HU224223B1 - Antigénkészítmények, előállításuk és alkalmazásaik - Google Patents
Antigénkészítmények, előállításuk és alkalmazásaik Download PDFInfo
- Publication number
- HU224223B1 HU224223B1 HU9802419A HUP9802419A HU224223B1 HU 224223 B1 HU224223 B1 HU 224223B1 HU 9802419 A HU9802419 A HU 9802419A HU P9802419 A HUP9802419 A HU P9802419A HU 224223 B1 HU224223 B1 HU 224223B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- dsm
- asmp
- anmp
- substance
- aemp
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 43
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 8
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 38
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 20
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 19
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 claims abstract description 15
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 10
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 9
- 201000009053 Neurodermatitis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 72
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 53
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 53
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 51
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 39
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 37
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 33
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 31
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims description 30
- 241000893976 Nannizzia gypsea Species 0.000 claims description 28
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 28
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 26
- 241001045770 Trichophyton mentagrophytes Species 0.000 claims description 25
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 25
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 23
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 23
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 23
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 15
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 14
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 241000893980 Microsporum canis Species 0.000 claims description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 6
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 108010022457 polysaccharide peptide Proteins 0.000 claims description 6
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 claims description 5
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 5
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- 241000893966 Trichophyton verrucosum Species 0.000 claims description 4
- 229940055035 trichophyton verrucosum Drugs 0.000 claims description 4
- 241000893962 Trichophyton equinum Species 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- RPEBFFQWTDZBGR-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-5-amino-4-hydroxy-3-phosphonooxycyclohexene-1-carboxylic acid Chemical compound N[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H]1O RPEBFFQWTDZBGR-PBXRRBTRSA-N 0.000 claims description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 2
- 241001480037 Microsporum Species 0.000 claims description 2
- -1 ammonium sulfate Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000043 antiallergic agent Substances 0.000 claims description 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 claims 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 abstract description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 83
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 83
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 83
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 45
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 32
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 17
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 12
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 10
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 9
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 8
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 8
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 8
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 8
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 8
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 7
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 7
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 7
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 7
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 5
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 5
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 description 4
- 206010014025 Ear swelling Diseases 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 4
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 4
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 4
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 3
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 208000002029 allergic contact dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N Dinitrochlorobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C([N+]([O-])=O)=C1 VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 2
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 210000004417 patella Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058284 Allergy to arthropod sting Diseases 0.000 description 1
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 description 1
- 206010003399 Arthropod bite Diseases 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 206010006474 Bronchopulmonary aspergillosis allergic Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000256113 Culicidae Species 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 208000020226 Heiner syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000006877 Insect Bites and Stings Diseases 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 208000011623 Obstructive Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 239000006159 Sabouraud's agar Substances 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 206010070835 Skin sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 208000005279 Status Asthmaticus Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046752 Urticaria Pigmentosa Diseases 0.000 description 1
- 206010046742 Urticaria contact Diseases 0.000 description 1
- 206010046751 Urticaria physical Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 208000005707 acquired angioedema Diseases 0.000 description 1
- 230000001800 adrenalinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000006778 allergic bronchopulmonary aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009285 allergic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000028004 allergic respiratory disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 239000008308 lipophilic cream Substances 0.000 description 1
- 208000030179 maculopapular cutaneous mastocytosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000008585 mastocytosis Diseases 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003170 nutritional factors Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 208000002440 photoallergic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000002881 physical urticaria Diseases 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 208000012134 pseudoallergy Diseases 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 150000003873 salicylate salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 231100000370 skin sensitisation Toxicity 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0002—Fungal antigens, e.g. Trichophyton, Aspergillus, Candida
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2/00—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/72—Candida
- C12R2001/725—Candida albicans
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/921—Candida
- Y10S435/922—Candida albicans
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
A találmány keratinofilgombákból vagy élesztőgombákból előállított,poliszacharidokat és/vagy glikopeptideket tartalmazó antigénhatásúanyagokra, ezek előállítására és gyógyszerkészítményekben történőalkalmazásaira vonatkozik. Ezek az anyagok alkalmasak emlősökbenkülönböző allergiás megbetegedések, mint például alopecia, ekcéma,neurodermitisz, továbbá lovak nyári ekcémájának megelőzésére éskezelésére, valamint immunválasz modulálására. A találmány tárgyátképezik ezen anyagok előállítására alkalmas keratinofil- ésélesztőgombafajok is.
Description
A találmány keratinofilgombákból vagy élesztőgombákból előállított, poliszacharidokat és/vagy glikopeptideket tartalmazó antigénhatású anyagokra, ezek előállítására és gyógyszerkészítményekben történő alkalmazásaira vonatkozik. Ezek az anyagok alkalmasak emlősökben különböző allergiás megbetegedések, mint például alopecia, ekcéma, neurodermitisz, továbbá lovak nyári ekcémájának megelőzésére és kezelésére, valamint immunválasz modulálására.
A találmány tárgyát képezik ezen anyagok előállítására alkalmas keratinofil- és élesztőgombafajok is.
HU 224 223 Β1
A leírás terjedelme 28 oldal (ezen belül 6 lap ábra)
HU 224 223 Β1
A találmány keratinofilgombákból, valamint élesztőgombákból előállítható poliszacharidokat és/vagy glikopeptideket tartalmazó antigénkészítményekre vonatkozik, továbbá ezen antigénkészítmények előállítására szolgáló eljárásokra, ezeknek gyógyszeralapanyagokként és vakcinákként való használatára, beleértve - de nem kizárólag - az allergia megelőzését és kezelését és az immunválasz modulálását.
Az allergia valamilyen formában a humán populáció több mint 20%-át kínozza, és elterjedtségének, morbiditásának és mortalitásának aggasztó növekedése az elmúlt évtized folyamán oda vezetett, hogy mint első számú környezeti betegséget tartják számon [Sutton, Gould, Natúré, 366, 421-428 (1993)]. Az allergia hasonló mértékben sújtja a humán és állati populációkat.
Az allergia kifejlődésében kulcsszerepet játszanak az immunológiai reakciók [Paul, E. William (szerk.) Fundamental Immunology, Raven Press Books Ltd., New York (1984)]. Lényegében két különböző típusú allergiás reakciót írtak le. Az egyik az azonnali típusú túlérzékenység (immediate type hypersensitivity=ITH), amikor az allergénnel szembeni maximális allergiás válasz perceken, illetve órákon belül megfigyelhető. A második a késői típusú túlérzékenység (delayed type hypersensitivity=DTH). DTH esetében az allergénnel szembeni allergiás válasz rendszerint 24-48 óra múlva éri el maximumát. A legvalószínűbb, hogy az ITH túlnyomóan IgE útján közvetítődik, míg a DTH sokkal összetettebb. A DTH kialakulásában valószínűleg további sejtközvetített válaszok (azaz B- és T-limfociták) vesznek részt. Például ha allergiás donorállatokból limfocitákat és antitesteket viszünk át nem allergiás recipiens állatokra, a recipiensben DTH fejlődik ki [P. W. Askenase, J. Exp. Med., 138, 1144-1155 (1973)].
A környezeti antigénekkel való közvetlen érintkezésük miatt, az allergiák által leginkább sújtott szövetek az epiteliális szövetek, mégpedig elsősorban a bőr. Bőrklinikákon például az akut allergiás kontakt dermatilis és a krónikus allergiás kontakt ekcéma teszi ki az összes dermatózis több mint 15%-át. Embernél az összes asztmás eset körülbelül 20%-át allergiás asztma okozza.
ITH-csoportba sorolható allergiás betegség például az atópiás ekcéma, az allergiás hörgőasztma (asthma bronchiale), szénaláz, orrnyálkahártya-gyulladás (rhinitis) és kötőhártya-gyulladás (conjunctivitis). Ezek krónikus formává is fejlődhetnek és nem tekinthetők kizárólag IgE-függő reakcióknak. DTH-ra példa az akut allergiás kontakt dermatilis és a krónikus allergiás kontakt ekcéma, amely bőrfolyamattal társult DTH-ként (IV típus) tovább osztályozható. Egy ilyen beteg megelőzőleg kontaktus révén szenzitizálódhatott egy allergénnel és túlérzékennyé vált. Az allergénnel való újbóli kontaktus akut, szubakut vagy krónius gyulladásos kontakt dermatitist eredményez.
Állatorvosi klinikumból vett példa az allergiás dermatitisre a nyári ekcéma, amelyet Sweet vagy Queensland Itch-nek is neveznek. A nyári ekcéma a lovak allergiás dermatitise, amely az allergiás betegségek atópiás formájához (amely I és IV típusú reakciókat foglal magában) tartozik. A nyári ekcémát a Culicidae és Ceratopgonidae családhoz tartozó szúnyogok csípése váltja ki, és a sörény, farok és has területén állandó eróziókkal (hámhiányok) és exszudátumokkal (izzadmányképződés) járó bőrléziók (sérülések) jellemzik. A megtámadott állatok erős bőrérzékenységgel reagálnak az irritációkra (ingerekre), például érintésre, esőre, szélre stb., amelyek lerontják általános egészségi állapotukat és teljesítőképességüket. Mint a többi allergiánál, úgy gondolják, hogy ennek a betegségnek a kialakulását is táplálkozási faktorok befolyásolják. Ennek a betegségnek a tünetei márciustól szeptemberig láthatóak, míg a bőr allergén által indukált érzékenysége egész évben megfigyelhető. A nyári ekcéma egy érdekes általános modellrendszerül szolgál az allergia tanulmányozásához és az allergiaellenes anyagok kifejlesztéséhez.
Az allergiára számos kezelést javasoltak a klinikai képtől függően. Az akut allergiás kontakt dermatítis, krónikus allergiás kontakt ekcéma és/vagy atópiás ekcéma kezelésére rendszerint glikokortikoszteroidokat, antimikrobiális anyagokat, gyulladásellenes gyógyszereket és/vagy kalciumot tartalmazó lipofil krémeket használnak. A nyári ekcéma kezelésére különböző vegyületeket alkalmaztak lokálisan vagy parenterálisan, például szteroidkészítményeket, inszekticideket, különböző galenusi készítményeket, szalicilátokat, olajokat vagy mikroorganizmusokból izolált peptideket. Az említett kezelések azonban csak a tünetekkel és nem az allergia okaival foglalkoznak.
A gyenge immunválasz vagy az immunelégtelenség gyakran fontos szerepet játszik az allergia kifejlődésében. Ennélfogva immunterápiás módszereket, így például immunstimulátorokat - mint a BCG, levamiszol és más stimulátorok - is használtak az ekcéma, atópiás ekcéma, bőrabscessusok (tályogok) és autoimmun betegségek kezelésére A. M. Tschernucha (szerk.) Koscha, kiadó: Medicina, Moszkva (1982)].
Bolha-allergiás dermatilis kezelésére eredményesen alkalmaztak antitesteredetű peptideket (8913737 számú nagy-britanniai szabadalmi bejelentés). Atópiás ekcéma kezelésére viszonylag jó eredményekkel alkalmaztak deszenzibilizálást [A. M. Tschernucha (szerk.) Koscha, kiadó: Medicina, Moszkva (1982)].
Az allergia kezelésében használt számos különböző megoldás ellenére - tudomásunk szerint - keratinofilgombákból vagy élesztőkből készített antigénhatású vegyületeket nem használtak eddig allergia kezelésére.
A találmány értelmezése szerint az „oldható” vagy „nem oldható” kifejezés vizes oldatban való oldhatóságra vonatkozik. Az „antigénkészítmény” kifejezés minden olyan összetett anyagra vonatkozik, amely antigén- vagy immunogénválaszt képes kiváltani. Az „immunválaszt moduláló” kifejezés a találmány szerinti antigénkészítmények immunválaszt stimuláló vagy fokozó képességére vonatkozik, például - mint bemutattuk - sejttenyészetben képesek stimulálni limfociták proliferációját [részletes áttekintés található a következő közleményekben: Strube et al., Vet. Med. Rév., 60,
HU 224 223 Β1
3-15 (1989); M. Büttner, Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis., 16, 1-10(1993)].
Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy a keratinofilgombákból vagy élesztőgombákból előállítható antigénkészítményeket fel lehet használni allergiák megelőzésére és kezelésére, valamint az immunválasz modulálására, főként emlősökben.
Eljárásokat fejlesztettünk ki antigénhatású anyag keratinofilgombákból, továbbá élesztőgombákból való előállítására. Az ezekkel az eljárásokkal előállítható antigénkészítmények poliszacharidokat és/vagy glikopeptideket tartalmaznak. Az antigénkészítményeket gyógyszerkészítmények és vakcinák gyanánt, állatok és emberek kezelésére, főképpen allergiák kezelésére és immunválasz modulálására használhatjuk. Magától értetődik, hogy a találmány szerinti gyógyszerkészítmények immunológiai és farmakológiai szempontból hasznosíthatók.
A találmány szerinti antigénhatású anyagot keratinofilgombákból vagy élesztőgombákból származó anyagból is elő lehet állítani, például gomba- vagy élesztősejtfalból.
A találmány szerinti antigénkészítmények előállítása céljára három különböző eljárást fejlesztettünk ki. Ezen eljárások szerint három különböző antigénfrakciót (ASMP, ANMP vagy AEMP) - a következőkben ezeket általában „frakciók”-nak nevezzük - készíthetünk keratinofilgombákból, valamint élesztőkből. Az egynél több frakciót tartalmazó antigénkészítményeket a továbbiakban „komplex készítmény-nek vagy röviden „komplexének nevezzük.
1. eljárás: az ezen eljárás szerint előállítható frakció olyan antigénhatású oldható anyagból áll, amely poliszacharidot és/vagy glikopeptideket tartalmaz (ASMP). Az eljárás, amelyet az 1. példa részletesen tárgyal, a következőket tartalmazza:
Keratinofil gombákat vagy élesztőgombákat tenyésztünk agarlemezeken, például úgy, ahogyan ez az EP 0564620 számú európai szabadalmi leírásban szerepel. Előnyös táptalaj például az Oxoid-féle malátakivonatot tartalmazó agar (mait extrakt agar). Más táptalajok is használhatók, ha azok biztosítják a keratinofilgombák és élesztő növekedését. A kapott gombabiomasszát kiemeljük és alkáliák vizes oldatával kezeljük. Előnyös alkalikus vizes oldat a nátrium-hidroxid- vagy kálium-hidroxid-oldat 0,1-5%-os (tömeg/térf.) előnyös koncentrációkban. Az alkalikus kezelést előnyösen 20-150 °C-on 30 órán át végezzük. A vizes alkalikus körülmények mellett végzett feldolgozás után a szilárd és folyékony fázist például centrifugálással, szűréssel vagy ülepítéssel választjuk el. Előnyös, ha az elválasztást centrifugálással végezzük, például körülbelül 3500 g mellett, amely a gombasejttörmelékek jó elválasztását biztosítja. A vizes alkalikus körülmények közötti kezelés, valamint az elválasztási lépés többször ismételhető.
Az alkalikus kezelés után a kapott felülúszót vizes savas körülmények között kezeljük, például 0,2-1,5 M szerves savval vagy 0,05-1 M ásványi savval. Használhatunk például sósavat vagy ecetsavat, előnyösen 2,5-4,5 pH-értékek között. Előnyös, ha a vizes savas körülmények közötti kezelést 2-4 órán át végezzük, 4-8 °C hőmérsékleten, és ezután következik a szilárd és folyékony rétegek elválasztása. A vizes savas körülmények közötti kezelés, valamint az elválasztási lépés többször ismételhető, előnyösen a fent említett körülmények mellett. Az elválasztási lépésben kapott felülúszót ezután kicsapjuk. A kicsapást előnyösen szerves oldószer, például alkohol - ilyen egy rövid szénláncú alkanol, mint például a metanol vagy etanol - hozzáadásával végezzük. Egy térfogat felülúszó és 2-5 térfogat alkohol arány az antigénhatású anyag jó kicsapódását eredményezi. Használhatók a szakterületen jártas szakemberek által ismert nem alkoholos kicsapási eljárások is, például ammónium-szulfáttal vagy más sókkal való kicsapással szintén elérhető az antigénhatású anyag kicsapódása. A szilárd fázist további elválasztási lépésnek vetjük alá, előnyösen a fent leírt körülmények között. A kapott szilárd fázist kinyerjük és ha kívánt, vizes oldatban - előnyösen desztillált vízben, melyből rendszerint 25-100 ml-t használunk - feloldjuk. Végül az ASMP-készítményt liofilizálhatjuk és száraz állapotban hosszabb ideig tárolhatjuk.
2. eljárás: az ezen eljárás szerint előállítható frakció olyan antigénhatású oldhatatlan anyagból áll, amely poliszacharidot és/vagy glikopeptideket tartalmaz (ANMP). Az eljárást, amelyet a 2. példa részletesen tárgyal, a következőkben foglaljuk össze röviden:
Keratinofilgombákat vagy élesztőket tenyésztünk agarlemezeken, például az EP 0564620 számú európai szabadalmi leírásban foglaltak szerint. Előnyös táptalaj például az Oxoid-féle mait extract agar. Más táptalajok is használhatók, amennyiben biztosítják a keratinofilgombák vagy élesztők növekedését. A kapott gombabiomasszát kiemeljük és alkáliák vizes oldatával kezeljük. Előnyös alkalikus vizes oldat a nátrium-hidroxid- vagy kálium-hidroxid-oldat, előnyösen 0,1-5% (tömeg/térf.) koncentrációkban. Az alkalikus kezelést előnyösen 20-150 °C-on 30 órát át végezzük. A vizes alkalikus körülmények mellett végzett feldolgozás után a készítmény szilárd és folyékony fázisát elválasztjuk, például centrifugálással, szűréssel vagy ülepítéssel. Előnyös, ha az elválasztást centrifugálással végezzük, például körülbelül 3500 g mellett. A vizes alkalikus körülmények közötti kezelést, valamint az elválasztási lépést többször ismételhetjük. Az alkalikus kezelés után a szilárd fázist ásványi vagy szerves savakkal kezeljük. A szilárd fázishoz előnyösen 0,2-1,5 M ecetsavat vagy 0,05-1 M sósavat adunk és 0,5-3 órán át 70-100 °C hőmérsékleten tartjuk. A savas kezelés után a szilárd fázist vizes oldattal, előnyösen desztillált vízzel, mossuk. Előnyös, ha a mosást körülbelül ötször ismételjük. Végül a szilárd fázist desztillált vízben szuszpendáljuk.
3. eljárás: az ezen eljárás szerint előállítható frakció olyan antigénhatású exogén anyagból áll, amely poliszacharidot és/vagy glikopeptideket tartalmaz (AEMP).
HU 224 223 Β1
Az eljárást, amelyet a 3. példában részletesen tárgyalunk, a következőképpen foglaljuk össze röviden:
A keratinofilgombákat vagy élesztőket vizes oldatban inkubáljuk vagy folyékony táptalajban tenyésztjük 240 óra hosszat (az oldat vagy tenyészet térfogatát itt primer volumennek (PV) nevezzük). Használhatunk desztillált vizes (lásd: 3.I. példa) és használhatjuk az EP 0564620 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett táptalajokat. Inkubálás vagy tenyésztés után a gombasejteket elválasztjuk, például centrifugálással, szűréssel vagy ülepttéssel, előnyösen centrifugálással a fent leírt körülmények mellett. A kapott felülúszót ezután liofilizáljuk, majd vízben oldjuk. Előnyös, ha a víz térfogata a primer volumen (PV) 0,1-0,2 térfogatával azonos. A kapott oldatot ezután kicsapjuk. A kicsapást úgy végezzük, hogy megfelelő szerves oldószert, például alkoholt - ilyen egy rövid szénláncú alkanol, például a metanol vagy etanol - adunk a felülúszóhoz. Egy térfogat felülúszó és 2-5 térfogat alkohol arány az antigénhatású anyag jó kicsapódását eredményezi. A gyakorlott szakemberek által ismert más, nem alkoholos kicsapási eljárások is használhatók, például az ammónium-szulfáttal vagy más sóval végzett kicsapás szintén biztosítja az antigénhatású anyag kicsapódását. A kapott csapadékot kinyerjük, és ha kívánt, vizes oldószerben, előnyösen desztillált vízben, oldjuk. Előnyös, ha a csapadék 0,5-50 mg-ját 1 ml vizes oldószerben oldjuk fel. Végül az AEMP oldatát liofilizálhatjuk és száraz állapotban hosszabb ideig, előnyösen 2-10 °C-on, tárolhatjuk.
Az előnyben részesített gombanemzetségek, amelyekből a fent meghatározott frakciók előállíthatók, a következők: Trichophyton, Microsporum és Candida.
Előnyös fajok:
- Trichophyton equinum,
-Trichophyton mentagrophytes,
- Trichophyton sarkisovii,
- Trichophyton verrucosum,
- Microsporum canis,
- Microsporum gypseum, vagy
- Candida albicans.
A fent említett fajok előnyös törzsei:
-Trichophyton equinum DSM No. 7276,
- Trichophyton mentagrophytes DSM No. 7279,
-Trichophyton sarkisovii DSM No. 7278
- Trichophyton verrucosum DSM No. 7277
- Mikcrosporum canis DSM No. 7281
- Mikcrosporum canis var. obesum DSM No. 7280
- Mikcrosporum canis var. distortum DSM No. 7275
- Mikcrosporum gypseum DSM No. 7274, vagy
- Candida albicans DSM No. 9656
A fent megnevezett törzseket a DSM-intézményben („Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1B, D-38124, Németország) a Budapesti Egyezmény mikroorganizmusok letétjéről rendelkező cikkelyei alapján helyeztük letétbe. Az összes törzset, kivéve a Candida albicans DSM No. 9656 törzset, az 1991. 10. 21-én benyújtott USSR 5006861 számú szovjetúnióbeli szabadalmi bejelentésben és a megfelelő bejelentésekben, azaz az
1992. 10. 17-én benyújtott EP 0564620 számon közzétett európai szabadalmi bejelentésben előzőleg leírták.
A frakciókat attól a fajtól függően neveztük el - lásd alább - amelyekből ezeket előállítottuk.
A törzsekből előállított frakciók neve:
(i) Trichophytum equinum, ASMP-TE, ANMP-TE vagy AEMP-TE, (ii) Trichophytum mentagrophytes, ASMP-TM, ANMP-TM vagy AEMP-TM, (iii) Trichophyton sarkisovii, ASMP-TS, ANMP-TS vagy AEMP-TS, (iv) Trichophyton verrucosum, ASMP-TV, ANMP-TV vagy AEMP-TV, (v) Microsporum canis, ASMP-MC, ANMP-MC vagy AEMP-MC, (vi) Microsporum gypseum, ASMP-MG, ANMP-MG vagy AEMP-MG, (vii) Candida albicans, ASMP-CA, ANMP-CA vagy AEMP-CA.
Ahol a specifikus törzsre vonatkozóan adunk információt, ott a faj rövidítését a speciális DSM-letéti szám követi, például: az AEMP-CA9656 jelölés a DSM No. 9656 letéti számú Candida albicans törzsből előállítható AEMP-frakcióra utal.
A fent leírt eljárások bármelyike által (1-3) meghatározott módon előállítható frakciók legalább egy olyan egyedi antigént tartalmaznak, amely a fent hivatkozott gombák közül legalább egyből előállítható. A találmány szerinti antigénkészítmények a fent meghatározott frakciók közül legalább egyet tartalmaznak, vagy ezek kombinációját tartalmazzák.
Az 1. és 3. példában leírt antigénkészítmények (ASMP és AEMP):
1. monoszacharidokat, aminosavakat és nukleotidokat tartalmaznak, amelyek túlnyomó részben polimerszerkezetekhez kötöttek és kisebb részben szabad monomerek;
2. főképpen a következő monoszacharidegységekből állnak: mannóz, galaktóz, glükóz és xylóz és mások, különböző relatív mennyiségben;
3. ezen monoszacharidok jelentős mennyiségéből képződött polimerstruktúrák keverékét tartalmazzák, s a polimerstruktúrák jelentős részének a molekulatömege nagyobb mint 20 000 kD;
4. kis mennyiségű szabad vagy kötött aminosavat tartalmaznak;
5. kis mennyiségű DNáz l-gyel való emésztéssel szemben érzékenységet mutató DNS-molekulákat tartalmaznak.
Az ASMP- és AEMP-antigénkészítmények MMRspektroszkópos vizsgálatával az 1-4. ábrán látható MMR-spektrogrammokat kaptuk.
A kémiai eltolódások és a szignálok sokfélesége (összefoglalást lásd a 12. táblázatban) egyezik a szénhidrátokra és amínosavakra vonatkozó szakirodalmi adatokkal.
Az AEMP- és ASMP-frakcióknál - ilyenek például a következők: MG 7274, TM 7279 és CA 9656 - a szénhidrátszignálok egy 3,2-5,5 ppm tartományt fednek át,
HU 224 223 Β1 az aminosavszignálok pedig egy 0,75-3,45 ppm szakaszt (α-protonok nélkül).
Az ASMP is típusos szignálokat mutat az acetát-CH3-ra 1,92 ppm-nél.
Az AEMP-frakciók szintén típusos szignálokat mutatnak diszacharidokra és aminosavakra. Például a TM 7279 spektruma aromás aminosavakra - mint a fenil-alanin, tirozin és triptofán - mutat szignálokat a 7,15-7,9 ppm szakaszban.
ASMP vagy AEMP egyedi frakciók vonatkozásában a 0,1-50 mg/ml koncentrációkat tartjuk előnyösnek. Az ANMP egyedi frakcióknál a 0,1-5% (térf./térf.) koncentrációkat helyezzük előnybe.
A találmány szerinti antigénkészítmények előnyös kiviteli formái például a következő frakciókombinációkat (komplexek) tartalmazzák:
A komplex 1 ASMP-TM-et, ASMP-MG-t és ASMP-CA-t tartalmaz. Előnyös, ha az egyes frakciók koncentrációja 0,1-50 mg/ml. A komplex 1 egy nagyon előnyös kiviteli formája az ASMP-TM7279, ASMP-MG7274 és ASMP-CA9656 kombinációját tartalmazza.
A komplex 1.1 ASMP-MG-t és ASMP-CA-t tartalmaz. Előnyös, ha az egyes frakciók koncentrációja 0,1-50 mg/ml. A komplex 1.1 egy nagyon előnyös kiviteli formája az ASMP-MG7274 és ASMP-CA9656 kombinációját tartalmazza.
A komplex 2 ANMP-TM-et, ANMP-MG-t és ANMP-CA-t tartalmaz. Előnyös, ha az egyes frakciók koncentrációja 0,1-5% (térf./térf.). A komplex 2 egy nagyon előnyös kiviteli formája az ANMP-TM7279, ANMP-MG7274 és ANMP-CA9656 kombinációját tartalmazza.
A komplex 3 AEMP-TM-et, AEMP-MG-t és AEMP-CA-t tartalmaz. Előnyös, ha az egyes frakciók koncentrációja 0,1-50 mg/ml. A komplex 3 egy nagyon előnyös kiviteli formája az AEMP-TM7279, AEMP-MG7274 és AEMP-CA9656 kombinációját tartalmazza.
A komplex 4 ANMP-t és AEMP-t tartalmaz. A frakciók következő kombinációi előnyösek: (1) ANMP-CA és AEMP-TM, vagy (2) ANMP-MG, ANMP-TM és AEMP-TM. Előnyös, ha az ANMP koncentrációja 0,1-5% (térf./térf.) és ha az AEMP koncentrációja 0,1-50 mg/ml. A komplex 4 nagyon előnyös kiviteli formái az alábbi kombinációkat tartalmazzák:
4.1 ANMP-CA9656 és AEMP-TM7279;
4.2 ANMP-MG7274, ANMP-TM7279 és AEMPTM7279.
A komplex 5 ANMP-t és ASMP-t tartalmaz. Előnyös az ANMP-MG, ANMP-TM és ASMP-CA kombinációja. Az egyes ANMP-frakciók előnyös koncentrációja 0,1-5% (térf./térf.) és az egyes ASMP-frakciók koncentrációja 0,1-50 mg/ml. Nagyon előnyös az ANMPMG7274, ANMP-TM7279 és ASMP-CA9656 kombinációja.
A találmány szerinti további előnyös antigénkomplexek például a következők: ASMP és AEMP, vagy ASMP és AEMP és ANMP, az ASMP és AEMP vonatkozásában 0,1-50 mg/ml koncentráció mellett és az
ANMP vonatkozásában 0,1-15% (térf./térf.) koncentrációk mellett.
A találmány szerinti antigénkészítményeket megfelelő, fiziológiailag elfogadható olyan vivőanyagokkal együtt alkalmazhatjuk, amelyek nem okoznak káros reakciókat. Ezek közé tartoznak a pufferek, oldatok vagy adjuvánsok, mint például a sóoldatok, laktát tartalmú oldatok, vagy a Ringer-oldat. Kedvelt vivőanyagok például a következők: A vivőanyag: 0,85% (tömeg/térf.) nátrium-kloridot tartalmazó vizes oldat; B vivőanyag: 5% (tömeg/térf.) glükózt, 0,3% (tömeg/térf.) „lab-lemco” húskivonatot (Oxoid) és 0,1% (tömeg/térf.) élesztőkivonatot tartalmazó vizes oldat; C vivőanyag: RPMI 1640 táptalaj (beszerezhető a Serva cégtől, kát. szám: 12-702).
A találmány szerinti antigénkészítmények vagy per se alkalmazhatók, vagy mint injekciós oldatok, krémek, spray-k, aeroszolok, tabletták, vagy pedig a szakterületen gyakorlott szakemberek által ismert egyéb alkalmazási formákban is. A találmány szerinti készítmények ezenkívül nagyon hatékony vakcinákként szolgálhatnak.
A találmány szerinti antigénkészítmények képesek az immunrendszer sejtjeinek proliferációját stimulálni, és ezáltal tudják modulálni az immunválaszt. A találmány szerinti antigénkészítmények továbbá meg tudják gátolni a humán keratinociták proliferációját.
A találmány szerinti antigénkészítmények nagy fokú rezisztenciát adhatnak az allergiás reakciókkal szemben, főképpen az epiteliális szöveteknek, leginkább pedig a bőrnek. Jelentős szerepük van az allergia megelőzésében és gyógyításában. Nálunk nem mutattak káros mellékhatásokat, amint ezt in vivő, laboratóriumi állatokban (tengerimalacok és fehér egerek) és lovakban (félvér és izlandi lovak) kimutattuk.
Pontosabban, akut allergiás dermatitis és bőrléziók eredményesen gyógyíthatók mellékhatások nélkül a találmány szerinti antigénkészítmények alkalmazásával, azaz vakcinálásával. A találmány szerinti antigénkészítmények intramuszkuláris injekciója (injekciói) után a bőr allergiás gyulladásának tünetei, a viszketegség és az allergiás dermatitisben szenvedő egyének bőrérzékenysége megszűnhet. Az utolsó injekció után 2-8 héten belül minden allergiás panaszból teljes felgyógyulást értünk el, és megszűnt a bőr allergén által indukált érzékenysége az irritánsokkal szemben. Ezenkívül, az utolsó injekció után 1-6 héten belül megszűnhet a viszketegség.
Egy előnyös kiviteli alakban a találmány szerinti antigénkészítmények védelmet nyújtanak a lovaknak, különösen az izlandi lovaknak, az úgynevezett nyári ekcéma ellen, és e betegségből felgyógyulást eredményeznek. A találmány szerinti készítményekből 1-3 intramuszkuláris vagy intradermális injekció után a nyári ekcémás lovak kigyógyulhatnak a nyári ekcémából, vagy védettek lehetnek a nyári ekcémával szemben. Előnyös az 1 és 1.1 komplex.
Egy további előnyös kiviteli alakban a találmány szerinti antigénkészítmények védelmet adnak emlősöknek alopecia ellen, és gyógyulást alopeciából. A ta5
HU 224 223 Β1 lálmány szerinti készítményekből 1-3 intramuszkuláris vagy intradermális injekció után az alopeciától szenvedő emlősök kigyógyulhatnak alopeciából vagy védettek lesznek alopeciával szemben. Előnyös az 1 vagy 1.1 komplex. 5
Egy másik előnyös kiviteli alakban a találmány szerinti antigénkészítmények javítják a szőrzet állapotát, és az emlősök évszakhoz kötött vedlését. 1-3 intramuszkuláris vagy intradermális injekció után a szőrzet állapota jelentősen javul, és a tökéletlenül vedlő egye- 10 deknél a teljes vedlés évszaknak megfelelő, igazi bundát (szőrzetet) eredményezhet. Előnyös az 1 vagy 1.1 komplex.
Egy másik előnyös kiviteli alakban a találmány szerinti antigénkészítmények védelmet nyújtanak ekcéma 15 ellen, és gyógyulást ekcémából. A találmány szerinti antigénkészítményekkel való 1-3 intradermális vagy intramuszkuláris injekció után, vagy e készítményekkel való helyi kezelés után az ekcémában szenvedő emlősök azaz emberek, meggyógyulhatnak az ekcémából, 20 vagy védettek lesznek ekcémával szemben. Előnyösek az ASMP-MG, ASMP-CA és ASMP-TM, azaz ASMP-MG7274, ASMP-CA9656 és ASMP-TM7279 frakciók vagy az 1 és 1.1 komplex.
Egy további előnyös kiviteli alakban a találmány sze- 25 rinti antigénkészítmények védettséget nyújtanak neurodermitis ellen, és felgyógyulást e betegségből. A találmány szerinti antigénkészítményekkel való helyi kezelés után a neurodermitisben szenvedő emlősök, illetve emberek, kigyógyulhatnak neurodermitisből, vagy védettek 30 lehetnek ellene. Előnyösek az ASMP-MG, ASMP-CA és ASMP-TM, azaz ASMP-MG7274, ASMP-CA9656 és ASMP-TM7279 frakciók vagy az 1 és 1.1 komplexek.
A találmány szerinti antigénkészítményeket fel lehet használni különböző indikációk kezeléséhez. Ilye- 35 neket ír le a következő kiadvány: Η. H. Peter (szerk.): „Klinische Immunologie”, Urban és Schwarzenberg, München, Németország (1991), például:
1. Allergiás légúti betegségek
1.1. allergiás rhinitis és conjunctivitis 40
1.1.1. évszakhoz kötött rhino-conjunctivitis
1.1.2. állandó rhinitis
1.2. tüdőasztma (asthma bronchiale)
1.3. status asthmaticus
1.4. gyermekek asztmája
1.4.1. fertőző bronchiolitis utáni obstruktív tüdőbetegség
1.4.2. enyhe, időszakos, vagy enyhe, állandó tüdőasztma
1.4.3. erős, állandó tüdőasztma
2. Allergiás bronchopulmonális aspergillózis
3. Ételallergiák
3.1. IgE-közvetített ételallergia
3.1.1. csecsemők IgE-közvetített ételallergiája
3.1.2. fiatalkorúak és felnőttek IgE-közvetített ételallergiája
3.2. IgG- és T-sejt-közvetített ételallergiák
3.3. Tehéntejjel szembeni túlérzékenység (intolerancia)
3.4. Heiner-szindróma
3.5. Eozinofil gasztroenteropátia
3.6. Genuin coeliakia
4. Rovar csípés/szúrás allergia
5. Csalánkiütés (urticaria) minden formája
5.1. kontakt urticaria
5.2. allergiás reakciókkal járó urticaria
5.3. prosztaglandinszintézis-erősítőkkel és -inhibitorokkal szembeni intoleranciával járó urticaria (pszeudoallergia)
5.4. fizikai urticaria
5.4.1. ermatográfia (urticaria factitia)
5.4.2. kolinerg és adrenerg urticaria
5.4.3. hidegallergia
5.4.4. fényallergia
5.4.5. nyomásallergia
5.4.6. a fizikai urticaria további ritka formái
5.5. érgyulladással járó urticaria
5.6. mastocytosis és urticaria pigmentosa
5.7. fertőző betegségekkel járó urticaria
5.8. immunthyreoiditisszel járó urticaria
5.9. urticaria és amiloidózis
6. Angioödéma
6.1. öröklött angioneurotikus ödéma (HANE=hereditary angioneuroticoedema)
6.2. szerzett angioneurotikus ödéma
7. Atópiás dermatitis, atópiás ekcéma
8. Gyógyszerrel kapcsolatos allergia
1. táblázat
A Candida albicans (DSM No. 9656) tulajdonságai és jellemzői
| A törzs tulajdonságai és jellemzői | DSM No. 9656 | Epidémiás törzs: No. 008 |
| A tenyészet leírása | Sabouraud agaron a 10 napos telep krémes sima, puffadt, csillogó, és kiemelkedő, középen bemélyedéssel; a telep széle szabályos, átmérője: 18-22 mm | Sabouraud agaron a 10 napos telep krémes sima, puffadt és csillogó, ráncos részekkel, a telep széle szabálytalan, átmérője 15-18 mm |
| Morfológiai jellemzők | A gömb alakú ovális blasztospórák mérete 3,5-5 *5-8 pm, a pszeudohifák szélessége 5-8 pm, a hifák szélessége 2-3 pm. Rizs-agaron a klamidospórák átmérője 13-16 pm | A gömb alakú ovális blasztospórák mérete 3,5-5x5-8 pm, a pszeudohifák szélessége 5-8 pm, a hifák szélessége 2-3 pm. Rizs-agaron a klamidospórák átmérője 13-16 pm |
HU 224 223 Β1
1. táblázat (folytatás)
| A törzs tulajdonságai és jellemzői | DSM No. 9656 | Epidémiás törzs: No. 008 |
| Patogenitási jellemzők | Fehér egérnek intraperitoneális injekcióban 10-100 millió gombasejt adása után 30 nap múlva az állatok 80%-ának hasürege granulómákat tartalmazott, letális hatást nem észleltünk. | Fehér egérnek intraperitoneális injekcióban 10-100 millió gombasejt adása után 30 nap múlva az állatok 80%-ának hasürege granulómákat tartalmazott, az állatok 40%-a elhullott |
A találmány további tárgyát a Candida albicans DSM No. 9656 törzs képezi, amelyet a tenyésztési morfológiai jellemzők stabilizálása alapján irányított szelekcióval és az emberből 1990-ben izolált 008 számú epidémiás törzs attenuálása révén kaptunk.
A Candida albicans DSM No. 9656 törzs biológiai tulajdonságait az 1. táblázatban foglaltuk össze.
A Candida albicans DSM No. 9656 törzs ezenkívül abban különbözik az epidémiás törzstől, hogy populációja stabil, morfológiai tulajdonságai hosszú időn át táptalajon végzett passzázsok mellett állandóak és virulenciája alacsony. A találmány szerinti antigénkészítmények előállításának előírásait követve ebből a törzsből nagymértékben hatékony és ártalmatlan találmány szerinti antigénkészítmények állíthatók elő.
Azok, akik ezen a szakterületen jártasak, könnyen megítélhetik, hogy a találmány jól alkalmazható a feladat kivitelezéséhez és az említett, valamint a találmány szerinti célkitűzések és előnyök eléréséhez. Az itt leírt vegyületek, eljárások és technikák az előnyös kiviteli alakokat jellemzik. A kiviteli alakok mint példák szerepelnek, és ezekkel nem óhajtjuk korlátozni a találmány oltalmi körét.
A találmány általános leírása után, a könnyebb megértés érdekében, a következők példákra hivatkozunk, amelyek a szemléltetést szolgálják és nem korlátozzák a találmány oltalmi körét.
Példák
A példákban a centrifugálást 3000 g és 3500 g között végezzük, körülbelül 30-50 percig. A táptalajokat az Oxoid cégtől (Unipath GmbH, Am Lippeglacis 6-8, 46 483 Wesel, Németország) vagy a Serva cégtől (Serva, Feinbiochemica GmbH, Co., KG, Carl-Benz Str. 7, 69 115 Heidelberg, Németország) szereztük be. Amennyiben másként nem jelezzük, a gombákat úgy tenyésztettük, ahogyan ez az Oxoid-katalógusban („5. aktualisierte deutsche Ausgabe”) vagy az EP 0564620 számú európai szabadalmi leírásban van leírva. A találmány szerinti antigénkészítmények előállítására felhasznált gombatörzseket az alábbi kiadványokban leírtak szerint, a gombatörzsek szelekciójával és attenuálásával kaptuk. N. V. Mazkevitch: „Spontannaja ismentchivost i kariologia nesovershennich gibov” kiadó: Isdatelstwo Nauka, Moszkva (1981); L. G. Ivanova: „Sistematika, morphologitcheskaja charakteristika, biologitcheskii svojstva vosbuditelej dermatophitosov, obshih dija givotnih i tcheloveka, Moszkva,
Moszkvai Egyetemi Könyvtár (1992). Az emlőssejttenyésztés alaptechnikáinak a leírását a következő kiadvány tartalmazza: Doyle, Griffiths, Newell (szerk.): Cell and Tissue Culture: Laboratory procedures, John Wiley and Sons (1995). A keratinocita-assay-khez HaCaT-sejteket használtunk [Boukamp et al., J. Cell. Bioi., 106, 761-771 (1988); Ryle et al., Differentiation, 40, 42-54 (1989)]. Izolált keratinociták vagy más keratinocitasejt-vonalak szintén használhatók. A lólimfociták izolálását és tenyésztését a következő kiadványban leírtak szerint végeztük: H. Friemel, „Immunologische Arbeitsmethoden VEB Gustav Fischer Verlag, Jena (1984); vagy E. Paul, „Fundamental Immunology”, Raven Press, New York (1984). A radioassay-ket lényegében Boehncke és munkatársai szerint [Scand. J. Immunoi., 39, 327-332 (1994)] és az idézett referenciák szerint végeztük. A nátrium-hidroxidból, kálium-hidroxidból, sósavból és ecetsavból vizes oldatokat készítettünk. Ha másként nem jelezzük, az oldható kifejezés vizes oldatban való oldhatóságot jelent. Az alább leírt kísérletekben használt fiziológiailag megfelelő vivőanyagok például a következők: A vivőanyag: 0,85% (tömeg/térf.) nátrium-kloridot tartalmazó vizes oldat; B vivőanyag: 5% (tömeg/térf.) glükózt, 0,3% (tömeg/térf.) húskivonatot („láb lemco” Oxoid) és 0,1% (tömeg/térf.) élesztőkivonatot (Oxoid) tartalmazó vizes oldat; C vivőanyag: RPM11640 táptalaj (Serva).
1. példa
Poliszacharidot és/vagy glikopeptideket tartalmazó, antigénhatású oldható anyagot (ASMP) állítottunk elő az alábbi törzsekből, és eljárásokkal.
Trichophyton mentagrophytes (ASMP-TM), Microsporum gypseum (ASMP-MG) vagy Candida albicans (ASMP-CA).
A gombákat agarlemezeken, az EP 0564620 számú európai szabadalmi leírás szerint tenyésztettük. A gombabiomasszát leemeltük és a következőképpen dolgoztuk fel.
/. ASMP-TM (i) A Trichophyton mentagrophytes-biomasszát 4,5%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 1 órán át, majd 45 percig centrifugáltuk. A felülúszó végső pH-ját 3,5-re állítottuk be 4 M ecetsavoldat hozzáadásával. Két óra múlva az üledéket centrifugálással választottuk el, majd 1 térfogat felülúszóhoz 3 térfogat etanolt adtunk. Az alkoholos kicsapással kapott üledéket centrifugálással ülepítettük
HU 224 223 Β1 és desztillált vízben oldottuk. Végül az egyes ASMP-készítményeket liofilizáltuk.
(ii) A Trichophyton mentagrophytes-biomasszát 0,2%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 1 órán át, majd centrifugáltuk. A felülúszót 1 M sósavoldattal kezeltük 3,5 pH mellett 4 órán át 4-10 °C-on. Az üledéket ezután centrifugálással választottuk el, majd 1 térfogat felülúszóhoz 2 térfogat etanolt adtunk. Az alkoholos kicsapással kapott üledéket centrifugálással ülepítettük és desztillált vízben oldottuk. Végül az egyes ASMP-készítményeket liofilizáltuk.
II. ASMP-MG (i) A Mikrosporum gypseum-biomasszát 0,2%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 2 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket ismét 0,2%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °Con 2 órán át, majd centrifugáltuk. Az eljárást harmadszor is megismételtük. A végső felülúszót 8 M ecetsavoldattal kezeltük 18-20 °C-on 3 órán át 3,5 végső pH mellett. Az üledéket ezután centrifugálással választottuk el, majd 1 térfogat felülúszóhoz 3 térfogat etanolt adtunk. Az alkoholos kicsapással kapott üledéket centrifugálással ülepítettük és desztillált vízben oldottuk. Végül az egyes ASMP-készítményeket liofilizáltuk.
(ii) A Microsporum gypseum-biomasszát először 3%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 75 °C-on 6 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket ezután 3%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 75 °C-on 6 órán át, majd centrifugáltuk. A végső felülúszót 0,5 M sósavoldattal kezeltük 3,5 végső pH mellett 4 órán át 4-10 °C-on. Az üledéket ezután centrifugálással választottuk el, majd térfogat felülúszóhoz 3 térfogat metanolt adtunk. Az alkoholos kicsapással kapott üledéket centrifugálással ülepítettük és desztillált vízben oldottuk. Végül az egyes ASMP-készítményeket liofilizáltuk.
III. ASMP-CA (i) A Candida albicans-biomasszát 3,0%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük 75 °C-on 6 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket ismét 3,0%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük 75 °C-on 6 órán át, majd centrifugáltuk. A végső felülúszót ezután 12 M ecetsavoldattal kezeltük 3,5 végső pH mellett 2 órán át 4-10 °C-on. Az üledéket centrifugálással választottuk el, majd 1 térfogat felülúszóhoz térfogat metanolt adtunk. Az alkoholos kicsapással kapott üledéket centrifugálással ülepítettük és desztillált vízben oldottuk. Végül az egyes ASMP-készítményeket liofilizáltuk.
(ii) A Candida albicans-biomasszát 4,5%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 35 °C-on 3 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket ezután 4,5%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük 35 °C-on 3 órán át, majd centrifugáltuk. Az eljárást harmadszor is megismételtük. A végső felülúszót 0,25 M sósavoldattal kezeltük 3,5 végső pH mellett 4 órán át 18-20 °C-on. Az üledéket ezután centrifugálással választottuk el és 1 térfogat felülúszóhoz 2 térfogat etanolt adtunk. Az alkoholos kicsapással kapott csapadékot centrifugálással ülepítettük és desztillált vízben oldottuk. Végül az egyes ASMP-készítményeket liofilizáltuk.
2. példa
Poliszacharidot és/vagy glikopeptideket tartalmazó, antigénhatású oldhatatlan anyagot (ANMP) állítottunk elő az alábbi törzsekből és eljárásokkal. Trichophyton mentagrophytes (ANMP-TM), Microsporum gypseum (ANMP-MG), vagy Candida albicans (ANMP-CA),
A gombákat akarlemezeken tenyésztettük az EP 0564620 számú európai szabadalmi leírás szerint. A gombabiomasszát leemeltük és az alábbiak szerint dolgoztuk fel:
/. ANMP-TM (i) A Trichophyton mentagrophytes-biomasszát 0,2%-os tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük 35 °C-on 24 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket 0,3 M ecetsavoldattal kezeltük körülbelül 3 órán át körülbelül 60 °C-on, és ötször mostuk desztillált vízzel. Az egyes mosási lépéseket centrifugálás követte. A végső üledéket 0,85%-os (tömeg/térf.) nátrium-klorid tartalmú vizes oldatban (A vivőanyag) reszuszpendáltuk 0,5% (térf./térf.) ANMP-TM végső koncentrációig. Az ANMP-TM-készítményt szuszpenzió formában, 2-10 °C-on tároltuk.
(ii) A Trichophyton mentagrophytes-biomasszát 0,2%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük 35 °C-on 24 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket 0,1 M sósavoldattal kezeltük 30 percig 70 °C-on és ötször mostuk desztillált vízzel. Az egyes mosási lépéseket centrifugálás követte. A végső üledéket RPMI 1640 tápoldatban (C vivőanyag) reszuszpendáltuk az ANMP-TM 1,5%-os (térf./térf.) végső koncentrációjáig. Az ANMP-TM-készítményt 2-10 °C-on, szuszpenzió formájában tároltuk.
II. ANMP-MG (i) A Microsporum gypseum-biomasszát 3%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük 75 °C-on 6 órán át, majd lecentrifugáltuk. Az üledéket ismét 3%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük 75 °C-on 6 órán át, utána centrifugáltuk. A kapott üledéket 0,7 M ecetsavoldattal kezeltük 4 órán át 60 °C-on és ötször mostuk desztillált vízzel. Minden mosási lépést centrifugálás követett. Az utolsó üledéket 5% (tömeg/térf.) glükóz, 0,1% (tömeg/térf.) élesztőkivonat (Oxoid) és 0,3% (tömeg/térf.) húskivonat („láb lemco” Oxoid) tartalmú vizes oldatban (B vivőanyag) reszuszpendáltuk az ANMP-MG 2,5% (térf./térf.) végső koncentrációjáig. Az ANMP-MG-készítményt 2-10 °C-on tároltuk szuszpenzió formában.
(ii) A Microsporum gypseum-biomasszát 3%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 35 °C-on 3 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket ismét 3%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 35 °C-on 3 órán át, majd centrifugáltuk. Az eljárást harmadszor is megismételtük. A kapott üledéket 0,5 M sósavoldattal kezeltük 30 percig 80 °C-on és ötször mostuk desztillált vízzel. Minden mosási lé8
HU 224 223 Β1 pést centrifugálás követett. A végső üledéket RPMI 1640 tápoldatban (C vivőanyag) reszuszpendáltuk az ANMP-MG 2,0% (térf./térf.) végső koncentrációjáig. Az ANMP-MG-készítményt 2-10 °C-on, szuszpenzió formájában tároltuk.
III. ANMP-CA (i) A Candida albicans-biomasszát 4,5%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 2 óra hosszat, majd centrifugáltuk. Az üledéket ismét 4,5%-os (tömeg/térf.) nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 2 órán át, majd centrifugálás következett és az eljárást harmadszor is megismételtük. A kapott üledéket 1 M ecetsavoldattal kezeltük 1 órán át 60 °C-on és ötször mostuk desztillált vízzel. Minden mosási lépés után centrifugálás következett. Az utolsó üledéket 0,85%-os (tömeg/térf.) nátrium-klorid-tartalmú vizes oldatban (A vivőanyag) reszuszpendáltuk az ANMP-CA 1,5%-os (térf./térf.) végső koncentrációjáig. Az ANMP-CA-készítményt szuszpenzió formában 2-10 °C-on tároltuk.
(ii) A Candida albicans-biomasszát 4,5%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 2 órán át, majd centrifugáltuk. Az üledéket ismét 4,5%-os (tömeg/térf.) kálium-hidroxid-oldattal kezeltük körülbelül 140 °C-on 2 órán át, majd a kapott üledéket 0,1 M sósavoldattal kezeltük 30 percig 100 °C-on, ezután ötször mostuk desztillált vízzel. Minden mosási lépés után centrifugálás következett. A végső üledéket RPMI 1640 tápoldatban (C vivőanyag) reszuszpendáltuk az ANMP-CA 2,5%-os (térf./térf.) végső koncentrációjáig. Az ANMP-CA-készítményt szuszpenzió formában 2-10 °C-on tároltuk.
3. példa
Poliszacharidot és/vagy glikopeptideket tartalmazó antigénhatású exogén anyagot (AEMP) állítottunk elő a következő törzsek folyékony tenyészeteiből: Trichophyton mentagrophytes (AEMP-TM), Mikrosporum gypseum (AEMP-MG) vagy Candida albicans (AEMP-CA). A folyékony tenyészeteket lényegében az
EP 0564620 számú európai szabadalmi leírás szerint tenyésztettük. Az egyes AEMP-készítményeket a következő eljárások szerint állítottuk elő.
/. AEMP-TM
A Trichophyton mentagrophytes-sejteket 24 óra hosszat 26 °C-on 1000 ml desztillált vízben inkubáltuk. A tenyészetet, amely ml-enként körülbelül 1,2*10® sejtet tartalmazott, ezután lecentrifugáltuk. A felülúszót liofilizáltuk, majd 100 ml desztillált vízben oldottuk, amelyhez 3 térfogat metanolt adtunk. A kapott csapadékot vizes oldatban oldottuk fel. A felülúszót liofilizáltuk és így kaptuk az AEMP-TM-készítményt.
II. AEMP-MG
A Microsporum gypseum-sejteket 50 órán át 28 °C-on 200 ml C vivőanyagban (RPMI 1640 táptalaj, Serva) tenyésztettük. A tenyészetet, amely ml-enként körülbelül 3*103 * * * 7 * * * II. sejtet tartalmazott, lecentrifugáltuk. A felülúszót liofilizáltuk, majd 20 ml desztillált vízben feloldottuk, amelyhez 2 térfogat metanolt adtunk. A kapott csapadékot vizes oldatban oldottuk fel. A felülúszót liofilizáltuk és így kaptuk az AEMP-MG-készítményt.
III. AEMP-CA
A Candida albicans-sejteket 30 órán át 37 °C-on 800 ml B vivőanyagban [1% (tömeg/térf.) húskivonat („láb lemco” Oxoid), 0,1% (tömeg/térf.) élesztőkivonat (Oxoid) és 5% (tömeg/térf.) dextróz] tenyésztettük. A tenyészetet, amely ml-enként körülbelül 10® sejtet tartalmazott, lecentrifugáltuk. A felülúszót liofilizáltuk, majd kis mennyiségű desztillált vízben oldottuk, amelyhez 2 térfogat metanolt adtunk. A kapott csapadékot vizes oldatban oldottuk fel. A felülúszót liofilizáltuk és így kaptuk az AEMP-CA-készítményt.
4. példa
Meghatároztuk a különböző antigénkészítmények befolyását a keratinocitasejt-tenyészetek (HaCaT-sejttenyészetek) növekedésére.
I. A Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279) törzsből készített ASMP-TM, ANMP-TM és AEMP-TM, a Microsporum gypseum (DSM No. 7274) törzsből készített ASMP-MG, ANMP-MG és AEMP-MG és a Candida albicans (DSM No. 9656) törzsből készített ASMP-CA-, ANMP-CA- és AEMP-CA-antigénfrakciókat különböző koncentrációkban használtuk. A 2. példa szerint előállított ANMP-frakciókat liofilizáltuk, majd PBS-ben (foszfáttal pufferolt konyhasóoldat, 6,7 mM foszfátkoncentrációval, körülbelül 7,2 fiziológiás pH-val; a Serva cégtől szereztük be, katalógusszáma: 17-516) reszuszpendáltuk.
Tenyésztéshez Falcon féle 12 tartályos szövettenyésztő lemezeket (lapos fenék, felület: 9,6 cm2) használtunk. Egy-egy tartályba 0,15 ml keratinocitasejt (HaCaT-sejtek)-szuszpenziót (körülbelül 1 millió sejt per ml 10 tömeg/térf.% fetális borjúszérummal kiegészített RPMI 1640 táptalaj), 2 ml táptalajt és 0,02-1 ml PBSben feloldott antigénfrakciót mértünk be. A kontrolltartályokhoz nem adtunk antigénfrakciót tartalmazó anyagot. A tenyésztést 5% (térf./térf.) szén-dioxidot tartalmazó inkubátorban végeztük, 37 °C-on, körülbelül 48 óra hosszat, amíg a kontrolltartályokban összefolyt egysejtréteg nem alakult ki.
A sejtnövekedés-gátlást úgy határoztuk meg, hogy az antigénfrakciókkal kezelt sejtlepedékek területének nagyságát az antigénfrakciókkal nem kezelt kontrolokéhoz (kontroll=100%) hasonlítottuk. Az eredményeket a 2. és a 3. táblázatban mutatjuk be.
Sejtnövekedés-gátlást a következő esetekben figyeltünk meg: 0,1 mg/ml ASMP-MG-koncentrációnál, 0,3 mg/ml ASMP-TM-koncentrációnál és 1 mg/ml ASMP-CA-koncentrációnál. ANMP-nél (MG, TM és CA) 1 mg/ml koncentrációnál figyeltünk meg gátlást. AEMP-MG esetén 0,3 mg/ml koncentrációnál észleltünk sejtnövekedés-gátlást, AEMP-TM és AEMP-CA esetén 1 mg/ml koncentrációnál.
5. példa
Meghatároztuk a különböző antigénfrakciók befolyását lólimfociták proliferációjára.
A T. mentagrophytes (DSM No. 7279), M. gypseum (DSM No. 7274) és C. albicans (DSM No. 9656) gom9
HU 224 223 Β1 batörzsek ASMP- és AEMP-antigénfrakcióit használtuk. Táptalaj-ml-enként körülbelül 40 000 limfocitát (izlandi lovakból) tartalmazó szuszpenziót készítettünk. Az RPMI 1640 táptalajt 10% fetális borjúszérummal egészítettük ki. A limfocitákat U fenekű 96 tartályos szövettenyésztő lemezeken (Falcon No. 3077) tenyésztettük. Minden tartályba 200 pl sejtszuszpenziót és 20 μΙ PBSben oldott antigénfrakciót mértünk be. A kontrollokat antigénfrakció hozzáadása nélkül készítettük.
A szövettenyésztő lemezeket 37 °C-on, 5% (térf./térf.) szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában inkubáltuk 72 óra hosszat. Ezután a táptalajt kicseréltük és a tartályokhoz 1-1 μΙ 3H-timidin-tartalmú oldatot adtunk. Egy második tenyésztési lépést végeztünk 12 órán át, majd a tenyészetet PBS-sel mostuk. A sejtproliferációt radioassay-technikával határoztuk meg a Boehncke és munkatársai által leírtak szerint [Scand. J. Immunoi., 39, 327-332 (1994)]. A sejtproliferáció-mérést úgy végeztük, hogy a teszttenyészeteket az antigénfrakciót nem tartalmazó kontrollokkal hasonlítottuk össze. A kontrollértékeket 100%-nak vettük. Az eredményeket a 4. táblázatban mutatjuk be. Az egyes antigénfrakciók vagy gátló-, vagy stimulálóhatást gyakorolnak a limfociták proliferációjára.
6. példa
Ebben a példában jellegzetes komplex készítményeket mutatunk be. Az ebben a példában leírt komplexeket (1-5) Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279), Microsporum gypseum (DSM No. 7274), vagy Candida albicans (DSM No. 9656) törzsekből állítottuk elő.
I. A komplex 1 ASMP-TM-et, ASMP-MG-t és ASMP-CA-t tartalmaz megfelelő vivőanyagban, a példában
| Komplex 1 | Koncentráció (mg/ml) | ||
| A | B | C | |
| ASMP-TM7279 | 5 | 10 | 30 |
| ASMP-MG7274 | 5 | 10 | 30 |
| ASMP-CA9656 | 5 | 10 | 30 |
| A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban |
A komplex 1.1 ASMP-MG-t és ASMP-CA-t tartalmaz megfelelő vivőanyagban, a példában
| Komplex 1.1 | Koncentráció (mg/ml) | ||
| A | B | C | |
| ASMP-MG7274 | 5 | 10 | 30 |
| ASMP-CA9656 | 5 | 10 | 30 |
| A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban |
II. A komplex 2 ANMP-TM-et, ANMP-MG-t és ANMP-CA-t tartalmaz megfelelő vivőanyagban, a példában
| Komplex 2 | Koncentráció [% (térf./térf.)] | |||
| A | B | C | D | |
| ANMP-TM7279 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,5 |
| ANMP-MG7274 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,5 |
| ANMP-CA9656 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,5 |
| szusz- penzió Avagy B vagy C vivőanyagban | szusz- penzió Avagy B vagy C vivőanyagban | szusz- penzió Avagy B vagy C vivőanyagban | szusz- penzió Avagy B vagy C vivőanyagban |
III. A komplex 3 AEMP-TM-et, AEMP-MG-t és AEMPCA-t tartalmaz megfelelő vivőanyagban, a példában
| Komplex 3 | Koncentráció (mg/ml) | ||
| A | B | C | |
| AEMP-TM7279 | 5 | 10 | 30 |
| AEMP-MG7274 | 5 | 10 | 30 |
| AEMP-CA9656 | 5 | 10 | 30 |
| A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban |
IV. A komplex 4 ANMP-t és AEMP-t tartalmaz, megfelelő vivőanyagban, a példában (i) Komplex 4.1
ANMP-CA9656 2,5% (térf./térf.)
AEMP-TM7279 7,1 mg/ml A vagy B vagy C vivőanyagban (ü)
| Komplex 4.2 | Koncentráció | |
| A | B | |
| ANMP-MG7274 | 2,5% (térf./térf.) | 3,0% (térf./térf.) |
| ANMP-TM7279 | 2,5% (térf./térf.) | 3,0% (térf./térf.) |
| AEMP-TM7279 | 10,5 mg/ml | 18,5 mg/ml |
| A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban |
V. A komplex 5 ASMP-t és ANMP-t tartalmaz megfelelő vivőanyagban, a példában
| Komplex 5 | Koncentráció | |
| A | B | |
| ANMP-MG7274 | 1,75% (térf./térf.) | 3% (térf./térf.) |
| ANMP-TM7279 | 1,75% (térf./térf.) | 3% (térf./térf.) |
HU 224 223 Β1
Táblázat (folytatás)
| Komplex 5 | Koncentráció | |
| A | B | |
| ASMP-CA9656 | 15,6 mg/ml | 15,6 mg/ml |
| A vagy B vagy C vivőanyagban | A vagy B vagy C vivőanyagban |
7. példa
Az antigénkészítmények ártalmatlanságát állatmodellrendszerekben (fehér egerek, tengerimalacok és lovak), vakcinálási kísérletekkel teszteltük.
Az antigénfrakciókat az 1-3. és 6. példában leírtak szerint, az alábbi törzsekből állítottuk elő: Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279), Microsporum gypseum (DSM No. 7274), vagy Candida albicans (DSM No. 9656).
A vakcináit állatok állapotának klinikai megfigyelését minden vakcináció után öt napon át naponta végeztük.
1. Általános állapot
- étvágy
- helyváltoztatásra (mozgásra) gyakorolt hatás
2. Helyi reakció
- ödéma és gyulladás az injekció helyén
- hőmérséklet-változás az injekció helyén
- fájdalom kialakulása az injekció helyén
- gyógyszeres kezelés szükségessége az injekció helyén.
I. Az antigénkészítményeket egyszer, vagy 10 napos időközt hagyva, kétszer oltottuk fehér egerek hasüregébe. A tengerimalacoknak hasüregbe vagy szubkután adtuk az injekciót. Az antigénkészítményeket, ezek koncentrációját és a kapott eredményeket az 5. és 6. (A és B) táblázatban mutatjuk be. A szubkután vagy hasüregbe oltott gombaantigének akár egyedi, akár komplex készítmény formában, legtöbbször nem hatottak károsan az állatok általános állapotára és helyi reakciót sem figyeltünk meg az injekció helyén.
II. A 6. példában leírt gombaantigénekkel előállított komplex készítményeket (4.1, 4.2 és 5 komplexek) egyszerre oltottuk intramuszkulárisan ugyanazon ló különböző testrészébe (a nyak bal és jobb oldalába és egy szügyizomba). Három lovat vakcináltunk: (i) egy vemhes kancát, (ii) egy 7-8 hónapos csikót és (iii) egy 6 éves mént. Az antigénkészítményeket, ezek koncentrációját és a kapott eredményeket a 7. táblázatban mutatjuk be.
A gombaantigének komplex készítmény formájában adott intramuszkuláris injekciója nem befolyásolta a lovak általános állapotát és az injekció helyén lokális reakciót sem figyeltünk meg. Ezek a vizsgálatok a találmány szerinti antigénkészítmények tökéletes ártalmatlanságát bizonyítják.
8. példa
Fehér egereken vizsgáltuk a különböző antigénkészítmények befolyását a bőr és szőrzet állapotára.
Az antigénkészítményeket az 1-3. és a 6. példában leírtak szerint, a következő törzsekből, állítottuk elő: Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279), Microsporum gypseum (DSM No. 7274) vagy Candida albicans (DSM No. 9656).
Az antigénkészítményekkel, 10 napos időközt hagyva, kétszer oltottunk fehér egereket, hasüregbe. A bőr és a szőrzet állapotát 5 napon át figyeltük. Az antigénkészítményeket, ezek koncentrációját és a kapott eredményeket a 8. táblázat mutatja be. Az antigénkészítmények injekciója a fehér egerek bőrének és szőrzetének állapotát javította a dermatitises kontrollállatokéval összehasonlításban.
9. példa
Három különböző antigénkészítmény hatásosságát tanulmányoztuk nyári ekcémás izlandi lovak vakcinálásával, placebóval kontrollált vizsgálatban.
Az antigénkészítményeket az 1-3. és a 6. példában leírtak szerint, a következő törzsekből állítottuk elő: T. mentagrophytes (DSM No. 7279), M. gypseum (DSM No. 7274) vagy C. albicans (DSM No. 9656). Az egyedi antigénkészítményeket tartalmazó A vivőanyagból háromszor 1 ml-t oltottunk intramuszkulárisan. Az injekciók között 5 napos időközöket hagytunk. Az injekciókat a szügyizom jobb és bal oldalán felváltva alkalmaztuk. Az antigénkészítményeket, koncentrációikat és a kapott eredményeket a 9. és a 10. táblázatban mutatjuk be.
Egy ASMP-MG7274-, ASMP-TM7279- és ASMPCA9656-tartalmú antigénkészítmény alkalmazása a vakcináit lovak (3) teljes gyógyulását eredményezte négy héttel a harmadik injekció után. A kontrollcsoportba tartozó lovak (antigént nem tartalmazó A vivőanyaggal oltva) a gyógyulás semmilyen jelét nem mutatták.
10. példa
Három különböző antigénkészítmény ártalmatlanságát tanulmányoztuk nyári ekcémás izlandi lovak vakcinálásával, placebóval kontrollált vizsgálatban.
Az antigénkészítményeket az 1-3. és a 6. példában leírtak szerint, a következő törzsekből állítottuk elő: T. mentagrophytes (DSM No. 7279), M. gypseum (DSM No. 7274) vagy C. albicans (DSM No. 9656). Az egyedi antigénkészítményeket tartalmazó A vivőanyagból háromszor 1 ml-t oltottunk intramuszkulárisan. Az injekciók között 5 napos időközöket hagytunk. Az injekciókat a szügyizom jobb és bal oldalán felváltva alkalmaztuk. Minden injekció után három napig figyeltük az állatokat mellékhatások szempontjából. Az antigénkészítményeket, koncentrációikat és a kapott eredményeket a 11. táblázatban mutatjuk be. Általános mellékhatásokat, mint láz, vagy étvágytalanság, nem figyeltünk meg. Az antigénkészítmények közül csak egy okozott duzzanatot az injekció helyén. Ezt a jelentéktelen mellékhatást csak egy lónál figyeltük meg. Fájdalomnak nem mutatkoztak jelei.
11. példa
Az ASMP-TM7279, ASMP-MG7274 és ASMPCA9656 egyedi frakciók, valamint az ASMP-TM7279-, ASMP-MG7274- és ASMP-CA9656-tartalmú komplex
HU 224 223 Β1 allergiaellenes hatásosságát laboratóriumi állatmodellben tanulmányoztuk.
Az egyedi frakciókat az 1. példa szerint állítottuk elő. A komplex 1-et az 1. és a 6. példa szerint állítottuk elő.
CF-1 egereket szenzibilizáltunk a Mouse Ear Swelling Test modell előírásai szerint [S. C. Gad, B. K. Dimm, D. W. Dobbs, C. Reilly, R. D. Walsh: Development. and Validation of an Altemative Dermal Sensitization Test: The Mouse Ear Swelling Test (MEST). Toxicology and Applied Pharmacology, 84, 93-114 (1986)]. Allergiás anyagok vizsgálatára ez egy jól ismert, validált és az OECD által elfogadott teszt. A komplex vagy egyedi frakciói hatásosságát az bizonyítja, ha egy laboratóriumi állatban az allergén által okozott fülduzzadást allergiaellenes hatásuk révén meggátolják. Placebóval kontrollált vakvizsgálatot végeztünk egerekkel és két allergénnel.
A MEST-vizsgálatot CF-1 egereken végeztük, amelyek a legérzékenyebbek allergénekre. A 6-10 hetes CF-1 egereket úgy készítettük elő, hogy leborotváltuk a hasi bőrt, amelybe 0,05 ml Freund-adjuvánst oltottunk, majd a 0. naptól a 4. napig a leborotvált hasi bőrön helyileg 100 μΙ 1-klór-2,4-dinitro-klór-benzol (DNCB)-allergént alkalmaztunk az egyik kísérletben és atkaallergént a másik kísérletben. Hét nappal később 20 μΙ allergént helyeztünk helyileg a tesztfülre és oldószert a kontrolifülre, majd 24 és 48 órával később megmértük a fül vastagságát. Ugyanígy jártunk el a kontrollcsoportnál, amelyet placebóval kezeltünk a komplex, illetve a komplexet alkotó frakciók helyett.
Az ASMP-TM7279, ASMP-MG7274 és ASMPCA9656 egyedi frakciók, valamint az ASMP-TM7279-, ASMP-MG7274- és ASMP-CA9656-tartalmú komplex 1 alkalmazása a kontrollcsoporthoz képest 90%-kal csökkentette a fülduzzanatot az atkaallergénnel való szenzibilizálás után és 87,5%-kal csökkent fülduzzanatot eredményezett DNCB-vel való szenzibilizálás után a rechallenget követő 48 óra múlva.
12. példa
Az 1. példában leírtak szerint előállított ASMPMG7274- és ASMP-CA9656-antigénkészítményeket tartalmazó komplex készítmény hatásosságát egy nyári ekcémás izlandi ló vakcinálásával mutattuk ki.
Háromszor 0,4 ml intradermális injekciót adtunk 0,2 mg MG-t és 0,2 mg CA-t tartalmazó A vivőanyagból úgy, hogy az injekciók között 5 nap időközöket hagytunk. Ezek az injekciók az utolsó injekció után három hét múlva a vakcináit ló gyógyulását eredményezték, amelyet a klinikai szimptómák jelentős csökkenése bizonyított. Mellékhatásokat nem figyeltünk meg.
13. példa
Microsporum gypseum (DSM No. 7274) törzsből az 1. példában leírtak szerint előállított antigénkészítmény (ASMP) hatásosságát egy gyulladással, viszketegséggel és a 4. és 5. lábujj között bőrerózióval járó ekcémában szenvedő 41 éves férfi vakcinálásával mutattuk ki.
A 0,4 mg ASMP-MG7274-et tartalmazó A vivőanyag 0,1 ml-ét intradermális injekcióként adtuk be. Az egyetlen injekcióval való kezelés után 4-5 nap múlva a bőr normális lett.
A viszketegség már 24 óra múlva megszűnt. Súlyos mellékhatásokat nem figyeltünk meg.
14. példa
A Candida albicans (DSM No. 9656) törzsből az 1. példában leírtak szerint előállított antigénkészítmény (ASMP) hatásosságát egy neurodermitis kezelésével mutattuk ki.
Az ASMP-CA9656-ot krémbe kevertük - a Procter és Gamble cégtől beszerzett „Kamill Hand und Nagelcreme” készítményt használtuk - úgy, hogy 60 mg ASMP-CA9656/ml krém végső koncentrációt kapjunk. A) készítményt helyileg alkalmaztuk egy 3 éves leánynál, aki neurodermitistől szenvedett, mindkét füle mellett a bőrön sárga varasodással. A krémet 30 napon át, naponta egyszer helyileg alkalmaztuk a bőrbetegség helyén. A kezelés után a bőr normálissá vált. Mellékhatásokat nem észleltünk.
15. példa
A Microsporum gypseum (DSM No. 7274) törzsből az 1. példa szerint előállított antigénkészítmény (ASMP) hatásosságát ekcéma kezelése révén mutattuk ki.
Az ASMP-MG7274-et krémbe kevertük - a Procter és Gamble cégtől beszerzett „Kamill Hand und Nagelcreme” készítményt használtuk - úgy, hogy 60 mg ASMP-MG7274/ml krém végső koncentrációt kapjunk. Gyűrűs ujján gyulladással, eróziókkal és viszketegséggel járó ekcémában szenvedő 30 éves férfit kezeltünk úgy, hogy a bőr megtámadott részein helyileg alkalmaztuk a krémet naponta egyszer, 30 napig. A kezelés után teljes gyógyulás következett be. A kezelés megkezdése után néhány nap múlva megszűnt a viszketés. Mellékhatásokat nem észleltünk.
16. példa
Microsporum gypseum (DSM No. 7274), Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279) és Candida albicans (DSM No. 9656) törzsekből az 1. példa szerint előállított antigénkészítmények (ASMP) hatásosságát egy olyan 5 éves ló vakcinálásával teszteltük, amely téli szőrzetét júniusig nem vedlette le. Az egyes antigénkészítményekből (ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 és ASMP-CA9656) 15-15 mg-ot tartalmazó A vivőanyag (végső koncentrációja 45 mg ASMP/ml) 1 ml-ét intramuszkuláris injekcióban adtuk a lónak háromszor, 5 napos időközönként. A vakcinálás 15 napon belül teljes vedlést és az évszaknak megfelelő szőrzetet eredményezett. Mellékhatásokat nem észleltünk.
17. példa
A példában egy Microsporum gypseum (DSM No.7274), Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279) és Candida albicans (DSM No. 9656) törzsekből az 1. példában leírtak szerint előállított komplex antigénkészítmény alopecia kezelésében kapott hatásosságát mutatjuk be.
HU 224 223 Β1
Két olyan 7 éves lovat, amelyeken alopecia volt látható - az egyiken testszerte 3-5, a másikon testszerte 7-10 különböző helyen - kezeltünk egy olyan vakcinával, amely mindegyik antigénkészítményből (ASMPMG7274, ASMP-TM7279 és ASMP-CA9656) 10 mg-ot tartalmazott 1 ml A vivőanyagban (végső koncentráció 30 mg/ml). A vakcinával háromszor oltottuk a lovakat intramuszkulárisan, ötnapos időközönként. Ez a kezelés az utolsó alkalmazás után 10 nap múlva mindkét ló szőrzetének teljes javulását eredményezte. Mellékhatásokat nem figyeltünk meg.
18. példa
Microsporum gypseum (DSM No. 7274), Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279) és Candida albicans (DSM No. 9656) törzsekből az 1. példa szerint előállított komplex antigénkészítmény lovak alopeciájának kezelésében észlelt hatásosságát ismertetjük a példában.
Egy 10 éves lovat, amelyen alopecia volt látható testszerte 10-12 különböző helyen, egy olyan vakcinával kezeltünk, amely az egyes antigénkészítményekből (ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 és ASMP-CA9656) 15 mg-ot tartalmazott 1 ml A vivőanyagban (végső koncentráció: 45 mg/ml). A vakcinával háromszor oltottuk a lovat intramuszkulárisan, ötnapos időközönként. Ez a kezelés az utolsó alkalmazás után 15 nap múlva a szőrzet teljes gyógyulását eredményezte. Mellékhatásokat nem észleltünk.
19. példa
Microsporum gypseum (DSM No. 7274), Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279) és Candida albicans (DSM No. 9656) törzsekből az 1. példában leírtak szerint előállított komplex antigénkészítmény hatásosságát ismertetjük kutyák alopeciájának kezelésében.
Egy 3 éves nőstény kutyát, amelyen alopecia volt látható testszerte 2-3 különböző helyen, egy olyan vakcinával kezeltünk, amely az egyes antigénkészítményekből (ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 és ASMP-CA9656) 10 mg-ot tartalmazott 1 ml A vivőanyagban (végső koncentráció: 30 mg/ml). A vakcinával háromszor oltottuk a kutyát intramuszkulárisan, ötnapos időközönként. Ez a kezelés az utolsó alkalmazás után 15 nap múlva a szőrzet (bunda) teljes gyógyulását eredményezte. Mellékhatásokat nem figyeltünk meg.
20. példa
Microsporum gypseum (DSM No. 7274), Trichophyton mentagrophytes (DSM No. 7279) és Candida albicans (DSM No. 9656) törzsekből az 1. példa szerint előállított komplex antigénkészítmény hatásosságát mutatjuk be kutyák alopeciájának kezelésében.
Egy 5 éves és egy 8 éves hím kutyát, amelyeken alopecia volt látható testszerte 2-4 különböző helyen, egy olyan vakcinával kezeltünk, amely az egyes antigénkészítményekből (ASMP-MG7274, ASMPTM7279 és ASMP-CA9656) 15 mg-ot tartalmazott 1 ml A vivőanyagban (végső koncentráció: 30 mg/ml). A vakcinával háromszor oltottuk a kutyákat intramuszkulárisan, ötnapos időközönként. Ez a kezelés az utolsó oltás után 20 nap múlva a szőrzet (bunda) teljes gyógyulását eredményezte. Mellékhatásokat nem észleltünk.
2. táblázat a különböző antigénfrakciók koncentrációjának befolyása a keratinocita sejt tenyészetekre, az antigénfrakciókkal nem kezelt kontroliokkal összehasonlítva (HaCat sejtek %-a; a kontrollok összefolyt egysejtrétege=100%)
| Antigénfrakció | Antigénfrakció koncentrációja (mg/ml) | |||||||||||||
| 0,003 | 0,007 | 0,01 | 0,015 | 0,03 | 0,1 | 0,3 | 0,45 | 0,6 | 1,0 | 1,25 | 1,5 | 1,75 | 2 | |
| sejtekkel fedett terület %-a a kontrollokhoz képest | ||||||||||||||
| ASMP-MG7274 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 50 | 25 | 25 | 25 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ASMP-TM7279 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 50 | 25 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ASMP-CA9656 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 50 | 25 | 25 | 0 |
| ANMP-MG7274 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 75 | 50 | 25 | 0 |
| ANMP-TM7279 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 50 | 25 | 25 | 0 |
| ANMP-CA9656 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 75 | 50 | 25 | 0 |
| AEMP-MG7274 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 75 | 50 | 25 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-TM7279 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 75 | 50 | 25 | 0 |
| AEMP-CA9656 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 75 | 50 | 25 | 0 | 0 |
HU 224 223 Β1
3. táblázat
A különböző antigénfrakciók azon koncentrációja, amely a keratinocitasejtek (HaCat-sejtek) növekedésének 50%-os gátlását idézi elő
| Törzs | Antigénfrakció-koncentráció (mg/ml) | ||
| ASMP | ANMP | AEMP | |
| MG7274 | 0,3 | 1,5 | 0,6 |
| TM7279 | 0,45 | 1,25 | 1,5 |
| CA9656 | 1,25 | 1,5 | 1,25 |
4. táblázat
A különböző antigénfrakciók befolyása a lólimfociták proliferációjára
| Antigénfrakció koncentrációja (pg/ml) | Lólimfocita-proliferáció %-ban (antigénfrakció nélküli kontrollok=100%) | |||||
| ASMPMG7274 | ASMPTM7279 | ASMPCA9656 | AEMPMG7274 | AEMPTM7279 | AEMPCA9656 | |
| 500 | 81,5 | 36,2 | 37,8 | 19,4 | 7,0 | 1,08 |
| 50 | 117 | 106,9 | 109,8 | 76,1 | 10,2 | 46,9 |
| 5 | 181 | 172,8 | 119,8 | 129,7 | 47,3 | 138,3 |
| 0,5 | 98,6 | 93,8 | 134,1 | 147,8 | 133,3 | 138,3 |
| 0,05 | 271,3 | 94,3 | 181,5 | 143,5 | 94,8 | 149,8 |
| 0,005 | 146,7 | 207,6 | 144,7 | 104,7 | 109,9 | 146,3 |
5A. táblázat
A tesztállatok (12-14 g-os fehér egerek) reakciója egyedi antigénfrakciók „első injekciója” után
| Antigénfrakció | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Vakcináit állatok száma | Helyi fájdalmat | Helyi reakciót | Helyi hőmérséklet-növekedést | Étvágy- hiányt | Mozgás- csökke- nést | Letális reakció- kat |
| mutató állatok száma | |||||||||
| ASMP-MG7274 | 10,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ASMP-TM7279 | 12,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ASMP-CA9656 | 15,5 mg/ml | 0,5 | 9 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 | 3,3% | 0,5 | 8 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-TM7279 | 3,3% | 0,5 | 10 | 0 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-CA9656 | 3,3% | 0,5 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-MG7274 | 15,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-TM7279 | 11,3 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-CA9656 | 13,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
HU 224 223 Β1
5B. táblázat
A tesztállatok reakciója a komplex készítmények „első injekciója” után
| Komplex | Száma | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Vakcináit állatok száma | Helyi fájdalmat | Helyi reakciót | Helyi hömérséklet-növekedést | Étvágy- hiányt | Mozgás- csökke- nést | Letális reakció- kat |
| mutató állatok száma | ||||||||||
| fehér egerek (testtömeg: 12-14 g) | ||||||||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279 | 4,2 | 2,5% 2,5% 10,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-CA9656 AEMP-TM7279 | 4,1 | 2,5% 7,1 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 5 | 1,75% 1,75% 15,6 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| tengerimalacok (testtömeg: 150-200 g) | ||||||||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279 | 4,2 | 2,5% 2,5% 10,5 mg/ml | 0,5 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-CA9656 AEMP-TM7279 | 4,1 | 2,5% 7,1 mg/ml | 0,5 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 5 | 1,75% 1,75% 15,6 mg/ml | 0,5 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
6A. táblázat
A tesztállatok (12-14 g-os fehér egerek) reakciója egyedi antigénfrakciók „második injekciója” után
| Antigénfrakció | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Vakcináit állatok száma | Helyi fájdalmat | Helyi reakciót | Helyi hőmérséklet-növekedést | Étvágy- hiányt | Mozgás- csökke- nést | Letális reakció- kat |
| mutató állatok száma | |||||||||
| ASMP-MG7274 | 10,5 mg/ml | 1,0 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ASMP-TM7279 | 12,5 mg/ml | 1,0 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ASMP-CA9656 | 15,5 mg/ml | 1,0 | 9 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 | 3,3% | 0,5 | 8 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-TM7279 | 3,3% | 0,5 | 10 | 0 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-CA9656 | 3,3% | 1,0 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-MG7274 | 15,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-TM7279 | 11,3 mg/ml | 1,0 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-CA9656 | 13,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
HU 224 223 Β1
6B. táblázat
A tesztállatok reakciója a komplex készítmények „második injekciója” után
| Komplex | Száma | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Vakcináit állatok szá- ma | Helyi fájdal- mat | Helyi reakciót | Helyi hőmér- sék- let-nö- veke- dést | Étvágy- hiányt | Mozgás- csökke- nést | Letális reakció- kat |
| mutató állatok száma | ||||||||||
| fehér egerek (testtömeg: 12-14 g) | ||||||||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279 | 4,2 | 2,5% 2,5% 10,5 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-CA9656 AEMP-TM7279 | 4,1 | 2,5% 7,1 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 5 | 1,75% 1,75% 15,6 mg/ml | 0,5 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| tengerimalacok (testtömeg: 150-200 g) | ||||||||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279 | 4,2 | 2,5% 2,5% 10,5 mg/ml | 1,0 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-CA9656 AEMP-TM7279 | 4,1 | 2,5% 7,1 mg/ml | 1,0 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 5 | 1,75% 1,75% 15,6 mg/ml | 1,0 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
7. táblázat
Lovak reakciója komplex készítmények injekciója (egy injekció) után (mindegyik ló egy időben kapta a 4.1,4.2 és 5. komplexet, külön injekcióban, külön testrészekbe)
| Komplex | Száma | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Vakcináit lovak száma | Helyi reakciókat mutató lovak száma | Általános reakciókat mutató lovak száma | ||||
| fájdalom | ödé- ma/gyul- ladás | hőmér- sék- let-nö- vekedés | étvágy- talanság | mozgás- csökke- nés | elhullás | |||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279 | 4,2 | 3,0% 3,0% 18,5 mg/ml | 0,5 | 0 | 0 | |||||
| ANMP-CA9656 AEMP-TM7279 | 4,1 | 3,0% 15,6 | 0,5 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 5 | 3,0% 3,0% 15,6 | 0,5 | 0 | 0 |
HU 224 223 Β1
8. táblázat
Fehér egerek (testtömeg: 12-14 g) bőrének és szőrzetének állapota komplex antigénkészítmények injekciója után
| Komplex | Száma | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf)] | Injekció (ml) | Állatok száma | Vakcinálás után az állatok bőrének állapota | Vakcinálás után az állatok szőrzetének állapota | |||
| első | második | pikkelyes | sima | sima és fényes | borzas és fénytelen | ||||
| (állatok | száma) | (állatok | száma) | ||||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279 | 4,2 | 2,5% 2,5% 10,5 mg | 0,5 | 1,0 | 2 | 0 | 2 | 2 | 0 |
| ANMP-CA9656 AEMP-TM7279 | 4,1 | 2,5% 7,1 mg | 0,5 | 1,0 | 3 | 0 | 3 | 3 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 5 | 1,75% 1,75% 15,6 mg | 0,5 | 1,0 | 1 | 0 | 1 | 1 | 0 |
| nem vakcináit | - | - | - | - | 3 | 3 | 0 | 2 | 1 |
9. táblázat
Különböző komplex készítményekkel végzet vakcinálás hatásosságának meghatározása nyári ekcémás izlandi lovakon
| Komplex | Száma | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Injekciók száma | Vakcináit lovak száma | Négy héttel a harmadik vakcinálás után a nyári ekcémából | |
| gyógyult | nem gyógyult | ||||||
| lovak | száma | ||||||
| ASMP-MG7274 ASMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 1 | 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml | 1 | 3 | 3 | 3 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ANMP-CA9656 | 2 | 1% 1% 1% | 1 | 3 | 3 | 0 | 3 |
| AEMP-MG7274 AEMP-TM7279 AEMP-CA9656 | 3 | 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml | 1 | 3 | 3 | 1 | 2 |
10. táblázat
Különböző komplex készítményekkel végzett vakcinálás hatásosságának meghatározása nyári ekcémás izlandi lovakon
| Komplex | Száma | Az egyedi frakciók koncentrációja [mg/ml vagy % (térf./térf)] | Injekciótérfogat (ml) | Injekciók száma | Vakcináit lovak száma | Négy héttel a harmadik injekció után | |
| viszketeg- ségből | ekcémából | ||||||
| gyógyult lovak száma | |||||||
| ASMP-MG7274 ASMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 1 | 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml | 1 | 3 | 3 | 3 | 3 |
HU 224 223 Β1
10. táblázat (folytatás)
| Komplex | Száma | Az egyedi frakciók koncentrációja [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekciótérfogat (ml) | Injekciók száma | Vakcináit lovak száma | Négy héttel a harmadik injekció után | |
| viszketeg- ségből | ekcémából | ||||||
| gyógyult lo | vak száma | ||||||
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ANMP-CA9656 | 2 | 1% 1% 1% | 1 | 3 | 3 | 1 | 0 |
| AEMP-MG7274 AEMP-TM7279 AEMP-CA9656 | 3 | 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml | 1 | 3 | 3 | 2 | 1 |
| Antigén nélkül (A vivőanyag) | - | (kontroll) | 1 | 3 | 3 | 0 | 0 |
11. táblázat
Különböző antigénkészítményekkel végzett vakcinálás ártalmatlanságának meghatározása nyári ekcémás izlandi lovakon
| Komplex | Száma | Koncentráció [mg/ml vagy % (térf./térf.)] | Injekció térfogata (ml) | Injekciók száma | Vakcináit lovak száma | Az első-harmadik injekció után 1-3 napig figyelt helyi mellékhatások | Az első-harmadik injekció után 1-3 napig figyelt helyi mellékhatások | ||
| duzzanat | fájdalom | láz | étvágyta- lanság | ||||||
| (lovak száma) | (lovak száma) | ||||||||
| ASMP-MG7274 ASMP-TM7279 ASMP-CA9656 | 1 | 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml | 1 | 3 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ANMP-CA9656 | 2 | 1% 1% 1% | 1 | 3 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| AEMP-MG7274 AEMP-TM7279 AEMP-CA9656 | 3 | 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml | 1 | 3 | 3 | 1 | 0 | 0 | 0 |
| Antigén nélkül (A vivőanyag) | - | (kontroll) | 1 | 3 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 |
12. táblázat MMR-spektrumok
| Antigénkészlt- mények | Acetát (s) | Dublett aminosavak | Triplett aminosavak | Multlplett szénhidrátok | Izolált CHZ aminosavak | Végállású alkil-CH aminosavak | Aril-H aminosavak |
| ASMP | |||||||
| MG 7274/9-18-1 | 1,92 ppm | ch3 (d,6,8 Hz) 1,33 ppm | ch3 (t, 7,1 Hz) 1,18 ppm | 3,2-4,3 ppm | 1,7-3,45 ppm | 0,95 ppm | |
| (4. ábra) | ch3 (d,7,5 Hz) 1,48 ppm | 4,9-5,4 ppm |
HU 224 223 Β1
12. táblázat (folytatás)
| Antigénkészít- mények | Acetát (s) | Dublett aminosavak | Triplett aminosavak | Multiplett szénhidrátok | Izolált CH2 aminosavak | Végállású alkil-CH aminosavak | Aril-H aminosavak |
| CH2 (AcB, 16 Hz) 2,7 ppm/2,5 p pm | |||||||
| CA 9656/ b008 | 1,92 ppm | ch3 (d,7,0 Hz) 1,33 ppm | CH3 (t, 7,0 Hz) 1,18 ppm | 3,4-4,6 ppm | 3,28 ppm | 0,95 ppm | |
| (2. ábra) | CH, (d, 7,3 Hz) 1,48 ppm | 4,9-5,24 ppm | |||||
| TM 7279/ 32-m-1-5 | 1,92 ppm | ch3 (d, 7,1 Hz) 1,33 ppm | ch3 (t, 7,1 Hz) 1,18 ppm | 3,5-4,35 ppm | 2,1-3,3 ppm | 0,85-0,95 ppm | |
| (3. ábra) | ch3 (d, 7,1 Hz) 1,48 ppm | 5,0-5,25 ppm | |||||
| AEMP | |||||||
| TM 7279/ P32-5-1 | CH3 (d, 6,5 Hz) 1,33 ppm | 3,2-4,07 ppm | 1,6-3,12 ppm | ||||
| (1A-C. ábra) | ch3 (d, 7,5 Hz) 1,48 ppm | 0,84-1,08 ppm | 7,15-7,9 ppm | ||||
| CH (d, 8,2 Hz) 4,65 ppm | |||||||
| CH (d, 4,0 Hz) 5,23 ppm |
(s)=szingulett
Az 1-4. ábrák leírása
Az 1-4. ábrákon bemutatott NMR-vizsgálatokat a következőképpen végeztük:
A spektrumokat D2O-ban, egy 250 MHZ BRUKER digitális NMR-spektrométerrel (DRX 400 modell) 400,13 Mc 1H-frekvenciával - kaptuk. Sávszélesség 14,5 ppm, környezeti hőmérséklet: 300 K. A kémiai eltolódásokat az oldószerközhöz viszonyítottuk.
A standard 1H-egydimenziós spektrumokat a megfelelő BRUKER pulse program használatával kaptuk.
Claims (36)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás poliszacharidot és/vagy glikopeptidet tartalmazó, oldható, antigénhatású anyag (ASMP) előállítására, azzal jellemezve, hogy gombasejteket, amelyek a keratinofilgombák vagy élesztőgombák közé tartoznak, vagy ezek anyagát- vizes alkalikus körülmények között kezeljük,- a preparátum szilárd és folyékony fázisait elválasztjuk,- elválasztás után a felülúszót ásványi vagy szerves savval kezeljük, és- elválasztás után az ASMP-t a felülúszóból kicsapjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gombasejteket vagy ezek anyagát- 0,1-5% (tömeg/térf.) kálium-hidroxiddal vagy nátrium-hidroxiddal 20-150 °C-on 30 órán át kezeljük,- majd centrifugáljuk,- centrifugálás után a felülúszót 0,1-1,5 M szerves savval vagy 0,05-1,0 M ásványi savval kezeljük,- centrifugálás után a felülúszót megfelelő szerves oldószerrel, így alkohollal, például egy rövid szénláncú alkohollal, vagy egy sóval, például ammónium-szulfáttal kezeljük,- a csapadékot kinyerjük és kívánt esetben vizes oldatban feloldjuk.
- 3. Eljárás poliszacharidot és/vagy glikopeptidet tartalmazó, nem oldható, antigénhatású anyag (ANMP) előállítására, azzal jellemezve, hogy gombasejteket, amelyek a keratinofilgombák vagy élesztőgombák közé tartoznak, vagy ezek anyagát- vizes alkalikus körülmények között kezeljük,HU 224 223 Β1- a preparátum szilárd és folyékony fázisait elválasztjuk,- elválasztás után a szilárd fázist ásványi vagy szerves savval kezeljük.
- 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gombasejteket vagy ezek anyagát- 0,1-5% (tömeg/térf.) kálium-hidroxiddal vagy nátrium-hidroxiddal 20-150 °C-on 30 órán át kezeljük,- a szilárd fázist 0,2-1,5 M szerves savval vagy 0,05-1,0 M ásványi savval kezeljük, és- vizes oldattal mossuk.
- 5. Eljárás poliszacharidot és/vagy glikopeptidet tartalmazó antigénhatású exogén anyag (AEMP) előállítására, azzal jellemezve, hogy gombasejteket, amelyek a keratinofilgombák vagy élesztőgombák közé tartoznak, vagy ezek anyagát- folyékony közegben tenyésztjük,- a készítmény szilárd és folyékony fázisait elválasztjuk, és- elválasztás után az AEMP-t a felülúszóból kicsapjuk.
- 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy- a tenyésztést 250 órán át folytatjuk,- elválasztás után alkoholt adunk a felülúszóhoz, és- a csapadékot kinyerjük és kívánt esetben vizes oldatban oldjuk.
- 7. Az 5. vagy 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy- elválasztás után a felülúszót liofolizáljuk,- a liofilizált anyagot vizes oldatban feloldjuk,- az oldat 1-5 térfogat alkohollal való kicsapása után a csapadékot vizes oldatban feloldjuk, és- az oldatot liofilizáljuk.
- 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a keratinofil gomba a Trichophyton és/vagy Microsporum nemzetséghez tartozik és/vagy az élesztőgomba a Candida nemzetséghez tartozik.
- 9. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gombasejt az alábbi gombafajok egyikéhez tartozik:- Trichophyton equinum,- Trichophyton mentagrophytes,-Trichophyton sarkisovii,- T richophyton verrucosum,- Microsporum canis,- Microsporum gypseum vagy- Candida albicans.
- 10. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gombasejt az alábbi törzsek egyikéhez tartozik:- Trichophyton equinum DSM No. 7276,-Trichophyton mentagrophytes DSM No. 7279,- Trichophyton sarkisovii DSM No. 7278,- Trichophyton verrucosum DSM No. 7277,- Microsporum canis DSM No. 7281,- Microsporum canis var. obesum DSM No. 7280,- Microsporum canis var. distortum DSM No. 7275,- Microsporum gypseum DSM No. 7274 vagy- Candida albicans DSM No. 9656.
- 11. Emlősökben allergiaellenes hatást kifejtő anyagot tartalmazó poliszacharid és/vagy glikopeptid, amely az 1., 3. vagy 5. igénypontok bármelyike szerinti eljárással állítható elő.
- 12. Az 1. vagy 2. igénypont vagy a 8-10. igénypontok bármelyike szerint előállítható anyag (ASMP).
- 13. A 3. vagy 4. igénypont vagy a 8-10. igénypontok bármelyike szerint előállítható anyag (ANMP).
- 14. Az 5-7. vagy a 8-10. igénypontok bármelyike szerint előállítható anyag (AEMP).
- 15. A 11. vagy 12. igénypont szerinti anyag, amely T. mentagrophytes DSM No. 7279 törzsből előállított ASMP-t, M. gypseum DSM No. 7274 törzsből előállított ASMP-t és C. albicans DSM No. 9656 törzsből előállított ASMP-t tartalmaz.
- 16. A 11. vagy 13. igénypont szerinti anyag, amely T. mentagrophytes DSM No. 7279 törzsből előállított ANMP-t, M. gypseum DSM No. 7274 törzsből előállított ANMP-t és C. albicans DSM No. 9656 törzsből előállított ANMP-t tartalmaz.
- 17. A 11. vagy 14. igénypont szerinti anyag, amely T. mentagrophytes DSM No. 7279 törzsből előállított AEMP-t, M. gypseum DSM No. 7274 törzsből előállított AEMP-t és C. albicans DSM No. 9656 törzsből előállított AEMP-t tartalmaz.
- 18. A 11-17. igénypontok szerinti anyagok bármilyen kombinációját tartalmazó anyag.
- 19. A 18. igénypont szerinti anyag, amely AMP-t és AEMP-t tartalmaz.
- 20. A 18. igénypont szerinti anyag, amely AMP-t és AEMP-t és ANMP-t tartalmaz.
- 21. A 18. igénypont szerinti anyag, amely AEMP-t és ANMP-t tartalmaz.
- 22. A 18. igénypont szerinti anyag, amely ASMP-t és ANMP-t tartalmaz.
- 23. Vakcina, amely egy 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyagot tartalmaz.
- 24. A 23. igénypont szerinti vakcina, amely megfelelő fiziológiás vivőanyagot is tartalmaz.
- 25. Injekciós oldat, amely a 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyagot vagy a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcinát tartalmazza.
- 26. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina vagy a 25. igénypont szerinti oldat gyógyászati alkalmazásra.
- 27. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina vagy a 25. igénypont szerinti oldat alkalmazása gyógyszerkészítmény előállítására.
- 28. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina vagy a 25. igénypont szerinti oldat alkalmazása allergia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 29. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina vagy a 25. igénypont szerinti oldat alkalmazása immunválasz modulálására szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 30. A „Deutsche Sammlung für Mikroorganismen (DSM) intézményben 9656 letéti számon letétbe he20HU 224 223 Β1 lyezett Candida albicans, amely a 11. igénypontban meghatározott anyagot szolgáltatja.
- 31. A 11. vagy 12. igénypont szerinti anyag, amely M. gypseum DSM No. 7274 törzsből előállított ASMP-t és C. albicans DSM No. 9656 törzsből előállított 5 ASMP-t tartalmaz.
- 32. A11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina, a 25. igénypont szerinti oldat vagy a 31. igénypont szerinti anyag alkalmazása nyári ekcéma megelőzésére vagy kezeié- 10 sére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 33. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina, a 25. igénypont szerinti oldat vagy a 31. igénypont szerinti anyag alkalmazása alopecia megelőzésére vagy keze- 15 lésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 34. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina, a 25. igénypont szerinti oldat vagy a 31. igénypont szerinti anyag alkalmazása ekcéma megelőzésére vagy kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 35. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina, a 25. igénypont szerinti oldat vagy a 31. igénypont szerinti anyag alkalmazása neurodermitisz megelőzésére vagy kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 36. A 11-22. igénypontok bármelyike szerinti anyag, a 23. vagy 24. igénypont szerinti vakcina, a 25. igénypont szerinti oldat vagy a 31. igénypont szerinti anyag alkalmazása emlősök szőrzetének javítására szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.HU 224 223 Β1Int. Cl.7: C 12 P 21/001A. ábraTM 7279/ p32-5-l-o-co-5Í-<D ppm
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9516461A GB2304347A (en) | 1995-08-11 | 1995-08-11 | Antigenic preparations |
| PCT/EP1996/003535 WO1997007232A1 (en) | 1995-08-11 | 1996-08-09 | Antigenic preparations |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP9802419A2 HUP9802419A2 (hu) | 1999-02-01 |
| HUP9802419A3 HUP9802419A3 (en) | 1999-12-28 |
| HU224223B1 true HU224223B1 (hu) | 2005-06-28 |
Family
ID=10779086
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9802419A HU224223B1 (hu) | 1995-08-11 | 1996-08-09 | Antigénkészítmények, előállításuk és alkalmazásaik |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6379678B1 (hu) |
| EP (1) | EP0863991B1 (hu) |
| JP (3) | JP4285768B2 (hu) |
| KR (1) | KR100447926B1 (hu) |
| CN (1) | CN1228450C (hu) |
| AR (1) | AR008982A1 (hu) |
| AT (1) | ATE253641T1 (hu) |
| AU (1) | AU717731B2 (hu) |
| CA (1) | CA2229203C (hu) |
| CO (1) | CO4750671A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ294394B6 (hu) |
| DE (1) | DE69630611T2 (hu) |
| DK (1) | DK0863991T3 (hu) |
| ES (1) | ES2206588T3 (hu) |
| GB (1) | GB2304347A (hu) |
| HU (1) | HU224223B1 (hu) |
| IL (1) | IL123153A (hu) |
| MX (1) | MX9801180A (hu) |
| NZ (1) | NZ316062A (hu) |
| PL (1) | PL186523B1 (hu) |
| PT (1) | PT863991E (hu) |
| RU (1) | RU2245721C2 (hu) |
| SK (1) | SK282746B6 (hu) |
| WO (1) | WO1997007232A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA966801B (hu) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2020959C1 (ru) * | 1991-10-21 | 1994-10-15 | Игорь Дмитриевич Поляков | Вакцина поливак-тм для профилактики и лечения дерматофитозов животных |
| GB2304347A (en) * | 1995-08-11 | 1997-03-19 | Boeringer Ingelheim Vetmedica | Antigenic preparations |
| EP0834322A3 (en) * | 1996-10-04 | 1998-04-22 | BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH | Mycosis vaccine |
| AU3547499A (en) * | 1998-03-31 | 1999-10-18 | Abbott Laboratories | Bacterial or yeast extracts which stimulate the production of defensins and methods of use thereof |
| CA2325063A1 (en) * | 2000-10-27 | 2002-04-27 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of National Defence | Method for detecting antibodies to and antigens of fungal and yeast exposures |
| CN1938044B (zh) * | 2002-12-16 | 2011-12-28 | 全球免疫股份有限公司 | 用于免疫治疗的基于酵母的疫苗 |
| US9820986B2 (en) * | 2005-03-04 | 2017-11-21 | Taiwan Hopaz Chems, Mfg. Co., Ltd. | Glycopeptide compositions |
| WO2010032139A1 (en) * | 2008-09-17 | 2010-03-25 | Hunter Immunology Limited | Bacterial and fungal vaccines for the treatment of asthma |
| RU2660365C1 (ru) * | 2015-11-20 | 2018-07-05 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) | Способ получения специфических антигенных препаратов из клинически значимых дрожжевых грибов |
| SI3429600T1 (sl) | 2016-03-15 | 2021-08-31 | Igor Polyakov | Novi imunobiološki izdelki |
| CA3017654C (en) * | 2016-03-15 | 2023-07-25 | Igor Polyakov | Compositions for the treatment and prevention of hoof and claw diseases |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3867555A (en) * | 1972-11-29 | 1975-02-18 | Anheuser Busch | Manufacture of yeast protein isolate having a reduced nucleic acid content by an alkali process |
| GB1541511A (en) * | 1976-01-19 | 1979-03-07 | Idemitsu Kosan Co | Polysaccharide and process for the production thereof |
| JPS536413A (en) * | 1976-07-07 | 1978-01-20 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Preparation of n-containing polysaccharides |
| NO153458C (no) * | 1978-06-07 | 1986-03-26 | Inst Experimentalnoi Veterinar | Fremgangsm¨te for fremstilling av vaksine for profylakse o g behandling av ringorm hos pelsdyr og kaniner for¨rsaket av trichophyton mentagrophytes. |
| AU547928B2 (en) * | 1981-11-03 | 1985-11-14 | Sutka, K. | Antigenic preparation from candida guilliermondii |
| GB8506373D0 (en) * | 1985-03-12 | 1985-04-11 | Axon Healthcare Ltd | Antigens antibodies |
| GB8913737D0 (en) | 1989-06-15 | 1989-08-02 | Univ Birmingham | A novel anti-allergy treatment |
| US5223491A (en) * | 1989-11-09 | 1993-06-29 | Donzis Byron A | Method for revitalizing skin by applying topically water insoluble glucan |
| AU7761091A (en) | 1990-04-09 | 1991-10-30 | Adalbert Kopera | Antenna assembly |
| US5277904A (en) * | 1990-10-26 | 1994-01-11 | Pier Allan C | Broad spectrum dermatophyte vaccine |
| RU2020959C1 (ru) | 1991-10-21 | 1994-10-15 | Игорь Дмитриевич Поляков | Вакцина поливак-тм для профилактики и лечения дерматофитозов животных |
| CN1130386A (zh) | 1993-08-19 | 1996-09-04 | 美国3M公司 | 肝素官能亲合性载体 |
| AUPM473294A0 (en) * | 1994-03-25 | 1994-04-21 | Franklyn, Kathleen Mary | Peptides for diagnostics and therapeutics |
| GB2304347A (en) | 1995-08-11 | 1997-03-19 | Boeringer Ingelheim Vetmedica | Antigenic preparations |
| EP0834322A3 (en) | 1996-10-04 | 1998-04-22 | BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH | Mycosis vaccine |
-
1995
- 1995-08-11 GB GB9516461A patent/GB2304347A/en not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-08-09 RU RU98104502/15A patent/RU2245721C2/ru active
- 1996-08-09 CO CO96042293A patent/CO4750671A1/es unknown
- 1996-08-09 US US09/011,018 patent/US6379678B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 AT AT96928443T patent/ATE253641T1/de active
- 1996-08-09 PL PL96324975A patent/PL186523B1/pl unknown
- 1996-08-09 CZ CZ1998400A patent/CZ294394B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-08-09 PT PT96928443T patent/PT863991E/pt unknown
- 1996-08-09 KR KR10-1998-0700994A patent/KR100447926B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-08-09 MX MX9801180A patent/MX9801180A/es active IP Right Grant
- 1996-08-09 NZ NZ316062A patent/NZ316062A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-08-09 DK DK96928443T patent/DK0863991T3/da active
- 1996-08-09 DE DE69630611T patent/DE69630611T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 CA CA2229203A patent/CA2229203C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 CN CNB961975717A patent/CN1228450C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 AU AU68207/96A patent/AU717731B2/en not_active Expired
- 1996-08-09 WO PCT/EP1996/003535 patent/WO1997007232A1/en active IP Right Grant
- 1996-08-09 JP JP50892197A patent/JP4285768B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 EP EP96928443A patent/EP0863991B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 ES ES96928443T patent/ES2206588T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-09 SK SK177-98A patent/SK282746B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-08-09 IL IL12315396A patent/IL123153A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-08-09 HU HU9802419A patent/HU224223B1/hu active IP Right Grant
- 1996-08-12 ZA ZA966801A patent/ZA966801B/xx unknown
- 1996-08-12 AR ARP960103948A patent/AR008982A1/es not_active Suspension/Interruption
-
2002
- 2002-03-22 US US10/103,133 patent/US7090857B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-06-18 JP JP2008158819A patent/JP4286312B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2008-06-18 JP JP2008158818A patent/JP4286311B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4286312B2 (ja) | 抗原製剤 | |
| JPH10298085A (ja) | 微生物培地を備える組成物とその使用 | |
| GB1590659A (en) | Immunological adjuvant constituted by the p-aminophenyl derivative of n-acetylmuramyl-l-alanyl-d-isoglutamine | |
| EP0003833B2 (de) | Antigenderivate, Verfahren zu deren Herstellung, diese enthaltende pharmazeutische Präparate | |
| JP2002037739A (ja) | 免疫調整剤 | |
| CN114456943A (zh) | 一株桦褐孔菌及其提取物及其应用 | |
| CA2063721C (fr) | Medicament immunostimulant a base de glycopeptidolipides polaires de mycobacterium chelonae | |
| US5780424A (en) | Purified ribosomal fractions separated from the nonphotosynthetic filamentous bacteria beggiatoales | |
| CN113164531A (zh) | 用于生发或防止脱发的外用剂 | |
| US5114848A (en) | Extracellular exopolymer, process for its preparation and pharmaceutical compositions containing the said exopolymer | |
| US20020041908A1 (en) | Iridacea extracts for stimulating the immune system | |
| US7727973B2 (en) | Lipid A-type compound and composition containing it | |
| US20150366929A1 (en) | Use of elicited iridaceae plant cells in the treatment of sensitive skin | |
| JP2008137912A (ja) | アレルギー予防・治療剤および食品 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20050510 |