HU199878B - Process for producing acylated splenopentynes and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient - Google Patents
Process for producing acylated splenopentynes and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient Download PDFInfo
- Publication number
- HU199878B HU199878B HU883100A HU310088A HU199878B HU 199878 B HU199878 B HU 199878B HU 883100 A HU883100 A HU 883100A HU 310088 A HU310088 A HU 310088A HU 199878 B HU199878 B HU 199878B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- priority
- june
- formula
- preparation
- arg
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/66—Thymopoietins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás új splenopentin Arg-Lys-G 1 u-Val-Tyr pentapept id-származékok előállítására és tisztítására. Ezeket a vegyületeket immunbiológiailag hatékony gyógyszerkészítményekben lehet használni.
A splenopentint és származékait az orvosi terápiában immunregulátorként alkalmazzák. A találmány alkalmazási területe tehát a gyógyszeripar.
Az elmúlt években számos kísérletet végeztek azon peptidek izolálására és jellemzésére, amelyek az immunrendszert befolyásolják. így izolálták a limopoielint és a splenint a timuszból, illetve a lépből (T. Audhya és munkatársai: Biochemistry 20, 6195/1981/).
Annak ellenére, hogy különböző szervből származnak, ezeknek a peptideknek messzemenőkig hasonló a szerkezetük: 49 aminosavból állnak és mindössze a 34-es helyzetben tér el a szekvenciájuk; aszparaginsav, illetve glutaminsav található bennük. Biológiai aktivitásuk szempontjából azonban lényegesen eltérnek egymástól. A timopoietinek a neuromuszkuláris transzmissziót befolyásolják (M.P. Scheid és munkatársai: J. Exp. Med. 147, 1727 /1987/), a korábbi T-sejtek differenciálódását stimulálják, és a korábbi B-sejtek differenciálását gátolják.
A splenin ezzel szemben a T- és a B-sejtek differenciálását stimulálja és nincsen neuroaktivitása. A splenin teljes molekula biológiai hatás minőségét a 32 — 36 rész-szekvenciája, Arg-Lys-Glu-Val-Tyr (splenopentin) reprodukálja.
A biológiailag aktív anyagok előállítása egyre nagyobb mértékben magával vonja a nagyérzékenységű és gazdaságilag hatásos kromatográfiai tisztítási eljárásokat is. Elsősorban azok az eljárások jönnek szóba, amelyeknél egyszerű hordozó- és futtatószer-rendszer alkalmazása mellett nagy az anyagáthaladás, egyenletesen jó a reprodukálhatóság és nagy a rendszer rezolúció.
A különböző acilezett splenopentin peptidek kromatográfiás elválasztásához, mivel a nagyszámú komponens esetében kicsik a töltés és ezáltal a polaritás különbségek, költséges és bonyolult kromatográfiás technikák alkalmazására van szükség. Előnyösen alkalmazhatók itt a HPLCeljárások, RP (reverz fázisú) szilikagél alapon, valamint a normál szilikagél fázisokon végzett adszorpciós vagy megoszlásos kromatográfiás módszerek.
A 3.421.614. számú német szövetségi köztársaság-beli (1984) szabadalmi leírásban splenopentinck kromatográfiás tisztítását szilikagél normál fázison, metil-klorid tartalmú futtatószerekkel javasolják. Javasolják ezenkívül a szintetikus splenopentin nyerstermékek kromatográfiás elválasztását adszorpciós, illetve megoszlásos kromatográfiával Kiesel-gél 60-on piridintartalmú szerves oldószerekkel. Hasonló elválasztási eljárást javasolnak a 2.804.566. számú német szövetségi köztársaságbeli I\9TII szabadalmi leírásban timopentin, illetve monoacetil-timopentin tisztítására.
Az RP- vagy normálfázisú szilikagélbázisú eljárások hátránya, hogy költséges készülékeket és anyagokat kell használni hozzá. így nagymennyiségű, nagytisztaságú termék előállítására ezek nem alkalmazhatók. További tényezők, amelyek ezek felhasználhatóságát korlátozzák: a rendszer kis kapacitása, a specifikus adszorpció miatti alacsony reprodukálhatósága, valamint a nem megfelelő rezolúciós képessége.
A peptidek tisztítására alkalmazott szokásos ioncserélő kromatográfiás eljárások az eluálási folyamat alatt sókat alkalmaznak. így például a 2.732.587. számú német szövetségi köztársaságbeli és 3.617.646. számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírásban ismertetett kromatográfiás eljárások nona-, illetve dekapeptidek tisztítására karboxi-metil-cellulózt és nátrium-kloridot, illetve ammónium-acetátot tartalmazó eluálószerekkel dolgoznak. Az anyagok tisztításához ezután mindig egy költséges sótalanítás is szükséges.
A találmány feladata ezért eljárás kidolgozni új, immunológiáiig hatékony splenopentin•származékok (SP5-származékok) előállítására és tisztítására. A találmány feladata továbbá immunbiológiailag hatásos gyógyszerkészítmények előállítása is.
A feladatot az alábbiak szerint oldottuk meg.
A találmány tárgya eljárás új, (I) általános képletű acilezett splenopentinek (Acil-SP5) előállítására - a képletben
R1 jelentése hidrogénatom vagy 1—18 szénatomos alkanoilcsoport,
R2 jelentése hidrogénatom vagy 1 — 18 szénatomos alkanoilcsoport,
R4 jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport vagy egy OR5 általános képletű csoport, ahol R5 jelentése 1 — 4 szénatomos alkílcsoport, azzal a megkötéssel, hogy R1 és R2 közül legalább az egyik hidrogénatomtól eltérő.
A találmány szerinti eljárást splenopentin-származékok előállítására úgy végezzük, hogy splenopentint, valamint részlegesen védett splenopentint egy ZR általános képletű acilezőszerrel, ahol
Z jelentése reakcióképes csoport és
R jelentése 1 — 18 szénatomos alkanoilcsoport, reagáltatunk, és így szelektíven acilezzük az arginint és/vagy a lizint N-helyzetben és/vagy a tirozint O-helyzetben.
Azt tapasztaltuk, hogy mind a mono-, mind a diacil splenopentinek előállításához acilezőszerként előnyösen alkalmazhatók, az N-hidroxi-norborn-5-én-2,3-dikarboxamid-1 — 18 szénatomos karbonsavakkal alkotott észterei.
A mono- és a diacetilezett splenopentineket előnyösen N-acetoxi-norborn-5-én-2,3-dikarboximid (acetil-ONB) vagy 1-acetoxi-benzotriazol (acetil-OBt) alkalmazásával állítjuk elő.
A mono- és a diformil-splenopentinek előállítását előnyösen végezhetjük formil-ONB vagy formil OBt alkalmazásával
Azt tapasztaltuk, hogy az acetilezöszerként először alkalmazott acetil-ONB felhasználása különleges előnyökkel jár. Hidrolízissel szembeni nagy stabilitása miatt igen jó a tárolási stabilitása és acetilezésre mind szerves, mind vizes kö-21
HU 199878 Β zegben alkalmazható. Elsősorban az aminocsoportokkal szembeni nagy reakcióképessége miatt bázis hozzáadása nélkül is rendkívül rövid idő alatt reagál. A reakció során keletkező N-hidroxi-norborn-5-én-2,3-dikarboxamid könnyen elválasztható és nem toxikus, így alkalmazása mindenekelőtt a gyógyszeriparban különösen előnyös.
Ezekkel az acilezószerekkel a mono- és a diacil-vegyületeket jó kitermeléssel (az elméleti 90%-a), nemkívánatos mellékreakciók nélkül állíthatjuk elő. Ha az acilezést tercier-aminok jelenlétében végezzük, a megfelelő triacil-vegyületeket kapjuk.
A kapott acilezett splenopentinek tisztítását különösen előnyösen kromatográfiásan végezzük karboxilezett kationcserélőkön, vizes eluálórendszerekben 10’2 és 10’5 mól/1 közötti ionerősségnél. Hordozóanyagként előnyösen akrilsav/divinil-benzol kopoíimereket alkalmazunk. Az ioncserélő kromatográfiánál szokásos magas hordozó kapacitás esetén (5-10 mg peptid/ml oszloptérfogat) a találmány szerint az eluálást izokratikusan, vizes eluálószerekkel végezzük, a 10'2 és 105 mól/1 közötti szükséges ionerősséget savak hozzáadásával érjük el.
A triacetil-(Na-Arg, N£-Lys, O-Tyr)-splenopentin, triacetil-(Na-Arg, N^-Arg, N*-Lys)-splenopentin, diacetil-(Na-Arg, N£-Lys)-splenopentin, mono-(Na-Arg)-splenopentin, mono(N£-Lys)-splennopentin, valamint D-Tyr-diacetil-(Na-Arg, N£-Lys)-splenopentin és L-Tyr-Diacetil-(Na-Arg, N£-Lys)-splenopentin-enantiomerek meglepő módon növekvő K’-értékkel eluálhatók és ezáltal polaritásuknak megfelelően elválaszthatók. Valamennyi elválasztott pepiidnél a reprodukálhatósági ráta nagyobb, mint 95%.
Különösen jó elválasztható hatást érünk el, ha olyan eluálószert alkalmazunk, amely 10-20% etanolt tartalmaz. Az eluálórendszerben a kis ionerősség miatt a peptideket a megfelelő frakciók besűrítésével és ezután a következő liofilizálásával egyszerűen és kíméletesen, analitikus RP-HPLC-vel meghatározott 98%-osnál nagyobb tisztaságban lehet izolálni.
Az egyéb eljárásoknál szükséges kiegészítő sótalanítási lépések itt elmaradnak. A találmány szerinti eljárás további előnye, hogy nem költséges kromatográfiás hordozóanyagokat alkalmaz, valamint az, hogy a hordozóanyag igen sokszor újra felhasználható (több, mint 100 kromatográfiás ciklusban).
Ha az így kapott új vegyületeket gyógyszerészeti célra alkalmas vivöanyaggal és/vagy gyógyszerészeti segédanyaggal keveijük össze, adagolásra alkalmas gyógyszerkészítményeket állíthatunk elő.
A splenopentin acilezésével elérjük azt a célt, hogy az enzimes lebontási stabilitást növeljük és ezáltal javítsuk a hatóanyag biológiai felhasználhatóságát.
Az immunológiai hatások kimutatására a következő modelleket alkalmazzuk: ' —T4-antigének mennyiségi növekedése emberi T-limfociták felületén szisztémás lupus éritematodes (SLE) betegeknél in vitro (8. példa,
1. táblázat.) és
- antitestképződés juh eritrocitákkal szemben (vérlemezke-képző lépsejtek) AB/Bln-egerekkel röntgen besugárzás után (8. példa, 2. táblázat).
A találmány szerint előállított acilezett splenopentineknek (Acil-SP5) további farmakológiai tulajdonságaik is vannak, elsősorban azok, amelyek az immunrendszer normalizálásával kapcsolatosak.
Ezért lehet felhasználta! őket a következő orvosi indikációknál:
— Vírusos infekciók kezelése (13. példa, 3.1-3.3. táblázat). Az Acil-SP5 alkalmas szernek bizonyult influenza vírusok ellen vagy pankreatitisz kezelésére a Coxsacki-vírussal történt fertőzés után. A vírussal szembeni immun védekezés stimulálásának mértékére megállapítottuk, hogy olyan vírusmennyiségek adagolása esetén, amelyek közepes erősségű fertőzéshez vezetnek, a betegség teljesen megakadályozható, másrészről azonos súlyosságú betegség kiváltásához szükséges vírusdózis a kezelés alatt mintegy 10-szer magasabb, mint a kezelés nélküli egyedeknél.
— Kemoterápia utáni kezelés (14. példa, 4.1. ábra, 4.1. táblázat). A szer alkalmas kemoterápiás kezelés utáni immunszupresszív állapot legyőzésére, például a rák kezelésénél vagy túladagolt ciklosporin terápia esetén.
Egerek ciklofoszfamid vagy dexametazon kezelése után a humorális immunválasz normalizálása Acil-SP5 adagolásával elérhető. Az AcilSP5-nek azonban nincsen hatása a normális antigén-specifikus humorális immunválasz kialakulására, így a hátrányos immunmoduláló mellékhatásokkal nem kell számolni (4.1. ábra).
Az Acil-SP5 származékok elősegítik az immunszupresszív terápia következtében szekunder immunhiánnyal rendelkező pácienseknél az immunrendszer gyorsított helyreállását (4.1. táblázat).
- Csontvelősejtek növekedésének és érésének stimulálása (15. példa, 5.1 —5.2. táblázat, 5.1 ábra). A találmány szerint előállított vegyületek in vitro alkalmazása az egér csontvelősejtekből származó törzskolóniák kialakulási sebességét növeli, ha azokat normál személyekből származó vagy SLE-pacié rockból származó leukocitákkal együtt agarban tenyésztjük. Az a tény, hogy az Acii-SP5 jelenlétében a kolóniák keletkezése megszaporodik, arra enged következtetni, hogy az Acil-SP5-tel közvetlenül a csontvelő éretlen törzssejtjeinek a proliferációja segíthető elő és/vagy az emberi leukociták az Acil-SP5 befolyása alatt koloniaképző faktorokat választanak ki (5.1. táblázat).
Egereknél szubletális besugárzás és csontvelőátültetés után a humorális immunválasz gyorsított helyreállása figyelhető meg (5.1. ábra).
A hatóanyagok alkalmazhatók immunszupresszív, illetve citosztatikus terápiánál, besugárzás után és csontvelőátültetés után. Azáltal hatnak, hogy specifikus képződési helyeik (receptoraik) vannak az emberi csontvelősejteken (külö-3HU 199878 Β nősen a törzssejteken), amelyek radioaktív ligandumok kötési vizsgálatával kimutathatók. Ilyen kötési helyek találhatók a timocitákon is, és 3Hjelzett splenopentinnel, vagy 125í-jelzett D-AcilSP5-tel kimutathatók (5.2. táblázat).
— HIV-infekciók terápiájánál (16. példa, 6.1. táblázat és 6.Ϊ ábra). A D-AU-SP5 adagolás a HIV-fertőzött pácienseknél elősegíti az összes limfocitaszám növekedését a kontroll területen, valamint a CD3+-, CD4+- és DR+-sejtek abszolút számának növekedését, valamint a CD4+/CD8+-viszony javulását. 16 hetes terápia után sem léptek fel mellékhatások (6.1. táblázat).
Ha kombinációban alkalmazzuk, az AIDS-terápiában használatos citosztatikummal és a revertáz-gátlóval, az azido-timidinnel vagy annak hatékonyabb változatával, a fluor-timidinnel, akkor gyorsabban normalizálódnak azok az immunrendszerben bekövetkezett hátrányos elváltozások, amelyeket ezek az anyagok okoznak (6.1. ábra).
- Immunszupresszív hatás megakadályozása krónikus intoxikáció esetén (17. példa, 7. táblázat). Az Acil-SP5 azáltal hat, hogy megszűnteti az alkohol és egyéb krónikusan ható noxa által kiváltott antigén specifikus humorális immunreakció szupressziót, megszünteti a fagocita-sejtek számának, illetve aktivitásának csökkenését és megakadályozza a timusz és a lép perciális atro fiáját.
— Autoimmun reakciók terápiája (18. példa,
8.1 — 8.2 táblázat). A találmány szerint előállított anyagok megfelelnek különböző olyan betegségek terápiájánál, amelyeknél az utoimmun reakció példáján ábrázolva /8.1. táblázat/). Ilyen például a reumatoid artritisz, az SLE és az atopiás reakciók.
A sikeres immunizálás után azonban nem segítik elő az antigén-specifikus antikörpertiter hátrányos csökkenését (8.2. táblázat).
A következőkben néhány példán keresztül közelebbről is bemutatjuk a találmányt.
Kiviteli példák
A példákban alkalmazott rövidítések:
M: mono-; D: di-; Pal: palmitoil-, Ac: acetil.
1. példa
Arginil-(N--acetil-Iizil)-glutamil-valil-tirozin-(N£-MAc-Sp5) előállítása
1.1 Acilezés
1,83 g (2 mmól) Boc-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH x 2HOAc-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk és hozzáadunk 0,487 g (2,2 mmól) acetil-ONB-t. Egy óra után a reakcióelegyet normál sósavba öntjük, a kicsapódó terméket leszűijük, vízzel semlegesre mossuk. Metanol/etil-acetát keverékéből átkristályosítjuk és így 1,72 g Boc-Arg-Lys(Ac)-Glu-Val-Tyr-OH x HOAc-t kapunk. Kitermelés: az elméleti 96,3%-a.
1.2 A védőcsoport lehasítása
1,34 g (1,5 mmól) Boc-Arg-Lys(Ac)-Glu-Val-Tyr-OH x HOAc-t 30 percig 10 nil trifluor-ecetsav/diklór-ctán 1:1 arányú keverékkel kezelünk és a felesleges trifluor-ecetsav ledesztillálása után metanolból éterrel kicsapjuk. Kitermelés: 1,34 g Arg-Lys(Ac)-Glu-Val-Tyr-OH x 2TFA, az elméleti 98,2%-a.
Híg sósavból való liofilizálással a megfelelő NÉ-MAc—SP5 x 2HCl-t kapjuk. Molekulatömeg: 808,75. Összegképlet: CjjHjjNjOiqCIj. Rf = 0,34 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz
1:1:1:1 arányú keverékével).
A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, majd az elegyből a sót eltávolítjuk, végül liofilizáljuk a kapott reakcióelegyet. így a szabad pepiidet, az N£-monoacetil-SP5-ot kapjuk meg.
Molekulatömeg: 735,8. Összegképlet:
C33HS3N9OK). Rf = 0,34 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
2, példa
Arginil-(NÉ-palmitoil-lizíl)-glutamil-valil-tirozin-(t-MPal-SP5) előállítása
2.1 Acilezés
1,83 g (2 mmól) Boc-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH x 2HOAc-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk és hozzáadunk 0,919 g (2,2 mmól) Pal-ONB-t. A reakcióelegy feldolgozása és tisztítása ugyanúgy történik, mint áz 1.1. példában. Kitermelés: 2,07 g Boc-Arg-Lys(Pal)-GLu-Val-Tyr•OH x HOAc, az elméleti 94,6%-a.
2.2 A védőcsoport lehasítása
1,64 g (1,5 mmól) Boc-Arg-Lys(Pal)-Glu-Val-Tyr-OH x HOAc-t 30 percig 10 ml trifluor-ecetsav és diklór-etán 1:1 arányú keverékével kezelünk, majd a felesleges trifluor-ecetsavat ledesztilláljuk és a terméket metanolból éterrel kicsapatjuk. Kitermelés: 1,63 g Arg-Lys(Pal)-Glu-Val-Tyr-OH x 2 TFA, az elméleti 93,7%-a. Híg sósavból való liofilizálás után a megfelelő t-Pal-SP5 x 2HCI-t kapjuk. Molekulatömeg: 1005,13. Összegképlet: €47^3^0^(¾. Rf= 0,66 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, a sót eltávolítjuk és liofilizáljuk. így a szabad pepiidet, az N£ MPA1-SP5-1 kapjuk. Molekulatömeg: 932,2. Összegképlet:
C47H81N9O10. Rf “ 0,66 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
3. példa (Νά Ácetil-arginiD-lizil-glutamil-valil-tirozin -(a-MAcetil-SP5) előállítása
3.1 Acilezés
1,16 g (1 mmól) Arg(NOj)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Tyr-OBzl x TFA-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk és 180 mikroliter N-metil-morfolin (vagy más tercier-amin) hozzáadása után 0,265 g (1,2 mmól) N-acetoxi-norborn-5-én-2,3-dikarnboximiddel reagáltatjuk.
perc után a reakcióelegyet keverés közben normál sósavba öntjük, a csapadékot leszűijük és vízzel mossuk. A terméket mintegy 10 ml dimetil-formamidban oldjuk és 5%-os NaHCOj-oldattal kicsapatjuk. A csapadékot szüljük és vízzel mossuk. Metanol/éterből átkristályosítjuk és így
HU 199878 Β
1,05 g védett Na-acetil-splenopentint kapunk. Kitermelés: az elméleti 96,2%-a.
3.2 A védőcsoport lehasftása
A védett acetil-peptidet 90%-os ecetsavban szuszpendáljuk és palládium/szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Kitermelés: 760,8 g Na-acelil-SP5 x 2HOAc, az elméleti 95,6%-a. Molekulatömeg: 855,94. Összegképlet:
C37H61N9O14. Rf» 0,30 (N-butanol:jégecet:etilacetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
4. példa
Diacetilezett splenopentinek előállítása
4.1. példa
ÍN—-Acetil-arginil)-(N--acetil-lizil)-glutamil-valil-tirozin (DAC-SP5) előállítása
4.1.1 DAC-SP5 szintézise SP5 és N-acetoxi-norborn-5-én-2.3-karboximid reakciójával
43,7 g (50 mmól) Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH x 3HOAc-t (SP5)-t 150 ml vízben oldunk és hozzáadjuk 33,2 g (150 mmól) acetil-ONB 100 ml dimetil-formamiddal készített oldatát. Dimetil-formamidot adunk a reakcióelegyhez mindaddig, amíg homogén oldat keletkezik. Az elegyet egy órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük (DC-kontroll), majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot éterrel vagy etil-acetáttal eldörzsöljük. A szilárd anyagot leszűrjük, éterrel mossuk és vákuumban kálium-hidroxid felett szárítjuk. Kitermelés: 38,4 g DAc-SP x HOAc, az elméleti 92%-a.
Híg sósavból végzett liofilizálással a megfelelő DAc-SP5 x HCl x 2H2O-t kapjuk. Molekulatömeg: 850,39.
Összegképlet:
számított: C: 49,43, H: 7,11, N: 14,83%, talált: C: 48,62, H: 7,26, N: 14,00%.
4.1.2. DAc-Sp5 szintézise SP5 és 1-acetoxi-benzotriazol (acetil-OBt) reakciójával
Az SP5 és az acetil-OBt reakcióját és a reakcióelegy feldolgozását a 4.1. példában leírtakkal analóg módon végezzük. Kitermelés: az elméleti 90%-a.
Rf= 0,52 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, a sót eltávolítjuk és liofilizálást végzünk, így a szabad peptidet, a DAc-SP5-t kapjuk. Molekulatömeg: 777,87. Összegképlet: ^3$Η$$^9θιΐ· Rf · 0,52 (N-butanol:jégecet:etil-acetát-víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
4.2. példa (NŰt-Acetil-arginil)fNl-acetil-lizil) glutamil-valil-tirozin-amid (DAc-SP5-NH?) előállítása
4,06 g (5 mmól) Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-NH2x2HOAc-t 15 ml vízben oldunk, és hozzáadjuk 3,32 g (15 mmól) acetil-ONB 10 ml dimetil-formamiddal készített oldatát. A reakcióelegyet 1 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük (DC-kontroll), majd az oldószért vákuumban ledesztilláljuk, és a maradékot etil-acetáttal és dietil-éterrel mossuk, majd vákuumban, kálium-hidroxid felett szárítjuk.
Kitermelés: 3,93 g (DAc-SP5-NH2HOAc, az elméleti 94%-a. Molekulatömeg: 836,9. összegképlet: C^H^NjoO^. Rf= 0,44 (N-butanol: :jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
A kapott vegyületet nátrium-hidroxiddal titráljuk, a sót eltávolítjuk és liofilizáljuk. így a szabad peptidet, a DAc-SP5-NH2-t kapjuk.
Molekulatömeg: 776,8. összegképlet:
C35H56Nio010. Rf= 0,44 (N-butanol:jégecet: :etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
4,3. példa (NSt-Acetil-arginil)(Nf-acetil-lizil) glutamil-valil-tirozin-etil-észter (DAc-SP5-QEt) előállítása
4,21 g (5 mmól) Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OEt x 2HOAc-t 15 ml vízben oldunk, és hozzáadjuk 3,32 g (15 mmól) acetil-ONB 10 ml dimetil-formamiddal készített oldatát. A reakcióelegyet 1 órán keresztül szobahőmérsékleten keveijük (DC-kontroll). Az oldószert ezután vákuumban ledesztilláljuk, és a maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük. A szilárd anyagot leszűrjük, etil-acetáttal és éterrel mossuk, majd vákuumban, kálium-hidroxid felett szárítjuk.
4,11 g DAc-SP5-OEt x HOAc-t kapunk. Kitermelés: az elméleti 95%-a. Molekulatömeg: 866,0. Összegképlet: C39H63N9Oi3. Rf= 0,60 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, a sót eltávolítjuk és liofilizáljuk. így a szabad peptidet, a DAc-SP5-OEt-t kapjuk meg. Molekulatömeg: 805,9. Össszegképlt:
C37H59N9OU. Rf= 0,60 (n-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
5. példa (N—-Palmitoil-arginil)-lizil-glutamil-valil-tirozin (q-MPal-SP5) előállítása
1 Acilezés ljó g (1 mmól) H-Arg(NO2)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val -Tyr-OBzl x TFA-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk, majd hozzáadunk 120 mikroliter N-metil-morfolint (vagy más tercier-amint), és 0,626 g (1,2 mmól) palmitinsav-(N-oxi-norborn-5-én-2,3-dikarboximid)-észterrel reagáltatjuk.
A reakcióelegyet a 3.1. példával analóg módon dolgozzuk rel, majd etanol/éterből átkristályosítjuk. így 1,21 g védett Na-palmitoil-splenopentint kapunk. Kitermelés: 94,3%.
5.2 A védőcsoport lehasftása
A védett palmitoil-peptidet 90%-os ecetsavban szuszpendáljuk és palládium/szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Kitermelés: 920 mg N°-Pal-SP5 x 2HOAcc, az elméleti 92,7%-a. Molekulatömeg: 1052,32, Összegképlet:
C5,H89OMN9. Rf - 0,66 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, a sót eltávolítjuk és liofilizálást vég-51
HU 199878 Β zünk. így a szabad pepiidet, az N“MPal-SP5-t kapjuk meg. Molekulatömeg: 932,2. Összegképlet: C47H81N9O10.
Rf= 0,66 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével).
6. példa
N - Acetoxi- norbom- 5-én-2,3-dikarboximid (acetil-ONB) előállítása
17,92 g (0,1 mól) N-hidroxi-norborn-5-én-2,3-dikarboxímidet 100 ml kloroformban oldunk és 0 ’C-on keverés közben hozzáadunk 21 ml (0,15 mól) trietil-amint, majd 19 ml (0,2 mól) ecetsavanhidridet. Szobahőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük a reakcióelegyet, majd az oldószert teljesen elpárologtatjuk, vizet adunk hozzá és a csapadékot leszűrjük. Izopropanolból és vízből átkristályosítjuk és így 19,33 g acetil-ONB-t kapunk. Kitermelés: 84,7%. Op.: 112,5-113,5 ’C. Molekulatömeg: 221,2. Összegképlet:
CiiHjjNO4.
7. példa
1-Acetoxi-benzotriazol (acetil-OBt) előállítása
13,51 g (0,1 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt 100 ml kloroformban oldunk. Ezután hozzáadunk 16,8 ml (0,12 mól) trietilamint és a reakcióelegyet 0 ’C-ra lehűtjük. Ezután keverés közben hozzáadunk 19 ml (0,2 mól) ecetsav-anhidridet és további 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószer eltávolítása után visszamaradó szilárd anyagot etil-acetátból vagy benzolból átkristályosítjuk. Kitermelés: 14,88 g (az elméleti 84%-a). Op.: 96 - 98 °C. Molekulatömeg:
221,2. Összegképlet: CnHuNO4.
8. példa t-MAc-SP5 immunbiológiai hatása
Az í-MAc-SP5-nek (amely a splenin léphormon 32 — 36-os szekvenciája) a splenin teljes molekulával azonos vagy ahhoz hasonló immunbiológiai hatása van. így például az t-MAc-SP5 elősegíti a T4-antigének mennyiségi növekedését a T-limfociták felületén, amelyek a működésre jól alkalmas T-segédlimficiták felületén kimutathatók. A működésre jól alkalmas T-segédlimfociták stimulálják az antitestképződést. Az e-MAc-SP5 által kiváltott antitest-keletkezés növekedés kimutatására releváns állatkísérleti modellt választottunk: AB/Bln-egereket röntgensugarakkal szubletálisan besugároztunk, és azután egyik csoportjukat nem kezeltük, másikat pedig e-MAc-SP5-tel kezeltük. Egyidejűleg elvégeztük az állatok juh eritrocitákkal történő immunizálását. Mivel a szubletálisan besugárzott állatok elveszítik azt a képességüket, hogy mennyiségileg elegendő antitestet termeljenek, az f-MAc-SP5tel kezelt állatoknál a juh eritrocitákkal szembeni megnövekedett antitest-képződés mértéke annak, hogy az c-MAc-SP5 mennyire regenerálja az immunrendszert.
Az t-MAc-SP5-tel kezelt állatók már 34 nap után ugyanannyi antitestet tudnak képezni, mint a nem besugárzott kontroll állatok. Ezzel szemben az e-MAc-SP5-tel nem kezelt állatok erre csak az egyszeri röntgenbesugárzás után 48 nappal képesek.
A találmányt a következőkben néhány kiviteli példán keresztül közelebbről is bemutatjuk (1. és 2. táblázat).
Vizsgálat
8.1 T4-antigén növekedés emberi limfociták felületén t-MAc-SP5-tel történt érintkezés után
A működésre jól alkalmas (érett) T-segédlimfociták felületükön T4-antigéneket, T-szupreszszor limfocitákat, T8-antigéneket tartalmaznak. Az olyan betegeknél, akiknek szisztémás lupus eritematodes (SLE) betegségük van monoklonális antitestekkel a limfociták felületén kevesebb T4-antigén mutatható ki. Terápiás kezelés következtében az értékek normalizálódnak. Amennyiben terápia előtt a páciensek limfocitáit «-MAc-SP5-tel hozzák érintkezésbe, 2 órás inkubálás után egyénileg különböző, de állandóan emelkedő számú T4-antigén mutatható ki (1. táblázat). Ezzel szemben a T8-antigének (felületi antigének) mennyisége a T-szupresszor limfocitákon, illetve citotoxikus T-limfocitákon nem változik. A T4-antigének szaporodnak, ha a T4sejtek szaporodnak, illetve ha az antigének szaporodva a felületükön exprimálódnak. A vizsgálatok azt mutatják, hogy az SLE páciensek limfocitái az f-MAc-SP5-tel való érintkezés után nem rendelkeznek megnövekedett 3H-timidin beépülési rátával (percenként 910 ± 180 impulzus, é-MAc-SP5 érintkezés nélkül — 820 ± 210 impulzus percenként €-MAc-SP5-tel való érintkezés után; n= 5, nem tapasztalható szignifikáns eltérés a t-tesztben). Ebből arra következtetünk, hogy a T4-antigének növekedése nem a T4-sejtek szaporodásából következik, hanem a T-sejt felszín valamely struktúrális megváltozásából, ami valószínűleg azonos a sejt érési folyamatával. Az érett, működésre jól alkalmas T-segédlimfociták stimulálják a B-limfociták általi antitest-képződést. Ezért azt vizsgáltuk, hogy az t-MAc-SP5 szisztémás alkalmazása után növekszik-e az antitest képződés meghatározott antigénekkel (juh eritrocitákkal) szemben.
8.2 Antitest képződés immunszupresszió és szisztémás t-MAc-SP5 kezelés után
Az antitest képződés befolyásolhatóságának kimutatására egy releváns állatkísérleti modellt alkalmaztunk. 4 hónapos AB/Bln-egereket (NDK Tudományos Akadémia, Bertin-Buch, NDK) szisztémásán (szubletálisan) röntgensugarakkal kezeltünk (600 c Gy) (Gy = gray, az elnyelt sugárdózis egysége), végül egy részüket tMAc-SP5-tel kezeltük (1., 2. és 3. állatcsoport a
2. táblázatban). Egy további állatcsoportot is vizsgáltunk, amelyet sem röntgenbesugárzásnak, sem e-MAc-SP5- kezelésnek nem vetettünk alá (4. állatcsoport a 2. táblázatban). A 2. és 3. állatcsoportot naponta 10 mikrogramm vagy 50 mikrogramm c-MAc-SP5-tel kezeljük (intraperitoneális alkalmazás). A besugárzás után különböző időpontokban (14. napon, 20. napon, stb. lásd
HU 199878 Β a 2. táblázatot) a JERNE-Plaque-teszttel (amelyet Ekéért és munkatársai módosítottak, lásd: R. Eckert, U. Pfüller, A. Kindt, E. Reichelt és H. Franz: Histaminrezeptor-tragende Lymphozyten, III. Supression von Immunreaktionen nach Abtöten dér Histaminrezeptor-tragenden Lymphozyten durch cin Konjugat aus Histamin und dér A-Kette des Misteílektins I. Biomed. Biochim. Acta 44,1239-1246 /1985/). Meghatároztuk az állatok antitest-képzésének mértékét juh eritrocitákkai szemben. Ehhez az állatokat a vizsgálat előtt 5 nappal juh eritrocitákkai immunizáljuk (intraperitoneálisan alkalmazunk állatonként 5x1ο8 sejtet) és a 2. táblázatban feltüntetett vizsgálati időpontokban megállapítjuk a juh eritrociták elleni antitest-képző képességüket (metodikai részleteket lásd W. Diezel és munkatársai: Biomed. Biochim. Acta 45, 1349-1352 /1986/ irodalmi helyen).
Ismeretes, hogy a szubletálisan besugárzott állatok elveszítik azt a képességüket, hogy elegendő antitestet képezzenek. A normális képződés csak egy bizonyos latens periódus után áll vissza, amely periódus alatt az állatok antitest-képző sejtjei regenerálódnak. Kísérleteink során az ál latok legkorábban 48 nappal az egyszeri röntgenbesugárzás után voltak képesek ugyanolyan mennyiségű antitestet képezni, mint a nem besugárzott kontroll állatok (nincs szignifikáns kü5 lönbség az 1. és 4. csoport között a 48. napon a 2. táblázatban). Ezzel szemben az «-MAc-SP5-tel kezelt állatok már a röntgen besugárzás után 34 nappal képesek voltak a normális antitest .termelésére (nincs szignifikáns különbség a 2. és 4., illetve a 3. és 4. csoport között a 34. napon a 2. táblázatban).
Az említett eredmények feljogosítanak annak feltételezésére, hogy az <-MAc-SP5-tel az immunvédekezési problémák előnyösen befolyásol15 hatók. Az ilyen állapot vagy veleszületett, vagy szerzett. A szerzett immunvédekezési problémák közül megemlítjük a szükséges gyógyszeres kezelés következményét (rákos megbetegedéseknél citosztatikus terápia és besugárzásos terá20 pia), valamint mindenképpen velejárója az AIDS-nek a betegség késői stádiumában. Az ismertetett eredményeknek megfelelően várható, hogy az c-MAc-SP5 az immunrendszer ilyen csökkentett funkciója esetén legalább részlege25 sen hatékonyan alkalmazható.
1. táblázat
T4-antigén mennyiségi növekedése emberi T-limfociták felületén t-MAc-SP5-tel való érintkezés után
T4-antigén meghatározás monoklonális antitestek segítségével (VIT4-CD4 cluster és VITB-CDB cluster) szisztémás lupus eritemadotes (SLE)-betegek T-limfocitái
A páciens száma | T-sejt-felületi antigén (%) | |
T4 | TB | |
1. Schr., R. kontroll | ||
(K) (í-MAc-SP5 nélkül) | 1 | 10 |
+ í-MAc-SP5 | 54 | 10 |
2.H..A. K. | 48 | 40 |
+ e-MAc-SP5 | 60 | 45 |
3.J..R.K. | 44 | 50 |
+ £-MAc-SP5 | 66 | 48 |
4.0., Η. K. | 42 | 12 |
+ í-MAc-SPS | 65 | 15 |
5.W., Β. K. | 45 | 40 |
+ £-MAc-SP5 | 67 | 42 |
-7HU 199878 Β ι
ο
Ό
-Μ '3 ι/Ί
rf £ co ό sü
o.'E νι <Ί fi ·»
HU 199878 Β
9. példa
Mono-, di- és triacetil--splenopentinek (mono-, di· és triacetil-SP5), monoacetil-(N-Arg)-SP5, diacetil-(N£-Arg, N£-Lys)-SP5, triacetil-(N^-Arg, Nf-Lys-Q-Tyr)-SP5 elválasztása
150 mm hosszú és 9 mm átmérőjű oszlopra (V * 9,54 ml), amelyben hordozóanyagként valamely 50 mikron és 90 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélő található, 50 mg ekvimoláris arányú mono-, di- és triacetil-SP5 keveréket viszünk fel.
Az anyagok eluálását 5 ml/óra áramlási sebességgel 1 í,5% etanollal pH/ 2,45-nél (ecetsav) végezzük. Az anyagok sorrendje mono-, di- és triacetil-SP5, R > 1, a reprodukálhatósági ráta nagyobb, mint 95% az egyes anyagoknál.
*A triacetil-splenopentinek előállítását lásd a Peptides 1988 - Proceedings of the 20th European Symposium, September 4 - 9, 1988, Tübingen, S. 745 bis 747. irodalmi helyen.
10. példa
Monoacetil-(NS.-Arg)-SP5 és monoacetil-(N--Lys)SP5 elválasztása
200 mm hosszú és 9 mm átmérőjű oszlopra (V = 12,7 ml), amely hordozóanyagként 40 mikron és 50 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélőt tartalmaz, ekvimoláris mennyiségű monoactil-(Na-Arg)-SP5-öt és monoacetil-fN'-Lysj-SPő-öt viszünk fel. Az eluálást vizes futtatószerrel végezzük 2,35-ös pH ér léknél (HCI) 10 ml/óra áramlási sebességgel. Az anyagokat polaritásuknak megfelelően (1. monoacetil-(Na-Arg)-SP5, 2. monoacetil-(N£-Lys)-SP5) 97%-os reprodukálhatósággal eluáljuk. A rezolució 1,5.
11. példa
Triacetil—(N—-Arg, N2-Arg, N--Lys)-SP5 és diacetil-(NSL-Arg, N--Lys)-SP5 elválasztása
200 mm hosszú és 5 mm átmérőjű oszlopra, amely hordozóanyagként 50 mikron és 60 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélőt tartalmaz, felvisszük a keveréket, amely mindkét pepiidből 5 mg-ot tartalmaz. Az eluá15 lást 3 ml/óra áramlási sebességgel, 11,5% etanollal, pH= 2,57 értéknél (ecetsav) végezzük. Az egyes anyagokra értett 96%-os reprodukálhatósággal 0,8 rezolúciót érünk el.
* A triacetil-splenopentinek előállítását lásd a Peptides 1988 - Proceedings of the 20th European Symposium, September 4-9, 1988, Tübingen, S. 745 bis 747. irodalmi helyen.
12. példa
A 4. példa szerint előállított acilezett splenopentinek szintézis nyerstermékének elválasztása
A nyerstermékben található anyagok;
1. monoacetil-(Na-Arg)-SP5,
2. diacetil-8(Na-Arg, N£-Lys)-SP5 (főtermék, nagynyomású oszlopkromatográfia szerint 75%),
3. triacetil-((NL*-Arg,N'í-Arg, N£-Lys)-SP5,
4. triacetil-^NP-Arg, N£-Lys-Ó-Tyr)-SP5,
5. diacetil-(Na-Arg, N£-Lys, D-Tyr)-SP5.
cm hosszú és 10 cm átmérőjű oszlopra, amely hordozóként 4,5 liter 50 mikron és 90 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélőt tartalmaz, felvisszük 35 g splenopentin szintézis nyerstermék 150 ml eluálószerrel készített oldatát. Az anyagkeverék elválasztását izokratikus eluálással, 10%-os etanollal, j)H = 2,5-nél (ecetsav), 80 ml/perc áramlási se bességgel végezzük. A frakcionált eluátumot 266 mm-nél mérjük. Végül a csúcstérfogatokat egyesítjük, szárazra pároljuk, és liofilizáljuk ekvimoláris mennyiségű sósav hozzáadásával. Összes reprodukálhatósági ráta: 95,6%. Főtermék: 19 g (54,3%).
A nagynyomású folyadékkromatográfiával a főtermék tisztasága 98,5%,
13. példa
Vírusos infekció kezelése
3.1. táblázat
DAc-SP5 kezelés hatása Balb/c-egerek halálozási aránya A/PR/8/34 influenzavírussal történt infekció (intranazális) után (n = 10-12)
lnfekciós dózis (L.Djq) | 10l | 102 | 103 | 104 | 105 |
Halálozási arány 6 nap után %-ban: Kontroll | 50 | 66,6 | 100 | 100 | 100 |
DAc-SP5-terápia az infekció alatt47 | 33,3 | 33,3 | 66,6 | 100 | 100 |
DAc-SP5 infekció előtt447 | n.g. | n.g. | n.g. | 100 | 100 |
HU 199878 Β
3.2, táblázat
infekció után (Balb/c egerek) (n= 10-25) | ||
Pankreatitiszes állatok | Infekciós dózis (TCID™ | |
(%-ban, n > 10-15) | 103 104 1CP | 106 |
Kontroll | 60 | 60 | 100 | 100 |
DAc-SP5-terápia | ||||
az infekció alatt * *z | 0 | 0 | 60 | 100 |
DAc-SP5 terápia | ||||
az infekció előtt+ +/ | u.g. | 80 | 100 | 100 |
3.3. táblázat
DAc-SP5 kezelés hatása a tüdő hisztopatológiai elváltozásainak kialakulására Balb/c egérnél és szíriai hörcsögnél (n = 9-10)
Hisztopatológiai tüdővel rendelkező állatok száma (%)
Kontroll DAc-SP5-terápia DAc-SP5 terápia infekció alatt+1 infekció előtt * +/
Hörcsög (TCID50 = -2xl(F·3)
Egér (TCID = 103·5)
100 10
100 0
100
100
Megjegyzések:
+/ = 0,5 mg DAc-SP5, s.c. (pro kg) naponkénti adagolás 5 napon keresztül a kezelés kezdete az infekció napja * +' = 0,5 mg ()DAc-SP5 pro kg, s.c., hetenként 3-szor az infekció kezdete előtti 2. hétben, n.g. = nincs adat.
14. példa
Kemoterápia utáni kezelés
4.1. ábra: DAc-SP5 és immunszupresszív hatású vegyületek befolyása az antigén specifikus IgM-válaszra egereknél.
A) Az alkalmazás módjától függetlenül DAc-SP5 terápiás dózis adagolása (háromszor 0,5 mg/kg 24 óránként) nincs szignifikáns hatással az IgM-válasz erősségére és kinetikájára egereknél juh eritrocitákkal szemben.
Állatok: himnemű 2-2,5 hónapos NMRI-egerek (kolónia tenyésztés).
Jerne-Plaque-teszt módszere: R. Eckert és G. Pastcrnak: Acta bioi. med. germ. 31, 127-137 /1973/ szerint. n= 16 (NaCl-kontroll), n= 8 (DaC- SP5-vizsgálatok).
B) A DAc-SP5 már néhány egymásutánt al4Q kalmazás esetén is visszaállítja a humorális immunválasz kémiai úton kiváltott szupresszióját a ciklofoszfamid egyszeri adagolása révén (7,2 mg/állat i.p.) kiváltott csaknem teljes antigénspecifikus IgM-válasz szupresszió részlegesen 4r helyreállítható négy egymásutáni napon végzett DAc - SP5 (0,5 mg/kg s.c.) kezeléssel.
A dexametazon adagolással kiváltott antigénspecifikus IgM-válasz csökkenés (a = 0,2 mg/állat i.p.; b = 0,08 mg/állat i.p.) a két következő napon végzett BAc-SP5 kezeléssel (0,5 mg/kg s.c.) teljesen helyreállítható.
* = p 0,05 (összehasonlítva a megfelelő értékkel, amit GAc-SP5 kezelés nélkül kapunk).
n = 6 - 8 az A)-nál ismertetett kísérleti állat. 55
-10HU 199878 Β
4,1. táblázat
Monociták, illetve limfocita szubpopuláció citofluorimetriás kimutatása (kvantitatív meghatározás) monoklonális antitestekkel szekunder immunhiányos páciens (nő)-nél diacetil-splenopentin kezelés előtt és alatt, miközben az egyéb terápia azonos maradt
Paraméter | Normálérték | Kezelés előtt | Kezelés DAc-SP5-tel (hét) | ||
2 | 3 | 4 | |||
Limfociták (Gpt/1) | 1,5-3,5 | 0,28 | 0,84 | 0,74 | 0,83 |
CD 3 (Gpt/1) | 1,0-2,0 | 0,04 | 0,39 | 0,55 | 0,67 |
CD 4 (Gpt/1) | 0,6-1,3 | 0,03 | 0,29 | 0,34 | 0,38 |
CD 4/CD 8 | 1,5-3,0 | 0,58 | 2,3 | 2,2 | 2,4 |
DR + -monociták | |||||
(Gpt/1) | 0,0-0,6 | 0,2 | 0,18 | 0,26 | 0,60 |
DR + -monociták (%) | 65-90 | 16 | 22 | 62 | 72 |
15. példa
Csontvelő törzssejtek növekedésének és érésének stimulálása
5.1. táblázat
Sejtkoloniák száma C57 Bl-egerek csontvelő törzssejtjeinek és kontrollszemélyek, illetve szisztémás lupus eritremadotes betegek leukocitáinak tenyésztése után különböző DAc-SP5 koncentrációk jelenlétében (kolóniáké pződési teszt) (A táblázatban a számok a DAc-SP5 adalék nélküli kolóniákra vonatkoztatott négy pár a le lll kultúra százalékos középértékei) (Módszer: H. Schunck és munkatársai: Biomed. Biochim. Acta 46, 581 /1987/)
Csoport Vizsg.
Sejtkoloniák 105 csontvelősejtenként a a sejteknek DAc-SP5-tel való tenyésztése nélkül és után.
Százalékos adatok DAc-SP5-tel való tenyésztés nélküli kolóniákra vonatkoztatva (= 100%) Dac - SP5 koncentráció/1 ml félszilárd agar lpg 2 pl 10 pl 20 pl
Kontroll
személyek | A B | 99 135 | 98 136 | 114 147 | 125 187 |
Páciensek (szisztémás lupus eritematodes) | A | 180 | 316 | 270 | 256 |
B | 284 | 873 | 642 | 438 |
-111
HU 199878 Β
5.2. táblázat
Jelzetlen ligandumok által kiszorítható -H-splenopentin és —I-diacetil-splenopentin kötődési hely kimutatása radioligandum ötődési vizsgálatokkal U és komputerrel alátámasztott affinitás-spektrum analízissel történő affinitás számítási
Sejt/faj | Radioligandum-disszociációs állandó (Kn, M)+) | |
JH-SP5 (n= 2 —5) | I25I-DAc-SP5 (n = 2 — 4) | |
Csontvelő patkány | 8,7 ± 2,2x10® | 8,5 ± 0,5x10·’ |
CsontvelŐ/ember | nincs adat | 1,2 ± 0,3x10·® |
Törzssejtvonal/ember | 12x10'® | nincs adat |
Timuszsejtek/patkány | 7,6 ±3,5x10·® | nincs adat |
Lépsejt/patkány | nincs kiszorítható kötés | nincs adat |
Peritoneális hízó- | ||
sejtek/patkány4) | 4,3 ± 1,3x10® | nincs adat |
1) = A módszert lásd: H. Repke és C. Liebmann: Membranrezeptoren und ihre Effektorsysteme, Akademie-Verlag, Berlin és VCH Weinheim, NSZK, 55 —101 /1987/;
2) = A módszert lásd: H. Repke: Biochim. Biophys. Acta 929, 47 - 61 /1987/;
3) = A telítettségi tartomány alatti értékekből számítva.
4) = A sejtpreparáció módszerét lásd: H. Repke és munkatársai: Agents and Actions 20,216 — 218/1987/.
Az 5.1. ábrán a következők láthatók:
Antiteslképzés juh eritrocitákkal szemben (Plaque-képző lépsejtek AB/Bln-egér) az állatok egyszeri 800 oGy-nal történő röntgenbesugárzása után, valamint az azt követő csontvelősejt átültetés után végül heti három alkalommal 10 mikrogramm DAc-SP5-tel történő gyógyszerezéssel (·) vagy DAc-SF5 kezelés nélkül (o). Az értékek (középérték ± szórás) legalább öt állatnál mért értékek középértékét jelzik. A vonalkázott felület: az állatok Plaque-képző lépsejtjei röntgenbesugárzás nélkül és DAC-SP5 kezelés nélkül. Minimális és maximális értékek a 49 napos kísérleti időn belül. Az állatok immunizálása juh eritrocitákkal 5 nappal az IM Plaque-képző lépsejtek meghatározása előtt.
16. példa
HÍV infekció kezelése
6.1. ábra: Diacctil-splenopentin hatása a 3’-fluor-timidin-5’-trifoszfát (FdTTP) HÍV revertázgátló állal kiváltott humorális immunreakció befolyásolására.
Láisd: E. Matthes és munkatársai: Biochem. Biophys. Rés. Com. 148,1, 78 — 85. oldal/1987/.
6.1. a. ábra: 2,5 hónapos hímnemű Balb/c egereknek ivóvízzel 4 napon keresztül napi 1 mg FdTTP-t adagolunk. 24 órával az adagolás befe . 35 jezése után következik 12 órás időszakonként háromszor 0,5 mg/kg s.c. DAc-SP5 adagolása. 12 órával az utolsó DAc-SP5 kezelés után következik a juh eritrocitákkal (i.p.) történő immunizálás. Újabb 24 óra elteltével ismét FdTTP ada40 golás (s.o.) következik az állatok haláláig. (Plaque-teszt az immunizálás utáni negyedik napon).
1. csoport: NaCl-kontroll (n= 6)
2. csoport: FdTTP (n = 6)
3. csoport: FdTTP + CAc - SP5 (n = 6).
6.1.b. ábra: Az állatok, a módszerek és az anyagok megegyeznek a 6.l.a. ábrán feltüntetettekkel. Az FdTTP kezelés időtartama 11 nap. 24 órával az FdTTP adagolás után végezzük DAc50 SP5 adagolást 24 órás időszakokkal 5 napon keresztül.
1. csoport: DAc-SP5 kontroll (n « 6)
2. csoport: FdTTP (n = 6)
3. csoport: FdTTP X DAC-SP5 (n - 6)
4. csoport: NaCl-kontroll (n= 4).
A Box és Whisker Plot négy azonos gyakoriságú területtel egy szúrópróba adatait ábrázolja. A Box-ban van a szúrópróba középső 50%-a, a keresztvonal a Medián (normál eloszlású adatoknál a Box közepében). A Box feletti és alatti vonalak fedik a szúrópróba több részét.
x«= p < 0,05, illetve p < 0,01.
-12HU 199878 B cm
NO <-í o’ cd cd o e£
6.1,a. táblázat
Monocita, illetve limfocita szubpopuláció citofluorometriás meghatározása (kvantitatív meghatározás) monoklonális antitestekkel HIV-fertfizött pácienseknél diacetil-splenopentines kezelés előtt és alatt
8=5
XU §8i> 8 $ ja jd >-4 ο ο o rf rf oo v-ι r- vj oq © oo u-i ól cm o cf <s θ' cf o' v?
'C m r- r~ cm. . oo <c <-4 ro λ x> dodo rf rf ^33328 ’T «m © © © © n
o
V> O <*> Ο Ό Qrd rí r-Γ <d o 3K I I I I I I η ο « ιη q o r-Γ r-Γ o” rí cd irf
Ό
353888
Jddcdo ‘
Ν Λ ιη f) . . r4 m r-l Ν Λ -Q rí cd cd cd rf rf
VlNrtQlOQ oocihn no <-í cd cd cd o
Π --Ί φ 00 00 Q rt CJO -4 gö rí cd cd cd cd c£ νγ © rn © so q* r*í cT r-Γ rn cf 2F Ν I I I I ® Ό »/> O © Τ-Γ r-Γ O ©* ® »n
íj <5o 3 ni
•4U
Já <D
Ό>
H H cm m
-13HU 199878 B
38Sf3 58
-4 -4 ο” o o' r-~ ΧΊ xf xí* Ή Ο ΧΊ O <s r- oo ή ί o rf d d h o rf r6.1.b. táblázat
Monocita, illetve limfocita szubpopuláció citofluorometriás meghatározása (kvantitatív meghatározás)
MÜ
-Ö .a
Ct fe
4>
w
Im
VÜ *3 s
u
O
Z υ
w ι
Oh
M 00 S •S £>3
24?
ΟΟΟΟΟΓ» Q χί t\ro η o ν η ο θ' σ' χ£
ΧΊ
Ή 00 xf Ή . .
oe -4 ro <μ Χΐ χ> rínod rf rf ο . ro o ro ΧΊ λ Λ ή ο ro σ' rf rfo c4 ro
ΧΊ (S ΧΊ ro Q ro ο ο ο ο ο τη σ' ο' σ' ο ΧΊΟ
ΧΊ Ο ΗΊ Ο. \Ο Qro c4 *4 ro ο eh I I I I I I ΧΊΟ'βΧΊΟΟ Ι-Γ r4 Ο .4 Ο ΧΊ
Ό
Q Ο.^ curí
2- θ« Ο.Α ’3
3as*§1 •gSS8|?
'SUU ?+ j + « £*Ω Q ey 'TŰ ro U
X) X> X) Λ X> Λ rf rf rf rf rf rf
Γ- ΧΊ Γ r- NO o r- xf D Nő π d d d o ro
ΧΊ
SS3S rídd a ro o <s o orf
ΧΊ
SSS8 3g i-Γ σ σ- θ' o oo χί o ro ο. Ό, o* rí rí h d O 5 I I I I I I
ΧΊΟ^'ΟΧΊΟΟ r-í r-í ο ή” O XJ 'Ή
Q,i-4 r-4 Q0
Ü ·^ ^3 -Μ __ o. O.Q '2 ?
^οαυ·5 g ro »t - β o
SqqÖÍ ?
’*,UU ? + + u eíQ tu ~ ág xtU
2) = a (*)-gal jelölt értékek megfelelnek a normálértékeknek.
3) = nd>. — nincs adat.
-14HU 199878 Β
17. példa
Krónikus alkoholintoxikáció hatása a hünnemfl Balb/c egerek immunrendszerének kiválasztott paramétereire
7. táblázat
Krónikus alkoholintoxikáció hatása hímnemfl Balb/c egerek immunrendszerének kiválasztott paramétereire
15% etanol adagolása legalább 1,5 hónapig | + | + | - | - |
0,1 mg DAc-SP5 i.p. ötször naponta vizsgálat előtt | + | + | ||
(n-40) | (n = 40) | (n-40) | (n-40) | |
% fagocita peritoneális sejtek | 29,0+ 1,7 | ' 47,5+1,7 | 75,0+2,6 | 46,0+1,7 |
fagocitózis index | 3,0+0,08 | 4,5+0,1 | 4,9+0,15 | 3,7+0,08 |
timusz-tömeg (mg) | 15,0+2,6 | 29,0+2,2 | 40,0+3,0 | 25,0+2,3 |
léptömeg (mg) Plaque-képző lépsejtek/ | 60,0+3,2 | 82,0+5,6 | 95,0+7,1 | 85,0+3,6 |
/106 sejt (Jerne-Plaque-teszt) | 61,3+3,8 | 214,3+5,9 | 285,0+11,3 | 156,6+12,0 |
Átlagértékek ±
18. példa
Autoimmun reakciók kezelése
8.1. táblázat
DAc-SP5 normalizáló hatása neuronális antigénekkel szembeni indukált autoimmun reakciója nyulaknál
Kísérleti csoportoki) Bazofílek %-os antigén specifikus reakciója neuroantigén (nyúl) standard preparátummal
Kiindulási 2 hét 6 hét 8 hét
értékek | után | után | után | |
1. Hippocampus sérülés2) + DAc-SP53>, N4) -6 | 31,3+ 1,9 | 42,0+4,8 | 28,3+3,9 | 15,0+2,9 |
2. Hippocampus sérülés + NaCl, n = 6 | 28,0+4,0 | 44,0+6,7 | 46,6+7,0 | 38,6+0,7 |
3. Kontroll + DAc-SP5, n - 4 | 21,0+5,0 | 20,5+3,3 | 10,0+2,7 | 23,0+6,2 |
4. Kontroll + NaCl, n - 4 | 11,0+3,0 | 20,5+4,6 | 33,5+3,3 | 22,5+3,8 |
1) — Chinchilla-nyulak (kb. 3000 g-osak), amelyek neuronális antigénekkel szemben spontán autoimmun reakciót mutatnak.
2) - A dorzális Hippocampus helyi sérülése a neuronális antigénekkel szembeni autoimmun reakció növekedését okozza.
3) - DAc-SP5 adagolás (1 mg/kg s.c.) ötször 4 napos időközökkel ’ - p < 0,005 (t-teszt Student szerint)
4) - n - állatok száma.
-151
HU 199878 Β
8.2. táblázat
DAC-SP5 hatása az (antiovalbumin) antitestek literére
Log2 PCA-titer
I. csoport II. csoport III. csoport IV. csoport
Immunizálás | ||||
2. Booster | 9,3 | 10,3 | 10,3 | 9,3 |
3. Booster | 12,3 | 12,3 | 13,3 | 12,3 |
4. Booster | 13,3 | 13,3 | 14,3 | 14,3 |
DAc-SP5 (háromszor hetente, s.c.) Kontroll
Napok az utolsó Boosterezés után | Lesöpört2) 10 Mg/kg | Il.csoport2) 100 Mg/kg | III .csoport2) 500 Mg/kg | IV.csoport |
7. | 13,6+0,6 | 13,5+0,7 | 13,6+06, | 13,4+0,5 |
14. | 13,5+1,0 | 13,8+0,8 | 13,8+0,8 | 13,0+0,8 |
21. | 13,0+0,4 | 12,6+0,4 | 12,8+0,5 | 12,7+0,5 |
28. | 12,9+1,3 | 12,9+0,8 | 13,0+1,0 | 13,0+0,9 |
35. | 12,8+0,5 | 13,2+0,5 | 12,7+0,5 | 12,9+0,5 |
42. | 13,0+0,6 | 13,1+0,9 | 12,7+0,5 | 12,9+0,5 |
49. | 12,9+0,7 | 13,1+0,9 | 12,6+0,6 | 12,6+0,4 |
56. | 12,3+0,4 | 12,6+0,9 | 12,1+0,9 | 12,1+0,4 |
x± S.D. | x ± S.D. | x ± S.D. | x± S.D. | |
n = 10 | n = 10 | n = 10 | n = 10 |
1) = Fj-hibrid egereket (Balb/c x C57 B1/6J) 1 pg ovalbuminnal 1 mg Al(OH)3-ban emulgeálva) immunizáljuk. Az anti-ovalbumin titert a passzív kután anafilaxis módszerével (lásd: Wyczotkowska és munkatársai: Int. Archs. Allergy Appl. Immun. 72, 16 — 21 /1983/) az egyes állatok szérumának hígitási sora segítségével határozzuk meg.
2) = A kísérleti és a kontrollcsoport értékei között nincs statisztikailag szignifikáns eltérés.
Claims (12)
1. Eljárás (I) általános képletű acilezett sple- 40 nopentinek és savaddíciós sóik előállítására — ahol
R1 jelentése hidrogénatom vagy 1-18 szénatomos alkanoilcsoport;
R2 jelentése hidrogénatom vagy 1-18 szén- 45 atomos alkanoilcsoport,
R4 jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport vagy egy OR5 általános képletű csoport, ahol R5 jelentése 1 — 4 szénatomos alkilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy R1 és R2 közül legalább az 50 egyik hidrogénatomtól eltérő - azzal jellemezve, hogy splenopentint vagy részlegesen védett splenopentint egy ZR általános képletű acilezőszerrel, ahol Z jelentése reakcióképes csoport és R jelentése 1 — 18 szénatomos alkanoilcsoport, reá- 55 gáltatunk, és adott vagy kívánt esetbn a védőcsoportot eltávolítjuk, a kapott savaddíciós sóból kívánt esetben felszabadítjuk a bázist, és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületeket a peptidkémiában szokásos kromatográfiás 60 eljárással tisztítjuk.
(Elsőbbsége: 1988,06.16.)
2. Eljárás az (I) általános képletű acilezett splenopentinek és savaddíciós sóik előállítására -ahol· 65
R1 jelentése hidrogénatom vagy 1-18 szénatomos alkanoilcsoport,
R2 jelentése hidrogénatom vagy 1-18 szénatomos alkanoilcsoport,
R4 jelentése hidroxilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy R1 és R2 közül legalább az egyik hidrogénatomtól eltérő - azzal jellemezve, hogy splenopentint, vagy részlegesen védett splenopentint egy ZR általános képletű acilezőszerrel, ahol Z jelentése reakcióképes csoport és R jelentése 1 — 18 szénatomos alkanoilcsoport, reagáltatunk, és adott vagy kívánt esetben a védőcsoportot eltávolítjuk, a kapott savaddíciós sóból kívánt esetben felszabadítjuk a bázist, és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületeket a peptidkémiában szokásos kromatográfiás eljárással tisztítjuk.
(Elsőbbsége: 1987.06.19.)
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy acilezőszerként N-hidroxi-norborn-5-én-2,3-dikarboxamid-(l —18 szénatomos)-karbonsavésztert, előnyösen N-acetoxi-norborn-5-én-2,3-dikarboximidet alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1988.06.16.)
4. A 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy acilezőszerként N-bidroxi-norborn-5-én-2,3-dikarboximid-(l — 18-szénatomos)karbonsavésztert, előnyösen N-acetoxi-norborii-516
-161
HU 199878 Β
-én-2,3-dikarboximidct alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1987.06.19.)
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy acilezőszerként 1-acetoxi-benzotriazolt alkalmazunk.
(Elsőbbsége: 1988.06.16.)
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy acilezőszerként 1-acetoxi-benzotriazolt alkalmazunk.
(Elsőbbsége: 1987.06.19.)
7. A 2., 4., 6. igénypont szerinti eljárás (N“-acetil-arginil)-(N£-acetil-lizil)-glutamil-valil-tirozin előállítására, azzal jellemezve, hogy Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-t N-acetoxi-norborn-5-én-2,3-dikarboximiddel vagy 1-acetoxi-benzotriazollal reagáltatunk.
(Elsőbbsége: 1987.06.19.)
8. A 2., 4., 6. igénypont szerinti eljárás arginil-(N£-acetil-lizíl)-glutamil-valil-tirozin előállítására, azzal jellemezve, hogy Na-Arg-védett splenopentint N-acetoxi-norborn-5-én-2,3-dikarboximiddel vagy 1-acetoxi-benzotriazollal reagáltatunk, majd N1*-védőcsoportot lehasítjuk. (Elsőbbsée: 1987.06.19.)
9. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az acilezett splenopentineket karboxilezett kationcserélőkön, előnyösen akrilátbázisú, divinil-benzollal térhálósított kationcserélőkön, vizes eluálórendszerekben, polaritásuknak megfelelően 10'5 és 10‘2 mól/1 közötti ion-erősségnél tisztítjuk, és az eluálást előnyösen izokratikusan 10 - 20% etanolt tartalmazó vizes eluálószerrel, pH = 2,5-nél végezzük. (Elsőbbsége: 1988. 06.16.)
10) A 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az acilezett splenopentineket karboxilezett kationcserélőkön, vizes eluálórendszerekben, polaritásuknak megfelelően 105 és 10*2 mól/1 közötti ionerősségnél tisztítjuk, és az eluálást előnyösen izokratikusan 10 — 20% etanolt tartalmazó vizes eluálószerrel, pH = 2,5-nél végezzük.
(Elsőbbsége: 1987.12.23.)
11. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy egy vagy több 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű vegyületet vagy annak savaddíciós sóját - a képletben R1, R , R4 és R5 jelentése az 1. igénypontban megadott — egy vagy több gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyaggal és/vagy gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverünk, és gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
(Elsőbbsége: 1988.06.16.)
12. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy egy vagy több 2. igénypont szerint előállított (I) általános képletű vegyületet vagy annak savaddiciós sóját — a képletben R1, R2 és R4 jelentése a 2. igénypontban megadott — egy vagy több gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyaggal és/vagy gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverjük, és gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DD30397587A DD263778A1 (de) | 1987-06-19 | 1987-06-19 | Verfahren zur herstellung acylierter splenopentine |
DD31108087A DD281089A7 (de) | 1987-12-23 | 1987-12-23 | Verfahren zur chromatographischen reinigung von acylierten splenopentin-peptiden |
DD31214488A DD268160A1 (de) | 1988-01-08 | 1988-01-08 | Verfahren zur herstellung eines mittels mit wirkung auf knochenmarkstammzellen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT47310A HUT47310A (en) | 1989-02-28 |
HU199878B true HU199878B (en) | 1990-03-28 |
Family
ID=27179904
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU883100A HU199878B (en) | 1987-06-19 | 1988-06-16 | Process for producing acylated splenopentynes and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0307553B1 (hu) |
JP (1) | JPS6485998A (hu) |
AT (1) | ATE107311T1 (hu) |
DE (1) | DE3850196D1 (hu) |
ES (1) | ES2056858T3 (hu) |
HU (1) | HU199878B (hu) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DD296084A5 (de) * | 1989-07-27 | 1991-11-21 | Adw | Verfahren zur herstellung von humanen spleninderivaten |
DD292382B5 (de) * | 1990-03-06 | 1994-03-24 | Berlin Chemie Ag | Verfahren zur herstellung eines parenteral applizierbaren lagerbestaendigen immunstimulierenden praeparats |
DE4011207A1 (de) * | 1990-04-06 | 1991-10-10 | Stiefel Thomas | Humane splenopentinderivate und verfahren zu deren herstellung |
EP0517126A1 (de) * | 1991-05-31 | 1992-12-09 | WOGEPHARM GmbH | Verwendung von Diacetyl-Splenopentin bei der Chemo- und Strahlentherapie |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2938420A1 (de) * | 1979-09-22 | 1981-04-09 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue peptide und verfahren zu ihrer herstellung |
US4309340A (en) * | 1980-03-31 | 1982-01-05 | American Home Products Corporation | Polypeptide compositions |
US4298523A (en) * | 1980-06-17 | 1981-11-03 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Methods and compositions for preparation of H-ARG-X-Z-Y-TYR-R |
HU185263B (en) * | 1981-06-12 | 1984-12-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing peptides effective on the immuncontroll analogous with the tp5 |
DE3401545A1 (de) * | 1983-08-03 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue peptide mit immunstimulierender wirkung, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
US4629723A (en) * | 1984-06-27 | 1986-12-16 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Potent thymopentin analogs |
-
1988
- 1988-06-16 HU HU883100A patent/HU199878B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-06-20 AT AT88109774T patent/ATE107311T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-06-20 JP JP63150377A patent/JPS6485998A/ja active Pending
- 1988-06-20 DE DE3850196T patent/DE3850196D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-20 EP EP88109774A patent/EP0307553B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-20 ES ES88109774T patent/ES2056858T3/es not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3850196D1 (de) | 1994-07-21 |
JPS6485998A (en) | 1989-03-30 |
EP0307553A3 (en) | 1990-05-09 |
EP0307553B1 (de) | 1994-06-15 |
ATE107311T1 (de) | 1994-07-15 |
HUT47310A (en) | 1989-02-28 |
ES2056858T3 (es) | 1994-10-16 |
EP0307553A2 (de) | 1989-03-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2060998C1 (ru) | Способ получения пептидов, пептиды, иммуномодулирующая композиция и способ регуляции недостаточной или избыточной функции т-клеток у пациента | |
EP0067425B1 (de) | Gegebenenfalls geschützte Peptide, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel | |
US4426324A (en) | Immunopotentiating peptides | |
DD213917A5 (de) | Verfahren zur herstellung neuer peptidderivate | |
US4683292A (en) | Immunotherapeutic polypeptide agents which bind to lymphocyte immunoglobulin FC receptors | |
EP0014815A2 (de) | Peptidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte sowie pharmazeutische Präparate mit einer dieser Verbindungen | |
JPH0753752B2 (ja) | 酵素抵抗性免疫変調ペプチド | |
EP0832900B1 (en) | Peptide and method of obtaining it | |
JPH0689029B2 (ja) | 効力のあるサイモペンチン類似体 | |
DD217807A5 (de) | Verfahren zur herstellung neuer substituierter tetrapeptide | |
JPS6360760B2 (hu) | ||
US4658016A (en) | Process for the preparation of pentapeptides having an action on the immune system and intermediate products for this process | |
US5688771A (en) | Lipophilic oligopeptides with immunomodulating activity | |
EP0190127A1 (en) | Immunotherapeutic polypeptide agents | |
US4567182A (en) | Compounds endowed with immunomodulating activity | |
HU199878B (en) | Process for producing acylated splenopentynes and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient | |
EP0378432B1 (en) | Novel peptides, their use to inhibit the maturation of t-lymphocytes and the activity of macrophages, and processes for their preparation | |
EP0382251B1 (en) | New adamantyl comprising tripeptides, derivatives and hydrochlorides thereof, their preparation and use | |
CZ553289A3 (en) | Peptide exhibiting immunomodulating activity, process of its preparation and pharmaceutical preparation in which it is comprised | |
AU721261B2 (en) | Peptide inhibitors of hematopoietic cell proliferation | |
US5656601A (en) | Acylated splenopentins, methods for their synthesis and their use | |
CA2258487A1 (en) | Cyclic depsipeptides and drugs containing the same as the active ingredient | |
EP0464009A2 (en) | Oligopeptide derivatives of ipoxantine endowed with immunomodulating activity and pharmaceutical compositions containing same | |
EP0050856B1 (en) | New peptide, process for its preparation and pharmaceutical composition containing it | |
US4146614A (en) | Threonyl-valyline leucine containing peptides and pharmaceutical compositions |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HU90 | Patent valid on 900628 | ||
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |