HU221239B1 - Method of inactivating viruses in proteins - Google Patents
Method of inactivating viruses in proteins Download PDFInfo
- Publication number
- HU221239B1 HU221239B1 HU9602914A HUP9602914A HU221239B1 HU 221239 B1 HU221239 B1 HU 221239B1 HU 9602914 A HU9602914 A HU 9602914A HU P9602914 A HUP9602914 A HU P9602914A HU 221239 B1 HU221239 B1 HU 221239B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- solution
- viruses
- inactivation
- inactivating viruses
- proteins
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 102
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 66
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 69
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 title claims description 18
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 65
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 61
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 26
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 76
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 51
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 17
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 16
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 16
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 14
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 14
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 9
- 241000484121 Human parvovirus Species 0.000 description 8
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 8
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 8
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 6
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 6
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 5
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 5
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 5
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 102100022712 Alpha-1-antitrypsin Human genes 0.000 description 4
- 101000823116 Homo sapiens Alpha-1-antitrypsin Proteins 0.000 description 4
- 101001010513 Homo sapiens Leukocyte elastase inhibitor Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 4
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- -1 alkyl phosphate derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014599 transmission of virus Effects 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-M tryptophanate Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C([O-])=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 101710081722 Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000347972 Caucasus prunus virus Species 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000709704 Human poliovirus 2 Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241001480512 Mammalian orthoreovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001475 anti-trypsic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- SSOLNOMRVKKSON-UHFFFAOYSA-N proguanil Chemical compound CC(C)\N=C(/N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 SSOLNOMRVKKSON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000002545 virucidic Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0082—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using chemical substances
- A61L2/0088—Liquid substances
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
A találmány hatékony ipari módszerre vonatkozik, amely extrém(alkalikus) pH-n, stabilizált közegben való inkubá- lással inaktiváljaáltalában a vírusokat (a lipidburokkal rendelkezőket vagy nemrendelkezőket) terápiás alkalmazásra szánt fehérjéket tartalmazóközegben, denaturálódás és a biológiai aktivitás jelentős veszteségenélkül. ŕ
Description
A humán plazmaszármazékok gyógyászati alkalmazása soha nem mentes a vírusok átvitelének rizikójától, még azután sem, hogy módszereket vezettek be a kiindulási anyagként alkalmazott plazma kiválasztására. Sok esetben a virális szennyezés jelenlétét indirekt úton, szerológiai markerek (alanin-aminotranszferáz) segítségével és specifikus antitestek jelenléte útján (humán immundeficiencia vírus: 1 és 2 típusú HÍV, hepatitisz C vírus: HCV) határozzák meg. Következésképpen egy inkubálási periódusnak kell eltelnie, mielőtt az említett közvetett indikátorok kimutatható mennyiségben megjelennek. A vírus bőséges proliferációja megy végbe ez alatt a fertőzés utáni időszak alatt (ablak periódus). A vírus típusától függően ez a virémiafázis a fertőzést követően 3-6 hónapig is eltarthat.
Hála a jelenlegi analitikai módszerek érzékenységének, a fertőzött egységek a fertőzés utáni első héten (hepatitisz B vírus felületi antigén: HBsAg) vagy néhány (2 vagy 3) héten (HÍV) vagy néhány (1-2) hónapon (HCV) belül kimutathatók.
A humán plazmavérszármazékok nagyon nagy számú, általában 1000-nél jóval több donációból készülnek, úgyhogy nagy a statisztikai valószínűsége annak, hogy egy nagy adag vírust (és analitikailag negatív töltésű antitestet) tartalmazó egység lesz jelen az „ablak periódusban”, és szennyezni fogja a teljes kezdeti plazma poolt (lásd Alegre Ámor A.: L.a transmisión de enfermedades virales por productos sanguíneos. Congreso Hematologia de Granada, Nov. 1994:175-178).
A virális genomnak a specifikus DNS sokszorozásának és kimutatásának módszerével, például a polimeráz láncreakcióval (PCR) történő közvetlen meghatározását jelenleg a kész végtermékre vagy a kiindulási plazma kezdeti pooljában alkalmazzák, úgyhogy a kimutathatósághoz magas minimális szint szükséges.
Következésképpen, egy negatív PCR-érték nem magyarázható a vírusok teljes hiányával, ugyanígy egy pozitív érték nem utal szükségképpen virális fertőzésre.
A fentiek alapján továbbra is nagy szükség van a vírusok inaktiválására vagy gyöngítésére alkalmas specifikus lépésekre a vérszármazékok előállítási és tisztítási eljárása során.
A mai napig számos közlemény jelent meg fertőző ágensek vérkészítmények útján történő átvitelére vonatkozóan, és a kutatás továbbra is az előállítási módszerek követésére összpontosít annak érdekében, hogy ellenőrizzék a plazmatermékek vírusmentességét.
Miután a vírusoktól teljes mértékben nem lehet megszabadulni (ismeretlen vírusok lehetősége miatt), és a vérszármazékok előállítása során lehetséges hibák vagy a jó termelési standardoktól (GPS) való eltérés következtében, a jelenlegi irányzat, különösen a vírusok inaktiválásának speciális lépésében, vagy a keresztszennyezés eredményeként, egy kétszeresen specifikus inaktiváló lépés beiktatása az előállítási eljárásba, ami hatalmas mértékben csökkenti a vírusok átvitelének rizikóját (EEC Guide (CPMP): 111/8115/89).
Hasonlóképpen,az egészségügyi hatóságok jelenlegi ajánlásai a vírusmentesség tekintetében arra irányulnak, hogy egy második inaktiválási lépést iktassanak be általában mindenfajta vírus vonatkozásában, akár rendelkezik az egy külső lipidburokkal, akár nem.
A plazmába átvitt ismert vírusok közül, amelyeket jelenleg a legveszélyesebbnek tartunk, a humán immundeficiencia és a hepatitis vírus (különösen a B és C) az, amely ismert módszerekkel inaktiválható.
A donációk herpeszvírussal (HSV és HHV) vagy citomegalovírussal (CMV), Epstein-Barr (EBV) vagy humán immunleukopátia-vírussal (HTLV-I/II) is szennyezettek lehetnek, azonban igen kicsi annak a valószínűsége, hogy ezek a plazmába kerülnek, mivel nagyon erősen kötődnek olyan sejtekhez (leukocitákhoz), amelyeket már előzőleg eltávolítanak.
Más vírusok, így a hepatitisz A és a humán parvovírus (PVH B19), főként az utóbb említett anyag, jelen lehet a plazmában, mivel előfordulásuk a donorpopulációban viszonylag magas. A két utóbb említett vírus az, amely plazmával átvive a leginkább ellenáll a fizikai és kémiai ágensekkel történő inaktiválásnak, noha ezek a vírusok a többieknél kevésbé veszélyeseknek tekinthetők, mindig feltételezve azt, hogy a fertőzés egészséges egyénben történik. A humán parvovírus potenciálisan az immundepressziós egyedekben vagy terhes nők kezelése alatt (a magzatra) veszélyes (lásd Mosquet N. et al., Atteinte hématologique sévere lors d’une infection á parvovírus B19: Des injections d’antithrombine III sont-elles á origine de la contamination? Therapie 1994; 49:459-76).
Minden esetben egy második inaktiválási lépést kell biztosítani olyan ismert inaktiválási módszerekkel, amelyek képesek a legrezisztensebb vírusok elpusztítására, amely vírusok nincsenek lipidburokkal ellátva. A módszereket néhány ilyen vírusra vagy azok modelljére tekintettel kell követni.
Napjainkban a szakterületen leírt víruseliminálási módszerek olyan fizikai és kémiai mechanizmusokon alapulnak, amelyek intaktiválással és/vagy ffakcionálással csökkentik a szennyezést. A legkidolgozottabb jelenlegi módszereket a következőképpen csoportosíthatjuk:
- Kémiai kezelés oldószerrel [tri(nBu)-foszfát és alkil-foszfát-származékok vagy TNBP] és detergenssel (Tween-80 vagy poliszorbát, triton X100 vagy nemionos felületaktív származékok), a jele S/D (lásd Horowitz B. et al., Inactivation of viruses in labile blood dérivativés: I. Disruption of lipid-enveloped viruses by Tri-(n-butyl)phosphate detergent combinations. Transfüsion 1985;25:516-522).
- Pasztőrözés folyadékban 60 °C-on 10 órán át a közbenső vagy utolsó lépésben, stabilizátorok jelenlétében (lásd Uemura Y. et al., Inactivation and elimination of viruses during the fractionation of an intravenous immunoglobulin preparation. Vox. Sang. 1989; 56:155-61).
- Száraz hőkezelés (száraz HT) a közbenső lépésben vagy a kész befejezett fiolában (általában) >80 °C-on, hosszabb időn át (lásd Knevelman A. et al., Effect of Monosaccharides during
HU 221 239 Β1
Severe’Dry Heat Treatment of Coagulation Factor VIII Concentrates. Vox. Sang. 1994; 66:96-103).
- Vírusok nanofiltrációja vagy filtrációja azonos, a vírus méreténél kisebb pórusméretű membránon keresztül (lásd Bumouf-Radosevich M. et al., Nanofiltration, A New Specific Vírus Elimination Method Applied to High-Purity Factor IX and Factor XI concentrates. Vox. Sang. 1994; 67:132-138).
- A további módszerek kevésbé használtak vagy használaton kívül kerültek: száraz hőkezelés szerves oldószerekkel, inaktiválás β-propiolakton-UV alkalmazásával (BPL-UV), metilén-UV-kék (lásd Wagner S. J. et al., Mammalian genotoxicity assessment of methylene blue in plasma: implications fór vírus inactivation. Transfusion 1995; 35(5):407-413), mérsékelten savas pH-n végzett kezelés (csak a gammaglobulinra használható) (lásd Kempf C. et al., Vírus inactivation during production of intravenous immunoglobulin. Transfusion 1991; 31(5):423-27).
Általában ezek a módszerek hatásosak a vírusok gyengítésére vagy elválasztására, noha nem mindegyik eliminálja a vírust hatékonyan és egyikük sem képes biztosítani minden típusú vírus teljes hiányát vagy jelentős gyengítését. Következésképpen minden módszernek vannak előnyei és hátrányai.
Egy víruselimináló lépés ideális esetben különféle kívánalmaknak kell hogy megfeleljen, amelyek közül néhányat nem teljesítenek a legszélesebb közben használt módszerek. Ezek a követelmények a következők:
1. Amikor több inaktiválási módszert alkalmazunk ugyanabban a tisztítási eljárásban, azoknak eltérő mechanizmus szerint kell hatniuk. Például a fizikai módszerek (inaktiválás vagy frakcionálás) jó kombinációt alkotnak a kémiai módszerekkel (inaktiválás).
2. A módszereknek hatásosaknak kell lenniük bármilyen típusú vírussal szemben. Az inaktiválási eljárások korlátozott hatásúak vagy hatástalanok a nagyobb fizikai vagy kémiai rezisztenciával rendelkező, lipidburok nélküli vírusokkal szemben (az S/D kezelés hatástalan ezekkel a vírusokkal szemben, vagy csökkent hatású, például a BPL-UV vagy metilén-UV-kék és a száraz hőkezelés 80 °C alatt). A pasztőrözés az inaktiválás hatásos módszere bármilyen típusú vírus esetében, azonban a hatása romlik, amikor a stabilizátorok vagy fehérje koncentrációja nagyon magas, a vírusok védekezési mechanizmusa miatt, úgyhogy a hőnek legellenállóbb vírusok csökkenése jelentéktelen olyan közegben, amely stabilizátorokat és/vagy fehérjéket nagy koncentrációban tartalmaz.
A vírusok membránon keresztül történő szűrése bármilyen vírus jelenlétét csökkenti tekintet nélkül annak fizikai vagy kémiai ellenállására, azonban a szűrés hatásossága a vírusok és a membrán pórusainak relatív méretétől függ. Következésképpen a legkisebb vírusok teljesen nem eliminálhatók, és szerencsétlen módon ezek legtöbbje lipidburok nélküli (humán parvovírus, hepatitis A és polio vírus).
3. A módszernek nem szabad fehérjék biológiai inaktiválását vagy denaturálását kiváltania, vagy ezen hatásnak nagyon kicsinek kell lennie, és a módszernek semmilyen esetben sem szabad antigén válaszú anyagokat eredményeznie. Néhány kémiai inaktiválási módszer a fehérjékben kémiai változást hoz létre (BPL-UV), és hasonlóképpen a hőkezelés, a szárazon vagy folyadékban végzett (pasztőrözés) is, bizonyos mértékben szinte elkerülhetetlenül denaturálja a fehérjéket, vagy a szóban forgó molekulát vagy a kísérő szennyező fehérjéket.
4. Zárvány lehetősége az utolsó lépésben. A kémiai inaktiválás az utolsó lépésben azért nehéz, mert az alkalmazott kémiai reagenseket (S/D, BPL, tiocianát) el kell választani, kivéve a metilén-kékes inaktiválási módszert (azonban még itt is emlékezni kell arra, hogy ennek a reakciónak a melléktermékei nem teljesen ártalmatlanok). Néhány pasztörizálási eljárást is közbenső lépésben végeznek, mivel a denaturált anyagot és/vagy az alkalmazott stabilizátorokat még el kell különíteni. A száraz hőkezelést gyakran az utolsó fázisban vagy a kész fiolában végzik.
A nanofiltráció általában a végső, kész oldatban történik oly módon, hogy azután már bizonyos alkalmazásokhoz további manipuláció nem szükséges.
5. Nem lehet az inaktiválási lépésnek semmilyen toxikus maradéka (kémiai reagensek). A legtöbb kémiai kezelés után további, a reagenseket hatásosan elimináló lépésekre van szükség. A maximálisan megengedhető határokat a kémiai szennyező toxicitása és a készítmény adagolásának gyakorisága függvényében kell megállapítani (mint a korábban említett S/D, BPL és tiocianát esetében is). Az inaktiválási (hővel) vagy frakcionálási (nanofiltráció) módszerek természetesen mentesek ezen hátrányoktól.
6. A műveletnek ipari méretekben is elvégezhetőnek, és az eljárásnak teljesen reprodukálhatónak kell lennie és olyan ismert paraméterekkel kell követhetőnek lennie, amelyeket könnyű beállítani. A kémiai inaktiválásra hatással van a termékek koncentrációja (fehérjék, sók, stabilizátorok és kémiai reagensek), emellett a hőmérséklet és a kezelés időtartama. Esetenként azonban néhány nem szabályzott paraméter elősegítheti a fenti inaktiváló szerek fogyasztását (amikor kémiai reakció játszódik le) vagy az inaktiváláshoz használt kiindulási oldat nem reprodukálható körülmények között van (részecskék vagy üledék jelenléte stb.). A száraz hőkezeléssel végzett inaktiválás a fiolák maradéknedvességtartalmától függ, ami sarzsról sarzsra könnyen változhat, úgyhogy ezt a paramétert nem lehet tökéletesen szabályozni.
7. Előnyben részesülnek az olyan egyszerű módszerek, amelyek nem igényelnek kiegészítő tisztítási lépéseket. Amint azt az 5. pont alatt már említettük, a kémiai inaktiválás a toxikus reagensek eltávolításához további lépéseket tesz szükségessé. Emellett befolyásolja azokat a pasztőrözési eljárásokat, amelyek a fehérjék megvédéséhez nagyfokú stabilizálást igényelnek (az FIX, FVIII, AT11I, al-PI, IM vagy IV gammaglobulinok stb. pasztőrözése).
HU 221 239 Β1
8. Az inaktiválási módszereknek ipari léptékben és elfogadható költségek mellett kell megvalósíthatóaknak lenniük az anyagokat és az alkalmazott reagenseket illetően. A nanofiltráció esetében például a készüléket egyszeri használat után kaparással meg kell tisztítani, és az óránként és felületegységenként elérhető termelékenység a fehérje grammjaiban kifejezve kicsi, következésképpen az ipari alkalmazás kis fehérje-előállítási arány miatt korlátozott.
Végül, a lipidburok nélküli vírusok inaktiválása folyamatosan képezi tárgyát számos tanulmánynak, amelyeknek célja, hogy megmutassa az új módszerek virucid hatékonyságát és az inaktiválás biztonságosságát a kezelt fehéijék lehetséges elváltozásaira tekintettel (lásd Highsmith F. A. et al., Inactivation of lipidenveloped model viruses in normál humán plasma by crosslinked starch-iodine. Transfusion 1994; 34:322-327).
Amint már korábban megállapítottuk, a humán parvovírus (PVH B19) és a hepatitis A vírus az a két fő, lipidburok nélküli vírus, amely a humán plazmába vagy vérszármazékokba átkerül. Ezért egy második inaktiválási lépés kifejlesztésének főként ezen vírusok csökkentésére kell irányulnia.
A humán parvovírus és hepatitisz A vírus átvitelét hemofíliás betegekben mutatták ki kizárólag S/D-vel inaktivált AHF adagolása révén írtak le olyan humán parvovírussal történő fertőzést is, ahol pasztörizálással inaktivált AHF-t infúzió formájában adagoltak. Azt is kimutatták, hogy a fehérjék stabilizált közegben, nagy koncentráció mellett történő pasztörizálása megvédi a vírusokat is, és a fertőzőképesség csökkenése jelentéktelen a PVH B19 és a HAV vírusokat illetően.
Nemrégiben publikáltak néhány olyan esetet, ahol a terhes nőnek adagolt antitrombin III készítmények hatására komplikáció lépett fel a magzatban (lásd Mosquet N. et. al.: Atteinte hématologique sévere lors d’une infection á parvovírus B19; Des injections d” antithrombine III sontelles á origine de la contamination? Therapie 1994; 49:459-76). Ezek az esetek a humán parvovírussal való szennyezettségnek tudhatok be, ami önmagában ok arra, hogy a kezelés ellenjavallt legyen, tekintettel a kockázat és a jótékony hatás arányára és az alternatív kezelés lehetőségére.
A jelen találmány fő tárgya lipidburokkal rendelkező vagy azzal nem rendelkező vírusok hatásos inaktiválása biológiai folyadékokból származó fehérjéket tartalmazó közegben egy rendkívüli lúgos pH-η történő virucid kezeléssel olyan körülmények között, ahol a stabilizálószer által nyújtott védelem következtében a fehérjék nem denaturálódnak.
A jelen bevezetés egyrészt olyan speciális inaktiváló módszereket sorol fel, mint például a kettős inaktiválási lépés a vírusátviteli veszély csökkentésére. Ez a bevezetés megmutatja az ideális inaktiválási módszerekkel szemben támasztott követelményeket is, és hogy egy ilyen módszer továbbra is a szakterület célja és a vizsgálatok tárgya. Ez a bevezetés egy specifikus ellenjavallati esetet is leír a vérszármazékok (antitrombin III) adagolására, amennyiben az előállítási eljárás lipidburok nélküli vírusok csökkentésére irányuló lépéseket nem tartalmaz.
A technika jelenlegi állása nem valósítja meg a találmány alapvető célkitűzéseit a lipidburok nélküli vírusok hatékony, alacsony költséggel történő eliminálását illetően, főként olyan termékek esetében, ahol a végtermékben (antitrombin III) rezisztens vírusok (humán parvovírus) jelenlétére lehet gyanakodni, emiatt ezen termékek terápiás alkalmazása ellenjavallt (lásd Mosquet N. et al.: Atteinte hématologique sévere lors d’une infection á parvovírus B19: Des injections d’antithrombine III sont-elles á origine de la contamination? Therapie 1994; 49:459-76).
Hasonlóképpen nem írtak le vagy dokumentáltak extrém (lúgos) pH-η végzett olyan inaktiválási eljárást, amelyet közvetlenül terápiás célra használandó fehérjék esetében szándékoznak alkalmazni. Az egyetlen ismert dolog, hogy a lúgok potenciálisan képesek néhány vírus elpusztítására, úgyhogy ezt a módszert kromatográfiás oszlopok, ultraszűrők és más, ismételten használható berendezések fertőtlenítési eljárásaként alkalmazzák a sarzsok keresztszennyeződésének elkerülésére, de a módszert soha nem használták a gyógyászatban intravénásán alkalmazott plazmafehérjék virális inaktiválására.
Az extrém alkalikus pH-η történő inaktiválás lehetősége a fehérje stabilitásán és a találmány szerinti eljárással kapott védőhatáson alapul. Ez a módszer, amelynek alapját egy fehérjékre gyakorolt hatásmechanizmus képezi, teljes mértékben új, és amint már kifejtettük, olyan indikációi vannak, amelyeket jelenleg a leírt módszerek egyike sem fed le.
Az egyetlen korábbi publikáció a gamma-globulin virális inaktiválásának alkalmazására vonatkozik mérsékelten savas (4-es) pH-η, és ezért különbözik a jelen találmány szerinti eljárástól, 37 °C-on végzett inkubálással, és a proteolitikus enzimek (pepszin) szinergetikus hatása néhány vírus hatásos csökkentését eredményezi (lásd Kempf C. et. al.: Vírus inactivation during production of intravenous immunoglobulin. Transfúsion 1991; 31 (5):423-27).
A labilis vírusok fertőzőképessége hatásosan csökkenthető más körülmények között, mérsékelten savas (4,25-ös) pH-η és a végtermékekben (gamma-globulin és maltóz) 21 °C-on 20 napos inkubálással, azonban a lipidburok nélküli vírusok körében nincs szignifikáns csökkenés.
A találmány fő tárgya azonban (lipidburok nélküli vírusok inaktiválása) nem volt kielégítően elérhető napjainkig, és az ennek a célnak az eléréséhez használt eljárás (stabilizátor jelenlétében extrém lúgos pH-η végzett inaktiválás), amelyet erre a célra eddig még nem használtak, szintén abszolút újdonságot kölcsönöz a találmány egészének.
A találmány a közeg extrém pH-körülmények között kifejtett, lipidburokkal rendelkező vagy a nélküli vírusokat inaktiváló képességén alapul.
Mérsékelten savas közegben és stabil savfehérjék (gamma-globulin) jelenlétében végzett virális inaktiválásáról, amelyhez ásványi savat (hidrogén-kloridot)
HU 221 239 BI vagy gyenge savakat (citromsav, ecetsav stb.) használtak, már beszámoltak. Amint írják, szignifikáns inaktiválást kaptak az érzékenyebb, főként a lipidburokkal rendelkező vírusok (a humán herpesz vírus és az egér leukémia vírus X-I) esetében. Azonban ahhoz, hogy 4es pH-η szignifikánsan csökkentsék a vírusokat, a fehérje oldatot környezeti feletti hőmérsékleten (37 °C-on) kell inkubálni, így teljesen inaktiválják a lipidburokkal rendelkező modellvírusokat, kivéve a vezikuláris stomatitis vírust (VSV), amely továbbra is fertőző marad.
A hidegben (4 °C) történő inaktiválás a legtöbb vírus esetében hatástalan, úgyhogy a 37 °C-on végzett inkubálás szinergetikusan együtt hat a savas pH-val (lásd Kempf C. et. al.: Vírus inactivation during production of intravenous immunoglobulin. Transfusion 1991; 31 (5):423-27).
A vírusok kész gamma-globulin-fiolában, 4,25-ös pH-η (maltóz segédanyaggal együtt), 21 °C-on 20 napon át történő inaktiválását is leírták már, és az eredmény azt mutatja, hogy a kisebb fizikai és kémiai ellenállással rendelkező vírusok teljesen inaktiválódnak, de az ellenállóbb, lipidburok nélküli vírusok [simian vírus-40 (SV-40); Reovirus 3) nem.
Bizonyos vírusok, így a poliovírus vagy a hepatitisz A vírus savas közeggel szembeni ellenálló képessége ismert és publikálásra került [lásd Roberts Peter L. et al.: Removal and Inactivation of Enveloped and Nonenveloped Viruses during the Purification of a HighPurity FIX by Metál Chelate Affinity Chromatography. Vox. Sang. 1994; 67(1):69-71]. Ezekben az esetekben a fertőzőképesség csökkenése gyakorlatilag nulla.
A bázikus közegben történő inaktiválásra vonatkozóan van egy leírás a technika állásában, amely szerint készülékek (oszlop, ultraszűrő stb.) alkalikus oldatokkal végzett fertőtlenítése virucid hatású, így kerülik el a gyártott sarzsok keresztszennyeződését (lásd Grun Janet B. et al.: Viral Removal/Inactivation by Purification of Biopharma-ceuticals. BioPharm 1992; 5(9):22-30], de a módszert soha sem alkalmazták terápiás felhasználásra szánt fehérjék speciális virális inaktiválására extrém pH-körülmények között.
A feltalálók által végzett kutatás megmutatta az alkáli-hidroxidok extrém pH-η, fehérjék vagy más stabilizátorok vagy segédanyagok távollétében kifejtett virucid hatását. A lipidburokkal rendelkező vagy nem rendelkező vírusokkal kapott eredmények nagy virucid hatékonyságot mutatnak mindkét vírustípussal szemben. Ennek megfelelően a polio A vírus (a hepatitisz A vírus modellje) és a nyúl parvovírus (a humán homológjának modellje) egyaránt inaktiválható.
A találmány szerinti, extrém lúgos pH-t alkalmazó módszer emellett a pasztörizálással történő inaktiválástól eltérő hatásmechanizmuson alapul, úgyhogy a módszerek feltehetően összeadhatók és kiegészíthetik egymást.
A vírusok inaktiválásának lehetősége fehérjék jelenlétében, extrém pH-η, nagymértékben a fehérjéknek a közegben mutatott stabilitásától függ. Néhány fehérje nagyobb szerkezeti stabilitással rendelkezik a bázikus pH-tartományban, úgyhogy a találmány szerinti eljárás főként ezen mérsékelten stabil fehérjék ellen irányul, ilyenek a szerin-proteáz-gátlók és rokon enzimek, amelyek közül mi az antitrombint (ATIII), egy al-proteázgátlót (αΐ-antitripszin) és a humán albumint emeljük ki (amely bizonyos szerkezeti hasonlóságot mutat a szerin-proteáz gátlók molekulájához).
Az extrém lúgos pH-η végzett inaktiváláshoz a fehérjéket stabilizálni kell a denaturálódás elkerülésére.
Általában különféle vegyületeket írtak le fehérjék stabilizálására, a szokásos cél a molekuláris integritás megőrzése a pasztörizálással vagy hőkezeléssel végzett inaktiválási lépések alatt, és a végtermékben a biológiai aktivitás megtartása a folyékony vagy fagyasztva szárított készítményekben. Az alkalmazott nagyszámú vegyület a következő fő csoportokba sorolható:
- cukrok, cukoralkoholok és poliolok (szacharóz, maltóz, mannit, szorbit, dextrinek, polietilénglikol stb.),
- aminosavak (lizin, glicin, hisztidin, arginin stb.),
- fehérjék (albumin) és
- szerves savak vagy azok sói (kaprilát, citrát, EDTA stb.).
Szervetlen sókat is használtak segédanyagként fiziológiai koncentrációkban, az egyetlen cél a megfelelő izotonicitás és oldhatóság elérése (főként fagyasztva szárított készítmények esetében), a fő anyag nátriumklorid, nátriumfoszfát stb. volt.
Fehérjék virális inaktiválás céljából, extrém pH-n történő stabilizálásának specifikus esetét a jelen találmányt megelőzően még nem érintették. Ezért feltételezzük, hogy a korábban leírt általános módszerek alkalmazhatók.
Azonban ezek a módszerek nem védik kielégítően az inaktiválandó fehérjéket.
A feltalálók által végzett kutatás eredményeként lehetővé vált a fehérjék stabilizálása olyan külső ágensek bevezetése nélkül, amely ágensek potenciálisan toxikusak vagy amelyeket nehéz eltávolítani, a cél inaktiválás létrehozása lúgos pH-n.
A fehérjék extrém pH-η történő stabilizálásának elmélete a fehérjék hipotetikus hidrofób kölcsönhatásán és a molekulaméret variációján (összehajtogatódás) alapul, ami az oldatban jelen levő nagy sókoncentrációk reverzibilis hatásának tudható be. Ez a molekuláris összehúzódás segíti a biológiailag aktív régiók megőrzését a töltések taszítása következtében (oldószer), ami a víztaszítóbb zónák nagyobb expozíciójának az eredménye.
A stabilizálószerek bármilyen típusú szervetlen ionok, különösen olyan poliionok (például ammóniumszulfát, nátrium-klorid stb.) lehetnek, amelyek képesek a közeget elegendő ionos töltéssel ellátni.
Másrészt a vírusok stabilizálásának a lehetősége akkor, amikor az ionerősség nő, egyre csekélyebb, mivel a külső burkot merev fehérje vagy lipoprotein szerkezetek alkotják, és ezért alig van alkalom arra, hogy önmagát összehúzódás és hidrofobicitás révén megvédje.
A találmány vírusok inaktiválására alkalmas módszert ír le általában extrém lúgos pH-η, olyan fehérjeoldatokban, amelyek stabilak terápiás alkalmazás céljára
HU 221 239 Β1 és humán vagy állati eredetűek vagy rekombináns DNS-technológiával készültek.
Általában az inaktiváló kezelést a termelési eljárás végső fázisában alkalmazzuk, hogy az előző lépések maradék szennyeződésének lehetséges rizikóját elkerüljük. Szintén előnyös, ha megfelelő tisztaságú frakciókat használunk a szükségtelen kicsapódás vagy a kezelés utáni elválasztás elkerülésére.
A következő, a találmány alkalmazásának nem korlátozó példái olyan fehérjékre utalnak, mint az antitrombin (ATIII), α-proteináz-gátlók (α-Pl) vagy szeroalbumin.
A kiindulási szolubilizált fehérjeoldatot vagy frakciót Cohn, Cohn-Oncley, Kistler-Nischmann ffakcionálással etanollal, hidegen, vagy polietilénglikollal, oktánsavval, ioncserélő vagy affinitáskromatográfiás módszerrel vagy bármely más eljárással kaphatjuk, amely az extrém lúgos pH-η végzett inaktiválási kezelés céljára elegendően tiszta frakciókat eredményez.
Az első lépés a fehérje szolubilizálása és előnyösen a segédanyagok és sók csökkentése, ha jelentős mennyiségben vannak jelen. A fehérjeoldatban a denaturáló ágensek (például etanol) lehetséges jelenlétét is szükséges megszüntetni vagy jelentősen csökkenteni. Erre a célra alkalmas módszer a molekulakizáró gyanták (kereskedelmi termékek: Sephadex, Sepharose, Sephacryl, Ultragel, Sephacel stb.) alkalmazásával végzett gélszűrés vagy előnyösen a fehérje méretétől függően 1-50 kD molekuláris pórusméretű (Pellicon modell, Millipore) ultraszűrő membránon vízzel szembeni diaszűrés. Egy alternatív módszer a hagyományos dialízis nitrocellulóz, cellofán vagy kuprofán membránokkal (gyártmány: I DEL M-ll) addig végezve, amíg a dializált oldat előnyösen 300 mOsm/kg alatti ozmolalitású, noha ez az érték nem meghatározó, ha a fehéijeoldat ionerősségének az értékét levonjuk a stabilizátor szükséges, hozzáadandó mennyiségéből.
Az oldatot azután injekciós vízzel 25% és 0,001% közötti, előnyösen 5% és 0,1% közötti fehérjekoncentrációig hígítjuk (a szóban forgó fehérje oldhatóságától függően), az inaktiválandó fehérjétől függően.
Az oldatot a fehérjétől függően 0 és 45 °C közötti, előnyösen 2 és 4 °C közötti hőmérsékletre állítjuk.
Egy semleges vagy nemsemleges ionos sóból (alkálifémek vagy az ammóniumion kloridjából vagy szulfátjából vagy karbonsavak alkálisóiból stb.) 0,005 móltól és a telítéshez szükséges mennyiség közötti arányban adunk az oldathoz, előnyösen 1 -4 mól nátrium-kloridot adunk az aktuális oldat 1 kg-jára vonatkoztatva egyedül, vagy az oldat megfelelő ionerősségét biztosító más sókkal keverve. A termékből készült végső készítmény részét képező segédanyagokat vagy stabilizálószereket egyidejűleg, szükséges esetben más speciális anyagokkal együtt adagolhatjuk, mindig azzal a feltétellel, hogy az eljárás alatt az extrém pH-nak ellenállnak.
Amikor a fehérjeoldatot stabilizáltuk, egy alkálifémhidroxid-oldatot (amely előnyösen 0,001 M és a telített oldat közötti koncentrációjú) adunk hozzá keverés közben, vagy bármilyen más alkalikus oldatot, amely kompatibilis a fehérjével és a közeggel, és amely megfelelő hidroxilion koncentrációt biztosít és az oldat pH-ját 10,0 és 14,0, előnyösen 12 és 13 közötti értékre állítja be. Az oldat hőmérsékletét 0 és 45 °C között, előnyösen 2 és 4 °C között tartjuk.
A pH beállítása bármely kereskedelemben kapható pH-mérővel (Crison gyártmány, Hanna) elvégezhető, de a készülék pontos beállítását előzőleg 10,00-es pHjú borátpufferrel el kell végezni.
Az expozíciós idő a kezelés alatt a lehető legrövidebb, kevesebb, mint 100 óra vagy 100 óra, és nagyobb, mint 1 másodperces inkubálási idő, előnyösen 1 és 60 perc közötti, ami megfelel egy extrém pH-η és rövid expozíciós idővel végzett kezelésnek.
A pontos inkubálási idő után az oldat pH-ját azonnal 10 alatti értékre állítjuk, előnyösen hidrogén-klorid vagy más erős vagy gyenge ásványi vagy szerves sav hozzáadásával, vagy bármely más olyan rendszerrel, amely képes a pH értékét közel semlegesre vagy a kívánt értékre csökkenteni.
A fehérjeoldatot azután dializálhatjuk és a végső készítményhez beállítjuk, előnyösen sterilizált eldobható dialízistöltetek (1 DEC M-ll vagy ekvivalense) vagy ultraszűrő, előnyösen 1-50 kD-os (Pellicon modell, Millipore) membránok használatával, a kívánt végső készítményhez megfelelő összetételű, elegendő dialízisoldat alkalmazásával, az oldat ionerősségének megfelelő módon történő csökkentésére.
A beállított oldatot 0,22 pm pórusméretű membránon át történő szűréssel sterilezhetjük, és azután fiolákba tölthetjük folyékony formában történő kiszereléshez, vagy, amennyiben alkalmas, fagyasztva szárítjuk.
1. példa
A lúgos kezelés vírusinaktiváló hatékonyságát úgy vizsgáltuk, hogy a víruskoncentrátum 1 ml-ét 19 ml 0,1 N nátrium-hidroxid-oldatba oltottuk 4 °C-on, a pH értéke 12,5 és 13 közötti.
Az 1. táblázatban megadott időkben mintákat vettünk sejttenyésztésre, savval végzett semlegesítést követően.
A tanulmányozott vírusok a marhaherpeszvírus vagy BHV (lipidburokkal rendelkező vírus) és nyúl parvovírus vagy CPV és 2 típusú humán poliovírus (mindkét vírus lipidburok nélküli) voltak. A számokat a tenyésztett sejtekben a citopátiás hatás révén határoztuk meg (TCID50).
Az eredmények az 1. táblázatban láthatók.
1. táblázat
Lipidburokkal rendelkező vagy nem rendelkező vírusok inaktiválása nátrium-hidroxiddal
| A vírusok száma (teljes egységek) | |||
| Idő (perc) | CPV | BHV | POLIO |
| Inokulum | 2,0x10’ | 6,9x10’ | 7,1 xlO8 |
| 0 | 1,9x105 | 1,2 xlO2 | 3,5 xlO4 |
| 10 | 2,4x105 | 1,2 xlO2 | 2,7x105 |
HU 221 239 Bl
| A vírusok száma (teljes egységek) | |||
| Idő (perc) | CPV | BHV | POLIO |
| 20 | 9,6xl02 | 4,5x10' | 2,0 xlO4 |
| 60 | 5,0 χ 10’ | 4,5x10' | 2,1 xlO3 |
| Inaktiválás: | |||
| redukciós faktor (lóg) | 5,6 | 8,2 | 5,5 |
A lúgos inaktiváló kezelés a vírusok számának jelentős csökkenését (> 4 lóg) eredményezi a vizsgált három vírus esetében, és ezért speciális inaktiválási lépésnek tekinthető.
2. példa
Az inaktiválási lépés virális követését a találmány szerinti módszerrel végeztük. Ezt két különböző vírus, így a marhaherpeszvírus és a nyúl parvovírus esetében vizsgáltuk.
Az inaktiválandó fehéije készre tisztított antitrombin III (sarzsszám 5139), amelynek fajlagos aktivitása 7 IU/mg fehérje, és fehérjekoncentrációja 0,8% volt. 45,1 g antitrombin III oldatot vettünk mindegyik vizsgálni kívánt vírushoz, és 8,7 g nátrium-klorid stabilizátort, 0,81 g trinátrium-citrát-dihidrátot és 1,06 g mannitot adtunk hozzá segédanyagként, és a megadott sorrendben. Minden adagolás után az egyesített terméket szolubilizáltuk. Az oldatot azután víz/jég elegyben 1,0+0,5 °C hőmérsékletű fürdőben hűtöttük, miközben folyamatosan mindegyik vírusból 4,5 g inokulumot adtunk az elegyhez, és keverés után egy 10 g-os mintát vettünk. 1,75 ml 2N nátrium-hidroxid-oldatot adtunk a mintához, úgyhogy az oldat pH-ja 12,50+0,05 volt. Ilyen körülmények között végzett 1 órás kezelés után mindegyik vizsgálati elegyet semlegesítettük. Ez 1,55 ml 2N sósav hozzáadásával történt, és ellenőriztük, hogy a pH 6,7 és 6,9 között legyen.
Mindegyik vizsgálati elegy utolsó mintáját a megfelelő sejtekben tenyésztettük, hogy meghatározzuk a fertőzőképességnek a jelen módszerrel kapott csökkenését. A vírusok számát citopatogenicitás-meghatározással TCID50 állapítottuk meg.
Az eredményeket a 2. táblázatban adjuk meg.
2. táblázat
Lipidburokkal rendelkező vagy nem rendelkező vírusok inaktiválása tömény, tisztított antitrombin III-ban
| A vírusok száma (teljes egységek) | ||
| Minta | BHV | CPV |
| Inokulum | 1,4x10’ | 2,4 xlO7 |
| Töltőanyag (kiindulási anyag) | 2,2 xlO8 | 4,2 xlO7 |
| Idő=60 perc | <1,5x10’ | 8,0 χ 102 |
| Inaktiválás: | ||
| redukciós faktor (lóg) | >5,2 | 4,7 |
A vírusok redukciójára kapott értékek szignifikánsak (> 4 lóg) a tanulmányozott két vírusra vonatkozóan. A nyúl parvovírus speciális esetében a redukció szintje gyakorlatilag azonos a fehérje és stabilizátorok távollétében (1. példa) tapasztalttal, a maradék fertőzőképesség a mérhetőségi határ alatt van (8,0 χ 102 egység).
3. példa
Az extrém pH-n végzett kezeléssel inaktivált termékjellemzése céljából a találmány szerinti eljárást addig végeztük, amíg a végső fagyasztva szárított terméket (antitrombin III) megkaptuk.
85,3 g antitrombin III koncentrátumból indultunk ki, amelyet kétszer tisztítottunk affinitási kromatográfiás úton (0,5/1), és amelynek optikai sűrűsége (Α2Χ0 nm) 4,20 és aktivitása 43,2 IU/ml volt, nátrium-kloriddal stabilizáltunk 3 mól/liter aktuális oldat mennyiség hozzáadásával.
Az oldatot azután megfelelő segédanyagokkal állítottuk be a kiindulási oldat literére vonatkoztatott 20 g trinátrium-citrát-dihidráttal és mannittal. Az oldatot azután víz/jég fürdőben hűtöttük, és a folyamat alatt 3 + 1 °C-on tartottuk. Ezt követően 2N nátrium-hidroxid-oldatot adtunk hozzá 12,50+0,02 pH-érték eléréséig (Crison pH-mérő, 10,0-es pH-jú borátpufferrel kalibrálva). 1 órás inkubálás után az oldathoz közel semleges pH-ig 2N sósavat adtunk.
Az inaktivált vírusoldatot konstans térfogatig diaszűrésnek vetettük alá egy 10 kD molekuláris mérethatárú aszeptikus ultraszűrő töltetben (model TFF PrepScale, 2,5 négyzetláb, Millipore), összesen öt térfogat dialízis pufferoldat alkalmazásával, amely nátriumkloridot, nátrium-citrátot és mannitot tartalmazott. A keletkezett oldatot a szükséges erőre állítottuk, 0,22 pmes membránon át sterilre szűrtük, és fiolákba töltöttük, amelyeket azután fagyasztva szárítottunk.
A végső kész terméket abból a célból jellemeztük, hogy megmutassunk bármilyen lehetséges molekuláris változást.
A stabilizátor (nátrium-klorid) által a lúgos kezelés alatt nyújtott védelmet úgy határoztuk meg, hogy mértük az aktivitás és a fajlagos aktivitás visszanyerését az inaktiválási lépés alatt. A kapott értékeket a 3. táblázatban mutatjuk meg.
3. táblázat
Az ATIII aktivitásának és specifikus aktivitásának visszanyerése az extrém (12,5-ös) pH-η végzett inaktiválási lépés alatt
| Minta | Stabilizált ATIII oldat | ATIII oldat inaktiválás után (1 óra 3±1 °C-on) |
| ATIII aktivitás (IU/ml) | 43,1 | 39,3 |
| Optikai sűrűség (A280 nm) | 4,20 | 3,95 |
| ATIII egység (IU) | 3332 | 3143 |
| Az aktivitás %-os visszanyerése | 100 | 97,0 |
| Fajlagos aktivitás (IU/mg) | 8,1 | 7,9 |
HU 221 239 Bl
A kész terméket a működőképességét bizonyító vizsgálatok alapján jellemeztük:
Heparin affinitás: kizárva (nincs affinitás) =3% (Heparin gyanta eluált =90%
Sepharose 6FF)
Immunelektroforézis heparinnal keresztezve: lassú fonnák (kis affinitás) =4,2%
Molekuláris megoszlás: aggregáció (polimerek) =3,6% (HPLC)
Elektroforézis (cellulóz-acetát/amid fekete): a2 sáv 0 99,6%
Fajlagos aktivitás: IU/mg összes fehérje=7,9 (*) Molekulatömegek: SDS-PAGE=58 500 (egyetlen sáv)
Redukáló körülmények =68 500 (egyetlen sáv) (2-ME) (*) Izoelektro-fókusz (izoelektromos pont) =4,98 fő sáv
4,90 másodlagos sáv (*) Az eredmények azonosak voltak a kész fiolában tisztított ATIII-ra vonatkozóan a találmány szerinti inaktiváló kezelést követően és a kezelés elhagyása esetén is.
A következő 4. táblázat a fagyasztva szárított an- stabilitását mutatja ugyanazon sarzson belül, inaktivátitrombin Ill-ból vízzel készült oldatok összehasonlító lássál vagy inaktiválás nélkül:
4. táblázat
ATM összehasonlító stabilitása oldatban, 25 °C-on
| Termék | A napok száma 25 °C-on | ||||
| 0 | 5 | 15 | 30 | ||
| Inaktivált | Aktivitás (IU/ml) | 17,3 | 17,4 | 14,4 | 11,4 |
| ATM | Kezdeti % | 100 | 101 | 83 | 66 |
| Nem-inaktivált | Aktivitás (IU/ml) | 18 | 20,9 | 11,4 | 8,2 |
| ATM | Kezdeti % | 100 | 116 | 63 | 46 |
Végső általános értékelésként azt mondhatjuk, hogy minden vizsgálat a fehérjemolekula szerkezeti vagy funkcionális változásának hiányát mutatta. 40
4. példa
A nátrium-klorid és más vegyületek védő hatását a fenti stabilizátorok különböző koncentrációival végzett inaktiváló kezelések segítségével mutattuk meg an- 45 titrombin III jelenlétében, oly módon, hogy meghatároztuk a biológiai aktivitás visszanyerését (kromogén szubsztrát módszer).
5,00 g-os frakciókat különítettünk el egyetlen sarzsból származó (száma 305690) tisztított an- 50 titrombin III oldatból, és növeltük a stabilizátorok nátrium-klorid, nátrium-citrát és mannit - mennyiségét, amint az az 5. táblázatban látható. A stabilizált oldatot víz/jég fürdőben 2 és 4 °C közötti hőmérsékletre hűtöttük, majd 2N nátrium-hidroxid-oldatot adtunk hozzá 12,50±0,05 pH-érték eléréséig. Ilyen körülmények között a mintákat 1 órán át inkubáltuk, majd 2N sósavval 7,0±0,2 pH-értékig semlegesítettük. A mintákban az antitrombin III visszanyert aktivitását az inaktiváló kezelés előtt és után is meghatároztuk.
A visszanyerés eredményeit az 5. táblázatban foglaltuk össze.
5. táblázat
ATM aktivitás visszanyerése a 12,5-es pH-η 1 órán át végzett inaktiváló kezelés alatt
| Stabil izátor | Az ATIII oldathoz adott stabilizátor (g/i) | ATIII visszanyerése (%) |
| Nátrium-klorid | 5,85 | 15,5 |
| Nátrium-klorid | 29,3 | 21,6 |
| Nátrium-klorid | 87,8 | 36,7 |
| Nátrium-klorid | 175,5 | 94,4 |
| Nátrium-citrát | 20 | 33,8 |
| Nátrium-citrát | 50 | 35,4 |
| Nátrium-citrát | 100 | 42,6 |
| Nátrium-citrát | 190 | 52,0 |
| Mannitt | 20 | 22,6 |
| Mannit | 50 | 27,6 |
HU 221 239 Β1
| Stabilizátor | Az ATIII oldathoz adott stabilizátor (g/i) | ATIII visszanyerése (%) |
| Mannit | 100 | 38,1 |
| Mannit | 200 | 40,2 |
| Nátrium-klorid/nátrium- citrát | 175,5/20,0 | 97,6 |
| Nátrium-klorid/nátrium- citrát | 175,5/50,0 | 98,2 |
| Nátrium-klorid/nátrium- citrát | 175,5/100,0 | 96,5 |
| Nátrium-klorid/nátrium- citrát | 175,5/190,0 | 96,3 |
| Nátrium-klorid/nátrium- citrát | 175,5/250,0 | 95,4 |
| Nátrium-klorid/nátrium- citrát | 175,5/300,0 | 97,4 |
Az eredmények azt mutatják, hogy a nátrium-kloridnak vagy kisebb mennyiségű más sókkal, így nátriumcitráttal alkotott keverékeinek a védőhatása megfelelő stabilitást ad a fehérjének. Az optimális stabilizáló összetétel az lesz, amely megőrzi az ATIII aktivitását és minimális védőhatást fejt ki a vírusokra. Ezt a stabilizátorok lehető legkisebb olyan koncentrációjával érjük el, amely nem védi a vírust (nátrium-klorid). Az optimális összetétel 175,5 g nátrium-kloridnak (vagy 3 mól sónak) 1 liter aktuális oldathoz való hozzáadásakor vagy még inkább a 20,0 g trinátrium-citrát-dihidrátot (0,067 mól/liter aktuális oldat) tartalmazó aktuális oldathoz való hozzáadásakor kapottnak felel meg.
5. példa
Ez a példa azt mutatja meg, hogy ugyanaz a módszer más, a szerin-proteáz-enzimek gátlói által alkotott csoportba tartozó fehéijék, így az al antitripszin (vagy al Pl) inaktiválására is használható.
Ebből a célból a nátrium-klorid védő hatását vizsgáltuk a proteázgátlóra (al Pl) vonatkozóan, oly módon, hogy az anti-elasztáz aktivitásának visszanyerését tanulmányoztuk a stabilizátor különféle koncentrációinak jelenlétében.
A kiindulási tisztított al Pl oldat (fajlagos aktivitás 1,05 IU/ml: A280 nm) antielasztáz aktivitása 8,8 IU/ml. Ebből az oldatból 20,0 ml-es frakciókat vettünk ki, és ezeket növekvő mennyiségű nátrium-klorid hozzáadásával stabilizáltuk. Oldódás után az anyagot víz/jég fürdőben 2 és 4 °C közötti hőmérsékletre hűtöttük, és a vírusokat 2N nátrium-hidroxid-oldat 12,50±0,05 pH-ig történő adagolásával inaktiváltuk. 1 órás ilyen körülmények közötti inkubálás után a mintákat 2N sósav közvetlen adagolásával semlegesítettük. Az inaktivált frakciókból mintákat vettünk, és antielasztáz aktivitásukat, fajlagos aktivitásukat és visszanyerésüket meghatároztuk.
Az eredmények a következő, 6. táblázatban láthatók.
6. táblázat al Pl virális inaktiválása 1 órán át 12,5-es pH-n, 2-4 °C-on
| A hozzáadott NaCl mennyisége (g/Iiter) (mól/liter) | Antielasztáz hatás (IU/ml) | Fajlagos aktivitás (IU/ml: Α28θ) | %-os vissza- nyerés a-PI (anti- clasz- táz) | |
| 0 | 0 | 2,12 | 0,25 | 24 |
| 29,3 | 0,5 | 2,50 | 0,29 | 28 |
| 58,5 | 1 | 2,66 | 0,34 | 32 |
| 117 | 2 | 9,13 | 1,17 | 112 |
| 234 | 4 | 8,21 | 1,10 | 105 |
A nátrium-klorid jelentős védő hatással rendelkezik (100%-nál nagyobb visszanyerési és 1,5 IU/ml :A280nál nagyobb fajlagos aktivitási értékek) 2 és 4 mól/liter koncentrációknál.
6. példa
Más, a szerin-proteáz-enzimek gátlóiéhoz hasonló molekuláris szerkezetű fehérjéket vizsgáltunk. Az albumin ezen fehérjecsoport egyik nem korlátozó példája.
Az eljárás abból állt, hogy intravénás injektálásra alkalmas tisztított stabilizált humán albumint lúgos inaktiváló kezelésnek vetettünk alá. Két, 2, illetve 5% fehérjét tartalmazó oldatot készítettünk ugyanabból az 5%-ra beállított albumin-oldatból (kaprilát és triptofanát) fiziológiás (0,9%-os) sóoldattal történő hígítással. A 2%-os oldatot két részre osztottuk, és 3 mól/liter nátrium-kloridot adtunk az egyikhez. Mindegyik oldatot víz/jég fürdőben 2-4 °C-ra hűtöttük. 2N nátriumhidroxid-oldat adagolásával az oldatok pH-ját 12,50±0,05 értékre állítottuk, az oldatokat 1 órán át ilyen körülmények között inkubáltuk, és azután 2N sósavval pH 7,0±0,2 értékre semlegesítettük.
Ezután a legnagyobb sókoncentrációjú oldatot Cuprofan-töltetben (1 DEL M-II) stabilizátorokat (kaprilátot és triptofanátot) tartalmazó oldatokkal szemben dializáltuk az albumin-oldatéval azonos koncentrációnál, az ionerősséget elegendő mértékben, a fiziológiás értékre csökkentve. Az ionerősség beállítása után az oldatokat ultraszűréssel (TFF PrepScale, Millipore), 10 kD-os membrán felhasználásával 5% fehérjetartalomig töményítettük. Mindegyik meghatározási mintában a stabilizátorok, a fehérje (5%) koncentrációját, az izotonicitást (0,15 M nátrium-klorid) és a pH-értéket (7,0±0,2) ismételten beállítottuk. Az utolsó lépés egy 0,22 pm-es steril membránon (PVDF, Millipore) át, 50 ml-es fiolákba történő szűrés volt, a fiolákat azután 10 órán át 60 ±0,5 °C-on pasztörizáltuk.
Az oldatokból és a kontroliból (amelyet inaktiváló kezelésnek nem vetettünk alá) a vizsgálat minden fehérje- és sókoncentrációjánál vettünk mintákat. A kész termék molekuláris összetételét (molekuláris eloszlás, HPLC) és stabilitását meghatároztuk.
Az eredményeket a 7. táblázatban adjuk meg.
HU 221 239 Bl
7. táblázat
Albumin virális inaktiválása 1 órán át 12,5-es pH-η és 2-4 °C-on
| Albuminkoncentráció (%) | 5 | 2 | kontroll (nem inaktivált) | |
| Nátrium-klorid-koncentráció | ||||
| (g/liter) | 8,8 | 8,8 | 184 | |
| (mól/liter) | 0,15 | 0,15 | 3,15 | |
| Turbiditás (NTU) | 35 | 32 | 17,9 | 9,4 |
| Aggregáció (HPLC) (polimer%) | ||||
| közvetlen | 12,40 | 9,66 | 0 | 14,56 |
| korrigált | 4,71 | 3,86 | 0 | 5,38 |
| Stabilitás meghatározás (1) | ||||
| (NTU) | 10 | 10 | 0,4 | 0 |
(I) Stabilitásvizsgálat: a turbiditás növekedésének meghatározása az albumin-oldat 56 °C-on 50 órán át végzett kezelése után.
7. példa
Meghatároztuk azt a pH-érték-tartományt és expozíciós időt, amelynél a virális inaktiválás lehetséges.
Tisztított antitrombin III oldatát (fajlagos aktivitás >6 IU/mg fehérje) inaktiváltuk különböző pH-értékek, hőmérsékletek és expozíciós idők alkalmazásával, oly módon, hogy a nátrium-kloriddal és -citráttal stabilizált oldatokhoz 2N nátrium-hidroxid-oldatot adtunk. Az oldatokat azután semlegesítettük, és mintákat vettünk azok ATIII-aktivitásának követésére. Az egyes kezelések utáni aktivitás visszanyerését számítással határoztuk meg.
Az eljárás pontos körülményeit és az eredményeket a 8. táblázatban foglaltuk össze.
8. táblázat
Az ATIII aktivitásának visszanyerése különböző pH, inkubációs idő és hőmérsékletek alkalmazásával
| Stabilizátorok | Hozzáadott stabilizátorok (g/1) | Hőmérséklet (°C) | Inkubálási idő (óra) | PH | Az ATIII aktivitás %-os visszanyerése |
| Nátrium-klorid + Nát- rium-citrát | 58,5 + 190,0 | 4 | 20 | 10,0 | 99,7 |
| 11,0 | 91,7 | ||||
| 12,0 | 85,2 | ||||
| 25 | 20 | 10,0 | 100,2 | ||
| 11,0 | 90,3 | ||||
| 12,0 | 27,6 | ||||
| 34,5 + 190,0 | 4 | 20 | 12,0 | 54,8 | |
| 12 | 92,8 | ||||
| 4 | 99,7 | ||||
| 1 | 96,3 | ||||
| 4 | 12,5 | 83,7 | |||
| 1 | 92,0 | ||||
| 1 | 13,0 | 60,2 | |||
| Nátrium-klorid + Nát- rium-citrát + Mannit | 5,0 + 5,2 + 20,0 (izotóniás összetétel) | 4 | 20 | 12,0 | 8,3 |
| 175,5 + 20,0 + 20,0 | 4 | 1 | 13,0 | 88,5 | |
| 204,8 + 20 + 20 | 4 | 1 | 13,0 | 91,6 | |
| 234,0 + 20,0 + 20,0 | 4 | 1 | 13,0 | 90,3 | |
| 175,5 + 17,0 + 20,0 | 4 | 1 | 12,5 | 97,3 | |
| 204,8 + 17,0 + 20,0 | 4 | 1 | 12,5 | 97,4 | |
| 12,66 | 91,8 |
Claims (10)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy a kiindulási fehérjeoldatot védőszerrel stabillá tesszük, a hőmérsékletét szabályozzuk, és alkalikus közegben extrém pH-értéken kezeljük, majd inkubáljuk, sav hozzáadásával semlegesítjük, és a stabilizátorokat dialízissel vagy diaszűréssel eltávolítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy a kiindulási fehérjeanyag előzőleg tisztított és denaturáló anyagoktól mentes.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve hogy a fehérjeanyag kiindulási oldatát 0,001 és 25 tömeg/térfogat % közötti, előnyösen 0,1 és 5 tömeg/térfogat % közötti fehérjekoncentráció eléréséig hígítjuk.
- 4. Az 1 - 3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy a fehérjéket nátrium-klorid vagy más semleges vagy nemsemleges ionos sónak magának vagy nátrium-kloriddal alkotott keverékének a hozzáadásával stabilizáljuk.
- 5. A 4. igénypont szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy nátrium-kloridot vagy más ionos sót 0,005 mól/liter oldat és a telítéshez szükséges mennyiség közötti arányban, előnyösen nátrium-kloridot 1 -4 mól/liter oldat arányban adunk az oldathoz.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy a stabilizált fehérjeoldat hőmérsékletét 0 és 45 °C közötti értékre, előnyösen 2-4 °C-ra szabályozzuk.
- 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy az extrém lúgos közegben végzett kezelés során 0,001 M és telített oldat közötti koncentrációjú alkalikus oldatot adunk a fehérjeoldathoz a 10 és 14 közötti, előnyösen a 12 és 13 közötti pH eléréséig.
- 8. A 7. igénypont szerinti eljárás vírusok inaktiválás ára fehérjékben, azzal jellemezve, hogy az alkalikus oldatként előnyösen egy alkálifém(nátrium-, kálium)-hidroxid vagy elegendő mennyiségű hidroxiliont szabaddá tevő vegyület vizes oldatát alkalmazzuk.
- 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy az inkubálást 1 másodperc és 100 óra közötti, előnyösen 1 perc és 60 perc közötti ideig végezzük.
- 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás vírusok inaktiválására fehérjékben, azzal jellemezve, hogy a kezelést hidrogén-klorid vagy más erős vagy gyenge (ásványi vagy szerves) sav hozzáadásával végzett semlegesítéssel, a pH-érték 10 alá csökkentésével, és az oldat semlegesítésével vagy a pH kívánt értékre történő állításával fejezzük be.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES09502143A ES2099678B1 (es) | 1995-11-03 | 1995-11-03 | Procedimiento para la inactivacion de virus en proteinas. |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9602914D0 HU9602914D0 (en) | 1996-12-30 |
| HUP9602914A2 HUP9602914A2 (en) | 1997-08-28 |
| HUP9602914A3 HUP9602914A3 (en) | 2000-03-28 |
| HU221239B1 true HU221239B1 (en) | 2002-08-28 |
Family
ID=8292048
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9602914A HU221239B1 (en) | 1995-11-03 | 1996-10-21 | Method of inactivating viruses in proteins |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5932468A (hu) |
| EP (1) | EP0771567B1 (hu) |
| JP (1) | JP3024073B2 (hu) |
| AR (1) | AR004224A1 (hu) |
| AT (1) | ATE211928T1 (hu) |
| CZ (1) | CZ292651B6 (hu) |
| DE (1) | DE69618536T2 (hu) |
| ES (2) | ES2099678B1 (hu) |
| HU (1) | HU221239B1 (hu) |
| MX (1) | MX9605278A (hu) |
| SK (1) | SK281404B6 (hu) |
| UY (1) | UY24358A1 (hu) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9900428D0 (en) * | 1999-01-08 | 1999-02-24 | Nat Blood Authority | Virus inactivation process |
| BR0008405B1 (pt) | 1999-02-22 | 2014-04-22 | Baxter Int | Composição de fator viii formulada sem a adição de albumina, uso de uma composição de fator viii, e, método de liofilizar uma formulação farmacêutica aquosa |
| US20090017069A1 (en) * | 2000-06-29 | 2009-01-15 | Lipid Sciences, Inc. | SARS Vaccine Compositions and Methods of Making and Using Them |
| CN100457896C (zh) * | 2005-10-26 | 2009-02-04 | 李法卿 | 灭活生物制品中病毒和去除细菌内毒素的方法 |
| US20100168018A1 (en) | 2008-11-07 | 2010-07-01 | Baxter International Inc. | Factor viii formulations |
| ES2938833T3 (es) * | 2016-03-28 | 2023-04-17 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc | Métodos de inactivación térmica de adenovirus |
| KR101938304B1 (ko) | 2016-05-13 | 2019-04-10 | 연세대학교 산학협력단 | 비대칭형 커프 구조를 갖는 구강 또는 비강 기관 삽관 튜브 |
| WO2018119561A1 (zh) * | 2016-12-26 | 2018-07-05 | 通博国际有限公司 | 可塌陷鼻腔喷射导管 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3941696A (en) * | 1973-12-20 | 1976-03-02 | Baylor College Of Medicine | Sterilization of holding tanks and toilet bowls by quaternary compounds |
| US4055655A (en) * | 1975-07-21 | 1977-10-25 | National Research Laboratories | Complexes of heavy metal ions and polyfunctional organic ligands used as antimicrobial agents |
| JPS53142593A (en) * | 1977-12-12 | 1978-12-12 | Green Cross Corp:The | Stabilization of urokinase by heating |
| JPH0669961B2 (ja) * | 1984-09-25 | 1994-09-07 | 株式会社ミドリ十字 | 免疫グロブリンの加熱処理方法 |
| JPH07121877B2 (ja) * | 1986-05-31 | 1995-12-25 | 株式会社ミドリ十字 | 静注用非化学修飾免疫グロブリンの加熱処理方法 |
| DE3816139A1 (de) * | 1987-10-17 | 1989-04-27 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von paramunitaetsinducern |
| EP0343275B1 (de) * | 1988-05-27 | 1993-02-03 | Centre Regional De Transfusion Sanguine De Lille | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen, virusfreien Antihämophiliefaktors mittels Chromatographie |
| FR2695140B1 (fr) * | 1992-08-06 | 1994-11-04 | Aetsrn | Procédé d'inactivation virale des produits plasmatiques par des fluides supercritiques ou subcritiques. |
| GB9306806D0 (en) * | 1993-04-01 | 1993-05-26 | Unilever Plc | Disinfectant compositions |
| SE9301582D0 (sv) * | 1993-05-07 | 1993-05-07 | Kabi Pharmacia Ab | Purification of plasma proteins |
-
1995
- 1995-11-03 ES ES09502143A patent/ES2099678B1/es not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-10-18 ES ES96500137T patent/ES2170845T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-18 DE DE69618536T patent/DE69618536T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-18 AT AT96500137T patent/ATE211928T1/de active
- 1996-10-18 EP EP96500137A patent/EP0771567B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-21 HU HU9602914A patent/HU221239B1/hu unknown
- 1996-10-23 AR ARP960104859A patent/AR004224A1/es active IP Right Grant
- 1996-10-29 UY UY24358A patent/UY24358A1/es not_active IP Right Cessation
- 1996-10-31 SK SK1407-96A patent/SK281404B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-10-31 MX MX9605278A patent/MX9605278A/es unknown
- 1996-11-01 US US08/742,502 patent/US5932468A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-01 CZ CZ19963215A patent/CZ292651B6/cs unknown
- 1996-11-05 JP JP8292614A patent/JP3024073B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2099678A1 (es) | 1997-05-16 |
| JPH09187273A (ja) | 1997-07-22 |
| ES2099678B1 (es) | 1998-02-16 |
| US5932468A (en) | 1999-08-03 |
| HU9602914D0 (en) | 1996-12-30 |
| DE69618536D1 (de) | 2002-02-21 |
| ES2170845T3 (es) | 2002-08-16 |
| ATE211928T1 (de) | 2002-02-15 |
| MX9605278A (es) | 1997-05-31 |
| UY24358A1 (es) | 1996-11-13 |
| CZ321596A3 (en) | 1997-05-14 |
| HUP9602914A3 (en) | 2000-03-28 |
| SK140796A3 (en) | 1997-07-09 |
| SK281404B6 (sk) | 2001-03-12 |
| CZ292651B6 (cs) | 2003-11-12 |
| HUP9602914A2 (en) | 1997-08-28 |
| JP3024073B2 (ja) | 2000-03-21 |
| AR004224A1 (es) | 1998-11-04 |
| EP0771567B1 (en) | 2002-01-16 |
| DE69618536T2 (de) | 2002-09-12 |
| EP0771567A1 (en) | 1997-05-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1027371B1 (en) | Process for the production of highly viral safe thrombin for forming fibrin glue from a pool of human plasma | |
| JPS6051116A (ja) | 脂質含有ウイルスを含まない蛋白質含有組成物及びその製造方法 | |
| JP2012051895A (ja) | ウイルス不活性化熱処理へ供するための血漿タンパク質の寒冷沈降物を安定化する方法 | |
| Roberts | Virus inactivation by solvent/detergent treatment using Triton X-100 in a high purity factor VIII | |
| Kempf et al. | Pathogen inactivation and removal procedures used in the production of intravenous immunoglobulins | |
| RU2411959C2 (ru) | Способ получения безопасных в вирусном отношении биологических текучих сред | |
| Burnouf | Safety aspects in the manufacturing of plasma-derived coagulation factor concentrates | |
| HU221239B1 (en) | Method of inactivating viruses in proteins | |
| SK8293A3 (en) | Composition for stabilizing bloodplasma during pasteurization and pasteurized plasma solution for therapeutic use | |
| EP0292003B1 (en) | Stabilzation of biological and pharmaceutical products during inactivation of viral and bacterial contaminants | |
| EP2695620B1 (en) | Caprylate viral deactivation | |
| US6465170B2 (en) | Method for depleting viral and molecular pathogens in a biological material | |
| CA2293401C (en) | A method for depleting viral and molecular pathogens in a biological material | |
| JPH0825903B2 (ja) | γ―グロブリン含有水溶液 | |
| AU756017B2 (en) | The process of preparing immunoglobulin for intravenous injection by viruses double-sterilized without adding any protectant | |
| SOUZANGARZADEH et al. | Inactivation of poliovirus type-1 and HSV-1 in human coagulation factor VII concentrate by pasteurization | |
| AU726999B2 (en) | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material | |
| Sofer | Part 3a, Plasma and Plasma Products | |
| MXPA98009535A (en) | Methods for the terminal sterilization of biologi products |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HC9A | Change of name, address |
Owner name: GRIFOLS, S.A., ES Free format text: FORMER OWNER(S): GRUPO GRIFOLS, S.A., ES; GRIFOLS, S.A., ES; PROBITAS PHARMA, S.A., ES |