 330 | 335 | ||||||||||||||
| ctg | act | ctc | gcc | gcc | gac | aag | ggg | tac | gag | gta | gtc | gcg | aat | cta | ttc | 1056 |
| Leu | Thr | Leu | Alá | Alá | Asp | Lys | Gly | Tyr | Glu | Val | Val | Alá | Asn | Leu | Phe | |
| 340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
| cag | gtg | ccc | cag | aat | ccc | gta | g | 1078 | ||||||||
| Gin | Val | Pro | Gin | Asn | Pro | Val |
355
HU 225 488 Β1 <210>2 <211 >359 <212> PRT <213> Fertőző burzális betegség vírusa
| <400> 2 | ||||||||||||||
| Tyr 1 | Asp | Leu | Gly Tyr 5 | Val | Arg | Leu | Gly | Asp 10 | Pro | Ile | Pro | Alá | Ile 15 | Gly |
| Leu | Asp | Pro | Lys Met 20 | Val | Alá | Thr | Cys 25 | Asp | Ser | Ser | Asp | Arg 30 | Pro | Arg |
| Val | Tyr | Thr 35 | Ile Thr | Alá | Alá | Asp 40 | Asn | Tyr | Gin | Phe | Ser 45 | Ser | Gin | Tyr |
| Gin | Thr 50 | Gly | Gly Val | Thr | Ile 55 | Thr | Leu | Phe | Ser | Alá 60 | Asn | Ile | Asp | Alá |
| Ile 65 | Thr | Ser | Leu Ser | Val 70 | Gly | Gly | Glu | Leu | Val 75 | Phe | Lys | Thr | Ser | Val 80 |
| Gin | Ser | Leu | Val Leu 85 | Gly | Alá | Thr | Ile | Tyr 90 | Leu | Ile | Gly | Phe | Asp 95 | Gly |
| Thr | Alá | Val | Ile Thr 100 | Arg | Alá | Val | Alá 105 | Alá | Asn | Asn | Gly | Leu 110 | Thr | Alá |
| Gly | Ile | Asp 115 | Asn Leu | Met | Pro | Phe 120 | Asn | Leu | Val | Ile | Pro 125 | Thr | Asn | Glu |
| Ile | Thr 130 | Gin | Pro Ile | Thr | Ser 135 | Ile | Lys | Leu | Glu | Ile 140 | Val | Thr | Ser | Lys |
| Ser 145 | Asp | Gly | Gin Alá | Gly 150 | Glu | Gin | Met | Ser | Trp 155 | Ser | Alá | Ser | Gly | Ser 160 |
| Leu | Alá | Val | Thr Ile 165 | His | Gly | Gly | Asn | Tyr 170 | Pro | Gly | Alá | Leu | Arg 175 | Pro |
| Val | Thr | Leu | Val Alá 180 | Tyr | Glu | Arg | Val 185 | Alá | Thr | Gly | Ser | Val 190 | Val | Thr |
| Val | Alá | Gly 195 | Val Ser | Asn | Phe | Glu 200 | Leu | Ile | Pro | Asn | Pro 205 | Glu | Leu | Alá |
| Lys | Asn 210 | Leu | Val Thr | Glu | Tyr 215 | Gly | Arg | Phe | Asp | Pro 220 | Gly | Alá | Met | Asn |
| Tyr 225 | Thr | Lys | Leu Ile | Leu 230 | Ser | Glu | Arg | Asp | His 235 | Leu | Gly | Ile | Lys | Thr 240 |
| Val | Trp | Pro | Thr Arg 245 | Glu | Tyr | Thr | Asp | Phe 250 | Arg | Glu | Tyr | Phe | Met 255 | Glu |
| Val | Alá | Asp | Leu Asn 260 | Ser | Pro | Leu | Lys 265 | Ile | Alá | Gly | Alá | Phe 270 | Gly | Phe |
| Lys | Asp | Ile 275 | Ile Arg | Alá | Ile | Arg 280 | Arg | Ile | Alá | Val | Pro 285 | Val | Val | Ser |
HU 225 488 Β1
| Thr | Leu 290 | Phe | Pro | Pro | Alá | Alá 295 | Pro | Leu | Alá | His | Alá 300 | Ile | Gly | Glu | Gly |
| Val | Asp | Tyr | Leu | Leu | Gly | Asp | Glu | Alá | Gin | Alá | Alá | Ser | Gly | Thr | Alá |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Arg | Alá | Alá | Ser | Gly | Lys | Alá | Arg | Alá | Alá | Ser | Gly | Arg | Ile | Arg | Gin |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Alá | Alá | Asp | Lys | Gly | Tyr | Glu | Val | Val | Alá | Asn | Leu | Phe |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Gin | Val | Pro | Gin | Asn | Pro | Val |
355 <210>3 <211> 101 <212> DNS <213> Fertőző burzális betegség vírusa <220>
<221 > CDS <222> (3)...(101) <223> D78 VP2 kódolórégiója, 884-985 nukleotidok <400> 3
| te | cac | ggc | ett gta ctg | ggc gcc | acc | atc | tac ctc | ata | ggc | ttt | gat | 47 |
| His | Gly | Leu Val Leu | Gly Alá | Thr | Ile | Tyr Leu | Ile | Gly | Phe | Asp | ||
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
| ggg | aca | acg | gta atc acc | agg get | gtg | gcc | gca aac | aat | ggg | ctg | acg | 95 |
| Gly | Thr | Thr | Val Ile Thr | Arg Alá | Val | Alá | Alá Asn | Asn | Gly | Leu | Thr | |
| 20 | 25 | 30 |
acc ggc 101
Thr Gly <210>4 <211 >33 <212> PRT <213> Fertőző burzális betegség vírusa <400> 4
| His | Gly | Leu | Val | Leu | Gly | Alá | Thr | Ile | Tyr | Leu | Ile | Gly | Phe | Asp | Gly |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Thr | Thr | Val | Ile | Thr | Arg | Alá | Val | Alá | Alá | Asn | Asn | Gly | Leu | Thr | Thr |
25 30
Gly <210>5 <211 >45 <212> DNS <213> Mesterséges szekvencia <220>
<223> Mesterséges szekvencia leírása: oligonukleotid láncindító <400> 5 gccggtcgtc agcccattgt ttgcggccac agccctggtg attac 45 <210>6 <211 >60
HU 225 488 Β1 <212> DNS <213> Mesterséges szekvencia <220>
<223> Mesterséges szekvencia leírása: oligonukleotid láncindító <400> 6 taccgttgtc ccatcaaagc ctatgaggta gatggtggcg cccagtacaa ggccgtggac 60
Claims (7)
1. Oltóanyag baromfi fertőző burzális betegség vírus (IBDV) fertőzés által okozott betegséggel szembeni 15 megvédésében való alkalmazásra, amely oltóanyag olyan IBDV-mutánst tartalmaz, amely az E-variánsa vírusgenom A-szegmensében lévő VP2-fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz, valamint képes csirke embrionális kötőszöveti (CEF) szövettenyészetet meg- 20 fertőzni és abban replikálódni, és amely mutáns az E-variáns VP2-fehérjét kódoló régiójában egy vagy több mutációt tartalmaz, miáltal (i) a 254. aminosav kodonja glicint kódol és/vagy (ii) a 270. aminosav kodonja treonint kódol, 25 gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy oldószerrel együtt.
2. Az 1. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az E-variáns VP2-fehérje kódolórégiójában a 254. aminosav kodonja GGC és/vagy a 270. aminosav kodonja ACG.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az E-variáns VP2-fehérjének a 253-284 fragmensét kódoló régiót a D78 IBDV-törzs megfelelő kódolórégiója helyettesíti.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a mutáns A-szegmensének a gerince egy klasszikus altípusba tartozó IBDV-ből származik, előnyösen a D78 jelű IBDV-törzsből.
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a mutáns vírusgenom B-szegmense egy klasszikus IBDV-törzsből származik, előnyösen a D78 jelű vagy a P2 jelű IBDV-törzsből.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben az IBDV-mutáns élő alakban van jelen.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyikében definiált IBDV-mutáns alkalmazása tömeges alkalmazási úton beadható oltóanyag gyártására.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP00202430 | 2000-07-07 | ||
| EP01201064 | 2001-03-22 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0102823D0 HU0102823D0 (en) | 2001-09-28 |
| HUP0102823A2 HUP0102823A2 (hu) | 2002-04-29 |
| HUP0102823A3 HUP0102823A3 (en) | 2005-06-28 |
| HU225488B1 true HU225488B1 (en) | 2006-12-28 |
Family
ID=26072471
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0102823A HU225488B1 (en) | 2000-07-07 | 2001-07-06 | A broad spectrum infectious bursal disease virus vaccine |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6485940B2 (hu) |
| JP (1) | JP2002095485A (hu) |
| KR (1) | KR100759769B1 (hu) |
| CN (1) | CN1257973C (hu) |
| AT (1) | ATE330969T1 (hu) |
| AU (1) | AU780878B2 (hu) |
| BR (1) | BR0102776A (hu) |
| CA (1) | CA2351010C (hu) |
| DE (1) | DE60120840T2 (hu) |
| HU (1) | HU225488B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA01006919A (hu) |
| NZ (1) | NZ512800A (hu) |
| PL (1) | PL199159B1 (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL1908822T3 (pl) * | 2003-03-24 | 2011-03-31 | Intervet Int Bv | Mutanty wirusa zakaźnego zapalenia torby Fabrycjusza i szczepionki |
| US7491399B2 (en) * | 2005-06-23 | 2009-02-17 | University Of Maryland Biotechnology Institute | In Ovo vaccine against infectious bursal disease |
| CN100384990C (zh) * | 2005-11-14 | 2008-04-30 | 浙江大学 | 传染性法氏囊病病毒无毒力毒株构建方法 |
| DE102006054260A1 (de) * | 2006-02-28 | 2007-09-27 | Lohmann Animal Health Gmbh & Co. Kg | Wasser stabilisierende Zusammensetzung, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU7955591A (en) | 1990-05-04 | 1991-11-27 | University Of Maryland At College Park, The | Specific dna sequences related to an ibdv protein including vectors, hosts and vaccines |
| US5788970A (en) | 1994-03-29 | 1998-08-04 | The University Of Maryland College Park | Chimeric infectious bursal disease virus CDNA clones, expression products and vaccines based thereon |
| CA2238659C (en) * | 1997-05-26 | 2010-12-14 | Akzo Nobel N.V. | Recombinant birnavirus vaccine |
| WO2000012677A2 (en) | 1998-09-01 | 2000-03-09 | The University Of Hong Kong | Generation of recombinant infectious bursal disease viruses by reverse genetics technology and the use of the recombinant viruses as attenuated vaccines |
-
2001
- 2001-06-25 US US09/888,876 patent/US6485940B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 AT AT01202532T patent/ATE330969T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 DE DE60120840T patent/DE60120840T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-03 AU AU54196/01A patent/AU780878B2/en not_active Ceased
- 2001-07-04 JP JP2001203090A patent/JP2002095485A/ja active Pending
- 2001-07-05 NZ NZ512800A patent/NZ512800A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-05 CA CA2351010A patent/CA2351010C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-06 HU HU0102823A patent/HU225488B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-07-06 BR BR0102776-0A patent/BR0102776A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-07-06 CN CNB011372451A patent/CN1257973C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-06 PL PL348550A patent/PL199159B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-07-06 MX MXPA01006919A patent/MXPA01006919A/es active IP Right Grant
- 2001-07-06 KR KR1020010040325A patent/KR100759769B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE330969T1 (de) | 2006-07-15 |
| DE60120840D1 (de) | 2006-08-03 |
| US20020064532A1 (en) | 2002-05-30 |
| NZ512800A (en) | 2002-03-01 |
| PL199159B1 (pl) | 2008-08-29 |
| CA2351010A1 (en) | 2002-01-07 |
| HU0102823D0 (en) | 2001-09-28 |
| US6485940B2 (en) | 2002-11-26 |
| KR100759769B1 (ko) | 2007-10-04 |
| CN1366041A (zh) | 2002-08-28 |
| PL348550A1 (en) | 2002-01-14 |
| KR20020013387A (ko) | 2002-02-20 |
| MXPA01006919A (es) | 2003-09-25 |
| DE60120840T2 (de) | 2006-11-16 |
| HUP0102823A3 (en) | 2005-06-28 |
| CN1257973C (zh) | 2006-05-31 |
| JP2002095485A (ja) | 2002-04-02 |
| AU780878B2 (en) | 2005-04-21 |
| CA2351010C (en) | 2010-12-14 |
| HUP0102823A2 (hu) | 2002-04-29 |
| BR0102776A (pt) | 2002-07-23 |
| AU5419601A (en) | 2002-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1035203B1 (en) | Genetically engineered cell culture adapted infectious bursal diseases virus (IBDV) mutants | |
| MX2010014555A (es) | Reoviridae aviar unico. | |
| KR101511712B1 (ko) | 신규 전염성 ｆ낭병 바이러스 ｉｂｄ ｋ7주 및 이를 이용한 전염성 ｆ낭병 백신 | |
| US5804195A (en) | Vaccine comprising an infectious bursal disease virus MB, MB-1 or MB-2 strain | |
| EP1908822B1 (en) | Infectious bursal disease virus mutants and vaccines | |
| HU225488B1 (en) | A broad spectrum infectious bursal disease virus vaccine | |
| CA2349960A1 (en) | Ibdv strain for in ovo administration | |
| EP1170302B1 (en) | Infectious bursal disease virus vaccines | |
| KR102421251B1 (ko) | 국내 분리 중국형 항원변이형 닭전염성 f낭병 바이러스 및 이를 포함하는 백신조성물 | |
| KR102421249B1 (ko) | 국내 분리 미주형 항원변이형 닭전염성 f낭병 바이러스 및 이를 포함하는 백신조성물 | |
| US7431930B2 (en) | Infectious bursal disease virus (IBDV) mutant expressing virus neutralising epitopes specific for classic-and variant IBDV strains | |
| MXPA00002278A (en) | Genetically engineered cell culture adapted infectious bursal diseases virus (ibdv) mutants |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: INTERVET INTERNATIONAL B.V., NL Free format text: FORMER OWNER(S): AKZO NOBEL N.V., NL |
|
| TH4A | Erratum | ||
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |