HU224072B1 - GE 2270 antibiotikumok amid származékai, eljárás ezek előállítására, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents

GE 2270 antibiotikumok amid származékai, eljárás ezek előállítására, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények Download PDF

Info

Publication number
HU224072B1
HU224072B1 HU9301941A HU9301941A HU224072B1 HU 224072 B1 HU224072 B1 HU 224072B1 HU 9301941 A HU9301941 A HU 9301941A HU 9301941 A HU9301941 A HU 9301941A HU 224072 B1 HU224072 B1 HU 224072B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
group
methyl
hydrogen
formula
compound
Prior art date
Application number
HU9301941A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9301941D0 (en
HUT64085A (en
Inventor
Romeo Ciabatti
Sergio Lociuro
Enrico Selva
Paolo Tavecchia
Original Assignee
Vicuron Pharmaceuticals Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vicuron Pharmaceuticals Inc. filed Critical Vicuron Pharmaceuticals Inc.
Publication of HU9301941D0 publication Critical patent/HU9301941D0/hu
Publication of HUT64085A publication Critical patent/HUT64085A/hu
Publication of HU224072B1 publication Critical patent/HU224072B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

A találmány a GE 2270 antibiotikum új (I) általános képletűszármazékaira, valamint ezek gyógyászatilag elfogadható addíciós sóiravonatkozik. A találmány tárgykörébe tartoznak továbbá az (I) általánosképletű vegyületek. A találmány szerinti megoldás kiterjed az (I)általános képletű vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítményekre.

Description

A találmány a GE 2270 antibiotikum új amidszármazékaira vonatkozik, továbbá eljárást is magában foglal az említett vegyületek előállítására, és kiterjed a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítményekre is.
A találmány közelebbről olyan új vegyületekre vonatkozik, amelyek (I) általános képletében
R jelentése hidrogénatom, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoport;
R-ι jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
Y jelentése -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben
R2 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, amino-(2-4 szénatomos alkil)-, (1-4 szénatomos alkil)-amino-(1-4 szénatomos alkil)- vagy di(1—4 szénatomos alkil)amino-(1-4 szénatomos alkil)-csoport;
R3 jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó szénláncú, az alábbi szubsztituensek közül egy-hármat hordozó
1-14 szénatomos alkilcsoport: karboxil-, formil-, szulfo-, foszfono-, aminocsoport, amelyek adott esetben rövid szénláncú alkoxi-karbonil- vagy benzil-oxi-karbonil-csoporttal védve vannak;
(1-4 szénatomos alkil)-amino-csoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxilcsoporttal szubsztituálva lehet; di{1—4 szénatomos alkil)-amino-, hidroxilcsoport, 1-4 szénatomos alkoxicsoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxilcsoporttal szubsztituálva lehet; merkaptocsoport, 1-4 szénatomos alkil-tio-csoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxilcsoporttal szubsztituálva lehet;
fenilcsoport, amely adott esetben egy-háromszorosan szubsztituálva lehet az alábbi szubsztituensek közül kiválasztott csoportokkal:
karboxil-, hidroxil-, merkaptocsoport; karbamoilcsoport, (1-6 szénatomos alkil)-karbamoil-csoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxil- és aminocsoporttal egyszeresen vagy kétszeresen lehet szubsztituálva; di(1-4 szénatomos alkil)-karbamoil-csoport, amelyben az alkilrészek a szomszédos nitrogénatommal együtt képezhetnek egy olyan telített 5 tagú heterociklusos csoportot, amely az egyik gyűrűszénatomon egy karboxil- vagy karbamoílcsoporttal adott esetben szubsztituálva lehet;
benzoil-amino-csoport, amelyben a fenilrész egy-három hidroxilcsoporttal lehet szubsztituálva;
tetrazolilcsoport;
3-6 szénatomos alkenilcsoport, amely adott esetben karboxil- vagy szulfocsoporttal szubsztituálva lehet;
-dezoxi-1 -g I u citi l-csopo rt;
2-dezoxi-2-glükozil-csoport; teljesen telített 5-7 tagú, nitrogéntartalmú heterociklusos csoport, amelyben a nitrogénatom adott esetben szubsztituálva lehet benzilcsoporttal; vagy
R2 és R3 a kapcsolódó nitrogénatommal együtt képezhet egy teljesen telített 5-7 tagú heterociklusos csoportot, amely gyűrű adott esetben egy gyűrűszénatomon karboxilcsoportot hordozhat,
R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport; azzal a feltétellel, hogy ha R4 hidroxi-metil-csoportot jelent, akkor egyidejűleg R metoxi-metil-csoportot és R-| metilcsoportot jelent.
A találmány tárgykörébe tartoznak a fenti (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható addíciós sói is.
A találmány szerinti vegyületek antimikrobiális aktivitással rendelkeznek.
A találmány tárgykörébe tartozik a találmány szerinti vegyületek előállítására vonatkozó eljárás is a megfelelő (II) általános képletű kiindulási vegyületekből, a képletben W jelentése karboxilos funkciós csoport vagy ennek aktivált észtere; míg R, R1 és R4 jelentése a fenti.
A GE 2270 antibiotikumot ATCC 53 773 Planobispora rosea fermentációjával vagy ennek variánsának vagy mutánsának a termelésével állítjuk elő a kívánt antibiotikus anyagnak a micéliumból és/vagy a fermentációs anyalúgból való izolálásával. Az ATCC 53 773 Planobispora rosea törzset talajmintából izolálták, és 1988. június 14-én deponálták az Amerikai Mikroorganizmus Gyűjteményben [American Type Culture Collection: (ATCC), 12 301 Parklawn Drive, Rockville, MD 20 852 Maryland, US] a Budapesti Szerződés feltételei szerint.
A törzs bejegyzésekor az ATCC 53 773 regisztrálási számot kapta.
Az antibiotikus hatású GE 2270 A a GE 2270 komplex antibiotikum fő komponense.
A GE 2270 A-t és az ATCC 53 773 Planobispora rosea mikroorganizmust a 359062 számú közzétett európai szabadalmi bejelentésben írták le.
Vizsgálataink alapján a GE 2270 A antibiotikum a (III) képlettel ábrázolható.
Abban az esetben, ha a GE 2270 A-t szelektív hidrogénezés körülményei között kezeljük, akkor származékaiként a GE 2270 A.), A2 és A3 nevű antibiotikumokat kapjuk. A fenti A-|, A2 és A3 faktorokat és az előállításukra szolgáló hidrolízist a 406 745 számú közzétett európai szabadalmi bejelentés és az 547 647 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés ismerteti.
Általában az előzőekben említett hidrolitikus körülmények közé tartozik a pufferolt vagy nem pufferolt vizes-savas közeg és a poláros szerves oldószerek keverékeinek használata. A reakció-hőmérséklet különféle tényezőktől, így az alkalmazott sav erősségétől és koncentrációjától függően változik, és általában -10 °C és 90 °C közötti. A reakcióidő is változtatható, jelentős
HU 224 072 Β1 mértékben függ olyan paraméterektől, mint a hőmérséklet, a sav erőssége és koncentrációja; általában néhány perctől néhány óráig terjedő mértékben változtatható.
Általában ha enyhe hidrolitikus körülményeket alkalmazunk, például rövidebb reakcióidőt és alacsonyabb hőmérsékletet vagy gyengébb savat, vagy kisebb savkoncentrációt, akkor rendszerint a GE 2270 Aret kapjuk; erősebb hidrolitikus körülményeket alkalmazva GE 2270 A2-t kapunk; a GE 2270 A3 kinyeréséhez még drasztikusabb hidrolitikus körülmények szükségesek.
Amíg a GE 2270 A2 és A3 közvetlenül használható a találmány szerinti vegyületek termeléséhez kiindulási anyagként, addig a GE 2270 Aj nem alkalmas a találmány szerinti vegyületek közvetlen előállítására kiindulási anyagként; azonban hasznosíthatjuk az említett kiindulási anyagok prekurzoraként, amint azt a későbbiekben ismertetjük.
A GE 2270 A2 és A3 antibiotikumokat az jellemzi, hogy a molekula felső részében egy észter és egy karboxil funkciós csoportja van. Közelebbről úgy találtuk, hogy a GE 2270 A2 és A3 antibiotikum az előzőekben meghatározott olyan (II) képlettel jellemezhető, amelyben W karboxilcsoportot (GE 2270 A3) vagy (a) képletű észtercsoportot (GE 2270 A2) jelent, R jelentése metoxi-metil-csoport, Rj és R4 metilcsoportot jelent.
A GE 2270 A2 és A3 (és keverékeik) használható megfelelő kiindulási anyagként a találmány szerinti vegyületek termeléséhez, erre a célra az A3 faktor az előnyösebb. Az A2 faktor közvetlenül alkalmazható aktivált észterként vagy A3 faktorrá alakítható át drasztikus savas hidrolízis előzőekben említett körülményei között, vagy hígított alkálifém-hidroxiddal végzett bázikus hidrolízissel (406 745 számú közzétett európai szabadalmi bejelentés és az 547 647 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés).
A 451 486 számú közzétett európai szabadalmi bejelentés és a 665 612 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés szerint további minor komponensek izolálhatok az ATCC 53 773 Planobispora rosea tenyészetéből vagy annak GE 2270 antibiotikumot termelő variánsából vagy mutánsából. Közelebbről ezeket a komponenseket a micéliumban és a tenyésztett mikroorganizmus fermentációs anyalúgjában is megtalálták.
A GE 2270 antibiotikum említett minor komponenseinek a micéliumból történő feltárására előnyös eljárás a leszűrt vagy centrifugált micélium vízzel elegyedő szerves oldószerrel történő extrahálásából, az extraktumok betöményítéséből és a nyers antibiotikus anyag kicsapásával történő feltárásából áll. A kicsapást előnyösen egy kicsapószer hozzáadásával végezzük.
A nyers antibiotikus anyag feltárása történhet még a vizes betöményített maradék vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel való extrahálásával vagy olyan adszorpciós kromatográfiával, melyet az abszorpciós mátrixból a kívánt termék eluálása követ.
A 911 146 67.8 számú európai szabadalmi bejelentésben ismertették, hogy az ATCC 53 773 Planobispora rosea ugyanebből a tenyészetéből a fentiekben leírt módon egy további minor komponens (C2a faktor) is izolálható.
A GE 2270 C2a antibiotikum fizikai-kémiai tulajdonságai a következők:
A) A Perkin-Elmer Model 320 spektrométerrel felvett ultraibolya-spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja:
Oldószer UV max. (nm)
0,1 M HCl 245-250 (széles) 300-315
0,1 Μ KOH 245-250 (széles) 300-315
Foszfátpuffer pH 7,38 245-250 (széles) 300-315
Metanol 245-250 (széles) 300-315
B) A GE 2270 C2a 1H-NMR-spektrumát 250 MHz-es
Bruker-spektrométerrel vettük fel. Az antibiotikumra, amelyet DMSO-d6 (hexadeutero-dimetil-szulfoxid) oldószerben, belső standardként TMS-t (δ 0,00 ppm) alkalmazva vettünk fel, a következő csoportok jeleit mutatja [δ, ppm, m] (s=szingulett, d=dublett, t=triplett, m=multiplett, Py=pirídin, Tz=tiazol);
9,03, d, (NH); 8,70, d, (2NH’-k); 8,60, s, 8,54, s, 8,29, s, és 7,38, s, (Tz CH’-k); 8,48, m, (glicin NH); 8,43, d, és 8,27, d, (Py, CH’-k); 7,35-7,20, m, (aromás CH’-k és primer amid NH); 6,89, s (primer amid NH); 6,04, d, (OH); 5,80, t (OH); 5,35-5,15, m, (aCH’-k); 5,04, m, (fenil-szerin βΟΗ); 4,98, s [CH2(OCH3)j; 4,87, d, [CH2(OH)j; 4,81, m és 4,56, m, (oxazolin CH2); 4,35-3,75, m, (glicin CH2 és prolinamid CH’-k); 3,39, s, (OCH3); 2,71, m, és 1,30, m, (aszparagin CH2); 2,48, d, (N-metil-aszparagin NCH3); 2,22-1,80, m, (izopropil CH és prolinamid CH’-k); 0,88 és 0,84, d, (valin CH3'-k).
C) A GE 2270 C2a 12,6 perces retenciós időt (Rt) mutat, és a GE 2270 A antibiotikumhoz (Rt=16,6 perc) viszonyított retenciós ideje 0,76 a következő reverz fázisú HPLC rendszerrel analizálva:
Oszlop: Bakerbond® C8 (5 pm) 4,6*250 mm (Bakerbond® a J. T. Baker Research Product, Phillisburg, New Jersey 08865 US által forgalmazott reverz fázisú oktil-szilil-szilikagél-tartalmú HPLC oszlop kereskedelmi neve)
Átfolyási sebesség; 1,8 ml/perc A fázis: acetonitril:tetrahidrofurán:40 mM-os ammónium-formiát 40:40:20 térfogatarányú elegye
B fázis: acetonitril:tetrahidrofurán:40 mM-os ammónium-formiát 10:10:80 térfogatarányú elegye
Elúció: az A fázis 20-30%-ig terjedő lineáris gradiense 20 perc alatt
Detektálás: 254 nm hullámhosszon UV-spektrométerrel.
D) A GE 2270 C2a antibiotikum fő FAB-MS csúcsa
1306 daltonnái van. Ez valószínűleg a protonált mo3
HU 224 072 Β1 lekulaion legalacsonyabb izotópjának felel meg. Az analízist dupla fókuszú Kratos MS-50 tömegspektrométerrel végeztük. 8 kV gyorsítófeszültséget alkalmaztunk, a gerjesztőtérben az atomokat xenongázzal (2x10-5 torr nyomáson) bombáztuk 6 kV feszültségen és 1 mA áramerősségnél. A FAB-MS analízishez az antibiotikumot 0,1 M ecetsavat tartalmazó tioglicerinmátrixszal kevertük.
A GE 2270 antibiotikum említett minor komponensei közül néhány (például B2, C2a, D·,, D2 és E) az előzőekben említett olyan (II) általános képlettel ábrázolható, amelyben
W (b) képletű csoportot jelent;
R jelentése a GE 2270 Cí és D·, esetében hidrogénatom, B2 esetében metilcsoport, D2 és E esetében hidroxi-metil-csoport, és B1 és C2a esetében metoxi-metil-csoport;
R-ι jelentése a GE 2270 B·,, D·) és E esetében hidrogénatom, és B2, C-i, C2a és D2 esetében metilcsoport; és
R4 jelentése a GE 2270 Bi, B2, C1f Dh D2 és E esetében metilcsoport, és C2a esetében hidroxi-metil-csoport.
Abban az esetben, ha a GE 2270 Dret, D2-t és E-t vagy elegyeiket ugyanazon hidrolitikus körülmények (406 745 számú közzétett európai szabadalmi bejelentésben és az 547 647 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírt) között kezeljük, mint amit a GE 2270 A-ból a GE 2270 A2 és A3 előállítására az előzőekben ismertettünk, akkor az említett közös W egység karboxilcsoporttá hidrolizálódik, és az R, R-ι és R4 szubsztituensek változatlanok maradnak.
Ezért az olyan (II) általános képletű származékok, ahol a képletben W karboxilcsoportot vagy aktivált észtercsoportot jelent, R hidrogénatomot, hidroxi-metilvagy metoxi-metil-csoportot, Rt hidrogénatomot vagy metilcsoportot és R4 metil- vagy hidroxi-metil-csoportot jelent, azzal a feltétellel, hogy ha R4 hidrogénatom vagy hidroxi-metil-csoport, akkor R metoxi-metil-csoportot és R-( metilcsoportot jelent, a találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagokként alkalmazhatók. Nyilvánvaló, hogy más mikroorganizmusokhoz hasonlóan a GE 2270-et termelő mikroorganizmustörzseknek is jellemzője a variánsok kialakulása. Például a törzs mesterséges variánsai és mutánsai nyerhetők különféle ismert mutagénekkel való kezeléssel, mint például ultraibolya sugarakkal, röntgensugarakkal, nagyfrekvenciájú hullámokkal, radioaktív sugarakkal és vegyi anyagokkal, ez utóbbiakra megemlítjük a salétromsavat, N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidint stb.
A találmány szerinti eljárásra alkalmazott ATCC 53 773 Planobispora rosea törzzsel ekvivalensnek tűnik valamennyi olyan természetes és mesterséges variáns és mutáns, amely a Planobispora nemzetséghez tartozik, és GE 2270 antibiotikumot termel.
A leírásban használt „alkilcsoport”, akár egyedül, akár más szubsztituensekkel kombinációban szerepel, mind az egyenes, mind az elágazó szénláncú szénhidrogéncsoportokat magában foglalja; az „1-14 szénatomos alkilcsoport” egyenes vagy elágazó szénláncú alifás szénhidrogénláncot jelent, amely 1-től 14-ig terjedő számú szénatomot tartalmaz, ilyenek például a metil-, etil-, propil-, 1-metil-etil-, butil-, 1 -metil-propil-, 1,1-dimetil-etil-, pentil-, 1-metil-butil-, 2-metil-butil-, 1-hexil-,
2- hexil-, 3-hexil-, 3,3-dimetil-1-butil-, 4-metil-1-pentil-,
3- metil-1 -pentil-, heptil-, oktil-, nonil-, decit-, undecil-, dodecil-, tridecil- és tetradecilcsoport; hasonlóképpen az „1-4 szénatomos alkil” egyenes vagy elágazó láncú 1-4 szénatomos szénhidrogénláncot jelent hasonlóan az előzőekben említett 1-4 szénatomos csoportokhoz.
Amint azt az előzőekben is említettük, az 1-14 szénatomos alkilcsoport egy-három szubsztituenst is hordozhat.
A halogénatom kifejezés fluor-, klór-, bróm- vagy jódatomot jelent.
A 3-6 szénatomos alkenilcsoportok közül megemlítjük a propenil-, 3-butenil-, 2-metil-propenil-, 2-pentenil- és 3-hexenilcsoportot. Ezek adott esetben karboxilvagy szulfocsoporttal szubsztituálva lehetnek.
A „teljesen telített 5-7 tagú, nitrogéntartalmú heterociklusos csoport, amelyben a nitrogénatom benzilcsoporttal szubsztituálva lehet” egy olyan teljesen telített 5-7 tagú heterociklusos csoportot jelent, amely egy nitrogénatomot tartalmaz, és ez a nitrogénatom adott esetben benzilcsoporttal helyettesített lehet. Az említett heterociklusos csoportok az -NR2R3 képletű csoport nitrogénatomjához kapcsolódnak egy olyan kötésen keresztül, amely ugyanezen nitrogénatom és a heterociklusos csoport szénatomja között van.
Abban az esetben, amikor R2 és R3 együtt a szomszédos nitrogénatommal egy „teljesen telített 5-7 tagú heterociklusos csoport” kifejezéssel megadott csoportot jelent, akkor ez a kifejezés magában foglalja például a következő heterociklusos csoportokat: pirrolidino-, piperidino- és hexahidroazepinocsoportot, mely karboxilcsoport szubsztituenst hordozhat.
Az „1-dezoxi-1-glucitil-csoport” kifejezés az (I) képletben olyan csoportot azonosít, ahol Y glutaminból, 1-amino-1-dezoxiglucitolból származó csoport. A „2-dezoxi-2-glükozil-csoport” kifejezés az (I) képletben olyan csoportot azonosít, ahol Y glükózaminból, azaz 2-amino-2-dezoxi-glükózból származó csoport.
A találmány szerinti vegyületek előnyös csoportját alkotják azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyeknél a képletben R metoxi-metil-csoportot, R! és R4 metilcsoportot jelent és a többi szubsztituens az előzőekben meghatározott jelentésű.
A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös csoportját azok a vegyületek alkotják, amelyek (I) általános képletében R metoxi-metil-csoportot, R1 és R4 metilcsoportot jelent, és Y olyan -NR2R3 képletű csoportot jelent, amelyben R2 hidrogénatom és R3 jelentése az előzőekben meghatározott.
A találmány szerinti vegyületek további előnyös csoportját azok a vegyületek alkotják, amelyek (I) általános képletében R metoxi-metil-csoportot, Rt és R4 metilcsoportot jelent, és Y egy természetes aminosavból vagy szintetikus dipeptidből származó -NR2R3 képletű csoportot jelent, ilyen aminosavak példáiként említjük meg a glicint, ornitint, szerint, aszparaginsavat, ti4
HU 224 072 Β1 rozint, leucint, fenil-alanint, metionint, prolint, treonint, lizint, a dipeptidek példáiként pedig a glicil-lizint, szeril-prolint, glicil-prolinamidot, tirozil-prolinamidot, treonil-prolinamidot és leucil-prolinamidot.
A találmány szerinti vegyületek további előnyös cső- 5 portját alkotják azok, amelyek (I) általános képletében R metoxi-metil-csoportot, R-ι és R4 metilcsoportot jelent, Y olyan -NR2R3 képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot jelent, és R3 3-7 szénatomos, egyenes szénláncú alkilcsoport, amely a karboxil-, szulfo- és foszfocso- 10 portok közül kiválasztott csoporttal szubsztituálva van.
A legelőnyösebb vegyület az, amely (I) általános képletében R metoxi-metil-csoportot, R1 és R4 metilcsoportot jelent, és Y jelentése olyan -NR2R3 képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatom és R3 5-karbo- 15 xi-pentil-csoport.
A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös csoportját alkotják azok, amelyek (I) általános képletében R hidrogénatomot, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoportot, R4 hidrogénatomot vagy metilcsoportot je- 20 lent, és Y olyan -NR2R3 általános képletű csoportot jelent, amelyben R2 hidrogénatom és R3 jelentése az előzőekben megadott.
A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös csoportját alkotják azok a vegyületek, amelyek (I) általá- 25 nos képletében R hidrogénatomot, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoportot, R4 hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent, R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport, azzal a feltétellel, hogy ha R4 hidrogénatomot vagy hidroxi-metil-csoportot jelent, akkor R jelentése me- 30 toxi-metil-csoport, R4 jelentése metilcsoport, és Y egy természetes aminosavból vagy szintetikus dipeptidből származó -NR2R3 képletű csoportot jelent, ilyen aminosavak példáiként említjük meg a glicint, omitint, szerint, aszparaginsavat, tirozint, leucint, fenil-alanint, metionint, 35 prolint, treonint, lizint, a dipeptidek példáiként pedig a glicil-lizint, szeril-prolint, glicil-prolinamidot, tirozil-prolinamidot, treonil-prolinamidot és leucil-prolinamidot.
A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös csoportját alkotják azok a vegyületek, amelyek (I) általá- 40 nos képletében R hidrogénatomot, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoportot, R1 hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent, R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport, azzal a feltétellel, hogy ha R4 hidroxi-metil-csoportot jelent, akkor R jelentése metoxi-metil-cso- 45 port, Rí jelentése metilcsoport, és Y olyan -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot, R3
3-7 szénatomos, egyenes szénláncú alkilcsoportot jelent, amely a karboxil-, szulfo- és foszfocsoportok közül kiválasztott csoporttal szubsztituálva van. 50
A találmány szerinti vegyületek utolsó, előnyös csoportját alkotják azok a vegyületek, amelyek (I) általános képletében R hidrogénatomot, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoportot, Rí hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent, R4 jelentése az előzőekben megadott, és Y 55 olyan -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot, R3 5-karboxi-pentil-csoportot jelent.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületekben R, R1( R4 és Y jelentése az előzőekben megadott, -NR2R3 jelentése az alábbi: 60
-NH2
-nhc4h9
-NH(CH2)4-PO3H2
-nhch2cooh
-NH-CH2CONH2
-NH-CH2-CON(C2H5)2
-NH-CH-COOH
I
COOH
-NH-CHCONH2 conh2
-NH-CH(CH2)3CONH2
COOH
-NH-CH(CH2)4CONH2
COOH
-NH-CH(CH2)nCOOH
CON(CH3)2, ahol n értéke 2, 3 vagy 4,
-NH-(CH2)n-NH2
-NH-(CH2)n-NHCH3
-NH-(CH2)n-N(CH3)2
-NH-(CH2)n-N(C2H5)2
-HN-(CH2)n—N(CH3)(C2H5), ahol n értéke 2, 3, 4, 5, 6, 7 vagy 8,
-NH-CH-CH2-CH2-N(C2H5)2 ch3
N-—-N
-nh-ch2.ch2 —*^/NH
-NH-CH2-CH-CH2-CH2-N(C2H5)2
OH
-NH-CH2-CH-CH2-N(CH3)2 ch2oh (CH2)3-N(C2H5)2 z
(CH2)3-N(C2H5)2 (CH2)4-NH2 z
(CH2)4-NH2
HU 224 072 Β1
-NH-(CH2)n-NH-(CH2)m-COOH
-NH-(CH2)n-O-(CH2)m-COOH
-NH-(CH2)n-S-(CH2)m-COOH, ahol n értéke 2, 3, 4 vagy 5 és m értéke 1, 2, vagy 4,
-NH-(CH2)n-CH=CH-(CH2)m-COOH
-NH-(CH2)n-CH=CH-(CH2)m-SO3H, ahol n értéke 1 vagy 2 és m értéke 0, 1 vagy 2.
A találmány szerinti vegyületek a hagyományos eljárások szerint sót képezhetnek.
Elsősorban azok a vegyületek, amelyek (I) általános képletében az -NR2R3 további amin funkciós csoportot tartalmaz, savaddíciós sókat képeznek.
Azok a találmány szerinti vegyületek, amelyek az -NR2R3 csoportban sav funkciós csoportot tartalmaznak, bázisokkal is képezhetnek addíciós sókat.
Azok a találmány szerinti vegyületek, amelyek savas és bázikus funkciós csoportot is tartalmaznak, belső sókat is képezhetnek. A találmány tárgykörében a „belső sókat” „nemsó” formájúként definiáltuk. A találmány szerinti vegyületek előnyös addíciós sói a gyógyászatilag alkalmazható savakkal és/vagy bázisokkal képzett addíciós sók.
A „gyógyászatilag alkalmazható savakkal és/vagy bázisokkal képzett addíciós sók” kifejezés magában foglalja mindazokat a savakkal és/vagy bázisokkal képzett sókat, amelyek biológiai, gyártási és formálási szempontból kompatibilisek a gyógyászati gyakorlattal ugyanúgy, mint az állattenyésztésben történő használattal.
Az (I) általános képletű vegyületek alkalmas savaddíciós sói azok, amelyek standard reakcióval állíthatók elő szerves és szervetlen savakkal, ilyen savak példáiként említjük meg a sósavat, bróm-hidrogén-savat, kénsavat, foszforsavat, ecetsavat, trifluor-ecetsavat, triklór-ecetsavat, borostyánkősavat, citromsavat, aszkorbinsavat, tejsavat, maleinsavat, fumársavat, palmitinsavat, koleinsavat, pamoasavat, mucinsavat, glutaminsavat, kámforsavat, glutársavat, glikolsavat, ftálsavat, borkősavat, laurinsavat, sztearinsavat, szalicilsavat, metánszulfonsavat, dodecilszulfonsavat (esztolinsav), benzolszulfonsavat, szorbinsavat, pikrinsavat, benzoesavat, fahéjsavat és hasonló savakat.
A bázisok képviselőiként említjük meg az alkálifémvagy alkáliföldfém-hidroxidot, így a nátrium-, kálium- és kalcium-hidroxidot; az ammóniát, szerves alifás, aliciklusos vagy aromás aminokat, így a metil-amint, dimetil-amint, trimetil-amint, 2-amino-2-(hidroxi-metil)-1,3-propándiolt (TRIS) és pikolint; valamint a bázikus aminosavakat, így a lizint, ornitint, argínint és hisztidint.
A találmány szerinti nemsó vegyületek vagy szabad aminovegyületek átalakítását a megfelelő addíciós sókká és ezek fordítottját, azaz a találmány szerinti vegyületek addíciós sóinak az átalakítását nemsó formájú vagy szabad aminoformájú vegyületekké a szakember számára általánosan ismert módon végezzük a találmány szerinti eljárásban.
Egy (I) általános képletű vegyületet például a megfelelő sav- vagy bázisaddíciós sójává alakíthatunk át a nemsó formájú vegyület vizes oldószerben való szétosztásával és a kiválasztott sav vagy bázis csekély mólfölöslegének hozzáadásával. A keletkezett oldatot vagy szuszpenziót ezt követően liofilizáljuk a kívánt só kinyerésére. Liofilizálás helyett néhány esetben lehetséges a végső sót kinyerni szerves oldószerrel való extrakcióval az elválasztott szerves fázis kis mennyiségűre való be töményítésével és egy olyan oldószerrel történő kicsapással, amely a sót nem oldja.
Abban az esetben, ha a só szerves oldószerben nem oldódik, és a nemsó formájú vegyület oldódik, akkor a sót nemsó formájú vegyület szerves oldószeres oldatából szűréssel nyerjük ki a kiválasztott sav vagy bázis csekély mólfeleslegű vagy sztöchiometrikus mennyiségének hozzáadását követően.
A nemsó formájú vegyületek előállíthatok a megfelelő sav- vagy bázisaddíciós sókból úgy, hogy ezeket olyan vizes oldószerben oszlatjuk el, amelyek szabaddá semlegesítik a nemsó formájú vegyületeket. A képződött nemsó formájú vegyületet kinyerhetjük például egy szerves oldószerrel való extrakcióval, vagy átalakíthatjuk egy másik bázis- vagy savaddíciós sóvá a kiválasztott sav vagy bázis hozzáadásával és az elegy előzőek szerinti feldolgozásával.
Amennyiben a semlegesítést követően sóleszakítás szükséges, akkor általános sólehasftási eljárást alkalmazunk.
Hagyományosan például olyan oszlopkromatográfiát alkalmazhatunk, amelyek pórusos polidextrángyantákat (így például Sephadex LH 20-at) vagy szilanizált szilikagélt tartalmaznak. A nemkívánatos sók vizes oldattal való eluálását követően a kívánt terméket víz és poláros vagy apoláros szerves oldószer keverékének lineáris gradiensű vagy lépcsős gradiensű eluálásával kapjuk; eluensként például acetonitril és víz (50-100):(50-0) térfogatarányú elegyet alkalmazhatunk.
Amint az általánosan ismert, a sóképzés - akár gyógyászatilag alkalmazható savakkal (bázisokkal), akár nem gyógyászatilag alkalmazható savakkal (bázisokkal) történik - hagyományos tisztítási technikaként alkalmazható. A sóképzés és izolálás után az (I) általános képletű vegyület só formája átalakítható a megfelelő nemsó formájú vegyületté vagy gyógyászatilag alkalmazható sóvá.
Az (I) általános képletű vegyületek savaddíciós sói például vízben és hidrofil oldószerekben oldhatóbbak, és megnövekedett a kémiai stabilitásuk.
Az (I) általános képletű vegyületek és sóik tulajdonságainak hasonlósága következtében, amint ezt a leírásban a korábbiak során már említettük, amikor az (I) általános képletű vegyületek biológiai hatásaival foglalkozunk, akkor ugyanezek alkalmazhatók gyógyászatilag alkalmazható sóikra is, és fordítva.
Tulajdonságaik következtében a találmány szerinti vegyületek humán- vagy állatgyógyászati kezelésre alkalmazható gyógyszerkészítmények előállításához hatóanyagként használhatók.
Elsősorban a GE 2270 antibiotikumok, az (I) általános képletű amidszármazékok antimikrobiális hatásúak, és főként Gram-pozitív baktériumok és Gram-pozitív és Gram-negatív anaerobok ellen hatásosak.
HU 224 072 Β1
A találmány szerinti vegyületek előállítására alkalmas általános eljárásban a megfelelő (II) általános képletű GE 2270 antibiotikumot reagáltatjuk egy HNR2R3 általános képletű aminnal inért szerves oldószerben. A (II) általános képletben
W karboxilcsoportot vagy aktivált észter funkciós csoportot jelent,
R jelentése hidrogénatom, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoport,
R-ι jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és
R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport, azzal a feltétellel, hogy ha R4 hidroxi-metil-csoportot jelent, akkor egyidejűleg R metoxi-metil-csoportot és R3 metilcsoportot jelent.
A HNR2R3 általános képletben R2 és R3 jelentése az előzőekben megadott.
Abban az esetben, ha W karboxilcsoportot jelent, akkor az amidálási reakciót kondenzálószer jelenlétében végezzük.
A találmány szerinti vegyületek előállítására az amidálást bizonyos esetekben úgy érdemes lefolytatni, hogy a reagensek egyes funkciós csoportjait meg kell védenünk. Ezek azok a funkciós csoportok, amelyek ugyan nem vesznek részt az amidálási reakcióban, de a reakciókörülményeket érzékenyen befolyásolhatják, vagy a reakció folyamatára negatív hatásúak, például nem kívánt mellékterméket eredményeznek.
Abban az esetben, ha az aminosav olyan további funkciós csoportokat, így amino-, karboxil- vagy merkaptocsoportokat tartalmaz, amelyek beavatkoznak az amidálás folyamatába, akkor ezeket a csoportokat a technika állásából ismert módszerek segítségével kell megvédeni. Ilyen módszereket ismertetnek például a következő szakkönyvek:
E. Gross és J. Meienhofer „The Peptides”, Vol. 3, Academic Press, New York, 1981, és M. Bodanszky és A. Bodanszky „The Practice of Peptide Synthesis”, Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, 1984.
Ezeknek a védőcsoportoknak stabilan kell a helyükön maradniuk az amidálási reakció körülményei között, és könnyen eltávolíthatóknak kell lenniük a reakció végén anélkül, hogy bármilyen hatást gyakorolnának az újonnan képződött amidkötésre vagy a molekula bármely más részére.
A találmány szerinti eljárásban az amino funkciós csoport megvédésére előnyösen alkalmazható N-védő csoportok előnyös képviselői azok, amelyek karbamátképző reagensek, ilyenek például az oxi-karbonil-csoportok, így 1,1-dimetil-propinil-oxi-karbonil-, terc-butil-oxi-karbonil-, vinil-oxi-karbonil-, aril-oxi-karbonil-, cinnamil-oxi-karbonil-, benzil-oxi-karbonil-, p-nitrobenzil-oxi-karbonil-, 3,4-dimetoxi-6-nitro-benzil-oxikarbonil-, 2,4-diklór-benzil-oxi-karbonil-, 5-benzizoxazolil-metil-oxi-karbonil-, 9-antranil-metil-oxi-karbonil-, difenil-metil-oxi-karbonil-, izonikotinil-oxi-karbonil-csoport és hasonlók.
A reaktív karboxil funkciós csoport megfelelő megvédése például észterképzéssel történik.
A szakember számára, de a leírásunk alapján is nyilvánvaló annak meghatározása, hogy a HNR2R3 általános képletű amin melyik funkciós csoportját szükséges megvédeni, hogyan kell azt megvédeni, és milyen lehasítási reakció szükséges a végső vegyület szabaddá tételéhez.
A speciális védőcsoportnak a szakember által történő kiválasztása függ természetesen a kívánt amidszármazék jellemzőitől. A végső vegyület amid funkciós csoportjának kell stabilnak lennie a védőcsoport(ok) eltávolítás! körülményei között.
Mióta a különböző védőcsoportok eltávolításának körülményei ismertek, a szakember képes a megfelelő speciális védőcsoportot kiválasztani.
A kondenzációs reakcióhoz alkalmazható inért szerves oldószerek az olyan oldószerek, amelyek nem avatkoznak bele a reakcióba kedvezőtlen módon, és képesek legalább részben oldani a kiindulási antibiotikus anyagot.
Az említett inért oldószerek példáiként említjük meg a szerves amidokat, glikolok és poliolok étereit, foszforamidokat és szulfoxidokat. Előnyös inért oldószerek közé tartoznak a dimetil-formamid, dimetoxi-etán, hexametil-foszforamid, dimetil-szulfoxid, dioxán és ezek elegyei.
Néhány alkalommal a víz is kompatibilis a reakciókörülményekkel.
Az olyan találmány szerinti eljárásban, ahol W karboxilcsoportot jelent, kondenzálószert alkalmazunk, mégpedig olyat, amely szerves vegyületekben és elsősorban peptidszintézisekben képes amidkötések létrehozására.
A kondenzálószerek előnyös képviselői az 1-4 szénatomos alkil-, fenil- vagy heterociklusos csoportokat tartalmazó foszforazidátok, így a difenil-foszforazidát (DPPA), dietil-foszforazidát, di(4-nitrofenil)-foszforazidát, dimorfolil-foszforazidát, továbbá difenil-foszforokloridát és a benzotriazol-1-il-oxitriszpirrolidino-foszfónium-hexafluoro-foszfát (PyBOP). Az előnyös kondenzálószer a difenil-foszforazidát (DPPA).
A találmány szerinti eljárásban a HNR2R3 általános képletű aminvegyületet általában enyhe mólfölöslegben alkalmazzuk.
Általában egy-kétszeres mólfelesleget használunk, míg az előnyös mólfölösleg 1,2-1,5-szeres.
Az amidálási folyamathoz szükséges, hogy a HNR2R3 általános képletű amin képes legyen sót képezni a kiindulási anyag karboxi funkciós csoportjával. Abban az esetben, ha ez az amin nem elég erős ahhoz, hogy a választott reakcióközegben ilyen sót képezzen, akkor a reakcióelegyhez egy sóképző bázist kell adni, legalább a kiindulási anyaggal ekvimoláris mennyiségben.
Az előzőekben említett sóképző bázisok például a tercier alifás vagy aliciklusos aminok, így trimetil-amin, trietil-amin, N-metil-pirrolidin, valamint heterociklusos bázisok, így a pikolin és hasonlók lehetnek.
A kondenzálószert általában csekély mólfeleslegben alkalmazzuk, például 1,1-tői 1,5-ig terjedő mólarányban, előnyösen a kiindulási GE 2270 vegyület 1,2-szeresét alkalmazzuk.
HU 224 072 Β1
A HNR2R3 általános képletű aminreagens a reakcióközegbe beadagolható a megfelelő savaddíciós só, például hidroklorid formájában.
Ebben az esetben a HNR2R3 általános képletű aminnak a sójából való felszabadítására legalább 2-szeres mólarányú és előnyösen 2-3-szoros mólfeleslegű erős bázist kell használni. Szintén ebben az esetben a megfelelő bázis egy tercier alifás vagy aliciklusos amin, amilyeneket az előzőekben példaként említettünk. Tulajdonképpen azokban az esetekben, amikor a só stabilabb a megfelelő szabad aminnál, sokkal előnyösebb a HNR2R3 általános képletű amin sóját használnunk, és ezt az előzőekben említett bázisokkal in situ felszabadítanunk.
A reakció-hőmérséklet jelentős mértékben függ a kiindulási anyagtól és a reakciókörülményektől. Általában az az előnyös, ha a reakciót 0-20 °C közötti hőmérsékleten végezzük.
A reakció-hőmérséklet is jelentős mértékben függ a többi reakcióparamétertől. A kondenzációs reakció általában 5-24 óra alatt válik teljessé.
Bizonyos esetekben a reakciófolyamatot TLC-vel vagy előnyösen HPLC-vel követjük a technika állásából ismert módszerek szerint.
Ezeknek a kromatográfiás vizsgálatoknak az eredményei alapján a szakember képes követni a reakciófolyamatot, és meg tudja határozni azt, hogy mikor kell a reakciót leállítani és megkezdeni a reakcióelegy feldolgozását a technika állásából jól ismert módszerekkel, utóbbiakra példaként említjük meg az oldószeres extrakciót, a kicsapást a terméket nem oldó oldószer hozzáadásával, valamint ezekkel együtt a további elválasztást és tisztítást oszlopkromatográfia alkalmazásával.
Amint már említettük, abban az esetben, ha a HNR2R3 általános képletű reagens valamely funkciós csoportját meg kell védenünk, akkor a védett végső vegyületből a védőcsoportot - elsősorban a védőcsoport milyenségétől függően - a technika állásából ismert módszerekkel le kell hasítanunk.
Abban az esetben, ha kiindulási anyagként a GE 2270 antibiotikum aktivált észterét alkalmazzuk, akkor ennek az észternek olyannak kell lennie, amelyben az észterezett alkohol a HNR2R3 általános képletű aminnal a reakciókörülmények között egy könnyen helyettesíthető és szubsztituálható kilépőcsoportot jelent, és ez a molekula többi részét nem változtatja meg. Az aminreagenst általában az aktivált észterhez viszonyítva mólfeleslegben alkalmazzuk egy olyan oldószerben, amelyet az előzőekben említettünk, és a rövid szénláncú alkanolok közül választunk. A reakció-hőmérséklet általában 0 és 100 °C közötti. Az aktivált észterek példáiként említjük meg a rövid szénláncú alkil-észtereket, ahol az alkilrész adott esetben ciano- és nitrocsoporttal lehet szubsztituálva, a halogénatomokkal és nitrocsoportokkal szubsztituált fenil-észtereket, továbbá a GE 2270 A2-ben lévő észtercsoportot.
Nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti vegyületek sok esetben több mint egy úton állíthatók elő, és a ta20 lálmány szerinti vegyületek ismert reakciók segítségével más találmány szerinti vegyületekké alakíthatók át.
Abban az esetben például, ha a HNR2R3 általános képletű amin egy olyan karboxi vagy észter funkciós csoportot tartalmaz, amely a megfelelő amidszárma25 zékká továbbalakítható, akkor a kívánt (I) általános képletű vegyület úgy állítható elő, hogy először az említett amint kondenzáljuk a GE 2270 kiindulási anyaggal, és ezt követően alakítjuk át a karboxi vagy észter funkciós csoportot amiddá, a megfelelő aminnal törté30 nő reagáltatásával.
A következő táblázatok tartalmazzák a találmány szerinti vegyületek néhány képviselőjének szerkezeti képletét (I. táblázat), előállítási módszereiket (részletesen leírva a kísérleti részben), a kiindulási anyagokat és a reakciótermékeket (II. táblázat). Az utóbbi táblázatban a HNR2R3 képletű aminok mellett kiindulási anyagokként a különböző GE 2270 faktorok és az I. táblázatban felsorolt továbbalakítható (I) általános képletű vegyületek szerepelnek.
I. táblázat
Vegyület száma Y R Rl R4
1. -NHCH2COOH CH2O-CH3 ch3 ch3
2. -NH CHCOOH CH2CH2CH2NH2 ch2o-ch3 ch3 ch3
3. -NH CHCOOH CH2OH ch2o-ch3 ch3 ch3
HU 224 072 Β1
/. táblázat (folytatás)
Vegyület száma Y R Rí r4
4. -NHCHCOOH Íh2cooh CH2O-CH3 ch3 ch3
5. -NH CH-COOH CH2 —OH CH2O-CH3 ch3 ch3
6. -NHCHCOOH 1h2CH(CH3)2 ch2o-ch3 ch3 ch3
7. -NH CH-COOH ch2o-ch3 ch3 ch3
8. -NHCHCOOH Ch2ch2sch3 ch2o-ch3 ch3 CH3
9. V COOH ch2o-ch3 ch3 ch3
10. -NH CHCOOH I HO---CH^h3 ch2o-ch3 ch3 ch3
11. -NH CH2CH2CH2CH2CH-COOH nh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
12. -NH CH2CONH|HCOOH ch2ch2ch2ch2nh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
HU 224 072 Β1
/. táblázat (folytatás)
Vegyület száma Y R Rí r4
13. ^h2oh -NHCHCONI V COOH ch2o-ch3 ch3 ch3
14. -NHCH2COI^ | conh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
15. -NHCHCOIÍI „ο-λ-L r-1 'e' conh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
16. -NHCHCOlT 1 CH3CHOH I conh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
17. CH(CH3)2 ch2 -NHCHCOI^ | conh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
18. -nhch2ch2ch2cooh ch2o-ch3 ch3 ch3
19. -nhch2ch2ch2ch2ch2cooh ch2o-ch3 ch3 CH3
20. -nhch2ch2ch2ch2ch2ch2ch2cooh ch2o-ch3 ch3 ch3
21. -nhch2ch2ch2ch2ch2ch2ch2ch2ch2ch2cooh ch2o-ch3 ch3 ch3
22. -nhch2ch2so3h ch2o-ch3 ch3 ch3
23. -nhch2ch2ch2so3h ch2o-ch3 ch3 ch3
24. -nhch2ch2ch2po3h2 ch2o-ch3 ch3 ch3
25. -nhch2ch2ch2ch2ch2po3h2 ch2o-ch3 ch3 ch3
26. -NH CH2—COOH ch2o-ch3 ch3 ch3
HU 224 072 Β1
/. táblázat (folytatás)
Vegyület száma Y R Rí r4
27. rx ^^COOH CH2O-CH3 ch3 ch3
28. N—N -NH CH2CH2CH2CH2CH2—Z | \i_nh ch2o-ch3 ch3 ch3
29. -|Í CH2CH CH CH CHCH2OH CHj OH OH OH OH ch2o-ch3 ch3 ch3
30. X O X X ch2o-ch3 ch3 ch3
31. 0 -NHCH2CH2CH2NHX'^S^^j^H ch2o-ch3 ch3 ch3
32. -NHCH2CH2N(CH3)2 ch2o-ch3 ch3 ch3
33. nh-Ochi~0 ch2o-ch3 ch3
34. xZCH2CH2CH2NH2 -N \CH2CH2CH2CH2NH2 ch2o-ch3 ch3 ch3
35. -nh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
36. -nhch2ch2ch2nh2 ch2o-ch3 ch3 ch3
37. -NHCH2CHO ch2o-ch3 ch3 ch3
38. -NHCH2CH2NHCH2CH2COOH ch2o-ch3 ch3 ch3
39. -nhch2ch2sch2ch2cooh ch2o-ch3 ch3 ch3
40. -nhch2ch2ch2ch=chcooh ch2o-ch3 ch3 ch3
41. -nhch2ch2och2ch2cooh ch2o-ch3 ch3 ch3
HU 224 072 Β1
/. táblázat (folytatás)
Vegyület száma Y R Rl R<
42. -NHCH2CH2CH2CH2CH2COOH CH2O-CH3 CH3 ch2oh
43. -nhch2ch2ch2ch2ch2cooh H H ch3
44. -nhch2ch2ch2ch2ch2cooh CH2OH CH3 ch3
A 2., 11., 12., 34., 36. számú vegyületeket trifluor-acetátos só formában izoláltuk
II. táblázat
Vegyület száma Kiindulási anyagok (GE 2270 faktor+aminreagens) Eljárásváltozat Termelés
1. A3+HCI.NH2CH2COOEt A, 80%
2. Á3 + HCl.NH2CHCOOMe lH2CH2CH2NH.Cbz A1 72%
3. A3 + HCl.NH2CHCOOMe CH2OH A1 70%
4. A3 + HCl.NH2CHCOOMe CH2COOMe A1 54%
5. A3 ♦ HCI.NH2CH-COOMe Íh2_-OH A, 70%
6. A3 * HCI.NH2CHCOOMe Íh2ch(ch3)2 A, 70%
7. A3 ♦ HCI.NH2CHCOOMe A, 60%
8. A3 ♦ HCLNH2(jHCOOMe CH2CH2SCH3 A1 70%
HU 224 072 Β1 //. táblázat (folytatás)
Vegyület száma Kiindulási anyagok (GE 2270 faktor+aminreagens) Eljárásváltozat Termelés
9. A3 ♦ HCI.HI^ | COOMe A1 75%
10. A3 + HCI.NH2^HCOOMe A1 70%
11. A3 4 NH2CH2CH2CH2CH2CH-COOH tlH.Cbz B, 64%
12. A3 + TFA.NH2CH2CONHCHCOOH JH2CH2CH2CH2NH.Cbz 74%
13. 3 + HCl.HN^ | COOMe C1 70%
14. 1* Η<ρ conh2 C 83%
15. A3 + HCI.NH2Q1COf/ HO—%—CH2 ’ \—/ conh2 vagy 5 ♦ Hl/ 1 CONH2 A 60%
C 70%
HU 224 072 Β1 //. táblázat (folytatás)
Vegyűlet száma Kiindulási anyagok (GE 2270 faktor+aminreagens) Eljárásváltozat Termelés
16. 10 ♦ | conh2 C 60%
17. 6 ♦ | CONHi C 65%
18. A3+HCI.NH2CH2CH2CH2COOMe A, 73%
19. A3+HCI.NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOMe A1 77%
A3+NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOH B 70%
20. A3+PTSA.NH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2COOMe A, 75%
21. A3+PTSA.NH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2COOMe A, 70%
22. A3+NH2CH2CH2SO3H B 20%
23. A3+NH2CH2CH2CH2SO3H B 25%
24. A3+NH2CH2CH2CH2PO3H2 B 40%
25. A3+NH2CH2CH2CH2CH2CH2PO3H2 B 35%
26. A3 + NHjCHz—-COOH B 60%
27. Aj ♦ HN^ ^^^COOH B 50%
28. N—N A3 ♦ NH2CH2CH2CH2CH2CH2 —-Z | 'N _NH B 65%
29. A3 ♦ NH-CH2(jH CH CH <jHCH2OH CHj OH Íh OH OH A 20%
30. CH2OH A3 ♦ HO<V^----- ho-^7~X oh nh2.hci A 80%
HU 224 072 Β1
II. táblázat (folytatás)
Vegyület száma Kiindulási anyagok (GE 2270 faktor+aminreagens) Eljárásváltozat Termelés
31. - ^\)THP C, 80%
32. A3+NH2CH2CH2N(CH3)2 A 75%
33. a3 ♦ NH2—CH2 —— A 60%
34. x pCH2CH2CH2NH.Boc *3 ♦ NH ^CH2CH2CH2CH2NH.Boc A1 50%
35. A2+NH3 in MeOH D 83%
36. A3+NH2CH2CH2CH2NH.Boc A! 70%
37. _och3 A3 +101201201^ ^*och3 A, 65%
38. 37+HCI.NH2CH2CH2COOCH2CH3 C1 20%
39. A3+TFA.NH2CH2CH2SCH2CH2COOCH3 A1 33%
40. A3+TFA.NH2CH2CH2CH2CH=CH-COOH B 51%
41. A3+TFA.NH2CH2CH2OCH2CH2COOH B 37%
42. C2a+HCI.NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOCH3 NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOH F G 40% 35%
43. D1+HCI.NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOCH3 NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOH H I 50% 40%
44. D2+HCI.NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOCH3 NH2CH2CH2CH2CH2CH2COOH J K 35% 30%
TFA=trifluor-ecetsav
PTSA=p-toluolszulfonsav
HPLC analízis
Az alábbi táblázat (III. táblázat) a találmány szerinti vegyületek képviselőinek Rrértékeit mutatja be.
Az analízist olyan Varian 5000 LC szivattyúval végeztük, amely 10 μΙ-es hurokinjektorral volt felszerelve, és változtatható hullámhosszúságú Varian 2050 detektorral 254 nm-en.
Oszlopok: előkolonna: LiChroCart-LiChrosorb RP-8 (5 μηι) kolonna: LiChroCart 125-4 LiChrospher 100 RP-8 (5 μπι)
Eluens: A 0,05 M-os vizes ammónium-formiát B acetonitril C tetrahidrofurán
A) módszer: izokratikusan 44% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
B) módszer: izokratikusan 40% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
C) módszer: izokratikusan 38% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,5 ml/perc
D) módszer: izokratikusan 30% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
HU 224 072 Β1
E) módszer: izokratikusan 38% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
F) módszer: 38-55% B gradiens az A-ban perc alatt az alábbi program szerint: Idő (perc) B % az A-ban
38
38
45
45
55
Átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
G) módszer: 38-55% B gradiens az A-ban perc alatt az alábbi program szerint: Idő (perc) B % az A-ban
0 38
6 38
10 44
15 44
25 55
Átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc.
H) módszer: izokratikusan 55% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
I) módszer: izokratikusan 60% B az A-ban átfolyási sebesség 0,7 ml/perc
L) módszer: izokratikusan 48% B az A-ban átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc
M) módszer: a gradiens az alábbiak szerint
Idő (perc) A% B% C%
0 74 10 16
20 62 19 19
Átfolyási sebesség: 0,7 ml/perc ///. táblázat
HPLC analízis
Vegyület száma Eljárás R. (perc) K
1. A 2,56 0,92
2. B 4,09 1,15
3. C 6,21 1,12
4. D 14,70 1,79
5. E 5,99 1,28
6. A 4,05 1,46 |
7. A 4,52 1,63
8. A 3,44 1,24
9. E 5,32 1,18
10. E 4,22 0,90
11. F 14,30 3,05
12. F 5,99 1,28
13. E 4,88 1,04
14. G 14,09 3,01
15. G 17,60 3,76
16. G 13,77 2,94
17. G 23,75 5,07
18. G 7,49 1,60
19. F 8,84 1,89
Vegyület száma Eljárás R. (Perc) K
20. G 17,77 3,78
21. G 31,10 6,64
22. F 5,01 1,07
23. F 4,40 0,94
24. F 6,27 1,34
25. F 11,17 2,39
26. F 29,04 6,02
27. F 6,28 1,34
28. F 12,14 2,59
29. F 8,02 1,71
30. E 6,81-7,61 anomer keverék 1,45-1,62 anomer keverék
31. F 17,64 3,76
32. B 9,64 2,70
33. H 15,10 7,40
34. I 7,22 3,92
35. L 10,28 4,11
36. F 19,32 4,13
37. F 14,56 3,11
38. F 11,00 2,35
39. F 9,48 2,02
40. F 6,84 1,46
41. F 3,95 0,84
42. M 17,23 1,32
43. M 15,76 1,52
44. M 16,64 1,50
19. M 20,81 1,32
relatív retenciós idő
K=relatív retenciós idö=R, amid/R, GE 2270 típusú kiindulási anyag [például a (II) képletű vegyület, amelyben W jelentése COOH]
Kísérleti rész
IV. táblázat - NMR
Az 1H-NMR-spektrumokat Bruker-spektrométerrel DMSO-d6 (hexadeutero-dimetil-szulfoxid) oldószerben vettük fel, belső standardként (δ 0,00 ppm) tetrametil-szilánt (TMS) használtunk (δ, ppm, m) 250 MHz és/vagy 500 MHz-nél (s=szingulett, br s=széles szingulett, d=dublett, dd=kettős dublett, t=triplett, m=multiplett).
V. táblázat - IR
Az infravörös spektrumokat (IR) Perkin-Elmer 580 spektrofotométerrel nujolban vettük fel.
VI. táblázat - UV
Az ultraibolya spektrumokat Perkin-Elmer 320 spektrométerrel vettük fel.
A szakember számára világos, hogy a IV., V. és VI. táblázatokban szereplő adatok a kapott csúcsok nem mindegyikét reprezentálják, hanem a jellemző, szerkezetbizonyító értékeket.
HU 224 072 Β1
IV. táblázat NMR-spektrumok
Vegyület száma 1 H-NMR (DMSO-d6) δ (ppm)
1. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 2,57 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,77 (dd, 1H); 3,99 (d, 2H); 4,25 (dd, 1H); 4,96 (s, 2H); 7,36-7,22 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
2. 0,79 (d, 3H); 0,85 (d, 3H); 2,05-1,70 (m, 4H); 2,54 (s, 3H); 3,33 (s, 3H); 3,65 (m, 2H); 3,81 (dd, 1H); 4,10 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H); 4,99 (s, 2H); 7,35-7,05 (m, 7H); 8,20 (s, 1H); 8,42 (s, 1H); 8,58 (s, 1H)
3. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 2,58 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,80 (dd, 2H); 3,84 (dd, 1H); 3,91 (dd, 1H); 4,26 (dd, 1H); 4,55 (m, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,36-7,20 (m, 7H); 8,29 (s, 1H); 8,55 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
4. 0,85 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 2,58 (s, 3H); 2,90 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,70 (dd, 1H); 4,29 (dd, 1H); 4,85 (m, 1H); 4,98 (s, 2H); 7,40-7,20 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,52 (s, 1H); 8,58 (s, 1H)
5. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,58 (s, 3H); 3,11 (m, 2H); 3,26 (br; s, 1H); 3,38 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H) 4,64 (m, 1H); 4,97 (s, 2H); 6,68 (d, 1H); 7,09 (d, 1H); 7,40-7,20 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
6. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 0,92 (d, 3H); 0,95 (d, 3H); 1,69 (m, 2H); 1,86 (m, 1H); 2,57 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,26 (dd, 1H); 4,53 (m, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,38-7,20 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,46 (s, 1H); 8,59 (s,1H)
7. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,58 (s, 3H); 3,20 (m, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,77 (dd, 1H); 4,25 (dd, 1H); 4,73 (m, 1H); 7,40-7,2 (m, 12H); 8,28 (s, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
8. 0,85 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 2,08 (s, 3H); 2,16 (m, 2H); 2,56 (m, 2H); 2,57 (s, 3H); 3,40 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,61 (m, 1H); 5,00 (s, 2H); 7,37-7,20 (m, 7H); 8,29 (s, 1H); 8,52 (s, 1H); 8,60 (s, 1H)
9. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,45-1,70 (m, 4H); 2,58 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,68 (m, 2H); 3,78 (dd, 1H); 4,10 (m, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,49 (m, 1H); 7,35-7,22 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
10. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,19 (d, 3H); 2,59 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,30 (m, 2H); 4,48 (dd, 1H); 4,99 (s, 2H); 7,4-7,2 (m, 7H); 8,33 (s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,60 (s, 1H)
11. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H): 1,55-1,35 (m, 2H); 1,61 (m, 2H); 1,83 (m, 2H); 2,58 (s, 3H); 3,34 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 3,91 (br; s, 1H); 4,29 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,35-7,13 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,43 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
12. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,37 (m, 2H); 1,70-1,49 (m, 3H); 1,75 (m, 1H); 2,58 (s, 3H); 2,76 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,03 (m, 2H); 4,28 (m, 2H); 4,97 (s, 2H); 7,35-7,20 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
13. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,98-1,82 (m, 2H); 2,18 (m, 2H); 2,56 (s, 3H); 2,69 (dd, 2H); 3,36 (s, 3H); 3,85-3,62 (m, 3H); 4,31 (m, 2H); 4,85 (m, 1H); 4,96 (s, 2H); 7,38-7,19 (m, 7H); 8,24 (s, 1H); 8,55 (s, 1H); 8,63 (s, 1H)
14. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,99-1,82 (m, 3H); 2,06 (m, 1H); 2,58 (s, 3H); 3,58 (m, 1H); 3,67 (m, 1H); 3,79 (dd, 1H); 4,18 (d, 2H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 6,93 (s, 1H); 7,36-7,28 (m, 8H); 8,28 (s, 1H); 8,52 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
15. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,07-1,63 (m, 4H); 2,58 (s, 3H); 2,99 (dd, 1H); 3,09 (dd, 1H); 3,38 (s, 3H); 3,51 (m, 1H); 3,77 (m, 2H); 4,30 (m, 2H); 4,89 (m, 1H); 4,98 (s, 2H); 6,66 (d, 1H); 6,95 (br, s, 1H); 7,16 (d, 1H); 7,39-7,20 (m, 8H); 8,23 (s, 1H); 8,42 (s, 1H); 8,58 (s, 1H)
16. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,20 (d, 3H); 1,98-1,80 (m, 3H); 2,08 (m, 1H); 2,56 (s, 3H); 3,36 (s, 3H); 3,85-3,71 (m, 2H); 4,13 (m, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,31 (dd, 1H); 4,73 (m, 1H); 5,05 (d, 1H); 6,89 (br; s, 1H); 7,15 (br; s, 1H); 7,38-7,19 (m, 7H); 8,26 (s, 1H); 8,51 (s, 1H); 8,56 (s, 1H)
17. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 0,94 (d, 3H); 0,98 (d, 3H); 2,10-1,62 (m, 7H); 2,56 (s, 3H); 3,36 (s, 3H); 3,65 (m, 1H); 3,88-3,70 (m, 2H); 4,31 (m, 2H); 4,88 (m, 1H); 4,96 (s, 2H); 6,79 (br, s, 1H); 7,18 (br; s, 1H); 7,35-7,20 (m, 7H); 8,25 (s, 1H); 8,48 (s, 1H); 8,56 (s, 1H)
18. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,81 (m, 2H); 2,30 (t, 2H); 2,58 (s, 3H); 3,35 (m, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,35-7,20 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,46 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
19. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,35 (m, 2H); 1,56 (m, 4H); 2,22 (t, 2H); 2,58 (s, 3H); 3,36 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,80 (dd, 1H); 4,29 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,42-7,22 (m, 7H); 8,29 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,62 (s, 1H)
HU 224 072 Β1
IV. táblázat (folytatás)
Vegyület száma 1 H-NMR (DMSO-d6) δ (ppm)
20. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,31 (br; s, 6H); 1,51 (m, 2H); 1,57 (m, 2H); 2,19 (t, 2H); 2,58 (s, 3H); 3,32 (m, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,38-7,19 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
21. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,41-1,20 (m, 12H); 1,47 (m, 2H); 1,57 (m, 2H); 2,17 (t, 2H); 2,58 (s, 3H); 3,29 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,38-7,19 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,43 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
22. 0,85 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 2,57 (s, 3H); 2,79 (t, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,59 (t, 2H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 1H); 7,41-7,20 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,57 (s, 1H)
23. 0,84 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,67 (m, 2H); 2,53 (t, 2H); 2,57 (s, 3H); 3,26 (t, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,41-7,26 (m, 7H); 8,26 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,57 (s, 1H)
24. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,58 (m, 2H); 1,79 (m, 2H); 2,58 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,50 (m, 2H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,38-7,21 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
25. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,65-1,35 (m, 8H); 4,58 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,40-7,20 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,43 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
26. 0,85 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 2,56 (s, 3H); 3,36 (s, 3H); 3,80 (dd, 1H); 4,31 (dd, 1H); 4,62 (br; s, 2H); 4,96 (s, 2H); 7,39-7,15 (m, 7H); 7,47 (d, 2H); 7,90 (d, 2H); 8,26 (s, 1H); 8,41 (s, 1H); 8,58 (s, 1H)
27. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,62 (br, s, 2H); 1,92 (br, s, 2H); 2,58 (s, 3H); 2,60 (m, 1H); 3,38 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 4,16 (m, 2H); 4,29 (dd, 1H); 4,38 (m, 2H); 7,35-7,19 (m, 7H); 8,25 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 8,57 (s, 1H)
28. 0,85 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 1,39 (m, 2H); 1,61 (m, 2H); 1,76 (m, 2H); 2,58 (s, 3H); 2,88 (t, 2H); 3.33 (m, 2H); 3,80 (dd, 1H); 4,29 (dd, 1H); 4,98 (s, 2H); 7,34-7,20 (m, 7H); 8,26 (s, 1H); C 8,58 (s, 1H)
29. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,58 (s, 6H); 3,38 (s, 3H); 3,70-3,41 (m, 5H); 3,89-3,75 (m, 2H); 3,98 (br; s, 1H); 4,35-4,26 (m, 2H); 4,97 (s, 2H); 7,35-7,21 (m, 7H); 8,26 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,58 (s, 1H)
30. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,58 (s, 3H); 3,29-3,14 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,90-3,49 (m, 4H); 4,29 (dd, 1H); 4,92 (m, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,12 (t, 1H); 7,35-7,18 (m, 7H); 8,26 (s, 1H); 8,51 (s, 1H); 8,58 (s, 1H)
31. 0,86 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 1,81 (m, 2H); 2,59 (s, 3H); 3,32 (m, 4H); 3,39 (s, 3H); 3,80 (dd, 1H); 4,30 (dd, 1H); 4,99 (s, 2H); 6,75 (d, 1H); 7,41-7,18 (m, 9H); 8,28 (s, 1H); 8,46 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
32. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,21 (s, 6H); 2,59 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,43 (m, 4H); 3,81 (dd, 1H); 4,31 (dd, 1H); 4,98 (s, 2H); 7,45-7,19 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,61 (s, 1H)
33. 0,86 (d, 3H); 0,90 (d, 3H); 1,91-1,70 (m, 2H); 2,26-2,05 (m, 2H); 2,60 (s, 3H); 2,91-2,69 (m, 4H); 3,40 (s, 3H); 3,51 (br; s, 2H); 3,95-3,75 (m, 2H); 4,30 (dd, 1H); 4,99 (s, 2H); 7,41-7,18 (m, 12H); 8,28 (s, 1H) 8,45 (s, 1H); 8,66 (s, 1H)
34. 0,85 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 1,81-1,49 (m, 4H); 2,01-1,88 (m, 2H); 2,59 (s, 3H); 2,98-2,65 (m, 4H); 3,39 (s, 3H); 3,80-3,51 (m, 4H); 3,81 (dd, 1H); 4,31 (dd, 1H); 4,99 (s, 2H); 7,41-7,18 (m, 7H); 7,90-7,65 (m, 6H); 8,25 (s, 1H); 8,36 (s, 1H); 8,61 (s, 1H)
35. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 2,59 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 4,29 (dd, 1H); 4,98 (s, 2H); 7,40-7,19 (m, 7H); 7,72 (br, s, 1H); 8,03 (br, s, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,60 (s, 1H)
36. 0,85 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,87 (m, 2H); 2,54 (s, 3H); 2,89 (m, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,42 (m, 2H); 3,79 (dd, 1H); 4,29 (dd, 1H); 4,98 (s, 2H); 7,38-7,20 (m, 7H); 7,69 (br; s, 3H); 8,29 (s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,61 (s, 1H)
37. 0,83 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,32 (m, 1H); 2,16 (m, 1H); 2,46 (d, 3H); 2,57 (s, 3H); 2,71 (m, 1H); 3,37 (s, 3H); 3,78 (dd, 1H); 4,16 (d, 1H); 4,26 (dd, 1H); 4,67 (m, 1H); 4,96 (s, 2H); 6,02 (d, 1H); 6,35 (dd, 1H); 7,35-7,20 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,60 (s, 1H); 9,61 (s, 1H)
38. 0,83 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,25 (m, 1H); 2,2 (m, 1H); 2,5 (s, 3H); 2,70 (m, 3H); 3,35 (s, 3H); 3,63 (m, 1H); 3,79 (d, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,4-7,15 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,53 (s, 1H); 8,61 (s, 1H)
39. 0,83 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,32 (m, 1H); 2,16 (m, 1H); 2,47 (d, 3H); 2,57 (s, 3H); 2,72 (m, 4H); 3,37 (s, 3H); 3,50 (m, 2H); 3,78 (dd, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 7,40-7,20 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,60 (s, 1H)
HU 224 072 Β1
IV. táblázat (folytatás)
Vegyület száma 1 H-NMR (DMSO-d6) δ (ppm)
40. 0,83 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,32 (m, 1H); 1,71 (m, 2H); 2,25-2,14 (m, 3H); 2,46 (d, 3H); 2,57 (s, 3H); 2,7 (m, 1H); 3,37 (s, 3H); 3,76 (dd, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,81 (d, 1H, J=15,7 Hz); 6,78 (m, 1H); 7,39-7,12 (m, 7H); 8,28 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,60 (s, 1H)
41. 0,86 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 1,43 (m, 1H); 2,19 (m, 1H); 2,47 (d, 3H); 2,59 (s, 3H); 2,72 (m, 1H); 3,39 (s, 3H); 3,50 (t, 2H); 3,58 (t, 2H); 3,68 (t, 2H); 3,79 (dd, 1H); 4,99 (s, 2H); 7,42-7,20 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,59 (s, 1H)
42. 0,83 (d, 3H); 0,85 (d, 3H); 1,2-1,4 (m, 3H); 1,5-1,65 (m, 4H); 2,22 (t, 3H); 2,60 (d, 1H); 2,69 (d, 1H); 3,37 (s, 3H); 3,79 (dd, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,86 (d, 2H); 4,97 (s, 2H); 5,00 (dd, 1H); 5,1-5,4 (m, 3H); 5,74 (t, 1H); 6,00 (d, 1H); 7,2-7,4 (m, 7H); 8,27 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,62 (s, 1H)
43. 0,84 (d, 3H); 0,89 (d, 3H); 1,4-1,2 (m, 3H); 1,65-1,50 (m, 4H); 2,23 (t, 3H); 2,59 (s, 3H); 2,79 (m, 1H); 3,87 (m, 1H); 4,25 (m, 1H); 5,04 (t, 1H); 5,35-5,20 (m, 3H); 6,09 (d, 1H); 6,67 (br, s, 1H); 7,04 (br, s, 1H); 7,35-7,15 (m, 6H); 8,24 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,61 (s, 1H)
44. 0,84 (d, 3H); 0,88 (d, 3H); 1,4-1,25 (m, 3H); 1,65-1,50 (m, 4H); 2,23 (t, 3H); 2,58 (s, 3H); 2,75 (m, 1H); 3,78 (dd, 1H); 4,28 (dd, 1H); 4,98 (m, 3H); 5,35-5,15 (m, 3H); 6,03 (m, 2H); 7,42-7,15 (m, 7H); 8,30 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,62 (s, 1H)
V. táblázat IR-spektrumok
Vegyület száma ——-— —- ---— -- IR (nujol cm-1)
1. 3370; 3110; 1730; 1655; 1545; 1520
2. 3350; 3110; 1720; 1650; 1535; 1500
3. 3340; 3105; 1720; 1645; 1535; 1500
4. 3360; 1725; 1640; 1535
5. 3350;3110; 1725; 1650; 1535; 1510
6. 3370; 3105; 1725; 1655; 1535; 1500
7. 3360; 3100; 1725; 1655; 1535; 1490
8. 3370; 3105; 1725; 1655; 1535; 1505
9. 3370; 3110; 3100; 1725; 1657; 1550; 1530; 1505
10. 3370; 3105; 1730; 1655; 1540; 1510
11. 3359; 3115; 1653; 1551; 1510
12. 3360; 3113; 1720; 1662; 1547; 1510
13. 3370; 3110; 1720; 1655; 1530; 1505 |
14. 3350:3120; 1655; 1535; 1500
15. 3350;3100; 1650; 1530; 1510
16. 3340; 3105; 1650; 1530
17. 3340; 3100; 1655; 1530
18. 3350; 3100; 1710; 1645; 1540
19. 3360; 3115; 1720; 1665; 1540; 1506
20. 3350; 3113; 1720; 1659; 1549; 1506
21. 3340; 1710; 1645; 1540; 1500
22. 3304; 1653; 1540
23. 3333; 1657; 1547; 1092; 1038
24. 3354; 3113; 1653; 1550; 1506; 1245
25. 3348;3111; 1660; 1548; 1507; 1245
26. 3315; 1653; 1539; 1238
27. 3361; 3113; 1720; 1653; 1531; 1507; 1092
28. 3333; 1653; 1547; 1494; 1243
HU 224 072 Β1
V. táblázat (folytatás)
Vegyület száma IR (nujol cm-1)
29. 3356 3114 1653; 1508; 1088
30. 3360 1670 1505; 1200
31. 3351 3115 1653; 1549; 1509; 1250
32. 3370 3110 1655; 1545; 1500; 1245
33. 3350 1655 1530; 1490; 1220
34. 3360 3105 1650; 1545; 1510; 1240
35. 3320 1747 1650; 1540; 1225
36. 3330 1662 1547; 1496; 1201
37. 3327 1730 1653; 1464; 1377
38. 3355 1720 1657; 1543; 1377
39. 3321 1717 1652; 1545
40. 3337 1665 1549
41. 3341 1721 1653; 1548; 1377
42. 3335 1722 1647; 1543
43. 3317 1665 1539
44. 3317 1720 1649; 1545
VI. táblázat
1% cm
UV-adatok Xmax E
Vegyület száma MeOH HCl 0,1 N Foszfátpuffer pH 7,38 KOH 0,1 N
1. 309 (290,9) 312 309 (247,9) 309 (252,7)
2. 309 (257,5) 310(222,6) 311 309 (226,3)
3. 309 (297,5) 312 309 (229,6) 309 (235,8)
4. 309 (245,1) 312 308 (234,7) 308 (234,1)
5. 308(173,8) 312 309(150,0) 305 (181,2)
6. 309 (277,1) 313 309 (229,8) 309 (236,7)
7. 309 (258,6) 313 309 (207,9) 309(218,9)
8. 309 (279,8) 311 309 (225,9) 309 (229,4)
9. 309(261,9) 313 308 (228,1) 309 (235,0) I
10. 309 (279,3) 314 309(241,8) 309 (251,1)
11. 309 (216,8) 310(178,5) 312 310(194,9)
12. 309 (226,2) 310(188,3) 311 309 (202,4) I
13. 308 (237,9) 314 308 (247,4) 308 (260,3)
14. 309 (263,4) 313 313 314
15. 309 (222,6) 313 314 304(169,8)
16. 309 (235,6) 313 312 312
17. 309 (230,3) 312 312 312
18. 309 (288,8) 313 309 (239,4) 309 (248,0)
19. 309 (283,2) 312 309 (220,3) 309(230,1)
20. 309 314 309 309
21. 309 (271,6) 313 311 (221,6) 309 (221,6)
22. 309(190,9) 309(152,2) 308 (160,4) 309(165,6)
23. 309 (242,2) 310(182,2) 309 (200,9) 309 (200,9)
HU 224 072 Β1
VI. táblázat (folytatás)
Vegyület száma MeOH HCI 0,1 N Foszfátpuffer pH 7,38 KOH 0,1 N
24. 309 312 310 309
25. 309 312 310 309
26. 309 (260,0) 313 310(197,7) 310(208,6)
27. 310(264,6) 313 310(227,4) 310(232,1)
28. 309 (260,5) 314 310(186,8) 310 (203,6)
29. 309 (243,4) 311 312 311
30. 309 (248,5) 311 311 309
31. 305 (253,7) 310 310 313 (249,5)
32. 309 (267,9) 310(234,9) 312 312
33. 309 (247,5) 311 (234,4) 314 312
34. 310 (224,0) 309 (198,2) 310 312
35. 308 (269,8) 314 313 313
36. 309 (243,9) 309 (205,5) 312 313
37. 309 (255,1) 312 314 312
38. 308 308 308 308
39. 308 (247,9) 312 308 (201,3) 308 (215)
40. 309 (304,3) 312 309 (235,9) 309 (262,0)
41. 309 (256,4) 312 309 (215,1) 309 (228,6)
42. 309 312 309 307
43. 309 (253,6) 313 309 (208,4) 309 (235,4) I
44. 309 (264,9) 314 309 (208,1) 309 (223,7)
A találmány szerinti vegyületek antimikrobiális hatását in vitro standard tesztekben mutatjuk be.
Propionibacterium acnes-re és Bacteroides fragi- 35 lis-ra vonatkozó minimális gátlási koncentrációt (MIC, pg/ml-ben) agarhígítással (104 inokulum/105 CFU/edény). További organizmusokra az MIC-t mikroanyalúgos hígítással határozzuk meg (104 inokulum 105 CFU/ml-re). Az inkubációs idő 18-24 óra, kivéve a 40 Haemophilus influenzae-t, P. acnes-t, B. fragilis-t (48 óra).
Az összes organizmust 37 °C-on inkubáljuk; H. influenzae-t 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában anaerob gázelegyben inkubálunk. Az alkalmazott közegek: Iso-Sensitest táptalaj (Oxoid) (Staphylococcus-ok, Streptococcus faecalis, Escherichia coli, Proteus vulgáris); infúziós táptalaj (Difco)+1 % C adalék (Difco) (H. influenzáé).
Néhány mikroorganizmusra vonatkozó minimális gátlási koncentrációt (MIC, mikrogramm/ml) az alábbi, VII. táblázatban adtunk meg.
VII. táblázat (MIC, mikrogramm/ml)
Törzs Vegyület száma
1. 2. 6. 7. 8.
Staph. aureus L165 Tour 0,5 0,13 <0,13 0,25 0,25
Staph. epidermidis L147 ATCC 12 228 1 0,25 1 0,5 2
Staph. haemolyticus L602 4 16 1 4 2
Strep. pneumoniae L44 UC41 8 >128 2 4 4
Strep. faecalis L149 ATCC 7080 0,25 0,06 <0,13 <0,13 0,25
Prop. acnes L1014 ATCC 6919 <0,13 0,06 <0,13 <0,13 <0,13
Sacf. fragilis L1010 ATCC 23 745 8 >128 >128 >128 32
HU 224 072 Β1
VII. táblázat (folytatás)
Törzs Vegyület száma
1. 2. 6. 7. 8.
Haemophilus influenzáé type B 8 >128 32 128 64
Esch. coli L47 SKF 12 140 >128 >128 >128 >128 >128
Prot. vulgáris ATCC 881 >128 >128 >128 >128 >128
Törzs Vegyület száma
14. 18. 19. 20. 21
Staph. aureus L165 Tour 0,06 0,25 0,06 0,25 0,25
Staph. epidermidis L147 ATCC 12 228 0,13 0,25 0,06 0,25 0,25
Staph. haemolyticus L602 0,25 1 0,25 0,25 0,5
Strep. pneumoniae L44 UC41 >128 1 0,25 2 2
Strep. faecalis L149 ATCC 7080 0,06 0,13 0,06 <0,13 0,13
Prop. acnes L1014 ATCC 6919 0,03 0,016 0,008 0,03 0,008
Bact. fragilis L1010 ATCC 23 745 >128 2 4 >128 32
Haemophilus influenzáé type B >128 2 2 >128 8
Esch. coli L47 SKF 12 140 >128 >128 >128 >128 >128
Prot. vulgáris ATCC 881 >128 >128 >128 >128 >128
Törzs Vegyület száma I
27. 28. 32. 35.
Staph. aureus L165 Tour 0,25 0,13 0,5 0,13
Staph. epidermidis L147 ATCC 12 228 0,25 0,5 0,5 0,13
Staph. haemolyticus L602 1 1 0,5 0,5 I
Strep. pneumoniae L44 UC41 8 2 1 >128 1
Strep. faecalis L149 ATCC 7080 1 0,06 0,25 0,06
Prop. acnes L1014 ATCC 6919 0,03 0,008 0,13 0,004
Bact. fragilis L1010 ATCC 23 745 64 >128 >128 >128
Haemophilus influenzáé type B 8 >128 >128 >128 ]
Eseti, coli L47 SKF 12 140 >128 >128 >128 >128 |
Prot. vulgáris ATCC 881 >128 >128 >128 >128 |
Törzs Vegyület száma 1
36. 37. 38. 39. 40. |
Staph. aureus L165 Tour 0,13 0,03 32 0,13 0,25
Staph. epidermidiLs 147 ATCC 12 228 0,13 0,06 32 0,25 0,25
Staph. haemolyticus L602 0,13 0,13 64 2 1
Strep. pneumoniae L44 UC41 4 >128 >128 4 1
Strep. faecalis L149 ATCC 7080 0,13 0,06 16 <0,13 <0,13
Prop. acnes L1014 ATCC 6919 0,06 0,004 0,25 <0,13 -
HU 224 072 Β1
VII. táblázat (folytatás)
Törzs Vegyület száma
36. 37. 38. 39. 40.
Bact. fragilis L1010 ATCC 23 745 >128 >128 >128 8 4
Haemophilus influenzáé type B >128 >128 >128 1 1
Esch. coli L47 SKF 12 140 >128 >128 >128 >128 >128
Prot. vulgáris ATCC 881 >128 >128 >128 >128 >128
Törzs Vegyület száma
41. 42. 43. 44.
Staph. aureus L165 Tour 0,25 0,13 0,13 0,13
Staph. epidermidis L147 ATCC 12 228 0,5 0,13 0,5 0,5
Staph. haemolyticus L602 1 0,5 0,5 1
Strep. pneumoniae L44 UC41 2 1 0,5 1
Strep. faecalis L149 ATCC 7080 <0,13 0,13 0,13 0,06
Prop. acnes L1014 ATCC 6919 <0,13 0,016 0,016 0,016
Bact. fragilis L1010 ATCC 23 745 4 >128 >128 >128
Haemophilus influenzáé type B 1 4 >128 >128
Esch. coli L47 SKF 12 140 >128 >128 >128 >128
Prot. vulgáris ATCC 881 >128 >128 >128 >128
A találmány szerinti vegyületek tulajdonságaik függvényében humán- és állatgyógyászati kezelésre alkalmazható gyógyszerek előállításához hatóanyagként használhatók.
Az (I) általános képletű GE 2270 antibiotikumok amidszármazékai elsősorban antimikrobiális szerekként alkalmazhatók, főként Gram-pozitív baktériumok és Gram-negatív anaerobok ellen.
A találmány szerinti antibiotikus anyagok fő gyógyászati indikációja olyan fertőzések kezelése, amelyeket ezekre az antibiotikumokra érzékeny mikroorganizmusok okoznak.
A „kezelés” kifejezés magában foglalja a megelőzést, a terápiát és a gyógyítást is.
Ez a kezelés alkalmazható bármely állatnál szükségképpen, beleértve a főemlősöket, elsősorban az embereket és más emlősöket, így a lovakat, marhákat, sertéseket és juhokat; szárnyasokat és általában a háziállatokat.
A találmány szerinti vegyületek a kezelés során bejuttathatok a szervezetbe önmagukban vagy gyógyászatilag alkalmazható hordozóanyagokkal alkotott keverék formájában, továbbá más antimikrobiális szerekkel együtt. Konjunktív terápia esetén, azaz a hatóanyagok egymást követő, egyidejű és külön történő bejuttatása során arra kell figyelni, hogy az először bejuttatott hatóanyag gyógyászati hatása még ne tűnjön el teljesen azelőtt, mielőtt a következőt bejuttatjuk.
Az előnyös gyógyszerkészítmények azok a formulációk, amelyek megfelelnek az ép vagy megsérült bőrön vagy nyálkahártyán való helyi alkalmazásra. A készítmények példáiként említjük meg a porokat, kenőcsöket, krémeket, szuszpenziókat. Ezekben a készítményekben az adalék anyagok a szokásos, gyógyászatilag alkalmazható vivőanyagok, így olajos, kenőcsszerű bázisok (például cetil-észter-gyanták, oleinsav, olívaolaj, paraffin, cetvelő, keményítő-giicerit); abszorbens kenőcsszerű bázisok (például vízmentes lanolin, hidrofil vazelin), emulziós kenőcsszerű bázisok (például cetil-alkohol, gliceril-monosztearát, lanolin, sztearinsav), vízoldható, kenőcsszerű bázisok [például glikol-éterek és származékaik, mint amilyenek a polietilénglikolok, poli(oxi-1,2etándiil)-alfa-omega-hidroxi-oktadekanoát].
Ezek a készítmények további ismert adalék anyagokat is tartalmazhatnak, így például konzerválószereket, és a technika állásából ismert módon állíthatók elő, ilyen módszereket a Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17. ed. 1985, Mack Publishing Co. kézikönyvben ismertetnek.
A találmány szerinti vegyületek parenterális bejuttatásra alkalmas készítményekként is formulázhatók a technika állásából ismert eljárások szerint. Egy találmány szerinti vegyület formulázható polipropilénglikollal vagy dimetil-acetamiddal és egy felületaktív anyaggal, ilyen például a poli(oxi-etilén)-szorbitán-monooletát vagy a polietoxilezett kasztorolaj.
HU 224 072 Β1
A parenterális bejuttatásra előnyös készítmény a következő adalékkal formulázható.
Chremophor® EL-(35 etoxicsoportot tartalmazó polietoxilezett kasztorolaj USP/NF) 20%, propilénglikol 5-10%.
Előnyösen ezt a készítményt alkalmazzuk intravénásán bármely, a találmány szerinti antibiotikumra érzékeny mikroorganizmus által okozott fertőzés esetén.
Intravénás alkalmazásra megfelelő készítmény összetétele:
19. számú vegyület 100 mg propiléngikol 1 ml injekcióhoz alkalmazható víz (q. s.) foszfátpuffer pH=8-8,5-re 5 ml
A pszeudomembrános vastagbélgyulladás vagy a gasztrointesztinális szervekben anaerob baktériumok jelenlétének tulajdonítható egyéb betegségek kezelésére a találmány szerinti vegyületek hatásos dózisát orálisan lehet bejuttatni a kezelendő szervezetbe egy megfelelő gyógyszerkészítmény, így kapszula vagy vizes szuszpenzió formájában.
A hatóanyag dózisa sok tényezőtől függ, ilyenek például a kezelt beteg típusa, kora, állapota és a bejuttatáshoz, bejuttatás! ütemhez kiválasztott hatóanyagfajta és készítménytípus.
A hatékony antimikrobiális dózisokat általában egyszeri egységű dózis formában alkalmazzuk.
Ezeknek a dózisformáknak az ismételt alkalmazása, például 2-6-szor naponta, általában előnyös. Hatékony dózis lehet például a naponta 0,5-50 mg/testtömeg-kg.
Előnyös kikészítési forma az 1-10 tömeg% találmány szerinti vegyületet tartalmazó kenőcs.
Egy adott páciens esetében azonban az adott körülményektől függően a kezelőorvos határozhatja meg az optimális dózist.
A találmány szerinti vegyületek a humán- és állatgyógyászati terápiában gyógyszerként történő használatukon kívül állatok növekedésének elősegítésére is alkalmazhatók.
Erre a célra egy találmány szerinti vegyületet a megfelelő tápanyagban orálisan alkalmazunk. A pontos alkalmazási koncentrációt úgy kell meghatározni, hogy az biztosítsa a fejlődés elősegítéséhez szükséges hatékony mennyiségű hatóanyagot az elfogyasztott táplálék normálmennyiségével.
Az állatok tápszerébe a találmány szerinti hatóanyag beadagolása előnyösen elvégezhető a hatásos mennyiségű hatóanyagot tartalmazó megfelelő élelmiszer-előkeverék elkészítésével és ennek az előkeveréknek a teljes tápszerbe való bejuttatásával.
A hatóanyagot tartalmazó közbenső koncentrátum vagy élelmiszer-adalék bekeverhető a táplálékba. Az olyan módszerek, amelyek szerint az előző élelmiszerelőkeverékek és teljes tápszerek előállíthatók és alkalmazhatók, szakkönyvekben vannak leírva (ilyenek például „Applied Animál Nutrition”, W. H. Freedman and Co., San Francisco, US, 1969 vagy „Livestock Feeds and Feeding” OB kötetek, Corvallis, Oregon US, 1977).
A következő példákban részletesebben mutatjuk be a találmányt - tárgykörének bármilyen korlátozása nélkül.
A) eljárás
A GE 2270 A3 kiindulási anyag reakciója a kiválasztott aminnal.
1. példa
A 15., 29., 30., 32., 33. számú vegyületek előállítása mmol GE 2270 A3 (előállítását lásd a 406 745 számú európai szabadalmi bejelentésben) 10 ml dimetil-formamiddal (DMF) készült oldatához keverés közben, 0 °C-on 1,2 mmol aminreagenst, 1,4 mmol trietil-amint (TEA) és 1,2 mmol difenil-foszforazidátot (DPPA) adtunk. Amennyiben az aminreagens sóját (kloridját, p-toluolszulfonsavas sóját stb.) használtuk, dupla mennyiségű trietil-amint alkalmaztunk. A reakcióelegy hőmérsékletét hagytuk szobahőmérsékletre emelkedni, majd további 4 órán át folytattuk a kevertetést. Ezután az elegyet 1 N vizes sósavval pH=3 értékig savanyítottuk, vízzel hígítottuk a csapadék teljes kiválásáig. A szilárd terméket levegőn szárítottuk, majd szilikagél 60-on (230-400 mesh, ASTM-Merck) kromatografáltuk, eluensként 3-5% metanol-kloroform elegyet alkalmaztunk. A cím szerinti vegyületet tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük, az oldószert bepároltuk. A szilárd anyag etil-éterrel történő kezelése után a cím szerinti terméket finom por alakjában nyertük.
A1. eljárás
A GE 2270 A3 kiindulási anyag reakciója további olyan reaktív funkciós csoporto(ka)t tartalmazó aminnal, amely(ek) védve van(nak), és ezt követően a védöcsoport(ok) lehasításával.
2. példa
A 34., 36. számú vegyületek előállítása
A reakciót az 1. példában ismertetett eljárás szerint végeztük. A reakcióterméket először oszlopkromatográfiával tisztítottuk, a szilárd anyagként kapott termék 1 mmol-ját 7 ml hideg trifluor-ecetsavval (TFA) kezeltük. A szuszpenziót néhány percig melegítettük, míg oldat képződött, és a trifluor-ecetsavat hidegen vákuumban bepároltuk. A gumiszerű anyagot, amely még nyomokban trifluor-ecetsavat tartalmazott, etil-éterrel kezeltük, miután a cím szerinti vegyület trifluor-ecetsavas sóját kaptuk finom por alakjában.
3. példa
Az 1., 3-10., 18-21. és 39. számú vegyületek előállítása
A reakciót az 1. példában ismertetett módon végeztük. A reakcióterméket először oszlopkromatográfiásan tisztítottuk, a szilárd anyagként kapott termék 1 mmol-ját 20 ml dioxánban oldottuk, és 1,2 ml 1 N vizes nátrium-hidroxidot adtunk hozzá keverés közben szobahőmérsékleten.
Öt óra elteltével 1 N vizes sósavval pH=2 értékig savanyítottuk, majd vízzel hígítottuk a termék teljes kicsapódásáig. A szilárd, cím szerinti anyagot szűrtük,
HU 224 072 Β1 levegőn szárítottuk, így a cím szerinti terméket finom por formájában nyertük.
4. példa
A 2. számú vegyület előállítása
A reakciót a 3. példában ismertetett módon végeztük. A hidrolízis során az észtercsoport átalakult, a terméket levegőn szárítottuk, a kapott szilárd anyag 1 mmol-ját 20 ml trifluor-ecetsavban oldottuk, és 50 mmol tioanizolt adtunk hozzá szobahőmérsékleten, keverés közben, amint azt Y. Kiso és munkatársai a Chem. Pharm. Bull. 28, 673 (1980) közleményben ismertették. 3,5 óra múlva a trifluor-ecetsavat vákuumban bepároltuk hidegen, majd a bepárlási maradékot minimális mennyiségű 1%-os metanol-kloroform elegyben fölvettük. Etil-éter hozzáadására a cím szerinti vegyület kivált, amelyet szűrtünk, etil-éterrel mostuk és vákuumban szárítottuk. A címbeli vegyületet trifluor-ecetsavas sóként finom por alakjában nyertük.
4/b. példa
A 37. számú vegyület előállítása
A reakciót az 1. példában ismertetett módon végeztük. A reakcióelegyben a kiindulási anyag eltűnt, a nyerstermék víz hozzáadására csapadék formában kivált, szűrtük, vízzel mostuk és levegőn szárítottuk. A nyersterméket ezután 3 ml tetrahidrofuránban oldottuk, és éjszakán át szobahőmérsékleten kevertettük 10%-os vizes sósav jelenlétében. Vízzel történő hígítás után a termék csapadék formában kivált, amelyet szűrtünk, levegőn szárítottunk. A szilárd terméket kromatográfiásan szilikagél 60-on (230-400 mesh, ASTMMerck) tisztítottuk, eluensként 2-4% metanolt tartalmazó kloroformot alkalmazva.
A címvegyületet tartalmazó frakciókat egyesítettük, az oldószert bepároltuk, a terméket halványsárga por formájában nyertük.
B) eljárás
A GE 2270 A3 kiindulási anyag reakciója a védőcsoportot nem tartalmazó sav funkciós csoporttal rendelkező aminnal.
5. példa
A 19., 22-28., 40., 41. számú vegyületek előállítása mmol GE 2270 A3 és 1,5 mmol TEA 10 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 0 °C-on, keverés közben 1,1 mmol DPPA-t adtunk. A reakcióelegy hőmérsékletét szobahőmérsékletre hagytuk emelkedni, majd további 4,5 órán át kevertettük. A választott amin 1,5 mmol-ját és 2 mmol TEA-t adtunk ezután az oldathoz szobahőmérsékleten, majd ugyanezen a hőmérsékleten még 5 órán át kevertettük. (Amennyiben a választott amin egynél több sav funkciós csoportot tartalmazott, annyi TEA-t adtunk az elegyhez, hogy az aminocsoport szabaddá váljon.) Ezután a reakcióelegyet 1 N vizes sósavval pH=2 értékig savanyítottuk és vízzel hígítottuk, míg a termék csapadék formájában teljesen kivált. A nedves, szilárd anyagot levegőn szárítottuk, és szilikagél 60 tölteten (230-400 mesh,
ASTM-Merck) 5-10% metanolt tartalmazó kloroformot használva eluensként, tisztítottuk. A címvegyületet tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük, és az oldószert bepároltuk. A szilárd anyagot dietil-éterrel kezelve a cím szerinti vegyületet finom por alakjában nyertük.
B1. eljárás
A GE 2270 A3 kiindulási anyag reakciója olyan reaktív funkciós csoportokat tartalmazó aminokkal, amelyek a nem védett sav funkciós csoportokon kívül különféle módon vannak védve, és ezt követi a védőcsoportok lehasítása.
6. példa
A 11., 12. számú vegyületek előállítása
A reakciót az 5. példában ismertetett eljárás szerint végeztük. A reakcióterméket kromatográfiásan tisztítottuk, s a kapott szilárd terméknek 1 mmol-nyi mennyiségét 20 ml trifluor-ecetsavban oldottuk, és 50 mmol tioanizolt adtunk hozzá keverés közben szobahőmérsékleten. 3,5 óra eltelte után a trifluor-ecetsavat vákuumban bepároltuk hidegen, és a bepárlási maradékot minimális mennyiségű 1% metanolt tartalmazó kloroformban felvettük. Etil-éter hozzáadására megkezdődött a cím szerinti vegyület csapadék formájában történő kiválása, amelyet szűrtünk, etil-éterrel mostunk és vákuumban szárítottunk, így a címvegyület trifluor-ecetsavas sóját kaptuk finom por alakjában.
C) eljárás
A GE 2270 A3 amidszármazékának, mint kiindulási anyagnak a reakciója a választott reagenssel.
7. példa
A 14., 15., 16., 17. számú vegyületek előállítása az
1., 5., 10., 6. számú vegyületekből
A GE 2270 kódszámú A3 faktor megfelelő amidszármazékának (az előző példákban ismertetett eljárás szerint állítottuk elő) 1 mmol-ját, továbbá 1,2 mmol aminreagenst és 1,4 mól TEA-t 10 ml dimetil-formamidban oldottunk, a reakcióelegyhez 0 °C-on 1,2 mmol DPPA-t adtunk. (Amennyiben az amin valamilyen sóját, például kloridját, p-toluolszulfonátját stb. alkalmaztuk, úgy dupla mennyiségű trietil-amint használtunk.) A hőmérsékletet hagytuk szobahőmérsékletre emelkedni, és a kevertetést további 4 órán át folytattuk. A reakcióelegyet ezután 1 N vizes sósavval pH=3 értékig savanyítottuk, majd annyi vízzel hígítottuk, hogy a termék csapadék formában történő kiválása teljes legyen. A nedves, szilárd anyagot levegőn szárítottuk, majd szilikagél 60-on (230-400 mesh, ASTM-Merck) kromatografáltuk, eluensként 3-5% metanolt tartalmazó kloroformot alkalmazva. A címvegyületet tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük, az oldószert bepároltuk. A szilárd anyag etil-éterrel történő kezelése után a cím szerinti vegyületet finom por alakjában nyertük.
C1. eljárás
Kiindulási anyagként GE 2270 A3 amidszármazékának reakciója olyan reagenssel, amely további reak25
HU 224 072 Β1 tív funkciós csoportosa)t tartalmaz, és ezek mindegyike védőcsoporttal van ellátva; majd ezt követően a védőcsoport(ok) lehasítása.
8. példa
A 13. számú vegyület előállítása a 3. számú vegyületből
A reakciót a 7. példában ismertetett eljárás szerint végeztük. A reakcióterméket kromatográfiásan tisztítottuk, és a kapott szilárd anyag 1 mmol-ját 20 ml dioxánban oldottuk, és 1,2 ml 1 N vizes nátrium-hidroxidot adtunk hozzá keverés közben szobahőmérsékleten. 5 óra elteltével az oldatot 1 N vizes sósavval pH=2 értékig savanyítottuk, és a csapadékképződés teljessé tételéig hígítottuk vízzel, a kivált cím szerinti vegyületet szűrtük, levegőn szárítottuk, így a címvegyületet finom por formájában nyertük.
9. példa
A 31. számú vegyület előállítása a 36. számú vegyületből
A GE 2270 A3 megfelelő amidszármazéknak (előállítása az előző példákban ismertetett módon történt) 1 mmol-ját 10 ml 10%-os metanolos kloroformban oldottuk, keverés közben 1,2 mmol TEA-t és 1,1 mmol választott reagenst (lásd a II. táblázatot) adtunk hozzá szobahőmérsékleten, 20 perc múlva az oldószert bepároltuk vákuumban, és a bepárlási maradékot 5%-os vizes nátrium-karbonát-oldattal kezeltük. A szilárd, kapott anyagot szűrtük, további nátrium-karbonát-oldattal, majd vízzel mostuk, és végül 10 ml metanolban újra feloldottuk. Utóbbi oldathoz 0,5 ml vizet és 0,1 mmol p-toluolszulfonsavat adtunk, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékleten kevertettük éjszakán át. Az elegyet ezután kb. 2 ml-re bepároltuk vákuumban, és vizet adtunk hozzá, a címvegyület csapadékként képződött, amelyet levegőn szárítottunk, miután a terméket finom por alakban kaptuk.
9/b. példa
A 38. számú vegyület előállítása a 37. számú vegyületből
A GE 2270 A3 megfelelő amidszármazékának (előállítását lásd az előző példákban) 0,13 mmol-ját 40 ml etanolban oldottuk, az oldathoz keverés közben, szobahőmérsékleten 9,2 mmol ecetsavat, 9,2 mmol nátrium-acetátot és 0,506 mmol kiválasztott reagenst (lásd II. táblázat) adtunk. Két óra múlva 0,46 mmol nátrium-boro-hidridet (Fluka) adtunk hozzá, és a keverést folytattuk éjszakán át ugyanezen a hőmérsékleten. Az oldószer bepárlása után nyersterméket kaptunk, amelyet 10 ml 1 N sósavval mostunk, szűrtünk és levegőn szárítottunk. A szilárd anyagot szilikagél 60-on (230-400 mesh, ASTM-Merck) kromatografáltuk 0-10% metanolt tartalmazó diklór-metán-eluenssel. A címvegyület metil-észterét (intermedier) tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük, az oldószer lepárlása után szilárd anyagot kaptunk, amelyet 2 ml dioxánban újra feloldottunk, és az oldatot éjszakán át 1,2 mól feleslegben alkalmazott 1 N NaOH-oldattal kezeltük szobahőmérsékleten. Az oldószer lepárlása után szilárd terméket kaptunk, amelyet további tisztítás céljából 1:1 térfogatarányú etil-acetát:metanol elegyével kezeltünk, így a címvegyületet finom por formájában nyertük.
D) eljárás
A GE 2270 A2 kiindulási anyag reakciója aminnal.
10. példa
A 35. számú vegyület előállítása
A GE 2270 A2 1 mmol-ját (előállítását lásd a 406 745 számú közzétett európai szabadalmi bejelentésben ismertetett eljárásban) 10 ml ammónium-hidroxiddal telített metanolban oldottuk. Az oldatot 3 napon át szobahőmérsékleten állni hagytuk, majd vákuumban bepároltuk. A bepárlási maradékot 2 ml metanolban felvettük, és a cím szerinti vegyületet vízzel kicsaptuk, szűrtük és levegőn szárítottuk. Etil-éterrel történő kezelés után a címvegyületet finom por formájában nyertük.
E) eljárás
A találmány szerinti vegyület sójának előállítása.
11. példa
A 19. számú vegyület argininsójának előállítása
A 19. számú vegyület 3 g-jának (2,42 mmol) 180 ml dioxánnal készült szuszpenziójához 423 mg (2,42 mmol) L-arginin 120 ml vízzel készült oldatát adtuk keverés közben, és a nem tiszta oldatot liofilizáltuk a kívánt só képződéséig.
F) eljárás
A GE 2270 C2a faktor reakciója [azaz olyan (II) képletű vegyület, amelyben R jelentése metoxi-metil-, R-j jelentése metil-, R4 hidroxi-metil- és W jelentése karboxilcsoport] aminnal, amely további funkciós csoporto(ka)t tartalmaz - utóbbi(ak) (mindegyike) védett - a védőcsoport(ok) később eltávolítható(k).
12. példa
A 42. számú vegyület előállítása
A reakciót a 3. példában ismertetett módon végeztük kiindulási anyagként a GE 2270 C2a faktort alkalmazva az A3 faktor helyett.
G) eljárás
A GE 2270 C2a kiindulási anyag reakciója védőcsoport nélküli savcsoportot tartalmazó aminnal az F) eljárás szerint.
13. példa
A 42. számú vegyület előállítása
A reakciót az 5. példában ismertetett eljárás szerint végeztük kiindulási anyagként a GE 2270 C2a faktort alkalmazva az A3 faktor helyett.
H) eljárás
A GE 2270 Dj faktor kiindulási anyag [azaz olyan (II) képletű vegyület, amelyben R és Rj jelentése hidrogénatom, R4 metil- és W karboxilcsoport] reakciója
HU 224 072 Β1 aminnal, amely további funkciós csoporto(ka)t tartalmaz - utóbbi(ak) védett(ek) -, a védőcsoport(ok) ezt követő lehasítása.
14. példa
A 43. számú vegyület előállítása
A reakciót a 3. példában ismertetett eljárás szerint végeztük kiindulási anyagként a GE 2270 D·, faktort alkalmazva az A3 faktor helyett.
I) eljárás
A GE 2270 Di faktor kiindulási anyag reakciója védőcsoport nélküli savcsoportot tartalmazó aminnal a H) eljárás szerint.
15. példa
A 43. számú vegyület előállítása
A reakciót az 5. példában ismertetett eljárás szerint végeztük kiindulási anyagként a GE 2270 D-ι faktort alkalmazva az A3 faktor helyett.
J) eljárás
A GE 2270 D2 faktor [azaz olyan (II) képletű vegyület, amelyben R jelentése hidroxi-metil-, R1 és R4 jelentése metil- és W jelentése karboxilcsoport] kiindulási anyag reakciója aminnal, amely további, reaktív funkciós csoporto(ka)t tartalmaz, utóbbi(ak) (mindegyike) védett, és a védőcsoport lehasítása.
16. példa
A 44. számú vegyület előállítása
A reakciót a 3. példában ismertetett eljárás szerint végeztük kiindulási anyagként a GE 2270 D2 faktort alkalmazva az A3 faktor helyett.
K) eljárás
A GE 2270 D2 faktor kiindulási anyag reakciója védőcsoport nélküli savcsoportot tartalmazó aminnal a J) eljárás szerint.
17. példa
A 44. számú vegyület előállítása
A reakciót az 5. példában leírt eljárás szerint végeztük, kiindulási anyagként a GE 2270 D2 faktort alkalmazva az A3 faktor helyett.
L) eljárás
A GE 2270 antibiotikum minor faktorainak keverékét, mint kiindulási anyagot (C2a, D2 és E) reagáltattuk aminnal, amely további reaktív funkciós csoporto(ka)t tartalmaz, utóbbiak mindegyike védett, és a védőcsoport(ok) eltávolítása.
18. példa
A reakciót a 3. példában ismertetett eljárás szerint végeztük, kiindulási anyagként a GE 2270 antibiotikum minor faktorainak keverékét (C2a, D·,, D2 és E) alkalmaztuk az A3 faktor és 6-amino-kapronsav-hidroklorid (Fluka) helyett. A retenciós idő Rt (min) a HPLC analízis részben az M) módszernél látható.
Ha Y=-NH-CH2CH2CH2CH2CH2COOCH3, R, (min) értéke 43,43 a GE 2270 C2a-ra vonatkozóan, 39,42 a GE 2270 Drre, 42,29 a GE 2270 D2-re és 37,41 a GE 2270 E-re vonatkozóan.
Ha Y=-NHCH2CH2CH2CH2CH2COOH, Rt (min)
17,23 a GE 2270 C2a-ra, 15,76 a GE 2270 Drre, 16,64 a GE 2270 D2-re és 15,13 a GE 2270 E-re vonatkozóan.
M) eljárás
A GE 2270 antibiotikum minor faktorai (C2a, D3, D2 és E) elegyének reakciója védőcsoport nélküli savcsoportot tartalmazó aminnal.
19. példa
A reakciót az 5. példában leírt eljárás szerint végeztük, kiindulási anyagként a GE 2270 antibiotikum minor faktorainak (C2a, D-j, D2 és E) kiválasztott elegyét alkalmaztuk az A3 faktor helyett, valamint 6-amino-kapronsavat (Fluka).
R, (min) értéke a HPLC analízis fejezetben az M) eljárásnál látható; 17,23 a GE 2270 C2a-ra, 15,76 a GE 2270 Drre, 16,64 a GE 2270 D2-re és 15,13 a GE 2270 E-re vonatkozóan.
A kiindulási anyagok előállítása
1. Az alábbi kiindulási anyagokat a Flukától szereztük be (Fluka, Chemika-Biochemika, Buchs, Svájc): glicin-etil-észter-hidroklorid,
L-tirozin-metil-észter-hidroklorid,
L-leucin-metil-észter-hidroklorid,
L-fenil-alanin-metil-észter-hidroklorid,
L-metionin-metil-észter-hidroklorid,
L-prolin-metil-észter-hidroklorid,
L-treonin-metil-észter-hidroklorid,
Na-Cbz-L-lizin, metil-4-amino-butirát-hidroklorid, metil-6-amino-kaproát-hidroklorid,
6-amino-kapronsav,
4-(metil-amino)-benzoesav, piperidin-4-karbonsav,
N-metil-D-glukamin,
D-(+)-glükózamin-hidroklorid,
2- (dimetil-amino)-etil-amin, amino-acetaldehid-dimetil-acetál, β-6-alanin-etil-észter-hidroklorid.
2. Az alábbi kiindulási anyagokat a Sigma cégtől szereztük be (Sigma, Biochemicals Organic Compounds, St. Louis, Amerikai Egyesült Államok): Νδ-Cbz-ornitin,
L-aszparaginsav-dimetil-észter-hidroklorid.
3. Az alábbi kiindulási anyagokat az Aldrich cégtől szereztük be (Aldrich, Catalogo Prodotti di Chimica Pine, Milánó, Olaszország):
L-prolinamid, taurin,
3- amino-1-propánszulfonsav,
3- amino-propil-foszfonsav,
4- amino-1 -benzil-piperidin.
4. A GE 2270 antibiotikum termelése GE 2270 A, B·,, B2, C1t C2, C2a, D1t D2 és E antibiotikumok előállításához
HU 224 072 Β1
Az ATCC 53 773 Planobispora rosea törzskultúrát zabliszt agar-agar táptalajon két héten át 28-30 °C-on tenyésztettük, majd 500 ml-es, egyenként az alábbi összetételű tápközeg 100 ml-ét tartalmazó flaskák inokulálására használtuk;
keményítő 20 g/l polipepton 5 g/l élesztőextraktum 3 g/l marhahúsextraktum 2 g/l szójaliszt 2 g/l kalcium-karbonát 1 g/l desztillált víz 100 ml (a pH-t a sterilezés előtt 7,0-re állítottuk).
Az edényeket forgó-rázó gépben (200 fordulat/perc) 28-30 °C-on 92 órán át inkubáltuk. Az így nyert tápközeget ezután a fenti ugyanolyan tápközeget tartalmazó 4 literes félig nyitott fermentor beoltására használtuk, majd a kultúrát 48 órán át 28-30 °C-on kevertettük kb. 900 fordulat/perc sebességgel, majd levegőztettük (kb. 1 liter/térfogat percenkénti térfogatárammal).
Az így kapott tápközeget az alábbi összetételű tápközeg 50 literjét tartalmazó fermentor beoltására használtuk:
keményítő 20 g/l pepton 2,5 g/l kazein (hidrolizált) 2,5 g/l élesztőextraktum 3 g/l marhahúskivonat 2 g/l szójaliszt 2 g/l kalcium-karbonát 1 g/l desztillált víz szükség szerint (sterilizálás előtt a pH-értéket 7,0-re állítottuk, és 72 órán át 28-30 °C-on inkubáltuk).
Az antibiotikumtermelést papírlemezes agarvizsgálattal követtük ATCC 6633 B. subtilis-t alkalmazva Davis-közegben.
A gátlási zónákat egy éjjelen át, 35 °C hőmérsékleten történő inkubálás után értékeltük.
4a) A nyers GE 2270 antibiotikum feltárása
A fentiek szerint kapott 50 liternyi fermentlevet feltártuk, szűrtük Clarcell szűrő segítségével.
A GE 2270 antibiotikumot főként a micéliumban találtuk, míg bizonyos mennyiségét a szűrletből nyertük ki.
A szűrlet pH-értékét 7,0-re állítottuk, majd 50 I etil-acetáttal extraháltuk. A szerves fázist centrifugálással elválasztottuk, majd csökkentett nyomáson bekoncentráltuk. A maradékként kapott olajat petroléterrel kezelve a nyers GE 2270 antibiotikumot csapadékként kaptuk meg, amelyet szűrtünk és szárítottunk, így 415 mg nyers GE 2270 komplex antibiotikumot nyertünk.
A micéliumot kétszer 20 I metanollal extraháltuk, az összegyűjtött extraktumot csökkentett nyomáson bepároltuk, így vizes maradékot kaptunk, amelyet kétszer etil-acetáttal extraháltunk. A nyers GE 2270 antibiotikumot (6,06 g) az extraktum bepárlása, majd petroléterrel történő kezelése után csapadék formában nyertük.
4b) A GE 2270 A antibiotikum izolálása
A fentiek szerint a micéliumból nyert nyerstermék 3 g-nyi mennyiségét tetrahidrofuránban oldottuk, majd csökkentett nyomáson szilikagél jelenlétében (230-400 mesh, 0,048-0,025 mm huzalátmérőjű szita) bekoncentráltuk. A szilárd maradékot összegyűjtöttük, majd 300 g szilikagélt (230-400 mesh, 0,48-0,025 mm huzalátmérőjű szita) tartalmazó, metilén-kloriddal készített kromatografálóoszlopra vittük. A kolonnát először 2 I metilén-kloriddal előkészítettük, majd szakaszosan a következő térfogatarányú (1,5 I) metilén-klorid/metanol eleggyel kezeltük; 98/2; 96/4; 94/6; 92/8; 90/10 és 88/12.
A frakciókat összegyűjtöttük, vékonyréteg-kromatográfiával, HPLC-vel vagy B. subtilis törzzsel szemben mikrobiológiailag analizáltuk, és antibiotikumtartalmuktól függően csoportosítottuk.
A GE 2270 A antibiotikumot tartalmazó összegyűjtött frakciókat csökkentett nyomáson bekoncentráltuk, olajszerű bepárlási maradékhoz jutottunk, amelyet tetrahidrofuránban oldottunk.
Az így nyert oldatból a GE 2270 A-t (600 mg) petroléter hozzáadásával kicsaptuk.
4b/a A GE 2270 antibiotikum minor faktorokat tartalmazó elegyének izolálása
A főként C2a, D·,, D2 és E minor faktorokban feldúsult elegyet HPLC-s módszerrel azonosítottuk, összehasonlítva az egyes komponensek analitikai mintájával.
A HPLC analízis részben ismertetett M) módszer szerinti Rt retenciós idők (perc) a következők:
GE 2270 C2a-ra vonatkozóan 20,55;
GE 2270 Drre vonatkozóan 17,43;
GE 2270 D2-re vonatkozóan 18,17 és
GE 2270 E-re vonatkozóan 16,61 perc.
A fenti frakciónak csökkentett nyomáson történő bepárlása után olajszerű maradékot kaptunk, amelyet tetrahidrofuránban feloldottunk, majd petroléterrel kicsapva a terméket, fehéres porszerű anyagot nyertünk. 4c) A GE 2270 D1t D2 és E antibiotikumok izolálása és elválasztása
A GE 2270 D-|, D2 és E antibiotikumok elválasztását és tisztítását az előzőek szerint kapott nyers elegyből preparatív HPLC-s módszerrel, 250*20 mm-es, Nucleosil® C18 (oktadecil-szilánnal kezelt szilikagél) (5 pm) töltetű oszlopon, eluensként az A fázisban acetonitril:tetrahidrofurán:4 mmol-os ammónium-acetát 40:40:20 térfogatarányú, a B fázisban acetonitriftetrahidrofurán:40 mmol-os ammónium-acetát 10:10:80 térfogatarányú elegyét alkalmazva végeztük. A 6 mg-nyi antibiotikumkeveréket 3 ml B és 1 ml A fázisban oldottuk, majd HPLC kolonnára injektáltuk, amelyet 14 ml/perc átfolyási sebességgel 26:74 térfogatarányú A fázis és B fázis eleggyel eluáltunk. A 254 nm-nél kapott UV abszorpciós spektrum szerint azonosított frakciókat összegyűjtöttük. A kromatográfiásan egységesnek mutatkozó frakciókat egyesítettük, és redukált nyomáson betöményítettük az acetonitril eltávolítása céljából. A maradékul kapott oldat Staphylococcus aureus L 165-tel szemben antibakteriális aktivitást mutatott, papírlemezes vizsgálat során.
HU 224 072 Β1
Ezeket az oldatokat legalább háromszor liofilizáltuk a HPLC-s kezelésből eredő ammónium-formiát teljes mennyiségének eltávolítása céljából.
A következő antibiotikummennyiségeket kaptuk:
mg GE 2270 E, 12 mg GE 2270 10 mg GE
2270 D2.
4d) A GE 2270 C2a antibiotikum és más GE 2270 antibiotikum faktorok tisztított elegyének izolálása A hatszor ismételt fermentációval kapott nyers
GE 2270 preparátumait összegyűjtöttük, és 12 193:7 térfogatarányú diklór-metán:metanol elegyében oldottuk. A nem oldódó részt kiszűrtük, s az antibiotikumok elegyét tartalmazó oldatot egy 13 kg (0,48-0,025 mm huzalátmérőjű szita, 230-400 mesh) szilikagéllel töltött kolonnára vittük, amelyet 93:7 arányú diklór-metán:metanol elegyével kezeltünk.
A GE 2270 C2a-t ugyanilyen arányú diklór-metán:metanol elegyével mostuk le az oszlopról. A találmány szerinti antibiotikumot tartalmazó frakciókat (HPLC analízis szerinti) egyesítettük, csökkentett nyomáson betöményítettük, szárítottuk, így 23,5 g terméket kaptunk, amely C2a antibiotikumot tartalmazott további minor faktorokkal keverékben.
Az előzőek szerint kapott termék 5,5 g-ját ismét kromatografáltuk 400 g szilikagéllel (0,48-0,025 mm huzalátmérőjű, 230-400 mesh) töltött oszlopon, amelyet diklór-metánnal kezeltünk. Az oszlopot először 1 I diklór-metánnal készítettük elő, majd a következőkben megadott arányú diklór-metán/metanol elegyekkel eluáltuk: 96/4 térfogatarány (3 liter); 94/6 térfogatarány (1 liter); 92/8 térfogatarány (2 liter); 90/10 térfogatarány (6 liter) és 88/12 térfogatarány (4 liter).
A főként GE 2270 C2a-t tartalmazó frakciókat (HPLC analízis szerint) összegyűjtöttük és bepároltuk. A bepárlási maradék petroléterrel történő kezelése után 646 mg antibiotikumot kaptunk.
4e) A GE 2270 C2a tiszta antibiotikum izolálása
A főleg GE 2270 C2a antibiotikumot tartalmazó előzőekben tisztított elegyet további HPLC preparatív tisztításnak vetettük alá.
A fentiekben nyert antibiotikumpreparátum 10 mg-ját 1 ml A fázisban (acetonitril:tetrahidrofurán: 40 mmol-os ammónium-acetát-40:40:20 térfogatarányú elegye) és 1 ml B fázisban (acetonitrihtetrahidrofurán: 40 mmol-os ammónium-acetát 10:10:80 térfogatarányú elegye) oldottuk, és egy 250*20 mm-es Hibar kolonnára (E, Merch; Darmstadt F. R. Németország) injektáltuk (az oszlop 7 pm szemcseméretű Nucleosil® C18, oktadecil-szilán-csoportokat tartalmazó szilikagéltöltettel volt töltve), a töltetet 40% A és 60% B fázist tartalmazó eleggyel stabilizáltuk. A kolonnát 22 percen át 15 ml/perc térfogatáramú, 40-50% A fázist tartalmazó lineáris gradienssel eluáltuk. Az UV-spektrumokat 254 nm-en vettük fel. A tiszta, cím szerinti antibiotikumot tartalmazó, egymást követő 10 kromatográfiás futtatás frakcióit összegyűjtöttük, és az acetonitril eltávolítása céljából csökkentett nyomáson bepároltuk, a GE 2270 C2a antibiotikumot vízből csaptuk ki. A csapadékot centrifugálással gyűjtöttük össze, desztillált vízzel kétszer mostuk, szárítottuk vákuumban, így 66 mg tiszta antibiotikumot kaptunk.
5. A GE 2270 A2 antibiotikum előállítása
A fentiek szerint előállított GE 2270 A antibiotikum 86 mg-ját 17 ml 95%-os etanol és 1,7 ml ecetsav elegyében oldottuk. 24 órán át 60 °C-on történő inkubálás után a kapott oldatot 0,1 mólos 7,5 pH-értékű nátrium-foszfát-pufferrel (100 ml) hígítottuk, és az elegy pH-értékét 1 mólos nátrium-hidroxiddal 7,5-re állítottuk. Az etanolt csökkentett nyomáson lepároltuk, a vizes maradékot etil-acetáttal kétszer (100 ml) extraháltuk. A szerves fázist csökkentett nyomáson bepároltuk, az így nyert szilárd maradékot tetrahidrofuránban oldottuk, majd a terméket petroléter hozzáadásával kicsaptuk. 62 mg GE 2270 A2 antibiotikumot kaptunk, amely kis mennyiségben GE 2270 A és A1 antibiotikumot is tartalmaz.
A tiszta GE 2270 A2 antibiotikumot preparatív HPLC-vel nyertük az alábbiak szerint:
mg-ot az előzőekben kapott nyerstermékből tetrahidrofuránban oldottunk, vízzel az oldhatósági határértékig hígítottuk, és 250*20 mm méretű HPLC kolonnára injektáltuk, amely Nucleosil® C18 (5 pm) (Stacroma®) reverz fázisú szilikagéltöltetet tartalmazott, az oszlopot 20 percen át 15 ml/perc térfogatáramú, lineáris gradiensü eluálószerrel eluáltuk, amely az A fázisban 64-93% B fázist tartalmazott.
Ebben a rendszerben az A fázis 7,2 pH-értékű 18 mmol-os vizes nátrium-foszfát és acetonitril 90:10 térfogatarányú elegye, míg a B fázis 7,2 pH-jú 18 mmol-os vizes nátrium-foszfát és acetonitril 40:60 térfogatarányú elegye. Öt egymást követő lefutás frakcióit fogtuk fel, és az UV-spektrumokat 330 nm-en vettük fel.
A frakciókat, amelyek nagy mennyiségben tartalmazták a GE 2270 A2 antibiotikumot, s amelynek főbb csúcsai UV-elnyelés alapján annak megfeleltek, összegyűjtöttük, és csökkentett nyomáson a vizes fázisig, bepároltuk, ez utóbbit etil-acetáttal kétszer extraháltuk. A szerves extraktumot desztillált vízzel mostuk a maradék szervetlen sók eltávolítása céljából, majd bepároltuk, miután szilárd bepárlási maradékot kaptunk. Ez utóbbit tetrahidrofuránban feloldottuk, az oldatot petroléterrel kezelve kicsapással nyertük a tiszta GE 2270 A2 antibiotikum 45 mg-nyi mennyiségét.
A 406 745 számú közzétett európai szabadalmi bejelentésben további alternatív módszert ismertetnek a GE 2270 A fő reakciótermékének a GE 2270 A2 antibiotikumból való előállítására.
6. A GE 2270 A3 antibiotikum előállítása
A GE 2270 A2 antibiotikumot egy órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk 0,5 mol-os nátrium-karbonátban. A reakcióelegyet hideg vízzel hígítottuk, és pH-ját sósavval 6,5 értékre állítottuk. A semlegesített oldat fő reakciótermékként GE 2270 A3 antibiotikumot tartalmazott. Ezt az antibiotikumot a vizes fázisból etil-acetáttal extraháltuk, majd a betöményített szerves fázisból petroléter hozzáadásával kicsaptuk.
A tiszta GE 2270 antibiotikumot oszlopkromatográfiával kaptuk az alábbi módon.
HU 224 072 Β1
A nyers GE 2270 A3 faktor 1,5 g-ját oldottuk metanol és diklór-metán 60 ml-nyi 1:1 térfogatarányú elegyében, és szilikagélen (0,125-0,48 mm huzalátmérőjű szita, 75-230 mesh) adszorbeáltuk az oldószerek csökkentett nyomáson történő lepárlásával. A szilárd maradékot ezután egy szilikagélt (0,125-0,48 mm huzalátmérőjű szita, 75-230 mesh) tartalmazó oszlop (töltetmagasság 40 cm) tetejére tettük, amely diklór-metánnal volt stabilizálva. A kolonnát metanol és diklór-metán alábbi összetételű elegyeivel eluáltuk:
1. 2% metanol 450 ml diklór-metánban,
2. 5% metanol 500 ml diklór-metánban,
3. 10% metanol 600 ml diklór-metánban,
4. 15% metanol 500 ml diklór-metánban,
5. 20% metanol 500 ml diklór-metánban,
6. 30% metanol 250 ml diklór-metánban.
A frakciókat fölfogtuk, vékonyréteg-kromatográfiával és ATCC 6633 B. subtilis mikroorganizmuson végzett mikrobiológiai próbával követtük. A GE 2270 A3 antibiotikum rendszerint olyan eluátumban volt, amely 15-20% metanolt tartalmazott.
A kívánt terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük és csökkentett nyomáson betöményítettük.
A maradék petroléterrel történő kezelése után 854 mg tiszta GE 2270 A3 antibiotikum csapódott ki.
7. A szűkebb értelemben vett kiindulási anyag előállítása D1t D2, E és C2a antibiotikum faktorokból
A szűkebb értelemben vett kiindulási anyagot, amelynek (II) általános képletében W karboxilcsoportot vagy aktivált észtercsoportot jelent, R jelentése hidrogénatom, hidroxi-metil-csoport vagy metoxi-metilcsoport, R-| metilcsoportot vagy hidrogénatomot és R4 hidroxi-metil- vagy metilcsoportot jelent, az előzőekben, az 5. és a 6. pontokban leírt eljárással lényegében azonos módon kaptuk, de kiindulási anyagként a GE 2270 A antibiotikum helyett egyenként a D1t D2, E és C2a faktorokat alkalmaztuk.
7a) A szűkebb értelemben vett kiindulási anyag előállítása a GE 2270 antibiotikum minor faktorainak (C2g, Di, D2 és E) elegyéből
A szűkebb értelemben vett kiindulási anyagot, amelynek (II) általános képletében W karboxilcsoportot vagy aktivált észtercsoportot jelent, és R, R-| és R4 C2a esetében metoxi-metil-csoportot, metilcsoportot, illetve hidroxi-metil-csoportot jelent, Dt esetében hidrogénatomot, hidrogénatomot, illetve metilcsoportot jelent, D2 esetében hidroxi-metil-csoportot, metilcsoportot, illetve metilcsoportot jelent, és E esetében hidroxi-metil-csoportot, hidrogénatomot, illetve metilcsoportot jelent, az előzőekben, az 5. és 6. pontokban leírt eljárással lényegében azonos módon kaptuk, de kiindulási anyagként a GE 2270 A antibiotikum helyett a minor faktorok (C2a, Dt, D2 és E) elegyét alkalmaztuk.
A HPLC szerinti retenciós időt (Rt [perc]) az M) módszerrel határoztuk meg, amelyet az előzőekben a HPLC analízis részben ismertettünk.
Abban az esetben, ha W aktivált észtercsoportot jelent, akkor az R, 22,51 perc a GE 2270 C2a-nál, 19,80 perc a GE 2270 ϋτ-ηόΙ, 20,41 perc a GE 2270 D2-nél és 18,92 perc a GE 2270 E-nél.
Abban az esetben, ha W karboxilcsoportot jelent, akkor az Rt 12,99 perc a GE 2270 C2a-nál, 10,38 perc a GE 2270 Drnél, 11,80 perc a GE 2270 D2-nél és
9,03 perc a GE 2270 E-nél.
8. Glicil-Ne-Cbz-L-lizin-trifluor-acetát előállítása
7,28 g (22 mmol) Νε-Cbz-L-lizin-metil-észter (Fluka) és 3,5 g (20 mmol) BOC-glicin (Fluka) 50 ml vízmentes DMF-fel készült oldatához erőteljes keverés közben 0 °C-on 4,8 ml (22 mmol) DPPA-t adtunk. Ehhez az oldathoz 0 °C-on 10-15 perc alatt 5,8 ml trietil-amin 50 ml vízmentes DMF-fel készült oldatát adtuk. További két órán át az elegyet 0 °C-on, majd éjszakán át szobahőmérsékleten kevertettük. A reakcióelegyhez ezután 250 ml toluolt és 500 ml etil-acetátot adtunk, majd 1 N vizes sósavval háromszor, ezután vízzel, majd nátrium-hidrogén-karbonát és konyhasó telített oldatával mostuk. Nátrium-szulfáton történő szárítás és az oldószer bepárlása után 9,7 g ragacsos, olajszerű terméket kaptunk, amely nem kristályosodott. Az olaj NMR-spektruma összhangban volt a BOC-glicil-Ne-Cbz-L-lizin-metil-észter szerkezetével.
A fentiekben kapott olajat 200 ml aceton/dioxán 1:1 térfogatarányú elegyében oldottuk, és 0 °C-on, keverés közben 30 perc alatt 22 ml 1 N vizes nátrium-hidroxidot adtunk hozzá. A reakcióelegyet 45 percig szobahőmérsékleten kevertettük, majd 300 ml hideg vízzel hígítottuk, 25 ml 1 N vizes sósavval savanyítottuk, előbb kloroformmal háromszor, majd etil-acetáttal háromszor extraháltuk.
Az extraktumot nátrium-szulfáton szárítottuk, az oldószert lepároltuk, így 9,4 g gumiszerű terméket kaptunk, amely nem volt kristályosítható. A termék NMR-spektruma összhangban állt a BOC-glicil-ΝεCbz-L-lizin szerkezetével.
Az előzőek szerint kapott gumiszerű vegyületet 20 ml hideg trifluor-ecetsawal (TFA) kezeltük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten addig kevertettük, amíg a vegyület teljesen beoldódott. Az oldatot vákuumban kis mennyiségűre koncentráltuk hidegen, majd etil-éter hozzáadására a cím szerinti vegyület kicsapódott. 9,6 g glicil-Ns-Cbz-L-lizin-trifluor-ecetsavas sóját kaptuk, fehér por alakjában. A vegyület NMR-spektruma megfelelt a szerkezetnek.
9. L-Tirozil-L-prolinamid előállítása °C-on, erőteljes keverés közben, 538 mg (2 mmol) BOC-L-tirozin (Fluka), 228,3 mg (2 mmol) L-prolinamid (Aldrich) és 168 mg nátrium-hidrogén-karbonát 5 ml száraz DMF-fel készült oldatához 0,48 ml (2 mmol) DPPA-t adtunk. A reakcióelegyet 24 órán át szobahőmérsékleten kevertettük, majd 50 ml víz hozzáadása után kloroformmal háromszor extraháltuk. A szerves fázist vízzel mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk, majd az oldószert lepároltuk, így olajszerű terméket kaptunk, amelyet szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatografáltunk, eluensként hexámaceton 2:3 térfogatarányú elegyét használva. A tisztítás után 420 mg BOC-L-tirozil-L-prolinamidot nyertünk fehér szilárd anyag formájában. Az NMR-spektrum megfelelt a várt szerkezetnek.
A szilárd anyagot 6 ml etil-acetátban oldottuk, és az oldatot szobahőmérsékleten kevertettük 48 órán át
HU 224 072 Β1 ml 3 N vizes sósavoldat jelenlétében. A reakcióelegyet ezután vákuumban szárazra pároltuk, a bepárlási maradékot etanolban újraoldottuk, majd a terméket etil-éterrel kicsaptuk. 302 mg L-tirozil-L-prolinamidot kaptunk fehér por alakjában. Az NMR-felvétel megfelelt a szerkezetnek.
10. 8-Amino-kaprilsav-metil-észter és 11-amino-undekánsav-metil-észter p-toluolszulfonátjainak előállítása mmol amin (Fluka) és 15,2 g (80 mmol) p-toluolszulfonsav-monohidrát (Fluka) 200 ml metanollal készült oldatát éjszakán át refluxáltattuk. Az oldószert vákuumban bepároltuk, és a bepárlási maradékot etil-éterben feloldottuk. Egy idő után a cím szerinti termékek kvantitatív mennyiségben kikristályosodtak. A két vegyület NMR-spektruma összhangban volt a szerkezetükkel.
11. 5-Amino-pentil-foszfonsav előállítása
3,48 g (33,7 mmol) 5-amino-1-pentanol (Fluka) és 5,0 g (33,7 mól) ftálsavanhidrid (Fluka) elegyét együtt ömlesztettük 180 °C-on. Ezen a hőmérsékleten tartottuk az ömledéket 90 percen át, miután a vízfejlődés megszűnt. A reakciót hagytuk szobahőmérsékletre hűlni, majd az olajos elegyet szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatografáltuk 2%-os metanolos kloroformmal eluálva. 5,9 g tiszta, olajszerű terméket kaptunk, melynek NMR-spektruma megfelelt a vegyület szerkezetének.
Az 5,9 g-nyi olajos intermedierhez (25 mmol) 1,6 ml (17 mmol) foszfor-tribromidot adagoltunk apránként, az exoterm reakció figyelembevételével. Ezután az elegyet 1,5 órán át 100 °C-on melegítettük, majd tört jégre öntöttük. A szilárd anyagot, amely kikristályosodott, szűrtük, és levegőn szárítottuk éjszakán át, miután
6,6 g tiszta brómintermedier-vegyületet kaptunk. A vegyület tömegspektruma megfelelt a várt molekulatömegnek.
A fentiekben kapott tiszta brómintermedier 500 mg-ját (1,69 mmol) és 140 mg (0,84 mmol) trietil-foszfitot (Fluka) 150 °C-ra melegítettük, 1 órán át ezen a hőmérsékleten tartottuk. 140 mg trietil-amint további három részben adtunk hozzá 30 percen belül ugyanezen a hőmérsékleten. Miután a kiindulási anyag teljesen eltűnt, a trietil-foszfit feleslegét ledesztilláltuk, és a nyersterméket szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatografáltuk 2%-os metanolos diklór-metán-eluenssel. 468 mg várt dietil-foszfonátot kaptunk ragacsos olaj formájában, melynek NMR-spektruma összhangban állt a szerkezettel.
A fenti dietil-foszfonát-intermedierből 468 mg-ot 3 ml 0,2 M-os hidrazin-metanolos oldattal kezeltünk éjszakán át szobahőmérsékleten. A csapadékként képződött ftálhidrazidot szűrtük, és a szűrletet vákuumban szárazra pároltuk. A bepárlási maradékot 1 N vizes sósavban felvettük, az oldatot etil-acetáttal mostuk, nátrium-hidroxiddal lúgosítottuk, és néhányszor normálbutanollal extraháltuk. A butanolos fázist nátrium-szulfáttal szárítottuk és szárazra pároltuk, így 75 mg olajszerű terméket kaptunk, amelynek NMR-spektruma megfelelt a várt vegyület szerkezetének.
175 mg dietil-(5-amino-pentil)-foszfonátot 20 órán át 0,6 ml tömény sósavban refluxáltattunk. A savas oldatot azeotrop desztillációval vákuumban szárazra pároltuk normálbutanol jelenlétében. A kapott, átlátszó olaj NMR-spektrum szerint 5-amino-pentil-foszfonsavnak felelt meg.
12. 5-(5-Amino-pentil)-tetrazol előállítása ml (80 mmol) 6-amino-kapronitril (Fluka) és 13,3 ml (96 mmol) trietil-amin 80 ml tetrahidrofúránnal készült oldatához 12,48 ml (88 mmol) benzil-klór-formátot (Fluka) adtunk cseppenként 0 °C-on, keverés közben. További két órán át, szobahőmérsékleten történő keverés után az oldószert vákuumban bepároltuk. A bepárlási maradékot etil-acetátban oldottuk, 1 N vizes sósavval és vízzel mostuk, majd nátrium-szulfáttal szárítottuk, az oldószer lepárlása után 19,6 g szirupszerű terméket kaptunk, amelynek NMR-spektruma összhangban állt a szerkezettel.
A védett 6-amino-kapronitril 1 g-ját (4,06 mmol) 40 ml 1-metil-2-pirrolidonban 150 °C hőmérsékleten argonatmoszférában 793 mg (12,2 mmol) nátrium-azid és 834 mg (6,1 mmol) trietil-amin-hidroklorid jelenlétében melegítettük. 4 óra elteltével a reakcióelegyet 120 ml vízzel hígítottuk, majd óvatosan 10%-os vizes sósavval pH=1 értékig savanyítottuk. Az oldatot etil-acetáttal extraháltuk, a szerves fázist 10%-os vizes nátrium-hidroxiddal kétszer visszaextraháltuk, és a lúgos oldatot etil-éterrel mostuk, tömény sósavval savanyítottuk, és etil-acetáttal háromszor extraháltuk. A szerves fázis szárítása és bepárlása után szirupszerű terméket kaptunk, amely metanol-víz elegyéből kristályosodott.
260 mg finom por alakú anyagot nyertünk, amely NMR- és tömegspektrum szerint a várt vegyület.
A nitrogénen védett amino-tetrazol 250 mg-ját (0,86 mmol) szobahőmérsékleten 5 ml tioanizollal (43,25 mmol) és 17,5 ml trifluor-ecetsawal kezeltük három órán át. A trifluor-ecetsavat vákuumban hidegen bepároltuk, a bepárlási maradék etil-éterrel történő kezelése után a cím szerinti vegyület trifluor-ecetsavas só formájában kristályosodott. Az NMR- és tömegspektroszkópiai adatok a várt szerkezetet bizonyították.
13. N-[3,4-di(O-tetrahidropiranil)-benzoil]-tiazolidin-2-tion előállítása
4,62 g (30 mmol) 3,4-dihidroxi-benzoesav (Fluka) 40 ml metanollal készült oldatát 24 órán át 0,325 ml tömény kénsav jelenlétében refluxáltattuk. Az oldat szobahőmérsékletre történt lehűlése után szilárd nátrium-hidrogén-karbonátot adtunk hozzá, és az oldószert bepároltuk vákuumban. A bepárlási maradékot etil-acetátban felvettük, vízzel mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk, és az oldószert bepároltuk, így szirupszerű terméket kaptunk, amely etil-acetát/hexán elegyéből kristályosodott, így 3,53 g fehér, kristályos anyagot nyertünk.
1,68 g (10 mmol) metil-3,4-dihidroxi-benzoát 4 ml etil-acetáttal és 25 ml diklór-metánnal készült oldatához keverés közben szobahőmérsékleten 9,1 ml (0,1 mól) dihidropiránt (Fluka) és 250 mg (1 mmol) piridinium-p-toluolszulfonátot adtunk. 4 nap elteltével a reakcióelegyet telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk és szárazra párol31
HU 224 072 Β1 tűk, így 3,36 g olajos anyagot kaptunk, amelyet további tisztítás nélkül használtunk a következő lépéshez.
Az előzőekben kapott nyersterméket 40 ml acetonban oldottuk, és 20 ml víz, 2,76 g (20 mmol) kálium-karbonát és 10 ml 1 N vizes nátrium-hidroxid (10 mmol) elegyéhez adtuk keverés közben, a kevertetést további 7 napon át folytattuk szobahőmérsékleten. Az acetont vákuumban bepároltuk, a maradék vizes fázist egy ugyanannyi térfogatú kloroformot tartalmazó lombikba öntöttük, 0 °C-ra hűtöttük, és óvatosan, erőteljes keverés közben 50 ml 1 N vizes sósavval savanyítottuk. A vizes fázist kloroformmal háromszor extraháltuk, és az egyesített szerves fázisokat 0,2%-os ammónium-formiáttal mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk és szárazra pároltuk, miután szirupszerű anyagot nyertünk, amely hexán hozzáadására kristályosodott. 2,34 g fehér, szilárd terméket kaptunk. Az NMR-adatok összhangban álltak a vegyület szerkezetével.
333 mg (2,8 mmol) 2-tiazolin-2-tiolt (Fluka), 557 mg (2,8 mmol) Ν,Ν'-diciklohexil-karbodiimidet (Fluka) és 35 mg 4-(dimetil-amino)-piridint sorrendben, 0 °C-on 644 mg (2 mmol) benzoesav-intermedier 14 ml etil-acetát:diklór-metán 5:2 térfogatarányú elegyéhez adtuk keverés közben.
A keverést tovább folytattuk szobahőmérsékleten éjszakán át, majd a képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrtük, a sárga színű oldatot vákuumban bepároltuk, maradékul sárga, olajos anyagot kaptunk, amelyet szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatografáltunk 25 térfogat-százalékos acetonos hexáneluenssel. 700 mg sárga kristályos anyagot nyertünk aceton-hexán elegyéből. Az NMR- és IR-spektroszkópiai adatok a cím szerinti vegyület szerkezetének feleltek meg.
14. N1,N8-Di(tercier-butoxi-karbonil)-spermidin előállítása
19,72 g (80 mmol) BOC-ON (Aldrich) 60 ml gázmentesített tetrahidrofuránnal készült oldatát cseppenként, 1 óra alatt argonatmoszférában kevertetett, 5,8 g (40 mmol) spermidin (Aldrich) 40 ml gáztalanított tetrahidrofuránnal készült oldatához adtuk 0 °C-on.
A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten kevertettük éjszakán át, majd szárazra pároltuk. A bepárlási maradékot etil-éterben felvettük, 1 N vizes nátrium-hidroxiddal négyszer, és vízzel is négyszer mostuk, nátrium-szulfáton szárítottuk, és az oldószert bepároltuk vákuumban. Etil-éter hozzáadása után a bepárlási maradékból 11 g fehér, porszerű termék kristályosodott ki. Az NMR-spektrum a cím szerinti vegyület szerkezetét igazolta.
15. N-(Tercier-butoxi-karbonil)-propilén-diamin előállítása g (15,6 mmol) 3-amino-propionitril-fumarát (Aldrich) 10 ml dioxán, 10 ml víz és 3,3 ml trietil-amin elegyével készült oldatához 4,2 g (17,2 mmol) BOC-ON-t (Aldrich) adtunk szobahőmérsékleten keverés közben. Három óra elteltével a reakcióelegyet vízzel hígítottuk és diklór-metánnal háromszor extraháltuk.
Az egyesített szerves fázisokat 1 N vizes nátrium-hidroxid-oldattal háromszor, és vízzel is háromszor mostuk, nátrium-szulfáton szárítottuk, majd szárazra bepároltuk. A maradékul kapott olajat etil-éterrel felvettük, és hexán hozzáadására 2,2 g fehér porszerű terméket nyertünk.
A nitrogénen BOC-csoporttal védett intermedier 1 g-ját (5,9 mmol) 7 ml 1 N etanolos nátrium-hidroxidban 275,6-103 Pa nyomáson, 130 mg Raney-nikkel-katalizátor (50%-os vizes szuszpenzió, pH >9, Aldrich) jelenlétében 40 órán át hidrogéneztük. A Raney-nikkelt kiszűrtük, az oldószert bepároltuk szárazra. A bepárlási maradékot etil-acetátban felvettük és 1 N vizes nátrium-hidroxiddal mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk, az oldószert vákuumban bepároltuk, így 950 mg színtelen olajat kaptunk, amely állás közben megszilárdult. Az NMR-adatok a cím szerinti vegyület szerkezetével összhangban voltak.
16. 3-(2-Amino-etil-tio)-propionsav-metil-észtertrifluor-acetát előállítása
0,5 g (6,48 mmol) cisztein-amin (Fluka) 5 ml diklór-metánnal készült oldatához 1,4 g (6,48 mmol) di(tercier-butil)-dikarbonát (Aldrich) 5 ml diklór-metánnal készült oldatát adtuk szobahőmérsékleten keverés közben. 30 perc múlva a szerves oldószert bepároltuk, és a nyersterméket 5 ml absz. etanolban oldottuk. Az etanolos oldathoz 2,7 ml (19,1 mmol) trietil-amint és 1,07 ml (9,57 mmol) metil-3-bróm-propionátot (Fluka) adtunk egymás után. A reakció kb. 30 perc múlva lejátszódott. Az etanolt vákuumban bepároltuk, és a maradékhoz 15 ml kloroformot adtunk. A szerves fázist vízzel mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk, és az oldószer bepárlása után olajos anyagot kaptunk, amelyet 1 ml trifluor-ecetsavval 0 °C-on, 5 percen át kezeltünk. Szárazra párlás után 270 mg halványsárga olajat nyertünk, melynek NMR- és IR-adatai a cím szerinti vegyület szerkezetét igazolták.
17. 6-Amino-2(E)-hexénsav előállítása ml (11,6 mmol) 4-amino-butiraldehid-dietil-acetál (Fluka) és 3,6 ml (25,6 mmol) trietil-amin 5 ml diklór-metánnal készült oldatához 1,5 ml (12,9 mmol) benzoil-klorid (Fluka) 5 ml diklór-metánnal készült oldatát adtuk keverés közben, szobahőmérsékleten 30 perc alatt. Egy óra múlva a reakcióelegyet 10 ml diklór-metánnal hígítottuk, vízzel mostuk, és a szerves fázist nátrium-szulfáttal szárítottuk, majd a térfogatot 20 ml-re egészítettük ki. Az így kapott oldatot három napon át, argonatmoszférában 1,6 ml (11,5 mmol) trietil-amin, 10,2 g (46,8 mmol) di(tercier-butil)-dikarbonát (Aldrich) és 1,4 g (11,5 mmol) 4-dimetil-amino-piridin (Fluka) jelenlétében reagáltattuk. Az oldószer eltávolítása után barna olajat kaptunk, amelyet szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatográfiásan tisztítottunk, eluensként 20% etil-acetátot tartalmazó normálhexánt alkalmazva, így 1,6 g, a nitrogénen védőcsoportot nem tartalmazó 4-amino-butiraldehid-dietil-acetált kaptunk, színtelen olaj formájában. Az NMR-adatok megfeleltek a szerkezetnek.
Az előzőekben nyert olajat 5 ml tetrahidrofuránban oldottuk, és 5 ml 1 N sósavval kezeltük szobahőmérsékleten három órán át. A tetrahidrofuránt vákuumban eltávolítottuk, a maradék oldatot háromszor 2 ml kloro32
HU 224 072 Β1 formmal mostuk. A szerves fázist ezután nátrium-karbonát-oldattal és vízzel mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk, majd szárazra pároltuk, így olajszerű terméket kaptunk, amelyet további tisztítás nélkül használtunk fel a következő lépésben.
160 mg (4 mmol) 60%-os nátrium-hidrid 5 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült szuszpenziójához 0 °C-on, argonatmoszférában 0,837 ml (4,3 mmol) trietil-foszfon-acetátot (Fluka) adtunk. 30 perc múlva az előzőekben előállított aldehid (1,17 g, 4,02 mmol) 2 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát adtuk hozzá, és a hőmérsékletet hagytuk szobahőmérsékletre emelkedni. A reakcióelegyet éjszakán át kevertettük, és még 50 mg 60%-os nátrium-hidridet adtunk hozzá 0 °C-on. További két óra elteltével a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 10 ml híg sósavval kezeltük és háromszor 5 ml etil-acetáttal extraháltuk. Az egyesített szerves fázisokat vízzel mostuk, nátrium-szulfáttal szárítottuk, majd szárazra pároltuk. A kapott nyersterméket szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatográfiásan tisztítottuk eluensként 15% etil-acetátot tartalmazó normálhexánt alkalmazva, s így 765 mg szirupszerű anyagot kaptunk. Az NMR-adatok a várt, kettős kötést tartalmazó termék szerkezetét igazolták, amely E-konfigurációjú izomer (J=16 Hz).
6,15 ml (6,15 mmol) 1 N lítium-hidroxidot 739 mg (2,05 mmol) az előzőekben kapott telítetlen észter 10 ml tetrahidrofuránnal készült oldatához adtuk keverés közben szobahőmérsékleten. Miután a kiindulási anyag teljesen elreagált, a reakcióelegyet vákuumban 30 °C-on (fürdőhőmérséklet) bekoncentráltuk. A vizes oldat pH-ját 1 N sósavoldattal 2-re állítottuk és etil-acetáttal extraháltuk. Az egyesített szerves fázist nátrium-szulfáttal szárítottuk, szűrtük, és az oldószert bepároltuk, így olajszerű terméket kaptunk, amely állás közben, vákuumban megszilárdult. Az NMR és tömegspektrumok adatai a 6-(N-BOC-amino)-2(E)-hexénsav szerkezetével összhangban voltak.
A N-BOC védőcsoport eltávolítását a cím szerinti vegyület kinyerésére tiszta trifluor-ecetsavban végeztük közvetlenül a megfelelő GE 2270 kiindulási anyaggal való kapcsolás előtt.
18. 3-(2-Amino-etoxi)-propánsav-trifluor-acetát előállítása g (6,22 mmol) N-BOC-etanol-amin [klasszikus módon etanol-aminból előállított (Fluka)] 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához keverés közben -78 °C-on 3,88 ml 1,6 mólos butil-lítiumot (Fluka) (6,22 mmol) adtunk keverés közben, argonatmoszférában. 30 perc múlva 1,3 g (6,22 mmol) terc-butil-3-bróm-propanoátot (előállítása klasszikus módon 3-bróm-propionsavból történt, Fluka) adtunk hozzá, a hőmérsékletet hagytuk szobahőmérsékletre emelkedni, és a képződött reakcióelegyet 20 órán át ezen a hőmérsékleten kevertettük. Vízzel történő hígítás után a reakcióelegyet kétszer 5 ml normálhexánnal extraháltuk. Az oldószer eltávolítása után a kapott nyersterméket szilikagél 60 (230-400 mesh, ASTM-Merck) tölteten kromatografáltuk eluensként 20% etil-acetátot tartalmazó normálhexánt alkalmazva, így 1,43 g olajat kaptunk. Az NMR-adatok a kapcsolt vegyület szerkezetét igazolták.
A kapcsolt vegyület teljes lehasítását trifluor-ecetsavas keveréssel végeztük kb. 5 percen át, szobahőmérsékleten, közvetlenül azelőtt, mielőtt a megfelelő GE 2270 kiindulási anyaghoz adtuk volna.
A trifluor-ecetsav vákuumban történő eltávolítása eredményezte a címvegyületet.

Claims (14)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. (I) általános képletű GE 2270 antibiotikum amidszármazéka és gyógyászatilag alkalmazható addíciós sói, ahol a képletben
    R jelentése hidrogénatom, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoport;
    R-ι jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
    Y jelentése -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben
    R2 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, amino-(2-4 szénatomos alkil)-, (1-4 szénatomos alkil)-amino-(1-4 szénatomos alkil)- vagy di(1—4 szénatomos alkil)amino-(1-4 szénatomos alkil)-csoport;
    R3 jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó szénláncú, az alábbi szubsztituensek közül egy-hármat hordozó 1-14 szénatomos alkilcsoport: karboxil-, formil-, szulfo-, foszfono-, aminocsoport, amelyek adott esetben rövid szénláncú alkoxi-karbonil- vagy benzil-oxi-karbonil-csoporttal védve vannak;
    (1-4 szénatomos alkil)-amino-csoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxilcsoporttal szubsztituálva lehet; dí(1—4 szénatomos alkil)-amino-, hidroxilcsoport, 1-4 szénatomos alkoxicsoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxilcsoporttal szubsztituálva lehet; merkaptocsoport, 1-4 szénatomos alkiltio-csoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxilcsoporttal szubsztituálva lehet; fenilcsoport, amely adott esetben egy-háromszorosan szubsztituálva lehet az alábbi szubsztituensek közül kiválasztott csoportokkal;
    karboxil-, hidroxil-, merkaptocsoport; karbamoilcsoport, (1-6 szénatomos alkil)-karbamoil-csoport, amelyben az alkilrész adott esetben karboxil- és aminocsoporttal egyszeresen vagy kétszeresen lehet szubsztituálva; dí(1—4 szénatomos alkil)-karbamoil-csoport, amelyben az alkilrészek a szomszédos nitrogénatommal együtt képezhetnek egy olyan telített 5 tagú heterociklusos csoportot, amely az egyik gyűrűszénatomon egy karboxil- vagy karbamoilcsoporttal adott esetben szubsztituálva lehet;
    HU 224 072 Β1 benzoil-amino-csoport, amelyben a fenilrész egy-három hidroxilcsoporttal lehet szubsztituálva;
    tetrazolilcsoport;
    3-6 szénatomos alkenilcsoport, amely adott esetben karboxil- vagy szulfocsoporttal szubsztituálva lehet;
    1 -dezoxi-1 -glucitil-csoport; 2-dezoxi-2-glükozil-csoport; teljesen telített 5-7 tagú, nitrogéntartalmú heterociklusos csoport, amelyben a nitrogénatom adott esetben szubsztituálva lehet benzilcsoporttal; vagy
    R2 és R3 a kapcsolódó nitrogénatommal együtt képezhet egy teljesen telített 5-7 tagú heterociklusos csoportot, amely gyűrű adott esetben egy gyűrűszénatomon karboxilcsoportot hordozhat,
    R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport; azzal a feltétellel, hogy ha R4 hidroxi-metil-csoportot jelent, akkor egyidejűleg R metoxi-metil-csoportot és R1 metilcsoportot jelent.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R metoxi-metil-csoportot jelent, és a többi szubsztituens jelentése az 1. igénypontban meghatározott.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R metoxi-metil-csoportot, R-| és R4 metilcsoportot jelent, és Y jelentése olyan NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot jelent és R3 jelentése az 1. igénypontban meghatározott.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R metoxi-metil-csoportot, R1 és R4 metilcsoportot jelent, és Y egy természetes aminosavból, így glicinből, ornitinból, szerinből, aszparaginsavból, tirozinból, leucinból, fenil-alaninból, metioninból, prolinból, treoninből, lizinből, vagy szintetikus dipeptidből, így glicil-lizinből, szeril-prolinból, glicil-prolinamidból, tirozil-prolinamidból, treonil-prolinamidból, leucil-prolinamidból származó aminocsoportot jelent.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R metoxi-metil-csoportot, Rí és R4 metilcsoportot jelent, Y jelentése olyan -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot jelent és R3 jelentése 3-7 szénatomos egyenes szénláncú alkilcsoport, és amely szénlánc a karboxil-, szulfo- és foszfocsoportok közül kiválasztott csoporttal szubsztituálva van.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R metoxi-metil-csoportot, R1 és R4 metilcsoportot jelent, és Y jelentése olyan -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot és R3 5-karboxi-pentil-csoportot jelent.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R jelentése hidrogénatom, hidroximetil- vagy metoxí-metil-csoport, R1 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport, és Y olyan -NR2R3 általános képletű csoportot jelent, amelyben R2 jelentése hidrogénatom és R3 jelentése az 1. igénypontban meghatározott.
  8. 8. A 7. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben Y egy természetes aminosavból, így glicinből, ornitinból, szerinből, aszparaginsavból, tirozinból, leucinból, fenil-alaninból, metioninból, prolinból, treoninből, lizinből, vagy szintetikus dipeptidből, így glicil-lizinből, szeril-prolinból, glicil-prolinamidból, tirozil-prolinamidból, treonil-prolinamidból, leucil-prolinamidból származó aminocsoportot jelent.
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű ven'>let, ahol a képletben R hidrogénatomot, hidroxi-mtu.vagy metoxi-metil-csoportot jelent, R·, hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent, R4 metil- vagy hidroxi-metilcsoportot jelent, és Y jelentése olyan -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot jelent és R3 jelentése 3-7 szénatomos egyenes szénláncú alkilcsoport, amely szénlánc a karboxil-, szulfo- és foszfocsoportok közül kiválasztott csoporttal szubsztituálva van.
  10. 10. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben R hidrogénatomot, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoportot jelent, Rí hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent, R4 metil- vagy hidroxi-metil-csoportot jelent, és Y jelentése olyan -NR2R3 általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot és R3 5-karboxi-pentil-csoportot jelent.
  11. 11. Eljárás az 1. igénypont szerinti vegyület és sói előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű GE 2270 antibiotikumot - a képletben
    W jelentése karboxilcsoport vagy aktivált észtercsoport,
    R jelentése hidrogénatom, hidroxi-metil- vagy metoxi-metil-csoport,
    R-ι jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,
    R4 jelentése metil- vagy hidroxi-metil-csoport; azzal a megkötéssel, hogy ha R4 hidroxi-metil-csoportot jelent, akkor egyidejűleg R metoxi-metil-csoportot, és Rí metilcsoportot jelent egy HNR2R3 általános képletű aminnal - a képletben R2 és R3 jelentése az 1. igénypontban meghatározott reagáltatunk inért szerves oldószerben, és abban az esetben, ha W karboxilcsoportot jelent, akkor kondenzálószer jelenlétében és kívánt esetben egy kapott szabad vegyületet ismert módon sóvá alakítunk.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kondenzálószerként 1-4 szénatomos alkil-, fenil- vagy heterociklusos csoportot tartalmazó foszforazidátokat, így difenil-foszforazidátot, dietil-foszforazidátot, di(4-nitro-fenil)-foszforazidátot, dimorfolil-foszforazidátot, difenil-foszforokloridátot vagy benzotriazol1-il-oxi-triszpirrolidino-foszfónium-hexafluor-foszfátot alkalmazunk.
  13. 13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a HNR2R3 általános képletű aminreagenst a kiindulási antibiotikumhoz viszonyítva 1-2-szeres mólfeleslegben alkalmazzuk, és a reakció-hőmérséklet 0-20 °C közötti.
  14. 14. Gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet tartalmazza, gyógyászatilag elfogadható vivőanyaggal összekeverve.
HU9301941A 1991-01-03 1992-01-02 GE 2270 antibiotikumok amid származékai, eljárás ezek előállítására, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények HU224072B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP91100123 1991-01-03
PCT/EP1992/000002 WO1992012172A1 (en) 1991-01-03 1992-01-02 Amides of antibiotic ge 2270 factors

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9301941D0 HU9301941D0 (en) 1993-09-28
HUT64085A HUT64085A (en) 1993-11-29
HU224072B1 true HU224072B1 (hu) 2005-05-30

Family

ID=8206281

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9301941A HU224072B1 (hu) 1991-01-03 1992-01-02 GE 2270 antibiotikumok amid származékai, eljárás ezek előállítására, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5599791A (hu)
EP (2) EP0494078A1 (hu)
JP (1) JP3183508B2 (hu)
KR (1) KR100225763B1 (hu)
CN (1) CN1063110A (hu)
AT (1) ATE117320T1 (hu)
AU (1) AU662122B2 (hu)
CA (1) CA2093219C (hu)
DE (1) DE69201236T2 (hu)
ES (1) ES2067325T3 (hu)
FI (1) FI932944A (hu)
HU (1) HU224072B1 (hu)
IE (1) IE920005A1 (hu)
IL (1) IL100572A (hu)
MX (1) MX9200015A (hu)
NZ (1) NZ241216A (hu)
WO (1) WO1992012172A1 (hu)
ZA (1) ZA927B (hu)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8501774B2 (en) 2003-12-18 2013-08-06 Morphochem Aktiengesellschaft für kombinatorische Chemie Oxazolidinone-quinolone hybrid antibiotics
US8513231B2 (en) 2003-04-30 2013-08-20 Morphochem Aktiengesellschaft fü Kombinatorische Chemie Use of oxazolidinone-quinoline hybrid antibiotics for the treatment of anthrax and other infections

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0451486T3 (da) * 1990-03-08 1995-05-08 Lepetit Spa Antibiotikum GE 2270 faktorer B1, B2, C1, C2, D1, D2, E og T
ES2113391T3 (es) * 1991-08-30 1998-05-01 Biosearch Italia Spa Factor c2a de antibiotico ge 2270.
US5882900A (en) * 1992-09-10 1999-03-16 Gruppo Lepetit S.P.A. Process for the selective increase of production of antibiotic GE 2270 factor a by adding vitamin B12 to nutrient medium
EP0675900B1 (en) * 1992-12-22 1998-02-18 Biosearch Italia S.p.A. Antibiotics ge 37468 a, b and c
ATE165101T1 (de) * 1995-02-07 1998-05-15 Biosearch Italia Spa Basische prolinamid derivate von ge2270 und ge2270-ahnlichten antibiotika
US5891869A (en) * 1995-02-07 1999-04-06 Biosearch Italia, S.P.A. Basic oxazoline-amide derivatives of GE2270 and GE2270-like antibiotics
IL125107A (en) * 1996-02-14 2002-12-01 Biosearch Italia Spa Derivatives of antibiotics GE2270 factors D2, C2a and E, process for their preparation and pharmaceutical compounds containing them
JPH1059997A (ja) * 1996-08-22 1998-03-03 Microbial Chem Res Found アミチアマイシンアミド誘導体
US20050166498A1 (en) * 1999-12-17 2005-08-04 Oakey David D. Carpet tile with cutout section, method and apparatus for production and method of installation
GB0024200D0 (en) * 2000-10-03 2000-11-15 Smithkline Beecham Sa Component vaccine
PT1553967E (pt) * 2002-06-17 2011-08-01 Naicons S C A R L Utilização de um derivado amídico do factor a3 do ge 2270 no tratamento da acne
ATE455181T1 (de) * 2004-01-19 2010-01-15 Dsm Ip Assets Bv Biochemische synthese von 6-aminocapronsäure
PE20080103A1 (es) * 2006-05-31 2008-04-03 Novartis Ag AMINOTIAZOLES COMO MODULADORES DEL FACTOR DE ELONGACION EF-Tu
KR20090082504A (ko) * 2006-12-20 2009-07-30 노파르티스 아게 아미노티아졸 마크로사이클, 그의 항균 화합물로서의 용도 및 그의 제조 방법
WO2008091627A2 (en) 2007-01-22 2008-07-31 Genomatica, Inc. Methods and organisms for growth-coupled production of 3-hydroxypropionic acid
EA200901613A1 (ru) 2007-06-04 2010-06-30 Новартис Аг Макроциклы и их применение
WO2009045637A2 (en) 2007-08-10 2009-04-09 Genomatica, Inc. Methods for the synthesis of acrylic acid and derivatives from fumaric acid
EA020205B1 (ru) 2007-12-12 2014-09-30 Новартис Аг Аминотиазолы, фармацевтические композиции на их основе и способы лечения бактериальной инфекции
CA2712779C (en) 2008-01-22 2021-03-16 Genomatica, Inc. Methods and organisms for utilizing synthesis gas or other gaseous carbon sources and methanol
BRPI0909690A2 (pt) 2008-03-05 2019-02-26 Genomatica Inc organismos produtores de alcoóis primários
WO2009151728A2 (en) 2008-03-27 2009-12-17 Genomatica, Inc. Microorganisms for the production of adipic acid and other compounds
BRPI0911759A2 (pt) 2008-05-01 2019-09-24 Genomatica Inc microorganismo para a produção de ácido metacrílico
BRPI0913901A2 (pt) 2008-06-17 2016-12-13 Genomatica Inc micro-organismos e métodos para a biossíntese de fumarato, malato e acrilato
KR20110097951A (ko) 2008-12-16 2011-08-31 게노마티카 인코포레이티드 합성가스와 다른 탄소원을 유용 제품으로 전환시키기 위한 미생물 및 방법
JP2012525156A (ja) 2009-04-30 2012-10-22 ゲノマチカ， インク． イソプロパノール、ｎ−ブタノール、及びイソブタノールの産生のための微生物
KR102454204B1 (ko) 2009-04-30 2022-10-12 게노마티카 인코포레이티드 1,3-부탄다이올 생산 유기체
US8377680B2 (en) 2009-05-07 2013-02-19 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the biosynthesis of adipate, hexamethylenediamine and 6-aminocaproic acid
BRPI1012877A2 (pt) 2009-05-15 2016-04-05 Genomatica Inc organismo para produção de ciclohexanona
WO2010144746A2 (en) 2009-06-10 2010-12-16 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for carbon-efficient biosynthesis of mek and 2-butanol
EP2462221B1 (en) 2009-08-05 2017-02-22 Genomatica, Inc. Semi-synthetic terephthalic acid via microorganisms that produce muconic acid
EP2933338A3 (en) 2009-09-09 2016-01-06 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the co-production of isopropanol with primary alcohols, diols and acids
KR20120083908A (ko) 2009-10-13 2012-07-26 게노마티카 인코포레이티드 1,4-부탄다이올, 4-하이드록시부탄알, 4-하이드록시부티릴-ｃｏａ, 푸트레신 및 관련 화합물의 제조를 위한 미생물 및 관련 방법
BR112012009332A2 (pt) 2009-10-23 2015-09-15 Genomatica Inc micro-organismo para a produção de anilina
CN109136161A (zh) 2009-12-10 2019-01-04 基因组股份公司 合成气或其他气态碳源和甲醇转化为1,3-丁二醇的方法和有机体
CA2787314A1 (en) 2010-01-29 2011-08-04 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the biosynthesis of p-toluate and terephthalate
US8637286B2 (en) 2010-02-23 2014-01-28 Genomatica, Inc. Methods for increasing product yields
US8048661B2 (en) 2010-02-23 2011-11-01 Genomatica, Inc. Microbial organisms comprising exogenous nucleic acids encoding reductive TCA pathway enzymes
US9023636B2 (en) 2010-04-30 2015-05-05 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the biosynthesis of propylene
US8580543B2 (en) 2010-05-05 2013-11-12 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the biosynthesis of butadiene
CN103025877A (zh) 2010-07-26 2013-04-03 基因组股份公司 用于生物合成芳族化合物、2,4-戊二烯酸和1,3-丁二烯的微生物和方法
EP3628676A1 (en) * 2018-09-28 2020-04-01 Université de Montpellier Modified peptides and their uses

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE117724T1 (de) * 1989-07-04 1995-02-15 Lepetit Spa Antibiotikum ge 22270, faktoren a1,a2,a3 und h.

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8513231B2 (en) 2003-04-30 2013-08-20 Morphochem Aktiengesellschaft fü Kombinatorische Chemie Use of oxazolidinone-quinoline hybrid antibiotics for the treatment of anthrax and other infections
US8501774B2 (en) 2003-12-18 2013-08-06 Morphochem Aktiengesellschaft für kombinatorische Chemie Oxazolidinone-quinolone hybrid antibiotics
US9133213B2 (en) 2003-12-18 2015-09-15 Morphochem Aktiengesellschaft für kombinatorische Chemie Oxazolidinone-quinolone hybrid antibiotics

Also Published As

Publication number Publication date
IE920005A1 (en) 1992-07-15
FI932944A0 (fi) 1993-06-24
AU662122B2 (en) 1995-08-24
EP0565567B1 (en) 1995-01-18
WO1992012172A1 (en) 1992-07-23
AU1154492A (en) 1992-08-17
ATE117320T1 (de) 1995-02-15
JP3183508B2 (ja) 2001-07-09
KR930703355A (ko) 1993-11-29
ES2067325T3 (es) 1995-03-16
JPH06504768A (ja) 1994-06-02
CN1063110A (zh) 1992-07-29
IL100572A (en) 1997-01-10
FI932944A (fi) 1993-06-24
CA2093219C (en) 2002-04-09
NZ241216A (en) 1994-04-27
IL100572A0 (en) 1992-09-06
DE69201236D1 (de) 1995-03-02
HU9301941D0 (en) 1993-09-28
EP0565567A1 (en) 1993-10-20
KR100225763B1 (ko) 1999-10-15
HUT64085A (en) 1993-11-29
ZA927B (en) 1992-09-30
EP0494078A1 (en) 1992-07-08
DE69201236T2 (de) 1995-06-01
US5599791A (en) 1997-02-04
MX9200015A (es) 1992-07-31
CA2093219A1 (en) 1992-07-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU224072B1 (hu) GE 2270 antibiotikumok amid származékai, eljárás ezek előállítására, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
WO1992012172A9 (en) Amides of antibiotic ge 2270 factors
KR960014104B1 (ko) 테이코플라닌 화합물의 치환 알킬아미드
JP5204779B2 (ja) アクチノマデュラ・ナミビエンシス由来の抗菌性・抗ウイルス性ペプチド
AU693989B2 (en) Basic oxazoline-amide derivatives of GE 2270 and GE 2270-like antibiotics
US6008225A (en) Derivatives of antibiotic GE2270 factors C2a, D2 and E
AU693995B2 (en) Basic proline-amide derivatives of GE 2270 and GE 2270-like antibiotics
JPH02204499A (ja) ペプチド誘導体
JP3107584B2 (ja) 抗生物質ｇｅ２２７０因子ｂ１、ｂ２、ｃ１、ｃ２、ｄ１、ｄ２、ｅおよびｔ
JPS61502335A (ja) デグルコテイコプラニンのカルボン酸エステル誘導体
JPS58213744A (ja) Ａ−２１９７８ｃ環状ペプチド誘導体およびその製造方法
JPH0213392A (ja) ペプチド抗生物質
EP0825194A2 (en) An amide derivative of amythiamicin
Stanchev et al. Synthesis and antibacterial activity of some new non-proteinogenic amino acids containing thiazole residues
EP0050856B1 (en) New peptide, process for its preparation and pharmaceutical composition containing it
FR2460961A1 (fr) Derives de tallysomycine, leur procede de production et medicament les contenant
Lociuro et al. Derivatives of antibiotic GE2270 factors C 2a, D 2 and E

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: BIOSEARCH ITALIA S.P.A., IT

HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20050401

GB9A Succession in title

Owner name: NAICONS SCARL, IT

Free format text: FORMER OWNER(S): BIOSEARCH ITALIA S.P.A., IT; GRUPPO LEPETIT S.P.A., IT; VICURON PHARMACEUTICALS INC., US

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees