HU206126B - Process for producing growth hormone releasing factor derivatives - Google Patents

Process for producing growth hormone releasing factor derivatives Download PDF

Info

Publication number
HU206126B
HU206126B HU863722A HU372286A HU206126B HU 206126 B HU206126 B HU 206126B HU 863722 A HU863722 A HU 863722A HU 372286 A HU372286 A HU 372286A HU 206126 B HU206126 B HU 206126B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
sub
leu
ala
ser
arg
Prior art date
Application number
HU863722A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT41819A (en
Inventor
Emil Thomas Kaiser
Gonul Velicelebi
Original Assignee
Salk Inst For Biological Studi
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Salk Inst For Biological Studi filed Critical Salk Inst For Biological Studi
Publication of HUT41819A publication Critical patent/HUT41819A/hu
Publication of HU206126B publication Critical patent/HU206126B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Junction Field-Effect Transistors (AREA)
  • Lighting Device Outwards From Vehicle And Optical Signal (AREA)
  • Surface Acoustic Wave Elements And Circuit Networks Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
  • Control Of High-Frequency Heating Circuits (AREA)
  • Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)

Description

A jelen találmány tárgya eljárás olyan peptidek előállítására, amelyek befolyásolják az emberek és más állatok agyalapi mirigyének működését. Részletesebben: a találmány tárgya eljárás olyan peptidek előállítására, amelyek elősegítik a növekedési hormonnak az agyalapi mirigyből való felszabadulását.
Az élettannal foglalkozó szakemberek már régen felismerték, hogy az adenohipofízis (az agyalapi mirigy egyik része) működését a hipotalamusz szabályozza az általa termelt különleges hormonok révén, ezek az anyagok serkentik vagy gátolják az agyalapi mirigy összes hormonjának kiválasztását. 1982-ben humán (emberi) hasnyálmirigy-daganatok kivonataiból elkülönítettek egy növekedési hormon releasing faktort (serkentő anyagot) [humán pancreatic (tumor) growth hormon releasing factor, rövidítése: hpGRF], megtisztították, szerkezetét felderítették, szintetikus úton előállították és megvizsgálták. A vizsgálat során megfigyelték, hogy ez az anyag elősegíti a növekedési hormon felszabadulását az agyalapi mirigyben. Azóta más fajok és az ember hipotalamuszából elkülönítették a megfelelő növekedési hormon releasing faktorokat, szerkezetüket meghatározták, és szintetikus úton is előállították őket. Azt találták, hogy az emberi hipotalamuszból származó növekedési hormon releasing faktor (rövidítése: hGRF) szerkezete ugyanaz, mint az emberi hasnyálmirigy-daganatokból elkülönített növekedési hormon releasing faktornak, mégpedig a következő: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-LysVal-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-LeuGln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-AsnGln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2.
A jelen munka során szintetikus peptideket állítottunk elő és vizsgáltunk, e polipeptidek az agyalapi mirigy sejtjeinek tenyészetéből növekedési hormont szabadítanak fel.
A peptidek leírására a Schröder és Lübke által meghatározott [The Peptides (A peptidek), Academic Press, 1965] nevezéktant használjuk, ahol az N-terminális aminocsoportja a szokásos módon a képlet bal oldalára kerül, és a C-terminális karboxilcsoportja a képlet jobb oldalán helyezkedik el. Természetes aminosavakon a szokásos, a természetben előforduló aminosavakat értjük, ezek a glicin, alanin, valin, leucin, izoleucin, szerin, treonin, lizin, arginin, aszparaginsav, aszparagin, glutaminsav, glutamin, cisztein, metionin, fenil-alanin, tirozin, prolin, triptofán és a hisztidin. Ha egy aminosav izomerek formájában létezhet, akkor a megadott rövidítések az L-izomereket jelölik, illetve az ettől való eltéréseket külön megadjuk.
A találmány tárgya eljárás a
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-ArgArg-Leu-Leu-Ala-Gln-Leu-Ala-Ser-Arg-Arg-LeuLeu-Gln-Glu-Leu-Leu-Ala-Arg-Y (I) általános képletű, ahol
Y jelentése -NH2 vagy -OH-csoport, és farmakológiailag elfogadható sóik előállítására.
A találmány szerinti peptideket - illetve intermedierjeiket - valamely alkalmas módszerrel állíthatjuk elő, például kizárólag szilárd fázisú módszerrel, részben ? szilárd fázisú módszerrel, fragmens-kondenzáció útján, vagy a klasszikus, oldatban lefolytatott szintézissel.
A kizárólag szilárd fázisú szintézis módszerét például a „Solid-Phase Peptide Synthesis” (Szilárd fázisú peptid-szintézis, Steward és Young, Freeman and Co., San Francisco, 1969) című tankönyv írja le, további példákat ismertet Vale és munkatársai 1978. augusztus 8-án közzétett 4105603 számú amerikai szabadalmi leírása. A klasszikus, oldatban lefolytatott szintézis módszereit részletesen ismerteti a „Methoden dér Organischen Chemie (Hoube-Weyl): Synthese von Pepiiden” [A szerves kémia módszerei (Houben-Weyl), A peptidek szintézise, szerkesztette: E. Wunsch, 1974., Georg Thieme Verlag, Stuttgart, NSZK] című mű. A fragmens kondenzációs szintézis módszert például a 3972859 számú, 1976. augusztus 3-án közzétett amerikai szabadalmi leírás ismerteti.
További alkalmas módszereket találhatunk a 3842067 számú (1974. október 15.) és 3862925 számú (1975. január 28.) amerikai szabadalmi leírásokban.
E módszerek közös vonása az, hogy a különféle aminosavak oldalláncában szereplő reakcióképes csoportokat alkalmas védőcsoportokkal megvédjük, e védőcsoportok megakadályozzák, hogy az adott helyen kémiai reakció játszódjék le, mindaddig, míg a védőcsoportot véglegesen le nem hasítjuk. E módszereknek általában az is közös jellemzőjük, hogy egy adott aminosav vagy fragmens α-aminocsoportját megvédjük, és így reagáltatjuk a molekula karboxilcsoportját, majd ezután az α-aminocsoport védőcsoportját szelektíven eltávolítjuk, és így visszük reakcióba a szabaddá tett aminocsoportot. Ennek megfelelően, e módszerek közös vonása továbbá, hogy a szintézis egyik lépéseként egy olyan köztiterméket állítunk elő, amely már tartalmazza a peptidláncban valamennyi szükséges aminosavat, mégpedig a kívánt sorrendben, és az egyes aminosavak oldalláncában szereplő csoportok védőcsoportokat viselnek.
A találmány szerint úgy járunk el, hogy legalább egy, a peptidkémiában ismert védőcsoportot tartalmazó
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-ArgArg-Leu-Leu-Ala-Gln-Leu-Ala-Ser-Arg-Arg-LeuLeu-Gln-Glu-Leu-Leu-Ala-Arg-X9 (II) általános képletű, ahol Y9 jelentése a C-terminálison levő védőcsoport, a gyanta-hordozóhoz kapcsoló kémiai kötés, vagy pedig X9 nincs jelen a molekulában, peptid köztitermékről lehasítjuk a védőcsoportot vagy védőcsoportokat és/vagy lehasítjuk a peptidláncról a gyantát, és kívánt esetben az így kapott pepiidet valamely farmakológiailag elfogadható sójává alakítjuk.
Az α-aminocsoport védésére alkalmas csoportok a polipeptidek stepwise szintézisében szokásosan alkalmazott védőcsoportok lehetnek. Az a-aminocsoport védésére használt csoport lehet például:
1. aromás uretán típusú védőcsoport, mint például fluorenil-metoxi-karbonil-csoport, benziloxi-karbonil-csoport vagy helyettesített benziloxi-karbonil-csoport, mint például p-klór-benziloxi-karbo1
HU 206 126 Β nil-csoport, p-nitro-benziloxi-karbonil-csoport, pbróm-benziloxi-karbonil-csoport vagy p-metoxibenziloxi-karbonil-csoport;
2. alifás uretán-típusú védőcsoport, mint például tercier-butoxi-karbonil-csoport, diizopropil-metoxikarbonil-csoport, izopropoxi-karbonil-csoport, etoxi-karbonil-csoport vagy alliloxi-karbonil-csoport; vagy
3. cikloalifás uretán-típusú védőcsoport, mint például ciklopentiloxi-karbonil-csoport, adamantiloxikarbonil-csoport vagy ciklohexiloxi-karbonil-csoport.
Az “-aminocsoport védésére előnyösen tercier-butoxi-karbonil-csoportot használunk, még abban az esetben is, ha a peptidlánc 1-es helyén N“-metil-helyettesített aminosav van.
A tirozin fenolos hidroxilcsoportjának védésére alkalmas védőcsoport például a tetrahidro-piranil-csoport, tercier-butil-csoport, tritilcsoport, benzilcsoport, 2-karboxi-benzoil-csoport, 4-bróm-2-karboxi-benzoilcsoport vagy 2,6-diklór-benzil-csoport. Előnyös védőcsoport a 2,6-diklór-benzil-csoport.
Az aszparaginsav vagy glutaminsav karboxilcsoportjának védésére alkalmas észteresítő csoport például a benzilcsoport, 2,6-diklór-benzil-csoport, metilcsoport vagy etilcsoport.
A szerint hidroxilcsoportjának védésére alkalmas védőcsoport például az acetilcsoport, benzoilcsoport, tercier-butil-csoport, tritilcsoport, tetrahidro-piranilcsoport, benzilcsoport, 2,6-diklór-benzil-csoport vagy 2-karboxi-benzoil-csoport. Előnyös védőcsoport a benzilcsoport.
Az aszparagin vagy glutamin oldalláncában levő amidocsoport védésére alkalmas védőcsoport előnyösen a xantilcsoport.
Az arginin -guanidinocsoportjának védésére alkalmas védőcsoport például a nitrocsoport, p-toluol-szulfonil-csoport, 2-karboxi-benzoil-csoport, adamantiloxi-karbonil-csoport vagy tercier-butoxi-karbonil-csoport, vagy pedig hirdogénatom.
Nem döntő jelentőségű, hogy milyen védőcsoportot választunk egy aminosav oldalláncában szereplő aminocsoport védésére. Általában azonban olyan védőcsoportot választunk, amely az α-aminocsoport védőcsoportjának lehasítása során nem hasad le. Bizonyos aminosavak, például a hisztidin esetében általában a kapcsolás után nem szükséges ezt az oldalláncban levő aminocsoportot védeni, ilyen esetekben ugyanazokat a védőcsoportokat alkalmazhatjuk mindkét aminocsoporton.
X9 jelentése a C-terminálison levő karboxilcsoport védésére alkalmas csoport, vagy a szilárd fázisú szintézisben a szilárd gyanta-hordozóhoz kapcsolódó kémiai kötés, vagy pedig az X9 csoport nem szerepel a molekulában, ebben az esetben a C-terminálison levő arginin amid formában van jelen. Ha valamely szilárd gyanta-hordozót alkalmazunk, akkor széles értelemben ezt is védőcsoportnak tekinthetjük, alkalmas ilyen, gyanta-hordozót tartalmazó X9 csoportok például az -O-CH2-[gyanta], -NH-[benzhidril-amin-gyanta] vagy
-NH-[p-metil-benzhidril-amin-gyanta], Ha a C-terminálison helyettesítetlen amidot kívánunk előállítani, akkor előnyösen benzhidril-amin-gyantát vagy metilbenzhidril-amin-gyantát használunk, ugyanis az ilyen gyantákról való lehasítás útján közvetlenül az amidhoz jutunk.
A találmány szerinti köztitermékek fenti (II) általános képletében legalább egy védőcsoport van jelen, vagy pedig X9 tartalmazza a gyanta-hordozót
A peptidek szintézise során egy adott oldalláncban alkalmazott védőcsoport megválasztásánál a következő általános szabályokat kell szem előtt tartanunk:
a) a védőcsoportnak a kapcsolási reakció körülményei között előnyösen meg kell tartania védő tulajdonságait, és nem szabad lehasadnia,
b) a védőcsoportnak az alkalmazott reagensekkel szemben stabilnak kell lennie, és a - xantilcsoport kivételével - előnyösen stabilnak kell lennie a szintézis egyes lépéseiben az α-aminocsoport védőcsoportjának lehasításához választott reakciókörülmények között is, és
c) a kívánt aminosavakat tartalmazó peptidlánc szintézise után az oldalláncban alkalmazott védőcsoportot olyan reakciókörülmények között lehessen lehasítani, amelyek nem változtatják meg a peptidláncot nemkívánatos módon.
A találmány szerint alkalmazott védett peptideket előnyösen a szilárd fázisú szintézissel állítjuk elő, e szintézist Merrifield [J. Am. Chem. Soc., 85, 2149 (1963)] írta le általánosságban, de használhatunk más, önmagában ismert, ezzel egyenértékű kémiai szintézismódszereket is, amint ezt a fentiekben is említettük. A szilárd fázisú szintézist a peptid C-terminálisán kezdjük oly módon, hogy valamely, az a-aminocsoportján védett aminosavat egy alkalmas gyantához kapcsolunk. Egy ilyen kiindulási anyagot úgy állítunk elő, hogy valamely, az α-aminocsoportján védett aminosavat észterkötéssel egy klór-metilezett gyantához vagy hidroxi-metil-gyantához kapcsolunk, vagy pedig egy amidkötéssel egy benzhidril-amin-gyantához vagy metil-benzhidril-gyantához kapcsolunk. A hidroxi-metilgyanták előállítását Bodansky és munkatársai [Chem. Ind. (London), 38,1597-98 (1966)] írták le. Klór-metilezett gyantákat a kereskedelemben a Bio Rád Laboratories (Richmond, Califomia) és a Láb. Systems, Inc. cégektől szerezhetünk be. Az ilyen gyanták előállítását Stewart és munkatársai [„Solid Phase Peptide Synthesis” (Szilárd fázisú peptid szintézis), Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, 1984, 1. fejezet, 8-9. oldal] írták le. A benzhidril-amin- és metil-benzhidril-amintípusú gyanta-hordozók a kereskedelemben kaphatók, ezeket azonban általában csak olyan esetekben használjuk, ha az előállítani kívánt polipeptid a C-terminálisán helyettesítetlen karboxamidocsoportot tartalmaz.
Először a C-terminális aminosavat, vagyis a tercierbutoxi-karbonil-csoporttal és p-toluol-szulfonil-csoporttal védett arginint kapcsolhatjuk a benzhidril-aminvagy metil-benzhidril-am in-típusú gyantához, amint ezt az alábbiakban ismertetjük. Miután a tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosavat rákapcsoltuk
HU 206 126 Β a gyanta-hordozóra, az α-aminocsoport védőcsoportját diklór-metánban trifluor-ecetsavval, vagy csak trifluorecetsavval lehasítjuk. A védőcsoport lehasítását körülbelül 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten végezzük. Használhatunk más, önmagában ismert, szokásos lehasító reagenseket, például dioxános sósavoldatot is, és az α-aminocsoport védésére szolgáló egyes védőcsoportok lehasítására alkalmas reakciókörülményeket is, amint ezt Schröder és Lübke a „The peptides” (A peptidek, 1. kötet, 72-75. oldal, Academic Press, 1965) című műben leírta.
Az α-amino-csoport védésére szolgáló védőcsoport lehasítása után a többi, az α-amino-csoporton és az oldalláncban védett aminosavat egymás után, a kívánt sorrendben kapcsoljuk a már meglevő részhez, és így állítjuk elő a fentiekben meghatározott köztiterméket.
Eljárhatunk úgy is, hogy a szintézis során nem egyenként kapcsoljuk az egyes aminosavakat, hanem néhányat ezek közül külön összekapcsolhatunk, majd ezután az így kapott peptidet kapcsolhatjuk a szilárd fázisú szintézishez használt reaktorban. A kapcsoláshoz használt reagens megválasztásának szempontjai a szakemberek előtt ismeretesek. A kapcsoláshoz különösen jól alkalmazható az N-etil-N’-diciklohexil-karbodiimid.
A szilárd fázisú peptid-szintézis során használható aktiválószerek a peptidkémiában járatos szakemberek előtt ismeretesek. Alkalmas ilyen aktiválószerek például a karbodiimidek, mint például az N-etil-N’-diizopropil-karbodiimid és az N,M-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid. További aktiválószereket és a peptidek kapcsolásához való alkalmazásukat Schöder és Lübke fent idézett művének 3. fejezete írja le, továbbá Kapoor, J. Phar. Sci., 59, 1-27 (1970).
Valamennyi védett aminosavat vagy peptidet körülbelül négyszeres vagy ennél nagyobb fölöslegben visszük be a szilárd fázisú szintézishez használt reaktorba, és a kapcsolást dimetil-formamid és diklór-metán 1:1 arányú elegyében, vagy tiszta dimetil-formamidban, vagy tiszta diklór-metánban végezzük. Ha a kapcsolás nem megy végbe tökéletesen, akkor az aamino-csoport védőcsoportjának lehasítása és a következő aminosavval való kapcsolás előtt ezt a kapcsolási műveletet megismételjük. Ha a szintézist kézi vezérléssel végezzük, akkor a kapcsolási reakció sikerét a szintézis minden egyes lépésben a ninhidrin-reakcióval ellenőrizzük, amint ezt E. Kaiser és munkatársai leírták [Anal. Biochem., 34, 595 (1970)]. A kapcsolási reakciókat elvégezhetjük automatikus úton is, például egy Beckman 990 típusú automata szintetizátorral, például a Rivier és munkatársai által leírt [Biopolymers, 17, 1927-1938 (1978)] program alkalmazásával.
A kívánt aminosavakat a megfelelő sorrendben tartalmazó peptidlánc kiépítése után a köztitermékként kapott peptidet valamely reagenssel, például cseppfolyós fluor-hidrogénsavval való kezelés útján lehasíthatjuk a gyanta-hordozóról. Ily módon az amid formában levő pepiidhez jutunk. Amennyiben a peptidlánc metionint is tartalmaz, akkor előnyösen először a tercierbutoxi-karbonil-csoportot hasítjuk le trifluor-ecetsav és 1,2-dimerkapto-etán alkalmazásával, majd ezután hasítjuk le a peptidláncot fluor-hidrogénsav segítségével a gyantáról, és így elkerülhetjük az esetleges S-alkileződést. Ha a hasításhoz fluor-hidrogénsavat használunk, akkor segédanyagként anizolt és metil-etil-szulfidot is használunk.
A találmány szerinti eljárást a továbbiakban - a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül - példákkal szemléltetjük.
Az 1. példában ismertetjük a találmány szerinti egyik előnyös, amid formában levő peptidnek a szilárd fázisú módszerrel való előnyös szintézisét. A megfelelő, de eltérő lánchosszúságú peptideket hasonló módon állíthatjuk elő, egyszerűen több vagy kevesebb aminosav alkalmazásával a lánc bánnelyik végén; jelenleg azonban az a véleményünk, hogy a növekedési hormon releasing faktor biológiailag aktív analógjainak az itt megadott szekvenciát vagy ezzel egyenértékű szekvenciát kell tartalmazniuk az N-terminális és a 27-es helyen levő aminosav között.
A jelen leírásban alkalmazott rövidítések jelentése
az alábbi:
hGRF emberi növekedési hormon releasing faktor (humán growth hormon releasing factor)
Alá alanin
Leu leucin
Ile izoleucin
Ser szerin
Arg arginin
Asp aszparaginsav
Glu glutaminsav
Gin glutamin
Phe fenil-alanin
Tyr tirozin
I, példa
A [Ser7·8·19, Alá9·15·18·28, Arg12·21, Leu13·26·27]hGRF( l-29)-NH2 képlettel jellemezhető,
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-ArgArg-Leu-Leu-Ala-Gln-Leu-Ala-Ser-Arg-Arg-LeuLeu- Gln-Glu-Leu-Leu-Ala-Arg-NH2 képletű peptidet stepwise módszerrel, egy Beckman 990 típusú peptid-szintetizátorban állítjuk elő egy metil-benzhidril-amin-típusú gyantán, amelynek kapacitása körülbelül 0,35-0,5 mmól/g gyanta. Az a-aminocsoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal és a guanidinocsoportján p-toluol-szulfonil-csoporttal védett arginint a Vale által leírt (4292313 számú amerikai szabadalmi leírás) általános módszerrel kapcsoljuk a gyantához, tehát kálium-fluorid jelenlétében, dimetil-formamidban, 24 órán át körülbelül 60 °C hőmérsékleten keverve. így grammonként körülbelül 0,35 mmól arginint tartalmazó gyantát nyerünk.
A védőcsoport lehasítása és semlegesítés után a peptidláncot lépésenként építjük ki a gyantán. A védőcsoport lehasítását, a semlegesítést és az egyes aminosavakkal való kapcsolást általában a J. Rivier által részletesen leírt [J. Amer. Chem. Soc., 96, 2986-2992 (1974)] módszernél végezzük. A szintézis során használt összes oldószert gondosan levegőmentesítjük oly módon, hogy valamely semleges gázt, például héliu4
HU 206 126 Β mot vagy nitrogént vezetünk bele, hogy ezáltal biztosítsuk az oxigénmentes közeget.
A védőcsoport lehasítását előnyösen az alábbi A műveletsor szerint végezzük:
A-müveletsor
Reagens Keverési idd, perc
1. 60% trifluor-ecetsav/2% 1,2-dimerkapto-etán 10
2. 60% trifluor-ecetsav/2% 1,2-dimerkapto-etán 15
3. 1%-os Izopropanolos 1,2-dimerkapto-etán-oldat 0,5
4. 10%-os, diklór-metános trietil-aminoldat 0,5
5. Metanol 0,5
6. 10%-os, diklór-metános trietil-aminoldat 0,5
7. Metanol (kétszer) 0,5
8. Diklór-metán (kétszer) 0,5
A kapcsolásokat előnyösen az alábbi B-műveletsor szerint végezzük:
B-müveletsor
Reagens Keverési idd, perc
9. Diciklohexil-karbodiimid -
10. Tercier-butoxí-karbonil-csoporttal védett aminosav 50-90
11. Metanol (kétszer) 0,5
12. Diklór-metán (kétszer) 0,5
13. 3 mólos, diklór-metános ecetsav-anhidrid-oldat 15,0
14. Diklór-metán 0,5
15. Metanol 0,5
16. Diklór-metán (kétszer) 0,5
Röviden úgy járunk el, hogy a gyanta 1 g-jára számítva 1-2 mmól, tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosavat használunk diklór-metánban, plusz egy egyenértéknyi mennyiségű, 1,0 mólos diklór-metános diciklohexil-karbodiimid-oldatot, és az elegyet 2 órán át keverjük. A tercier-butoxi-karbonil-csoporttal és p-toluol-szulfonil-csoporttal védett arginin kapcsolását dimetil-formamid és diklór-metán 1:1 arányú elegyében végezzük. A szerin és a treonin oldalláncában jelen levő hidroxilcsoportot benzil-éter formájában védjük. Az aszparagin vagy glutamin amidocsoportját a diciklohexil-karbodiimiddel végzett kapcsolás során előnyösen xantilcsoporttal védjük.
Az aszparagin vagy glutamin karboxilcsoportjának aktiválására p-nitro-fenil-észter-csoportot használunk, és például a tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aszparagin p-nitro-fenil-észterét úgy kapcsolhatjuk, hogy a reakciót egy egyenértéknyi mennyiségű 1-hidroxi-benzotriazol jelenlétében, dimetil-formamid és diklór-metán 1:1 arányú elegyében végezzük, egy éjszakán át. Ebben az esetben diciklohexil-karbodiimidet nem adunk a reakcióelegyhez. A lizin oldalláncának védésére 2-klór-benziloxi-karbonil-csoportot használunk. Az arginin guanidinocsoportjának és a hisztidin imidazolgyűrűje 1-es nitrogénatomjának védésére ptoluol-szulfonil-csoportot használunk, és a glutaminsav vagy aszparaginsav oldalláncának karboxilcsoportját benzil-észter formájában védjük. A tirozin fenolos hidroxilcsoportját 2,6-diklór-benzil-csoporttal védjük.
A szintézis végeredményeképpen a BOC-Tyr(X)Ala-Asp-(X3)-Ala-Ile-Phe-Ser(X4)-Ser(X4)-AlaTyr(X2)-Aig(X6)-Arg(X6)-Leu-Leu-Gln(X5)-Leu-LeuAla-Gln(X5)-Leu-Ala-Ser-X4)-Arg(X6)-Aig(X6)GluíX^-Leu-Leu-Ala-AigCX'O-X9 általános képletű vegyülethez jutunk, ahol a fenti általános képletben
X jelentése p-toluol-szulfonil-csoport,
X2 jelentése 2,6-diklór-benzil-csoport,
X3 jelentése benziloxicsoport,
X4 jelentése benzilcsoport,
X5 jelentése xantilcsoport,
X6 jelentése p-toluol-szulfonil-csoport, és X9 jelentése -NH-[gyanta] általános képletű csoport
Az α-amino csoport védőcsoportjának lehasításához használt trifluor-ecetsav hatására a xantilcsoport részlegesen vagy teljesen lehasadhat.
A gyantához kapcsolt védett peptid védőcsoportjainak eltávolítása és a gyantáról való lehasítása céljából ezt a terméket a gyantához kötött peptid 1 g-jára számított 1,5 ml anizollal, 0,5 ml metil-etil-szulfiddal és 15 ml fluor-hidrogénsavval kezeljük -20 °C hőmérsékleten fél órán át, majd 0 °C hőmérsékleten újabb fél órán át. Ezután a fluor-hidrogénsavat nagymértékben csökkentett nyomáson eltávolítjuk, a gyantát és a peptidet tartalmazó maradékot felváltva vízmentes dietil-éterrel és kloroformmal mossuk, majd a peptidet levegőmentesített 2 n vizes ecetsav-oldattal kivonatoljuk, és a gyantát kiszűrjük.
A gyantáról lehasított és védőcsoportokat már nem viselő peptidet ezután feloldjuk 0-5%-os ecetsavban, és megtisztítjuk, például finomszemcsés Sephedex G50-en való gélszűrés útján.
Ezután a kapott peptidet preparatív vagy félpreparatív nagy felbontású folyadékkromatográfiás módszerrel tovább tisztítjuk, amint ezt Rivier és munkatársai [Peptides: Structure and Biological Function (A peptidek: Szerkezet és biológiai hatás), 1979, 125-128.], valamint Marki és munkatársai [J. Am. Chem. Soc., 103,3178 (1981)] leírták. E célra egy Waters Associates prep LC-500 típusú készüléket használunk, az oszlopokat Vydac-féle, 300A jelzésű, 15-20μ szemcseméretű C18-szilikagéllel töltjük. Acetonitril és trietil-ammónium-foszfát-oldat felhasználásával, egy kisnyomású Eldex-féle készülék segítségével gradiens elúciót végzünk, amint ezt J. Rivier leírta [J. Liq. Chromato5
HU 206 126 Β graphy, /, 343-367 (1978)]. A kromatografált frakciók tisztaságát nagy felbontású folyadék-kromatográfiás módszerrel gondosan ellenőrizzük, és csak a megfelelően tiszta frakciókat egyesítjük. A tisztaságra nézve egymástól függetlenül megvizsgált, tisztított frakciókat sómentesítjük, e célból acetonitril 0,1%-os trifluorecetsav-oldattal készült oldatával gradiens elúciót végzünk.
A középső frakciókat fagyasztva szárítva a kívánt peptidet kapjuk, amelynek tisztasága nagyobb lehet mint 98%. Rf=86 (n-butanol-piridin-ecetsav-víz
15:10:3:12) (A rendszer) Rf=0,67 (n-butanol-piridinecetsav-víz 42:24:4:30) (B rendszer)
Elektroforézis: Whatman 3MM HCOOH : ecetsav pH
1,9, 1000 v, 1 óra (előhívás ninhidrinnel)
Rf=0,57 (ref.: arginin).
2. példa
Az I. példában megadottal azonos aminosav-szekvenciájú, de a C-terminálison szabad sav formában levő peptidet, vagyis a [Ser7·8·19, Alá9·15·'8·28, Arg12·21, Leul3-26-27]-hGRF(l29)-OH képlettel jellemezhető, H-Tyr-Ala-Asp-AlaIle-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-Arg-Arg-Leu-Leu-Ala-GlnLeu-Ala-Ser-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Glu-Leu-Leu-AlaArg-OH képletű peptidet stepwise módszerrel, egy Beckman 990 típusú peptid-szintetizátorban állítjuk elő egy klórmetilezett gyantán, amelynek a kapacitása körülbelül 0,35-0,5 mmól/g gyanta. Az α-amino-csoportján tercierbutoxi-karbonil-csoporttal, és a guanidinocsoportján ptoluol-szulfonil-csoporttal védett arginint a Monahan és munkatársai által leírt módon [Biopolymers, 12,2513-19 (1973)], diklór-metánban mint oldószerben 2 órán át egy egyenértéknyi mennyiségű, 2 mólos diklór-metános diciklohexil-karbodiimid-oldat jelenlétében keverve kapcsoljuk a gyantához. Ily módon grammonként körülbelül 0,35 mmól arginint tartalmazó gyantát kapunk. A továbbiakban a szintézist az 1. példában leírt módon végezzük, beleértve a peptidláncnak a gyantáról való lehasítását, a védőcsoportok eltávolítását és a tisztítást is.
A vékonyréteg-kromatográfiás és nagy felbontású folyadék-kromatográfiás vizsgálatok szerint az így kapott peptid lényegében tisztának tekinthető.
Rf=0,85 (A rendszer).
Rf=0,68 (B rendszer).
Elektroforézis: Whatman 3MM HCOOH: ecetsav, pH 1,9, 1000 V, l óra (előhívás ninhidrinnel)
Rf-0,59 (ref.: arginin).
A vékonyréteg-kromatográfiás és nagy felbontású folyadék-kromatográfiás vizsgálatok szerint az így kapott analógokat lényegében tisztának tekinthetjük.
Azt találtuk, hogy ezek a szintetikus peptidek legalább olyan erős, de gyakran még erősebb hatást gyakorolnak a növekedési hormon kiválasztására, mint az emberi növekedési hormon releasing faktor szintetikus, a C-terminálison szabad karbonsav formájú analóg 140. fragmense.
Kimutathatjuk például az 1. példa szerinti szintetikus peptidnek a növekedési hormon felszabadulását elősegítő hatását, e célból in vitro kísérleteket végzünk, amelyek során e vegyületet, valamint különböző további analógokat és fragmenseket egymással és az emberi növekedési honnon releasing faktor szintetikus, a Cterminálison szabad karbonsav formájú analóg 1-40. fragmensével mint összehasonlító anyaggal - molárisán azonos koncentrációban - összehasonlítjuk. E vizsgálatokhoz 4 nappal a mérés előtt eltávolított patkány agyalapi mirigyből származó sejtek tenyészeteit használjuk. A növekedési hormon kiválasztása szempontjából optimálisnak tekintett tenyészeteket használjuk fel az összehasonlító vizsgálatokhoz, a Vale és munkatársai által először általánosságban [Endocrinology, 91, 562-572 (1972)], majd részletesen is [Endocrinology, 112, 1553-1555 (1983)] leírt módon. A vizsgálandó anyagot 4 órán át ínkubáljuk, majd a tenyésztés közegének meghatározott térfogatú részleteit kivesszük, feldolgozzuk, és egy jól meghatározott radioimmun-assay módszerrel megmérjük az immunreakcióra képes növekedési hormon tartalmát. Ez a - morálisan azonos koncentrációkkal végzett - összehasonlító vizsgálat azt mutatja, hogy az 1. és 2. példa szerinti peptidek hatása egyenértékű az emberi hasnyálmirigy-daganatokból nyert növekedési hormon releasing faktor összehasonlító anyagként használt - a C-terminálison szabad karbonsav formájú - 1-40. fragmensének hatásával.
Az emberi hasnyálmirigy-daganatokból nyert növekedési hormon releasing faktor ilyen szintetikus analógjait feltehetőleg emberen is lehet alkalmazni mindazon esetekben, amikor a kezelőorvos növelni akarja a növekedési hormon termelését, és ilyen esetekben ezen analógok előnyösebbek lehetnek, mint a természetes, emberi hasnyálmirigy-daganatokból nyert növekedési hormon releasing faktor. Az ilyen analógok szilárd fázisú szintézise egyszerűbb, mint a természetes molekula szintézise, miután az ilyen analóg peptidek lánca rövidebb. Továbbá, ezen analógok rendezettebb szerkezetük révén stabilabb peptidek lehetnek, és így könnyebb lehet őket megtisztítani. A növekedési hormon kiválasztásának ilyen analógokkal való serkentése olyan betegek esetében érdekes, akik az endogén növekedési hormon releasing faktornak a normálishoz képest csökkent mértékű termelése miatt teljes vagy viszonylagos növekedési hormonhiányban szenvednek. Továbbá valószínű, hogy e vegyületek alkalmazásával a normális növekedési hormonszintekkel rendelkező emberekben vagy állatokban is meg lehet növelni a növekedési hormon kiválasztásának mértékét, és ennek következményeképpen meg lehet növelni a testmagasságot. Ezenkívül, e vegyületek adagolása feltehetően megváltoztatja a test zsírtartalmát, és módosít bizonyos további, a növekedési hormontól függő anyagcsere-, immunológiai és fejlődési folyamatokat. így például ezeket az analógokat felhasználhatjuk arra, hogy emberekben bizonyos körülmények között, például égési sérülések után serkentsük az anabolikus,folyamatokat. További példaképpen megemlítjük, hogy ezeket az analógokat adagolhatjuk melegvérű haszonállatoknak, például csirkéknek, pulykáknak, sertéseknek, kecskéknek,
HU 206 126 Β szarvasmarháknak és birkáknak, továbbá felhasználhatjuk e vegyületeket víziállatok tenyésztése során, például halak és más hidegvérű tengeri állatok, például tengeri teknősök, angolnák, valamint kétéltűek tenyésztése során a növekedés meggyorsítására, valamint a fehérje és zsír arányának megnövelésére oly módon, hogy az említett állatoknak e peptidek hatásos mennyiségeit adagoljuk.
Ha e szintetikus peptideket embereknek kívánjuk beadni, akkor e vegyületek tisztaságának legalább körülbelül 93%-osnak, és előnyösen legalább 98%-osnak kell lennie. A jelen alkalmazás céljait tekintve, a tisztaság a kívánt peptidnek az összes jelen levő peptid és peptid-fragmens összsúlyára vonatkoztatott %-os mennyiségét jelenti. Ha ezeket a szintetikus peptideket haszonállatoknak vagy más állatoknak kívánjuk beadni a növekedés elősegítése és testük zsírtartalmának csökkentése céljából, akkor elfogadható, ha körülbelül 5%os vagy ennél kisebb, akár 0,01%-os tisztaságú peptidet alkalmazunk.
Ezeket a szintetikus peptideket vagy nem-toxikus sóikat az ember- vagy állatgyógyászatilag elfogadható vivőanyagokkal gyógyászati készítményekké alakíthatjuk, és e készítményeket állatoknak, beleértve az embert is, adagolhatjuk intravénásán (vénába), szubkután (bőr alá), intramuszkulárisan (izomba), perkután (bőrön át), például intranazálisan (orrba), vagy akár orálisan (szájon át) is. Az ilyen készítményeket a kezelőorvos alkalmazhatja a növekedési hormon felszabadulásának serkentésére, mindazon esetekben, amikor a kezelni kívánt betegnek ilyen kezelésre van szüksége. A szükséges dózis a kezelni kívánt egyed állapotától függően, továbbá állapotának súlyosságától és a kívánt kezelés időtartamától függően változhat.
Az ilyen peptideket gyakran nem-toxikus sóik formájában, például savaddíciós vagy bázisokkal alkotott sóik, vagy fém-komplexeik, mint például cinkkel, vassal és más, hasonlókkal képzett komplexeik formájában adagolhatjuk (e komplexeket a jelen leírás céljait tekintve ugyancsak sónak tekintjük). Ilyen savaddíciós sók például a hidrokloridok, hidrobromidok, szulfátok, foszfátok, maleátok, acetátok, citrátok, benzoátok, szukcinátok, malátok, aszkorbátok, tartarátok és más hasonlók. Bázisokkal alkotott sók például az ammónium- vagy szerves ammóniumsók. A sókat önmagukban ismert eljárásokkal képezzük.
Ha a hatóanyagot orálisan, tabletta formájában kívánjuk adagolni, akkor a tabletta tartalmazhat valamely kötőanyagot, például tragakantát, kukorica-keményítőt vagy zselatint; a szétesést elősegítő anyagot, például alginsavat, továbbá egy csúsztatószert, mint például magnézium-sztearátot. Ha a hatóanyagot cseppfolyós halmazállapotú készítmény formájában kívánjuk adagolni, akkor használhatunk édesítőés/vagy ízesítőszereket is, intravénás adagolásra pedig izotóniás (a vérrel azonos ozmózisnyomású) sóoldatokat, foszfát-puffer-oldatokat és más hasonlókat használhatunk.
E peptideket a kezelőorvos felügyelete mellett kell embereknek adagolni, és a gyógyászati készítmények e peptideket általában valamely szokásos, szilárd vagy cseppfolyós halmazállapotú, gyógyászatilag elfogadható vivőanyag kíséretében tartalmazzák. A parenterális (a gyomor- és bélrendszer megkerülésével beadott) dózis a kezelt egyed egy testsúlykilogrammjára számítva körülbelül 100 pg és körülbelül 50 pg között van.
Habár a jelen találmány szerinti eljárást annak előnyös kivitelezési változataira írtuk le, amelyek a feltalálók által jelenleg ismert legjobb kivitelezési változatok, úgy kell tekintenünk, hogy bizonyos - egy átlagosan képzett szakember számára nyilvánvaló - változtatásokat és módosításokat bevezethetünk anélkül, hogy eltérnénk a találmánynak az alábbi igénypontban meghatározott oltalmi körétől. így például módosíthatjuk a peptidláncot, és különösen elhagyhatunk egy vagy két aminosavat a C-terminálisról, és így a jelenleg ismert kísérleti gyakorlatnak megfelelően olyan peptideket állíthatunk elő, amelyek megtartják a peptid biológiai hatását, vagy legalábbis annak legnagyobb részét, az ilyen peptideket ugyancsak a jelen találmány oltalmi körébe tartozóknak tekintjük. Ezenkívül, beiktathatunk további aminosavakat a C-terminálisra, és/vagy a természetben előforduló aminosavak helyett alkalmazhatunk általában ezekkel egyenértékűnek bizonyuló aminosavakat is, amint ez a peptidek kémiájában jól ismert dolog. Ily módon további analógokhoz juthatunk, amelyek például nagyobb mértékben ellenállhatnak a proteolízisnek (a fehérjék lebomlásának), és ugyanakkor megtarthatják a jelen leírásban igényelt polipeptidek hatásának legalábbis a legnagyobb részét, és ezáltal ugyancsak nem térünk el a jelen találmány oltalmi körétől, például a 4. példában leírt vegyületek által meghatározott oltalmi körtől. Hasonló módon, ha a C-terminálison levő karboxilcsoportot módosítjuk, például rövid szénláncú alkil-amiddá alakítjuk, ez szintén egyenértékű molekulákat eredményez.

Claims (1)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONT
    Eljárás a
    H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-ArgArg-Leu-Leu-Ala-Gln-Leu-Ala-Ser-Arg-Arg-LeuLeu-Gln-Glu-Leu-Leu-Ala-Arg-Y (I) általános képletű, ahol
    Y jelentése -NH2 vagy -OH csoport és farmakológiailag elfogadható sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy legalább egy, a peptidkémiában ismert védőcsoportot tartalmazó
    H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-ArgArg-Leu-Leu-Ala-Gln-Leu-Ala-Ser-Arg-Aig-LeuLeu-Gln-Glu-Leu-Leu-Ala-Arg-X9 (II) általános képletű, ahol
    X9 jelentése a C-terminálison levő védőcsoport, a gyanta-hordozóhoz kapcsoló kémiai kötés, vagy pedig X9 nincs jelen a molekulában peptid köztitermékről lehasítjuk a védőcsoportot vagy védőcsoportokat, és/vagy lehasítjuk a peptidláncról a gyantát, és kívánt esetben az így kapott peptidet valamely farmakológiailag elfogadható sójává alakítjuk.
HU863722A 1985-08-29 1986-08-28 Process for producing growth hormone releasing factor derivatives HU206126B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/770,683 US4689318A (en) 1985-08-29 1985-08-29 GRF analogs

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT41819A HUT41819A (en) 1987-05-28
HU206126B true HU206126B (en) 1992-08-28

Family

ID=25089358

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU863722A HU206126B (en) 1985-08-29 1986-08-28 Process for producing growth hormone releasing factor derivatives

Country Status (19)

Country Link
US (1) US4689318A (hu)
EP (1) EP0216517B1 (hu)
JP (1) JPH0762037B2 (hu)
KR (1) KR910002701B1 (hu)
AT (1) ATE69821T1 (hu)
AU (1) AU589674B2 (hu)
CA (1) CA1299507C (hu)
DE (1) DE3682641D1 (hu)
DK (1) DK413986A (hu)
ES (1) ES2001274A6 (hu)
GR (1) GR862194B (hu)
HU (1) HU206126B (hu)
IL (1) IL79534A0 (hu)
IN (1) IN163758B (hu)
NO (1) NO863432L (hu)
NZ (1) NZ217280A (hu)
PH (1) PH23188A (hu)
SU (1) SU1651787A3 (hu)
ZA (1) ZA865886B (hu)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4734399A (en) * 1985-08-06 1988-03-29 Hoffmann-La Roche Inc. Growth hormone releasing factor analogs
US4828988A (en) * 1986-05-15 1989-05-09 Smith Kline - Rit Hybrid polypeptides comprising somatocrinine and alpha1 -antitrypsin, method for their production from bacterial clones and use thereof for the production of somatocrinine
DE3742633A1 (de) * 1987-12-16 1989-06-29 Hoechst Ag Peptide mit beeinflussender wirkung auf die hypophyse von saeugern
US5565606A (en) * 1986-10-21 1996-10-15 Hoechst Aktiengesellschaft Synthesis of peptide aminoalkylamides and peptide hydrazides by the solid-phase method
US4784987A (en) * 1987-01-13 1988-11-15 The Salk Institute For Biological Studies GRF analogs VI
US4843064A (en) * 1987-01-13 1989-06-27 The Salk Institute For Biological Studies GRF analogs V
IL84758A (en) * 1987-01-13 1992-03-29 Salk Inst For Biological Studi Peptides stimulating the release of pituitary growth hormone in fish and amphibians,and pharmaceutical compositions containing them
IL86102A (en) * 1987-05-11 1994-04-12 Univ Tulane Alkylated peptides that release growth hormone and their use
US5112808A (en) * 1987-05-11 1992-05-12 American Cyanamid Company Alkylated hormone-releasing peptides and method of treatig mammals therewith
US5002931A (en) * 1987-05-22 1991-03-26 The Salk Institute For Biological Studies GRF analogs VII
US5098995A (en) * 1987-05-22 1992-03-24 The Salk Institute For Biological Studies GRF Analogs VIIA
US5043322A (en) * 1988-07-22 1991-08-27 The Salk Institute For Biological Studies Cyclic GRF analogs
US5756458A (en) * 1989-06-16 1998-05-26 Pharmacia & Upjohn Company Stabilized potent GRF analogs
CA2082059A1 (en) * 1990-05-04 1991-11-05 David H. Coy Synthetic grf analogs
EP0544706A4 (en) * 1990-06-29 1993-10-13 Hoffmann-La Roche Inc. Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs
CZ85393A3 (en) * 1990-11-14 1994-03-16 Upjohn Co Stabilized active analogs of growth hormone releasing factors
ATE119916T1 (de) * 1990-12-10 1995-04-15 Hoffmann La Roche Verfahren zur enzymatischen herstellung von grf(1-44)nh2.
JPH06507402A (ja) * 1991-03-20 1994-08-25 ワーナー−ランバート・コンパニー 治療活性を有するα−置換ポリペプチド
CA2084061A1 (en) * 1991-04-09 1992-10-10 Arthur M. Felix Growth hormone releasing factor analogs
US5262519A (en) * 1991-05-15 1993-11-16 The Salk Institute For Biological Studies GRF analogs XI
US5550212A (en) * 1993-12-17 1996-08-27 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity
JPH07200419A (ja) * 1993-12-28 1995-08-04 Nec Corp バスインタフェース装置
US5792747A (en) * 1995-01-24 1998-08-11 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Highly potent agonists of growth hormone releasing hormone
EP0820296A4 (en) * 1995-04-14 1999-06-30 Univ Tulane ANALOGS OF THE GROWTH HORMONE-RELEASING FACTOR
CN1491233A (zh) * 2001-02-02 2004-04-21 康久化学公司 长效生长激素释放因子衍生物
US20060128615A1 (en) * 2002-09-18 2006-06-15 Pierrette Gaudreau Ghrh analogues
WO2009009727A2 (en) * 2007-07-12 2009-01-15 Akela Pharma Srl Ghrh analogs and therapeutic uses thereof
WO2009108364A2 (en) * 2008-02-27 2009-09-03 Ipsen Pharma S.A.S. Antagonistic analogues of ghrh
WO2011153491A2 (en) 2010-06-03 2011-12-08 University Of Miami Agonists of growth hormone releasing hormone as effectors for survival and proliferation of pancreatic islets
US9079974B2 (en) 2011-12-21 2015-07-14 The University Of Miami GH-RH analogs with potent agonistic effects
US9855312B2 (en) 2012-12-21 2018-01-02 University Of Miami GHRH agonists for the treatment of ischemic disorders
WO2014100816A2 (en) 2012-12-21 2014-06-26 University Of Miami Ghrh agonists for islet cell transplantation and function and the treatment of diabetes
JP7134093B2 (ja) 2016-04-19 2022-09-09 グリフォン・ファーマシューティカルズ・アンテルナシオナル・エスアー ペグ化バイオアクティブペプチド及びその使用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4595676A (en) * 1983-04-26 1986-06-17 The Salk Institute For Biological Studies Rat hypothalamic GRF
US4529595A (en) * 1983-01-13 1985-07-16 The Salk Institute For Biological Studies GRF Analogs
US4500910A (en) * 1982-11-30 1985-02-19 Rca Corporation Hue control system
IL70530A (en) * 1983-01-13 1986-09-30 Salk Inst For Biological Studi Synthetic peptides having growth hormone releasing factor activity and compositions containing them
US4518586A (en) * 1983-01-13 1985-05-21 The Salk Institute For Biological Studies GRF Analogs III
US4514331A (en) * 1983-06-29 1985-04-30 University Patents, Inc. Peptide hormones with calcitonin-like activity
US4528190A (en) * 1983-10-25 1985-07-09 The Salk Institute For Biological Studies GRF Analogs IV
US4649131A (en) * 1984-09-24 1987-03-10 Hoffmann-La Roche Inc. Growth hormone releasing factor analogs

Also Published As

Publication number Publication date
HUT41819A (en) 1987-05-28
KR910002701B1 (ko) 1991-05-03
ZA865886B (en) 1987-03-25
PH23188A (en) 1989-05-29
GR862194B (en) 1986-12-31
NZ217280A (en) 1989-04-26
AU589674B2 (en) 1989-10-19
IN163758B (hu) 1988-11-05
DK413986A (da) 1987-03-01
AU6183886A (en) 1987-03-05
EP0216517B1 (en) 1991-11-27
SU1651787A3 (ru) 1991-05-23
NO863432D0 (no) 1986-08-27
KR870002163A (ko) 1987-03-30
DK413986D0 (da) 1986-08-29
JPH0762037B2 (ja) 1995-07-05
JPS6251698A (ja) 1987-03-06
EP0216517A3 (en) 1988-09-21
EP0216517A2 (en) 1987-04-01
ATE69821T1 (de) 1991-12-15
IL79534A0 (en) 1986-10-31
US4689318A (en) 1987-08-25
ES2001274A6 (es) 1988-05-01
NO863432L (no) 1987-03-02
DE3682641D1 (de) 1992-01-09
CA1299507C (en) 1992-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU206126B (en) Process for producing growth hormone releasing factor derivatives
FI92210B (fi) Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi
FI88402B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger
FI83660B (fi) Foerfarande foer framstaellning bukspottskoertelns grf hos maenniskan.
US4529595A (en) GRF Analogs
US4517181A (en) Mammalian PGRF
US4626523A (en) GRF analogs II
KR0138907B1 (ko) 합성 펩티드
FI87080C (fi) Foerfarande foer framstaellning av grf-analoger
US5262519A (en) GRF analogs XI
HU199508B (en) Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient
US4784987A (en) GRF analogs VI
US4728726A (en) GRF analogs IIIb
FI89499B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbar peptid
HU190973B (en) Process for prodiction of grf-analoges
KR0163033B1 (ko) Grf 유사체 viia
EP0107890B1 (en) Mammalian pgrf
US4843064A (en) GRF analogs V
US4703035A (en) Human pancreatic GRF amidated fragments
AU593973B2 (en) Grf analogs v
US4816438A (en) Insulin-selective somatostatin analogs
CA1333892C (en) Insulin-selective somatostatin analogs
HU201566B (en) Process for producing new analoguse of activatin factor of human growth hormon and pharmaceutical and veterinair compositions containing them

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee