HU214884B - Vérlemezke membrán mikrorészecskék, ezeket tartalmazó gyógyászati és diagnosztikai készítmények és eljárás a mikrórészecskék és a készítmények előállítására - Google Patents
Vérlemezke membrán mikrorészecskék, ezeket tartalmazó gyógyászati és diagnosztikai készítmények és eljárás a mikrórészecskék és a készítmények előállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU214884B HU214884B HU374/90A HU337490A HU214884B HU 214884 B HU214884 B HU 214884B HU 374/90 A HU374/90 A HU 374/90A HU 337490 A HU337490 A HU 337490A HU 214884 B HU214884 B HU 214884B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- platelet
- platelets
- platelet membrane
- composition
- membrane fragment
- Prior art date
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims abstract description 84
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 title claims abstract description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 claims description 266
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 39
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 17
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 claims description 15
- 101710149643 Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 claims description 15
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 7
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 6
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 4
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000000527 sonication Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 13
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 abstract 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 abstract 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 abstract 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 40
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 38
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 38
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 31
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 230000003582 thrombocytopenic effect Effects 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 12
- 108010000020 Platelet Factor 3 Proteins 0.000 description 11
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 8
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 8
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 206010060935 Alloimmunisation Diseases 0.000 description 3
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N Doxorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 3
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 229960002918 doxorubicin hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003634 thrombocyte concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000006390 HLA-B Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710101148 Probable 6-oxopurine nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 description 2
- 102000030764 Purine-nucleoside phosphorylase Human genes 0.000 description 2
- 241000271897 Viperidae Species 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940035756 doxorubicin injection Drugs 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000002821 viper venom Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- HIYAVKIYRIFSCZ-CVXKHCKVSA-N Calcimycin Chemical compound CC([C@H]1OC2([C@@H](C[C@H]1C)C)O[C@H]([C@H](CC2)C)CC=1OC2=CC=C(C(=C2N=1)C(O)=O)NC)C(=O)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-CVXKHCKVSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 1
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002339 anti-haemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 1
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N calcium ionophore A23187 Natural products N=1C2=C(C(O)=O)C(NC)=CC=C2OC=1CC(C(CC1)C)OC1(C(CC1C)C)OC1C(C)C(=O)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012560 cell impurity Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012032 thrombin generation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- -1 ultraviolet light Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/19—Platelets; Megacaryocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás prokoaguláns aktivitással bíró, aktívvírusoktól mentes vérlemezkemembrán- mikrorészecskék előállítására. Atalálmány szerint kész vagy frissen nyert vérlemezkéket, ghostvérlemezkéket vagy membránfrakciójukat, amelyek adott esetbenhasználhatósági időn túli vérből vagy vérkészítményből származnak,kívánt esetben előkezelés és tisztítás után, legalább 60 °Chőmérsékleten hőkezelnek, és kívánt esetben a hőkezelés előtt vagyután homogenizálnak, vagy membránmikrorészecske-frakciót legalább 60°C hőmérsékleten hőkezelnek, és kívánt esetben a hőkezeltmembránmikrorészecskéket liofilizálják. A kapott mikrorészecskefrakciótranszfúzió formájában gyógyászati készítmény előállításárahasználható, továbbá például vérrögök jelenlétének és helyénekkimutatására alkalmas diagnosztikai szerré formálható. ŕ
Description
A találmány tárgya vérlemezkemembrán-mikrorészecskék, ezeket tartalmazó gyógyászati és diagnosztikai készítmények és eljárás a mikrorészecskék és a készítmények előállítására. A találmány szerinti vérlemezkemembránmikrorészecske-készítmény vérzés leküzdésére szolgáló transzfúzióként alkalmazható.
Egy felnőtt ember szervezete 4,0-5,5 liter vért tartalmaz, amely mintegy 60% folyadékból (plazma) és 40% alakos elemből (vörösvérsejtek, fehérvérsejtek és vérlemezkék) áll. Normál fiziológiás körülmények között a vérlemezkék fő funkciója a haemorrhagia megakadályozása.
A vérlemezkék a csontvelőben képződnek úgynevezett megakariocita prekurzorsejtekből, és élettartamuk a keringésben 8-10 nap. Ennek a rövid élettartamnak a következtében a vérlemezkehiány gyorsan jelentkezik, ha a csontvelő vérlemezke-termelő képessége csökken, például kemoterápiában részesülő rákos betegeknél. A vérlemezkeszám csökkenése számos betegség esetén bekövetkezhet, például ha in vivő antitestek képződnek a vérlemezke felületi glikoproteinjeivel szemben vagy más vérlemezke felületi antigénekkel szemben. A vérlemezkék csökkenése vagy pusztulása azt eredményezi, hogy a keringésben részt vevő vérlemezkék mennyisége nem kielégítő (ezt az állapotot nevezik trombocitopéniának, azaz csökkent trombocitaszámnak), és ez az állapot ellenőrizhetetlen vérzéshez vezethet. A vérlemezkehiány származhat olyan sebészeti beavatkozásból is, amelynek során a vérkeringést testen kívülre vezetik, amely körülmény a keringő vérlemezkék károsodását vagy pusztulását elősegíti. A trombocitopénia klinikai kezelését jellemzően friss, intakt vérlemezkék transzfúziójával végzik.
Döntően úgy tartják, hogy csak a metabolikusan aktív, intakt vérlemezkék hathatnak in vivő a vérzés megszüntetésére. Ennek következtében a transzfúziós terápia a jó minőségű, friss, életképes vérlemezkék beszerzési lehetőségétől függ. A transzfúzióra szolgáló vérlemezke-készítményt jellemzően két módon készítik: a) donoroktól frissen levett véregységekből, amelyeket randomdonor vérlemezkének neveznek, vagy b) egyetlen donortól aferézissel, amelyet egy donortól származó vérlemezkének neveznek. Ezek a transzfúziós készítmények friss, koncentrált, intakt vérlemezkék plazmaszuszpenziói.
A vérlemezke-transzfúzió jelenlegi gyakorlatának legnagyobb hátránya az intakt vérlemezkék rövid,
3-5 napos tárolhatósági ideje. Számos olyan vérlemezkeegység, amelyeket kórházak, vérbankok gyűjtöttek, sajnálatos módon megsemmisítésre került lejárat miatt. A vérlemezkeegységek rövid tárolhatósági ideje miatt nehéz ezekből nagy készletet tartani. Ez a probléma különösen kritikussá válik decentralizált felhasználás esetén, például a hadseregnél, polgári védelemnél és a baleseti ügyeleteknél.
Mind klinikailag, mind állatmodellen megkíséreltek néhány helyettesítő anyagot alkalmazni intakt, élő vérlemezkék helyett. Klein és munkatársai azt közölték, hogy liofilizált vérlemezkék klinikai adagolása után vérzéscsíllapodást észleltek [Klein, E., Farber, S.,
Djersasi, I., Toch, R., Freeman, G., Amold, P., „The Preparation and Clinical Administration of Lyophilized Piatelet Matériái to Children with Acute Leukémia and Aplastic Anémia”, J. Pediatrics, 49, 517. (1956)], azt feltételezték, hogy a vérlemezkék morfológiai integritása nem esszenciális abban a tekintetben, hogy az intakt vérlemezkék in vivő funkciói legalább részben enélkül is megőrződhetnek. A liofilizált vérlemezkeanyag intravénás adagolásának legnagyobb mellékhatása az volt, hogy a beteg az infúzió helyén komoly fájdalmat érzett, ezt feltehetően a liofilizált anyagban jelen lévő magas szerotonintartalom által kiváltott érgörcs okozta. Az előző eredményekkel ellentétben Hjort és munkatársai azt közölték, hogy friss, ultrahanggal roncsolt teljes vérlemezke-készítmény nem volt képes az eritrociták számának csökkentésére trombocitopéniás kutyák nyirokjában [Hjort, P., Perman, V. és Cronkite, E., „Fresh, Disintegrated Platelets and Radiation Thrombocytopenia: Correction of Prothrombin Consumption without Correction of Bleeding”, 1959], Legújabban McGill és munkatársai [„Platelet Membráné Vesicles Reduced Microvascular Bleeding Times in Thrombocytopenic Rabbits”, J. Láb. Clin. Med., 109, 127-133. (1987)] azt közölték, hogy vérlemezkemembrán-koncentrátumok transzfúziója trombocitopéniás nyulak vérzési idejét csökkentette. A koncentrátum ghost vérlemezkéket is tartalmazott (a „ghost” kifejezés a magyar szaknyelvben használatos, nincs magyar megfelelője), amelyeknek mérete mintegy a normál vérlemezkék méretének megfelelő és mitokondriumot, valamint felületi kapcsolórendszer maradékait tartalmazzák. A McGill-féle koncentrátum előállításának lépései: 1. teljes nyúlvér centrifugálása a friss vérlemezkék kiülepítésére; 2. a kiülepedett vérlemezkék fagyasztása -65 °C hőmérsékleten; 3. a vérlemezkék felolvasztása, majd másodszori fagyasztása és felolvasztása; majd 4. a kiülepített vérlemezkék öblítése és ismételt szuszpendálása vérlemezkementes plazmában.
A vérlemezkemembrán-ffakciók előzőekben leírt előállítása során a hőmérsékletet mindig 4 °C értéken vagy ez alatt tartjuk. Ez a hőmérséklet állandó érték, ha biológiai anyagokkal dolgozunk, mivel az aktivitás rendszerint igen rövid idő alatt elvész, ha a biológiai anyagot magasabb hőmérsékletnek tesszük ki. Például a proteinek, így az enzimek mintegy 60 °C hőmérsékletre melegítve inaktiválódhatnak. Az aktivitás elveszhet azonban 4 °C hőmérsékleten is. Azt ismertették például, hogy részlegesen tisztított vérlemezke 3 faktor (PF-3) vérkicsapó aktivitásának nagy részét elveszíti öt napos 4 °C hőmérsékleten való tárolása alatt [Wu, VY., McCoy, L. E., „Piatelet Factor 3: Quantitation and Characterization”, Thromb. Rés., 11, 581-593. (1977)]. (Úgy tűnik, hogy a PF-3 egy vérlemezkemembránkomplexszel kapcsolatos, amely katalitikus felületet nyújt a trombinképződés elősegítésére.) Az ilyen aktivitásveszteség nagy gondot jelent, ha a vérlemezke-frakciót gyógyászati készítményként kívánjuk felhasználni.
Ha a vérlemezke-frakciót humán célú felhasználásra készítjük, természetesen steril körülményeket kell
HU 214 884 Β alkalmazni. A teljes vér transzfuziójához hasonlóan a donortól kapott vérlemezkeegységek a befogadót az átvihető betegségeknek teszik ki, amelyek közé tartoznak az AIDS, a hepatitisz és más, transzfuzióval kapcsolatos betegségek. Kockázatot jelent az is, hogy több transzfuzió után a recipiens/beteg szervezetében antitestek fejlődhetnek ki a kapott vérlemezkékkel szemben (ezt az állapotot nevezik alloimmunizációnak). Az ilyen antitestek a transzfuzióval bejuttatott vérlemezkék gyors bomlását okozhatják. Továbbá a transzfüziók jelentős kockázatát jelenti a tárolt vérlemezkék bakteriális szennyeződése.
A találmány tárgyát gyógyászati és diagnosztikai termékek képezik, amelyeket új eljárással nyerünk vérlemezkemembránokból. A termékek olyan vérlemezkemembránfragmens-készítményeket tartalmaznak, amelyek prokoaguláns hatással bírnak, és amelyek teljes vérlemezkék helyettesítésére alkalmasak transzfuzió formájában vérzés gátlására, használhatók helyileg is sebgyógyulás elősegítésére, vagy in vitro vagy in vivő diagnosztikai szerként alkalmazhatók.
A találmány egyik szempontja szerint a vérlemezkemembránfragmens-készítmény aktív vírustól mentes.
A „vírustól mentes” megjelölésen azt értjük, hogy a vírus titer szövettenyészetben való meghatározásakor vírus jelenléte nem mutatható ki, azaz például a plakkképző aktivitás értéke különböző szöveteken a módszer érzékenysége (101) alatti. [Egyébként a találmány szerinti eljárás vírusszám-redukciós faktora (RF) legalább 5,7, ami a vírus titer inaktiválás előtti és utáni értékében a vírusszám logaritmusa kitevőjének csökkenését jelenti.]
A készítmény előállításának előnyös módja a vérlemezkemembránfragmens-készítmény hőkezelését foglalja magában, ami a vírusszennyezés csökkentését vagy megszüntetését szolgálja, valamint csökkenti vagy megszünteti a bakteriális fertőzést is. Nem várt módon a készítmény, bár hőkezelt, megőrzi prokoaguláns és vérzéscsillapító tulajdonságait. Ezen túlmenően a hőkezelt membránfragmens jóval stabilabb, mint az várható volna. A készítmény oldatban 4 °C hőmérsékleten legalább 8 héten át tárolható anélkül, hogy prokoaguláns aktivitásában jelentős csökkenés következne be, és legalább 6 hónap elteltével is aktivitásának több mint 90%-át megőrzi. Aktivitását (90% feletti mértékben) megőrzi liofilizálás után is. Ezen túlmenően a proteinés foszfolipidtartalom sem a liofilizálás folytán, sem hat hónapos tárolás alatt nem változik.
A találmány egy másik szempontja szerint a készítmény nem immunogén, különösen nem antigén az antigéndeterminánsok HLA I osztályának tekintetében. Ennek megfelelően a készítménynek egy adott recipiens számára való beadhatóságát nem korlátozzák a donor genetikai jellemzői.
A találmány egy további szempontjából a vérlemezkemembránfragmens-készítmény, amely prokoaguláns aktivitással bír, és amely vérzés gátlására képes, lényegében mentes a GPIIb/IIIa komplextől. Ez meglepő, figyelembe véve azt a széles körben elterjedt nézetet, hogy a GPIIb/IIIa komplex részt vesz és szükséges a vérzéscsillapításban.
A vérlemezkemembránfragmens-készítmény előnyösen mentes a ghost vérlemezkéktől, és viszonylag homogén mikrorészecskéket tartalmaz. Előnyösen a mikrorészecskéknek legalább 80%-a 600 nm alatti átmérőjű, és legalább 95%-a 1 mikron alatti átmérőjű. Még előnyösebben a mikrorészecskék átlagos átmérője 300 és 400 nm közötti. Az ilyen mikrorészecskék mérete egy jellemző ghost vérlemezke méretének mintegy Λ_ X*e·
Az előnyös készítmény gyakorlatilag nem tartalmaz szerotonint (a vérlemezke-lizátumban 0,02% alatti mennyiség van jelen), ezzel kiküszöbölődnek azok a légzéssel és érrendszerrel kapcsolatos problémák, amelyek egyes, a technika állása szerinti készítmények transzfüziójakor jellemzően jelentkeztek. A készítmények továbbá nem bírnak kimutatható purin-nukleozidfoszforiláz-aktivitással, citoplazma enzimmarkerrel, és lényegében mentesek az V, VIII, IX és X faktortól. Egyik megvalósítási formájában a mikrorészecskefrakció 3 tömeg% szénhidrátot, 30 tömeg% foszfolipidet, 58 tömeg% proteint és 9 tömeg% koleszterint tartalmaz, és a protein aránya a foszfolipidhez 1,97 ±0,10 (átlag±SD, n=7).
Nem várt módon a vérlemezkemembránfragmenskészítmények előállíthatok használhatósági időn túli vérlemezkékből. Jellemző módon a kórházak és más intézmények a transzfüzióra szolgáló vérlemezkéket szobahőmérsékleten tárolják 3-5 napig. Ezt követően a vérlemezkéket felhasználásra alkalmatlannak tekintik, és mint „használhatósági időn túli vérlemezkéket” eldobják. Arra a felismerésre jutottunk, hogy a találmány szerinti gyógyászati és diagnosztikai készítmények az ilyen használhatósági időn túli vérlemezkékből előállíthatok. így a találmány azzal az előnnyel jár, hogy általa a transzfüzióra alkalmas vérlemezkemembrán-frakció teljes egészében vagy részben használhatósági időn túli vérlemezkékből nyerhető, ezáltal az eddig használhatatlanként megsemmisítésre kerülő nagy mennyiségű vérlemezke hasznosítható.
A találmány tárgyát képezi a vérlemezkékből származó találmány szerinti készítmények előállítása is. A találmány egyik szempontja szerint profrombináz aktivitással bíró vérlemezke vagy vérlemezkemembránfragmens-tartalmú készítményt a készítményben lévő vírusok inaktiválásának megfelelő körülmények között kezelünk. A készítményt hőkezeljük. Az ilyen készítmény homogenizálható is, előnyösen ultrahangos kezeléssel, az így kapott vérlemezkemembrán-mikrorészecskék lényegében mentesek a ghost vérlemezkéktől. A készítmény kezelhető a GPIIb/IIIa felületi glikoprotein komplex lényegében teljes eltávolítására is.
A találmány tárgyát képezi egy eljárás vérlemezkékből származó termékek előállítására használhatósági időn túli vérlemezkékből vagy azok membránfragmenséből mint kiindulási anyagból. A használhatósági időn túli vérlemezkék származhatnak egyetlen donortól vagy több donortól gyűjtött anyagok lehetnek. Az eljárás magában foglalja a vírusinaktiválást és kívánt esetben a mikrorészecskék létrehozására szolgáló kezelést. Az így nyert vérlemezkemembrán-mikrorészecs3
HU 214 884 Β kék GPIIa/IIIa-tól lényegében teljes mértékben mentesek.
A találmány szerinti termékek előállítására szolgáló legelőnyösebb eljárás a vérlemezkék ismételt fagyasztását-felolvasztását, továbbá mosását foglalja magában, ezzel elsődlegesen ghost vérlemezkék és egy lizátum nyerhető. Ezt követően a ghost vérlemezkéket a lizátumtól elválasztjuk, és oldatban szuszpendáljuk. A kapott, a ghost vérlemezkéket tartalmazó szuszpenziót legalább 60 °C-ra melegítjük, és ezen a hőmérsékleten legalább 2 órán át tartjuk a vírusszennyeződés inaktiválására. A hőkezelés csapadékképződéssel is jár. A csapadékot azonban nem távolítjuk el az eljárásnak ezen a pontján, mivel a csapadék a kívánt aktivitás jelentős részét tartalmazza. Ehelyett a csapadékot tartalmazó szuszpenziót először homogenizáljuk, előnyösen ezt ultrahanggal végezzük, majd a csapadékot a szuszpenzióból elválasztjuk. A szuszpenziót ezután tárolhatjuk vagy transzfúzióra felhasználhatjuk.
A vérlemezkemembránfragmens-készítményt gyógyászatilag hatékony mennyiségben alkalmazhatjuk állatok és ember kezelésére vérzések megakadályozására. Ha a találmány szerinti készítményt gyógyászati készítményként transzfuzió formájában alkalmazzuk, a steril készítményt bármely fiziológiásán kompatibilis oldatban, például sóoldatban vagy plazmában szuszpendálhatjuk. A készítmény alkalmazható önmagában vagy más hatóanyagokkal, köztük teljes vérlemezkékkel. A készítmény a mesterséges vér ideális kiegészítője. A készítmények alkalmazhatók helyileg is vérzés elállítására és sebek kezelésére. Ilyen felhasználás esetén a készítményeket gyógyászati szempontból elfogadható hordozóanyagban, például gélben vagy kenőcsben szuszpendálhatjuk, vagy átitathatunk velük egy hordozóanyagot, például gézt. A készítmények használhatók hordozóanyagként is hatóanyag szállítására, vagy jelzett állapotban diagnosztikai célra használhatók, például egy vércsomó helyének megtalálására szolgáló leképezőrendszerben.
A következőkben az ábrákat ismertetjük.
Az 1. ábrán a trombinalvadási-idő standard görbéjét mutatjuk be;
a 2. ábrán hőkezelés hatását mutatjuk be PF-3 fajlagos aktivitására;
a 3. ábrán normál és csökkent trombocitaszámú nyulak vérlemezkeszámát és vérzési idejét mutatjuk be. A satírozott oszlopok mutatják a vérzési időt, az üres oszlopok a vérlemezkeszámot;
a 4. ábrán transzfúzió formájában bejuttatott vérlemezkemembrán-mikrorészecskék hatását mutatjuk be doxorubicin-hidrogén-kloriddal indukált trombocitopéniában szenvedő állatok vérzési idejére;
az 5. ábrán transzfúzió formájában bejuttatott vérlemezkemembrán-mikrorészecskék hatását mutatjuk antitesttel kiváltott trombocitopéniában szenvedő állatokra; és a 6. ábrán transzfuzió formájában bejuttatott vérlemezkemembrán-mikrorészecskék dózisfüggő hatását mutatjuk be buszulfánnal indukált súlyos trombocitopéniában szenvedő állatok vérzési idejére.
A következőkben a találmány előnyös megvalósítási módjának részletes leírását adjuk.
A találmány szerinti terméket teljes vérlemezkékből vagy teljes vérlemezkék membránszármazékaiból készítjük. A teljes vérlemezkék lehetnek frissen gyűjtött vérlemezkék vagy használhatósági időn túli vérlemezkék. Használhatósági időn túli vérlemezkén olyan vérlemezkéket értünk, amelyeket 4 °C és szobahőmérséklet között tároltak legalább 3 napig. A használhatósági időn túli vérlemezkéket az elfogadott gyakorlat szerint eldobják, mivel ezek már transzfúziós anyagként nem használhatók.
Vérlemezke-származékokon nem intakt vérlemezkéket értünk, például ghost vérlemezkéket vagy vérlemezkemembrán-fragmenst, amely vérlemezkemembrán-mikrorészecskéket tartalmaz.
A találmány szerinti terméket a kezelendő lénynek hatékony mennyiségben adjuk be. A „lény’megjelölésen minden olyan élő szervezetet értünk, amelyben a vérzés elállításának képességét legalább részben vérlemezkék közvetítik, például embert, kutyát, macskát, lovat. A „hatékony mennyiség” megjelölésen olyan menynyiséget értünk, amely képes annak az adott terápiás vagy diagnosztikai célnak a kielégítésére, amelynek érdekében a terméket adagoljuk. A transzfúzió általános esetében hatékony mennyiségen azt a mennyiséget értjük, amely a vérzéselállítási funkciót lényegében azonos szintre állítja vissza, mint amilyen teljes vérlemezkék transzfüziója esetén elérhető lenne. Trombocitopéniában szenvedő betegek esetén hatékony mennyiségen azt a mennyiséget értjük, amely képes a beteg vérzési idejének csökkentésére, előnyösen annak nem veszélyes szintig való csökkentésére, még előnyösebben olyan szintre, amely a normál lényének megfelelő. A hatékony mennyiség egyénenként határozandó meg, alapjául legalább részben a kezelendő lény mérete, a tünetek súlyossága és az elérendő eredmények szolgálnak. így a hatékony dózist szakember a fenti tényezők alapján rutinvizsgálatokkal meghatározhatja.
A találmány szerinti termék kezelhető úgy, hogy aktív vírustól mentes legyen. Az, hogy a tennék aktív vírustól mentes, azt jelenti, hogy ahhoz kielégítő körülményeknek tettük ki, hogy bármely jelen lévő vírust, például HBV-t, NANBHV-t, CMV-t és HIV-t inaktiváljunk vagy elpusztítsunk. Ezek közé a körülmények közé tartoznak az antitestekkel való kezelés, etanolos, ultraibolyafénnyel történő, szerves oldószeres detergenssel és fenantrolin kelátképző szerekkel való kezelés (lásd a „Vírus Inactivation in Plasma Products”, szerkesztő: ΤΙ Morgenthaler, Cunent Studies in Hemotology and Blood Transfusion No. 56, Karger, N. Y. 1989 szakirodalmi helyen, amelyet leírásunkba referenciaként építünk be). A vírusok inaktiválása szempontjából előnyös eljárás az olyan időtartamú és mértékű hőkezelés, amely inaktiválja vagy elpusztítja a vírust.
A találmány szerinti termékek olyan kezelésnek is kitehetők, amelyek csökkentik vagy kiküszöbölik transz4
HU 214 884 Β fúzióként való alkalmazásuk esetén fellépő immunogenitásukat. A találmány szerinti terméket előnyösen gyűjtött vérlemezkékből készítjük, amely legtöbb egyénnél transzfüzió formájában beadva szokásosan antitestválaszt váltana ki. Jelenleg az alloimmunizáció komoly problémát jelent az olyan trombocitopéniás betegek kezelésénél, akik ismételt vérlemezke-transzfüzióra szorulnak. A vérlemezkék HLA-A és HLA-B antigénekkel bírnak, amelyek vagy a vérlemezkemembránok részét képezik vagy a plazmából abszorbeáltak. A HLA-A vagy HLA-B elleni antitestek kifejlődése (amely a vérlemezke-alloimmunizáció elsődleges oka) a transzfúzióval bejuttatott vérlemezkék gyors bomlását okozza, így csökkenti a vérlemezke-transzfüzió hatását a vérzés csillapítására.
A vérlemezke-koncentrátumok fehérvérsejtekkel való szennyezettsége (amely HLA antigének forrása) ugyancsak hozzájárulhat az alloiummunizáció kifejlődéséhez.
A találmány szerinti előnyös termékek nem immunogének, nem alloimmunogének és HLA-determinánsokra (különösen az I osztályba tartozó HLA-determinánsokra) nem immunogének. A „nem immunogén” kifejezésen azt értjük, hogy a transzfúziónak kitett lényben néhány transzfuziót követően nem halmozódik fel olyan immunológiai válasz, amely elegendő ahhoz, hogy a transzfüzióval bevitt termék terápiás hatása ellen hasson. A „nem alloimmunogén” kifejezésen azt értjük, hogy a transzfuziónak kitett lény az alloimmunogén forrásból készített anyag néhány transzfüziója után nem kimutatható jelentős immunológiai választ alloantigének ellen. A kimutathatóságon azt értjük, hogy alloantigének elleni szérum antitest nem mutatható ki a szokásos eljárásokkal, például DÓT-vizsgálattal, vagy hogy bármely alloantigén elleni immunológiai válasz nem elegendő ahhoz, hogy a transzfüzióval bevitt termék terápiás hatása ellen hasson.
A következőkben a találmány szerinti előnyös termék előnyös előállítási eljárását írjuk le.
1. példa
V érlemezkemikrorészecske-frakció készítése
Frissen gyűjtött, tárolt (1-5 napon át, 20-25 °C hőmérsékleten) vagy használhatósági időn túli (4 °C hőmérsékleten 5 napon túl tárolt) vérlemezke-koncentrátumot (50-60 ml/koncentrátum) 600 ml-es vérzsákokba gyűjtünk (Fenwall transfer pack unit, 4R2023, Fenwall Laboratories, Deerfield, Illinois, USA) steril plazmaátvivő felszerelésen (Fenwall 4C2243, Fenwall Laboratories, lásd fent) keresztül. Minden zsák összesen 500-600 ml vérlemezke-koncentrátumot tartalmaz (ezt a továbbiakban 600 ml-es egységnek nevezzük). A 600 ml-es egységet 1000 fordulat/perc mellett 11 percig 22 °C hőmérsékleten centrifugáljuk, hogy a vörösvérsejt- és a fehérvérsejt-szennyeződéseket eltávolitsuk belőle (PR7000, International Equipment Company, Needham Heights, Massachusetts, USA). A vérlemezkéket tartalmazó felülúszót ezután egy új 600 ml-es vérzsákba visszük át, 3000 fordulat/perc sebességgel 25 percig 22 °C hőmérsékleten centrifugáljuk, ezzel a vérlemezkéket a plazmától elválasztjuk. A vérlemezkékben szegény plazmát eltávolítjuk, a vérlemezkéket tartalmazó csapadékot finoman felszuszpendáljuk 20 ml 0,9%-os nátrium-klorid-oldatban (fiziológiás sóoldat), 100 ml végtérfogatra hígítjuk további sóoldattal, majd 300 ml-es vérzsákokban gyűjtjük (zsákonként három 100 ml-es minta három, eredetileg 600 ml-es egységnek felel meg). Az előzőek szerint újraszuszpendált vérlemezkéket ismételten centrifugáljuk 3000 fordulat/perc sebességgel 20 percig 22 °C hőmérsékleten. A felülúszót eltávolítjuk, a vérlemezkéket tartalmazó csapadékot fiziológiás sóoldattal kétszer mossuk ismételt újraszuszpendálással és centrifugálással.
Végül a mosott vérlemezkéket ismét fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk (minden egyes 600 ml-es egységet 25 ml-ben), majd ismételt fagyasztással (-80 °C legalább 6 órán át) és felolvasztással (25 °C legalább 1 órán át), a fagyasztás-felolvasztás műveleteket háromszor ismételve roncsoljuk. A fagyasztott-felolvasztott szuszpenziót fiziológiás sóoldattal hígítjuk, minden 600 ml-es egységet 100 ml-re, és 3000 fordulat/perc sebességgel 30 percig centrifugálva csapadék formájában összegyűjtjük a ghost vérlemezke csapadékot. Ezt a ghostvérlemezke-csapadékot fiziológiás sóoldatban ismételten szuszpendáljuk (minden 600 ml-es egységre számított 100 ml sóoldatban), és ismételt szuszpendálással és centrifugálással kétszer mossuk.
A mosott ghostvérlemezke-csapadékot fiziológiás sóoldatban ismét szuszpendáljuk (egy 600 ml-es egységre számítva 40-50 ml), majd vízfürdőben 20 órán át 60 °C hőmérsékleten tartjuk. Más megoldás szerint a ghostvérlemezke-szuszpenziót melegíthetjük 100 °C hőmérsékleten 5 percig. Ezek a körülmények elegendőek ahhoz, hogy bármely vírusszennyeződést inaktiváljanak. A hőkezelés során jelentős csapadék képződik. A hőkezelt ghostvérlemezke-szuszpenziót ezután ultrahanggal homogenizáljuk (ultraszonikus feldolgozó Model W-385, Heat Systems, Inc., Farmingdale, New York, USA) 1,27 cm-es roncsolószarut alkalmazunk átfolyócellában (Model 800B, Heat Systems). Az ultrahangos rendszert először nitrogéngázzal átöblítjük, ezután injektáljuk bele a ghostvérlemezke-szuszpenziót. A szuszpenziót ezután ultrahanggal kezeljük 20 kHz-s pulzálással 5 perc 43 másodpercen át (2 másodperces ciklusokban, 1,4 másodperc bekapcsolás, 0,6 másodperc kikapcsolás) a „4” teljesítményfokozaton, így 48 mikrométeres dupla amplitúdót kapunk. Ezt követően az ultrahanggal kezelt készítményt 3000 fordulat/perc mellett 30 percig 22 °C hőmérsékleten centrifugáljuk, így a kicsapódott anyagot a vérlemezkemembrán-mikrorészecskéktől elkülönítjük, mely utóbbiak a felülúszóban maradnak. A felülúszót ezután eltávolítjuk, liofilizáljuk, és liofilizálatlan nitrogéngáz alatt tároljuk.
A 2. és 3. vizsgálati példák elvégzéséhez 8 mg fenti liofilizált anyagot 4 ml vízben veszünk fel, és az így kapott izotóniás, 2 mg/ml koncentrációjú készítményt használjuk. Ennek megfelelően a nyulakat 2 mg fehérje/testtömeg kg dózissal kezeljük.
Az előző módon készített vérlemezkemikrorészecske-frakció aktív vírustól mentes. Gyakorlatilag mentes
HU 214 884 Β a ghost vérlemezkéktől, és a mikrorészecskéknek több mint 80%-a 600 nm alatti átmérőjű, több mint 95%-a 1000 nm alatti átmérőjű. A használhatósági időn kevéssel (legfeljebb 2 héttel) túlhaladt vérlemezkékből készített mikrorészecskék átlagos átmérője 7 különböző készítmény esetén 300 és 400 nm közötti. A 7 készítményből számított átlagos átmérő 341 nm.
A vérlemezkemikrorészecske-frakció továbbá lényegében mentes szerotonintól, GPIIb/IIIa-tól (ez egy felületi glikoprotein), purin-nukleozid-foszforiláztól, V, VIII, IX és X koagulációs faktortól és trombospondintól (ez egy alfa-granulumkomponens). Másrészt a készítményben GPIb (ez egy másik felületi glikoprotein) jelen van, ugyancsak kimutatható β-glükoronidáz (egy lizoszómamarker) (a lizátumnak mintegy 25%-a). A GPIIb/IIIa hiánya meglepő volt, mivel feltételezések szerint a GPIIb/IIIa szükséges a vérzés csillapításában.
A vérlemezkemembránok roncsolására és a vérlemezkeghost-frakció izolálására más eljárások is használhatók. Például a vérlemezkék egyensúlyba hozhatók glicerinnel, majd a sejten kívüli glicerinkoncentráció gyors hígításával hipotóniásan roncsolhatok. Az ilyen művelet során ozmotikus nyomásgradiens jön létre a vérlemezke külső membránján át, ez a sejtmembrán roncsolódásához vezet. Ezenkívül számos más kémiai szer (például nátrium-klorid) használható hasonló módon az ozmotikus sokk kiváltására és a vérlemezkék roncsolására. A találmány előnyös megvalósítási mód10 ja szerint ismételt fagyasztást és kiolvasztást alkalmazunk. A vérlemezkék tárolhatók leforrasztott tartályban 4 °C, -20 °C vagy -80 °C hőmérsékleten nitrogéngázban vagy liofílizált állapotban is nitrogénatmoszférában. Ha más megjelölés nem szerepel, a következő el15 járásokban 4 °C hőmérsékleten tárolt mikrorészecskéket alkalmazunk.
A vérlemezkemikrorészecskefrakció-készítményt két különböző vizsgálatsorozatban elemeztük bizonyos komponensei tekintetében, eredményeinket az I. táblázatban ismertetjük.
I. táblázat
Az össztömeg %-ában (tömeg%)
| Vizsgálat | Szénhidrát | Foszfolipid | Protein | Koleszterin |
| N=4 | 3,3±0,14 | 30,0±0,9 | 57,8±0,9 | 9 (becsült) |
| N = 8 | 2,6±0,3 | 30,1 ±2,5 | 53,2±1,7 | 9,9±0,9 |
A kevéssel használhatósági időn túli vérlemezkékből készített előnyös vérlemezkemikrorészecskefrakció prokoaguláns aktivitását Russel viperaméregidő eljárásával [Spaet, T. H., Cintron, J., „Studies on Platelet Factor-3 Availability”, Brit. J. Hamematol, 77, 269 (1965)] határozzuk meg, amelyet a PF-3 aktivitás mérésére használnak. A Russel-vizsgálat egy trombinképződési vizsgálat, amelynek végpontja a fibrinogénalvadással határozható meg. A fajlagos aktivitást trombin-standardgörbéhez hasonlítva határozzuk meg, és képződött trombin/mg vérlemezke protein vagy képződött trombin/mg vérlemezke foszfolipid egységben fejezzük ki. A PF-3 fajlagos aktivitást 1 mg proteinre (E/mg) az első vizsgálatsorozatban 148,1 ± 13,4 (n=7) értékűnek találtuk. A második vizsgálatsorozatban ez az érték 175 ± 8 (n=8). A PF-3 fajlagos aktivitás 1 mg foszfolipidre (E/mg) az első kísérletsorozatban 291,3 ±40,0, a második kísérletsorozatban 310±23. Ezek a fajlagos aktivitásértékek messze meghaladják a friss, intakt teljes vérlemezkékre kapott értékeket. Feltételezzük, hogy ez a szokásosan az intakt vérlemezkékben nem hozzáférhető prokoaguláns membránfragmensek felszabadulásának következménye.
A fajlagos aktivitás liofílezés után is megőrződik, bár ahhoz, hogy 60%-nál nagyobb fajlagos aktivitás maradjon meg, védőanyagot kell alkalmazni (0,4 g szacharóz/100 ml, az aktivitásnak több mint 90%-a őrződik így meg).
A készítmény foszfolipidrészének összetételét két különböző vizsgálatsorozatban határoztuk meg, ezek eredményeit a II. táblázatban ismertetjük.
77. táblázat
Az összfoszfolipid %-ában (tömeg%)
| Vizsgálat | Pl | PS | PE | PC | SP |
| N=4 | 5,8±l,0 | 10,1 ±0,9 | 22,5±1,5 | 45,8±4,0 | 15,4±0,7 |
| N=8 | 6,8±0,5 | 12,2 ±0,7 | 23,8±2,1 | 40,6±2,3 | 16,6±1,5 |
Pl: foszfatidil-inozit, PS: foszfatidil-szcrin, PE: foszfatidil-etanol-amin, PC: foszfatidil-kolin, SP: szfingomiclin
Vizsgáltuk a vérlemezkemikrorészecske-frakciók prokoaguláns aktivitását és trombocitopéniás állatokban vérzés csillapítására való képességüket. A kevéssel használhatósági időn túli vérlemezkékből készített mikrorészecskefrakciók prokoaguláns aktivitása a friss vérlemezkéből készültével összemérhető. A friss vérlemezkékből és a kevéssel használhatósági időn túli vérθθ lemezkékből készült frakciók prokoaguláns aktivitása a
HU 214 884 Β teljes vérlemezkék aktivitásához mérhető. Az ilyen frakció transzfüziója minden recipiens állatban lecsökkentette a vérzési időt.
Megvizsgáltuk a hőkezelés és az ultrahangos kezelés hatását is a prokoaguláns aktivitásra. A kevéssel használhatósági időn túli vérlemezkékből készült mikrorészecskefrakciót hőkezeléssel szemben viszonylag stabilnak találtuk. Azt találtuk továbbá, hogy ennek a vérlemezkemikrorészecske-frakciónak a prokoaguláns aktivitása jelentősen csökken, ha a hőkezelést megelőzi a homogenizálás. Ezt és a találmány szerinti mikrorészecskefrakció egyéb tulajdonságait az alábbi példákban részletesebben ismertetjük.
A fentiekben leírt eljárás szerint előállított terméket, valamint különféle köztitermékeit GPIIb/IIIa jelenlétére vizsgáltuk immunológiai DOT-vizsgálattal. A GPIIb/IIIa jelen volt az intakt vérlemezke-készítményekben, a vérlemezke-lizátumban, a vérlemezke-lizátum felülúszójában és a vérlemezkeghostmembrán-frakcióban. Nem észleltünk kimutatható GPIIb/IIIa-t a hőkezelt vérlemezkeghostmembrán-frakcióban, sem a végtermékben.
Immunológiai DOT-vizsgálattal vizsgáltuk a végterméket és a köztitermékeket HLA antigének (I osztály) jelenlétére is. HLA antigének voltak jelen a mosott, intakt vérlemezke-készítményekben, a vérlemezke-lizátumban, a vérlemezke-lizátum felülúszójában és a vérlemezkeghostmembrán-frakcióban. HLA antigének nem voltak kimutathatók a hőkezelt vérlemezke ghost membrán frakcióban, sem a végtermékben.
Ugyancsak immunológiai DOT-vizsgálattal vizsgáltuk a végterméket és a különböző köztitermékeket GPIb jelenlétére. Minden megvizsgált minta, beleértve a hőkezelt mintát, GPIb jelenlétét mutatta.
Az előzőekben és a következőkben a találmány előnyös megvalósítási módjának leírása szerepel anélkül, hogy találmányunkat erre kívánnánk korlátozni. A találmány tárgya egyrészt hőkezelt vérlemezkék vagy vérlemezkemembrán-frakció biztosítása a vírusfertőzés kiküszöbölésére. Bár ismeretes, hogy az ilyen hőkezelés általában a vírusfertőzést inaktiválja, soha nem használtak ilyen kezelést vérlemezke-készítményekkel kapcsolatban. Ennek folytán a találmány révén elsőként biztosítunk transzfüzióra alkalmas vírusinaktivált vérlemezke-frakciót.
A találmány tárgyát képezik másrészt olyan transzfúziós készítmények, amelyek használhatósági időn túli vérlemezkékből készültek. A találmány révén valósul meg először a használhatósági időn túli vérlemezkék nagy tömegének - amelyet szokásosan eldobnak transzfüzióra való alkalmassá tétele. Továbbá, mivel a tárolás során a használhatósági időn túli vérlemezkék vírusfertőzésének valószínűsége nő, a találmány szerinti hőkezelési lépés hozzájárul ahhoz is, hogy a használhatósági időn túli vérlemezkéket úgy hasznosíthassuk, hogy vírusmentességüket biztosítsuk.
A találmány szerint a ghost vérlemezkéktől lényegében mentes vérlemezkemikrorészecske-frakció előállításánál a hőinaktiválási és homogenizálási lépést kombinálhatjuk is. A készítmény homogén méreteloszlású mikrorészecskéket tartalmaz, és lényegében mentes a nem kívánt citoplazmaanyagtól. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a homogenizálás (ultrahangos homogenizálás) a hőinaktiválási lépést követi, aminek révén egyrészt a mikrorészecskék homogén méretét biztosítjuk, másrészt megakadályozzuk, hogy a hőinaktiválási lépés során képződő csapadékhoz jelentős mennyiségű aktivitás kötődjön.
Amint azt az előzőekben már említettük, a mikrorészecskefrakciót lépésenként állítjuk elő. Első lépésként a vérlemezkemembránt részlegesen roncsoljuk, így egy ghost vérlemezke frakciót és citoplazmaanyagokat tartalmazó lizátumot állítunk elő. Ha a ghostvérlemezkefrakciót elkülönítettük a citoplazmaanyagtól, a ghost vérlemezkéket homogenizáljuk, így a ghost vérlemezkéktől lényegében mentes frakciót nyerünk, amely lényegében egyenletes méretű mikrorészecskéket tartalmaz. Megjegyezzük azonban, hogy az első lépés, a részleges roncsolás el is hagyható. így a vérlemezkéket ultrahanggal kezeljük, és a kapott mikrorészecskéket a lizátumból izolálhatjuk.
Úgy véljük, hogy a találmány szerinti vérlemezkemembránmikrorészecske-frakció lényegében nem immunogén a teljes vérlemezkékhez hasonlítva, ezért előállítható különböző, összeillő vércsoportú donoroktól gyűjtött vérlemezkékből. Az alapos mosás, amellyel a fehérvérsejteket teljesen eltávolítjuk, hozzájárulhat ahhoz, hogy nem immunogén preparátumot nyerjünk.
A találmány szerinti előnyös termékek prokoaguláns aktivitással bírnak, vírusmentesek, nem alloimmunogének, és annyira stabilak, hogy kereskedelmi méretekben előállíthatók, liofilizálhatók és megfelelő tárolóedényekben tárolhatók.
2. példa
Vérlemezke-mikrorészecskék prokoaguláns aktivitásának vizsgálata
A PF-3 (vérlemezke 3-faktor) prokoaguláns aktivitást Russel-féle viperaméreg-idő vizsgálattal mértük, amely eljárás egy trombinképződés-vizsgálat. A vizsgálat végpontját vizuálisan határozzuk meg, gyűjtött humánplazma-mintában jelen lévő fíbrinogén alvadása alapján.
0,025 mol/l-es, pH=7,3-as imidazolpufferben készült kalcium-klorid törzsoldatot 37 °C hőmérsékleten tartunk. A gyűjtött humán plazmát és az 1. példa szerint előállított vérlemezkemembránmikrorészecske-frakciót 25 pg/ml-es oldat formájában szobahőmérsékleten tároljuk. A Russel-viperamérget (RW; 10 pg/ml, sóoldatban; Wellcome Diagnostics, Dartford, Anglia) jégen tartjuk.
A vizsgálatot 0,1 ml gyűjtött plazma és 0,1 ml vérlemezkemembránmikrorészecske-oldat 12x75 mm-es bór-szilikát üvegcsőben való elegyítésével és 37 °C hőmérsékleten 5-10 percig történő inkubálásával kezdjük. Ezután az elegyhez 0,1 ml RVV-oldatot adunk, és az elegyet 37 °C hőmérsékleten 30 másodpercig inkubáljuk, majd 0,1 ml CaCl2-oldatot adunk hozzá. A CaCl2-oldat adagolása és a fibrinalvadás közötti időtartamot mérjük. A vizsgálati rendszerben képződött trombinegységet az 1. ábra szerinti trombinalvadási idő standard görbe alapján számítjuk tisztított marhatrom7
HU 214 884 Β bin (Sigma 850-1; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) és gyűjtött humán plazma alkalmazásával.
A hőkezelés és az ultrahangos kezelés hatását a prokoaguláns aktivitásra (PF-3) Russel-féle viperaméreg-idő vizsgálattal mértük. Amint az a 2. ábrán látható, a hőkezelés és azt követő ultrahangos kezelés révén olyan vérlemezkemembránmikrorészecske-frakciót nyertünk, amely prokoaguláns aktivitásának jelentős részét megőrizte. Azonban akkor, ha az ultrahangos kezelés a hőkezelést megelőzi (ezt az ábrán nem mutatjuk be), a vérlemezkemembránmikrorészecske-frakció prokoaguláns aktivitása rendkívüli mértékben megváltozik, a prokoaguláns aktivitás 50%-kal csökken.
3. példa
Vérlemezke-mikrorészecskék hatása vérzécsillapításra
Megvizsgáltuk az 1. példa szerint előállított vérlemezke mikrorészecskék képességét antitesttel indukált trombocitopéniás állatok vérzésének csillapítására. Nyulakban a trombocitopéniát antinyúl vérlemezke antiszérummal váltottuk ki. Először 10 normális, 3,53±0,41 kg testtömegű nyálban meghatároztuk a vérlemezkeszámot és a vérzési időt (a vérlemezkeszám 548 000±97 000/μ1; a vérzési idő 153±47 s, átlag ±SD). A kereskedelmi forrásból beszerzett antinyúl vérlemezke antiszérumot 0,2-0,4 ml antiszérum/testtömeg kg mennyiségben intravénásán 10 nyúlnak adtuk be. Az antiszérum injekció beadása után 2 óra múlva minden állatban különböző mértékben trombocitopéniát észleltünk. Az adatok alapján a „kiváltott trombocitopénia” mértéke szerint csoportokat képeztünk: 1. csoport: a vérlemezkeszám kevesebb mint 80 000/μ1;
2. csoport: a vérlemezkeszám 100 000-200 000/μ1, és
3. csoport: a vérlemezkeszám több mint 200 000/μ1 (ez a 3. ábrán látható).
Mind a 10 antiszérummal kezelt nyúlban a vérzési idő meghosszabbodása is kiváltódott (ezt 2 órával az antiszérum injekció beadása után mértük). Jelentős meghosszabbodás jelentkezett az első csoportba tartozó állatoknál (súlyos trombocitopénia, a vérlemezkeszám <75 ΟΟΟ/μΙ-nél), mérsékelt meghosszabbodást észleltünk a 2. és 3. csoportba tartozó állatoknál (lásd a 3. ábrán).
Az első csoportba tartozó, súlyos trombocitopéniában szenvedő állatoknak 2 mg fehéije/testtömeg kg dózisban a használhatósági időn kevéssel túli vérlemezkékből készült vérlemezkemikrorészecske-frakciót adtunk be transzfüzió formájában. Amint az a 4. ábrán látható, az antiszérum injekció beadása után 2 óra múlva a vérlemezkeszám 41 000, 73 000, illetve 56 000/μ1 az 1., 2., illetve 3. csoportba tartozó állatoknál. Azonos időtartam alatt a vérzési idő jelentősen meghosszabbodott mind a három nyúlnál, különösen a 2. nyúlnál, amelynél a metszéssel ejtett seb még 20 perc múlva is erősen vérzett, és a vérzés elállítására helyi nyomás alkalmazására volt szükség. A vérlemezke-mikrorészecskék beadása után az 1. és 3. állat vérzési ideje jelentősen lecsökkent, míg a 2. nyúlnál a vérzés helyi nyomás alkalmazása nélkül, spontán 20 perc múlva állt el. így minden vizsgált állatnál azt észleltük, hogy a találmány szerinti vérlemezke-mikrorészecskék transzfuzióját követően a vérzési idő csökken.
4. példa
Vérlemezke-mikrorészecskék hatása vérzéscsillapításra
Az 1. példa szerint előállított vérlemezke-mikrorészecskék hatását vizsgáltuk doxorubicin-hidrogén-kloriddal kiváltott trombocitopéniában szenvedő állatok vérzésének csökkentésére. Kilenc nyúlnak intravénásán doxorubicin-hidrogén-kloridot (Adriamycin; 2 mg/testtömeg-kg) adtunk be, és ezzel trombocitopéniát váltottunk ki. A doxorubicin beinjektálását megelőző alap vérlemezkeszám 488 000±94 000/μ1. Az alap vérzési idő 128±21 s. A doxorubicin beinjektálása után 1 héttel a vérlemezkeszám 13OOOO±31 ΟΟΟ/μΙ-re csökkent (p<0,01), ezzel egyidejűleg a vérzési idő a trombocitopéniás kontrolihoz mérten 2,4-szeresre nőtt, értéke 311 ±89 s, n=9, p<0,01.
Doxorubicinnel kiváltott trombocitopéniában szenvedő nyulaknak 2 mg membrán fehéije/testtömeg kg dózisban kevéssel használhatósági időn túli vérlemezkékből készült vérlemezkemikrorészecske-frakciót vagy sóoldatkészítményt adtunk be transzfüzió formájában. Minden állatban, amelynek prokoaguláns membránokat adtunk, vérzéscsillapító hatást észleltünk. A vérzési időnek a transzfúziót követő 15 perc, 2 óra és 4 óra elteltével való ismételt mérésekor a trombocitopéniás kontroliéhoz viszonyított jelentős csökkenését észleltük (p<0,01). Ezt az 5. ábrán mutatjuk be. Ezzel ellentétben nem észleltünk jelentős változást azoknál a trombocitopéniás nyulaknál, amelyeknek sóoldat-infuziót adtunk be.
5. példa
Vérlemezke-mikrorészecskék vérzéscsökkentő hatása
A találmány szerinti vérlemezke-mikrorészecskék vérzési időt csökkentő hatását további kísérletben igazoltuk, amelyben súlyosan trombocitopéniás nyulaknak a találmány szerinti vérlemezke-mikrorészecskéket transzfúzióként beadva a dózisfuggő hatást mértük. A nyulakban a trombocitopéniát két szubkután beadott busulfan (1,4-butándiol-dimetánszulfonát) (összesen 35 mg/testtömeg kg) injekcióval váltottuk ki, a vérlemezkeszám 25 000/μ1 alá csökkent. A súlyosan trombocitopéniás nyulaknak a vérlemezke mikrorészecskéket három koncentrációban, 0,5 mg/testtömeg kg, 1,0 mg/testtömeg kg, illetve 2,0 mg/testtömeg kg dózisban, valamint kontrollként sóoldatkészítményt adtunk be transzfúzió formájában. Az alap vérlemezkeszámot a transzfüzió napján mértük, ennek nagyságrendje minden állat esetén mintegy 15 000/μ1.
A 6. ábrán látható, hogy a vérlemezke-mikrorészecskék vérzéscsökkentő hatása közvetlenül kapcsolatos a transzfuzióként beadott dózissal. A súlyosan trombocitopéniás nyulak közül azoknak a vérzési ideje, amelyek sóoldatot kaptak, nem csökkent. Másrészt a súlyosan trombocitopéniás nyulak meghosszabbodott vérzési ideje a vérlemezkemikrorészecske-transzfüziót követően dózisfuggő módon csökkent.
HU 214 884 Β
A trombocitopéniás nyulakon végzett fenti transzfúziós vizsgálatok igazolják a találmány szerinti vérlemezkemembrán-fragmens vérzéscsillapító hatását.
A találmány előzőekben leírt és a rajzokban bemutatott megvalósítási módja természetesen szakember ismeretének körén belül számos módosítással és változtatással végrehajtható. Ezek a változatok ugyancsak a találmány oltalmi körén belül esnek.
Diagnosztikai készítmények készítése
1. formálási példa
In vitro diagnosztikai készítmény antivérlemezke antitest kimutatására a beteg plazmájából Vérlemezke-mikrorészecskéket hidrofób adszorpcióval [Foster, P. A. és munkatársai, J. Bioi. Chem., 262, 8443-8446 (1987)] polisztirol- (vagy hasonló anyagból készült) gyöngyök felületére viszünk [a polisztirolgyöngyök leírása például a Foster, P. A. és munkatársai, J. Bioi. Chem., 262, 8443-8446. (1987) szakirodalmi helyen szerepel],
A hidrofób kölcsönhatás lúgos, pH 8,5-10,0 tartományban szobahőmérsékleten 1 -2 óra alatt játszódik le. A bevonattal ellátott gyöngyöket a megmaradt kötőhelyek telítésére 1% blokkolóreagenssel (Boehringer Mannheim) blokkoljuk, majd 3 órán át szobahőmérsékleten a beteg plazmájával inkubáljuk.
Az antivérlemezke antitestek a bevonattal ellátott gyöngyökhöz kötődnek. Az összekapcsolódott antigénantitest komplex antihumán IgG konjugáttal (biotin, lúgos foszfatáz) vagy izotóppal jelzett anti-humán IgGvel kimutatható. A kontroll reakciója (háttér) és a betegből származó minta reakciója közötti különbség számszerűsíthető.
2. formálási példa
Radioleképezőszer és alkalmazása a szervezetben lévő vérrög helyének kimutatására
Vérlemezke mikrorészecskéket kapszulázásos eljárással [Anal. Biochem., 94, 302-307. (1979)] radioaktív jelzéssel látunk el, például indium-111-gyel (H1In) jelölünk. A 'In radioizotóp a vérlemezke mikrorészecskékbe az A-23187 ionoforral vihető be, és a membránrészecskékben dietilén-triamin-penta-ecetsav (DTPA) kelátképzővel vihető komplexbe. Az izotóppal jelzett mikrorészecskéket izotóniás steril oldatban, például 0,9%-os nátrium-klorid-oldatban vesszük fel, a koncentrációnak lényegében csak az izotóppal jelzett részecskék detektálhatósága szab határt, így ennek megállapítása szakember ismereteinek körébe tartozik.
Ezután a jelzett vérlemezke-mikrorészecskéket tartalmazó készítményt a betegbe injektáljuk, és haladását számlálóval követve állapítjuk meg az érrendszerben lévő trombus és/vagy embólia helyét.
Claims (43)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás prokoaguláns aktivitással rendelkező, aktív vírusoktól mentes vérlemezkemembrán-mikrorészecskék előállítására, azzal jellemezve, hogya) vérlemezkéket, ghost vérlemezkéket vagy membránfrakciójukat - amelyet adott esetben ismert módon frissen állítunk elő, és kívánt esetben ismert módon roncsolunk, kívánt esetben frakcióira választunk szét és/vagy kívánt esetben tisztítunk - legalább 60 °C hőmérsékleten hőkezelünk, és kívánt esetben a hőkezelés előtt vagy után homogenizálunk, és a membránmikrorészecske-frakciót izoláljuk, vagyb) membránmikrorészecske-frakciót legalább 60 °C hőmérsékleten hőkezelünk, és kívánt esetben a hőkezelt membránmikrorészecskéket liofilizáljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy frissen gyűjtött vérlemezkéket vagy használhatósági időn túli vérlemezkéket alkalmazunk.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy frissen gyűjtött vagy használhatósági időn túli ghost vérlemezkéket alkalmazunk.
- 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vörös- és fehérvérsejtektől mentes vérlemezkét alkalmazunk.
- 5. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy plazmaszennyeződésektől mentes vérlemezkéket alkalmazunk.
- 6. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vörös- és fehérvérsejtektől és plazmaszennyeződésektől mentes vérlemezkét alkalmazunk.
- 7. A 4-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vérlemezkékből a vörös- és fehérvérsejteket és a plazmaszennyezést egyszeri vagy többszöri mosással távolítjuk el.
- 8. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyűjtött vérlemezkéket vagy azok membránfrakcióját alkalmazzuk.
- 9. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ghost vérlemezkeként vérlemezkék egyszeri vagy többszöri fagyasztásával és felolvasztásával kinyert ghost frakciót alkalmazunk.
- 10. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ghost vérlemezkeként a vérlemezkékből liofilizálással kinyert ghost frakciót alkalmazunk.
- 11. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ghost vérlemezkeként a vérlemezkékből hipotóniás roncsolással kinyert ghost frakciót alkalmazunk.
- 12. Az 1 -11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hőkezelés után homogenizálunk.
- 13. Az 1-3. vagy a 9-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ghost frakciót hőkezelünk.
- 14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a homogenizálást ultrahangkezeléssel végezzük.
- 15. A 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az ultrahangkezelést a hőkezelést követően végezzük el.
- 16. Az 1-15. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hőkezelés során képződöttHU 214 884 Β csapadékból a legfeljebb 1 μ méretű részecskéket izoláljuk.
- 17. Eljárás prokoaguláns aktivitással bíró, aktív vírusoktól mentes vérlemezkemembrán-mikrorészecskéket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-16. igénypontok bármelyike szerint előállított vérlemezkemembrán-mikrorészecskéket gyógyászati célra alkalmas hordozóanyaggal és adott esetben más, gyógyászati célra alkalmas hordozóanyaggal elegyítjük, és az elegyet gyógyászati készítménnyé formáljuk.
- 18. Eljárás diagnosztikai készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-16. igénypontok bármelyike szerint előállított vérlemezkemembrán-mikrorészecskéket radioizotóppal jelöljük, és szilárd hordozóhoz kötjük.
- 19. Prokoaguláns aktivitással bíró, aktív vírustól mentes vérlemezkemembránfragmens-készítmény.
- 20. A 19. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény lényegében mentes a ghost vérlemezkéktől.
- 21. A 19. igénypont szerinti vérlemezkemembránffagmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy lényegében mentes az 1 mikronnál nagyobb átmérőjű részecskéktől.
- 22. A 19-21. igénypontok bármelyike szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy HLA I osztály determinánsokra nézve nem antigén.
- 23. A 22. igénypont szerinti vérlemezkemembránffagmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy nem alloimmunogén.
- 24. A 22. igénypont szerinti vérlemezkemembránffagmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy nem immunogén.
- 25. A 22. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy GPIIb/IIIa komplextől lényegében mentes.
- 26. A 19-21. igénypontok bármelyike szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy GPIIb/IIIa komplextől lényegében mentes.
- 27. Vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy prokoaguláns aktivitással bír, és HLA I osztálybeli determinánsokra nézve nem antigén.
- 28. A 27. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy nem alloimmunogén.
- 29. A 27. vagy 28. igénypont szerinti vérlemezkemembránffagmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy ghost vérlemezkéktől lényegében mentes.
- 30. A 27. vagy 28. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy 1 mikronnál nagyobb átmérőjű részecskéktől lényegében mentes.
- 31. A 27. vagy 28. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy GPIIb/IIIa komplextől lényegében mentes.
- 32. A 30. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy GPIIb/IIIa komplextől lényegében mentes.
- 33. Prokoaguláns aktivitással bíró vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy GPIIb/IIIa komplextől lényegében mentes.
- 34. A 33. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy 1 mikronnál nagyobb átmérőjű részecskéktől lényegében mentes.
- 35. Prokoaguláns aktivitással bíró vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény vagy köztiterméke vírusinaktiváló kezelésen ment át.
- 36. A 35. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény vagy köztiterméke hőkezelt.
- 37. A 35. igénypont szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy GPIIb/IIIa komplextől lényegében mentes.
- 38. A 19., 21., 27., 33. vagy 34. igénypontok bármelyike szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyaga használhatósági időn túli vérlemezke.
- 39. Gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy gyógyászati szempontból hatásos mennyiségű, prokoaguláns aktivitással bíró, használhatósági időn túli vérlemezkékből készült vérlemezkemembránfragmens-készítményt és gyógyászati célra alkalmas hordozóanyagot tartalmaz.
- 40. A 39. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy gyűjtött, használhatósági időn túli vérlemezkékből készült.
- 41. A 19., 21., 27., 33., 34. vagy 39. igénypontok bármelyike szerinti vérlemezkemembránfragmens-készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény 4 °C hőmérsékleten legalább 8 hétig stabil.
- 42. Diagnosztikai készítmények, azzal jellemezve, hogy az 1-16. igénypontok bármelyike szerint előállított, radioizotóppal jelzett, szilárd hordozóhoz kötött vérlemezke-mikrorészecskéket tartalmaznak.
- 43. Diagnosztikai készítmények, azzal jellemezve, hogy a 19-41. igénypontok bármelyike szerinti, radioizotóppal jelzett, szilárd hordozóhoz kötött vérlemezke-mikrorészecskéket tartalmaznak.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/337,916 US5185160A (en) | 1984-06-21 | 1989-04-14 | Platelet membrane microvesicles |
| PCT/US1990/001989 WO1990012581A1 (en) | 1989-04-14 | 1990-04-12 | Platelet membrane microparticles |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU903374D0 HU903374D0 (en) | 1991-12-30 |
| HUT61200A HUT61200A (en) | 1992-12-28 |
| HU214884B true HU214884B (hu) | 2000-03-28 |
Family
ID=23322568
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU374/90A HU214884B (hu) | 1989-04-14 | 1990-04-12 | Vérlemezke membrán mikrorészecskék, ezeket tartalmazó gyógyászati és diagnosztikai készítmények és eljárás a mikrórészecskék és a készítmények előállítására |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5185160A (hu) |
| EP (2) | EP0467991B1 (hu) |
| JP (1) | JP2972329B2 (hu) |
| KR (1) | KR0162094B1 (hu) |
| AT (1) | ATE169501T1 (hu) |
| AU (2) | AU649398B2 (hu) |
| CA (1) | CA2051659C (hu) |
| DE (1) | DE69032559T2 (hu) |
| DK (1) | DK0467991T3 (hu) |
| ES (1) | ES2118721T3 (hu) |
| FI (1) | FI107702B (hu) |
| GR (1) | GR1001172B (hu) |
| HU (1) | HU214884B (hu) |
| IE (1) | IE990035A1 (hu) |
| NO (1) | NO306761B1 (hu) |
| WO (1) | WO1990012581A1 (hu) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5332578A (en) * | 1989-04-14 | 1994-07-26 | Prp, Inc. | Platelet membrane microparticles |
| US5428008A (en) * | 1989-04-14 | 1995-06-27 | Prp, Inc. | Therapeutic composition of micellar structures capable of promoting hemotasis |
| US6187572B1 (en) | 1990-04-16 | 2001-02-13 | Baxter International Inc. | Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants |
| US5358844A (en) * | 1993-02-18 | 1994-10-25 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Preservation of blood platelets |
| US5462752A (en) * | 1994-07-28 | 1995-10-31 | Prp, Inc. | Inhibition of platelet binding |
| AT407484B (de) * | 1997-11-12 | 2001-03-26 | Bio Prod & Bio Eng Ag | Arzneimittel zur förderung der wundheilung |
| DK1351697T3 (da) * | 2001-01-18 | 2014-01-20 | Georg Watzek | Lægemiddel til fremme af regenerationen af væv |
| US20050191286A1 (en) * | 2004-02-09 | 2005-09-01 | Gandy James B. | Lyophilized platelet rich plasma for the use in wound healing (chronic or acute) and bone or tissue grafts or repair |
| US20060004189A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-01-05 | James Gandy | Compositions for treating wounds and processes for their preparation |
| US20060142198A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-06-29 | Wound Care Partners Llc | Compositions for treating wounds and processes for their preparation |
| US20060165667A1 (en) * | 2004-12-03 | 2006-07-27 | Case Western Reserve University | Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization |
| DE102006045550A1 (de) * | 2006-09-25 | 2008-04-03 | Dade Behring Marburg Gmbh | Verfahren zur Herstellung von agglutionationsfähigen Thrombozytenfragmenten und deren Verwendung |
| EP3584310B1 (en) | 2008-09-16 | 2024-04-17 | Mayo Foundation for Medical Education and Research | Compositions containing platelet contents |
| CA2949225A1 (en) | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Cell culture media compositions for primary cells |
| EP3265116B1 (en) * | 2015-03-04 | 2021-06-02 | University of Rochester | Systemic and topical application of platelet microparticles to treat bleeding in trauma patients |
| US10596123B2 (en) * | 2015-03-11 | 2020-03-24 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Exosome delivery technology |
| WO2016205144A1 (en) * | 2015-06-14 | 2016-12-22 | Bluecircle Therapeutics, Inc. | Compositions of platelet-derived theranostics and uses thereof |
| CA3121200A1 (en) | 2018-11-30 | 2020-06-04 | Cellphire, Inc. | Platelets as delivery agents |
| US11767511B2 (en) | 2018-11-30 | 2023-09-26 | Cellphire, Inc. | Platelets as delivery agents |
| SG11202112054WA (en) | 2019-05-03 | 2021-11-29 | Cellphire Inc | Materials and methods for producing blood products |
| CA3150936A1 (en) | 2019-08-16 | 2021-02-25 | Cellphire, Inc. | Thrombosomes as an antiplatelet agent reversal agent |
| CA3170198A1 (en) | 2020-02-04 | 2021-08-12 | Cellphire, Inc | Methods of treating acquired hemophilia with anti-fibrinolytic loaded platelets |
| WO2021232015A1 (en) * | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Cellphire, Inc. | Platelet derived extracellular vesicles |
| WO2024192173A1 (en) * | 2023-03-14 | 2024-09-19 | Cellphire, Inc. | Hla-characterized platelet derivative compositions, and methods of making, selecting and using such compositions |
| CN117643621B (zh) * | 2023-10-27 | 2024-07-02 | 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） | 一种溶栓药PLT-r-SAK及其制备方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4994438A (en) * | 1981-11-02 | 1991-02-19 | Cedars Sinai Medical Center | Heat treatment of lyophilized plasma fractions |
| US4456590B2 (en) * | 1981-11-02 | 1989-05-30 | Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate | |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4760131A (en) * | 1986-04-23 | 1988-07-26 | Collagen Corporation | Wound-healing composition |
| US4764463A (en) * | 1986-10-30 | 1988-08-16 | The University Of Tennessee Research Corporation | Platelet cyropreservation |
| US4753797A (en) * | 1987-06-24 | 1988-06-28 | Miles Laboratories, Inc. | Enhancing platelet morphology prior to patient use |
-
1989
- 1989-04-14 US US07/337,916 patent/US5185160A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-04-12 DK DK90908046T patent/DK0467991T3/da active
- 1990-04-12 CA CA002051659A patent/CA2051659C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-04-12 DE DE69032559T patent/DE69032559T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-04-12 WO PCT/US1990/001989 patent/WO1990012581A1/en active IP Right Grant
- 1990-04-12 EP EP90908046A patent/EP0467991B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-12 JP JP2506787A patent/JP2972329B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-12 EP EP97113637A patent/EP0815866A3/en not_active Ceased
- 1990-04-12 AU AU55388/90A patent/AU649398B2/en not_active Ceased
- 1990-04-12 KR KR1019910701331A patent/KR0162094B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-04-12 HU HU374/90A patent/HU214884B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-04-12 ES ES90908046T patent/ES2118721T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-12 AT AT90908046T patent/ATE169501T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-04-12 IE IE19990035A patent/IE990035A1/en unknown
- 1990-04-17 GR GR900100286A patent/GR1001172B/el unknown
-
1991
- 1991-10-11 FI FI914819A patent/FI107702B/fi active
- 1991-10-14 NO NO914024A patent/NO306761B1/no not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-07-15 AU AU41950/93A patent/AU652317B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0467991B1 (en) | 1998-08-12 |
| CA2051659C (en) | 2001-08-07 |
| AU652317B2 (en) | 1994-08-18 |
| ATE169501T1 (de) | 1998-08-15 |
| WO1990012581A1 (en) | 1990-11-01 |
| GR1001172B (el) | 1993-06-07 |
| GR900100286A (en) | 1991-09-27 |
| FI914819A0 (fi) | 1991-10-11 |
| FI107702B (fi) | 2001-09-28 |
| JPH04506451A (ja) | 1992-11-12 |
| NO914024D0 (no) | 1991-10-14 |
| EP0815866A3 (en) | 1998-08-12 |
| EP0815866A2 (en) | 1998-01-07 |
| HU903374D0 (en) | 1991-12-30 |
| EP0467991A1 (en) | 1992-01-29 |
| DE69032559D1 (de) | 1998-09-17 |
| US5185160A (en) | 1993-02-09 |
| DE69032559T2 (de) | 1999-01-07 |
| NO306761B1 (no) | 1999-12-20 |
| EP0467991A4 (en) | 1993-01-07 |
| NO914024L (no) | 1991-10-14 |
| AU4195093A (en) | 1993-10-07 |
| KR920700661A (ko) | 1992-08-10 |
| AU649398B2 (en) | 1994-05-26 |
| IE990035A1 (en) | 2000-11-01 |
| ES2118721T3 (es) | 1998-10-01 |
| HUT61200A (en) | 1992-12-28 |
| AU5538890A (en) | 1990-11-16 |
| JP2972329B2 (ja) | 1999-11-08 |
| DK0467991T3 (da) | 1999-02-01 |
| KR0162094B1 (ko) | 1998-12-01 |
| CA2051659A1 (en) | 1990-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU214884B (hu) | Vérlemezke membrán mikrorészecskék, ezeket tartalmazó gyógyászati és diagnosztikai készítmények és eljárás a mikrórészecskék és a készítmények előállítására | |
| DE69230381T2 (de) | Rekonstituierte thrombozytenmembranvesikel | |
| Chao et al. | Infusible platelet membrane microvesicles: a potential transfusion substitute for platelets | |
| JP5204490B2 (ja) | 出血の制御及び出血性疾患の治療のための止血剤としての細胞由来微粒子 | |
| Gawaz et al. | Impaired function of platelet membrane glycoprotein IIb-IIIa in end-stage renal disease. | |
| Coller et al. | Thromboerythrocytes. In vitro studies of a potential autologous, semi-artificial alternative to platelet transfusions. | |
| EP0796623B1 (de) | Pharmazeutisches Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen | |
| Ludlam et al. | Factor VIII and fibrinolytic response to deamino‐8‐D‐argenine vasopressin in normal subjects and dissociate response in some patients with haemophilia and von Willebrand's disease | |
| US5462752A (en) | Inhibition of platelet binding | |
| US5332578A (en) | Platelet membrane microparticles | |
| JPH07507304A (ja) | 製薬的に許容しうる固定乾燥ヒト血液血小板 | |
| JP2011184465A (ja) | 止血を促進するためのフィブリノゲン標的微粒子 | |
| JP2007507480A5 (hu) | ||
| JP2020183446A (ja) | Ｐｅｇ化リポソームおよび血液凝固因子の製剤処方 | |
| Glaser et al. | Biochemical studies on the virus and the inclusion bodies of silkworm jaundice | |
| KR101077976B1 (ko) | 비-코카서스인의 혈장의 부분으로부터 생성된 범용적으로적용가능한 바이러스 불활성화 혈장 | |
| HU211345A9 (hu) | Vérlemezke-membrán mikrorészecskék Az átmeneti oltalom az 1-14. igénypontokra vonatkozik. | |
| Nour-Eldin | Bridge anticoagulant neutralizing agent: Properties and isolation | |
| Ashford et al. | The effect of Arvin on reticulo-endothelial activity in rabbits | |
| Gawaz et al. | Impaired Function of Platelet Membrane Glycoprotein lIb-Illa in End-Stage Renal Disease1’2 | |
| Nieuwland et al. | Chapterr 2 | |
| MXPA00001259A (en) | A universally applicable blood plasma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |