HU192971B - Process for preparing antibiotic factors a-51568 a and b - Google Patents
Process for preparing antibiotic factors a-51568 a and b Download PDFInfo
- Publication number
- HU192971B HU192971B HU834327A HU432783A HU192971B HU 192971 B HU192971 B HU 192971B HU 834327 A HU834327 A HU 834327A HU 432783 A HU432783 A HU 432783A HU 192971 B HU192971 B HU 192971B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- factor
- antibiotic
- culture
- fractions
- factors
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
- C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/365—Nocardia
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás az A-51563 A-faktorként és B-faktorként jelölt antibiotikumok előállítására, az eddig még le nem írt Nocardia orientalis NRRL 15232 mikroorganizmus vagy annak A-51568 antibiotikumot termelő mutánsának vagy variánsának tenyészetével süllyesztett aerob fermentációs körülmények között. A Nocardia orientalis NRRL 15232 törzs normális körülmények között az A-51568 A- és B-faktorok kb. 95:5 arányú keverékét termeli. Ezek az antibiotikumok gátolják az olyan, főleg a Gram-pozitív Staphylococus és streptococcus nemzetiségekhez tartozó patogén mikroorganizmusok növekedését, melyek a penicillinnel szemben ellenállóak.
A mikroorganizmusok jelentékeny része patogén és számos humán és állati betegség kiváltó oka. Az évek során nagyszámú, a patogén mikroorganizmusokkal szemben aktív antibiotikumot fedeztek fel. Ennek ellenére szükséges, hogy még hatékonyabb antibiotikumokat találjunk a patogén mikroorganizmusok okozta emberi és állati betegségek kezelésére.
Az A-51568 A-faktor és B-faktor antibiotikumok a glikopeptid típusú antibiotikumok közé tartoznak és a Gram-pozitív mikroorganizmusokkal szemben hatékonyak.
A glikopeptid típusú antibiotikumos ismertek már e téren, ilyen többek között a vankomicin (Mc Cormick és munkatársai, 3 067 099 számú USA szabadalom 1962), melynek szerkezetét Williamson és munkatársai (J.Am.Chem.Soc. 103, 6580-6585, 1981) írták ie az aktaplanin (A-4696 antibiotikum, Hamill és munkatársai, 3 952 095 számú USA szabadalom 1976), mely szerkezetének egy részletét Debono (4 322 343 számú USA szabadalom, 1982) írta le a risztocetin (765 886 számú brit szabadalom, 1957) - a risztocetin komplex egyik faktorának, a risztocetin A-nak szerkezetét Kálmán és munkatársai (J. Am. Chem. Soc., 102, 897-905, 1980) írták le -, az ovoparcin (Kunstmann és munkatársai 3 338 786 számú USA szabadalom, 1967), melynek szerkezetét Ellestad és munkatársai (J.Am.Chem.Soc. 103, 6522-6524,1981) írták le.
A találmányban szereplő antibiotikumok és gyógyászati szempontból alkalmazható sóik az (1) általános képlettel - ahol n jelentése 1 vagy 2 - jellemezhetők. Az antibiotikumot, melynek (1) általános képletében n jelentése 1, A-51568 A-faktornak, ahol n jelentése 2, A-51568 B-faktornak nevezzük. Az (1) általános képletű antibiotikum . vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója szerepelhet készítményben, mint főalkotórész.
Az A-51568 A-faktor fehér, amorf szilárd anyag. Elemanalízise szerint az összetétel: C: 50,63%, H: 5,07%, N: 8,36%, S1: 8,19%, O:
: 25,16%. A gyors-atom-bombázású tömegspektrometria szerint meghatározott molekulasúlya: 1435.
Az A-51568 A-faktor protonmágneses magrezonancia spektrumát dimetil-szulfoxidtari határoztuk meg 60 °C hőmérsékleten és 360 MHz-en. A szerkezeti képlet hattagú gyűrűit betűkkel jelöljük a (2) képletben ábrázoltak szerint.
A ppm-ben megadott kémiai eltolódási adatokat az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
A-51568 A-faktor kémiai eltolódás adatai (60 °C)
A gyűrű kémiai eltolódás
| -NH | 6.54 |
| 4.19 | |
| —’ i | 5.14 |
| -OH | 5.86 |
| 7.86 | |
| -5 | 7.30 |
| -6 | 7.47 |
| B gyűrű | kémiai eltolódás |
| -NH | 8.24 |
| -1’ | 5.72 |
| 5.63 | |
| -€ | 5.22 |
| C gyűrű | kémiai eltolódás |
| -NH | --X |
| -2’ | 4.78 |
| -1’ | 5.18 |
| -CH | 5.74 |
| -2 | 7.66 |
| -3 | 7.18 |
| -6 | 7.42 |
| D gyűrű | kémiai eltolódás |
| -NH | 8.45 |
| -1’ | 4.47 |
| -2 | 6.26 |
| -4 | 6.42 |
| E gyűrű | kémiai eltolódás |
| -N -1 | 8.54 |
| -1’ | 4.47 |
| 7.17 | |
| -5 | 6.72 |
| -6 | 6.79 |
| Aszpargin | kémiai eltolódás |
| -NH | 6.61 |
| “OC | 4.32 |
| -J | 2.56 és 2.14 |
Aszpargin
-NH2
Leucin kémiai eltolódás
7.29 és 6.83 kémiai eltolódás
-NH’ (közepes), 1062 (közép erős), 1028 (gyenge), 1015 (gyenge), 930 (gyenge), 882 (gyenge), 881 (gyenge) cm* *’
Az A-51568 A-faktor savas, semleges és bázikus vizes oldatának ultraibolya abszorpciós spektrumának adatait a 2. táblázatban foglaljuk össze.
Glükóz
3.70
1.65 és |Q
1.49
1.76
0.93 és
0.90 kémiai eltolódás
2. táblázat
Az A-51568 A-faktor UV spektruma savas vagy semleges maximum nm (e)
278 (5.500)
234 (váll) (25.000) bázikus maximum nm (e) 302 (6.000)
264 (váll) (10.000)
Vankózamin (3-CHs
Vankózamin
| 5.33 | Az A-51568 B-faktor [(1) általános kép- |
| 3.58 | letben n=2] fehér, amorf szilárd anyag. A |
| 3.49 | 20 gyors-atom-bombázású tömegspektrometria |
| 3.49 | szerint molekulasúlya: 1437. |
| -X | Az A-51568 B-faktor proton mágneses |
| 3.70 és | magrezonancia spektrumát dimetil-szulfoxid- |
| 3.54 | bán határoztuk meg, 60 °C hőmérsékleten, |
| 25 360 MHz-en. A hattagú gyűrűket betűkkel | |
| kémiai eltolódás | jelöljük, ahogyan azt a (3) képleten ábrázol- |
| --------— | juk. A ppm-ben kifejezett kémiai eltolódás! |
| 5.30 | adatokat a 3. táblázat mutatja. |
| 1.93 és | |
| 1.77 | 30 |
| 1.37 | 3. táblázat |
| Az A-51568 B-faktor kémiai eltolódás adatai | |
| kémiai eltolódás | (60 °C) |
x
4.67 (5-CH3) 1.09 * nem meghatározott
Az A-51568 A-faktor proton mágneses magrezonancia spektruma nagyon hasonló a vankomicinéhez. A fő különbség, hogy az A-51568 spektrumában hiányzik az N-metil-leucin N-CH3 rezonanciája. A vankomicin proton NMR spektrumában 2,39 ppm-nél jelentkező metil szlnglett az A-51568 A-faktor NMR spektrumában nincs meg.
A molekulasúly, a proton mágneses magrezonancia spektrum és az elemanalizis adatai alapján az A-51568 A-faktor tapasztalati képlete: C65H73CI2N9O24.
Az A-51568 A-faktor 66%-os vizes dimetil-formamidban végzett potenciometrikus titralása N: 6,2; 8,8; 10,3 és 12,85 pKa értékeket mutat (kezdeti pH: 6,12).
Az A-51568 A-faktor fajlagos forgatóképessége: [o:]d25oC=-20,4o (c=10 mg/ml, víz);
[oc]36525oC=-33,6° (c=10 mg/ml, viz).
A KBr pasztillában felvett infravörös spektrumát az 1. ábrán mutatjuk be. A spektrumon a következő abszorpciós csúcsokat különböztethetjük meg: 3400 (széles, erős), 3380 (széles erős), 1657 (széles, erős), 1587 (közép erős), 1505 (közép erős), 1424 (közepes), 1396 (közepes), 1328 (széles, gyenge), 1310 (széles, gyenge) 1231 (közép erős), 1174 (gyenge), 1156 (gyenge), 1128
A gyűrű kémiai eltolódás
| 40 | -NH -2’ -1’ -OH -2 -5 -6 | 6.54 4.19 5.13 5.58 7.84 7.29 7.47 |
| 45 | B gyűrű | kémiai eltolódás |
| -NH | 7.63 | |
| -1’ | 5.67 | |
| -2 | 5.60 | |
| 50 | -6 | 5.23 |
| C gyűrű | kémiai eltolódás | |
| -NH | -X | |
| 55 | -2’ | 4.81 |
| -1’ | 5.13 | |
| -OH | 5.83 | |
| -2 | 7.84 | |
| -3 | 7.16 | |
| 60 | -6 | 7.13 |
| D gyűrű | kémiai eltolódás | |
| -NH | 8.42 | |
| 55 | -1’ | 4.48 |
| -2 | 6.29 | |
| -4 | 6.42 | |
| E gyűrű | kémiai eltolódás | |
| -NH | 8.48 | |
| -1’ | 4.48 | |
| -2 | 7.18 | |
| -5 | 6.72 | |
| -6 | 6.79 | |
| Glutamin | kémiai eltolódás | |
| -NH | 6.83 | |
| -0C | 4.06 | |
| -L | 1.67 és | |
| -Ϊ | 1.87 | |
| -NHz | 6.83 és 6.41 | |
| Leucin | kémiai eltolódás | |
| -NH2 | -X | |
| —0L | 4.05 | |
| -j | 1.63 és 1.68 | |
| -Ϊ | 1.67 | |
| -á | 0.92 0.91 | |
| Glükóz | kémiai eltolódás | |
| -1 | 5.33 | |
| -2 | 5.52 | |
| -3 | 3.48 | |
| -4 | 3.29 | |
| -5 | 3.16 | |
| -6 | 3.70 és 3.52 | |
| Vankózamin, | kémiai eltolódás | |
| -1 | 5.30 | |
| -2 | 1.92 és 1.76 | |
| (3-CHa) | 1.37 | |
| 4 | 3.16 | |
| 5 | 4.67 | |
| (5-CHa) ' | 1.09 |
x nem meghatározott
Az A-51568 B-faktor proton mágneses magrezonancia spektruma nagyon hasonló a vankomicinéhez és az A-51568 A-faktoróhoz. A fő különbség, hogy az A-51568 B-faktor spektrumából hiányzik a vakomicin spektrumában meglevő, az N-metil-leucin csoporttól származó N-CH3 rezonancia és a van komid n, valamint az A-51568 A-faktor spektrumában meglevő aszparagintól származó rezonanciák. A vankomicin és az A-51568 A-faktor spektrumában meglevő aszparagin rezonanciacsúcsai helyett az A-51568 B-faktor spektrumában a glutamin rezonanciacsúcsai jelennek meg.
A tömegspektrum, a proton mágneses magrezonancia spektrum adatai és ezeknek az adatoknak az A-51568 A-faktor adataival való összehasonlítása alapján az A-51568 B-faktor tapasztalati képlete: C65H73CI2N9O24.
A találmány az eddig le nem írt Nocardia orientalis NRRL 15232 törzset használja. A törzs biológiailag tiszta tenyészetét laborató'iumunkban A-51568.1 kultúraként jelöltük.
Az A-51568.1 tenyészet az eredetileg a mexikói Yucatanban gyűjtött talajmintából izolált A-51568 tenyészetből természetes szelekcióval nyert variáns törzs.
Az A-51568.1 tenyészetet a Nocardia orientalis egyik törzsének határoztuk meg, egyrészt az egyidejű laboratóriumi összehasonlítások, másrészt az alábbi irodalomban közölt Nocardia leírások alapján: D.Berd, .Laboratory Identification of clinically important aerobic Actínomycetes, Appl. Microbiol., 25, (4): 665-681 (1973); Bergey’s manual of determinative bacteriology, szerk. R.E. Buchanam és N.E. Gibbons, 8. kiadás (The Williams and Wilkins Co., Baltimore); R.E. Gordon és munkatársai .Nocardia coelica, Nocardia autotrcphia and the Nocardin strain', Int. J. Syst. Bacteriol. 24, (1): 54-63 (1974); R.E.
Goi don és munkatársai, .Resistance to rifampir and lysozyme of strains of somé species of Mycobácterium and Nocardia as a taxonomic tool', Int. J. Syst. Bacteriol., 27, (3): 176-178 (1977); S.A. Waksman, The Actinomycetes, II. kötet (The Williams and Wilkins Co., Baltimore (1961); ill. ennek a fajnak a leírásával: R.E. Gordon és munkatársai .Somé bits and pieces of the genus Nocardia: N.carea, N. vacinii, N.Transvalensis, N. orientalis and N. aerocolonigenes', J.Gen. Microbiol., 109: 69-78 (1978); S.J. Mishra és munkatársai .Identificat'on of Nocardiae and Streptomycetes of medical importance', J.CIin. Microbiol., 11, (6): 728-736 (1980) és Pittenger és munkatársai, .Streptomyces orientalis, n. sp., the source of vancomycin, Antibiot. and Chemoth., 6, (11): 642-647 (1956).
A törzs leírásánál az International Streptomyces Project (ISP) számára a Streptomices fajok leírására ajánlott, Shirling és Gotclieb által leírt [.Methods of characterization of Streptomyces species, Int. J. Syst. Bacteriol., 16, (3): 313-340 (1966)] módszereket és táptalajokat, valamint a Nocardia fajták jellemzésére ajánlott, Gordon és munkatársai által közzétett [..Nocardia coelica, Nocardia autotrophia and the Nocardin strain', Int. J. Syst. Bacteriol., 24, (1): 54-63 (1974)] módszereket használtuk.
A továbbiakban ismertetjük az A-51568.1 tenyészet jellemző tulajdonságait, melyek alapján rendszertani hovatartozását meghatároztuk.
Morfológia: Az A-51568 tenyészet erőteljes szubsztrát és légmicéliumot fejleszt.
19Σ971
Fénymikroszkóp alatt vizsgálva a légmicéliumok pókhálóhoz hasonlóak. Süllyesztett, rázott tenyészetben a hifák rövid micélium darabokra törnek.
A légmicéliurnokat fénymikroszkóp alatt 5 vizsgálva konidiumokat nem lehet megfigyelni, elektromikroszkóppal azonban a konidiumok láthatók. Az A-51568.1 kultúrának ezek a tulajdonságai akkor figyelhetők meg, ha ISP-5 táptalajon és csapvizes agaron nő. A spórafelszín sima (sm). A spóraalak gömbölyűtől hengeresig változik, a spórák gyengén és szabálytalanul képződnek. Ez a morfológia a Bergey’s Manual (1. fent) ismertetése szerint a nem-streptomycetes csoportba sorolja a 15 mikroorganizmust. A tenyészet jellemzése: Az A-51568.1 kultúra jól nő élesztő dextróz agaron és sok más agaros táptalajon, a tenyészet gyakran redőzött és pelyhes. Bőséges légmicéliumot növeszt, a spóratömeg színe a 20 szürke (GY) és némelykor a fehér (W) színsorozathoz tartozik. A Tresner és Backus rendszerben (1. Tresner és Backus, .System of color wheels fór Streptomycete taxonomy, Appl. Microbiol., 11: 335-338 (1956) ez a 25 szürke szín a d halvány szürkétől a 2dc sárgás szürkéig terjedő tartományhoz áll a legközelebb.
A légmicéliumok se nem olyan sűrűn növök, se nem olyan hosszúak, mint a tipikus 30
Streptomycesnél. A légmicéliumok képződése szervetlen só -keményítő agaron (ISP-4). glicerin -aszparagin agaron (ISP-5) és glicerin-glicin agaron, de legjobban élesztő-malátakivonat agaron (ISP-2) figyelhető meg.
A sötétbarna jellemző szín figyelhető meg a fonák oldalon a következő agaros táptalajokon: ISP-2, ISP-5, tirozinos agar (ISP-7), és glicerin-glicin agar. Ezt a színt a pH nem befolyásolja. Halvány vagy vöröses-barna oldható pigment szintén keletkezik a fenti táptalajok, valamint a Czapek-féle agaron és glükóz-aszpargin agaron. Az A-51568.1 tenyészet fonákjának színe más táptalajokon sárgásbarna.
Változékonysági vizsgálatokban az A-51568.1 kultúra egységes tenyészettipust mutat, így stabil izolátumnak tekinthető.
Az A-51568.1 tenyészet különböző táptalajon mutatott sajátságait a 4. táblázatban mutatjuk be, összehasonlítva a Nocardia orientalis ATCC 19795 törzs tenyészeteinek tulajdonságaival.
A színeket az ISCC-NBS Centroid Color Charts Sample No. 2106 (National Bureau of Standard, U.S. Department of Commerce, 1958) és a Color Harmony Manual, 4. kiadás (Color Standards Department, Container Corporation of America, Chicago, Illinois, 1958) szerint jelöljük.
4. táblázat
Az A-51568.1 és az ATCC 19795 tenyészeti sajátosságai különböző táptalajon táptalaj A-51568.1 ATCC 19795
ISP-2 N: erőteljes, redőzött felszín
F: 59.d. Br. (nem pH függő)
Lrn: erőteljes, d 1. Gray (GY) halvány szürke)
Op: vöröses-barna
ISP-3 N: erőteljes
F: 89.p.Y.
Lm: jól növekvő, d LGray (GY) (halvány szürke)
Op: nincs
ISP-4 N: erőteljes
F: 72. d. OY.
Lm: erőteljes, b Oyster White (W) (fehér)
Op: nincs
ISP-5 N: erőteljes
F:59. d.Br. (nem pH függő)
Lm: erőteljes, b Oyster White (W) (fehér)
Op: halvány-barna ISP-7 N: erőteljes
F: 65. br. Black (fekete) (nem pH függő)
Lm: erőteljes, 2ba p.Yellow (Y) (fakó sárga)
Op: sötét vöröses-barna
Czapek N: jó erőteljes, redőzött felszín, 72.d.OY.
erőteljes, 2ba pale Yeliow (Y) (fakó sárga) nincs erőteljes
89.p.Y.
jól növekvő, d 1. Gray (GY) (halvány szürke) nincs erőteljes
72. d. OY.
erőteljes, b Oyster White (W) (fehér) nincs erőteljes
70. 1. OY.
erőteljes, b Oyster White (W) (fehér) nincs erőteljes
71. m. OY.
erőteljes, 2ba p. Yeliow (Y) (fakó sárga) nincs jó
-511 táptalaj A-51568.1
ATCC 19795 táptalaj
Emersonféle agar glükóz aszpargin gliceringlici n tápagar csapvíz élesztő dextróz
F: 74.s. yBR
Lm: jól növekvő, b Oyster White (W) (fehér)
Op: halvány barna N: erőteljes, redőzött, pelyhes F: 74. s. yBr
Lm: jól növekvő, d. 1. GYT, 2ba p.Y (GY)
Op: nincs N: erőteljes F: 75. deep yBr Lm: erőteljes 2dc y Gray (GY) (szürke)
Op: olaj barna N: erőteljes
F: 73. d. yB (nem pH függő)
Lm: erőteljes, 2dc y Gray (GY) (szürke)
Op: olaj barna N: jó
F: 70.1. OY.
Lm: jól növekvő, b Oyster White (W) (fehér)
Op: nincs N: elég jó
F: 93. y Gray (szürke)
Lm: gyenge növekedésű Op: nincs
N: erőteljes, redőzött, pelyhes F: 68. s. OY.
Lm: erőteljes, d light Gray (GY) (halvány szürke)
Op: nincs
70. 1. OY.
jól növekvő, b Oyster White (W (fehér) nincs erőteljes, redőzött, pelyhes 74. s. yBr jól növekvő 2ba p. Yellow (Y) (fakó sárga) nincs erőteljes
67. brill. OY.
erőteljes, 2ba p. Ywllow (Y) (fakó sárga) nincs erőteljes
71. m. OY.
erőteljes, 2ba p. Yellow (Y) (sárga) nincs jó
70. 1. OY.
jól növekvő, Oyster White (W) (fehér) nincs elég jó
93. y Gray (szürke) gyenge növekedésű nincs erőteljes, redőzött, pelyhes
68. s. OY.
erőteljes, b Oyster White (W) (fehér) nincs
N: növekedés, F: fonák oldal, Lm: légmicélium, Op: oldható pigment.
Sejtfal vizsgálatok: az A-51568.1 teljes-sejt hidrolizátumát használva, bizonyos, di- 40 agnosztikai szempontból fontos cukrok jelenlétét M.P. Lexhevalier [.Identififation of aerobic Actinomycetes of clinical importance,
J. Lab.Clin. Med., 71,: 931-944 (1968)] módszerével határozzuk meg. 45
A teljes sejt hidrolizátumát használjuk a diamino-pimelinsav izomerek Becker és munkatársai [Ap'pl. Microbiol., 11: 421-423 (1964)] módszerével történő meghatározásához.
A vizsgálatok az alábbi eredményekre 50 vezettek: Kimutatott diagnosztikai jelentőségű cukrok: galaktóz, arabinóz és ribóz; 2,6-diamino-pimelinsav izomer: meso-izomer.
A teljes sejt cukor összetétele a fentiek szerint „A típusú, a sejtfal .IV típusú, a 55 fő sejtfal-komponensek ilyen kombinációja a Nocardia nemre utal; 1: M.P. Lechavalier [J.
Lab.Clin. Med., 71,: 931-944 (1968)].
A teljes sejt metanolizátumát vékonyréteg kromatograf iával vizsgálva D.E. Minnikin és munkatársainak eljárása szerint [„Differentiation of Mycobacterium, Nocardia, and related taxa by thin-layer chromatographic analysis of whole-organism methanolysates, J. Gén. Microbiol., 88,: 200-204 (1975)], rnikolsav metilésztert nem lehet kimutatni.
A fenti meghatározásokon kívül, az A-51568.1 kultúrát összehasonlítottuk 21 Nocardia orientalis referens törzs irodalomban közölt adataival is, valamint egyidejűleg összehasonlításokat végeztünk NRRL 2451, NRRL 2452 és ATCC 19795 törzsekkel. A tenyészetre vonatkozó), a morfológiai és a fiziológiai sajátosságok, összehasonlításét az 5. táblázatban foglaljuk össze.
-613
19Σ971
5. táblázat
Az A-51568.1 és a N.orientalis vonatkoztatási törzsek fiziológiai tulajdonságainak összehasonlítása
| tulajdonság | A-51568.1 | NRRL 2451 | NRRL 2452 | ATCC 19795 | N. orientalis |
| savrögzités | - | - | - | - | |
| léghifák | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| kataláz | + | 4 | 4 | 4 | 4 |
| sejtfal típus | IV | IV | IV | IV | IV |
| konidium | . + | 4 | 4 | 4 | 4 |
| adenin lebontás | - | - | - | - | - |
| kazein lebontás | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| DNS lebontás | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| hipoxantin lebontás | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| tirozin lebontás | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| karbamid lebontás | + | 4 | 4 | 4 | 4 |
| xantin lebontás | + | 4 | + | - | - |
| fragmentáció | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| zselatin elfolyósítás | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| Gram-féle festés | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| eszkulin hidrolízis | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| hippurát hidrolízis | 4 | 4- | 4 | 4 | 4 |
| fölözött tej hidrolízis | 4 | 4 | + | 4 | 4 |
| keményítő hidrolízis | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| melanoid pigmentáció | - | - | - | - | n.v. |
| morfológia: pókhálószerű | 4 | 4- | 4 | 4 | 4 |
| sótürés, NaCI% | 8 | 8 | 8 | 10 | n.v. |
| nitrát redukció | - | - | - | 4 | - |
| foszfatáz | + | + | 4 | 4 | n.v. |
| bacitracin rezisztencia | - | - | - | - | n.v. |
| lizozim rezisztencia | + | 4- | 4 | 4 | - |
| novobiocin rezisztencia | - | - | - | + | n.v. |
| penicillin G rezisztencia | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| rifampin rezisztencia | 4 | 4- | 4 | 4 | 4 |
| spóraszín | GY-W | w-y | W-Y | W-Y | W-Y |
| (szürke- | (fehér- | (fehér- | (fehér- | fehér- | |
| -fehér) | -sárga) | -sárga) | -sárga) | -sárga) | |
| spóra alak: gömbölyű- | |||||
| -hengeres | + | 4 | 4 | 4 | + |
| spórafelszín: sima | + | 4 | 4 | 4 | 4 |
| túlélés: 50 °C-on, 8 óra | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| hőmérséklet tartomány | 10-40 | 15-40 | 15-40 | 10-40 | 10-40 |
| .A típusú cukor- | |||||
| összetétel | 4 | 4- | + | 4 | 4 |
| ureáz termelés | 4 | + | 4 | 4 | 4 |
| szénforrás felhasználás | |||||
| azonossága | -t- | 4 | 4 | 4 | 4 |
| szerves sav felhasználás | |||||
| azonossága | 4 | + | 4 | 4 | 4 |
| vegetatív növekedési op- | |||||
| timum azonos táptalajon | 4 | 4 | 4 | + | n.v. |
n.v.=nem vizsgált összehasonlítottuk továbbá az A-51568.1 kultúrát az NRRL 2451, NRRL 2452 és ATCC 19795 törzsekkel, valamint 21 N. orientalis törzs irodalmi adataival a szénhidrátokból történő savtermelós szempontjából. Az eredményeket a 6. táblázatban foglaljuk össze.
-715
6. táblázat
Savtermelés szénhidrátokból
A-51568.1 NRRL 2451 NRRL 2452 ATCC 19795 N. orientalis szénhidrát
| adonit | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 1 (+) arabinóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| cellobióz | 4 | í | 4 | 4 | 4 |
| cellulóz | - | - | - | - | n.v. |
| dulcit | - | - | - | n.v. | |
| i-eritrin | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| fruktóz | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| d(+) galaktóz | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| glükóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| glicerin | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| i-inozit | 4 | 4 | + | 4 | 4 |
| inulin | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| d(+) laktóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| d(+) maltóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| d(-) mannit | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| d(+) mannóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| d(+) melecitóz | -t | V | e | - | - |
| d(-) melibióz | - | - | - | ||
| cí-metil-D-glükóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| d(+) rafinóz | - | - | - | - | - |
| 1 (+) ramnóz | - | - | - | 4 | - |
| szalicin | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| d(—) szorbit | - | - | - | - | - |
| szacharóz | 4 | 4 | 4 | 4 | n.v. |
| d(+) trehalóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| d(+) xilóz | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| kontrol | - | - | - | - | |
| n.v.=nem vizsgált |
Az A-51568.1 tenyésztési, morfológiai és fiziológiai tulajdonságait összehasonlítottuk az alábbi közleményekben leírt 14 különböző Nocardiával: R.E. Gordon és munkatársai, .Somé bits and pieces of the genus Nocardia:
N. carnen, N. vaccinii, N. transvalensis, N. orientalis, and N. aerocolonigenes, J. Gén. Microbiol., 109: 69-78 (1978) és S.J. Mishra és munkatársai, .Identification of Nocardia and Streptomycetes of medical importance, J.
Clin. Microbiol., 11 (6) 728-736 (1980). Ezen kívül egyidejű laboratóriumi összehasonlításokat végeztünk az A-51568.1 és az NRRL 2451, NRRL 2452, ATCC 19795 tenyészetek között.
A hasonlósági tényezőket az
S=[Ns++Ns']/[Ns++Ns_+Nd]x100 egyenlettel számoltuk ki, ahol Ns+=a pozitív hasonlóságok száma Ns-=a negatív hasonlóságok száma Nd -eltérések száma (különbözőségek)
Lásd: W.A. Kurilowícz és munkatársai, „Numerical taxonomy of Streptomycetes’, Polish Medical Publishers, Varsó, (1975).
A hasonlósági tényezők kiszámításához 60 használt tulajdonságok főleg fiziológiaiak. Az A-51568.1 kultúrát hasonlítottuk az összes többi törzshöz. A teljes azonosságnál a hasonlósági tényezők értéke: 100. A hasonlósági hányadosokat a 7. táblázatban tüntetjük fel.
7. táblázat
Az A-51568 kultúra és néhány viszonyítási Nocardia törzs közötti hasonlósági tényező
| tenyészet | hasonlósági tényező |
| A-51568.1 | 100 |
| NRRL 2451 | 95 |
| NRRL 2452 | 95 |
| ATCC 19795 | 86 |
| N. orientalis (21 | |
| törzs együttese) | 89 |
| N. aerocolonigenes | 76 |
| N. hirsuta | 68 |
| N. autotrophia | 65 |
| N. dassonvillei | 63 |
| N. madurea | 63 |
| N. brasliensis | 61 |
| N. caviae | 61 |
| N. transvalensis | 57 |
| N. cmarae | 53 |
| N. vaccinii | 50 |
| N. asteroldes | 47 |
| N. carnea | 47 |
| N. pelletieri | 39 |
| Az A-51568.1 | és a N. orientalis ATCC |
| 19795 tenyészetek | közötti hasonlóságokat és |
| különbözőségeket | a 8. táblázatban foglaltuk |
össze.
-817
8. táblázat
Az A-51568.1 és az ATCC 19795 tenyészetek közötti hasonlóságok és különbözőségek bán mutatjuk be. A táblázatban a minimális gátlás! koncentrációkat tüntetjük fel.
| hasonlóságok | különbözőségek | |
| szénhidrátból történő | néhány tá | ptalajon a |
| savképzés | tenyészet | jellemzői: |
| 1 é g h i f ά k | légmícéliumok színe, | |
| fonák Gidai színe, | ||
| kataláz termelés | oldható | pigmentek, |
| IV. típusú sejtfal | xantin | lebontás |
| konidium megléte | NaCI tűrés | |
| tenyészet jellemzői: | nitrát | redukció |
| kazein, DNS, hipoxantin | novobiocin | rezisz- |
| és tirozin lebontás | tencia |
9. táblázat
Az A-51568 A-faktor aktivitása különféle baktériumokkal szemben baktérium
IC minimális gátlási konc.
(pg/ml) micélium fragmentáltság zselatin elfolyósítás eszkulin, hippurát, fölözött tej és keményítő hidrolízis adeninbontás hiánya melonoid pigmentek hiánya foszfatáz termelés lizozin, penicillin és rifampin rezisztencia bacitracin érzékenység spóraalak spórafelszín festódésí reakció teljes sejt hidrolizátum „A típusú cukorösszetétele túlélés 50 °C-on, 8 óra alatt hőmérsékleti tartomány (10-40 °C) ureáz termelés szerves vegyületek hasznosítása vegetatív növekedés CSM táptalajon
Az A-51568.1 kultúrát elhelyeztük a Northern Régiónál Center, U.S. Department of Agriculture, Agricultural Reserch Service törzsgyújteményébe (Peoria, Illinois 61604) és az NRRL 15232 szám alatt elérhető.
Gyógyászati szempontból alkalmazhatók az A-51568 A- és B-faktorok nem toxikus sói is. A .gyógyászati szempontból alkalmazható sók kifejezés alatt az olyan sókat értjük, melyek esetében a vegyületnek, mint egésznek a melegvérű állatokkal szembeni toxicitása nem haladja meg a nem só formájában levő illető vegyületek toxlcitását. Az A-51568 A- ill. B-faktor megfelelő sói a szervetlen és szerves savakkal - például kénsav, foszforsav, sósav, ecetsav, borostyánkősav, citromsav, tejsav, maleinsav és fumársav - történő reakció során keletkező savaddíciós sók, illetve az antibiotikumok karboxilcsoportjának erős bázisokkal - például nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, nátrium-karbonát, kálium-karbonát, ammónium-hidroxid, dietanol-amin, stb. - törtő reakciója során keletkezett sók.
Az A-51568 A-faktor különböző baktériumokkal szembeni, agar-hígításos módszerrel mért antibakteriálís aktivitását a 9. tábl&zatStaphylococcus aureus
3055
X400 16 V138
V140 V102
Staphylococcus epidermidis 20. 222
270
285
219
269
Streptococcus pyogenes C203
ATCC 10389
Streptococcus sp. B csoport
Streptococcus sp. D csoport
X6S
9960
2041
8043
Streptococcus sp. D csoport 12253F
Mx161 45 2058
Streptococcus pneumoniae Park I B1-438
Haemophilus parainfíuenzae
7901
7996
HaemophiHs influenzáé
0.5
0.5
0.5
0.5
0.125
0.5
C.L. 32
Mx366 32
Mx371 64
64
Bond 64
16836 128 • 4842 32
312 128
Az A-51568 A- és B-faktor aerob baktériumokkal szembeni in vitro aktivitását agartr
-919
-higításos módszerrel határozzuk meg. A 24 órás leolvasásnál kapott eredményeket a 10. táblázatban folglaljuk össze.
10. táblázat
Az A-51568 A- és B-faktor aktivitása aerob baktériumokkal szemben mikroorganizmus minimális gátlási konc.
G>g/mi)
A B
Staphylococcus aureus 3055 (>'.1.1) 1 2
Staphylococcus aureus V41 1 2
Staphylococcus
| aureus X400 | 2 | 2 |
| Staphylococcus aureus S13E | 1 | 2 |
| Staphylococcus epidermidis EPI1 | 2 | 2 |
| Staphylococcus epidermidis EPI2 | 1 | |
| Staphylococcus epidermidis 222 | 2 | |
| Streptococcus pyogenes C203 | 1 | 0.5 |
| Streptococcus pneumoniae Park I | 0.5 | 0.6 |
| Streptococcus sp. D csoport X66 | 1 | 1 |
| Streptococcus sp. D csoport 9960 | 4 | |
| Streptococcus sp. D csoport 2041 | 2 | |
| Haemophilis influenzáé (érzékeny) Holt | 64 | |
| Haemophilis influenzáé (ellenálló) R252 | 128 | |
| Haemophilis influenzáé (érzékeny) C.L. | 128 | |
| Haemophius influenzáé (ellenálló) 76 | 64 | |
| Escherichia coli N10 | >128 | >128 |
| Escherichia coli EC14 | >128 | >128 |
| Escherichia coli TEM | 128 | >123 |
| Klebsiella pneumoniae X26 | >128 | >128 |
| Klebsiella pneumoniae KAE | >128 | >128 |
| Klebsiella pneumoniae X6B | - | >128 |
| Megvizsgáltuk az A-51568 | A- és | B-fak- |
| torokat anaerob baktériumokkal szemben. | ||
| Amint az agar-higításos módszerrel | kapott | |
| minimális gátlási koncentráció | értékei | bízo- |
| nyitják számos anaerob baktériumokkal | szem- |
ben aktívak. Az eredményeket a 11. táblázatban mutatjuk be.
11. táblázat
Az A-51568 A- és B-faktor aktivitása anaerob baktériumokkal szemben
Mikroorganizmus Minimális gátlási konc.
ÍMS/ml)
A B
| Clostridium difficile 2994 | 2 1 | |
| Clostridium perfringens 81 | 1 | 1 |
| Clostridium stepicum 1128 | 1 | 1 |
| Eubacterium aerofaciens 1235 | 2 | 1 |
| feptococcus | ||
| ősaccharolyticus 1302 | 16 | 1 |
| Feptococcus prevoti 1281 | 32 | .( |
| F eptost r ep tococ :cus | ||
| rnaerobius 1428 | 1 | 2 |
| Peptostreptococcus | ||
| intermedius 1264 | 1 | 1 |
| F-ropionibacterium acnes 79 | 1 | 2 |
| Bacteroídes fragilis 111 | 32 | 32 |
| Bacteroides fragilis 1877 | 32 | 16 |
| Bacteroídes fragilis 1936B | 32 | 32 |
| Bacteroides | ||
| tlietaiotaomicron 1438 | 32 | 32 |
| Bacteroides melaninoge- | ||
| nicus 1856/28 | >128 | >128 |
| Bacteroides melaninoge- | ||
| rlcus 2736 | 16 | >128 |
| Bacteroides vulgatis 1211 | 32 | 4 |
| Bacteroides corrodens 1874 | 32 | 32 |
| F jsobacterium | ||
| symbiosum 1470 | 2 | 32 |
| Fusobacterium | ||
| necropborúm 6054A | 2 | 128 |
| Amint az agar higításos | vizsgálatok | bi- |
| zc nyitják az A-51568 A-faktor | számos Clost- |
ridium difficile törzzsel szemben is aktiv. Ezeket az eredményeket a 12. táblázatban foglaljuk össze.
táblázat
Clostridium difficile minimális gátlási konc.
(iug/ml)
A
8484 2 6830 2 26 34 2 78 2 A-194 2 A-195 2 A-196 2 A-279 2 A-280 2 A-281 2 WAL-2112 2 WAL-3657 2 WAL-4268 2 107B 2 111 F 2 1153 2 3424-5B 2 3816 2 39E0D 2
-1021
Az A-51568 A-, ill. B-faktor in vivő antimikrobiáiis aktivitást mutat a kísérletileg előidézett bakteriális fertőzésekkel szemben. A vizsgálandó vegyületet két dózisban szubkután bejuttatva a fertőzött egerekbe, az aktivitást ED» értékekben mértük [EDso=mg/kg-ban kifejezett hatékony dózis, amely a vizsgálati állatok 50%-át megvédte. Warren Wick és munkatársai, J. Bacteriol. 81, 233-235 (1961)]. Az A-51568 A- ill. B-faktorra kapott
| ED50 értékek (mg/kgx2 egységben): | ||
| A | B | |
| Staph. aureus 3055 | 1.79 | 2.5 |
| Strep. pyogenes C203 | 3.03 | 7.94 |
| Strep. pneumorlae Park I | 2.71 | 2.5 |
A találmány szerint előállított vegyületek alkalmasak ember vagy állatok fertőzéses megbetegedésének kezelésére, az A-51568 A-faktor, A-51568 B-faktor vagy ezek gyógyászati szempontból alkalmas sójának antibiotikus hatású dózisát - 25-2000 mg - bejuttatva a szervezetbe.
Fertőzött emberek kezelésénél az antibiotikumot parenterálisan, tehát i.m. injekcióval vagy i.v. infúzióval juttatjuk be. Az injekcióhoz az antibiotikumot kellő koncentrációban hígítjuk valamilyen gyógyászati szempontból alkalmazható közegben, például .Water-for-Injection -bán, 0,9%-os konyhasó oldatban, 5%-os dextróz oldatban, Ringer-oldatban, vagy más általánosan használt oldószerben. I.v. infúzióhoz az antibiotikumot vagy sóját fiziológiás oldatban vagy híg tápoldatban oldjuk megfelelő koncentrációban, például 5-10%-ban és így infuzáljuk lassan. Alternatív eljárásként az antibiotikumot valamilyen vivőanyaghoz kötve is bejuttathatjuk.
Az antibiotikum vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója dózis egységet tartalmazó készítményként leolvasztott ampullákban, steril, légmentesen lezárt gumidugós üvegekben vagy műanyag tasakokban forgalmazható. Az ilyen egységnyi dózisú készítmények antioxidánsokat, stabilizáló anyagokat, diszpergáló anyagokat, puffereket stb. tartalmazhatnak. Egységnyi dózisú kiszerelés lehet például a 100 mg A-51568 A- vagy B-faktort vagy ezek nem toxikus sóját tartalmazó gimidugós (butil-gumi) üveg vagy 250 mg hatóanyagot tartalmazó steril, leolvasztott ampulla, I.v. infúzióhoz az egységnyi dózisú kiszerelés 5 g A-51568 A- vagy B-faktort vagy gyógyászati szempontból alkalmas sóját tartalmazza műanyag tasakban.
Amennyiben az A-51568 A- és B-faktort antibakteriális szerként használjuk, beadható szájon át vagy parenterálisan. Amint az megszokott, az A-51568 A- és B-faktort általában egy gyógyászati szempontból alkalmazható vivő- vagy hígítóanyaggal adjuk be. Az antibiotikum dózist különböző tényezők határozzák meg, mint például az adott fertőzés természete és súlyossága. Az alkalmazandó dó12 zisegységet és nagyságot a minimális gátlási koncentráció, az ED» érték, valamint a kezelendő szervezettől és a fertőző mikroorganizmustól eredő tényezők figyelembevételével állapítjuk meg.
Az A-51568 A-, illetve B-faktor gátolja többek között a Staphylococcusok, Streptococcusok és Propionibacterium acnes növekedését és ezért ezek az antibiotikumok alkalmasak pédául a szőrtüszőgyulladás kezelésére. A tisztított A-51568 A-, illetve B-faktor gyógyászati szempontból alkalmazható oldószerben, például izopropil-alkoholban forgalmazható a bőr kezelésére. Ezek az antibiotikum oldatok 1-15%-osak lehetnek. A bőr kezelésére szolgáló antibiotikum készítmény lehet ezen kívül krém vagy borogató víz formájában is.
Az A-51568 A-, illetve B-faktor a pszeudomembrános vastagbélgyulladást okozó Clostridium difficile növekedését is gátolja. A pszeudomembrános bélhurut kezelésére alkalmazhatjuk tehát a szájon át beadott A-51568 A-, illetve B-faktort vagy gyógyászati szempontból alkalmazható, nem toxikus sóját. Az antibiotikum beadható ilyen célból zselatin kapszulában vagy folyékony szuszpenzióként.
Az A-51568 A- és B-faktort az eddig még le nem irt Nocardia orientalis NRRL 15232 mikroorganizmus vagy annak A-51568 antibiotikumot termelő mutánsának vagy variánsának tenyésztésével állítjuk elő, asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat, valamint szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, aerob fermentációs körülmények között addig végezve a fermentációt, amíg jelentős szintű antibiotikus aktivitás nem jelentkezik. Az antibiotikus aktivitás legnagyobb része a fermentlében található, míg kisebb mennyisége a micéliumhoz kötődik. Az antibiotikumot legkönnyebben a micéliumnak szűréssel történő eltávolítása után, a szűrt fermentléből nyerjük ki, előnyösen oszlopkromatografia alkalmazáséval.
Alkalmas adszorbensek: a szén, az anion- és kation-cserélő gyanták, a poliamid, a karboxi-emetil-ceilulózok, a nagy-porozitású sztlrol és divinil-benzol kopolimerek, például a Diaion HP-20, az Amberlite XAD gyanták, a keresztkötésű dextránnal készült hidrofil, oldhatatlan molekulasziták, mint amilyen a Duolite gyanták és a TSK gélek. A Diaion gyantákat a Mitsubishi Chemical Industries, Limited, (Tokió, Japán) készíti, az Amberlite XAD gyantákat Rohm and Haas (Philadelphia, Pennsylvania). A Doulite gyanták a Diamond Shamrock (Redwood City, California) készítményei. A Sephadex gyantákat a Pharmacia Fine Chemicals AB (Uppsala, Svédország) készíti. A TSK gélek az E. Merck, (Damstadt, NSZK) és a Bio-Rad (2200 Wright Ave., Richmond, California, 94804) cégektől szerezhetők be.
Az A-51568 A- és B-faktor termeléséhez számos különféle táptalaj használható. A gaz-1123 daságos termelés, az optimális kinyerés és a termék könnyű elválasztása szempontjából azonban bizonyos táptalajok előnyben részesülnek. Ezek a táptalajok asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat, valamint szervetlen sókat tartalmaznak. Alkalmas szénforrás a burgonya dextrin, melasz, glükóz, szacharóz, laktóz, maltóz és keményítő. A szénforrás optimális koncentrációja: 2-5%.
Előnyös nitrogénforrás a nátrium-glutamát, hús pepton, nátrium-nitrát, ammónium-nitrát, ammónium-szulfát, szójapor és élesztő.
A mikroorganizmus növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges nélkülözhetetlen nyomelemek a táptalaj más alkotórészeiben mint szennyezések megfelelő mennyiségben megtalálhatók. Kedvező hatáső lehet azonban, ha a táptalajhoz olyan oldható szervetlen sókat adunk, melyek nátrium, kálium, magnézium, kalcium, ammónium, klorid, karbonát, foszfát, szulfát, nitrát, stb. ionokat szolgáltatnak.
Nagy méretű fermentálásoknál, ha habzás lép fel, szükséges lehet kevés mennyiségű (0,2 ml/l) habzásgátló, például propilén-glikol adagolása.
Noha kis mennyiségű A-51568 A- és B-faktort rázott lombikos tenyészetekből is kaphatunk, az antibiotikum keverék nagyobb mennyiségének előállítására fermentációs tartályokban végzett süllyesztett, aerob fermentációt használunk. Nagy tartályban történő fermentálásnál előnyös a vegetatív inokulum használata. A vegetatív inokulumok elkészítéséhez kis térfogatú táptalajt spórával vagy micélium töredékkel oltunk be, hogy friss, aktívan növekvő tenyészethez jussunk. A vegetatív tenyészetet aztán átvisszük a nagy tartályba, ahol megfelelő inkubációs idő alatt az A-51568 antibiotikum keverék optimális hozammal termelődik.
Az inokulum elkészítésénél ezen kívül eljárhatunk úgy Is, hogy a táptalajt a vizes spóraszuszpenzió helyett liofilizált pellettel oltjuk be. A IiofiIizálásra szánt spóraszuszpenzió elkészítése hasonló a vizes spóraszuszpenzióéhoz, azzal a különbséggel, hogy steril borjúszérumot használunk a steril desztillált víz helyett.
Az NRRL 15232 mikroorganizmus széles - 25-37 °C - hőmérsékleti tartományban tenyészthető. Az A-51568 antibiotikum keverék optimális temelése 32-34 °C hőmérsékletnél történi k.
Amint az az aerob süllyesztett tenyészeteknél szokásos, steril levegőt poriasztunk keresztül a tenyészleven. A tartályban történő termelésnél a mikroorganizmus kellő növekedéséhez szükséges levegő percenkénti térfogata a tenyészlé térfogatának 0,1-0,25-szöröse a 100-300 percenkénti fordulatszámmal végzett keverés mellett. 100 liter tenyészlevet tartalmazó 165 literes tartálynál, percenkénti 200 fordulatszámú keverés mellett az átáramoltatott levegő optimális mennyisége a tenyészlé térfogatának 0,15-szőröse percenként.
Az antibiotikus aktivitás rendszerint 24 óra elteltével jelenik meg és legalább 168 órás fermentációs időn keresztül megmarad. Az antibiotikum termelés csúcsa a 90. és 114. óra közé esik.
Az antibiotikum keverék termelődésének fokozására p-hidroxi-fenll-gliclnt adhatunk a tenyészethez 5.10-3 M/ml koncentrációban. Egyik kísérletünknél p-hidroxi-fenil-giicin hozzáadásával a termelés 64%-kal növekedett.
Befolyásolható az antibiotikum termelés a foszfát koncentrációval is. Egyik kísérletünkben a foszfát koncentrációnak már csökkentése is 20%-os termeléscsökkenést jelentett.
Az antibiotikus aktivitás a lecentrifugált fermentlé felülúszójában van. Mintavételnél a fermentlevet 15 percig 1000 g értéknél centrifugáljuk és az elválasztott felülúszót biológiailag értékeljük agar lemezen, Micrococcus iLteus ATCC 9341 mikroorganizmust használva.
Az A-51568 antibiotikum keverék termelődését a fermentáció alatt agar vagy diffúziós módszerrel - Bacillus subtilis ATCC 6633 törzset használva -, vagy turbidimetriás eljárással - Staphylococcus aureus ATCC 9114 m kroorganizmust használva - követjük nyomon.
A találmány tárgya eljárás az <1) általános képletű antibiotikumok előállítására Nocardia orientalis NRRL 15232 mikroorganizmus vagy annak A-51568 antibiotikumot termelő mutánsának vagy variánsának tenyészetével asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat, valamint szervetlen sókat tartalmazó táptalajén süllyeszetett, aerob fermentációs körülmények között.
A találmány teljesebb illusztrálása céljából az alábbi, példákat adjuk meg.
7. példa
A Nocardia orientalis NRRL 15232 ferde agar tenyészetéhez a következő összeállítású táptalajt használjuk:
előfölözött zabliszt 60.0 g élesztő 2.5 g
K2HPO4 1.0 g
Czapek-féle sóoldat 5.0 ml agar 25.0 g deionlzalt vízzel 1,0 literre feltöltve.
A Czapek-féle sóoldat az alábbi összetételű:
KCI 10.0 g
MgSO4-7H2O 10.0 g
FeSO4'7H2O 0.2 g ionmentes vízzel 100 ml-re feltöltve.
-1225
A kémhatást nátrium-hidroxid vizes oldatával pH 7,3-ra állítjuk. Sterilizálás után a kémhatás: pH 6,7.
A ferde agart beoltjuk a Nocardia orientalis NRRL 15232 spóráival és két napon kérészül inkubáljuk 30 °C hőmérsékleten. A kifejlődött tenyészetre steril desztillált vizet öntünk, és teril eszközzel ebben elszuszpendáljuk a spórákat és a micéliumot. 1 ml spóraszuszpenzióval oltunk be 50 ml alábbi öszszetételü táptalajt a vegetatív tenyészethez:
keményítő dextrin 30.0 g melasz 20.0 g
Bacto-pepton (Difco) 7.0 g
L-tirozin 1.0 g ionmentes vízzel 1,0 literre töltjük fel.
Az oldat kémhatása pH 5,5, amit nátrium-hidroxid vizes oldatával pH 7,0-re állítunk. Sterilizálás után a kémhatás: pH 6,1.
A vegetatív inokulumot 250 ml-es, széles szájú Erlenmeyer lombikokban 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk, 48 órán keresztül rázatva egy 2,5 cm kitérésű, 250 percenkénti fordulatszámú razógépen. Ezt a tenyészetet használjuk a kis térfogatú fermentorok oltásához (az inokulum a táptalaj térfogatának 0,8%-a), vagy tovább oltjuk nagyobb térfogatú micélium előállításéhoz.
100 liter alábbi összetételű láptalajt 0,8% (800 ml) fenti vegetatív inokolummal oltunk be. A termelésre szánt tenyészet táptalajának összetétele:
| pol i p ropi lén-g I i - | |
| kol (2000) | 0.2 g |
| burgonya dextrin | 30.0 g |
| melasz | 20.0 g |
| Bacto-pepton (Difco) | 7.0 g |
| L-tirozin | 1.0 g |
| ionmentes vízzel 100 | literre töltjük fel. |
| Az oldat kémhatása | pH 5,2, amit 5 n |
| nátrium-hidroxid oldattal | pH 7,1-re állítunk |
| be. A táptalajt 121 °C | hőmérsékleten, 1- |
-1,3 bar nyomáson sterilezzük 45 percen keresztül. Sterilizálás után az oldat kémhatása: pH 6,2.
A beoltott táptalajt 165 literes fermentorban fermentáljuk 30 °C hőmérsékleten 114 órán keresztül. A percenként átbuborékoltatott levegő mennyisége a fermentlé térfogatának 0,15-szőröse. A keverést a szokásos keverőberendezéssel végezzük percenként 200-as fordulatszámmal.
Az antibiotikus aktivitás a fermentlé felülúszójában található. Az antibiotikum menynyiségének mérésére a fermentlé mintákat 1000 g-én lecentrifugáljuk, és a felülúszót vizsgáljuk. A felülúszót pH 6,0 kémhatású foszfátpufferrel hígítjuk és mikrobiológiailag mérjük az aktivitást agar lemezen, Micrococcus luteus ATCC 9341 mikroorganizmust használva.
2. példa
Az alábbiakban ismertetjük az A-51568 antibiotikum keverék kinyerését.
liter fermentléhez, mely az A- és B-faktort 95:5 arányban tartalmazza, szűrési segédanyagot (Hyflo Supercel diatómaföld, Johns-Manville Corp.) adunk, és a keveréket leszűrjük. A 2,7 I térfogatú, pH 7,8 kémhatású szűrletet Diaion HP-20 gyantával (gyöngy formájú, nagyporozitású, sztirol-divinil-benzol kopolimer, Mitsubishi Chemical Industries, Ltd., Tokió, Japán) töltött, 3x25 cm-es kromatográfiás oszlopra visszük. Az effluenst eldobjuk, és az oszlopot 1 liter vízzel, majd 500 ml 25%-os metanollal mossuk. Az A-51568 antibiotikum keveréket kétszer 500 ml 50%-os vizes metanollal eluáljuk az oszlopról. Az Aés B-faktor azonos módon adszorbeálódik a HP-20 gyantán és azonos körülmények között is eluálódik róla, ezért a faktorok nem választhatók el ennél a lépésnél. Az eluciós faktorok antibiotikus aktivitását B. Subtilissel vizsgáljuk. A legaktívabb frakciókat kis térfogatra koncentráljuk és liofilizáljuk. 905 mg nyers A-51568 antibiotikum keveréket nyerünk, melyben az A- és B-faktorok aránya 95:5
3. példa
Az alábbiakban az A-51568 antibiotikum keverék tisztítását írjuk le.
A 2. példában leírtak szerint nyert 905 mg nyers A-51568 antibiotikum keveréket 50 ml vízben oldjuk és Sephadex CM-25 (NH** ciklusú) (Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Svédország) gyantával töltött 1,7x x44 cm-es kromatográfiás oszlopra visszük. Az effluenst eldobjuk, és az oszlopot 250 ml vízzel mossuk. Az oszlopot konvex grádiensű ammónium-hidrogén-karbonát oldattal (víz γ 1 M NH4HCO3; 100 ml-es keverőkamra) eluáljuk. 25 ml-es frakciókat gyűjtünk és az antibiotikus aktivitásukat B. subtilisszel vizsgáljuk.
Az aktív frakciókat összeöntjük. Minthogy a Sephadex CM-25 gyantán nem egyformán adszorbeálódik és eluálódik az A- és B-faktor, az A-faktorban gazdag frakciók nem azonosak a B-faktorban gazdag frakciókkal. Minthogy a B-faktor az A-faktorhoz képest lényegesen kisebb mennyiségben van a keverékben, a B-faktorban gazdag frakciók viszonylag alacsony antibiotikus aktivitást mutatnak az A-faktorban gazdag frakciókhoz képest. Az egyesített frakciók ezért viszonylag kevés B-faktort tartalmaznak. A termék sótalanítása céljából az összegyűjtött frakciókat 1,7x10 cm méretű, vízzel ekvilibrált
-1327
Diaion HP-20 oszlopra visszük, az oszlopot 200 ml vízzel mossuk és 100 ml 50%-os vizes metanollal eluálunk. A metanolos eluátumot szárazra pároljuk, a bepárlási maradókot kevés vízben oldjuk és 0,1 n vizes sósavval megsavanyítjuk. A savas oldatot llof ί I i zál j u k. 25 mg tisztított A-51568 A-faktort nyerünk, melynek fizikai állandói megegyeznek a leírás bevezető részében megadottakkal.
A B-faktor kinyeréséhez a- 3. példában leírtakat végezzük el, de a B. subtilisszel végzett mikrobiológiai vizsgálatok helyett nagynyomású föl yadékkromatog ráfiét (HPLC) használunk a frakciók vizsgálatára. Erre azért van szükség, mert a mikrobiológiai módszerrel nem tudjuk megkülönböztetni az A- és B-faktort. A HPLC vizsgálatokkal az Aés B-faktort tartalmazó frakciók azonosíthatók és egymástól elválasztva gyűjthetők öszsze. A faktorok szerint egyesített frakciókat az előzőekben leírtak szerint sótalanítjuk, és így egy A-faktorban és egy B-faktorban gazdag termékhez jutunk.
4. példa
Az A-51568 A- és B-faktor keverékének teljes fermentléből történő kinyeréséhez, a fermentlevet Hyflo Supercelen szűrjük keresztül. Miután a szürlet kémhatását 5 n sósavval pH 6,0-6,5-re állítottuk, Ionac X-236 gyantát (H+ formában) adunk hozzá (100 liter fermentléhez 4 liter gyantát), és a keveréket kevertetjük miközben az antibiotikum adszorbeálódik a gyantán. A felülüszót eldobjuk, és a gyantát vízzel mossuk (a gyanta térfogatának tízszeresével). A mosóvizet eldobjuk, és a gyantát oszlopra töltjük. Az oszlopot 0,1 n ammónium-hidroxidal eluáljuk (az oszloptérfogat ötszörösével). A 4 literes frakciókat rögtön semlegesítjük 5 n sósavval. Az antibiotikus aktivitást B.sublitesszel és HPLC-vel határozzuk meg. Az A-51568 A- és B-faktorok keverékét tartalmazó frakciókat összeöntjük, és Diaion HP-20 oszlopon sótalanitjuk. Az effluenst eldobjuk, és a gyantát 0,1% H3PO4-et tartalmazó 5%-os izopropilalkohollal eluáljuk. 500 ml-es frakciókat gyűjtünk, és vizsgáljuk ezek antibiotikus aktivitását. Az aktív frakciókat egyesítjük, töményítjük és liofilizáljuk. A nyert nyers termék 95% A-51568 A-faktort és 5% A-51568 B-faktort tartalmaz.
A termék további tisztításához és az Aés B-faktor egyidejű elválasztásához az Aés B-faktorok nyers keverékét vízben oldjuk és CM-Sephadex C-25 oszlopra visszük. Az oszlopot víz } 0,25 n ammónium-hidro-karbonát lineáris gradienssel eluáljuk. A frakciókat HPLC-vel vizsgáljuk, és az A-, illetve B-faktort tartalmazó frakciókat külön-külön egyesítjük.
Az egyesített frakciókat sótalanitás céljából Diaion HP-20 gyanta oszlopokra visszük és az oszlopokat 0,1% H3PO4-et tartalmazó 5%-os izopropilalkohollal eluáljuk. A megfelelő frakciókat a HPLC vizsgálatoknak megfelelően egyesítjük. A két oldatot töményítjük és liofilizáljuk, A-51568 A-faktort, illetve B-faktort nyerve.
5. példa
Az 1. példában leírt eljárást követjük vegetatív inokulum előállítására, azzal az eltéréssel, hogy a vegetatív inokulum táptalajénak kémhatását sterilizálás után pH=6,6-ra állítjuk, és az inkub&lást 46 órán át végezzük. Az előállított 250 ml-es Erlenmeyer-lombikokban levő tenyészetek 10-10 ml-ével kétszer 400 ml, fentiekkel azonos összetételű 20 táptalajt inokulálunk. Ezeket a táptalajokat 2000 ml-es, szélesnyakú Erlenmeyer-lombikokban 30 °C hőmérsékleten, 51 órán át rázatjuk 2,5 cm kitérésű, 250 percenkénti fordulatszámú rázógépen.
25 110 I alábbi összetételű táptalajt 0,8% (800 ml) fentiekben előállított vegetatív inokulummal oltunk be. A termelésre szánt tenyészet táptalajának összetétele:
SÁG 471 (Union
| Carbide gyártmány) | 0.2 g/l |
| polipropilén-gli- | |
| kol (2000) | 0.1 g/l |
| burgonya-dextrin | 30.0 g/l |
| melasz | 20.0 g/l |
| Bacto-pepton (Difco) | 7.0 g/l |
| L-tirozin | 1.0 g/l |
| ionmentes vízzel 110 l-re | töltjük fel. |
| Az oldat kémhatása 5,5, | amit 5 n nátrí- |
| um-hidroxid-oldattal pH-7,0-ra állítunk be. A | |
| táptalajt 121 °C hőmérsékleten, 1-1,3 bar |
nyomáson sterilezünk 45 percen keresztül. Sterilizálás után az oldat kémhatása: pH=6,2
A beoltott táptalajt 165 l-es fermentor45 bán fermentáljuk 30 °C hőmérsékleten, 114 órán keresztül. A percenként átbuborékoltatoit levegő mennyisége a fermentlé térfogatának 0,125-szöröse. A keverést a szokásos keverőberendezéssel végezzük, percenkénti
5q 250-es fordulatszámmal.
Az antibiotikus aktivitás a fermentlé felülúszójában található. Az antibiotikum menynyiségónek mérésére a fermentlé mintákat 1000 g-n lecentrifugáljuk, és a leöntött fe55 lülúszót vizsgáljuk. A felülüszót pH=6,0 kémharású foszfát-pufferrel hígítjuk, és mikrobiológiai lag mérjük az aktivitást agar-lemezen, Micrococcus luteus ATCC 9341 mikroorganizmust használva.
A fenti fermentációban nyert kétszer 110 I teljes fermentlevet (össztérfogata kb. 230 I) Hyflo-Supercel kovaföld szóróanyaggal keverünk össze, és az elegyet 92 cm-es Sperry keretes szűrőn szűrjük. A 185 I szűrlet kémhatását 5 n sósav hozzáadásával
-1429 ρΗ=6,0-6,5-re állítjuk. Az A-51568 faktorokat Ionac X-236 gyantán (H+) adszorbeáljuk (100 I szürletre 4 I gyantát alkalmazunk), majd az elegyet az adszorpció elősegítésére keverjük. A felülúszót elöntjük és a gyantát 10 gyanta-térfogat, azaz kb. 40 I vízzel mossuk. A mosófolyadékot elöntjük, majd az X-236 gyantát oszlopra töltjük és 5 oszlop-térfogat 0,1 n ammónium-hidroxiddal eluáljuk. 4 l-es frakciókat gyűjtünk, és az antibiotikum-aktivitást vékonyrétegen, biológiai aktivitás-méréssel és HPLC-vizsgálattal állapítjuk meg. A két A-51568 frakciót tartalmazó eluátum kémhatását 5 n sósav adagolásával pH=7,0-ra állítjuk, majd egyesítjük, és az elegy sótalanítása céljából Diaion HP-20 gyantával töltött oszlopra visszük fel. (5 I gyanta, az oszlop mérete 10x108 cm) Az antibiotikum aktivitását az előzőekben leírt biológiai módszerrel határoztuk meg. Az oszlopról lejövő oldatot elöntjük, majd a gyantát 5% izopropil-al koholt és 0,1% foszforsavat tartalmazó, vizes oldattal eluáljuk. 500 ml-es frakciókat szedünk, és az antibiotikum jelenlétét biológiai módszerrel és HPLC-analízissel állapítjuk meg. Az aktív frakciókat egyesítjük, koncentráljuk és líofilizáljuk. A kapott nyers anyag 95% A-51568 A- és 5% A-51568 B-antibiotikumot tartalmaz.
A termék tisztítása és az A és B frakció elválasztása elősegítésére az előzőekben nyert 14,7 g liofilizátumot 200 ml ionmentesített vízben vesszük fel, majd CM-Sephadex C-25 gyantával töltött 10x108 cm méretű üvegoszlopra töltjük (NH<+ ciklus, 5 I gyanta, Pharmacia Fine Chemicals Ab, Uppsala, Svédország). Az oszlopot víz és 0,25 n vizes ammónium-hidrogén-karbonát-oldat lineáris gradiensével eluáljuk. 1 l-es frakciókat gyűjtünk, azokat 5 n sósavval semlegesítjük, majd az antibiotikum jelenlétét vékonyrétegen és biológiai méréssel határozzuk meg. Mindegyik frakcióból egy-egy mintát HPLC-módszerrel is vizsgálunk. Az A-51568 Aés/vagy A-51568 B-antibiotikumokat tartalmazó frakciókat két részre osztjuk, az antibiotikumok aránya szerint. Az 1-es számú frakció a 10 és 11. frakcióból áll, melyek az A10 és B-faktort hozzávetőlegesen 1:1 arányban tartalmazzák. A 2-es számú frakciót a 12. és 13. 14. 15. és 16. frakcióból képezzük, ez túlnyomórészt az A-faktort tartalmazza. Az így előállított frakciót a fentiek szerint HP-20 gyantán sómentesitjük. Az 1-es számú frakciót 50 ml HP-20 gyantával töltött 0,63 cm-es oszlopra, míg a 2-es számú frakciót 500 ml HP-20 gyantával töltött 3,8x x61 cm-es oszlopra visszük fel.
A két oszlopot 5% izopropil-alkohol és 0,1% foszforsav vizes oldatával eluáljuk. 10 ml-es frakciókat szedünk, és biológiai módszerrel és HPLC-módszerrel vizsgáljuk. Az aktív frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk.
Az előzőekben előállított, 1-es számú frakcióból nyert liofilizált és sómentesített antibiotikum-frakciókat HPLC segítségével kromatografáljuk, és így tiszta A-51563 A- és A-51568 B-antibiotikumokat nyerünk, melyeknek fizikai állandói megegyeznek a leírás bevezető részében megadottal.
Claims (4)
1. Eljárás az (1) általános képletű Ίη - ahol n jelentése 1 (A-51568 A-faktor) vagy
2 (A-51568 B-faktor) - antibiotikumok előállítására, azzal jellemezve, hogy Nocardla orientalis NRRL 15232 mikroorganizmust vagy annak (1) általános képletű antibiotikumot 35 termelő mutánsát vagy variánsát tenyésztjük asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást, valamint szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, aerob fermentációs körülmények között, és kívánt esetben a keletke40 zett antibiotikumot elválasztjuk a fermentléból. (Elsőbbsége: 1983. 12. 19.)
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az A-51568 A-faktort a fermentléből kinyerjük. (Elsőbbsége: 1982. 12.
45 20.)
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az A-51568 B-faktort a fermentléből kinyerjük. (Elsőbbsége: 1983. 12.
19.)
4 db rajz
A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója
88.570.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US45088082A | 1982-12-20 | 1982-12-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU192971B true HU192971B (en) | 1987-08-28 |
Family
ID=23789893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU834327A HU192971B (en) | 1982-12-20 | 1983-12-19 | Process for preparing antibiotic factors a-51568 a and b |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0112184B1 (hu) |
| JP (2) | JPS59118798A (hu) |
| KR (1) | KR860001497B1 (hu) |
| AT (1) | ATE42571T1 (hu) |
| AU (1) | AU563466B2 (hu) |
| CA (1) | CA1214413A (hu) |
| DD (1) | DD210709A1 (hu) |
| DE (1) | DE3379735D1 (hu) |
| DK (1) | DK167688B1 (hu) |
| EG (1) | EG16163A (hu) |
| ES (1) | ES8504935A1 (hu) |
| FI (1) | FI834594A (hu) |
| GB (1) | GB2132207B (hu) |
| GR (1) | GR78784B (hu) |
| HK (1) | HK72088A (hu) |
| HU (1) | HU192971B (hu) |
| IE (1) | IE56382B1 (hu) |
| IL (1) | IL70441A (hu) |
| NZ (1) | NZ206592A (hu) |
| PH (1) | PH20198A (hu) |
| PT (1) | PT77810A (hu) |
| RO (1) | RO87735A2 (hu) |
| SU (1) | SU1194285A3 (hu) |
| ZA (1) | ZA839269B (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3572178D1 (en) * | 1984-04-16 | 1989-09-14 | Lilly Co Eli | Improvements in and relating to antibiotics m43a, m43b, m43c and m43d |
| IL78597A0 (en) * | 1985-04-25 | 1986-08-31 | Lilly Co Eli | Novel glycopeptide derivatives |
| JP2577133B2 (ja) * | 1989-11-27 | 1997-01-29 | スティフティング フォール ド テフニスヘ ウェッテンスハッペン | 船舶のプロペラ |
| RU2633511C1 (ru) * | 2016-06-29 | 2017-10-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Штамм Amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика диметилванкомицина и способ получения антибиотика |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4322406A (en) * | 1980-12-18 | 1982-03-30 | Eli Lilly And Company | Antibiotic A-4696 factors B1, B2, B3, C1a, C3 and E1 |
| US4322343A (en) * | 1980-12-18 | 1982-03-30 | Eli Lilly And Company | Pseudo-aglycone of actaplanin |
-
1983
- 1983-12-13 RO RO83112843A patent/RO87735A2/ro unknown
- 1983-12-13 PT PT77810A patent/PT77810A/pt not_active IP Right Cessation
- 1983-12-13 IL IL70441A patent/IL70441A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-12-13 ZA ZA839269A patent/ZA839269B/xx unknown
- 1983-12-14 CA CA000443232A patent/CA1214413A/en not_active Expired
- 1983-12-14 GR GR73247A patent/GR78784B/el unknown
- 1983-12-14 FI FI834594A patent/FI834594A/fi not_active Application Discontinuation
- 1983-12-15 PH PH29980A patent/PH20198A/en unknown
- 1983-12-15 DK DK578083A patent/DK167688B1/da active
- 1983-12-15 AU AU22426/83A patent/AU563466B2/en not_active Ceased
- 1983-12-15 NZ NZ206592A patent/NZ206592A/en unknown
- 1983-12-16 DD DD83258052A patent/DD210709A1/xx unknown
- 1983-12-16 AT AT83307676T patent/ATE42571T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-12-16 GB GB08333668A patent/GB2132207B/en not_active Expired
- 1983-12-16 EP EP83307676A patent/EP0112184B1/en not_active Expired
- 1983-12-16 DE DE8383307676T patent/DE3379735D1/de not_active Expired
- 1983-12-18 EG EG774/83A patent/EG16163A/xx active
- 1983-12-19 HU HU834327A patent/HU192971B/hu not_active IP Right Cessation
- 1983-12-19 IE IE2990/83A patent/IE56382B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-12-19 SU SU833679352A patent/SU1194285A3/ru active
- 1983-12-19 ES ES528197A patent/ES8504935A1/es not_active Expired
- 1983-12-20 JP JP58241824A patent/JPS59118798A/ja active Granted
- 1983-12-20 KR KR1019830006026A patent/KR860001497B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-09-08 HK HK720/88A patent/HK72088A/xx unknown
-
1991
- 1991-11-27 JP JP3312467A patent/JPH0771479B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0265071B1 (en) | Glycopeptide antibiotics | |
| US4935238A (en) | Antibiotic A 40926 complex and its pure factors PA, PB, A, B and B0 | |
| CS228909B2 (en) | Method of preparing antibioticum a-4696 in complex form, or in the form of factor b1,b2,b3,c1a,c3 and e1 | |
| US4208403A (en) | A-21978 Antibiotics and process for their production | |
| KR950010461B1 (ko) | 항생물질 a 40926 n-아실아미노글루쿠로닐 아글리콘 및 항생물질 a 40926 아글리콘의 제조 방법 | |
| US5187082A (en) | Process for producing A83850 antibiotics | |
| US4918054A (en) | Antibiotics called `chloropolysporins B and C`, a process for their preparation, and their therapeutic and veterinary use | |
| US4495179A (en) | A51568 Antibiotic and process for producing thereof | |
| US4548925A (en) | Antibiotic M43A, pharmaceutical composition and method of use | |
| EP0159180B1 (en) | Improvements in and relating to antibiotics m43a, m43b, m43c and m43d | |
| HU192971B (en) | Process for preparing antibiotic factors a-51568 a and b | |
| US4558009A (en) | Process for producing antibiotic A-51568 by fermentation and microorganism | |
| US4548924A (en) | Antibiotics M43B and M43C, pharmaceutical composition and method of use | |
| US4558008A (en) | Process for production of A-51568B antibiotic | |
| AU602700B2 (en) | Antibiotic A 42867 and the addition salts thereof | |
| US4717714A (en) | A-51568B antibiotic | |
| NZ199196A (en) | Antibiotic a-4696 factor g and growth-promoting compositions;actinoplanes missouriensis atcc 31681 | |
| DE69012942T2 (de) | Glycopeptid-Antibiotika. | |
| DD210709A5 (de) | Verfahren zur herstellung des antibiotikums a51568 mit den faktoren a und b | |
| Bombay et al. | EUROPEAN PATENT APPLICATION |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |