HU224915B1 - Process for the preparation of pharmaceutical compositions for inhibiting thrombin containing 2-phenyl-3-aroyl-benzothiophene derivatives - Google Patents

Process for the preparation of pharmaceutical compositions for inhibiting thrombin containing 2-phenyl-3-aroyl-benzothiophene derivatives Download PDF

Info

Publication number
HU224915B1
HU224915B1 HU9403675A HU9403675A HU224915B1 HU 224915 B1 HU224915 B1 HU 224915B1 HU 9403675 A HU9403675 A HU 9403675A HU 9403675 A HU9403675 A HU 9403675A HU 224915 B1 HU224915 B1 HU 224915B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
thrombin
compound
compounds
blood
plasma
Prior art date
Application number
HU9403675A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9403675D0 (en
HUT71344A (en
Inventor
Daniel Jon Sall
Gerald Floyd Smith
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of HU9403675D0 publication Critical patent/HU9403675D0/hu
Publication of HUT71344A publication Critical patent/HUT71344A/hu
Publication of HU224915B1 publication Critical patent/HU224915B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4535—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom, e.g. pizotifen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)

Description

A vérkoaguláció, a trombózis folyamatát komplex proteolitikus kaszkád indukálja, és trombinképződéshez vezet. A trombin fehérjebontás révén eltávolítja az Aaés Ββ-fibrinogén láncokból az aktiválópeptideket, amelyek egyébként a vérplazmában oldódnak, és így oldhatatlan fibrinképződést eredményez.
A koagulációellenes hatást a napi gyakorlatban heparinok és kumarinok adagolásával hajtják végre. A koaguláció és a trombózis parenterális farmakológiai kezelését úgy végzik, hogy heparinok alkalmazásával a trombin inhibiálását hajtják végre. A heparinok a trombinképződésre indirekt módon hatnak úgy, hogy gyorsítják az endogén antitrombin (lll) enzimek hatását az inhibiálásban (ezek a trombin fő inhibiáló fiziológiai hatóanyagai). Mivel a (lll) antitrombin koncentráció a vérplazmában változik, és a felülethez kötött trombin valószínűleg rezisztens a fenti indirekt mechanizmusra, a heparinok sok esetben hatástalanok a kezelésben. Mivel a koagulációs tesztvizsgálatoknak megfelelő hatással, illetve biztonsági előírásokkal kell rendelkezniük, a heparinkoncentrációt a koagulációs tesztvizsgálatokban ellenőrizni kell [különösen a részleges, aktivált tromboplasztin idő (APTT) tesztvizsgálatban], A kumarinvegyületek trombinképződést generálnak úgy, hogy ezek blokkolják a posztátviteli gamma-karboxilezést a protrombin és más ilyen típusú fehérjék szintézisében. A kumarinok hatásmechanizmusa következtében hatásuk csak lassan az adagolás után 6-24 órán belül alakul ki az adagolás után. Ezen túlmenően ezek a vegyületek nem szelektív antikoaguláns hatásúak. A kumarinok adagolása továbbá koagulációs tesztvizsgálatok folytonos alkalmazását igényli (különösen a protrombin időszakos tesztvizsgálatát).
A találmány tárgya azon alapul, hogy a találmány szerinti vegyületek, amint az alábbiakban leírjuk, trombininhibitor hatásúak, és orálisan adagolva biológiailag felszívódnak.
A találmány tárgya eljárás trombin inhibiálására alkalmas készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az az (I) általános képletű vegyület, ahol az általános képletben
R1 és R3 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, metilcsoport, -CO-(1-6 szénatomszámú alkil)-csoport vagy -CO-Ar általános képletű csoport, ahol Ar jelentése kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport;
R2 jelentése pirrolidinocsoport, hexametilén-imino-csoport vagy piperidinocsoport;
vagy gyógyszerészetileg elfogadható sója vagy szolvátja hatásos mennyiségét tartalmazza.
A találmány szerinti eljárás azon alapul, hogy az (I) általános képletű 2-fenil-3-aroil-benzotiofén-vegyületek (benzotiofének) alkalmasak a trombininhibiálásra. A találmány szerinti vegyületek antikoaguláns szerként megelőző vagy kezelő eljárásban történő felhasználása azon alapul, hogy ezekkel kezelhetők tromboembóliás betegségek, mint például vénás trombózis, tüdőembólia, artériás trombózis, különösen szívizom-ischaemia, szívizominfarktus és agytrombózis, általános hiperkoagulális állapotok és lokális hiperkoagulális állapotok, mint például az érplasztika utáni és a szívkoszorúérmegvezetés-operáció utáni állapotok, illetve az általános szövetsérülések, amelyek például a gyulladásos folyamatokhoz kapcsolódhatnak. A találmány szerinti gyógyszerkészítmény az (I) általános képletű vegyületet vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját vagy szolvátját olyan mennyiségben tartalmazza, amely hatásosan inhibiálja a trombin hatását vagy a trombinnal kapcsolatos betegségeket vagy rendellenességeket. Az inhibiálás elnevezés alatt azt értjük, amit a gyógyszerészeti gyakorlatban általában megfogalmazunk ember vagy emlős esetében, és ez azt jelenti, hogy a trombin feleslegének korlátozását és/vagy kezelését végezzük az adott betegségek vagy körülmények között. A találmány szerinti eljárás ennek értelmében terápiás és/vagy megelőző eljárás is lehet.
A találmány szerinti előnyös vegyület a Raloxifene, illetve ennek hidrokloridsója, amely olyan (I) általános képletű vegyület, ahol az általános képletben R1 és R3 jelentése hidrogénatom és R2 jelentése 1-piperidinilcsoport.
Általában legalább (I) általános képletű vegyületet szokásosan alkalmazott kiszerelőanyagokkal, hígítóanyagokkal vagy hordozóanyagokkal készítménnyé alakítunk, és tabletta, elixír vagy oldat formává alakítunk, amelyek orális adagolásra alkalmasak, vagy intramuszkuláris vagy intravénás úton adagolható formává alakítunk. A találmány szerinti vegyületek transzdermálisan is adagolhatok, és fenntartott hatóanyag-kibocsátású dózisforma-készítménnyé is átalakíthatok.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott aktív hatóanyagokat ismert eljárásokkal állíthatjuk elő, mint például a 4,133,814 számú, a 4,418,068 számú és a 4,386,635 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben leírt eljárások, amely bejelentéseket referenciaként adunk meg. Általában az előállítási eljárás során egy 6-hidroxilcsoportot és egy 2-(4-hidroxi-fenil)-csoportot tartalmazó benzo[b]tiofénvegyületből indulunk ki, majd a kiindulási anyagot védőcsoportokkal látjuk el. Ezt követően a vegyületet acilezzük, és ezután a védőcsoportokat eltávolítjuk, így az (I) általános képletű vegyületeket állítjuk elő. Az ilyen előállítási eljárások példáit a fent referenciaként megadott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben írták le. A „kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport” elnevezés alatt a leírásban fenilcsoportot vagy 1 vagy 2 szubsztituenst tartalmazó fenilcsoportot értünk, ahol a szubsztituensek lehetnek 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, hidroxilcsoport, nitrocsoport, klóratom, fluoratom vagy tri(klórvagy fluor)-metil-csoport.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható savaddíciós és bázisadd íciós sókat képezhetnek különféle szerves és szervetlen savakkal, valamint bázisokkal, és így a találmány tárgykörébe beleértjük a gyógyszerészetileg elfogadható sókat, amelyek általában gyógyszerészeti gyakorlatban alkalmazottak. Az ilyen sók a találmány tárgykörét képezik. A sók képzésére alkalmazható jellemző, szervetlen savak például a sósav, a hidro2
HU 224 915 Β1 gén-bromid, a hidrogén-jodid, a salétromsav, a kénsav, a foszforsav, a hipofoszforsav és hasonlók. A szerves savakból származó sók esetében alkalmazható savak például a mono- és dikarbonsavak, a fenilszubsztituált alkánkarbonsavak, a hidroxi-alkánkarbonsavak, a hidroxi-alkándikarbonsavak, az aromás savak, az alifás és aromás szulfonsavak. Ilyen gyógyszerészetileg elfogadható sók lehetnek például az acetátok, a fenil-acetátok, a trifluor-acetátok, az akrilátok, az aszkorbátok, a benzoátok, a klór-benzoátok, a dinitro-benzoátok, a hidroxi-benzoátok, a metoxi-benzoátok, a metil-benzoátok, az o-acetoxi-benzoátok, a naftalin-2-benzoátok, a bromidok, az izobutirátok, a fenil-butirátok, a β-hidroxi-butirátok, a butin-1,4-dioátok, a hexin-1,4dioátok, a kaprátok, a kaprilátok, a kloridok, a cinnamátok, a cifrátok, a formiátok, a fumarátok, a glikollátok, a heptanoátok, a hippurátok, a laktátok, a malátok, a maleátok, a hidroxi-maleátok, a malonátok, a mandelátok, a mezilátok, a nikotinátok, az izonikotinátok, a nitrátok, az oxalátok, a ftalátok, a tereftalátok, a foszfátok, a monohidrogén-foszfátok, a dihidrogén-foszfátok, a metafoszfátok, a pirofoszfátok, a propiolátok, a propionátok, a fenil-propionátok, a szalicilátok, a szebacátok, a szukcinátok, a szuberátok, a szulfátok, a biszulfátok, a piroszulfátok, a szulfitok, a biszulfitok, a szulfonátok, a benzolszulfonátok, a p-bróm-fenil-szulfonátok, a klórbenzolszulfonátok, az etánszulfonátok, a 2-hidroxi-etánszulfonátok, a metánszulfonátok, a naftil-1-szulfonátok, a naftil-2-szulfonátok, a p-toluolszulfonátok, a xilolszulfonátok, a tartarátok és hasonlók. Előnyösen alkalmazható só a hidrokloridsó.
A gyógyszerészetileg elfogadható savaddíciós sókat jellemzően úgy állítjuk elő, hogy az (I) általános képletű vegyületet ekvimoláris mennyiségű vagy feleslegben alkalmazott savval reagáltatjuk. A reaktánsokat általában közös oldószerben, mint például dietil-éterben vagy benzolban elegyítjük. A só általában az oldatból csapadékként kiválik, a csapadékkiválás kb. 1 óra-10 nap időtartamon belül megtörténik, és az anyagot szűréssel vagy az oldószer elpárologtatósával izolálhatjuk.
A sóképzésre alkalmazott általános bázisok például az ammónium-hidroxid, az alkálifém- és az alkáliföldfém-hidroxidok, karbonátok, továbbá az alifás és elsőrendű, másodrendű és harmadrendű aminok és az alifás diaminok. Különösen előnyösen alkalmazható addíciós sók képzésében az ammónium-hidroxid, a kálium-karbonát, a metil-amin, a dietil-amin, az etilén-diamin és a ciklohexil-amin.
A gyógyszerészetileg elfogadható sók az alapvegyülettel összehasonlítva általában megnövelt olthatóságúak, és így gyakran alkalmasabbak folyadék vagy emulzió formájú készítmény előállítására.
A találmány szerinti gyógyszerkészítményeket a szakirodalomban ismert eljárásoknak megfelelően állíthatjuk elő. Például a találmány szerinti vegyületeket szokásosan alkalmazott kiszerelőanyagokkal, hígítóanyagokkal vagy hordozóanyagokkal elegyíthetjük, és tabletta, kapszula, szuszpenzió, por vagy hasonló formává alakíthatjuk. Ezekben a készítményekben alkalmazható kiszerelőanyagok, hígítóanyagok és hordozóanyagok például a töltőanyagok és hordozóanyagok, mint például keményítő, cukrok, mannitol és szilíciumvegyületek; a kötőanyagok, mint például karboxi-metil-cellulóz és más cellulózszármazékok, alginátok, zselatin és poli(vinil-pirrolidon); nedvesítőszerek, mint például glicerol; dezintegrálószerek, mint például kalcium-karbonát és nátrium-hidrogén-karbonát; oldódást késleltető segédanyagok, mint például paraffin, reszorpciósebesség-növelő segédanyagok, mint például kvaterner ammóniumvegyületek; felületaktív anyagok, mint például cetil-alkohol, glicerol-monosztearát; abszorpciót biztosító hordozóanyagok, mint kaolin és bentonit; és kenőanyagok, mint például talkum, kalcium- és magnézium-sztearát és szilárd polietilénglikolok.
A találmány szerinti vegyületek továbbá elixír vagy oldat formává is alakíthatók, amelyek orális adagolásra használhatók, vagy oldat forma is kialakítható, amely parenterális adagolásra, mint például intramuszkuláris, szubkután vagy intravénás úton történő felhasználásra alkalmas. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek jól átalakíthatok olyan készítményekké, amelyek fenntartott hatóanyag-kibocsátási formák. Ezek a készítmények úgy alakíthatók ki, hogy az aktív hatóanyag kibocsátása a gélrendszer adott traktusában vagy előnyösen, különösen előnyös helyzetében kerüljön kibocsátásra egy adott időtartam alatt. A bevonatok, borítások és védőmátrixok, amelyeket erre a célra alkalmazunk, lehetnek polimer vegyületek vagy viaszok.
A trombin inhibiálásához szükséges (I) általános képletű találmány szerinti vegyület adott dózisa a megfelelő betegségek és körülmények esetében az alábbi tényezők függvénye: a betegség súlyossága, az adagolás útja, továbbá más hasonló faktorokat kell figyelembe venni, amelyeket a kezelőorvos határoz meg. Általában a hatásosan elfogadott napi dózis kb. 0,1-kb. 1000 mg/nap, előnyösebben kb. 50-kb. 200 mg/nap közötti. A fenti dózist a kezelést igénylő betegnek napi egy-három vagy kívánt esetben több alkalommal adagolhatjuk olyan mennyiségben, hogy a trombint vagy ezzel összefüggő betegséget hatásosan inhibiálja.
Általában az (I) általános képletű találmány szerinti vegyületet előnyösen savaddíciós só formában adagoljuk. Ez a gyakorlat a gyógyszerészeti hatóanyagok esetében, amelyek bázisos csoportot tartalmaznak, mint például esetünkben a piperidinocsoport, szokásosan alkalmazott. Az ilyen célokra az alábbi dózisformákat alkalmazhatjuk.
Készítmények
A készítményekben az „aktív hatóanyag” elnevezés alatt az (I) általános képletű vegyületeket értjük.
1. készítmény: Zselatinkapszula
Keményzselatin-kapszulákat állítunk elő az alábbiak szerint:
Alkotóelemek Mennyiség (mg/kapszula)
Aktív hatóanyag 0,1-1000
Keményítő, NF 0-650
HU 224 915 Β1
Alkotóelemek Mennyiség (mg/kapszula)
Keményítő folyós por 0-650
Szilikonfolyadék 350 centistoke 0-15
Az alkotóelemeket elegyítjük, majd 45 mesh No. (4,275 μ) szitán szitáljuk, és ezután keményzselatinkapszulákba töltjük.
Az egyes előállított kapszulaformák, amelyek Raloxifene hatóanyagból készülnek, az alábbiak:
2. készítmény: Raloxifene kapszula Alkotóelemek Mennyiség (mg/kapszula)
Raloxifene 1
Keményítő, NF 112
Keményítő folyós por 225,3
Szilikonfolyadék 350 centistoke 1,7
3. készítmény: Raloxifene kapszula Alkotóelemek Mennyiség (mg/kapszula)
Raloxifene 5
Keményítő, NF 108
Keményítő folyós por 225,3
Szilikonfolyadék 350 centistoke 1,7
4. készítmény: Raloxifene kapszula Alkotóelemek Mennyiség (mg/kapszula)
Raloxifene 10
Keményítő, NF 103
Keményítő folyós por 225,3
Szilikonfolyadék 350 centistoke 1,7
5. készítmény: Raloxifene kapszula Alkotóelemek Mennyiség (mg/kapszula)
Raloxifene 50
Keményítő, NF 150
Keményítő folyós por 397
Szilikonfolyadék 350 centistoke 3,0
A fent leírt adott formuláit készítmények természetesen a megfelelő kívánság szerint módosíthatók.
Tablettaformált alakot állítunk elő az alábbi alkotóelemekből:
6. készítmény: Tabletta
Alkotóelemek Mennyiség (mg/tabletta)
Aktív hatóanyag 0,1-1000
Mikrokristályos cellulóz 0-650
Szilícium-dioxid-füst 0-650
Sztearinsav 0-15
Az alkotóelemeket elegyítjük, majd tablettává préseljük. Más eljárás szerint 0,1-1000 mg aktív hatóanyag/tabletta tartalmú tablettákat állítunk elő:
7. készítmény: Tabletta
Alkotóelemek Mennyiség (mg/tabletta)
Aktív hatóanyag 0,1-1000
Keményítő 45
Mikrokristályos cellulóz 35
Poli(vinil-pirrolidon)
(10%-os vizes oldat) 4
Nátrium-karboxi-metil-cellulóz 4,5
Magnézium-sztearát 0,5
Talkum 1
Az aktív hatóanyagot, a keményítőt és a cellulózt No. 45 mesh U. S. (4,275 μ) szitán szitáljuk, majd alaposan elkeverjük. A poli(vinil-pirrolidon)-oldatot a kapott porral elkeverjük, majd ezután az elegyet 14 mesh U. S. (1,33 μ) szitán szitáljuk. A kapott granulátumot 50-60 °C közötti hőmérsékleten megszárítjuk, majd 18 mesh U. S. (1,71 μ) szitán szítáljuk. A nátrium-karboxi-metil-keményítőt, a magnézium-sztearátot és a talkumot előzetesen 60 mesh U. S. (5,7 μ) szitán szitáljuk, majd hozzáadjuk a fenti granulátumhoz. Ezután az elegyet elkeverjük, és tablettázógépen tablettává préseljük.
Egyenként 5 ml dózisban 0,1-1000 mg aktív hatóanyagot tartalmazó szuszpenziókészítményt állítunk elő az alábbiak szerint:
8. készítmény: Szuszpenzió Alkotóelemek Mennyiség (mg/5 ml)
Aktív hatóanyag 0,1-1000 mg
Nátrium-karboxi-metil-cellulóz 50 mg
Szirup 1,25 mg
Benzoesavoldat 0,10 ml
ízanyag q. v.
Színanyag q. v.
Kiegészítő mennyiségű tisztított víz 5 ml
Az aktív hatóanyagot 45 mesh U. S. (4,275 μ) szitán szitáljuk, majd elkeverjük a nátrium-karboxi-metil-cellulózzal és a sziruppal, így sima pasztát képezünk. A benzoesavoldatot, ízanyagot és színanyagot bizonyos mennyiségű vízzel hígítjuk, majd keverés közben hozzáadjuk a fenti elegyhez. Ezt követően az elegyet a végtérfogatra kiegészítő vízzel feltöltjük.
A találmány tárgya eljárás emlősökben trombin inhibiálására alkalmas készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyület hatásos (trombininhibiáló) dózisát tartalmazza.
A találmány szerinti trombininhibiáló eljárás alatt a terápiás és/vagy megelőző kezelést is értjük.
A találmány szerinti készítmény továbbá ember vagy állat kezelésére alkalmas, amely olyan betegségben szenved, ahol trombininhibiálást kell végrehajtani. A találmány szerinti vegyület várhatóan állatokban, az embert is beleértve, alkalmas kezelés vagy megelőző
HU 224 915 Β1 kezelés végrehajtására trombózis és a vérben, illetve szövetekben létrejövő hiperkoaguláció kezelésére. A találmány szerinti eljárásban előállított készítményt alkalmazhatjuk kezelésben vagy megelőzésben trombózis és hiperkoaguláció vérben vagy szövetekbeni kezelésében. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek használhatók az alábbi kezelési vagy megelőzési eljárásokban: vénás trombózis és tüdőembólia, artériás trombózis, mint például myocardiális ischaemia, myocardiális infarktus, nem stabil angina, trombózisalapú agyvérzés és perifériális artériás trombózis. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek kezelésben vagy megelőző kezelésben alkalmazhatók atherosclerotikus betegségek esetében, mint például koronaér-artériás betegség, agyi artériás betegség és perifériás artériás betegség. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek valószínűleg hatásosak más trombolitikumokkal együtt myocardiális infarktusok kezelésében. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek alkalmasak trombózis utáni perkután áttetsző érplasztika (PCTA) utáni és koronaér bypass operáció utáni újraelzáródás előzetes kezelésére. A találmány szerinti vegyületek várhatóan alkalmasak további mikrurgia utáni trombózis-újrakialakulás megelőzésére, és várhatóan alkalmasak mesterséges szervek, illetve szívbillentyűvel kapcsolatos koagulációellenes kezelésben történő alkalmazásra. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek alkalmazhatók vérdialízis/művese és elszórt éren belüli koaguláció antikoaguláns kezelésében történő felhasználásra. Továbbá hatásosak katéterek és mechanikai in vivő betegekben alkalmazott eszközök öblítésében, illetve antikoaguláns anyagként vér, plazma és más vértermékek in vitro tartósításában történő felhasználásra. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek valószínűleg más olyan betegségek kezelésében is alkalmazhatók, ahol a vérkoaguláció alapvető betegség vagy a másodlagos patológia forrása lehet. Ilyenek például a rákos megbetegedések, a metasztázist is beleértve, a gyulladásos betegségek, az ízületi gyulladást is beleértve, és a diabétesz. A találmány szerinti antikoaguláns vegyületek orálisan vagy parenterálisan, például intravénás infúzió útján (iv.), intramuszkuláris injekció formában (im.) vagy szubkután úton (se.) adagolhatok.
A találmány szerinti eljárás továbbá vérrögoldó szerrel együttesen történő alkalmazásban is alkalmazható, mint például szövet plazminogén aktivátor (t-PA) módosított t-PA, sztreptokináz vagy urokináz kombinált kezelés. Azokban az esetekben, amelyekben a vérrögképződés megtörtént, és egy artéria és véna részben vagy teljesen elzáródott, általában valamely vérrögoldó hatóanyagot tartalmaznak. A találmány szerinti vegyület alkalmazható az oldóanyag alkalmazása előtt, vagy ezzel egy időben, vagy az oldóanyag alkalmazása után. Előnyösen az alkalmazást aszpirinnel kombináltan végezzük abból a célból, hogy a vérrögképződés újrakialakulását megelőzzük.
A találmány szerinti eljárást továbbá végrehajthatjuk vérlemez glukoprotein llb-llla receptor antagonistával kombinációban, amely a vérlemez-aggregációt inhibiálja. A találmány szerinti vegyületet a llb-llla receptor antagonista adagolása előtt, vagy ezzel egy időben, vagy ezt követően is adagolhatjuk abból a célból, hogy a vérrögképződés újrakialakulását megelőzzük.
A találmány szerinti eljárást ezen túlmenően végezhetjük aszpirinnel kombinált alkalmazásban. A találmány szerinti vegyületet az aszpirin adagolása előtt, vagy ezzel egy időben, vagy ezután is végezhetjük, és így megakadályozhatjuk a vérrög újraképződését. Mint korábban leírtuk, a találmány szerinti vegyületet előnyösen a vérrögoldó hatóanyaggal kombináltan, illetve aszpirinnel kombináltan adagoljuk.
A találmány szerinti vegyületek hatásosságát trombininhibitorként az alábbi tesztvizsgálatok közül egy vagy több segítségével mutatjuk ki.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek emlősökben inhibiálják a trombin hatását. A trombininhibiálás in vitro mutatható ki úgy, hogy a trombin amidázaktivitását inhibiáljuk olyan tesztvizsgálatban, amelyben a trombin hidrolizálja a kromogén szubsztrátot (az N-benzoil-D-fenil-alanil-L-valil-L-valil-L-arginil-pnitro-anilidet vagy az N-benzoil-D-Phe-L-Val-L-Arg-pnitro-anilidet).
A tesztvizsgálatot úgy hajtjuk végre, hogy 50 μΙ puffért (0,03 mól Tris, 0,15 mól NaCI, pH 7,4) 25 μΙ humán trombinoldattal (tisztított humán trombin, Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, 8 NIH egység/ml) és 25 μΙ tesztvizsgálati vegyületet oldószerben [50% víz és 50% metanol (térfogat/térfogat)] készült eleggyel keverjük. Ezután az elegyhez 150 μΙ vizes kromogén szubsztrátoldatot adagolunk (amely 0,25 mg/ml koncentrációjú), majd a szubsztrát hidrolízisének sebességét mérjük úgy, hogy a reakciót 405 nm értéknél követjük a p-nitro-anilin-felszabadulás mérésével. Standardgörbéket készítünk úgy, hogy a trombinkoncentráció függvényében a hidrolízis sebességét ábrázoljuk. Az adott kísérletben a tesztvizsgálati vegyülettel mért hidrolízissebességeket ezután „szabad trombin” értékké alakítjuk át a standardgörbék alkalmazásával. A kötött trombin mennyiségét (a tesztvizsgálathoz kötött trombinmennyiséget) úgy számítjuk, hogy az egyes kísérletekben mért szabad trombinmennyiséget levonjuk a tesztvizsgálatban alkalmazott ismert mennyiségű kezdeti trombinértékből. Az egyes kísérletekben a szabad inhibitormennyiséget úgy számítjuk, hogy a kötött trombin mólszámát levonjuk az adagolt inhibitor mólszámából (az inhibitor a tesztvizsgálatnak alávetett vegyület).
A Kass-érték az elvi egyensúly állandó a trombin és a tesztvizsgálati (I) általános képletű vegyület közötti reakcióban.
Trombin+(l)->Trombin-(l) [Trombin—(I)]
Kass= —__ [(Trombin)x(l)]
A Kass-értéket a tesztvizsgálati vegyület számos koncentrációja esetében kiszámítjuk, és az átlagértéket számítjuk 1/mol egységben.
A fentiekben a humán trombin esetében leírt tesztvizsgálati eljárást követjük, és más humán vérkoagulá5
HU 224 915 Β1 ciós rendszer szerint proteázokat alkalmazunk a megfelelő kromogén, alább megadott szubsztráttal, és így mérjük a találmány szerinti vegyület koagulációfaktor szerinti proteázra vonatkozó szelektivitását.
A humán Xa, IXa, Xla, Xlla faktorokat az Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana cégtől szerezzük be; a humán urokinázt a Leó Pharmaceuticals, Denmark cégtől vesszük; és a rekombináns aktivált protein C (aPC) vegyületeket az Eli Lilly and Co. által benyújtott, a 4,981,952 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírt eljárásnak megfelelően állítjuk elő, amelyet egyébként referenciaként adunk meg. Kromogén szubsztrátként az alábbiakat alkalmazzuk: N-benzoil-lle-Glu-Gly-Arg-pnitro-anilid (Xa faktorra); N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilid (IXa faktorra az Xa faktorra leírt tesztvizsgálat szerint); piroglutamil-Pro-Arg-p-nitro-anilid (Xla faktorra és aPC esetére); H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitro-anilid (Xlla faktorra); és piroglutamil-Gly-Arg-p-nitro-anilid (urokinázra); ezeket a kromogén anyagokat a KabiVitrum, Stockholm, Sweden vagy Midwest Biotech, Fishers, Indiana cégektől vásároljuk. A marhatripszint a Worthington Biochemicals, Freehold, New Jersey és a humán plazma kallíkreint a Kabi Vitrum, Stockholm, Sweden cégtől szerezzük be. A H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitro-anilid kromogén szubsztrátot, amely plazma kallikrein esetében alkalmazható, a Kabi Vitrum, Stockholm, Sweden cégtől szerezzük be. Az N-benzoil-Phe-Val-Arg-pnitro-anilid-szubsztrátot a trombin- és a tripszinanyagokhoz kereskedelemben kapható reaktánsokból kiindulva a találmány szerinti vegyületre leírt eljárással állítjuk elő ismert peptidkapcsolási reakciók alkalmazásával.
A humán plazmint a Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana cégtől szerezzük be; az nt-PA vegyületet, mint egylánc-aktivitású referenciát az American Diagnostica, Greenwich, Connecticut cégtől vásároljuk; a módosított t-PA6 (mt-PA6) vegyületet az Eli Lilly and Company eljárásával állítjuk elő, amely a szakirodalomban ismert [lásd Burck és munkatársai, J. Bioi. Chem., 265, 5120-5177 (1990)]. A plazmin kromogén szubsztrátot (H-D-Val-Leu-Lys-p-nitro-anilid) és a szövet plazminogén aktivátor (t-PA) szubsztrátot (H-D-lle-Pro-Arg-p-nitro-anilid) a Kabi Vitrum, Stockholm, Sweden cégtől szerezzük be.
A fent leírt kromogén szubsztrátokban a hárombetűs szimbólumok: az Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu és Lys a megfelelő aminosavak jelzésére szolgálnak, amelyek izoleucin, glutaminsav, glicin, prolin, arginin, fenil-alanin, valin, leucin és lizin.
A trombininhibitorok előnyösen megkímélik az urokináz, a szövet plazminogén aktivátor (t-PA) és a sztreptokináz által indukált fibrinolízist. Ez igen fontos terápiás felhasználásuk szempontjából, mivel csak ebben az esetben lehet kiegészítő anyagként alkalmazni ezeket sztreptokinázzal, t-PA aktivátorral vagy urokinázzal trombózisterápiában, és ugyancsak jelentős abból a szempontból, hogy ezeket a hatóanyagokat trombózisellenes szerekként endogén fibrinolízis kímélő anyagként alkalmazhassuk (a t-PS és az urokináz vonatkozásában). A fibrinolitikus proteázok amidázaktivitásával való kölcsönhatás hiányán túlmenően az ilyen fibrinolitikus rendszert óvó jellemzőt vizsgálhatjuk úgy is, hogy humán plazma vérrögöket alkalmazunk, és megvizsgáljuk ezek oldását különféle fibrinolitikus plazminogén aktivátorokkal.
Felhasznált anyagok
Kutyaplazmát veszünk ébrenléti, kevert fajú vadászkutyákból (bármely nemű Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigan, USA). A mintát vénából nyerjük és 3,8%-os citrátoldatban tároljuk. A friss kutyaplazmából fibrinogént állítunk elő, továbbá emberi fibrinogént nyerünk ki friss, aznapi ACD humán vérből (az I-2 frakcióból) a korábban leírt eljárások, illetve szabadalmi bejelentések eljárásai szerint: Smith, Bíochem. J., 185, 1-11 (1980); és Smith és munkatársai, Biochemistry. 11, 2958-2967, (1972). Humán fibrinogént (98% tisztaságú/plazminmentes) szerezhetünk be az American Diagnostica, Greenwich, Connecticut cégtől. Az I-2 fibrinogén preparátumokon a radioaktív jelzését korábban leírt eljárás szerint végezzük [Smith és munkatársai Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972)]. Az urokinázt a Leó Pharmaceuticals, Denmark cégtől szerezzük be 2200 Ploug egység/fiola formában. A sztreptokinázt a Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Somerville, New Jersey cégtől szerezzük be.
Eljárások - Humán plazma vérrögök t-PA által végzett oldására kifejtett hatás
Humán plazma vérrögöket hoztunk létre mikrotesztvizsgálati csövekben úgy, hogy 50 μΙ trombint (73 NIH egység/ml) adagoltunk 100 μΙ humán plazmához, amely 0,0229 Ci 125-jód-jelzett fibrinogént tartalmazott. A vérrög oldását úgy vizsgáltuk, hogy a vérrögökre 50 μΙ urokinázt vagy sztreptokinázt rétegeztünk (50, 100 vagy 1000 egység/ml), majd a mintákat 20 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk. Az inkubálás után a csöveket Beckmen Microfuge segítségével centrifugáltuk. 25 μΙ felúszót gamma-számlálás céljából 1,0 ml 0,03 mol-os tris/0,15 mol-os NaCI bufferhez adagoltunk. A kontrollmintákban 100%-os oldás történt, amikor a trombinadagolást elhagytuk (és ezt pufferrel helyettesítettük). A találmány szerinti trombininhibitorokat vizsgáltuk: milyen mértékben lépnek kölcsönhatásba a fibrinolízissel. A vizsgálatot úgy végeztük, hogy a befedőoldatokba 1,5 és 10 pg/ml koncentrációban a fenti vegyületeket adagoltuk. Az adatpontok lineáris extrapolálásával durván becsültük a körülbelüli IC50-értékeket, amelyek a fibrinolitikus hatóanyag egy adott koncentrációja mellett 50%-os oldást biztosítanának.
Antikoaguláns aktivitás
Felhasznált anyagok
A kutyaplazmát és a patkányplazmát az alábbi forrásokból szerezzük be: ébrenléti kevert fajú vadászkutyákból (bármely nemű Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigan, USA) vagy érzéstelenített hím Sprague-Dawley-patkányokból (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, Indiana, USA). A mintákat vénából nyerjük és
HU 224 915 Β1
3,8%-os citrátoldatban tároljuk. A fibrinogént I-2 frakcióként napi ACD humán vérből preparáljuk a korábban leírt szakirodalmi eljárásnak megfelelően [Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980); és Smith és munkatársai, Biochemistry, 11, 2958-2967 (1972)]. A humán fibrinogént továbbá beszerezhetik 98% tisztaságú/plazminmentes formában az American Diagnostica, Greenwich, Connecticut cégtől. Az ACTIN koagulációs vegyületeket, a Thromboplastint és a humán plazmát beszerezhetjük a Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida cégtől. A marhatrombint a Parké Davis (Ann Detroit, Michigan) cégtől szerezzük be, és ezt a plazmában koagulációs tesztvizsgálatra alkalmazzuk.
Eljárások
Antikoagulációs hatás meghatározása
A koagulációs tesztvizsgálatokat a korábban szakirodalomban leírt eljárások szerint végezzük [Smith és munkatársai, Thrombosis Research., 50, 163-174 (1988)]. A koagulációs tesztvizsgálati mérésekben CoAScreener koagulációs mérőműszert alkalmazunk (American LABor, Inc.). A protrombin időt (PT) úgy mérjük, hogy 0,05 ml tesztvizsgálati plazmához 0,05 ml fiziológiás sóoldatot és 0,05 ml Thromboplastin-C reagenst adagolunk. Az aktív részleges tromboplasztin időt (APTT) úgy mérjük, hogy 0,05 ml tesztvizsgálati plazmát 0,05 ml Actin reagenssel 120 másodpercen át inkubálunk, majd az elegyhez 0,05 ml CaCI2-oldatot adagolunk (0,02 mól). A trombin időt (TT) úgy mérjük, hogy 0,05 ml tesztvizsgálati plazmaoldathoz 0,05 ml fiziológiás sóoldatot és 0,05 ml trombint adagolunk (10 NIH egység/ml). Az (I) általános képletű vegyületeket a humán vagy állati plazmához széles koncentrációhatárokon belül adagoljuk abból a célból, hogy a meghosszabbítási hatást az APTT, PT és TT tesztvizsgálatokban meghatározzuk. A vérrögképződés idejének megkétszerezési koncentrációját minden tesztvizsgálatban lineáris extrapolálás segítségével határozzuk meg.
Állatok
Hím Sprague-DawIey-patkányokat (350-420 g testtömegű, Harlan Sprague-Dawley Inc., Indianapolis, IN) érzéstelenítünk xylazin (20 mg/kg, se.) és ketamin (120 mg/kg, se.) adagolásával, majd 37 °C hőmérsékleten vízzel melegített borításon tartjuk. A nyaki vénába infúzió céljára kanült vezetünk.
Artéria-véna rövidre zárási modell
A bal nyaki vénát és a jobb nyaki verőeret (artériát) kanül segítségével 20 cm hosszú polietilén PE 60 csővel rövidre zárjuk. Egy 6 cm középső nagyobb átmérőjű (PE 190) csövet építünk a rövidre zárásba, ahol 5 cm hosszúságban az üregben gyapotszál található. Ezt a középső részt súrlódási tömítéssel kötjük a hosszabb átívelések közé, és így a rövidre záró artéria-véna ágat teljessé tesszük. A rövidre záráson keresztül 15 percen át vért áramoltatunk keresztül, majd a gyapottöltetet óvatosan eltávolítjuk és tömegét megmérjük. A nedves gyapot tömegét levonjuk a gyapot és a thrombus összes tömegéből (J. R. Smith, BrJ Pharmacol. 77:29, 1982).
Artériasérülés FeCI3 modell
Középvonalú ventrális nyaki bemetszés segítségével a nyaki verőeret izoláljuk. Minden egyes artéria alá termoelemet helyezünk, és az ér hőmérsékletét szalagrekorder segítségével folyamatosan mérjük. Hosszantilag bevágott karmantyúövezetet (0,058 belső átmérő*0,077 külső átmérő*4 mm, Baxter Med. Grade Silicone) helyezünk minden egyes nyaki verőér köré közvetlenül a termoelem fölé. FeCI3-hexahidrátot oldunk vízben, és az oldat koncentrációját csak a FeCI3 tömegére kifejezve 20%-ra állítjuk be. Az oldatból az artéria sérülésének létrehozására és trombózis indukálására 2,85 μΙ mennyiséget pipettázunk a karmantyúba, és a termoelem hely mérés fölött az artériát ebben az oldatban áztatjuk. Az arteriális rögképződés és elzáródás a hőmérséklet gyors csökkenésével jelzett. Az elzáródás időtartamát percekben mérjük, és ez a FeCI3-adagolás és a gyors véredényhőmérséklet-esés között eltelt időtartam (K. D. Kurz, Thromb. Rés., 60:269, 1990).
Spontán trombolízis modell
In vitro kísérleti adatok azt mutatják, hogy a peptid trombininhibitorok a trombint inhibiálják és inhibiálnak más szerinproteázokat, mint például a plazmint és a szövet plazminogén aktivátort. A találmány szerinti vegyületek in vivő fibrinolízisinhibiálását spontán trombolízissebességnek a mérésével határozzuk meg. A meghatározást úgy végezzük, hogy jelzett egész vérrögöt helyezünk a tüdővéráramba. 1 ml patkányvért elegyítünk gyors ütemben 4 IU (Parké Davis) marhatrombinnal és 5 pCi (ICN) 125l humán fibrinogénnel, majd az elegyet azonnal szilikoncsőbe visszük, és egy órán át 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Az öregített thrombust (vérrögöt) a csőből eltávolítjuk, majd 1 cm-es darabokra vágjuk, ezután háromszor normál fiziológiás sóoldattal mossuk, végül minden egyes darabot gamma-számlálóval számlálunk. Egy ismert számlált értékű darabot ezután katéterbe szívunk, amelyet beültetünk a nyaki vénába. A katéter hegye a jobb pitvar felé mutat, és a vérrögöt a tüdőáramlásba történő cirkulálásra kibocsátjuk. A beültetés után egy órával a szívet és a tüdőt kimetsszük, majd külön-külön radioaktív tartalmukat számláljuk. A trombolízist az alábbi % formában fejezzük ki:
(injektált cpm-tüdő cpm) % trombolízis=-* 100 injektált cpm
A beültetett vérrög fibrinolitikus oldódása időfüggőén történik (J. P. Clozel, Cardiovas. Pharmacol., 12:520, 1988).
Koagulációs paraméterek
Fibrométer segítségével mérjük a plazma trombin időt (TT), továbbá az aktivált részleges tromboplasztin időt (APTT). A vérmintát a nyaki katéterből nyerjük, és nátrium-citrátot tartalmazó injekciós fecskendőben tá7
HU 224 915 Β1 roljuk (3,8%-os, 1 rész:9 rész vér). A TT-mérés céljából 0,1 ml patkányplazmát elegyítünk 37 °C hőmérsékleten 0,1 ml fiziológiás sóoldattal és 0,1 ml (30 U/ml Tris-pufferben; Parké Davis) marhatrombinnal. Az APTT mérése érdekében 0,1 ml plazmát és 0,2 ml APTT oldatot (Organon Teknika) 5 percen át 37 °C hőmérsékleten inkubálunk, majd az elegyhez a koaguláció megkezdéséhez 0,025 mol-os CaCI2-oldatot adagolunk. Az egyes tesztvizsgálatokat két párhuzamos mérésben végezzük, majd átlagot képezünk.
Biológia felszívódás index
A plazma trombin időt (TT) a bioaktivitásmértéken számítjuk, és ez az alapvegyület tesztvizsgálatát helyettesíti, mivel feltételezzük, hogy a TT-ben foglalt inkrementumok csak az alapvegyület által kifejtett trombininhibiálásból erednek. A trombininhibitor TT-re kifejtett idő hatását a vegyület érzéstelenített patkányoknak történő iv. pilula adagolása vagy az ébrenléti éheztetett patkányoknak történő orális adagolása után határozzuk meg. Mivel a vértérfogat korlátozott, illetve adott számú pont szükséges ahhoz, hogy meghatározhassuk azt az időtartamot, amely ahhoz szükséges, hogy a kezelés idejétől eljussunk a kezelés előtti értékekhez történő visszatérés időpontjáig, a mérésben két patkánypopulációt alkalmazunk. Minden egyes populációmintában váltakozó szekvenciális időpontokat alkalmazunk. Az idő előrehaladása során mért átlagos TT-értékek alapján számoljuk a görbe alatti területet (AUC). A biológiai felszívódás indexet az alábbi képlet alapján számoljuk (relatív aktivitási % formában megadott).
A plazma TT időtartam vagy előrehaladás görbe alatti területét (AUC) meghatározzuk és a dózishoz igazítjuk. Ezt a biológiai felszívódás indexet „relatív aktivitás %-nak nevezzük, és az alábbi képlet alapján számítjuk:
AUC iv. dózis po.
Alkalmazott vegyületek
A vizsgált vegyületek oldatait naponta frissen készítjük el normál fiziológiás sóoldatban, és pilulaként injektáljuk, vagy a kísérleti perturbáció előtt 15 perccel kezdődő infúzió segítségével adagoljuk, és az infúziót a teljes zavaró hatás időtartam alatt fenntartjuk. A pilulainjekció térfogata 1 ml/kg iv. adagolás esetében, és 5 ml/kg po. adagoláskor, illetve az infúzió térfogata 3 ml/óra.
Statisztikai eredmények
Az eredményeket ±SEM formában fejezzük ki. Egyutas varianciaanalízist végzünk, és így meghatározzuk a statisztikailag jelentős eltéréseket, majd Dunnett-tesztet alkalmazunk, hogy meghatározzuk, mely értékek különböznek. Az eltérés jelentőség szintje egyenlő értékek nulla hipotézisének csökkenésére P<0,05.
Alkalmazott állatok
Hím kutyákat (vadászkopók; 18 hónap-2 éves korú; 12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, New York
14516) éjszakán át éheztetünk, majd Purina által engedélyezett étellel táplálunk (Purina Mills, St. Louis, Missouri), a táplálást a dózis adagolása után 240 perccel végezzük. A kutyáknak vizet kívánság szerint adunk. A szobahőmérsékletet 66-74 °F (20-24 °C) értéken tartjuk; a levegő relatív nedvességtartalma 45-50%, és a világítást 0600-1800 órán át fenntartjuk.
Farmakokinetikai modell
A tesztvizsgálati vegyületet közvetlenül a dózis adagolása előtt formuláljuk úgy, hogy 5 mg/ml koncentrációban steril 0,9%-os fiziológiás sóoldatban oldjuk. A kutyáknak orális úton étkezéssel 2 mg/kg egyetlen dózis tesztvizsgálati vegyületet adagolunk. A fejhez tartozó vénából a dózis adagolása után 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 és 6 óra elteltével 4,5 ml vérmintákat veszünk. A mintákat citráttal kezelt Vacutainer-csövekben gyűjtjük, és a plazma centrifugálással történő redukálása előtt jégen tároljuk. A plazmamintákat dinitro-fenil-hidrazinnal származékká alakítjuk, majd nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC) segítségével tisztítjuk (Zorbax SB-C8 oszlop), eluens metanol/500 mmol-os nátrium-acetát (60:40 térfogat/térfogat), amelynek pH-értéke foszforsavval 7 értékre beállított. A tesztvizsgálati vegyület plazmakoncentrációját meghatározzuk, és ebből a farmakokinetikai paramétereket számítjuk, amelyek eliminációs sebességi állandó, Ke; teljes kiürülés, Clt; eloszlás térfogata, Vd; maximális plazmábani tesztvizsgálati vegyület koncentráció ideje, Tmax; Tmax esetén a tesztvizsgálati vegyület maximális koncentrációja, Cmax; plazma-félélettartam, t0,5; és görbe alatti terület, AUC; abszorbeált tesztvizsgálati vegyület frakció, F.
Koszorúérartéria-trombózis kutyamodellben
A kutyák sebészeti preparálását és műszerezését a Jackson és munkatársai, Circulation, 82, 930-940 (1990) közleményben leírtak szerint végezzük. Vegyes fajú vadászkopókat (6-7 hónapos, bármely nemű, Hazelton-LRE, Kalamazoo, Ml, USA) érzéstelenítünk nátrium-pentobarbital segítségével (30 mg/kg intravénás adagolás iv.). Ezután a kutyákat intubáljuk és szobalevegővel átfúvatjuk. A ki- és belégzett levegő térfogatát, illetve a légzés sebességét úgy állítjuk be, hogy a vér PO2-, PCO2- és pH-értékét a normálhatárértékek között tartsuk. Az ólom II ECG mérés céljára bőr alatti elektródokat vezetünk be.
A bal nyaki vénát és a közös nyaki verőeret bal oldali, középoldali nyakbemetszésen keresztül izoláljuk. Az artériás vérnyomást (ABP) egy előkalibrált Millar jelátalakító segítségével (MPC-500 model, Millar Instruments, Houston, TX, USA) folyamatosan mérjük. A jelátalakítót a nyaki verőérbe ültetjük be. A nyaki vénát kanüllel látjuk el, és a kísérlet alatt vérmintákat veszünk. Ezen túlmenően mindkét hátsó láb combi vénát kanüllel látjuk el, és a tesztvizsgálati vegyületet ezen keresztül adagoljuk.
Bal oldali mellkasfelmetszést alkalmazunk az ötödik bordaközben, és a szívet szívburki bölcsőbe helyezzük. Az első fő átlós szívkamrai ág közelében 1-2 cm
HU 224 915 Β1 hosszú bal oldali körív koronaér-artériát (LCX) izolálunk. 26 mérőhelyes tűhegyű szál anód elektródot (Teflon-borított, 30 mérőhelyes ezüsttel bevont rézszál elektródot) helyezünk az LCX-be (amely elektród 3-4 ml hosszú). Az elektródokat az artéria belső felületével érintkeztetjük (amelyet a kísérlet végén is ellenőrzünk).
A stimuláló áramkört úgy egészítjük ki, hogy a katódot szubkután (sc.) helyre helyezzük. Az LCX köré az elektród területe felett állítható műanyag eltömőt helyezünk. Előre kalibrált elektromágneses árammérő próbát (Carolina Medical Electronics, King, NC, USA) helyezünk az LCX köré az anód közelében, és a koronaér-véráramot (CBF) mérjük. Az eltömítőt úgy állítjuk be, hogy a vérbőség véráram válaszban 40-50%-os inhibiálást biztosítson, amelyet az LCX-ben 10 mp mechanikai elzáródás után észlelünk. Valamennyi haemodinamikai és ECG mérést adatrögzítő rendszerrel rögzítünk és analizálunk (M3000 model Modular Instruments, Malvern, PA. USA).
Thrombusképződés és vegyületadagolás időbeli elosztása
Az LCX belső részének elektrolitikus sérülését idézzük elő az anódra 100 μΑ egyenáram (DC) alkalmazásával. Az áramot 60 percen át fenntartjuk, majd akkor is, ha az éredény elzáródott, akkor is, ha ez az elzáródás nem történt meg, leállítjuk. A thrombusképződés spontán előrehalad mindaddig, ameddig az LCX teljesen eltömődik (ez 0 CBF-értéket jelent, illetve növekedés tapasztalható az S-T szegmensben). A találmány szerinti vegyület adagolását akkor kezdjük, amikor az eltömődött thrombust egy órán át hagytuk öregedni. A találmány szerinti vegyületet két órán át infúzió segítségével 0,5-1 mg/kg/óra dózisban adagoljuk, és ezzel párhuzamosan trombózist előállító hatóanyag adagolását is megkezdjük (amely lehet például szövet plazminogén aktivátor, sztreptokináz, APSAC). A tesztvizsgálati vegyület adagolása után három órával reperfúziót vizsgálunk. A koronaér-artéria újraeltömődése sikeres trombolízis után 0 CBF-értékkel mérhető, amely >30 percen át fennáll.
Hematológia és templát vérzésidő meghatározások μΙ térfogatú citráttal kezelt (3,8%) vérmintában (1 rész citrát:9 rész vér) az egész vérsejtszámot, a hemoglobinmennyiséget, illetve a hematokritértéket hema5 tológiaanalizáló segítségével (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner. Mount View, CA, USA) meghatározzuk. Fogíny templát vérzési idejét Simplate II vérzésidő-meghatározó eszközzel (Organon Teknika Durham, N. C., USA) meghatározzuk. Az eszközt úgy használjuk, hogy két vízszintes bemetszést végzünk a kutya bal állkapcsa felső vagy alsó fogínyén. Valamennyi bemetszés 3 mm széles és 2 mm mélységű. Miután a bemetszést elvégeztük, a vérzés időtartamát stopperórával mérjük. A vérzési időt közvetlenül a tesztvizsgálati vegyület adagolása előtt (0 perc), az infúzió közben 60 perc elteltével és a tesztvizsgálati vegyület adagolása végén (120 perc), valamint a tesztvizsgálat befejezésekor mérjük.
Valamennyi adatot egyutas variációanalízissel analizáljuk (ANOVA), majd Student-Neuman-Kuels utólagos hoc t-teszttel meghatározzuk a szignifikanciaértéket. ANOVA ismételt méréseket végzünk, hogy a szignifikanciakülönbségeket a kísérlet egyes időpontjai között meghatározzuk. A kapott értékeket akkor tekintjük statisztikusan eltérőnek, hogyha p<0,05 értéket tapasztalunk. Va25 lamennyi értéket ±SEM átlagértékben adunk meg. Valamennyi vizsgálatot az American Physiological Society előírásainak megfelelően végzünk. A vizsgálatok további részleteit leírták Jackson és munkatársai, J. Cardiovasc. Pharmacol., 21, 587-599 (1993) közleményben.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületeket, továbbá a templát vérzési idő tesztvizsgálatban 0,25, 0,50 és 1,0 mg/kg/óra dózis esetében is értékeltük.
A találmány szerinti vegyületek hatásossága azzal jellemezhető, hogy bármely fenti tesztvizsgálatban trombinra vagy jellemzőire pozitív hatást fejtenek ki.
Inhibíciós vizsgálat
A táblázatban szereplő adatok egy „enzimprofil méréssorozat eredményei. A profilt egy olyan mérés40 sorozat során rögzítettük, amelyben a találmány szerinti vegyületek inhibíciós hatását vizsgáltuk különböző szerinproteázok esetén.
Proteázinhibíció: Ka><106 l/mol
Vegyület Móltömeg Humán trombin Ökörtripszin Humán Xa Humán plazmin Humán nt-PA Humán UK
A 459,57 0,02 0,00 0,006 0,000 0,015 0,000
B 510,06 0,02 0,00 0,009 0,000 0,035 0,000
Az egyes proteázokkal elvégzett vizsgálatok mindegyikénél kaptunk egy Ka-t, amely egy, az inhibitor trombinhoz (vagy egyéb proteázhoz) való asszociáció- 55 jára vagy affinitására jellemző érték. A trombin hatásának következtében a fibrinogén oldhatatlan fibrinné alakul. A trombin ebben a reakcióban amidázként viselkedik. A vegyületek a trombingátló hatást az említett amidázaktivitás gátlása útján fejtik ki. 60
Az inhibíció mérésére szolgáló vizsgálati módszer magában foglal egy kromogén, valamint egy termékképződési méréssorozatot az inhibitor jelenlétében, illetve anélkül, 405 nm-en. Első lépésben, a kromogén anyagot és a trombint alkalmazva, inhibitor jelenléte nélkül egy standardgörbét veszünk fel. A hidrolízis mértékét (az egységnyi idő alatt keletkezett termék mennyiségét) a trombinkoncentráció függvényében áb9
HU 224 915 Β1 rázoljuk. Ezután elvégezzük a méréseket az inhibitor jelenlétében. A kapott hidrolízisértékekből a standardgörbe felhasználásával meghatározzuk a szabad trombin mennyiségét. A kötött trombin (az inhibitorhoz kötött trombin) mennyiségét úgy kaphatjuk meg, hogy kivonjuk a szabad trombin mennyiségét a kiindulási trombinértékből.
Ka= cti/(ctsz+cisz) cti: az inhibitorhoz kötött trombin koncentrációja ctsz: a szabad trombin koncentrációja cisz: a szabad inhibitor koncentrációja A nagyobb Ka-érték arra utal, hogy a több proteáz kötődik az inhibitorhoz. Ez erősebb asszociációt és nagyobb inhibíciót jelent. Az egyéb szerinproteázokkal, így például ökörtripszinnel, humán plazminnal vagy humán urokinázzal kapott nullás értékek arra utalnak, hogy a találmány szerinti vegyületek nem asszociálódnak ezekkel a proteázokkal, vagyis szelektívek a trombinra. A nullás érték valójában azt jelenti, hogy a vegyület proteázhoz való asszociációja nem mérhető érték (valószínűleg egy olyan hidrolízisgörbe, amely nem tér el attól a standardgörbétől), amelynek eredményeképpen az összes proteáz szabad állapotban van, ahelyett hogy a vegyülethez kötődne.
A találmány szerinti vegyületekkel kapott adatokból egyértelműen látszik a trombin szelektív inhibíciója a többi szerinproteázhoz képest.

Claims (5)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyületet, ahol az általános képletben
    R1 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, metilcsoport, -CO-(1-6 szénatomszámú alkil)-csoport vagy -CO-Ar általános képletű csoport, ahol Ar jelentése kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport;
    R2 jelentése pirrolidinocsoport, piperidinocsoport; vagy sóikat vagy szolvátjaikat, amelyeket ismert eljárással állítunk elő, alkalmas hordozóanyaggal gyógyszerkészítménnyé feldolgozzuk, amely alkalmas trombin inhibiálására, illetve olyan betegség vagy rendellenesség ellen, amelyben trombininhibiálás szükséges.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkalmazott vegyület hidrokloridsó forma.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítmény megelőző kezelésben adagolható.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkalmazott aktív hatóanyag a (II) képletű vegyület vagy ennek hidrokloridsója.
  5. 5. Az (I) általános képletű vegyületek alkalmazása trombin inhibiálására szolgáló gyógyszerkészítmény előállításánál.
HU9403675A 1993-12-21 1994-12-19 Process for the preparation of pharmaceutical compositions for inhibiting thrombin containing 2-phenyl-3-aroyl-benzothiophene derivatives HU224915B1 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/171,394 US5441965A (en) 1993-12-21 1993-12-21 Methods of inhibiting thrombin

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9403675D0 HU9403675D0 (en) 1995-02-28
HUT71344A HUT71344A (en) 1995-11-28
HU224915B1 true HU224915B1 (en) 2006-04-28

Family

ID=22623580

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9403675A HU224915B1 (en) 1993-12-21 1994-12-19 Process for the preparation of pharmaceutical compositions for inhibiting thrombin containing 2-phenyl-3-aroyl-benzothiophene derivatives

Country Status (21)

Country Link
US (3) US5441965A (hu)
EP (1) EP0664126B1 (hu)
JP (1) JPH07223947A (hu)
KR (1) KR950016744A (hu)
CN (1) CN1078070C (hu)
AT (1) ATE150308T1 (hu)
AU (1) AU693822B2 (hu)
CA (1) CA2138493A1 (hu)
CZ (1) CZ287725B6 (hu)
DE (1) DE69402173T2 (hu)
DK (1) DK0664126T3 (hu)
ES (1) ES2102154T3 (hu)
GR (1) GR3023537T3 (hu)
HU (1) HU224915B1 (hu)
IL (1) IL112048A (hu)
NO (1) NO313081B1 (hu)
NZ (1) NZ270185A (hu)
RU (1) RU94045846A (hu)
TW (1) TW321601B (hu)
UA (1) UA29446C2 (hu)
ZA (1) ZA9410084B (hu)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5811447A (en) 1993-01-28 1998-09-22 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6515009B1 (en) 1991-09-27 2003-02-04 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US5770609A (en) 1993-01-28 1998-06-23 Neorx Corporation Prevention and treatment of cardiovascular pathologies
US6395494B1 (en) 1993-05-13 2002-05-28 Neorx Corporation Method to determine TGF-β
US6251920B1 (en) 1993-05-13 2001-06-26 Neorx Corporation Prevention and treatment of cardiovascular pathologies
US5595722A (en) 1993-01-28 1997-01-21 Neorx Corporation Method for identifying an agent which increases TGF-beta levels
US6491938B2 (en) 1993-05-13 2002-12-10 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
JPH08510451A (ja) 1993-05-13 1996-11-05 ネオルックス コーポレイション 異常増殖性平滑筋細胞に関連した病因の予防及び治療
US5545641A (en) * 1994-10-20 1996-08-13 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting physiological conditions associated with an excess of bradykinin
US6562862B1 (en) 1994-10-20 2003-05-13 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting physiological conditions associated with an excess of neuropeptide Y
US5484808A (en) * 1995-02-09 1996-01-16 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting cell-cell adhesion
AU6277396A (en) * 1995-06-07 1996-12-30 Neorx Corporation Prevention and treatment of cardiovascular pathologies with tamoxifen analogues
DE69622472T2 (de) * 1995-06-07 2003-02-06 Eli Lilly And Co., Indianapolis Behandlung von Krankheiten durch Induktion von BEF-1 Transkriptionsfaktor
US5840747A (en) * 1995-06-07 1998-11-24 Eli Lilly And Company Calcium channel antagonists
US6545027B1 (en) 1995-06-07 2003-04-08 Eli Lilly And Company Methods of modulating NF-kB transcription factor
DE69634045T2 (de) 1995-10-31 2005-05-19 Eli Lilly And Co., Indianapolis Antithrombotische diamine
TW442286B (en) * 1996-02-28 2001-06-23 Pfizer New therapeutic uses of estrogen agonists
IL120266A (en) 1996-02-28 2005-05-17 Pfizer Use of estrogen antagonists and estrogen agonists in the preparation of medicaments for inhibiting pathological conditions
US5811437A (en) * 1996-05-21 1998-09-22 Eli Lilly And Company Methods of increasing nitric oxide synthesis
US5747509A (en) * 1996-06-03 1998-05-05 Schering Aktiengesellschaft Method for lowering plasma levels of lipoprotein(a)
ZA982877B (en) * 1997-04-09 1999-10-04 Lilly Co Eli Treatment of central nervous system disorders with selective estrogen receptor modulators.
US6025373A (en) * 1997-04-22 2000-02-15 Eli Lilly And Company Methods for reducing fibrinogen
CA2288144A1 (en) 1997-04-30 1998-11-05 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
AU7274198A (en) 1997-04-30 1998-11-24 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
JP2002513415A (ja) 1997-04-30 2002-05-08 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 抗血栓剤
AU7470098A (en) 1997-04-30 1998-11-24 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US6103740A (en) * 1997-08-21 2000-08-15 Eli Lilly And Company Methods for lowering platelet counts
US6187777B1 (en) 1998-02-06 2001-02-13 Amgen Inc. Compounds and methods which modulate feeding behavior and related diseases
NZ507151A (en) * 1998-04-08 2002-11-26 Lilly Co Eli Pulmonary and nasal delivery of raloxifene
FR2777784B1 (fr) * 1998-04-27 2004-03-19 Arepa Composition pharmaceutique a base d'estrogene et de progesterone
US6284756B1 (en) 1998-04-30 2001-09-04 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US6288108B1 (en) 1998-06-16 2001-09-11 Eli Lilly And Company Methods for increasing levels of acetylcholine
JP2002518329A (ja) 1998-06-16 2002-06-25 イーライ・リリー・アンド・カンパニー アセチルコリンレベルを増加させる方法
US6353003B1 (en) 1998-06-17 2002-03-05 Eli Lilly And Company Method for reducing levels of homocysteine and C-reactive protein
CA2287549A1 (en) * 1998-10-28 2000-04-28 Jefferson Ray Mccowan Antithrombotic agents
AU777770C (en) 1999-05-04 2005-11-10 Strakan International Limited Androgen glycosides and androgenic activity thereof
JP3887588B2 (ja) * 2002-08-30 2007-02-28 株式会社リガク Ｘ線回折による応力測定法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4133814A (en) * 1975-10-28 1979-01-09 Eli Lilly And Company 2-Phenyl-3-aroylbenzothiophenes useful as antifertility agents
US4418068A (en) * 1981-04-03 1983-11-29 Eli Lilly And Company Antiestrogenic and antiandrugenic benzothiophenes
US4380635A (en) * 1981-04-03 1983-04-19 Eli Lilly And Company Synthesis of acylated benzothiophenes
US5075321A (en) * 1987-03-24 1991-12-24 University Of Pennsylvania Methods of treating diseases characterized by interactions of IgG-containing immune complexes with macrophage Fc receptors using antiestrogenic benzothiophenes
US5395842A (en) * 1988-10-31 1995-03-07 Endorecherche Inc. Anti-estrogenic compounds and compositions
JP3157882B2 (ja) * 1991-11-15 2001-04-16 帝国臓器製薬株式会社 新規なベンゾチオフエン誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
HU9403675D0 (en) 1995-02-28
ATE150308T1 (de) 1997-04-15
AU693822B2 (en) 1998-07-09
NO944932D0 (no) 1994-12-19
ZA9410084B (en) 1996-06-19
IL112048A (en) 1999-03-12
EP0664126B1 (en) 1997-03-19
NO313081B1 (no) 2002-08-12
NO944932L (no) 1995-06-22
DK0664126T3 (da) 1997-09-01
RU94045846A (ru) 1996-10-20
ES2102154T3 (es) 1997-07-16
US5508292A (en) 1996-04-16
NZ270185A (en) 1997-07-27
TW321601B (hu) 1997-12-01
CZ322694A3 (en) 1995-09-13
GR3023537T3 (en) 1997-08-29
IL112048A0 (en) 1995-03-15
CA2138493A1 (en) 1995-06-22
HUT71344A (en) 1995-11-28
CN1107704A (zh) 1995-09-06
CZ287725B6 (en) 2001-01-17
DE69402173T2 (de) 1997-07-17
US5688813A (en) 1997-11-18
CN1078070C (zh) 2002-01-23
AU8155894A (en) 1995-06-29
US5441965A (en) 1995-08-15
UA29446C2 (uk) 2000-11-15
EP0664126A1 (en) 1995-07-26
JPH07223947A (ja) 1995-08-22
KR950016744A (ko) 1995-07-20
DE69402173D1 (de) 1997-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU224915B1 (en) Process for the preparation of pharmaceutical compositions for inhibiting thrombin containing 2-phenyl-3-aroyl-benzothiophene derivatives
US6583173B2 (en) Antithrombotic agents
US6214841B1 (en) Antithrombotic compound
JP2022513919A (ja) 血栓性または血小板塞栓性疾患および／または血栓性または血小板塞栓性合併症の治療および／または予防のための置換オキソピリジン誘導体
JPH07278093A (ja) 抗血栓物質
JPH07278091A (ja) 抗血栓症剤
JPH0841095A (ja) 抗血栓症活性を有する化合物
US6172100B1 (en) Antithrombotic agents
JPH107671A (ja) 抗血栓性ジアミド
JPH0597674A (ja) コラーゲナーゼ阻害剤
AU2001264495B2 (en) A combination product comprising melagatran and a factor viia inhibitor
EP0997465B1 (en) Azaindole derivatives and their use as antithrombotic agents
WO1995023809A1 (en) Antithrombotic agents
EP1244655B1 (en) Antithrombotic agents
EP0997460A1 (en) Benzothiophene compounds as antithrombotic agents and intermediates

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees