JPH06506939A - 血小板由来の成長因子に依る消化管潰瘍の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 血小板由来の成長因子に依る消化管潰瘍の治療方法本出願は１９９１年４月１２ 日出願の、米国特許出願第６８５，０８５号の一部継続出願である。

本発明は広義には消化管（Ｇり疾患の治療に関する。

本光凱■宜景 消化性潰瘍は胃壁の病変として生しる胃潰瘍、十二指腸、即は天然の粘液重炭酸 層を維持する因子のアンバランスから生して、上皮及びその下方の結合組織の破 壊に至る。シメチジン細胞数の減少に帰せられる。この領域は従って消化管の酸 性が結腸壁の粘膜及び粘膜下層に限局され、結腸直腸粘膜の重度の炎症、陰窩ｍ 瘍及び多発性潰瘍を生しる。本疾患の特徴は血便、下痢、発熱、及び肝機能異常 である。すべての慢性潰瘍性大腸炎患者の５０％以上は、病変＆ｌｌ織の切除を 目的とした手術を発病２年以内に受けている。

潰瘍性大腸炎は多様な癌化学際法の、重度且つ薬物用量を抑制している毒性副作 用である。この状態がもたらず病変は、患者に激痛及び機能不全を引き起こす。

口腔粘膜の破壊は、口腔内に見い出される多数の微生物の全身的侵襲の人口とな る。従って、口腔は顆粒球減少性癌患者に生じる敗血症の最も高頻度に特定され る原因となる。粘膜炎の現行の治療法は局所的または全身的な対症療法、もしく は局所的な抗菌剤療法に限られてＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ８９１０３４６７号 は、消化器潰瘍の治療に耐酸性の繊維芽細胞成長因子の使用を開示している。

見肌■！對 本発明は血小板由来の成長因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗ ｔｈｆａｃｔｏｒ、　ＰＤＧＦ）が、全消化管の上皮層の下層に位置する肉芽組 織の成長の強力な促進剤である発見に基づく０本発明は哺乳類の消化管内に存在 する潰瘍の治療方法を特徴とし、治療有効量のＰＤＧＦまたはその薬物学的に許 容出来る形態を、哺乳類の消化管に投与することを含む。ここに用いられる消化 管は口から直腸に至る迄を言う。

本発明の好ましい実施態様に於て、哺乳類はヒトであり、本発明に依って治療可 能な潰瘍には、局部的な回腸炎を生じる回胃に見出される胃潰瘍、または十二指 腸もしくは食道に見出される潰瘍の様な消化性潰瘍を含む。好ましくは、ＰＤＧ Ｆは本発明に従って経口または経腸的に投与する。

本発明に南いられる”ＰＤＧＦ’は、天然のＰＤＧＦ、遺伝子組換えＤＮＡ技術 に依って真核細胞または細菌宿主細胞、並びに生物学的活性を有するＰＤＧＦの 突然変異体、ＰＤＧＦの生物学的活性分画、及びＰＤＧＦの生物学的活性分画の 生物活性を有する活性突然変異体を用いて得られるＰＤＧＦを包含する。生物学 的活性のある突然変異体、ＰＤＧＦまたはその分画はＰＤＧＦの生物学的活性領 域を保持するが、天然ポリペプチドのアミノ酸配列と異なって良い、即ちＰＤＧ Ｆ分画は蛋白質の生物学的活性に不必要なアミノ酸配列を欠いても良く、またＰ ＤＧＦ突然変異体は生物学的活性に必須ではないアミノ酸を欠いても良く、ある いは付加的、もしくはその存在がこの蛋白質の生物学的活性に影響しないアミノ 酸で置換されても良い。

本発明に用いられる”潰瘍”とは、開放性病変または消化管の上皮下層の統合性 を破る障害に関連し、下層の肉芽組織に摩爛を生じる。

本発明のその他の特徴及び利点は、以下の好ましい実施態様及び特許請求の範囲 の記述から明かとなる。

光１９１縦度凱泗。

ＰＤＧＦは血小板によって産生されるペプチド　ホルモンであり、傷創の治癒、 動脈硬化症、腫瘍、胚形成及び骨髄線維症を含む生物学的システムの広範囲な制 御に影響する。創傷の治癒に於て、ＰＤＧＦは繊維芽細胞、平滑筋、及びグリア 細胞の走化性並びに有糸分裂反応の双方を誘発する。上皮細胞下層の傷害は、創 傷部位にｌＩｎした結合組織に血小板が付着して、ｒ’ＤＧＦの放出をもたらす 。放出されたＰＤＧＦは走化性的に繊維芽細胞、単球、グリア及び平滑筋細胞を 創傷部位に移動させると考えられている。

ＰＤＧＦはこれらの細胞中のＤＩＩＡ合成を刺激して、その増殖速度を増加させ ると考えられている。

天然のＰＤＧＦは２本のポリペプチド鎖から成る二量体分子であり、その１方ま たは双方にＭｔｌが結合していることがある。２本の鎖は、Ａまたはα及びＢま たはβと呼ばれ、同様な性質ではあるが同一ではない。２本鎖は分子量がそれぞ れ約１７，０００〜１８．０００ダルトン及び約１３，０００〜１４，０００ダ ルトンである。生体内では、Ａ及びＢ鎖は分子量の大きな前駆体から合成され、 アミノ基及びカルボキシ基末端が反応を受ける。成熟したヒト＾鎖は１１０また は１２５個のアミノ酸及び種々のＮ−結合糖側鎖から成り、その長さ及びアミノ 酸配列は起Ｂ組織に依って定められている。

完全に成熟したヒトＢ鎖はＣ−５ｉｓ遺伝子に依ってコードされアミノ酸１１． ２個を有する。生物学的に活性なＰＤＧＦは＾＾またはＢＢの二量体としても存 し、分子量はそれぞれ約３５　、０００ダルトン及び３２．０００ダルトンであ る。

本発明は哺乳類、特にヒトの消化管内の潰瘍性疾患の治療方法を従供する。消化 管は、口腔から直腸に至り肉芽組織を覆う上皮層を有する。従って、全消化管、 口腔、食道、胃、上部及び下部腸管、並びに結腸はこれらの類領する細胞の型を 有している。従って、潰瘍、例えば回腸潰瘍の本発明に依るＰＤＧＦの投与に依 る治療は、消化管のその他の部位の潰瘍治療、例えば口腔にも適用可能である。

以下に本発明のＰＤＧＦに依る十二指腸潰瘍の治療実験を示し、無治療の潰瘍よ り速やかに治癒した、また口腔粘膜炎及び潰瘍性大腸炎の治療にＰＤＧＦを投与 した実験を示す。本発明に依るＰＤＧＦ投与は消化管のすべての領域の潰瘍に通 用可能である。本発明の方法は、その方法の最も簡単な形態で、哺乳類の消化管 への治療有効量のＰＤＧＦまたは薬物学的に受け入れられる誘導体、もしくは塩 類の非経口的投与を含むが、より好適には経口または直腸投与が含まれる。

ＰＤＧＦはヒトの血小板から調製され、遺伝子ＭＡ換えＤＮＡ技術に依って製造 され、また市販もされている。ヒト血小板からのｅＯＧＦの調製は文献に記載さ れている。例えば、Ｈｅ１ｄｅｎ　ｅｔ　ａｌ、。

（１９７９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　１１．ｓ、Ａ 、、　７６：　３７２２−３７２６　；Ａｒ＋ｔｏｎｉａｄｅｓ　ｅｔ　ａｌ、 、（１９７９）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、八、。

７６：１８０９−１８１３．　Ａｎｔｏｎｉａｄｅｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｌｌ、 Ｓ、Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、４，４７９，８９６及びＬｉｐｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ、 、　Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、　４＋３５０＋６８７が挙げられ１、：れ らのすべてをここに引用する。更に、ＰＤＧＦはＥＰ公開第０１７７９５７号記 載の形質転換した酵母の様な真核細胞、あるいは　ξ−ｃｏｌｉの様な形質転換 した原核細胞を用いた遺伝子組換え技術で産生される（Ｃｈａｒｅｔｔｅ　ｅｔ 　ａｌ、、米国特許出願第０７／１５５，０６６号：出願日１９８８年２月１１ 日、同一譲受人に譲渡し、ここに引用する）。

ＰＤＧＦはＡ＋ｗｇｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　（Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａ ｋｓ＋　ＣＡ）　、　ＰＤＧＦ　Ｉｎｃ。

（Ｂｏｓｔｏｎ、門Ａ）、　Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 Ｉｎｃ、（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）及びＣｒｅａｔｉｖｅ　ＢｉｏＭｏｌｅｃｕ ｌｅｓ、　Ｉｎｃ、（Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、　ＭＡ）から購入可能である。

投与の為のＰＤＧＦの製剤化は通常の技術で達成される。例えば、液剤、錠剤ま たはカプセル製剤は、薬学的に許容される担体く例えば、乳糖、澱粉、軽質無水 珪酸、微結晶セルロース、蔗糖）、結合剤（例えばアルファー型澱粉、メチルセ ルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒド ロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン）、崩壊剤（例えばカ ルシウム　カルボキシメチルセルロース、澱粉、低置換ヒドロキシプロピルセル ロース）、界面活性剤［例えば、Ｔｗｅｅｎ　８０　（花王−アトラス）　、Ｐ ｌｕｒｏｎｉｃ　Ｆ１ａ　（旭電化、日本）；ポリオキシエチレン−ポリオキシ プロピレン　共重合体）］、抗酸化剤（例えば、Ｌ−システィン、亜硫酸ナトリ ウム：アスコルビン酸ナトリウム）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム 、タルク）、及び同効物を用いて調製出来る。

直腸製剤も常法で調製される、例えば高級脂肪酸グリセライドの様な油性基剤［ 例えば、カカオ　バター、ｌｌｉ　ｔｅｐｓｏｌｓ　（半合成基剤）　Ｄｙｎａ ｍｉｔｅＮｏｂｅｌ　％　ドイツ連邦共和国］、脂肪酸グリセライド基剤［例え ばＭｉｇｌｙｏｌｓ　（Ｄｙｎａｍｉｔｅ　Ｎｏｂｅ＋）　］または植物油（例 えば、胡麻油、大豆油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油）が用いられる。

本組成を注射用水溶液に調製した場合、溶液は水性溶媒（例えば蒸留水、生理食 塩液、リンゲル液）または油性溶媒（例えば胡麻油、オリーブ油）を用いて通常 の方法で調製される。もし所望ならば、１種以上の添加物を使用しても良い。こ の様な添加物には、溶解補助剤（例えばサリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム ）、緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム、グリセリン）、等張化剤（例えばヒト 血清アルブミン、ポリエチレングリコール）、保存剤（例えばベンジル　アルコ ール、フェノール）または鎮痛剤（例えば塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイ ン）が含まれる。

組成物を注射剤に製造する場合は、例えば希釈剤（例えば薄留水、生理食塩液、 ブドウ糖）、医薬添加物（例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナト リウム）、保存剤（ベンジル　アルコール、塩化ベンザルコニウム、フェノール ）、または鎮痛剤（例えばブドウ糖、グルコン酸カルシウム、塩酸プロカイン） を用いて常法で調製される。

或種の下部消化管疾患、例えば消化性潰瘍及び潰瘍性大腸炎並びにその他の炎症 性腸管疾患では、ｐｏｃｐ［酸物をフタール酸ヒドロキシプロピルメチルセルロ ース、酢酸フタール酸セルロース、またはメタクリル酸共重合体の様な、腸溶性 共重合体で、ＰＤＧＦを更に胃酸及びペプシンの様な消化酵素から保護する為に 被覆する。この被覆組成物は、従ってその治療効果が最高となる消化管領域に迄 通過する。

本発明はまたＰＤＧＦまたはその塩、及びＰＤＧＦを安定化し、効力を増強し、 またはその他治療効果に影響する１種以上の薬剤から成る医薬組成物の投与を可 能とする。この種の薬剤に、（１）ヘパリンを含むグリコースアミノグリカン、 デキストラン硫酸の樟な硫酸グルカン、β−シクロデキストリン　テトラデカ硫 酸、及びβ−１，３−グルカンの様な硫酸化シクロデキストリン、（ｉｉ　）Ｈ ２−受容体拮抗剤（例えばｃｉｓｓｔｉｄｉｎｅＳｒａｎＨ４ｄ＋ｎｅ、　ｆａ ｍｏ−ｔｉｄｉｎｅ、　ｒｏｘａｔｉｄｉｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）　、ムスカリ ン受容体拮抗剤（例えばｐｉｒｅｎｚｅｐｉｎｅ）、プロトン　ポンプ（ＡＴＰ ａｓｅ）阻害剤（例えばｏｍｅｐｒａｚｏｎｅ　）の様な分泌抑制剤、（山）コ ロイド状ビスマス塩（例えばＤｅ−Ｎｏｌ）　、５ｕｃｒａｌｆａｔｅ及びプロ スタグランジン誘導体の様な細胞保護剤、及び（１ｖ）水酸化アルミニウム　ゲ ル、水酸化マグネシウム及び重炭酸ナトリウムの様な制酸剤を含む。

この樺な薬剤は別個にまたは組成物の１成分として投与可能である。

安定剤及び効力増強剤とＰＤＧＦとの量的比率は、使用した薬剤、患者の状態、 及び投与形態を含む多数の要因に依って異なる。

−Ｃ的に、安定剤とＰＤＧＦとの重量比は、約０．１〜１００であり、より好ま しくは０．２〜２０、更に好ましくは約０．５〜４である。

本発明に於て使用出来る安定剤にはヘパリン、ヘパリン分画の様なグリコースア ミノグリカン、硫酸デキストラン、硫酸ンクロデキストリン及び硫酸β−１，３ −グルカンの様な硫酸グルカンが含まれる。本発明で使用可能な硫酸グルカンは 塩の形態でも良い。塩類としては、すべての薬学的に許容されるカチオン、例え ばナトリウム、カリウム、アンモニウム、トリメチルアンモニウム、及び類似物 が使用される。

好ましい分泌抑制剤はｒａｎｊｔｉｄｉｎｅ及びｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅである。

使用する分泌抑制剤の投与量は上記した因子に依って変動する。

例えば、消化性潰瘍の治療に使用した場合、好ましい組成物にはＰＤＧＦ約１０ 〜３００μｇ、好ましくはＰＤＧＦ　１００μｇ、及び分泌抑制剤を約２０＝６ ００−ｇ、好ましくは２００　幅ｇ含有させる。

好ましい制酸剤には水酸化アルミニウム　ゲル、重炭酸ナトリウム及び水酸化マ グネシウムが含まれる。制酸剤はＰＤＧＰと併用、またはＰＤＧＦの製剤中に１ 成分として含有させる。制酸剤の使用量は通常投与１回につき０．５〜５．Ｏｙ ｍｇである。

細胞保護剤の使用量は使用薬剤を含めて要因の数に依存する。

通常成人１名当りプロスタグランジン誘導体２．５〜５μｇ、及び５ｕｃｒａｌ ｆａｔｅ　０．５ｕｇである※代表的なＰＤＧＦ製剤の例は安定剤である硫酸グ ルカンとの組合せである。本発明のＰＤＧＦ蛋白質成分が、水性媒体中で硫酸グ ルカンと接触する場合には、一層ＰＤＧＦを安定化させるには二または三塩基性 カルボン酸の存在下で実施するのが好ましい。二塩基性カルボン酸の例には、酒 石酸、マレイン酸、リンゴ酸及びフマール酸が含まれる。三塩基性カルボン酸の 例にはクエン酸及びイソクエン酸が含まれる。上記したカルボン酸類は塩の形態 でも差し支えない。天然のカルボン酸を水性媒体中に添加することも可能であり 、好ましくは適量のアルカリまたは酸を、Ｈを調整する為に添加する。　Ｉ’Ｄ ＧＦ蛋白質成分を硫酸グルカンと、更にカルボン酸と水性媒体中で接触させるに は、これらの成分を水性媒体中で撹拌して行なわれる。水性媒体は好ましくは蒸 留水、生理食塩液、ブドウ糖液、リン酸緩衝液及び塩酸トリス−ヒドロキソメチ ルアミノメタン緩衝液の様な緩衝液から成る。

ＰＤＧＦ蛋白質成分の水性溶液、硫酸グルカンの水溶液及びカルボン酸の水溶液 を混合するか、これらの固形成分の混合物を水に熔解させることが可能である。

これらの成分の混合は３〜ＩＯ’Ｃ２より好ましくは約５〜９°Ｃの温度範囲で 行なわれる。混合に要する時間は通常１〜３０分の範囲である。得られた組成物 は凍結乾燥することが可能であり、その間に複合体が形成されて取得される。得 られた安定化ＰＤＧＦＭｉ成物の単離酸物取得には、５ｅｐｈ−ａｄｅｙ、ゲル を用いたゲルＩＩｌ過、または１）ＥＡＥ−もし７くはＣＭ−Ｔｏｙｏｐｅａｒ ｌを用いたイオン交換りｌコマトゲラフイーが使用される。あるいは安定化した ＰＤＧＦ＆ｌｌ成物は分離ま酸物回収せずにそのまま使用可能である。

ｙｉＸ段を及で敗与方法 本発明に依る消化管ａ瘍に対する好ましい投与方法は経口投与、例えば錠剤、カ プセル、トローチまたは明明ガムであり、または平削あるいは浣腸に依って直腸 投与される。消化管疾也のその他の投与経路には、非経口的、例えば静注または 皮下性が含まれる。

ヒト成人患者の消化管潰瘍治療に要するＰＤＧＦの投与量設定は、通常約０．！ 　ｕｇ　−３０ｍｇ／Ｂ、好ましくは約０．１　ｔｔｇ　〜ＩＯｍｇ、より好ま しくは約１．０　μｇ〜３　ｍｇ／　日、また、最も好ましくは、約１０μｇ〜 ３００　μｇ７日である。経口投与には、ＰＤＧＦまたはその塩の１０μｇ＝］ 、５０μｇを、薬学的に許容される担体、希釈剤またはその他の適当な媒体出兵 に錠剤またはカプセル剤とする。

このような製剤は好ましい用量範囲で、１日１〜４回投与が好適である。

本発明は以下の実験を参照すると一層理解されるであろう。

誘溌」≦」１１Ｗ退Ｇ　Ｆ　？ｆ６Ｍ 以下の実験では、ラットに潰瘍を誘発し、次いでＰＤＧＦを投与して治療した。

雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット、体重１５０〜２００　ｇに十二指腸 潰瘍誘発因子塩酸システアミン２５　ｍｇ／１００　ｇ体重を、１日３回強制経 口投与した。更に、ラット毎にコルチゾール５　ｍｇ／１００　ｇ体重を、塩酸 システアミン投与に依る死亡率を低下させる為に、単回皮下投与した。

塩酸システアミン投与３日後に、穿孔性士−指！１ｉｆｉｌｉを有するラットを 、腹腔切開で確認し、対照群とＰＤＧＦ投与群に無作為に分けた。

第１群は潰瘍を有する９２１９匹とＵ７な。第１群全９匹のラットにはＰＤＧＦ は投与せず、生理食塩液のみを投与した。ラットには生理食塩液の１日２回強制 紅ｒ−１投与を第２１日の剖検迄実施し、ａ瘍の測定と組織学的検査横木を採取 した。

第２群はラット５匹とし、ＰＤＧＦ　１００　ｎｇ／１００　ｇ体重の、１日２ 回強制経口投与を 第２１日の剖検迄実施し、潰瘍の測定と組織学的検査標本を採取した。

第３群はラット５匹とし、それぞれにＰＤＧＦ　５００　ｎｇ／１００　ｇ体重 の、１日２回強制経口投与を第２１日の削検迄実施し、潰瘍の測定と組織学的検 査横木を採取した。

ＰＤＧＦ投与の有無双方の群及び対照群の潰瘍の測定結果は第１表に示した。

第１表 第１群 潰瘍発生率　・　１００χ 潰瘍陥凹　・　１６．９±６．８　ａｍ”第２群 潰瘍発生率　・　６０χ ａ瘍陥凹＝　２．５　＋１．１　＋ｕ＋ｚ（ｐ　＝　０．０５１）第３群 潰瘍発生率　・　２９χ 潰瘍陥凹＝　２．０５＋１．４　ｅ＋＋ｗ”　（ｐ　２０．０４８＞ＰＤＧＦ投 与群ラノＩうの十二指腸切片の組織学的検査は、顕著且つ濃密な肉芽組織及び部 分的もしくは完全な上皮化を有する治癒潰瘍を示した。

従って、この結果はＰＤＧＦの経口投与が、存意に消化管の潰瘍の治癒を促進す ることを示した。

」Ｌ■！量及互ごブ２之分撮 以下の実験では、胃酸及びペプシン分泌量を、ＰＤＧＦ投与群及び対照群ラット で測定した。

第１群はラット８〜ｌＯ匹とし、２４時間絶食後にエーテル麻酔下に生理食塩液 及びラテックス３０　ｎ＋ｇを投与した。ランドの胃は１時間の幽門結紮で絞窄 した。

第２群はラット８〜１０匹とし、２４時間絶食後にＰＤＧＦ　５００　ｎｇ／１ ００　ｇ体重を注射筒で強制経口投与した。ラットの胃は１時間の幽門結紮で絞 窄した。

次いで第１及び第２群の各ラットから胃液を採取し、遠心分離して胃酸分泌及び ペプシン分泌の測定をする為に水層の酸度滴定を行なった。胃酸は胃液の酸性度 から測定し、ペプシン濃度は周知の方法である標準的プロテア・−ゼ測定で決定 した。ペプシンが胃内で最も豊富なプロテアーゼであるので、総プロテアーゼ濃 度はベペプシン濃度の良い指標となる。胃液の水性成分はアルブミンを基質とし た分光測定で分析した（Ｓｚａｂｏ、　Ｓ。

ｅｔ　ａｌ、＋　Ｒｅｓ、Ｃｏｖｅ、Ｃｈｅｗ、Ｐａｔｈｏｌ、Ｐｈａｒｍａｃ ｏｌ、＋　１９７７＋　１６＋３１１−３２３、引用文献として採用）。

第１群の対照ラットにはＰＤＧＦではなく生理食塩液を投与し、胃ペプシンは正 常濃度であった。第２群にはＰＤＧＦ投与群を含め、胃液容量及びペプシン分泌 量に減少は認められながった。従って、消化管潰瘍のＰＤＧＦ治療は、消化管内 の胃酸及びペプシン分泌の正常値に影響を示さなかった。

ロ　ニ′のＰＤＧＦ汐２、 口腔結膜炎には、放射線療法または化学療法等の結果としての口腔の潰瘍が含ま れる。潰瘍性結膜炎の経過は破壊相と治癒相に分けられる。口腔上皮の基底層の 細胞は迅速に分裂するので、抗有糸分裂剤及び化学療法の毒作用の影響を受け易 い。その結果、萎縮性変化が生じて潰瘍へと移行する。これが破壊相である。潰 瘍の形成に続いて、治癒相の間に病変は徐々に消退する。ＰＤＧＦは上皮細胞増 殖の既知の促進剤である。結膜炎の治癒時間の短縮に於ける有効性は、当業者に は既知の実験方法で評価可能であり、その１例を以下に示す。

雄性の６〜８週齢のゴールデンシリアンハムスター（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ 　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｗｉ１ｍｉｎｇｔｏｎ＋　ＭＡ）対するＰＤＧ Ｆの作用を検討した。試験ハムスタ一群は、（１）偽薬対照群、（２）ＰＤＧＦ 低用Ｈｆｆ−１及び（３）　ＰＤＧＦ高用量群に分けた。各群は１２匹のハムス ターで構成した。

第０日に、全５群に結膜炎誘発処置を開始した。Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉ１６０ 　ｍｇ／ｋｇを第０日から第５口上、５回腹腔内投与した。第２日に、右頬袋粘 膜の表層を１８ゲージ針で刺激した。重度の潰瘍性結膜炎が、少なくとも８０！ のハムスターに第７日進に生した。

第５日より、第２及び第３群のハムスターに、約１００〜５００ｎｇ／１００　 ｇ体重のＰＤＧＦを１日２回投与し、第１８口上継続した。第１群のハムスター には第０〜１８日の間、偽薬投与を行なった。

媒体対照またはＰＤＧＦの投与は、頬袋粘膜を穏やかに乾燥させてから行ない、 媒体またはＰＤＧＦ材料を平均して粘膜表面に投与した。ＰＤＧＦが粘膜と接触 を保つ樺にしドロキシプロピルセルロース基剤で被覆した。本被覆で少なくとも ４時間の接触時間を保持した。

第９［］ζｒ、各群２匹のハムスターを屠殺して組織学的検査を行なった。右頬 袋粘膜及びその下層の結合組織を切除し、て１０τホルマリンで固定しまた。こ の検体はパラフィンに埋包し、で組織学的検査を行なった６切片は・＼フトキシ リン及びエオシン？′染色し、ハムスター組織の［口腔病理に精通１．た］」腔 癩病理学者、″、、起′ａ、を知らせずに検査させた。萎縮、細胞浸潤、及び結 合組織の破壊の程度、潰瘍及び上皮化の進行度を８ｆ価した。

Ｄ腔潰瘍は次いで、対照群に比した治癒の促進の徴候を観察ｔ７た。その他のハ ムスターは、毎日検査及び体重測定を行い、右頌袋は反転させて写真撮影を行な った。

頬袋の写真には番号を付して、無作為に標準的結膜炎パネルに就いて３名の観察 者に起源を知らせす′に評価させた、各群の平均結膜炎評点は、各実験日に採点 ｊ７た。群間の相違は５ｔｕｄｅｎｔのｔ検定で判定した。更に、データはχ２ 統計的分析を用いて、重度の結膜炎を有するハムスター数を比較して群間で評価 した。

毎［３の平均体重の有意差も測定し７た。　ＰＤＧＦに依るこの様な治療が口腔 内の潰瘍＆［ｌ織の治癒に依って…傷を減退させると予測された。

墳１ｊ）Ｊ１鯰４則吐拍瀝 潰瘍性大腸炎には結腸の潰瘍が含まれる。結腸潰瘍に対するＰＤＧＦ治療の効果 は、当業者には周知の実験方法に依って評価可能であり、その１例を以下に示す 。

ハムスター、体重５００〜５５０ｇ　（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｉｅｓ）を個別ケージに収容し、温度調整した室内に置き、ハムスタ ー飼料（Ｐｕｒｉｎａ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）及び水を自由 に摂取させた。

環境順応４８時間後に、ハムスターを３実験群に分けた。

３群すべてに分解カラゲニン（紅藻から得られた多＠ｌ＠、　Ｇｌａｘ。

１、ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、パリ、フランス）を含有する水を与えた。カラゲ ニンはハムスターではｆｆｉ瘍性天性大腸炎発物質として既知である。対照群（ １）では、ハムスター２０匹に分解カラゲニン含有量Ｏχの水を琴えた。第２及 び第３群のハムスターにはそれぞれ分解カラゲニン１χ及び５χを含有する水を 与えたにの実験は３０日間継続した。この期間中、ハクスフ−は毎［ｊ観察及び 体重測定を行なった。

大腸炎の発生は数挿の基準で測定し／３〜：１）肉眼に依る軟便及び／または血 便の有熊、２）潜血検出のＣ０ＩＯ５（、ｒｅｅｎ　ｍ　（Ｍｅｌｅｎａｌ、、 ａｂｓ、、　Ｂｕｍｏｎｔ、　ＴＸ）を使用する糞中の潜血の検出、及び３）体 重の減少である。

第２５日に、各ハムスターはｋｅｔａｍｉｎｅ　３−５　ｍｇ／ｋｇの筋注で麻 酔し、結腸直腸粘膜生検で３１の検体を小型鼻腔鏡で採取した。

すべての検体は１５χフオルマリンで固定し、ヘマトキシリン及びエオシンで染 色して組織学的検査を行なった。潰瘍性大腸炎の病理学的診断は陰窩ＩＩ瘍、リ ンパ球浸潤、基底膜のｔ細管欝血及び結腸粘膜の潰Ｊｉ（Ｏｎｄｅｒｄｏｎｋ、 　Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ　５ｃｉｅｎｃｅ。

３０：　４０（ｓ）、　１９８５　、引用文献として記載）で確定した。潰瘍性 大腸炎の重度は０〜３に段階付けし、標準的点数システムに依り病理学的指数と して表現した（Ｏｎｄｅｒｄｏｎｋ　ｅｔ　ａｌ、、　Ａｓｅｒ、　Ｊ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、　３２：２５８．１９７９．０ｋａｙａｓｕ 　ｅｔ　ａｌ、、　Ｇａｓｔｒｏｅｎ−ｔｅｒｏｌｏｇｙ、　９８：６９４．１ ９９０、両文献とも引用文献として記載）。

第３０日に、組織学的に潰瘍性大腸炎が示されたハムスターの２５２に、ＰＤＧ Ｆを投与し、残りの２５％に対照として蒸留水を投与した。ＰＤＧＦはハムスタ ーの半数に１００　ｎｇ／１００　ｇ体重の低用量を、残りの半数に５００　ｎ ｇ／１００　ｇ＃重の高用量を、３１ＩＩＩのバルブ針で１日２回、第２８〜３ ７日の１０日間１日２回経口投与した。

投与期間中、ハムスターは毎日臨床検査を行い、体重の増加、糞便の状態及び糞 便中の血液の減少または消失を記録した。第３７日に、すべてのハムスターを２ ００−ｇ／ｋｇを超す大量のｐｅｎｔｏ−ｂａｒｂｉｔａｌを投与して層殺し、 全結腸を摘除して、カラゲニン誘発結腸潰瘍の治癒に於ける０ＤＧＦの治療有効 性を検討した。

統計的分析は統計解析システムの反復測定分散分析（八ＮＯνＡ）を用いて行な い、Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ検定に依る各群毎の対電の比較を行なった。有意 差はｐ＜０．０５とした。データの統合及び分析はＣ１１ｎｆｏ　Ｄａｔａ　Ｍ ａｎａｇｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ｂｒｉｇｈ ａｍ　ａｎｄＷｏｍｅｎ’ｓ　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ、　Ｂｏｓｔｏｎ＋　ＭＡ）の 協力を得た。　ＰＤＧＦ治療は結腸の潰瘍性＆ｉ１１織に有意な治癒をもたらす と予想される。

土９菫９１１１旧 その他の本発明の実施態様は以下の特許請求の範囲に示す。

補正書の写しく翻訳文）捷出書（特許法第１８４条の８）平成５年１０月８日

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．治療有効量の血小板由来の成長因子またはその薬学的に許容される形態を哺 乳類の消化管内に投与することよりなる哺乳類の消化管内に存する潰瘍の治療方 法。
2. ２．請求項１の方法に於て、潰瘍が回腸に存する方法。
3. ３．請求項１の方法に於て、潰瘍が結腸に存する方法。
4. ４．請求項１の方法に於て、潰瘍が口腔に存する方法。
5. ５．請求項１の方法に於て、潰瘍が消化性潰瘍である方法。
6. ６．請求項５の方法に於て、前記消化性潰瘍が十二指腸内に存する方法。
7. ７．請求項５の方法に於て、前記消化性潰瘍が胃内に存する方法。
8. ８．請求項５の方法に於て、前記消化性潰瘍が食道内に存する方法。
9. ９．請求項１〜８の方法に於て、前記哺乳類がヒトである方法。
10. １０．請求項１〜８の方法に於て、ＰＤＧＦを経口投与する方法。
11. １１．請求項９の方法に於て、ＰＤＧＦを経口投与する方法。
12. １２．請求項１〜３及び５〜８の方法に於て、ＰＤＧＦを経直腸投与する方法。
13. １３．請求項９の方法に於て、ＰＤＧＦを経直腸投与する方法。
14. １４．消化管の潰瘍治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。
15. １５．潰瘍性大腸炎の治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。
16. １６．口腔粘膜炎の治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。
17. １７．消化性潰瘍の治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。
18. １８．十二指腸潰瘍の治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。
19. １９．胃潰瘍の治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。
20. ２０．食道潰瘍の治療の医薬調製に使用する血小板由来の成長因子。