HU211508A9 - Compositions for treating viral infections in humans and compositions therefor - Google Patents

Compositions for treating viral infections in humans and compositions therefor Download PDF

Info

Publication number
HU211508A9
HU211508A9 HU95P/P00374P HU9500374P HU211508A9 HU 211508 A9 HU211508 A9 HU 211508A9 HU 9500374 P HU9500374 P HU 9500374P HU 211508 A9 HU211508 A9 HU 211508A9
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
azido
fluoro
compound
adg
virus
Prior art date
Application number
HU95P/P00374P
Other languages
English (en)
Inventor
Fritz Eckstein
Gerhard Hunsmann
Heinz Hartmann
Original Assignee
Medivir Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19873708849 external-priority patent/DE3708849A1/de
Priority claimed from US07/041,147 external-priority patent/US4880782A/en
Application filed by Medivir Ab filed Critical Medivir Ab
Publication of HU211508A9 publication Critical patent/HU211508A9/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgyi területe: A találmány olyan gyógyszerkészítményekkel foglalkozik, melyek alkalmasak az RNS-függő DNS-polimerázzal rendelkező vírusok okozta emberi betegségek kezelésére. Különösen a retrovírusos fertőzések, főleg a szerzett immunhiány szindrómát (AIDS) okozó humán immunhiányossági vírus (HlV)-fertőzés kezelésére szolgáló módszerek.
A találmány háttere és a megelőző ismeretek:
A szerzett immunhiány szindrómában (AIDS) szenvedő betegeket először 1981-ben figyelték meg. Noha az esetek kezdetben izoláltak voltak, és úgy tűnt, hogy a homoszexuális férfiakat érinti, ez a megfigyelés hamarosan helytelennek bizonyult, minthogy az AIDS valamennyi népességi csoportban széleskörűen elterjed.
A föld egyes helyein az AIDS fertőzés járvány jelleget öltött, és várható, hogy hamarosan más részein is hasonlójellegű lesz.
A 4 520 113 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalomban (benyújtva 1984. április 23-án) Gallo és munkatársai megállapítása szerint a bizonyítékok azt sugalják, hogy a betegség egy fertőző ágens átvitelével terjed. Az emberi szervezetben a kór elsődleges célpontja a T-sejtek speciális alpopulációja. A betegek súlyos immunhiánya abból adódik, hogy a limfocita populációjukban szokatlanul alacsony a „helper T-sejtek (T4) aránya, ezáltal lecsökkennek a T4 segítő funkciók, köztük a Bsejtek által történő antitestképzés’'.
Gallo és munkatársai [Science, 220 : 865 (1983. május 20.)] felvetik, hogy az AIDS kiváltó oka egy humán T-sejt leukémia vírus (HTLV). Ezekre a vírusokra jellemző a fokozott tropizmus a T4 sejtek irányába, a nagy molekulatömegű (100 kd) reverz transzkriptáz és az optimális enzimaktivitáshoz előnyös a Mg2+ jelenléte. Schüpbach és munkatársai [Science, 224 : 503-505 (1983. május 20.)], Bőrre - Sinussi és munkatársai [Science, 220: 868-871 (1983. május 20.)] egyetértenek a Gallo-féle feltételezéssel, és csak a vírus elnevezésben térnek el, amennyiben a nyirokcsomó-megbetegedés AIDS vírusának (LAV) nevezik. Jelenleg a legtöbb kutató a vírust humán immunhiány vírusnak (HÍV) hívja, és ezt az elnevezést használjuk a továbbiakban.
A mindig halálos kimenetelű HÍV fertőzés kezelésére alkalmas módszerek és hatóanyagok utáni kutatás csaknem azonnal megindult. Hangsúlyoznunk kell, hogy a kutatások több szinten indultak meg. Az első a „megelőző” szint, azaz megelőzni a fertőzés megjelenését. Ez a megközelítés előfordulást csökkentő módszereket jelent, ezekkel itt a továbbiakban nem foglalkozunk. A második megközelítés a vírussal szembeni immunválasz vakcinával történő kialakításának a kutatása. A kutatások ezen a területen több ok miatt is lassan haladtak. A HÍV fertőzés csak embernél fordul elő és mindig halálos. A vakcina kutatása általában egy elgyengített vagy elölt vírustörzs szervezetbe való bejuttatását jelenti, hogy ezáltal kialakulhasson az immunválasz. Állatkísérletek nem alkalmasak a vizsgálatokra, a humán kísérletekben rejtőző kockázat viszont túl nagy volt ahhoz, hogy előrehaladhasson a kutatás ezen a területen.
A harmadik megközelítő mód a „követő” másodlagos fertőzés kezelése, mely az után alakul ki, hogy a HÍV az immunrendszert tönkretette. Ilyen fertőzés eredménye például a Pseudomonas carnii által okozott tüdőgyulladás (PCP). A szulfametoxazol - kereskedelmi nevén a „Bactrim” - hatásos gyógyszer, azonban rendkívülien toxikus és sok AIDS beteg allergiás rá. Ezek a tényezők a gyógyszer felhasználhatóságát korlátozzák. Ahol a szulfametoxazol nem használható, a protozoaellenes pentamidinizetionátot alkalmazzák. Ez a hatóanyag hatásosnak bizonyult, ha az AIDS betegeknek intravénásán adják be vagy aerosol alakjában alkalmazzák, de ez is extrém módon toxikus és különféle ismert és feltételezett mellékhatásokat okoz. Hosszú idejű gyógykezelésre egyik hatóanyag sem alkalmazható.
A HÍV fertőzés kezelésének negyedik módja a vírusok szaoorodásának megakadályozása. Ez a terület sokkal több figyelmet kapott, mert végüli s ez az egyetlen megközelítési mód, mely az eredeténél szünteti meg vagy korlátozza a fertőzést.
Az e területen használt jelenlegi hatóanyag az AZTként is jelölt azidotimidin. Szigorúan meghatározott kísérletek szerint az AZT megzavarja a vírus szaporodását, ami a fertőzés enyhülését eredményezi.
Azonban az AZT-vel is problémák vannak, mert toxikus és feltehetően elnyomja a csontvelő működését [lásd például: Kolata, Science, 225: 1463 (1987. március 20.)]. Az AZT kezelés nagyon szigorú körülményeket igényel, melyekhez a betegeknek alkalmazkodnia kell, hogy a kezelés hatásos legyen. Ennek és az AZT toxicitásának ellenére a kutatások nem álltak le a hatóanyag pozitív eredményének elérését követően.
A jelen találmány tárgya olyan gyógyszerkészítmény, mely alkalmas a humán immunhiány vírus okozta fertőzésben szenvedő betegek kezelésére vagy legalábbis az alkalmazható választék nyújtására.
A találmány összefoglalása:
A találmány olyan gyógyszerkészítménnyel foglalkozik, mely alkalmas az RNS-függő DNS-polimerázzal jellemezhető fertőzés kezelésére. A készítmény legalább egy, az alábbi általános képlettel - ahol X jelentése azidocsoport, metoxicsoport vagy fluoratom; B jelentése timin-, uracil-, guanin-, citozin-, hipoxantin- vagy puringyök, amennyiben X jelentése metoxicsoport vagy fluoratom; vagy B jelentése guanin-, purin- vagy hipoxantingyök, amennyiben X jelentése fluoratom - jellemzett vegyületnek vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sójának antivirális mennyiségét tartalmazza. A készítmény a szokásos gyógyászati szempontból alkalmazható vivőanyagokat és hígítókat is tartalmaz.
Az ábrák rövid leírása: az
1. ábra a HÍV vírus MT4 sejtekre gyakorolt patogenitásának grafikus ábrázolása, a
2. ábra a 3’-azido-2‘ ,3'-dideoxi-guanozinnal kezelt és HÍV vírussal fertőzött sejtek in vitro életképességvizsgálata, a
3. ábra a 3’-trifluor-2’ ,3’-dideoxi-guanozinnal kezelt és HÍV vírussal fertőzött sejtek in vitro életképességvizsgálata, a
HU 211 508 A9
4. ábra a 3’-fluor-2’ ,3’-dideoxiguanozinnal kezelt és HÍV vírussal fertőzött sejtek in vitro életképességének vizsgálata, az
5. ábra a 3’-azido-2’ ,3’-dideoxiinozinnal kezelt és
HÍV vírussal fertőzött sejtek életképességének a vizsgálata.
A találmány előnyös kivitelezésének részletes leírása:
A fent leírt aktív anyagok a timidin, uridin, guanozin, citidin, purin vagy az inozin típusú bázisok 9-(βD-deoxiribofuranozil) nukleozidjai. Különösen jelentős a 3’-azido-2’,3’ -dideoxiguanozin, a 3’-azido-2’,2’dideoxiinozin, a 3’-fluor-2’,3’-dideoxiguanozin és a 3’-fluor-3’-deoxitimidin. Az első vegyületet Imazawa és munkatársai [J. Org. Chem. 43: 3044-3048 (1978)] módszerével állítottuk elő.
Meglepő, hogy a találmány szerinti vegyületek aktívaknak bizonyultak a HÍV fertőzéssel szemben, mert Clerco és munkatársai szerint [Biochem. Pharm., 29: 1849-1851 (1980)] a 3’-azido-2’,3’-dideoxiguanozinnak nincs kimutatható antivirális hatása a tehénhimlő, a herpes simplex 1 vagy a vesicularis stomatitis vírussal szemben.
A 3'-azido-2’,3’-dideoxiguanozin előállítása általában a megfelelő 5’-O-acetil- vagy 5’-O-trimetil-szilil3’-azido-3’-deoxitimidin szililezett N2-palmitoil-guaninnal történő transzglikozilálásával történik trimetilszilil-trifluor-metánszulfonát katalizátor jelenlétében.
A megfelelő hipoxantin-vegyület analóg módon állítható elő a megfelelő palmitoil-hipoxantin felhasználásával. Ezek a guanin- és hipoxantin-vegyületek előállíthatók úgy is, hogy az N. D. Dyatkina és A. V. Azhayev által leírt módszerrel [Synthesis, 1984, 961. old.) előállított l-O-metil-5-O-(4-metil-benzoil)-3-azido-2,3-dideoxi-D-ribofuranózt szililezett guaninnal vagy hipoxantinnal reagáltatjuk katalizátor, például trimetil-szilil-trifluor-metánszulfonát jelenlétében H. Vorbruggen, K. Krokiewics és B. Benna által leírt eljárás szerint [Chem. Bér., 114: 1234 (1981)].
A megfelelő guanin vagy hipoxantin vegyületeket, melyek fluoratomot vagy metoxicsoportot viselnek a 2-deoxi-ribofuranozil 3-as helyén, a 3’-fluor-3’-deoxitimidinből vagy a 3’-0-metil-3-deoxitimidinből nyerhetjük ugyanilyen transzglikozilációval. A G. Kowollik, K. Gártner, P. Lángén módszerével (Tetrahedron Letters, 1969. 3863) előállított 2,3’-anhidro-l-(2-deoxi^-D-xilofuranozil)-timidin (röviden: O2, O3,-ciklotimidin) kiindulási anyagként szolgál. Nátrium-metiláttal való reakcióval 3’-O-metil-3’-deoxitimidint állítunk elő. A 3'-fluor-3'-deoxitimidin és az előállítása G. Etzold, R. Hintsche, G. Kowallik és P. Lángén [Tetrahedron, 27:2463-2472 (1971)] cikkéből ismert. Az előállításnál dietilén-glikolban ciklotimidint reagáltatunk kálium-hidrogén-difluoriddal. A reakcióterméket szilikagéloszlopon különítjük el, eluensként kloroform és metanol elegyét használva. A második tisztítási lépést LiChroprep RP-18 oszlopon végezzük 50 mM trietilammónium-karbonát és 5% acetonitril elegyet használva eluensként.
A 3'-fluor-3’-deoxitimidin előállítható így is, hogy a G. Kowallik, G. Etzold, M. von Janta, Lipinski, K.
Gártner, B, Lángén szerint [J. Prakt. Chem., 315:895 (1973)] módszerével előállított ciklotimidint fluor-hidrogén-savval és alumínium-trifluoriddal reagáltatjuk. Alternatív módon a ciklotimidint dimetil-formamidban vagy dioxánban reagáltatjuk 18-crown-6-koronaéterrel. A hipoxantin-vegyületek előállíthatók a megfelelő adenin-vegyületből - melyek részben ismertek a fent idézett irodalomból - salétromsavval vagy nitrozil-kloriddal történő deaminációval.
A 3’-fluor-2’,3’-dideoxiuridin a 3’-fluor-3’-deoxitimidinnel analóg módon állítható elő [G. Etzold, R. Hintsche, G. Kowallik és P. Lángén, Tetrahedon, 27 : 2463-2472 (1971)]. A2,3-anhidro-l-(2’-deoxi^-D-xilofuranozil)-uracil (röviden: Oj.Orciklodeoxiuridin), az O2,O3-cikloetimidnnel analóg módon állítható elő [G. Kowallik, K. Gártner; P. Lángé, Tetrahedron Letters (1969) 3863] 2’-deoxiuridinből kiindulva. Ezután a ciklodeoxiuridint etilén-glikolban kálium-hidrogéndifluoriddal reagáltatjuk, 3’-fluor-2’,3’-deoxiuridint nyerve. Ez a vegyület szolgál kiindulási anyagként a 3’-fluor-2’,3’-deoxicitidin előállítására, amit Β. E L. Li, C. B. Reese és P. F. Swann [Biochem., 26: 1986— 1093 (1987)] vagy W. L. Sung [J. Org. Chem., 47: 3623-3628 (1982)] szerinti aminálással hajtunk végre difenil-foszfor-kloridáttal vagy triizopropil-benzolszulfonil-kloriddal végzett reakcióval vagy más alkalmas aktiváló reagensben nitrotriazol, triazoil vagy más megfelelő nukleofil jelenlétében, majd ezt követően ammóniával reagáltatunk.
A találmány szerinti hatóanyagok hatékonyságát olyan biológiai módszerrel határoztuk meg, ahol az AIDS-es vagy ARC-es betegekből izolált HÍV vírust fogékony humán T-sejtekkel tenyésztjük. Az így tenyésztett HÍV in vitro patogenitását MT4 sejtekkel határoztuk meg; ez olyan T4-sejtvonal, mely HIV-citopatikus. Az MT4 sejtvonalat a Science, 229 : 563-566 (1985) cikk írja le. A citopatológiás hatást a timidinnek a sejtekbe való beépülésével mérjük. Ha a HÍV vírussal inokulált MT4 sejtekhez a jelen találmány szerinti hatóanyagot, különösen ha a 3’-azido-2’,3’-dideoxiguanozint adunk, az még nanomólos koncentrációban is képes a sejteket a vírus citopatológiás hatásától megvédeni.
A toxicitás meghatározásához ugyanezt a rendszert használjuk. Ebben az esetben a HÍV vírust nem tartalmazó MT4 sejteket a jelen találmány szerinti készítményben szereplő nukleozidanalógoknak tesszük ki, és ugyancsak a timidin beépülés alapján meghatározzuk a toxicitást. Az antivirális hatást mutató koncentráció és a toxikus hatás kiváltásához szükséges hatóanyagmennyiség ismeretében meghatározzuk az in vitro terápiás indexet.
Az alkalmazott humán sejtvonal esetében ez a terápiás index a legelőnyösebb 3’-azido-2’,3’-dideoxiguanozin esetében: 103 vagy annál nagyobb; 3’-fluor-3’deoxitimidin esetében: nagyobb, mint 103; 3’-fluor2’,3’-dideoxiguanozin esetében: kb. 400. A vizsgálatokat úgy hajtjuk végre, hogy mikrotitter lemezen az MT4 sejtvonalhoz a vírust termelő sejtvonal felülúszójának hígítás! sorozatát adjuk. Ezzel egyidejűleg radioaktívan jelölt timidint is adunk a mikrotitterlemez lyu3
HU 211 508 A9 kaiba, és mérjük a sejtek életműködésével arányos timidinbeépülést. A találmány szerinti hatóanyag toxikus koncentrációjának vagy a vírust tartalmazó közeg citopatikus mennyiségének megfelelően a radioaktív timidin beépülése arányosan csökken. 5
Az 1. ábrán grafikusan szemléltetjük a vírust termelő sejtvonal HÍV vírust tartalmazó felülúszójának különböző víruskoncentrációknál gyakorolt hatását, a timidin MT4 sejtekbe történő beépülésére. A beépülési görbe azt mutatja, hogy 1:30 hígításban a HÍV vírus 10 patogenitása nagyon alacsony timidinfelvételt eredményez. majd a felvétel növekszik és a legmagasabb értékét 1:10 000 hígítású vírusos felülúszónál éri el. Az
1. ábra szerint az 1:40 arányú felülúszóhígításnál a
HÍV vírus MT4 sejtekre gyakorolt maximá- 15 lis patogenitása még megfigyelhető. A jelen találmány szerinti gyógyszerkészítmények hatóanyagainak hatékonyságát ennél a vírushígításnál határozzuk meg, a vizsgálandó hatóanyagot hozzáadva a sejtvonalhoz és 20 megállapítva ismét a timidinbeépülést. Az
2. ábrán az előnyös 3’-azido-2’,3’-dideoxiguanozinnal kapott eredményt szemléltetjük. Az ábrán grafikusan tüntettük fel a hozzáadott hatóanyagmennyiség (pg/ml) és a timidinbe- 25 épülés (cpm, counts per minute) közötti összefüggést. A (-)HIV jelzéssel ellátott görbét vírus távollétében a (+)HIV jelzéssel ellátott görbét vírus jelenlétében nyerjük. Látható, hogy a 0,3 pg/ml hatóanyagkon- 30 centrációnál 50%-os védelmet kapunk az 1:40 hígítású HÍV vírusos felúszóval szemben. A
3. ábra a 2. ábrával analóg módon mutatja a 3’-fluor-3-deoxitimidin mennyisége (pg/ml) és a 35 timidinbeépülés (cpm) közötti összefüggést. Látható, hogy kevesebb, mint 0,002 μg/ml koncentrációnál már 50%-os védelmet érünk el az 1:40 hígítású HÍV vírusos felülúszóval szemben. A 40
4. ábra analóg módon a 3’-fluor-2’,3’-dideoxiguanozin in vitro antivirális aktivitását szemlélteti. Ez a hatóanyag 1,5 μg/ml koncentrációnál mutat 50%-os védelmet az 1:40 hígítású HÍV vírusos felülúszó patogén hatásával szemben. Az
5. ábrán azoknak a kísérleteknek az eredményeit mutatjuk be, melyeknél 3’-azido-2’,3’-dideoxiinozint adunk hatóanyagként. Az inozin-vegyület toxicitása magasabb, de a timidin HÍV vírussal fertőzött sejtekbe való beépülése itt is növekszik, és csaknem azonos, mint a vírussal nem fertőződött T4 sejteknél.
2. példa
Az alábbi példában a HÍV vírus fitohemaglutinnel (PHA) stimulált perifériás vérlimfocitákban (PBL) történő termelődésének gátlását tanulmányozzuk. A perifériás vérlimfociták mintáit PHA-val stimuláljuk, és ezután adjuk a HÍV vírust közvetlenül abban a tenyészetbe, amelybe a sejtek növekedtek. Azokhoz a mintákhoz, melyekhez hatóanyagot is adunk, ez az adagolás közvetlenül a vírus hozzáadása után történik.
A hatóanyag hozzáadását követően a jelenlévő HÍV vírus mennyiségét radioimmunassay-jel határozzuk meg, ami a HÍV vírus „p24” komponensén alapszik. Az alkalmazott radioimmunassay érzékenysége 20-0,625 pg/ml.
A vizsgálatnál lényeges, hogy meghatározzuk a PBL-k életképességét is. Ezt a radioaktív timidin beépülésén keresztül végezzük az 1. példában leírtak szerint.
Minden hatóanyagnál különböző koncentrációkat alkalmazunk: azido-timidinnél (AZT) ez 1; 0,1 és 0,01 mM, míg 3’-azido-2’,3’-dideoxi-guanozinnál (ADG) a dózisok: 3; 0,3; 0,003 és 0,0003 μg. A pozitív kontrollok („+”) HÍV vírust kapnak, de hatóanyagot nem, a negatív kontrollok (,.-”) hatóanyagot nem kapnak, de vírust sem. A vizsgálatokat a tenyészet 4., 7., és 14. napján végezzük. Mindegyik alkalommal a tápközeget friss közeggel cseréljük ki.
A kapott eredményeket az I. táblázatban foglaltuk össze.
/. TÁBLÁZAT
minta nap dátum beütési szám 1 beütési szám 2 átlag nettó,%B/Bo ng p24/ml
Összbeütés 5639 5478 5423,5
vak 151 138 144,5 0,0
„O standard 3187 2932 3059,5 2915,0 100,0%
0,625 ng 2695 2724 2709,5 2565,0 88,0%
1,25 ng 2492 2497 2494.5 2350,0 80,6%
2.5 ng 1981 2105 2043 1898,5 65,1%
5.0 ng 1494 1472 1483 1338,5 45.9%
10,0 ng 815 899 857 712,5 24,4%
20,0 ng 546 498 522 377,5 13,0%
AZT1 4 1700 1684 1692 1547,5 53,1% 3.7
AZT 0,1 4 1600 1708 1689 1544,5 53,0% 3,7
HU 211 508 A9
minta nap dátum beütési szám 1 beütési szám 2 átlag nettó,%B/Bo ng p24/ml
AZT 0,01 4 1759 1692 1725,5 1581,0 54,2% 3,6
(+) kontroll 4 307 314 310,5 166,0 5,7% 20
(+) kontroll 4 3209 3165 3187 3042,5 104,4% 0
(-) kontroll 4 2709 2771 2740 2595,5 89,0% 0
ADG 3 4 1587 1730 1658,5 1514,0 51,9% 3,8
ADG 0,3 4 1215 1208 1211,5 1067,0 36,6% 6,8
ADG 0,03 4 357 360 358,5 214,0 7,3% 20
ADG 0,003 4 396 376 386 241,5 8,3% 20
AZT 1 7 2310 1957 2133,5 1989,0 68,2% 2,2
AZT 0,1 7 2304 2369 2336,5 2192,0 75,2% 1,6
AZT 0,01 7 1959 1960 1959,5 1815,0 62,3% 2,7
(+) kontroll 7 224 232 228 83,5 2,9% 20
(+) kontroll 7 293 239 266 121,5 4,2% 20
(-) kontroll 7 2649 2839 2744 2599.5 89,2% 0
ADG 3 7 2255 2255 2110,5 72,4% 1,8
ADG 0,3 7 1047 843 945 800,5 27,5 10
ADG 0.03 7 316 262 289 144,5 5,0% 20
ADG 0.003 7 294 283 288,5 144,0 4,9% 20
AZT 1 11 2458 2483 2470,5 2326,0 79,8% 1,25
AZT 0,1 11 2531 2340 2435,5 2291,0 78,6% 1,3
AZT 0,01 11 501 485 493 348,5 12,0% 20
(+) kontroll 11 249 236 242,5 98,0 3,4% 20
(+) kontroll 11 242 260 251 106,5 3,7% 20
(-1 kontroll 11 2770 2817 2793,5 2649,0 90,9% 0
ADG 3 11 2653 2592 2622,5 2478,0 85,0% 0,9
ADG 0,3 11 277 287 282 137,5 4,7% 20
ADG 0,03 11 225 242 233,5 89,0 3,1% 20
ADG 0.003 11 201 225 213 68,5 2,3% 20
AZT 1 14 2652 2558 2605 2460,5 84,4% 0,94
AZT 0.1 14 2151 2048 2099,5 1955,0 67,1% 2,3
AZT 0,01 14 351 299 325 180,5 6,2% 20
(+) kontroll 14 277 309 293 148,5 5,1% 20
(+) kontroll 14 227 245 236 91,5 3,1% 20
(-) kontroll 14 2393 2665 2529 2384,5 81,8% 1,1
ADG 3 14 2725 2721 2723 2578,5 88,5% 0,6
ADG 0,3 14 316 297 306,5 162,0 5,6% 20
AG 0,03 14 292 282 287 142,5 4,9% 20
ADG 0,003 14 288 260 274 129,5 4,4% 20
Érdemes megjegyezni, hogy az ADG 3 gg koncentrációnál kissé hatékonyabb volt. mint az AZT. Úgy az AZT. mint az ADG az alacsonyabb koncentrációknál kb. azonos mértékben veszít a hatékonyságából. A hatóanyagok nem mutatnak toxicitást a PBLkal szemben sem, minthogy a timidinnel kapott „beütési szám” azt bizonyítja, hogy a sejt életképessége jó maradt.
A II. táblázatban ezeket a RIA adatokat foglaltuk össze 106 sejt/ml-re megadva.
HU 211 508 A9
II. TÁBLÁZAT
minta nap nettó beütés CPM/ml sejt + 06 CPM/1 + 06 sejt
AZT 1 μΜ 7 380,0 2,9E + 03 3,72 7,66E + 02
AZT 0,1 μΜ 7 47,0 3.5E + 02 4,08 8.64E + 01
AZT 0,01 μΜ 7 784,0 5,9E + 03 3,3 1.78E + 03
(+) kontroll 7 41,186,0 3.1E + O5 2,92 1,06E + 05
(+) kontroll 7 62,298,0 4,7E + 05 3,68 1.27E + 05
(-) kontroll 7 21,0 1.6E + 02 4 3,94E + 01
ADG 3 pG 7 325,0 2,4E + 03 3,7 6.59E + 02
ADG 0,3 pG 7 1,704,0 1.3E + 04 3,92 3,26E + 03
ADG 0,03 pG 7 36,160,0 2,7E + 05 2,68 1.01E + 05
ADG 0,003 pG 7 43,236,0 3,2E + 05 3,78 8.58E + 04
AZT 1 μΜ 11 (1,084,0) -8.1E + 03 5,02 -1.62E + 03
AZT 0,1 μΜ 11 163,0 1.2E + 03 4,9 2.49E + 02
AZT 0,02 μΜ 11 3,681,0 2,8E + 04 3,84 7.19E + 03
(+) kontroll 11 44,567,0 3,3E + 05 4,22 7.92E + 04
(+) kontroll 11 48,778,0 3,7E + 05 4,44 8,24E + 04
(-) kontroll 11 (1,225,0) -9,2E + 03 5,72 -1.61E + 03
ADG 3 pG 11 (1,280,0) -9,6E + 03 5,84 -1.64E + 03
ADG 0,3 pG 11 24,287,0 1,8E + 05 4,84 3,76E + 04
ADG 0,03 pG 11 52,529,0 3,9E + 05 4,48 8,79E + 04
ADG 0,003 pG 11 38,738,0 2,9E + 05 4,7 6.18E + 04
AZT 1 μΜ 14 76,0 5.7E + 02 3,68 1.55E + O2
AZT 0,1 μΜ 14 519,0 3,9E + 03 3,98 9.78E + 02
AZT 0.01 μΜ 14 18,411,0 1.4E + 05 5,75 2.41E + 04
(+) kontroll 14 15,864.0 1.2E + 05 5,02 2,37E + 04
(+) kontroll 14 27,525,0 2.1E + 05 4.72 4.37E + 04
(—) kontroll 14 (405,0) -3,0E + 03 3,98 -7,63E + 02
ADG 3 pG 14 (12,0) -9.0E + 01 3,5 -2.57E + 01
ADG 0.3 pG 14 19,307,0 1,4E + 05 3,08 4.70E + 04
ADG 0.03 pG 14 30,818,0 2,3E + 05 3,66 6.32E + 04
ADG 0.003 pG 14 31,978,0 2,5E + 05 4,36 5,67E + 04
Az eredmények azt mutatják, hogy az ADG 0,3-3 pg/ml dózistartományban hatásos. Hasonló eredmények várhatók a 3’-azido-2',3’-dideoxiguanozin esetében is.
3. példa
A 2. példában leírtakat ismételjük meg 3’-fluor2 ,3'-dideoxiguanoziddal. A 3’-fluor-2',3’-dideoxiguanozidot a 3'-azido-2',3'-dideoxiguanoziddal analóg módon állítjuk elő. [Imazowa és Eckstein, J. Org. Chem., 43:3044 (1978)] a 3’-fluor-3’-deoxitimidin [előállítva G. Etzold és munkatársai módszerével, Tetrahedron, 27:2463 (1971) palmitoil-guaninnel történő transzglikozidálásával. A reakcióelegyet acetonitrilben forraljuk 60 percen át visszafolyató hűtő alatt bisz(trimetil-szilil)-acetamid és trimetil-szilil-trifluor-metánszulfát jelenlétében. Szilikagél rétegen való kromatografálásnál a termék valamivel nagyobb Rf értéknél (0,43) jelenik meg a kromatogramon, mint a timin (0,38). Ezt a terméket metanolban egy éjszakán át 50 °C-on reagáltatjuk ammóniával. Az elegy szárazra párlása után a terméket víz/metanol elegyben oldjuk és LiChroprep RP-18 oszlopon kromatografáljuk, eluensként 6% acetonitrilt tartalmazó 50 mM trietil-ammónium-hidrogén-karbonát oldatot (pH = 7,5) használva. A terméket tartalmazó frakciók bepárlása után, a terméket ismét bepárolva metanolból, kristályos 9-(3-fluor2,3-dideoxi-|3-D-ribofuranozil)-guanint kapunk. Op.: >230 ’C
Ή-NMR (DMSO), δ, 6,15 ppm (dd, 1 H, Jjhf - 53 Hz, H = 3’), 4,14 (dm, 1 H,
J44 j = (dm, 1 H, J = 32 Hz, H-4’).
HPLC: ODS-Hypersil oszlopon, lineáris grádiens
100 mM trietil-ammónium-hidrogén-karbonáttal (pH 6
HU 211 508 A9
7,5) és acetonitrillel (0-15%, 15 percen belül); retenciós idő: β-anomer: 8,8 perc. a-anomer: 6,8 perc. Hozam: 15%.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények a hatóanyagot tartalmazhatják szabad állapotban vagy gyógyászati szempontból alkalmazható só alakjában, a hatóanyag nevezetesen az előzőekben ismertetett általános képletű vegyület vagy vegyületek keveréke. A gyógyszerkészítmény tartalmazhat továbbá adalékanyagokat és hígítóközegei az adagolás módjának megfelelően.
A bejuttatás történhet szájon át, parenterálisan, hüvelyen keresztül vagy intravénásán, melyek közül az orális adagolás az előnyös. Az előnyös napi dózis egy 70 kg testsúlyú embernél 1-20 g közötti tartományban van. Az optimális dózis és a bevitel módja esetről esetre változik.
Noha leírtuk a találmány előnyös kivitelezési módját, a szakemberek előtt nyilvánvaló, hogy különféle változtatások és módosítások végezhetők rajta anélkül, hogy eltérnénk a találmánytól és ezért mindezek a változatok és módosulatok beletartoznak a találmány oltalmi körébe.

Claims (10)

1. Gyógyszerkészítmény az RNS-függő DNS polimerázzal jellemzett fertőzés kezelésére, azzal jellemezve, hogy az alábbi általános képletű - ahol
X jelentése azidocsoport, metoxicsoport vagy fluoratom,
B jelentése timin-, uracil-, guanin-, citozin-, purinvagy hipoxantingyök, ha X jelentése metoxicsoport vagy fluoratom; vagy guanin-, purin- vagy hipoxantingyök, ha X jelentése azidocsoport vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója antivirális mennyiségét tartalmazza gyógyászati szempontból alkalmazható vivőanyag kíséretében.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az általános képletben X jelentése fluoratom vagy metoxicsoport és B jelentése timin-, uracil-, guanin-, citozin-, purin- vagy hipoxantingyök.
3. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a nevezett vegyület a 3’-azido-2’,3’-dideoxiguanozin.
4. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a nevezett vegyület a 3’-fluor-3’-deoxitimidin.
5. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a nevezett vegyület a 3’-fluor-2’,3’-dideoxiguanozin.
6. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a nevezett vegyület a 3’-azido-2’,3’-dideoxiinozin.
7. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a nevezett vegyület 1-20 g napi dózisnak megfelelő mennyiségben van jelen.
8. 3’-fluor-2',3'-dideoxiguanozin.
9. 3’-azido-2’,3’-dideoxiinozin.
10. Fertőzés kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény, mely lényegét tekintve azonos a példákban leírtakkal.
HU95P/P00374P 1987-03-18 1995-06-22 Compositions for treating viral infections in humans and compositions therefor HU211508A9 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19873708849 DE3708849A1 (de) 1987-03-18 1987-03-18 Arzneimittel zur behandlung von viruserkrankungen
US07/041,147 US4880782A (en) 1986-11-21 1987-04-22 Method of treating viral infections in humans and compositions therefor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU211508A9 true HU211508A9 (en) 1995-11-28

Family

ID=25853652

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU95P/P00374P HU211508A9 (en) 1987-03-18 1995-06-22 Compositions for treating viral infections in humans and compositions therefor

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP0286825A3 (hu)
AU (1) AU609099B2 (hu)
DK (1) DK147088A (hu)
HU (1) HU211508A9 (hu)
NO (1) NO881190L (hu)
NZ (1) NZ223865A (hu)
PT (1) PT87004B (hu)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5084445A (en) * 1986-05-01 1992-01-28 University Of Georgia Research Foundation, Inc. 3'-azido-2',3'-dideoxy-5-methylcytidine
US5077279A (en) * 1986-05-01 1991-12-31 University Of Georgia Research Foundation, Inc. 3'-azido-2',3'-dideoxy-5-methylcytidine anti-viral composition
JPH01265099A (ja) * 1987-10-08 1989-10-23 Stichting Rega Vzw 抗ｈｉｖ活性をもつ３’，−フルオロプリン−２’，３’−ジデオキシリボシド類
US5157114A (en) * 1988-08-19 1992-10-20 Burroughs Wellcome Co. 2',3'-dideoxy-3'-fluoro-5-ethyngluridine
SE464168B (sv) * 1989-07-19 1991-03-18 Bo Fredrik Oeberg Antiviral komposition bestaaende av en 3'-fluoro-2',3'-dideoxynukleosidfoerening och en 2',3'-dideoxynukleosidfoerening (exempelvis azt)
KR910007655A (ko) * 1989-10-03 1991-05-30 엠. 피. 잭슨 치료용 뉴클레오시드
JPH05501404A (ja) * 1989-11-06 1993-03-18 ニユコメド・アクシエセルカペト ヌクレオシド誘導体
SE9003151D0 (sv) * 1990-10-02 1990-10-02 Medivir Ab Nucleoside derivatives
GB9105899D0 (en) * 1991-03-20 1991-05-08 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
US5869493A (en) 1996-02-16 1999-02-09 Medivir Ab Acyclic nucleoside derivatives

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD209197A1 (de) * 1981-07-21 1984-04-25 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung von 3'-fluor-2',3'-didesoxyguanosin
SU1053474A1 (ru) * 1982-02-08 1985-08-07 Институт биоорганической химии АН БССР 3-Фтор-2,3-дидезоксигуанозин,про вл ющий цитостатическую активность
US4724232A (en) * 1985-03-16 1988-02-09 Burroughs Wellcome Co. Treatment of human viral infections
CY1508A (en) * 1985-03-16 1990-08-03 Wellcome Found Antiviral nucleosides
CA1285935C (en) * 1985-03-16 1991-07-09 Janet Lister Rideout Therapeutic nucleosides
DK167377B1 (da) * 1985-09-17 1993-10-25 Wellcome Found 3'-azidopyrimidinnucleosider eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf til anvendelse ved behandling af eller profylakse for en human retrovirusinfektion
DE3739432A1 (de) * 1987-02-24 1989-06-01 Multivac Haggenmueller Kg Verpackungsmaschine

Also Published As

Publication number Publication date
PT87004B (pt) 1992-06-30
DK147088A (da) 1988-09-19
EP0286825A3 (en) 1989-04-12
PT87004A (pt) 1988-04-01
EP0286825A2 (en) 1988-10-19
AU609099B2 (en) 1991-04-26
DK147088D0 (da) 1988-03-17
NO881190L (no) 1988-09-19
NO881190D0 (no) 1988-03-17
AU1308188A (en) 1988-09-22
NZ223865A (en) 1990-06-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4880782A (en) Method of treating viral infections in humans and compositions therefor
DE3882985T2 (de) Adenosin-deaminase-stabile anti-retroviral-nukleoside.
US4788181A (en) 5-substituted-2',3'-dideoxycytidine compounds with anti-HTLV-III activity
US4861759A (en) Antiviral compositions and methods
Hayashi et al. Cyclobut-A and cyclobut-G, carbocyclic oxetanocin analogs that inhibit the replication of human immunodeficiency virus in T cells and monocytes and macrophages in vitro
CA1286991C (en) Medicament for the treatment of virus infections
Hartmann et al. Enhanced in vitro inhibition of HIV-1 replication by 3′-fluoro-3′-deoxythymidine compared to several other nucleoside analogs
WO1996022778A1 (en) Derivatives of succinamide and their use as metalloproteinase inhibitor
HU211508A9 (en) Compositions for treating viral infections in humans and compositions therefor
US5616566A (en) Method of inhibiting HIV replication with 2',3'-dideoxyadenosine
US5446029A (en) Anti-retroviral activity of 2',3'-dideoxy-3'-fluoronucleosides
EP0216511B1 (en) Inhibition of in vitro infectivity and cytopathic effect of HTLV-III/LAV by 2'3'-dideoxycytidine
EP0294443B1 (en) Use of nucleosides for the manufacture of medicament for treatment of diseases caused by retrovirus or hepatitis b virus
AU637975B2 (en) Therapeutic uses of 2',5'-oligoadenylate derivatives
Kulikowski et al. Synthesis and antiviral activities of arabinofuranosyl-5-ethylpyrimidine nucleosides. Selective antiherpes activity of 1-(. beta.-D-arabinofuranosyl)-5-ethyluracil
WO1988003804A2 (en) Method of treating viral infections in humans and compositions therefor
EP0258412A1 (en) Composition for and method of treating aids and certain related diseases
WO1990003978A1 (en) 5-halogeno-3'-fluoro-2',3'-dideoxyuridine compounds and their therapeutic application
RU2183213C2 (ru) Модифицированные нуклеозид-5'-трифосфаты как антивирусные агенты
US4990499A (en) Anti-herpes simplex virus activity of 5-alkoxymethyl-2'-deoxycytidimes and their 5-monophosphates
Prusoff Idoxuridine or how it all began
EP2402357A1 (en) Analogs of 2',3'-dideoxy-3'-fluorothymidine 5'-monophosphate (FLTMP) for treatment human immunodeficiency virus (HIV), their application and pharmaceutically acceptable form of drug
EP0493378A1 (en) Use of 2',3'-dideoxyguanosine for the treatment of AIDS