HU207227B - Process for producing pharmaceutical compositions containing acid-resistant fibroblast growth factor for treating gastrointestinal ulcers - Google Patents
Process for producing pharmaceutical compositions containing acid-resistant fibroblast growth factor for treating gastrointestinal ulcers Download PDFInfo
- Publication number
- HU207227B HU207227B HU895785A HU578589A HU207227B HU 207227 B HU207227 B HU 207227B HU 895785 A HU895785 A HU 895785A HU 578589 A HU578589 A HU 578589A HU 207227 B HU207227 B HU 207227B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- acid
- fgf
- composition
- resistant
- ulcer
- Prior art date
Links
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 title abstract description 90
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 title abstract description 90
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 title abstract description 88
- 206010061459 Gastrointestinal ulcer Diseases 0.000 title description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 59
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 14
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 71
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims description 65
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims description 33
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 26
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 17
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 14
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 13
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 claims description 12
- 229960001380 cimetidine Drugs 0.000 claims description 12
- CCGSUNCLSOWKJO-UHFFFAOYSA-N cimetidine Chemical group N#CNC(=N/C)\NCCSCC1=NC=N[C]1C CCGSUNCLSOWKJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 5
- 239000002731 stomach secretion inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- BVPWJMCABCPUQY-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-chloro-2-methoxy-N-[1-(phenylmethyl)-4-piperidinyl]benzamide Chemical compound COC1=CC(N)=C(Cl)C=C1C(=O)NC1CCN(CC=2C=CC=CC=2)CC1 BVPWJMCABCPUQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 4
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000159 acid neutralizing agent Substances 0.000 claims description 4
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 claims description 4
- 229960000620 ranitidine Drugs 0.000 claims description 3
- VMXUWOKSQNHOCA-LCYFTJDESA-N ranitidine Chemical compound [O-][N+](=O)/C=C(/NC)NCCSCC1=CC=C(CN(C)C)O1 VMXUWOKSQNHOCA-LCYFTJDESA-N 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001175 peptic effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 45
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 11
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010023799 Large intestinal ulcer Diseases 0.000 description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 7
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 7
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 6
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 5
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- COWYTPMAAISPHT-SWSWVKNJSA-A chembl411368 Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].[K+].O1C(COS([O-])(=O)=O)[C@@H]2C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(COS([O-])(=O)=O)O1)C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@H]1O[C@H](C(COS([O-])(=O)=O)O1)C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@H]1O[C@H](C(COS([O-])(=O)=O)O1)C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@H]1O[C@H](C(COS([O-])(=O)=O)O1)C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@H]1O[C@H](C(COS([O-])(=O)=O)O1)C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@H]1O[C@H](C(COS([O-])(=O)=O)O1)C(O)C(OS([O-])(=O)=O)[C@H]1O2 COWYTPMAAISPHT-SWSWVKNJSA-A 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 5
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 4
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 4
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 4
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 4
- -1 renitidine Chemical compound 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethanethiol;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCCS OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002558 Curdlan Polymers 0.000 description 3
- 239000001879 Curdlan Substances 0.000 description 3
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 3
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 235000019316 curdlan Nutrition 0.000 description 3
- 229940078035 curdlan Drugs 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 239000003485 histamine H2 receptor antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 2
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 2
- 101100120045 Bos taurus FGF1 gene Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 101001052035 Homo sapiens Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- 206010061297 Mucosal erosion Diseases 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N Procaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 2
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- AMHIJMKZPBMCKI-PKLGAXGESA-N ctds Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]2O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O2 AMHIJMKZPBMCKI-PKLGAXGESA-N 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 229960001309 procaine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical class O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 2
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 2
- 229960001407 sodium bicarbonate Drugs 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- MNQYNQBOVCBZIQ-JQOFMKNESA-A sucralfate Chemical compound O[Al](O)OS(=O)(=O)O[C@@H]1[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](COS(=O)(=O)O[Al](O)O)O[C@H]1O[C@@]1(COS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)O1 MNQYNQBOVCBZIQ-JQOFMKNESA-A 0.000 description 2
- 229960004291 sucralfate Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N (8R,11R,12R,13E,15S)-11,15-Dihydroxy-9-oxo-13-prostenoic acid Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWGFSQJQIHRAAE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.OCC(N)(CO)CO CWGFSQJQIHRAAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000588813 Alcaligenes faecalis Species 0.000 description 1
- 229920001450 Alpha-Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 239000004135 Bone phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 125000002353 D-glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-ZAFYKAAXSA-N D-threo-isocitric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-ZAFYKAAXSA-N 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010013647 Drowning Diseases 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 241000701867 Enterobacteria phage T7 Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-FONMRSAGSA-N Isocitric acid Natural products OC(=O)[C@@H](O)[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-FONMRSAGSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 1
- 208000010728 Meckel diverticulum Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229940121948 Muscarinic receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010062065 Perforated ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMTZFNFIKUPEJC-UHFFFAOYSA-N Roxane Chemical compound CC(=O)OCC(=O)NCCCOC1=CC=CC(CN2CCCCC2)=C1 SMTZFNFIKUPEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010066969 Vitello-intestinal duct remnant Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940005347 alcaligenes faecalis Drugs 0.000 description 1
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-N alpha-L-IdopA-(1->3)-beta-D-GalpNAc4S Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(O)=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-N 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 1
- 229940043377 alpha-cyclodextrin Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000711 alprostadil Drugs 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N benzocaine Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 229940084030 carboxymethylcellulose calcium Drugs 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 150000001923 cyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960001596 famotidine Drugs 0.000 description 1
- XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N famotidine Chemical compound NC(N)=NC1=NC(CSCCC(N)=NS(N)(=O)=O)=CS1 XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 description 1
- 229940080345 gamma-cyclodextrin Drugs 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000002634 heparin fragment Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229940031704 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Drugs 0.000 description 1
- 229920003132 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Polymers 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229940031703 low substituted hydroxypropyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 210000003750 lower gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000002954 meckel diverticulum Anatomy 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 229940117841 methacrylic acid copolymer Drugs 0.000 description 1
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960004633 pirenzepine Drugs 0.000 description 1
- RMHMFHUVIITRHF-UHFFFAOYSA-N pirenzepine Chemical compound C1CN(C)CCN1CC(=O)N1C2=NC=CC=C2NC(=O)C2=CC=CC=C21 RMHMFHUVIITRHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000001187 pylorus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960003287 roxatidine acetate Drugs 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 229960004025 sodium salicylate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- YFGAFXCSLUUJRG-WCCKRBBISA-M sodium;(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N YFGAFXCSLUUJRG-WCCKRBBISA-M 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N threo-D-isocitric acid Natural products OC(=O)C(O)C(C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
- C07K14/503—Fibroblast growth factor [FGF] basic FGF [bFGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
- C07K14/501—Fibroblast growth factor [FGF] acidic FGF [aFGF]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás sav-rezisztens fibroblaszt növekedési faktort (FGF-et) tartalmazó kompozíciók és gyógyászati készítmények előállítására, amelyek emlősök gasztrointesztinális fekélyeinek kezelésére alkalmazhatók elsősorban, de használhatók más, fibroblaszt növekedési faktorra reagáló betegségek kezelésére is, különösen akkor, ha a sav- vagy hőérzékeny fibroblaszt növekedési faktor terápiás értéke viszonylag csekély.
A gasztrointesztinális rendszer fekélyei - amelyeket általában peptikus fekélynek neveznek - a gasztrointesztinális traktus hámsejtrétegének hiányosságából erednek. Ez a hiányosság rendszerint a sósav és a pepszin együttes hatásából ered. Definíció szerint, a peptikus fekélyek legalább a nyálkahártya alatti szövetig behatolnak, az ennél nagyobb mértékű felületi léziókat eróziónak nevezik. A peptikus fekélyek a gasztrointesztinális traktus több helyén létrejöhetnek, beleértve a gyomrot, duodenumot vagy nyelőcsövet, a Meckel-féle diverticulumban, sebészetileg kialakított összeszájadzásnál, és - ritkábban - a felső éhbélben (jejunumban).
Húsz évvel ezelőtt a peptikus Fekélyek kezelése ágynyugalomból, szigorú diétából, savközömbösítő szerekből és/vagy az érintett területek sebészeti úton történő eltávolításából állt. Napjainkban a peptikus fekélyek kezelésére H2-receptor antagonistákat használnak. A két leggyakrabban használt H2-receptor antagonista a ranitidin és a cimetidin, mindkettő gyógyászati hatása a gyomorsav-szekréció gátlásán alapul. A fenti két antagonista hatásosságát és nemkívánatos mellékhatásait sokan tanulmányozták, például Thomas és munkatársai [Clinics in Gastroenterology, /5(2), 501— 529 (1984)].
Noha a fenti antagonistákkal végzett kezelés igen elterjedten alkalmazott és viszonylag eredményes, sok peptikus fekély nem kezelhető' H2-receptor antagonista terápiával. így például - noha ennek okát még nem teljesen tisztázták - a duodenális fekélyek mintegy 20-30%-a nem gyógyul sem cimetidinnel, sem ranitidinnel 4-6 héten keresztül tartó kezelés hatására. Ezenkívül nem ritka H2-receptor antagonista terápia esetén a fekély kiújulása vagy súlyosbodása.
A fibroblaszt növekedési faktorról (FGF) kimutatták, hogy erős angiogén faktor, amely többek között a sebgyógyulásban új érhálózat kialakulásáért felelős. Az FGF-nek két típusa van, úgymint savas fibroblaszt növekedési faktor (aFGF), és bázikus fibroblaszt növekedési faktor (bFGF). Az aFGF sav-rezisztens, de hőre érzékeny, és a bFGF savra és hőre érzékeny. Ezért korábban az FGF alkalmazása savas és/vagy meleg környezetben, így például a peptikus fekélyek kezelésére, nem volt lehetséges.
A találmány tárgya eljárás gyógyászati kompozíciók előállítására, amely kompozíciók emlős szervezetekben az FGF-re reagáló betegségek kezelésére alkalmazhatók oly módon, hogy a kezelendő emlősnek gyógyászatilag hatásos mennyiségben adunk egy találmány szerinti eljárással előállított, sav-rezisztens FGF-kompozíciót vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyászati kompozíciók különösen emlősök gasztrointesztinális traktusában lévő fekélyek kezelésére alkalmasak úgy, hogy a kezelendő emlősnek gyógyászatilag hatásos mennyiségben adagoljuk a találmány szerinti eljárással előállított sav-rezisztens FGF-kompozíciót. Még közelebbről, a találmány szerinti eljárással előállított kompozíciók lehetővé teszik olyan peptikus fekélyek és egyéb betegségek kezelését, amelyek egyébként FGF-re érzékenyek, de a savas körülmények miatt a kezelés FGF-fel nem valósítható meg.
A találmány értelmében előállíthatunk olyan gyógyászati készítményeket is, amelyek alkalmasak emlősök FGF-re reagáló betegségeinek kezelésére, és amelyek egy sav-rezisztens FGF-kompozíciót tartalmaznak. Közelebbről a találmány szerinti eljárással előállított, sav-rezisztens FGF-kompozíciót tartalmazó gyógyászati készítmények emlősök gasztrointesztinális traktusában lévő fekélyek kezelésére alkalmasak. A fenti gyógyászati készítmények úgy állíthatók elő, hogy a sav-rezisztens FGF kompozíció gyógyászatilag hatásos mennyiségét győgyászatilag elfogadható hordozó-, vivő- vagy hígítóanyaggal elegyítjük.
A találmány szerinti eljárással előállított sav-rezisztens FGF-kompozíciót előnyösen gyógyászatilag elfogadható vivőanyaggal elegyítve adagoljuk, egy vagy több (a) stabilizálószerrel, (b) szekréciógátló anyaggal, például H2-receptor antagonistával, (c) citoprotektív anyaggal és (d) savközömbösítő anyaggal kombinálva.
Ha a találmány szerinti eljárással előállított, sav-rezisztens FGF-kompozícíókat gasztrointesztinális fekélyben szenvedő emlősöknek adagoljuk, a fekély láthatólag teljes mértékben gyógyul. A fent említett H2receptor antagonistákkal összehasonlítva, az antagonistákkal elért legjobb eredmény kisebb, vagy ugyanakkora, mint a sav-rezisztens FGF-kompozíció optimális mennyisége mintegy 10%-ának adagolásával elért eredmények.
A találmány szerinti eljárással előállított gyógyászati készítmények emlősök FGF-re reagáló betegségei megelőzésére és/vagy kezelésére alkalmazhatók. A kezelés legegyszerűbb módja az, hogy a kezelendő emlősnek hatásos mennyiségben adunk egy sav-rezisztens FGF-kompozíciót, vagy annak egy gyógyászatilag elfogadható sóját. A találmány szerinti eljárással előállíthatók bizonyos gyógyászati készítmények is, amelyek sav-rezisztens FGF-et vagy sóját tartalmazzák, valamint egy vagy több olyan szert, amely a sav-rezisztens FGF-et stabilizálják, gyógyászati hatékonyságát potencírozzák, vagy egyéb módon befolyásolják. Ezek a szerek többek között (i) stabilizálószerek, például glükózamino-glukán, mint heparin, glukán-szulfát, példái dextrán-szulfát, szulfátéit ciklodextrin, például β-ciklodextrin-tetradekaszulfát és $-í,3-glukán-szulfát;
HU 207 227 B (ii) szekréciót gátló szerek, például H2-receptor antagonisták (mint a cimetidin, renitidin, famotidin, roxatidin-acetát), muszkarin-receptor antagonisták (például pirenzepin);
(iii) citoprotektív szerek, például spizofuron és prosztaglandin-származékok; és (iv) savközömbösítőszerek, például alumínium-hidroxid-gél, nátrium-hidrogén-karbonát és szukralfat lehetnek. A fenti szerek vagy külön adhatók, vagy a kompozíció komponenseként,
A találmány értelmében a gasztrointesztinális traktus különféle fekélyei úgy kezelhetők, hogy az emlősnek a sav-rezisztens FGF-komopzíció hatásos mennyiségét adagoljuk. A fenti fekély például regionális csípőbélgyulladás, fekélyes kolitisz vagy peptikus (duodenális vagy gyomor-) fekély lehet.
A találmány szerinti eljárással előállított, sav-rezisztens FGF-kompozíciót emlősök egyéb betegségeinek kezelésére is használhatjuk, amelyek FGF-terápiával csak a savas környezet miatt nem kezelhetők. így például a hólyagok daganatellenes kezelése a szerv szövetében gyakran fekélyesedést okoz, amely FGF-fel kezelhető lenne, ha az FGF sav-rezisztens lenne. A kötözött sebek is savas környezetet jelenthetnek, amelyek sav-rezisztens FGF-fel végzett kezeléssel gyógyíthatók. Szakemberek előtt nem kétséges, melyek azok a további területek, amelyekben az FGF-terápia alkalmazható lenne, ha nem savas körülményekről lenne szó.
A találmány szerinti eljárással előállított sav-rezisztens FGF-kompozíció aFGF- vagy bFGF-kompozíció lehet. A találmány szerinti eljárásban használható aFGF és bFGF különféle forrásokból származhat, beleértve az emlősöket, így embert, marhát, majmot, sertést és lovat.
A találmány szerinti eljárással előállított sav-rezisztens FGF-kompozíció (i) sav-rezisztens természetes emlős FGF, például aFGF, (ii) stabilizálószerekkel stabilizált természetes emlős
FGF, (iii) módosítással sav-rezisztenssé tett FGF, vagy (ív) stabilizálószerekkel még stabilabbá tett módosított
FGF lehet.
A találmány szerinti eljárással előállított előnyös sav-rezisztens FGF-kompozíció főkomponense egy módosított FGF, így egy tisztított, rekombináns humán bázikus FGF (rhbFGF) protein lehet, amelyben az érett protein 25., 69., 87. és 92. aminosav-maradékát képviselő négy cisztein közül egy vagy több szerinre cserélésével mutációt indukálunk („mutein”).
A humán bFGF-et felépítő aminosavak számozásában az N-terminális Pro az első aminosav. A legelőnyösebb sav-rezisztens FGF és rhbFGF CS23 mutein, amelynek szerkezetét Senoo és munkatársai részletesen ismertették [Biochem. Biophys, Research Commun. 757(2), 701-708 (1988); és a 281822 sz. európai szabadalmi leírás]. A találmány szerinti eljárásban használható egyéb muteinek - amelyek a fenti irodalmi helyekről szintén ismertek - azok, amelyek egy vagy több további aminosavat tartalmaznak, vagy amelyekből egy vagy több aminosav hiányzik, vagy más aminosavval van szubsztituálva.
Noha elméletileg még nem teljesen tisztáztuk, de úgy véljük, hogy az FGF cisztein-maradékait semleges aminosavakkal - például szerinnel vagy alaninnal helyettesítve az FGF hővel, savval és bizonyos FGF-et bontó enzimekkel szemben stabillá válik. Az ilyen fajta helyettesítés véleményünk szerint csak csekély változást okoz a protein szerkezetében és aktivitásában, mert egy kénatom (cisztein) oxigénatomra való cseréje (szerin) megakadályozza a mutáció helyén a nemkívánatos intermolekuláris diszulfid-kötés kialakulását.
A találmány értelmében a sav-rezisztens FGF savas környezetben nagy stabilitást mutat, különösen akkor, ha egy vagy több, az alábbiakban részletesen ismertetett stabilizálószerrel együtt használjuk. A natív emlős FGF és a módosítással sav-rezisztenssé tett FGF toxicitása igen alacsony.
Az adagolás módja számos tényezőtől függ, többek között a kezelendő betegségtől, a beteg kényelmének szem előtt tartásával. Például a hólyag fekélyes sebeinek kezelése esetén - amelyet például besugárzásos terápia vagy kemoterápia okozott - a találmány szerinti eljárással előállított sav-rezisztens FGF-kompozíciót húgycső-katéterrel adagolhatjuk, A gasztrointesztinális traktus fekélyeinek kezelésére az adagolást előnyösen orálisan, például tabletta, kapszula, gyógycukor vagy rágógumi formájában végezhetjük. A gasztrointesztinális traktus betegségei esetén alkalmazható adagolási mód ezenkívül a rektális adagolás beöntéssel, vagy a parenterális adagolás.
A kezelésre használt sav-rezisztens FGF-et ismert eljárásokkal állíthatjuk elő. A tablettákat és kapszulákat például adalékanyagok, így gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagok (például laktóz, kukoricakeményítő, könnyű szilícium-dioxid, mikrokristályos cellulóz, szacharóz), kötőanyagok (például alfa-formájú keményítő, metil-cellulóz, karboxi-metil-cellulóz, hidroxipröpil-cellulóz, hidroxi-propil-metil-cellulóz, poli(vinil-pirrolidon), dezintegrálószerek (például karboximetil-cellulóz-kalciumsó, keményítő, alacsonyan szubsztituált hidroxi-propil-cellulóz), felületaktív szerek [például Tween 80 (Kao-Atlas), Pluronic F68 (Asahi Denka, Japán), poli(oxi-etilén)-poli(oxi-propilén) kopolimer], antioxidánsok (például L-cisztein, nátrium-szulfit, nátrium-aszkorbát), csúsztatószerek (például magnézium-sztearát, talkum) és egyéb hasonló anyagok alkalmazásával állítjuk elő.
A rektális készítményeket is szokásos eljárásokkal állíthatjuk elő, például kenőcs-bázisokat, így hosszabb szénláncú zsírsav-glicerideket [például természetes eredetű kakaóvajat, Witepsolt (félszintetikus bázis, gyártja a Dynamite Nobel, NSZK)] közepes szénláncú zsírsav-glicerideket [például Miglyolokat (Dynamite Nobel)], vagy növényi eredetű olajokat (például szezámolajat, szójaolajat, kukoricaolajat, gyapotmagolajat, olívaolajat) alkalmazva.
Ha a kompozíciót injektálható vizes oldattá formáljuk, az oldatot szokásos módon állíthatjuk elő. Oldószert,
HU 207 227 B így például vizes oldószert (például desztillált vizet, fiziológiás sóoldatot, Ringer-oldatot) vagy olajos oldószert (például szezámolajat, olívaolajat) használva. Kívánt esetben egy vagy több adalékanyagot is használhatunk. A fenti adalékanyag például oldódást elősegítő segédanyag (például nátrium-szalicilát, nátrium-acetát), puffer (például nátrium-citrát, glicerin), izotonizálószer (például glükóz, invert cukor), stabilizálószer (például humán szérumalbumin, polietilénglikol), konzerválószer (például benzil-alkohol, fenol) vagy analgetikum (például benzalkónium-klorid, prokain-hidrogén-klorid) lehet.
Ha a kompozíciót injekciós szilárd készítménnyé formáljuk, a készítményt szokásos módon állíthatjuk elő, például hígítóanyagot (így desztillált vizet, fiziológiás sóoldatot, glükózt), adalékanyagot [például karboxi-metil-cellulózt (CMC), nátrium-arginátot], konzerválószert (például benzil-alkoholt, benzalkónium-kloridot, fenolt) vagy analgetikumot (például glükózt, kalcium-glükonátot, prokain-hidrogén-kloridot) használhatunk.
A szükséges sav-rezisztens FGF dózisa más hatóanyagokhoz - például H2-blokkolókhoz - viszonyítva figyelemreméltóan kicsi, és számos faktortól, például a kezelendő betegségtől, hogy önmagában, vagy stabilizálószerrel, szekréciógátló anyaggal, citoprotektív anyaggal és savközömbösítő szerekkel együtt használjuk-e, és a beteg táplálékfogyasztásának mennyiségétől függ.
Ha felnőtt ember gasztrointesztinális traktusában lévő fekélyek kezelésére használjuk, a sav-rezisztens FGF protein-komponensének mennyisége orális adagolás esetén általában 0,1 pg-30 mg naponta, előnyösen mintegy 0,1 gg-10 mg, még előnyösebben mintegy 1,0-3 mg naponta, és legelőnyösebben mintegy 10 pg-300 pg a napi dózis. Orális adagolásra 10150 pg rhbFGF CS23 muteint vagy annak sóját gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígító vagy egyéb megfelelő segédanyaggal tablettává vagy kapszulává formálhatunk. Az ilyen készítményt előnyösen napi 1-4 alkalommal adagolva biztosítjuk a fent említett előnyös dózist.
Az alsó gasztrointesztinális traktus bizonyos betegségei, például peptikus fekélyek és fekélyes kolitisz esetén előnyös, ha a sav-rezisztens FGF-kompozíciót valamely enterális kopolimerrel - például hidroxí-propil-metil-cellulóz-ftaláttal, cellulóz-acetát-ftaláttal vagy metakrilsav kopolimerrel - bevonjuk, ezáltal a sav-rezisztens FGF-et még inkább védjük savtól és emésztő enzimektől, például pepszintől. Ez a bevonatos kompozíció így bejut a gasztrointesztinális traktusba, azaz az emésztő traktusba és az emésztőcsatornába, ahol terápiás hatása optimálisan megnyilvánulhat.
Azt is felismertük, hogy a sav-rezisztens FGF-et bizonyos anyagok tovább stabilizálják és/vagy aktivitását potencírozzák. Ilyen anyagok a szekréciógátló szerek, savközömbösítő szerek, citoprotektív anyagok és stabilizálószerek, mint például a glükózamino-glukánok és a glukán-szulfátok néven ismert vegyületcsoport. Szakemberek számára magától értetődő, hogy az ilyen stabilizáló/potencírozó szerek FGF-hez viszonyított mennyisége számos faktortól függően változhat, többek között az alkalmazott szertől, a beteg állapotától és az adagolás módjától függhet. A fenti stabilizálószerek mennyiségének tömegaránya az FGF-hez viszonyítva általában 0,1-100, előnyösen 0,2-20, még előnyösebben mintegy 0,5-4 lehet.
Előnyös szekréciógátló szerek a renitidin és a cimetidin. Az alkalmazott szekréciógátló szer mennyisége a fenti faktoroktól függően változik. így például peptikus fekélyek kezelésére egy előnyös kompozíció mintegy 10-300 pg, előnyösen mintegy 100 pg rhbFGF CS23 muteint és mintegy 20-600 mg, előnyösen mintegy 200 mg szekréciógátló szert tartalmaz.
Előnyös savközömbösítő szerek például az alumínium-hidroxid gél, nátrium-hidrogén-karbonát és szukralfat. A savközömbösítő szert a sav-rezisztens FGF mellett adhatjuk a betegnek, vagy a sav-rezisztens FGF-kompozíció egy komponenseként beépíthetjük a kompozícióba. A savközömbösítő szer mennyisége általában 0,5-5 g/kezelés.
A citoprotektív anyag mennyisége számos tényezőtől, többek között az adott citoprotektív anyagtól függ. Prosztaglandin-származékok esetén ez a mennyiség általában 2,5-5 pg/felnőtt ember, spizofuron esetén mintegy 80 mg/felnőtt ember.
A találmány szerinti kompozícióban használt stabilizálószerek glükóz-amino-glukánok, így heparin, heparin-fragmentumok, glukán-szulfátok, így dextránszulfát, ciklodextrin-szulfát és P-l,3-glukán-szulfát lehetnek. A fenti glukán-szulfát kéntartalma előnyösen legalább 3 tömeg%, még előnyösebben mintegy 1220 tömeg%, legelőnyösebben mintegy 16-20 tömeg%. Előnyös stabilizálószerek a glukán-szulfátok, különösen a dextrán-szulfát.
A glükóz-amino-glukánok ismert vegyületek (lásd például Molecular Biology of the Cell, Gerland Publishing Inc., New York, London, 1983). A találmány szerinti eljárásban használt glükóz-amino-glukánok mintegy 0,1-3,0 szulfátcsoportot tartalmaznak diszacharid-egységenként, és móltömegük mintegy 1000100000, előnyösen 2000-50000. A fenti glükóz-amino-glukánokra példaként a heparint, heparin-szulfátot és dermatan-szulfátot említjük.
A heparin ismert (például Merck Index, 8. kiadás, 1983). A heparin móltömege mintegy 5000-40000.
A ciklodextrinek természetes gyűrűs vegyületek, amelyek hat (alfa), hét (béta) vagy nyolc (gamma) D-glükóz-egységből állnak, amelyek egymáshoz alfa( 1 —->4) kötéssel kapcsolódnak. Mogyoró alakú molekulaszerkezetük üreget képez, és így megfelelő méretű vendég-molekulákkal zárványkomplexet képeznek.
A ciklodextrin-szulfát a fenti ciklodextrinek szulfonálásával előállított észter. A szulfonálást ismert módon végezhetjük. Előnyös szulfonálási eljárást ismertetnek a 2923 704 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a 36422/1975 számon közzétett japán szabadalmi leírásban.
A ciklodextrin-szulfát kéntartalma rendszerint több mint 3 tomeg%, előnyösen 12-24 tömeg%. A fenti ciklodextrin-szulfátok is jól oldódnak vízben.
HU 207 227 Β
A találmány szerinti eljárásban használható ciklodextrin-szulfát szulfonálási foka tetszőleges, de 12 tömeg%-ot meghaladó mértékű lehet, a kéntartalomra számítva. Különösen előnyös a mintegy 16—21 tömeg% ként tartalmazó ciklodextrin-szulfát.
A találmány értelmében az FGF protein-komponens stabilizálására használhatók az alfa-, béta- és gamma-ciklodextrin-szulfát-sók is. Előnyösek a bétaciklodextrin-sók, például a béta-ciklodextrin-tetradekaszulfát.
A találmány szerinti eljárásban használható β-1,3glukán-szulfátot a P-l,3-glukán szulfonálásával állíthatjuk elő. A P-l,3-glukán - amelyet az Alcaligenes vagy Agrobacterium nemzetségbe tartozó mikroorganizmusok termelnek - egyenes szénláncú, vízoldható és hőre gélesedő. A különféle glukánok tisztítására alkalmas eljárásokat Ebisu és munkatársai ismertetik (Journal of Bacteriol.ogy, 1489-1501. oldal, 1975).
A hőre zselatinálódó PS poliszacharidként is ismert curdlan (beszerezhető a Wako Pure Chemical Industries, Ltd.-től, Japán) vízben oldhatatlan, hőre zselatinálódó, egyenes szénláncú glukán, amely egyedül β(1—>3) kötéssel rendelkezik, és amelyet az Alcaligenes vagy Agrobacterium nemzetségbe tartozó mikroorganizmusok termelnek (lásd például 7000/1968, 32673/1973 és 32 674/1973 számon közzétett japán és 1352938 számú nagy-birtanniai szabadalmi leírás). A curdlan-termelő Alcaligenes faecalis var. myxogenes NTK-u törzs, Agrobacterium radiobacter törzs és Agrobacterium radiobacter U-19 törzs az amerikai törzsgyűjtemény-katalógusban (ATCC Cataloguse of Strains, I, 15. kiadás, 1982) ATCC-21680, ATCC-6466, illetve ATCC-21679 számon vannak nyilvántartva.
A curdlan kis móltömegű hidrolízis-termékei is használhatók. Ezek előállítását részletesen a 83798/1980 számon közrebocsátott japán és a 4454 315 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások ismertetik.
A β-1,3^1υ1<Αη átlagos polimerizációs foka (DP) kisebb mint 1000. Közelebbről, a kb. 6-300 polimerizációs fokú hidrolízistermékét, előnyösen 15-200 polimerizációs fokú hidrolízistermékét használhatjuk a találmány szerinti eljárásban.
Az egyenes szénláncú β-1,3^Ηύίάη szulfátja amely a találmány szerinti eljárásban használható - a β-13-glukán vagy kisebb polimerizációs fokú polimerjei hidroxilcsoportjainak szulfonálásával előállított észter; a 0,8-3 átlagos szubsztitúciós fokú (DS) észterek, előnyösen az 1-2 átlagos szubsztitúciós fokú észterek használhatók a találmány szerinti eljárásban.
Az egyenes szénláncú β-13-glukán vagy kisebb móltömegű polimerje szulfonálását ismert módon végezhetjük [Journal of Biological Chemistry, 239, 2986 (1964)]. A β-1,3^1υϊ<ύη-5ζυ1ίύΐ kéntartalma rendszerint nagyobb, mint 5 tömeg%, előnyösen mintegy 1021 tömeg%, és vízben igen jól oldódik.
A találmány szerinti eljárásban előnyösen használható glukán-szulfát a dextrán szulfátja, a dextrán a szacharózból keletkezik mikroorganizmusok, például Leuconostoc mesenteroides hatására.
A dextrán-szulfát a dextrán részleges szulfátja, a dextrán alapszerkezete a glükóz alfa(l—6) kötés, és kéntartalma rendszerint legalább 12 tömeg%, előnyösen mintegy 16-20 tömeg%. Átlagos móltömege mintegy 1000-40000000, előnyösen kb. 3000-1000000. A dextrán-szulfát vízben nagyon jól oldódik.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazható glukán-szulfát só formában is lehet. A só valamely gyógyászatilag elfogadható kationnal képzett só, például nátrium-, kálium-, trimetil-ammónium-, ammóniumsó, vagy más hasonló só lehet.
Ha a glukán-szulfátot az FGF-proteinnel vizes közegben hozzuk érintkezésbe, ezt úgy végezhetjük, hogy először beadagoljuk a glukán-szulfátot szabad állapotban, majd meghatározott mennyiségű lúgot vagy savat adagolunk, a pH kívánt értékre állítására. Lúg hozzáadására a glukán-szulfát vizes közegben sóvá alakulhat, vagy a szabad glukán-szulfátból és só formában lévő glukán-szulfátból álló elegyet kapunk.
Ha a találmány szerinti FGF-protein-komponenst vizes közegben glukán-szulfáttal hozzuk érintkezésbe, ezt előnyösen két- vagy hárombázisú karbonsav jelenlétében végezzük, így még stabilabb FGF-et kapunk. Kétbázisú karbonsavként például borkősavat, maleinsavat, almasavat, fumársavat, vagy hasonló savat használhatunk. Hárombázisú karbonsavra példaként a citromsavat, izocitromsavat stb. említhetjük.
A fent említett karbonsavak is lehetnek só formában. Úgy is eljárhatunk, hogy a vizes közeghez először hozzáadjuk a szabad karbonsavat, majd megfelelő mennyiségű lúg vagy sav hozzáadásával beállítjuk a kívánt pH-értéket. Lúg hozzáadására a glukán-szulfát sóvá alakulhat vizes közegben, vagy együtt lesz jelen a szabad glukán-szulfát és a só formájú glukán-szulfát.
Ha az FGF-protein-komponenst vizes közegben hozzuk érintkezésbe a glukán-szulfáttal, a glukán-szulfát FGF-protein-komponenshez viszonyított tömegaránya 0,1-100, előnyösen 0,2-20, legelőnyösebben 0,54 lehet.
A glukán-szulfát koncentrációja vizes közegben előnyösen 0,0005-5 vegyes%, még előnyösebben mintegy 0,01—1 vegyes% lehet. A karbonsav mennyisége vizes közegben előnyösen 1 mmól/1-1 mól/1, még előnyösebben mintegy 10 mól/I-500 mól/1 lehet.
Az FGF-protein-komponens glukán-szulfáttal, továbbá karbonsavval való érintkeztetésére elegendő, ha a fenti anyagokat vizes közegben egyszerűen összekeverjük.
Vizes közegként előnyösen desztillált vizet, fiziológiás sóoldatot, glükóz-oldatot, puffereket, például foszfát- vagy trisz(hidroxi-metil)-amino-metán-HCl puffért (Tris-HCl-t) használunk.
Vagy az FGF-protein-komponens vizes oldatát, a glukán-szulfát vizes oldatát és a karbonsav vizes oldatát elegyítjük, vagy a szilárd formában lévő fenti anyagok elegyét oldjuk vízben. A fenti anyagok elegyítését 0 és 40 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 3 és 10 közötti pH-értéken, még előnyösebben pH 4-9 értéken hajtjuk végre. Az elegyítéshez szükséges idő mintegy 1 és 30 perc között változtatható. A kapott kompozíciót
HU 207 227 Β liofiiizálhatjuk, ezalatt komplex képződhet, és azt kinyerhetjük.
Az így kapott stabilizált FGF-kompozíció elválasztására és kinyerésére Sephadex gélen gélszűrést, vagy DEAE- vagy CM-gyantán ioncserélős kromatográfiát végezhetünk. A stabilizált FGF-kompozíciót azonban mint olyant, elválasztás és kinyerés nélkül is alkalmazhatjuk.
A fent ismertetett eljárásokkal nagystabilitású FGFkompozíció állítható elő, amelyet nagy biztonsággal alkalmazhatunk különféle emlősök, például ember, patkány, tengerimalac, kutya, egér stb. kezelésére.
A találmányt közelebbről az alábbi példákkal kívánjuk megvilágítani, a korlátozás szándéka nélkül.
Az 5., 6. és 7. példákban használt humán bázikus FGF-et a 237968 számú európai szabadalmi leírás 1., 3., 6. vagy 8. példájában ismertetett módon állítjuk elő, Escherichia coli K12 MM294/pTB669 transzformánst használva [amely az Institute fór Fermentation, Osaka (EFC) törzsgyűjteményében 1986. 08. 11-én IFO 14532 számon, és a Fermentation Research Institute (FRI) Japán törzsgyűjteményében 1986. 08. 21-én FERM P-8918 számon lett letétbe helyezve, amely azóta a Budapesti Egyezménynek megfelelő letétté lett átalakítva BP-1281 számon].
Az alábbi 1-3. és 5-8. példákban használt rhbFGF CS23 mutein proteint a fent idézett Biochemical and Biophysical Research Communication 151, 701-708 (1988) irodalmi helyen és a 281822 számú európai szabadalmi leírás 1. és 2. referenciapéldájában és 1., 6., 7. és 24. példájában ismertetett módon állítjuk elő, Escherichia coli MM294/pTB762 transzformáns alkalmazásával (amely az Instituts fór Fermentation, Osaka, Japán törzsgyűjteményében IFO 14613 számon 1987. 05. 27-én, és a Fermentation Research Institute, Japán törzsgyűjteményében FERM P-9409 számon 1987. 06. 11-én lett letétbe helyezve, és azóta a Budapesti Egyezménynek megfelelő letétté lett alakítva BP-1645 számon).
A 6. példában használt rekombináns humán savas FGF proteint (rhaFGF-et) az alábbi 4. példában ismertetett eljárással állítjuk elő. Az ábrákat az alábbiakban ismertetjük:
- 1. ábra: a humán savas FGF-et (haFGF) kódoló cDNS-szekvencia
- 2. ábra: a pTB975 plazmid megszerkesztése
- 3-5. ábra: haFGF tisztítása.
1. példa
Az alábbi kísérletekben a duodenális fekélyt normális patkányokban S. Szabó módszerével [American Joumai of Pathology, 273-276. oldal (1978)] indukáljuk. Közelebbről, az állatoknak gyomor-szondán keresztül orálisan, ugyanazon a napon háromszor, 25 mg/testtömeg-kg dózisban ciszteamint adunk. 24 óra múlva az állatok mintegy 10%-a elpusztul perforált fekély következtében. A 3. napon mindegyik patkányon kis has-bemetszést ejtünk, és megvizsgáljuk, hogy kialakult-e a duodenális fekély. Azokat a patkányokat, amelyeknél nem látható a duodenális fekély kialakulása (a túlélő állatok mintegy 1-2%-a) a vizsgálatból kizárjuk. így minden egyes vizsgálatban résztvevő állat fekélyes, és a torzítások megelőzésére az állatokat véletlenszerűen osztjuk csoportokba.
A vizsgálatban résztvevő állatok testtömege a vizsgálatok megkezdésekor mintegy 160 g. Az alábbi eredményeket négy csoport állattal kaptuk, amelyeket 21 napon keresztül kezeltünk, majd leöltünk. Az összes mérést a 21 napos kezelés befejezése után, az állatok elpusztításakor végeztük.
I. csoport: FGF-kezelés nélkül
Négy fekélyes állatot nem kezeltünk FGF-fel. A fekély mértéke, mélysége és területe statisztikusan azonos a korábban vizsgált 50 másik kezeletlen állat esetén tapasztaltakkal.
Fekély átlagos mélysége* = 1,625 (S.D. = 1,302;
S.E.M. = 0,460)
Fekély átlagos területe = 8,83 mm2 (S.D. = 9,75;
S.E.M. = 3,45)
Testtömeg 189 g
176 g
177 g 180 g x = 182 g fekély átlagos mélysége az alábbiakat jelenti:
= néhány sejt mélyen az epiléliumban = a nyálkahártya alatt és az izomsejtekben
- az izomrétegen keresztül
- áthatolt (majdnem perforált)
II. csoport: 10 ng rhbFGF CS23 mutein kezelés
A második csoportba tartozó négy patkányt ng/100 g testtömeg dózisban naponta két alkalommal kezeljük rhbFGF CS23 muteinnel. A fenti dózist hetente kétszer az állat testtömegéhez igazítjuk.
Fekély átlagos mélysége = 1,00 (S.D. = 1,414; S.E.M.
= 0,707)
Fekély átlagos területe = 3,14 mm2
Testtömeg 232 g
212 g
204 g
216g x = 216 g
III. csoport: 100 ng rhbFGF CS23 mutein kezelés
A patkányok harmadik csoportjában négy állatot 100 ng/100 g testtömeg dózisban kezelünk rhbFGF CS23 muteinnel, naponta két alkalommal. A dózist ebben az esetben is hetente kétszer minden egyes állat esetén testtömegéhez igazítjuk.
Fekély átlagos mélysége = 0,25 (S.D. = 0,5; S.E.M. =
0,25)
Fekély átlagos területe: 0,392 mm2 (az összes fekély teljesen gyógyult, kivéve egy kis fekélyt, ami egy állatban még gyógyulóban van)
Testtömeg 198 g
205 g 254 g _ 215 g x = 218g
HU 207 227 B
IV. csoport: 500 ng rhbFGF CS23 mutein kezelés Az öt patkányból álló negyedik csoportot
500 ng/100 g testtömeg dózisban kezeljük rhbFGF CS23 muteinnel, naponta kétszer. A dózist minden egyes állat esetén hetente kétszer a testtömeghez igazítjuk.
Fekély átlagos mélysége: 0,6 (S.D. 1,342; S.E.M. = 0,6)
Fekély átlagos területe = 1,88 mm2
Testtömeg 207 g
217 g
295 g
196 g
216 g x = 208 g
A fenti adatokból látható, hogy az orálisan adagolt sav-rezisztens rhbFGF CS23 mutein igen gyorsan gyógyítja a ciszteaminnal indukált fekélyeket. Még a legjobb Hj-blokkolókkal is kisebb, vagy legfeljbb azonos eredményeket érhetünk el, mint a 10 ng/100 g testtömeg rhbFGF CS23 muteinnel kezelt csoportban.
2. példa
10% magzati borjúszérumot tartalmazó Dulbeccoféle MÉM tápközeghez 10 μg/ml koncentrációban rhbFGF CS23 muteint adunk, majd 25 pg/ml végkoncentrációban dextrán-szulfát-só (Seikagagu Kogyo, Japán) adunk az elegyhez. A kapott elegyet 37 °C-on 24 órán keresztül inkubáljuk. A használt dextrán-szulfát-sók 5000, 7500, illetve 500000 átlagos móltömegű nátriumsók. Kontrollként azonos, de dextrán-szulfátnátriumsót nem tartalmazó tápközeget használunk. A 24 óra múlva megmaradt aktivitások az 1. táblázatban láthatók. A kontroliban nem találunk mérhető CS23 mutein aktivitást, míg a többi csoportban az FGF aktivitás stabilan megmarad.
1. táblázat
| Adalékanyag | FGF maradék aktivitása (%) |
| dextrán-szulfát-nátriumsó (átlagos móltömeg 5000) | 93 |
| dextrán-szulfát-nátriumsó (átlagos móltömeg 7500) | 100 |
| dextrán-szulfát-nátriumsó (átlagos móltömeg 500000) | 100 |
| kontroll | 6 |
A fenti eredmények azt mutatják, hogy a dextránszulfát védőhatást fejt ki az rhbFGF CS23 muteinre azon hőmérséklettel szemben, amelynek a protein az állatok kezelésekor ki van téve. Más szavakkal, ha a dextrán-szulfátot vizes közegben FGF-fel hozzuk érintkezésbe, stabilizált FGF-et kapunk. Ezt a stabilizált FGF-et gyógyászati készítményekké alakíthatjuk, amelyek a gasztrointesztinális traktusban lévő hővel, savval és enzimreakciókkal szemben stabil.
3. példa
Milliliterenként 0,5 mg rhbFGF CS23 muteint, 0,23 mg dextrán-szulfát-nátriumsót (átlagos móltömege 7500) és 15 mg nátrium-citrátot tartalmazó vizes oldatot (pH 7,4) készítünk.
4. példa
Savas FGF előállítása
A humán savas FGF-et az alábbiakban ismertetett módon állítjuk elő, az alábbi irodalmi helyeken ismertetett módszerek alkalmazásával: Biotechnology 5, 960 (1987); Journal of Biological Chemistry 263, 16471 (1988); és ICSU Short Report 8. kötet, Advances in Gene Technology: Protein Engineering and Production, Proceedings of the 1988 Miami Bio/Technology Winter Symposium, IRL press, 110. oldal.
(i) Expressziós plazmid szerkesztése
A humán savas FGF-et kódoló cDNS-t (1. ábra) kémiai úton szintetizáljuk, és pUC18 plazmidba illesztjük [Methods in Enzymology 101, 20-78 (1983)], így pTB917 plazmidot kapunk. A pTB917 plazmidot BspMI-gyel hasítjuk, és a végeket E. coli DNS-polimeráz I nagy fragmentum segítségével kitöltjük. Ezután a DNS-t BamHI-gyel emésztjük, így 0,45 kb hosszúságú DNS-fragmentumot kapunk. Vektor DNS-ként a T7 fág 010 promoterét hordozó pET3c-t [Studier F. W. és munkatársai, Journal of Molecular Biology, 189, 113-130 (1986)] használunk. A pET3c-t Ndel-gyel hasítjuk, és a végeket E. coli DNS-polimeráz I nagy fragmentumot használva kitöltjük. Ezután a kapott DNS-hez T4 DNS-ligázzal hozzákötjük az 5’-CCATGG-3’ Ncol linkért (kötőszekvenciát). A kapott plazmidot Ncol-gyel hasítjuk, E. coli DNS-polimeráz I nagy fragmentummal kitöltjük a végeket, majd az S10 szekvenciát BamHI-gyel hasítva eltávolítjuk. Erre a helyre beillesztjük a 0,45 kb hosszúságú BspMI-BamHI tompavégű fragmentumot, T4 DNS-ligázzal végzett ligálással, így pTB plazmidot kapunk (2. ábra).
(ii) haFGF cDNS expressziója E. coliban
Escherichia coli MM294-et DE3 lambda fággal lizálunk (Studier és munkatársai fent idézett munkája), amelyben a T4 fág RNS-polimeráz génjét rekombináltuk. Ezután a pLysS plazmidot bevisszük az E. coli MM294 (DE 3) törzsbe, ezáltal E. coli MM294 (DE 3)/pLysS-t kapunk. A fenti törzsbe pTB975 plazmidot bevive kapjuk az E. coli MM294 (DE 3)/pLysS, pTB975-öt. A fenti transzformánst 35 gg/ml ampicillint és 10 gg/ml kloramfenikolt tartalmazó L-tápközegben 37 °C-on tenyésztjük. Amikor a Klett-érték kb. 170, a tápközeghez 0,5 mmól/1 végkoncentrációban izopropil^-D-tiogalaktozidázt (IPTG) adunk, és a tenyésztést még 3 órán keresztül folytatjuk. A sejteket centrifugálással összegyűjtjük, PBS-sel mossuk, újra lecentrifugáljuk és -20 °C-on tároljuk.
HU 207 227 B (iii) haFGF tisztítása liter tenyészetből nyert sejttömeget 100 ml, 10 mmól/I Tris-HCl-t (pH 7,4), 10 mmól/1 EDTA-t, 0,6 mól/l NaCl-t, 10% szacharózt és 0,25 mmól/1 PMSFet tartalmazó pufferben szuszpendálunk, majd 0,5 mg/ml koncentrációban tojásfehérje-lizozimet adunk a szuszpenzióhoz. Az elegyet 1 órán keresztül jeges fürdőn tartjuk, majd 37 °C-on 5 percen keresztül inkubáljuk, 20 másodpercen keresztül kétszer ultrahanggal kezeljük, és SORVALL centrifugával 18000 fordulat/perccel 30 percen keresztül 4 °C-on centrifugáljuk. A kapott felülúszót jeges hűtés mellett 20 mmól/1 Tris-HCl-t (pH
7.4) és 1 mmól/1 EDTA-t tartalmazó pufferrel elegyítjük. A kapott elegyet heparin-Sepharose oszlopon (átmérője 2,5x4 cm) folyatjuk keresztül, amelyet 20 mmól/1 TrisHCl-t (pH 7,4), 1 mmól/1 EDTA-t és 0,2 mól/l NaCl-t tartalmazó pufferrel ekvilibráltuk. Az oszlopot 150 ml, 20 mmól/1 Tris-HCl-t (pH 7,4), 1 mmól/1 EDTA-t és 0,5 mól/l NaCl-t tartalmazó pufferrel mossuk, majd 20 mmól/1 Tris-HCl-t (pH 7,4), 1 mmól/1 EDTA-t és 1,5 mól/l NaCl-t tartalmazó pufferrel eluáljuk. 6 ml-es frakciókat szedünk, és a második csúcsként megjelenő frakciókat (8-11., összesen 24 ml) összegyűjtjük, az OD2S0 érték folyamatos mérése segítségével (3. ábra).
A fenti frakciókhoz azonos térfogatban (22 ml) 20 mmól/1 Tris-HCl-t (pH 7,4), 1 mmól/1 EDTA-t és 2 mól/l (NH4)2SO4-ot tartalmazó puffért adunk. Az elegyet fenil-Sepharose oszlopon (átmérője 2,5x8 cm) folyatjuk keresztül, amelyet 20 mmól/1 Tris-HCl-t (pH
7.4) , 1 mmól/1 EDTA-t és 1 mól/l (NH4)2SO4-ot tartalmazó pufferrel ekvilibráltunk. Az átfolyási sebesség 0,5 ml/perc. Az oszlopot az ekvilibrálásra használt pufferrel azonos összetételű pufferrel mossuk, majd 1 mól/l —> 0 mól/l lineáris (NH4)2SO4 gradienssel eluáljuk (átfolyási sebesség 0,5 ml/perc, a gradiens-idő 200 perc). A 40-55. frakciókat összegyűjtve (4. ábra) kapjuk a tisztított humán savas FGF-et.
(iv) Fordított fázisú C,r-IÍPLC
A (iii) lépésben kapott humán savas FGF-et 1,2 mg/ml koncentrációban tartalmazó oldatból 0,25 ml-t 0,1% trifluor-ecetsavval (TFA) elegyítünk, és az elegyet fordított fázisú C4 oszlopra (VYDAC, USA) visszük. Az eluálást 0,1% TFA jelenlétében. 0% —> 90% acetonitril lineáris gradienssel végezzük, az átfolyási sebesség 1 ml/perc. A gradiens-idő 60 perc. Az eredményeket az 5. ábrán ismertetjük.
(v) Biológiai aktivitás
A (iv) lépésben kapott, tisztított haFGF biológiai aktivitását Sasada és munkatársai módszerével határozzuk meg [Mól. Cell Bioi. 5, 588-594 (1988)], mégpedig úgy, hogy mérjük a (3H)-timidin beépülést a DNS-be, BALB/c3T3 sejtben. Amikor a mintát hozzáadjuk, herparinoldatot (SIGMA, I tisztaságú) keverünk a tápfolyadékhoz és a mintához, amennyiben szükséges.
5. példa
A gyomor-, duodenális vagy vastagbél-fekélyt K. Tagaki és munkatársai módszere szerint indukáljuk normál patkányokban [Jpn. J. Pharmacol. 19, 418-426 (1969)].
A vizsgálatokban héthetes, mintegy 250 g tömegű hím Jel: Spargue-Dawley patkányokat használunk. A patkányokat éterrel altatjuk, és a hason bemetszést teszünk. 6 mm átmérőjű, kerek fémformát helyezünk a savóshártya-felülettel szoros érintkezésben az üreg és a szerv elülső falának találkozásánál a gyomorba; a nyombélfalra, kb. 7 mm-re a pylorustól, illetve a vastagbélfalra, kb. 5 cm-re az ileocecális találkozástól. A fémformára 50 pl jégecetet öntünk, és 20 másodpercen keresztül rajtahagyjuk. Az ecetsav eltávolítása után a kezelt területet 100 μΐ sóoldattal leöblítjük, és a hasat összezárjuk.
Az 5%-os gumiarábikumoldatban szuszpendált FGF-kompozíciót naponta kétszer adjuk orálisan (de. 9-kor és du. 4-kor), 6 egymást követő napon keresztül, az operációt követő naptól kezdve. Az operáció utáni 7. napon az állatokat CO2-dal előidézett fulladással leöljük. A fekélyes terület nagyságát (mm2) és mélységét (O-tól 3-ig terjedő skála szerint, 0: nincs lézió, 1: nyálkahártya-erózió, 2: enyhe fekély, 3: mély fekély vagy perforáció) boncoló-mikroszkóp alatt, 1 mm-es négyzethálós beosztású nézőkével (10-szeres nagyítás) mérjük. A fekélyindexet a területből és a mélységből számítjuk ki.
Az ecetsav a gyomor, a duodénum és a vastagbél savóshártya-felületén kerek fekélyt okoz. A 2-4. táblázat eredményeiből látható, hogy a kontroll csoport fekélyindexei az egyes fekély-fajtáknál az operációt követő 7. napon 6,7 ± 1,1; 5,7 ± 1,1, illetve 14,2 ± 1,6. A kontroll csoportnak csak 150 mmól/1 NaCl-t tartalmazó citrát-pufferből (pH 7,0) álló hordozóanyagot adunk; az rhbFGF csoportot orálisan 30 pg/testtömeg-kg dózisban rhbFGF-fel kezeljük; a CS23 csoport orálisan 30 pg/testtömeg-kg dózisban rhbFGF CS23 muteint kap; és a CS23-DS csoportot 30 pg/testtömeg-kg rhbFGF CS23 mutein és 13,8 pg/testtömeg-kg dextránszulfát (átlagos móltömege 7500) elegyével kezeljük.
A CS23 és CS23-DS csoportban a gyomor-, duodenális és vastagbél-fekély gyógyulása felgyorsul; a doudenális és vastagbél-fekélyre kifejtett hatás statisztikusan szignifikáns (2-4. táblázat). Az rhbFGF fekélygyógyulást előidéző hatása kevésbé jelentős, mint a CS23 és CS23-DS hatása.
2. táblázat:
rhbFGF, CS23 és CS23-DS hatása esetsavval indukált gyomorfekély gyógyulására, patkányban
| Kezelés | Dózis Rkg, p. 0.) | Patkányok száma | Fekélyindex | Fekélyindex javulása (%) |
| kontroll | 8 | 6,7 ± 1,1 | - | |
| rhbFGF | 30 | 8 | 5,8 ±0,9 | 13 |
| CS23 | 30 | 8 | 4,3 ±0,9 | 36 |
| CS23-DS | 30 | ·. 8 | 3,8 ±0,9 | 46 |
az eredményeket átlagérték + s.e.-ként adjuk meg
HU 207 227 Β
3. táblázat rhbFGF, CS23 és CS23-DS hatása esetsavval indukált duodenális fekély gyógyulására, patkányban
| Kezelés | Dózis (μ/kg, p. 0.) | Patká- nyok száma | Fekélyindex | Fekélyindex javulása (%) |
| kontroll | 8 | 5,7 ±1,1 | - | |
| rhbFGF | 30 | 8 | 5,9 ±1,4 | -4 |
| CS23 | 30 | 8 | 2,5 ±0,5* | 56 |
| CS23-DS | 30 | 8 | 1,7 ±0,4** | 70 |
az eredményeket átlagérték ± s.e.-ként adjuk meg *: p<0,05, **: p<0,01 a kontrollal szemben (Student-féle t-teszt)
4. táblázat rhbFGF, CS23 és CS23-DS hatása esetsavval indukált vastagbél-fekély gyógyulására, patkányban
| Kezelés | Dózis (μ/kg. p. 0.) | Patká- nyok száma | Fekélyindex | Fekélyindex javulása (%) |
| kontroll | 8 | 14,2 ±1,6 | - | |
| rhbFGF | 30 | 8 | 14,0 ±1,5 | 1 |
| CS23 | 30 | 8 | 8,0 ±1,9* | 44 |
| CS23-DS | 30 | 8 | 7,3 ±2,1 | 49 |
az eredményeket átlagérték ± s.e.-ként adjuk meg *: p<0,05 a kontrollal szemben (Student-féle t-teszt)
6. példa
Az alábbi kísérletekben a vastagbél-fekélyt úgy indukáljuk, hogy a vastagbél nyálkahártyájának felületére helyileg N-etil-maleimidet (NEM) viszünk. A kísérletekben héthetes, kb. 250 g-os hím Jel: Spargue-Dawley patkányokat használunk. A patkányok vastagbelébe, az anusztól 6 cm-re, Nelaton-katéterrel adagolunk 50 pl, 1%-os metil-cellulózzal készült 3%-os NEM-oldatot. A 150 mmól/1 NaCl-t tartalmazó 50 mmól/1 koncentrációjú nitrát-pufferben (pH 7,0) vagy 20 mmól/1 koncentrációjú Tris-HCl pufferben (pH 7,0) oldott FGF-kompozíciókat 0,2 ml/patkány dózistérfogatban adjuk a vastagbélbe, 7 cm-re az anusztól, Nelaton-katéterrel, naponta két alkalommal (de. 9-kor és du. 4-kor) a fekély NEM-kezeléssel történt indukálását követő naptól kezdve, 10 egymást követő napon keresztül. A NEM-kezelést követő 11. napon az állatokat szén-dioxiddal kiváltott fulladással elpusztítjuk, és boncoló mikroszkóp alatt, 1 mm-es négyzethálós nézőkét (10-szeres nagyítás) használva mérjük a fekélyes terület nagyságát (mm2) és a fekély mélységét (O-tól 3-ig terjedő skála: 0: nincs lézió, 1: nyálkahártya-erózió, 2: enyhe fekély, 3: mély fekély vagy perforáció). A fekély indexet a területből és a mélységből számítjuk ki.
Az 1. kísérletben a kontroll csoport csak hordozóanyagot kap, amely 150 mmól/1 NaCl-t tartalmazó mmól/1 koncentrációjú citrát-puffer (pH 7,0). Az rhbFGF csoportot rhbFGF-fel kezeljük, 2 pg/patkány dózisban, a CS23 csoportot rhbFGF CS23 muteinnel kezeljük, 2 pg/patkány dózisban, és a CS23-DS csoportot 2 pg/patkány rhbFGF CS23 mutein és 0,92 pg/patkány 7500 átlagos móltömegű dextránszulfát elegyével kezeljük.
A 2. kísérletben a kontroll csoport csak 20 mmól/1 koncentrációjú Tris-HCl-puffert (pH 7,0) kap, az rhaFGF csoport 2 pg/patkány dózisban 4. példa szerint előállított rhaFGF-et kap.
Az 5. táblázat eredményeiből látható, hogy a vastagbél nyálkahártyájára felvitt NEM súlyos, mély fekélyt indukál. A kontroll csoport fekélyindexe a NEM adagolásától számított 11. napon 231,6 ± 51,1 az 1. kísérletben, és 191,6 + 84,5 a 2. kísérletben. Az rhbFGF, CS23, CS23-DS és rhaFGF mind gyorsította a vastagbél-fekély gyógyulását.
5. táblázat rhbFGF, CS23 és CS23-DS és rhaFGF hatása NEM indukálta vastagbél-fekély gyógyulására, patkányban
| Kezelés | Dózis (μ/kg, p. 0.) | Patká- nyok száma | Fekélyindex | Fekélyindex javulása (%) |
| 1. kísérlet | ||||
| kontroll | 8 | 23l,6±51,l | - | |
| rhbFGF | 2 | 9 | 167,6 ±37,3 | 28 |
| CS23 | 2 | 9 | 108,4 ±26,3* | 53 |
| CS23-DS | 2 | 9 | 79,4 ± 14,9* | 66 |
| 2. kísérlet | ||||
| kontroll | 10 | 191,6 ±84,5 | - | |
| rhaFGF | 2 | 9 | 99,4 ±25,2 | 48 |
az eredményeket átlagérték + s.e.-ként adjuk meg ♦: p<0,05 kontrollal szemben (Student-féle t-teszt)
7. példa
Az alábbi kísérletekben az 1. példában ismertetett állat-modellt használjuk duodenális fekély indukálására normál patkányban. Nőstény patkányoknak három alkalommal adunk 25 mg/100 g dózisban orálisan ciszteamin-HCl-t. Három nap múlva az áthatoló duodenális fekélyes állatokat (megállapítása hasfelmetszéssel) véletlenszerűen kontroll és kezelt csoportokba osztjuk.
A csoportonként 6-8 patkány (1) csak hordozóanyagot (2) rhbFGF-et (vad) (vad típusú rekombináns humán bFGF) vagy (3) CS23-at (sav-rezisztens rhbFGF CS23 mutein) kap, 100 ng/100 g dózisban, gyomorszondán keresztül, naponta 2 alkalommal, a 21. napon végzett boncolásig, amikor a fekélyeket mérjük és szövettani metszeteket készítünk. A kísérletet háromszor megismételjük, az eredményeket a 6. táblázatban foglaljuk össze.
HU 207 227 Β
6. táblázat
| Kezelés | Fekélyes patkányok aránya | Fekélyes terület |
| kontroll | 89% | 9,8 ± 4,6 mm2 |
| rhbFGF (vad) | 80% | 2,1 ± 1,3 mm2 (p- 0,073) |
| CS23 | 33% | 1,7 ±1,1 mm2 (p- 0.063) |
A boncolás során készített szövettani metszeteket is kiértékeltük. A megfigyeléseket az alábbiakban összegezzük: jelentős eresedés, enyhe egymagvú sejt beszűrődés, és sűrűn sarjadzó szövet a fekély-ágyban; gyógyult fekélyek, amelyek teljesen hámosodnak; hipertrófiás normális gyomor- és duodenális nyálkahártya. Ezeket a szövettani eredményeket nem észleljük a csak hordozóanyaggal kezelt patkányok esetén,
8. példa
Az alábbi kísérletekben normális «patkányokban az
1. és 7. példában ismertetett módon indukálunk duodenális fekélyt. Nőstény patkányoknak háromszor adunk orálisan 25 mg/100 g dózisban ciszteamin-HCl-t. Három nap múlva az áthatoló duodenális fekéllyel rendelkező állatokat (hasfelmetszéssel megállapítva) kontroll és kezelt csoportokra osztjuk véletlenszerűen. Csoportonként 3-4 patkány (1) csak hordozóanyagot (2) 100 ng/100 g dózisban CS23-at (sav-rezisztens rhbFGF CS23 muteint) és (3) 10 mg/100 g dózisban cimetidint kap, gyomorszondán keresztül, naponta két alkalommal, a 21. napon végzett boncolásig, amikor mérjük a fekély nagyságát és szövettani metszeteket is készítünk. Az eredményeket a 7. táblázatban ismertetjük.
7. táblázat
| Kezelés | Fekélyes patkányok aránya | Fekélyes terület |
| kontroll | 100% | 10,6 ± 9,0 mm2 |
| cimetidin | 50% | 6,7 ± 2,9 mm2 |
| CS23 | 75% | 2,8 ± 1,9 mm2 |
A 7. táblázat eredményeiből látható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított sav-rezisztens FGFkompozíció használata fekélyek kezelésében jelentős javulást eredményez, a standard cimetidin terápiával összehasonlítva.
A találmány oltalmi körét természetesen nem kívánjuk a fenti példákra korlátozni. Szakemberek számára kézenfekvő változtatások ugyanúgy a találmány oltalmi körébe tartoznak.
9. példa
Ebben a példában az 1. és 7. példákban ismertetett módszert alkalmazzuk duodenális fekély redukálására normális patkányokban. Nőstény patkányoknak háromszor adunk orálisan ciszteamin-HCl-t 25 mg/100 g dózisban. Három nap múlva a hasfelmetszéses vizsgálat szerint áthatoló duodenális fekéllyel rendelkező állatokat véletlenszerűen kontroll és kezelt csoportokba osztjuk. Csoportonként 3-4 patkánynak (1) csak hordozóanyagot (2) 100 ng/100 g dózisban CS23-at (sav-rezisztens rhbFGF CS23 muteint), (3) 10 ng/100 g dózisban cimetidint és (4) 100 ng/100 g CS23-at + 10 mg/100 g cimetidint adunk, naponta két alkalommal gyomorszondán keresztül, a 21. napon végzett boncolásig, amikor is mérjük a fekély nagyságát és szövettani metszeteket is készítünk. Az eredményeket a 8. táblázatban ismertetjük.
8. táblázat
| Kezelés | Fckclyes patkányok aránya | Fekélyes terület |
| kontroll | 100% | 10,2 ± 8,0 mm2 |
| CS23 | 75% | 2,7 ± 1,8 mm2 |
| cimetidin | 50% | 7,9 ± 2,8 mm2 |
| CS23 + cimetidin | 50% | 2,0 ± 1,3 mm2 |
10. példa
Az alábbi példában K. Takagi és munkatársai [Jpn. J. Pharmacol., 19, 418-426 (1969)] módszere szerint indukálunk gyomorfekélyt normális patkányokban.
A vizsgálatokban héthetes, legfeljebb 250 g-os hím Jel: Spargue-Dawley patkányokat használunk. A patkányokat éténél altatjuk, és a hason bemetszést teszünk, 20 pl 20%-os ecetsavat injektálunk a savóhártya alatti rétegbe az üreg és a szerv elülső falának érintkezésénél a gyomorban. A vízben vagy 1%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban oldott hatóanyagokat orálisan adjuk 1 ml/100 g testtömeg dózistérfogatban naponta kétszer (reggel 9-kor és délután 4-kor) 14 egymást követő napon keresztül, az operáció utáni 2. naptól kezdve. A fekélyes terület nagyságát (mm2) és a fekély súlyosságát (O-tól 3-ig terjedő skála szerint, 0: teljesen gyógyult, 1: sebhely vagy szinte teljesen gyógyult, 2: enyhe fekély, 3: mély fekély vagy perforáció) 1 mm-es négyzethálós beosztású nézőkével (10-szeres nagyítás) ellátott boncolómikroszkóp segítségével határozzuk meg. A fekélyindexet a területből és a fekély súlyosságából kapjuk.
A gyomor savóhártyájába injektált ecetsav kerek fekélyt okoz. A vízzel kezelt kontroll csoport fekélyindexe 8,5 ± 2,4 volt. A CS23 vízben oldva 100 pg/kg dózisban mérsékelten gyorsította a fekély gyógyulását, és az 1%-os NaHCO3 maga nem befolyásolta a fekély gyógyulását (lásd 10. táblázat). Azonban 100 pg/kg CS23 1%-os NaHCO3-ban oldva jelentősen gyorsította a fekély gyógyulását (10. táblázat).
HU 207 227 B
10. táblázat
CS23 és 1%-os NaHCO3 hatása patkányban ecetsavval indukált gyomorfekély gyógyulására
| Kezelés | Dózis (μ/kg, p.o.) | Patkányok száma | Fekélyindex | Fekélyindex javulása (%) |
| H2O | 11 | 8,5 + 2,4 | - | |
| CS23 (H2O) | 100 | 11 | 6,4 ±2,2 | 25 |
| l%NaHCO3 | 13 | 10,1 ±3,3 | -19 | |
| CS23 (1% NaHCO3) | 100 | 10 | 2,1 ±0,7* | 75 |
az eredményeket átlagérték + s.e.-ként adjuk meg * p<0,05 H2O-val szemben
11. példa rhbFGF CS23 és spizofurán orális adagolására alkalmas gyógyászati készítményt állítunk elő az alábbiak szerint.
Az egyenként 1 mg rhbFGF CS23-at, 80 mg spizofuránt, 75 mg laktózt, 29,9 mg kukoricakeményítőt, 6,5 mg hidroxi-propil-cellulózt, 7,0 mg mikrokristályos cellulózt, 0,6 mg magnézium-sztearátot tartalmazó tabletta-magokat 7,5 mg hidroxi-propil-metil-cellulózból, 1,5 mg polietilénglikol 6000-ből és 1,0 mg titán-oxidból álló bevonattal látjuk el.
72. példa rhbFGF és prosztaglandin El orális adagolására alkalmas gyógyászati készítményt állítunk elő az alábbiak szerint.
mg rhbFGF CS23-at, 2,5 gg prosztaglandin Elet, 19 mg ciklodextrint és 380 mg laktózt 1-es számú zselatin kapszulába töltünk.
Claims (14)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás emlősök gasztrointesztinális traktusában lévő fekélyek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy savrezisztens FGF-kompozíciót gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal és/vagy egyéb segédanyaggal és kívánt esetben egy szekréciógátló szerrel, savközömbösítő szerrel vagy citoprotektív szerrel összekeverünk és a keveréket gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy sav-rezisztens FGF-kompozícióként (a) natív FGF-et 1:0,1 - 1:100 tömegarányban stabilizálószerrel kombinálva, vagy (b) sav-rezisztens FGF-et, vagy (c) sav-rezisztens FGF-et 1:0,1 - 1:100 tömegarányban stabilizálószerrel kombinálva alkalmazunk.
- 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy sav-rezisztens FGF-ként rhbFGF CS23 muteint alkalmazunk.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás regionális csípőbélgyulladás kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő FGF-kompozíciót a megfelelő segédanyagokkal keverjük össze.
- 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás fekélyes kolitisz kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő FGF-kompozíciót a megfelelő segédanyagokkal keverjük össze.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás peptikus fekélyek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő FGF-kompozíciót a megfelelő segédanyagokkal keverjük össze.
- 7. A 6. igénypont szerinti eljárás duodenális peptikus fekélyek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő FGF-kompozíciót a megfelelő segédanyagokkal keverjük össze.
- 8. A 6. igénypont szerinti eljárás peptikus gyomorfekélyek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő FGF-kompozíciót a megfelelő segédanyagokkal keverjük össze.
- 9. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy stabilizálószerként glükózamino-glukánt vagy glukán-szulfátot alkalmazunk.
- 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy glukán-szulfátként dextrán-szulfátot, ciklodextrán-szulfátot vagy p-l,3-glukán-szulfátot alkalmazunk.
- 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szekréciógátló szert is keverünk a sav-rezisztens FGF-kompozícióhoz.
- 12. All. igénypont szerinti eljárás, azzaljellemezve, hogy szekréciógátló szerként cimetidint vagy ranitidint alkalmazunk.
- 13. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy savközömbösítő szert is keverünk a sav-rezisztens FGF-kompozícióhoz.
- 14. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy citoprotektív szert is keverünk a sav-rezisztens FGF-kompozícióhoz.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US23496688A | 1988-08-19 | 1988-08-19 | |
| US07/382,263 US5175147A (en) | 1988-08-19 | 1989-07-20 | Acid-resistant fgf composition and method of treating ulcerating diseases of the gastrointestinal tract |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU895785D0 HU895785D0 (en) | 1990-12-28 |
| HUT55638A HUT55638A (en) | 1991-06-28 |
| HU207227B true HU207227B (en) | 1993-03-29 |
Family
ID=26928432
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU895785A HU207227B (en) | 1988-08-19 | 1989-08-11 | Process for producing pharmaceutical compositions containing acid-resistant fibroblast growth factor for treating gastrointestinal ulcers |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5175147A (hu) |
| EP (1) | EP0360006B1 (hu) |
| JP (1) | JP2501480B2 (hu) |
| KR (1) | KR920700040A (hu) |
| CN (1) | CN1040741A (hu) |
| AT (1) | ATE91628T1 (hu) |
| CA (1) | CA1330757C (hu) |
| DE (1) | DE68907679T2 (hu) |
| DK (1) | DK93890D0 (hu) |
| ES (1) | ES2058423T3 (hu) |
| FI (2) | FI901949A0 (hu) |
| HU (1) | HU207227B (hu) |
| IE (1) | IE63046B1 (hu) |
| IL (1) | IL91322A (hu) |
| NO (1) | NO901710D0 (hu) |
| WO (1) | WO1990001941A1 (hu) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5202311A (en) * | 1988-08-19 | 1993-04-13 | Children's Medical Center Corporation | Stabilized fgf composition |
| EP0406738A3 (en) * | 1989-07-03 | 1991-08-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production of acidic fgf protein |
| JPH0343088A (ja) * | 1989-09-29 | 1991-02-25 | Takeda Chem Ind Ltd | ａＦＧＦ蛋白質の製造法 |
| CA2020720A1 (en) * | 1989-07-13 | 1991-01-14 | Shigeko Yamazaki | Method for the purification of therapeutically active recombinant acidic fibroblast growth factor |
| AUPN271295A0 (en) * | 1995-05-02 | 1995-05-25 | Gropep Pty Ltd | Method of treatment |
| US6399569B1 (en) | 1991-03-11 | 2002-06-04 | Curis, Inc. | Morphogen treatments for limiting proliferation of epithelial cells |
| US5972884A (en) * | 1991-03-11 | 1999-10-26 | Creative Biomolecules, Inc. | Morphogen treatment of gastrointestinal ulcers |
| AU657960B2 (en) * | 1991-04-12 | 1995-03-30 | Brigham And Women's Hospital | Method of treating gastrointestinal ulcers with platelet derived growth factor |
| NO921495L (no) * | 1991-04-16 | 1992-10-19 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Oligosakkarid og fremgangsmaate for dets fremstilling |
| US6190864B1 (en) * | 1991-05-08 | 2001-02-20 | Chiron Corporation | HCV genomic sequences for diagnostics and therapeutics |
| US5348941A (en) * | 1992-04-01 | 1994-09-20 | Merck & Co., Inc. | Stabilizers for fibroblast growth factors |
| EP0646174A1 (en) * | 1992-06-16 | 1995-04-05 | The Whittier Institute For Diabetes And Endocrinology | Recombinant production of saporin-containing proteins |
| US5464815A (en) * | 1993-09-08 | 1995-11-07 | Genentech, Inc. | Inhibition of heparin-binding |
| US6551618B2 (en) | 1994-03-15 | 2003-04-22 | University Of Birmingham | Compositions and methods for delivery of agents for neuronal regeneration and survival |
| FR2718023B1 (fr) * | 1994-03-30 | 1996-08-14 | Paris Val Marne Universite | Médicament et composition pharmaceutique pour le traitement de lésions du tractus digestif. |
| US5783568A (en) * | 1994-06-10 | 1998-07-21 | Sugen, Inc. | Methods for treating cancer and other cell proliferative diseases |
| US5531880A (en) * | 1994-09-13 | 1996-07-02 | Microelectronics And Computer Technology Corporation | Method for producing thin, uniform powder phosphor for display screens |
| FR2724665B1 (fr) * | 1994-09-16 | 1996-12-20 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de production de proteines recombinantes, plasmides et cellules modifiees |
| US5593696A (en) * | 1994-11-21 | 1997-01-14 | Mcneil-Ppc, Inc. | Stabilized composition of famotidine and sucralfate for treatment of gastrointestinal disorders |
| US5538737A (en) * | 1994-11-30 | 1996-07-23 | Applied Analytical Industries, Inc. | Oral compositions of H2 -antagonists |
| KR100761486B1 (ko) * | 2000-08-15 | 2007-10-04 | 카디오배스큘러 바이오 떼러퓨틱스, 인크. | 파아지를 이용한 생리 활성 단백질 및 펩티드의 대량생산법 |
| AU2001286996A1 (en) * | 2000-08-31 | 2002-03-13 | Chiron Corporation | Stabilized fgf formulations containing reducing agents |
| JP2021513563A (ja) * | 2018-02-13 | 2021-05-27 | ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インコーポレーティッド | 線維芽細胞成長因子類似体及びその使用 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4296100A (en) * | 1980-06-30 | 1981-10-20 | Franco Wayne P | Method of treating the heart for myocardial infarction |
| DE3382562D1 (de) * | 1982-09-24 | 1992-06-25 | Us Health | Wiederherstellung von gewebe bei tieren. |
| JPS6034997A (ja) * | 1983-05-09 | 1985-02-22 | ジヨージ、ジヨセフ、トダロ | 生物学的活性ポリペプチド類 |
| JPS6028999A (ja) * | 1983-06-30 | 1985-02-14 | Maruho Kk | 細胞増殖促進作用を有するたんぱく質、その組成物と製造方法 |
| US4745098A (en) * | 1984-02-24 | 1988-05-17 | The Regents Of The University Of California | Compositions and method for improving wound healing |
| CA1207239A (en) * | 1984-08-10 | 1986-07-08 | Upendra K. Banik | Gastrointestinal compositions |
| JPS6172947A (ja) * | 1984-09-18 | 1986-04-15 | Takasago Thermal Eng Co Ltd | クリ−ンル−ムの形成法およびこの方法に使用する空気調和設備ユニツト |
| EP0593065B1 (en) * | 1985-09-12 | 2002-08-21 | Scios Inc. | Recombinant fibroblast growth factors |
| IL81839A0 (en) * | 1986-03-14 | 1987-10-20 | Takeda Chemical Industries Ltd | Polypeptide,dna and its use |
| CA1294546C (en) * | 1986-04-23 | 1992-01-21 | John S. Sundsmo | Wound healing composition containing collagen |
| NZ220917A (en) * | 1986-07-11 | 1991-05-28 | Merck & Co Inc | Human and bovine acidic fibroblast growth factor vectors, hosts and compositions |
| AU1185488A (en) * | 1987-01-16 | 1988-08-10 | Amgen, Inc. | Production of fibroblast growth factor |
| JP2879148B2 (ja) * | 1987-07-07 | 1999-04-05 | サイオス インコーポレイテッド | 組換え繊維芽細胞成長因子 |
| KR890701607A (ko) * | 1987-11-24 | 1989-12-21 | 원본미기재 | 섬유아세포 성장 인자의 유사체 |
| AU614137B2 (en) * | 1988-06-06 | 1991-08-22 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Stabilized fgf composition and production thereof |
| JPH0240399A (ja) * | 1988-07-27 | 1990-02-09 | Takeda Chem Ind Ltd | 線維芽細胞増殖因子ムテインの複合体あるいは組成物 |
-
1989
- 1989-07-20 US US07/382,263 patent/US5175147A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-11 WO PCT/US1989/003467 patent/WO1990001941A1/en active Application Filing
- 1989-08-11 JP JP1509678A patent/JP2501480B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-11 KR KR1019900700801A patent/KR920700040A/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-08-11 HU HU895785A patent/HU207227B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-08-15 IL IL9132289A patent/IL91322A/en unknown
- 1989-08-18 CA CA000608827A patent/CA1330757C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-18 IE IE266489A patent/IE63046B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-08-18 AT AT89115252T patent/ATE91628T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-08-18 EP EP89115252A patent/EP0360006B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-18 ES ES89115252T patent/ES2058423T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-18 DE DE89115252T patent/DE68907679T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-19 CN CN89106448A patent/CN1040741A/zh active Pending
-
1990
- 1990-04-17 DK DK093890A patent/DK93890D0/da not_active Application Discontinuation
- 1990-04-18 NO NO901710A patent/NO901710D0/no unknown
- 1990-04-18 FI FI901949A patent/FI901949A0/fi not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-04-03 US US07/862,776 patent/US5401721A/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-06-22 FI FI943028A patent/FI943028A/fi not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1040741A (zh) | 1990-03-28 |
| IE892664L (en) | 1990-02-19 |
| NO901710L (no) | 1990-04-18 |
| IL91322A0 (en) | 1990-03-19 |
| EP0360006B1 (en) | 1993-07-21 |
| DE68907679T2 (de) | 1994-01-27 |
| AU630111B2 (en) | 1992-10-22 |
| ATE91628T1 (de) | 1993-08-15 |
| NO901710D0 (no) | 1990-04-18 |
| AU4218989A (en) | 1990-03-23 |
| IE63046B1 (en) | 1995-03-22 |
| FI901949A0 (fi) | 1990-04-18 |
| US5175147A (en) | 1992-12-29 |
| DK93890A (da) | 1990-04-17 |
| WO1990001941A1 (en) | 1990-03-08 |
| DK93890D0 (da) | 1990-04-17 |
| EP0360006A3 (en) | 1990-04-04 |
| CA1330757C (en) | 1994-07-19 |
| HU895785D0 (en) | 1990-12-28 |
| IL91322A (en) | 1994-12-29 |
| KR920700040A (ko) | 1992-02-19 |
| FI943028A0 (fi) | 1994-06-22 |
| EP0360006A2 (en) | 1990-03-28 |
| FI943028A (fi) | 1994-06-22 |
| DE68907679D1 (de) | 1993-08-26 |
| JPH03505736A (ja) | 1991-12-12 |
| US5401721A (en) | 1995-03-28 |
| HUT55638A (en) | 1991-06-28 |
| ES2058423T3 (es) | 1994-11-01 |
| JP2501480B2 (ja) | 1996-05-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU207227B (en) | Process for producing pharmaceutical compositions containing acid-resistant fibroblast growth factor for treating gastrointestinal ulcers | |
| EP0706398B1 (en) | Pharmaceutical composition containing heparin, heparin fragments or their derivatives in combination with glycerol esters | |
| HU208635B (en) | Process for production of stabilized medical preparatives containing fibroblast growing factor | |
| US5234908A (en) | Method of treating gastrointestinal ulcers with platelet derived growth factor | |
| US20070254828A1 (en) | Pharmaceutical composition with healing activity comprising at least one soluble dextran derivative and at least one platelet-derived growth factor | |
| EA013369B1 (ru) | Модифицированная композиция фактора роста кератиноцитов и способ ее применения | |
| US5482929A (en) | Composition of stabilized fibroblast growth factor | |
| BG64458B1 (bg) | Използване на цинков хиалуронат срещу пептична язва | |
| JP3860415B2 (ja) | 骨代謝異常症治療剤 | |
| Fukunaga et al. | Aluminium β‐cyclodextrin sulphate as a stabilizer and sustained‐release carrier for basic fibroblast growth factor | |
| JPH06506939A (ja) | 血小板由来の成長因子に依る消化管潰瘍の治療方法 | |
| CZ20022231A3 (cs) | Komplex skládající se z osteoklastogenezi inhibujícího faktoru a polysacharidu | |
| AU630111C (en) | Acid-resistant FGF composition and method of treating ulcerating diseases of the gastrointestinal tract | |
| HU200277B (en) | Process for producing pharmaceutical composition comprising human xiii factor as active ingredient | |
| RU2020931C1 (ru) | Способ получения лекарственного средства для лечения язвенной болезни желудочно-кишечного тракта млекопитающих | |
| JPH05331199A (ja) | 凍結乾燥した酸性線維芽細胞成長因子 | |
| CA2616125A1 (en) | Truncated oxidized thymosin .beta.4 and derivatives thereof | |
| JP2688733B2 (ja) | 消化管粘膜障害の予防及び治療剤 | |
| Garner | Enhancing mucosal defence and repair mechanisms | |
| JP2020143036A (ja) | リポソーム、およびそれを含有する抗マラリア薬 | |
| WO1994004175A1 (en) | Hgf production promoter | |
| JPH0640940A (ja) | 線維芽細胞成長因子安定化組成物 | |
| JPH10251153A (ja) | アスピリンおよび抗−Ｘａオリゴ糖の組合せを含有する組成物ならびにアスピリンと任意的に組み合わせた抗−Ｘａオリゴ糖の使用 | |
| MXPA97001943A (en) | Compositions containing an acetilsalicilic acid association and an anti-xa oligosacarid and use of an anti-xa oligosacaride optionally in combination with acetilsalicil acid | |
| JPH10251162A (ja) | 上部消化管疾患の予防および／または治療剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |