HU191713B - Process for producing composition containing purified detoxicated endotoxin - Google Patents
Process for producing composition containing purified detoxicated endotoxin Download PDFInfo
- Publication number
- HU191713B HU191713B HU843169A HU316984A HU191713B HU 191713 B HU191713 B HU 191713B HU 843169 A HU843169 A HU 843169A HU 316984 A HU316984 A HU 316984A HU 191713 B HU191713 B HU 191713B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- endotoxin
- tde
- composition
- effective amount
- nmol
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/05—Immunological preparations stimulating the reticulo-endothelial system, e.g. against cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
A jelen találmány tárgya eljárás tisztított, detoxikált endotoxint tartalmazó termék (TDE) előállítására, amely termát immunstimulátorként, valamint adjuvánsként alkalmazható. A jelen találmány szerinti eljárásban használt TDE azzal jellemezhető, hogy nem tartalmaz kimutatható mennyiségű 2-keto-3-dezoxi-oktanoátot, m(g foszfort 350 és 475 nmól/ /mg közti mennyiségben, zsírsavakat 1700 és 2000 nmól/mg közötti mennyiségben tartalmaz.
Az Enterobacteriaceae családból, akár szülő, akár mutáns törzsből nyert endotoxikus extraktumok ismertek. Ezeket az extraktumokat különböző immunogén tumorok immunterápiájához használják (lásd: Paptides as Requirement fór Immunotherapy of the Guinea-Pig Une-10 Tumor with Endotoxlns /A tengeri malac-10 tumor endotoxinokkal történő immunterápiájához szükséges peptidek/, Ribi és munkatársai: Cancer Immunoi. Immunother. 7. kötet, 43—58 /1979/). Az endotoxion-extraktumokról azonban ismeretes, hogy nagyon toxikusak éá ezért csak korlátozottan használhatók rákos tumorok kezelésében. Erőfeszítéseket tettek arra, hogy' az endotoxinokat úgy detoxikálják, hogy tumor-visszafejlesztő képességük megmaradjon. Amint Ribi és munkatársai kimutatták, az endotoxinok detoxikálására ismert olyan kémiái eljárások,amelyek azért megőrzik az adjuváns hatást, mint pl. a szukcinilezés és ftálilezés, ebben az esetben csökkenést váltanak ki mind az endotoxicitásban, mind a tumor-visszafejlesztő képességben. Ezért az eddig végzett kísérletek tisztított endotoxin-termék nyerésére nem voltak sikeresek.
A jelen találmányban a TDE előállításához szükséges kiindulási anyagként használt típusú endotoxin extraktumot nyerhetünk bármelyik Enterobacteriae családba tartozó mikroorganizmusból, szülő-törzsekből és mutánsokból egyaránt. A példa kedvéért a következő nemzetségeket adjuk meg illusztrációként az olyan mikroorganizmus-típusokra, amelyeket jól alkalmazhatunk:
Salmonella, Shigella, Escherichia, Brucella, Bordetella, Citrobacter, Pseudomonas, Pasteurella, Neisseria, Proteus, Klebsiella és Serratio.
Leginkább a következő fajokat használjuk: S. minnesota, S. typhimurium, B. pertussis, B. abortus,
S. enteritidis, E. coli, S. typhi, S. marcescens, S. typhosa, Shigella flexni, és S. abortus equi.
A kiindulási anyagként alkalmazott endotoxikus extraktumot a számos ismert módszer valamelyikével állítjuk elő (lásd pl.:
1. Webster, M.E., Sagin, JJ7., Landy, M., és Johnson, A.G.: J. Immunoi., 1955,744,55
2. Westphal, O., Luderitz.O., és Bister, F.: Z.Naturforsch., 76, 148/1952/
3. Westphal, O.: Pyrogens. Polysaccharides in Biology, Tr. Second Macy Conference (kiadó:George F. Springer), Madison, New Jersey, Madison Ponting Co., 1957,115 '
4. Galanos, C., Luderitz, 0., Westphal, 0.: Eur.
J. Biochem.,9,245/1969/
5. Chen,C.H., Johnson,A.G.,Kasai,N.,Key,B.A. Levin, J., Nowotny, A.: J. Infect., Dis. 128, 543 /1973/
6. Ribi, E., Hasldni, W.T., Landy, M., Milner, K. C.: The Journal of Experimental Medlcine 114, 647 /1961/
7. Lelve, L.: Biochem. Biophys. Rés. Comm. 21, 290 /1965/
8. Ribi, E., Milner, K.C. és Penine,T.:J.Immunology 82,75 /1959/
Az előnyös módszert, amellyel endotoxikus kivonatot lehet nyerni, Chen és munkatársai hozták nyilvánosságra, nevezetesen a metanol-kloroformos kicsapást.
A metanol kloroformos csapadékát (MKCs) ezután egy szerves vagy szervetlen savval reagáltatjuk, majd liofilezzük, hogy hidrolizált nyers A lipidet állítsunk elő csökkentett toxicitással és pirogén-hatással, ha a kiindulási endotoxin anyaghoz hasonlítjuk. Ezt az anyagot azután egy olyan oldószerrel kezeljük, amely képes fajlagosan feloldani a zsírsavakat és tisztátalan Ságokat anélkül, hogy feloldaná a nyers A lipidet. Erre a célra alkalmas oldószer az aceton. A detoxikált, finomított A lipid foszfát-tartalma mintegy fele annak, amelyet a toxikus endotoxinoknál figyeltek meg, azt sugallva, hogy a foszfát-tartalom kapcsolatban van az endotoxinok toxikus hatásával.
Az MKCs-vel való reakcióhoz használt előnyös szerves savak a sósav, kénsav és foszforsav és az előnyös szerves savak a toluolszulfonsav vagy a triklór•ecetsav. A reakciót megfelelően 90 °C és 130 °C között célszerű végezni annyi ideig, amely elegendő a teljes hidrolízishez, ez általában 15 és 60 perc között van.
A nyers, detoxikált endotoxin készítését véghez lehet vinni olyan módon, hogy a kiindulási anyagot a savval reagáltatjuk egy szerves oldószer jelenlétében, ilyen pl. a kloroform, metanol, etanol és ezek kombinációi.
Az így nyert nyers A lipidet acetonban felszuszpendáljuk, az aceton előnyös oldószer a zsírsavak és egyéb tisztátalanságok feloldásához. Az oldószert ezután eltávolítjuk, így nyers, detoxikált endotoxint nyerünk.
A nyers, detoxikált endotoxint ezután valamely oldószerben feloldjuk és az oldatot megfelelő kromatográfiás oszlopon, mint pl. molekula-kizárásos kromatográfiás oszlopon, engedjük át, hogy elkülönítsük a TDE frakciókat, amelyeket azután az oldószer eltávolítása után egyesítünk. Az egyik kiviteli formában a nyers detoxikált endotoxin-oldatot Sephadex-oszlopon engedjük át olyan oldószerben, mint pl. kloroform, metanol, aceton, pjridin, éter vagy ecetsav, vagy ezek kombinációi. Az oszlop nyomása változó lehet, de általában az atmoszférikus nyomás és 6$· 10s Pa között van, és az átfolyási sebesség 0,1 -10 ml/perc között.
A nyers, detoxikált endotoxin-oldatot DEAE cellulóz oszlopon is lehet átengedni azonos nyomás-viszonyok között, amelyet a Sephadex oszlopnál említettünk. Az átfolyási sebességet 2-15 ml/perc között tartjuk. Az alkalmazott oldószerek azonosak azzal, amelyeket a Sephadex-oszlopnál alkalmazunk, bár víz és/vagy dietil-amin minden keverékhez adható kb. 1%koncentrációig.
Más módszer, amely alkalmas TDE előállítására nyers, detoxikált endotoxinból, lehet pl. az oldat átengedése kis nyomáson sziÚkagél-őO oszlopon, amelynek szemcse-mérete 25 és 63 mikron között van, és amelyhez kloroformból, metanolból, vízből és ammónium-hidroxidból álló oldószert alkalmazunk. Az előnyös térfogat-arány ezekből a komponensekből az oldószerhez kb. 50 25.4 2.
A jelen találmány tárgya tehát egy tisztított, detoxikált endotoxint tartalmazó termék előállítása, amely hatásosan alkalmazható a melegvérű állatok
191.713 immunrendszerének stimulálására. A TDE-t speciálisan mint B-eejt mitogént lehet alkalmazni a timföldnek termelésének stimulálására, a makrofágok stimulálásáta, vagy mint olyan adjuvánst, amely növeli a melegvérű állatok immunválaszát.
A jelen találmány tárgya tehát egy, az immunrendszer stimulálására használható tisztított, detoxikált endotoxin (TDE) előállítása. A jelen találmány szerinti TDE-ben nincs kimutatható mennyiségű 2-keton-3-dezoxi-oktanoát, míg foszfortartalma 350 és 475 nmól/mg, és zsírsav-tartalma 1700 és 2000 nmól/mg között van.
A jelen találmány szerinti TDE-t az immunrendszer stimulálására lehet alkalmazni melegvérű állatokban olyan antigének ellen, mint pl. mikro-bakteriális és gomba-sejtek, mikro-bakteriális sejt-fragmensek, vírusok, vírus-alegységek és szintetikus peptidek, amelyek sejt- és vírus alegységeknek felelnek meg. Speciális antigének, amelyeket a TDE bevezetésével fokozott immunválaszra lehet késztetni,pl. a Crytococcus neoformans, Candida-fajok, Chlamyda fajok, Legionella fajok, Clostridiumok, hepatitis, meningitis, Steptococcus fajok, Staphylococcus fajok, Klebsiella fajok, Herpes vírus, Brucella fajok, Bordetella fajok, Yersinia fajok, Pasteurella fajok, Francisella fajok, Listeria fajok és hasonlók.
A jelen találmány szerinti TDE B-sejt mitogenicitást mutat, vagyis a TDE, amikor megfelelő dózis-mennyiségben és formában melegvérű állatba vezetjük be, aktiválja a B-limfodtákat, amelyek az antitestek előállításáért felelős sejtek.
VIZSGALATOK (1) B sejt mitegenicitás
A TDE azzal a képességével jellemezhető, hogy aktiválja a B-limfocitákat, amelyek az antitestek előállításáért felelős sejtek. Ezt az I. Táblázatban mutatjuk be.
I. táblázat
A tisztított, detoxikált endotoxin mitogén aktivitása
Adag 3 H-ti mi din-beépülés (pg/ml) CPM* * Sí**
BALB/cnu/+ 10 34,500 5,0
BALB/cnu/nu 10 38,693 5,6
Módszer:
104 sejt/ml-t tenyésztettünk az egyes törzsekből mitogénnel vagy mitogén nélkül 0/2 mg RPMI-1640 (5% borjú-embrió szérum) táptalajban 96 üreges mikrotitráló lemezekben. 1 ucl 3H-timidint adtunk minden egyes üreghez a 48 órás inkubálás 18, órájában és mértük a SH beépülését standard szcintillációs technikával.
* CPM=beütés/perc **S1 = stimulációi index (2) Interleukín I. termelése
A TDE-t lehet alkalmazni a makrofágok 9tál kibocsátott Hmfokínok termelésének stimulálására. Az interleuldn I a makrofágok által kibocsátott oldható immunregulátor, amely felelős a limfociták aktiválásáért a fertőzés helyén. Az interleukin-1 kritikus szerepet játszik, mint az immunválasz erősítője.
Rágcsáló makrofágokat helyeztünk el mikrotitráló lemezekre (1- 10*/üreg), minden meghatározást három párhuzamossal végeztünk. Az első üregek 1 ml 50 pg/ml-es standard endotoxin-oldatot kaptak, amelyet a korábban említett függő bejelentésben leirt eljárással összhangban készítettünk. A második üreg-sorozatban az üregek 1-1 ml 5o /ml-es TDE oldatot kaptak, amelyet a jelen találmánnyal összhangban állítottunk elő. Mindegyik ágenst 1 ml M 199 tápközegben szolubilizáltunk, amely még 5% FCS-t (borjú embrió szérum) is tartalmazott. M 199 tápközeget, amely még 5% FCS-t is tartalmazott adtunk az üregek harmadik sorozatához, ezek szolgáltak kontrollként.
A lemezeket 37 °C hőmérsékleten 20 órán át ínkubáltuk. A felülúszót eltávolítottuk és hígítottuk, hogy 1:10 arányú felülúszó-desztillált víz oldatot nyerjünk. A felülúszót Gery és munkatársai módszerével (Cellular Immun. 64 , 293 /1981/) vizsgáltuk meg interleukín I termelésre.
A felülúszó eltávolítása után visszamaradt sejteket lizáltuk 0,1% Triton Χ-100-at használva. A nyert oldatot 1:10 arányban olyan RPMI 1640 tápközeggel hígítottuk, amely 5% borjú embrió szérumot is tartalmazott.
A hígított oldatot interleukín I termelésre megvizsgáltuk olyan módon, hogy mértük a PHA indukált makrofágba a 3H-timidin beépülésének növekedését, amint ezt Gary és munkatársai a fentebb idézett irodalmi helyen leírták. Az eredmények a II. táblázatban találhatók.
II. táblázat
| Vizsgálati anyag (50 Mg/ml) | Felülúszó válasz (1:10 hígítás) | Lizátum válasz (1:10 hígítás) |
| Endotoxin standard TDE Kontroll | 31,137±1,721 16,78211/295 3,323+31 | 51,69512797 66,178+2332 12,153± 497 |
Amint a II. táblázatban látható az interleukin I termelése a jelen találmány szerinti TDE-ből a lizált sejtben nagymértékben meghaladja a standard endotoxin extraktumból nyert interleukin I termelést.
Azonos vizsgálatot hajtottunk végre humán monodtákat használva rágcsáló makrofágok helyett. Az eredményeket a III. táblázat tartalmazza.
III.táblázat
| Vizsgálati anyag (10 Mg/ml) | Felül úszó válasz (1:50 hígítás) | Lizátum válasz (150 hígítás) |
| Endotoxin standard TDE Kontroll | 42,41811763 17^1011983 1,693± 289 | 5182 Π1348 50,6261 813 15,17311,292 |
(3) Makrofág aktiválás
A jelen találmány szerinti TDE stimulálja a makrofágokat is, amint ezt a makrofágoknak a fluoreszcens gyöngyök fagodtózissal elnyelési képességének méréséből kiderül.
· 104 hashártya-váladék sejtet összekevertünk 5
191.713 μΐ vizsgálati anyagot tartalmazó oldattal, amely standard endotoxint, iUetve jelen találmány szerinti TDE-t, illetve kontrollként fiziológiás sóoldatot tartalmazott, ilyen módon képeztünk három különböző vizsgálati oldatot. Minden oldat 1 gg vizsgálati anyagot és 20 gl fluoreszcens gyöngy szuszpenziót tartalmazott. A vizsgálati oldatokat egyenként mikroszkóp lemezre helyeztük és 90 percen át inkubáltuk 37 °C hőmérsékleten.
Az inkubálás után a lemezeket fluoreszcens mikroszkóp alatt megvizsgáltuk. Vizuális megfigyeléssel meghatároztuk azoknak a sejteknek a számát, amelyek fluoreszcens gyöngyöt nyeltek fagocitózissal, valamint a sejtenként elnyelt gyöngyök számát.
A fagocitózis indexet a következő képlettel összhangban számítottuk ki:
FAGOCITÓZIS INDEX= % fagodtáló sejt «gyöngyök száma 100 sejtenként és két kísérlet eredményeit a IV. táblázat mutatja be.
IV. táblázat
Fagocitózis index kísérlet 2Jcísérlet
| Endotoxin | ||
| standard | 5,0 | 3,6 |
| TDE | 5,4 | 4,1 |
| Kontroll | 1,0 | 05 |
Amint a IV. táblázatból látható, a jelen találmány szerinti TDE-nél a fagocitózis-index szignifikánsan nagyobb, mint a standard endotoxinnál, ezáltal megállapítható, hogy a TDE a makrofágok jelentősen hatásosabb stimulátora.
(4) Adjuváns aktivitás
Hogy a TDE alkalmazását a melegvérű állatok immunrendszerének stimulátoraként tovább bizonyítsuk, a TDE-t adjuvánsképességre is megvizsgáltuk olyan módon, hogy meghatároztuk immunválasz -fokozó képességüket birka vörösvérsejtekre (SRBC). Ezt olyan módon hajtottuk végre, hogy az antitestek birka vörös vérsejt lizáló képességét mértük. Három vizsgálati anyagot készítettünk. Mindegyik 1- 107 SRBC-t tartalmazott. A 2. sz. vizsgálati anyag ezen kívül 20 mcgs. standard endotoxint, míg a 3. sz. vizsgálati anyag 20 mcgs jelen találmány szerinti TDE-t tartalmazott.
A vizsgálati anyagot interperitoneálisan adtuk be BALB/C egereknek. 4—5 nap után a vizsgálati állatokat leöltük és lépüket eltávolítottuk, a lépeket szövet-őrlőben megőröltük. Minden lépből standard sejt-szuszpenziót készítettünk hemodtométert alkalmazva, és a fenti szuszpenziók mindegyikét lemezekre helyeztük a cél SRBC-vel, tápközeggel és agarral együtt.
A lemezeket 2 órán át 37 °C hőmérsékleten inkubáltuk és tengerimalac szérumot adtunk komplement-forrásként minden egyes lemezhez, ezt további 30 perces inkubálás követte 37 °C hőmérsékleten .
Ezek után a lemezeket megvizsgáltuk, hogy meghatározzuk a tarfolt-képző sejtek mennyiségét, amelyek azok a területek, amelyekben az antitestek öszszeroncsolták az SRBC sejteket a tengerimalacezérumban található komplement segítségével. Az eredményeket az V. táblázat mutatja be.
Vizsgálati anyag PFC/2-105 lépaejtek
SRBC 88
SRBC * Endotoxin standard 165
SRBC * TDE 219
Amint a III. táblázatból látható, a tarfoltot képező sejtek száma, amely a TDE alkalmazásának eredményeként jött létre, a standard endotoxinnál elért eredményhez képest jelentősen nagyobb, amely megalapozza azt a megállapítást, hogy a TTE hatásos adjuváns .
A TDE-t, amikor a jelen találmány szerint alkalmazzuk, gyógyászatilag elfogadható közeggel kombinálva lehet beadni, pl. fiziológiás sóoldattal vagy olaj-cseppes emulzióban. Az említett kompozídót lehet stabilizálni pl. liofilezéses módszerrel, majd visszaállítani a hatás bármiféle elvesztése nélkül.
Amint fentebb leírtuk, a melegvérű állatok és az emberek kezeléséhez használható kompozíciót lehet olajos cseppemulzió formájában alkalmazni. Az alkalmazott olaj mennyisége 0,5-3 térfogat% között lehet a kompozíció teljes térfogatára vonatkoztatva. Előnyösen 0,75—1,5 térfogat% olajat célszerű alkalmazni. A megfelelő olajokra példák könnyű ásványolaj, szkvalén, 7-n-hexil-oktadekán, Conoco szuperolaj és Drakeol GVR ásványolaj (a Pennreco Company, Bulter,Pennsylvania cég termékei).
A homogenizált olaj-tartalmú keveréket azután egyesítjük valamely detergenssel, amelyet kívánt esetben fel lehet oldani fiziológiás sóoldatban az összekeverés előtt. A detergens mennyisége tipikus esetben 0,02 és 0/2 térfogat% között van, előnyösen 0,1 és 0/2 térfogat% között a kompozíció teljes térfogatára vonatkoztatva. Bármilyen közönséges detergens-anyagot lehet használni, beleértve a Tween 80-at, és az Arlacelt (az Atlas Chemical Company gyártmánya).
A detergens hozzáadásával keletkezett keveréket ezután homogenizáljuk, szuszpenziót képezve, amely nagy százalékban olyan olajcseppeket tartalmaz, amelyek TDE-vel vannak beburkolva, amint ezt mikroszkóp alatti megfigyeléssel meg lehet határozni.
A TDE mennyisége egy injekcióban 5 és 500 /rg, előnyösen 10 és 100 pg között van (70 kg-os felnőtt teljes testsúlyára vonatkoztatva).
1-3 injekciót adunk be kb. 2 hónapos periódus alatt.
A jelen találmányban alkalmazott TDE kompozíció szignifikánsan kisebb pirogén aktivitást mutat, mint az a kompozíció, amely standard endotoxint tartalmaz, amely tényt a következő példa bizonyítja ·
Három Uj-Zéland törzsből származó patkányt injekcióztunk be (füli vénába) standard endotoxint tartalmazó kompozícióval. A standard endotoxinnak azt a mennyiségét, amely ahhoz szükséges, hogy a testhőmérsékletben legalább 0,46 °C hőmérséklet-növekedést okozzon a vizsgálati populáció 50%-ában, 3 órán periódusban határoztuk meg, végbél-hőmérőt alkalmazva.
Három másik vizsgálati patkányt szintén injekci-41
191.713 óztunk olyan kompozícióval, amely TDE-t tartalmazott, és elvégeztük ugyanazt a pirogén-aktivitási vizsgálatot. Az eredményeket a VI. táblázat mutatja be.
VI. táblázat
Pirogén aktivitás
Vizsgálati anyag Patkány aktivitás* (Mg/kg)
Endotoxin standar 0,012
TDE 10 (vagyis nem volt láz a legmagasabb dózisnál, 10 Aíg^iál sem) *Az a dózis,amely ol^an láz-választ vált ki,amely nagyobb, mint 0,46 C a vizsgálati popiládó 50%ában
Amint a VI táblázatban látható, a standard endot'oxinláz-választ váltott ki a vizsgálati állatok 50%ában 0,012 Mg/kg dózisban. A TDE azonban nem alakított ki láz-választ még> lO/tg/kg-nál sem, amely pedig 850-ezer nagyobb dózisszint, mint a standard 25 endotoxinnál volt.
Claims (5)
1, Eljárás melegvérű állatok hatásos adjuváns vá30 laszát kiváltani vagy immunválaszát stimulálni képes, detoxikált endotoxint tartalmazó kompozíció előállitására, azzal jellemezve, hogyEnterog bacteriaceae családba tartozó mikroorganizmusból származó endotoxin-extraktumot savval hidrolizálunk, a termékből a zsírsavakat egy, a zsírsavakat oldó, de a toxint nem oldó oldószerrel - előnyösen acetonnal - kivonjuk, és a maradékot kromatográfiásan tisztítjuk, a kapott tisztított, kimutatható
10 mennyiségű 2-keto-dezoxi-oktanoátot nem tartalmazó, 350 és 475 nmól/mg közötti mennyiségű foszfort & 1700 és 2000 nmól/mg közötti mennyiségű zsírsavakat tartalmazó, detoxikált endotoxin hatásos mennyiségét gyógyászatilag elfogadható hordozókkalkeveijiik.
10 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségként egy kiszerelési egységben 5 és 500 Mg közötti mennyiségű hatóanyagot alkalmazunk egy 70 kg-os felnőtt teljes testsúlyára vonatkoztatva.
2Q
3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hatásos mennyiségként egy kiszerelési egységben 10 és 100 pg közötti menynyiségű hatóanyagot alkalmazunk egy 70 kg testsúlyú felnőtt teljes testsúlyára vonatkoztatva.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal j ellemezve, hogy a kompozíciót liofilezett formában állítjuk elő.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kompozíciót olajos csepp-emulzió formájában állítjuk elő.
ábra nélkül
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US52696783A | 1983-08-26 | 1983-08-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT34887A HUT34887A (en) | 1985-05-28 |
| HU191713B true HU191713B (en) | 1987-03-30 |
Family
ID=24099553
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU843169A HU191713B (en) | 1983-08-26 | 1984-08-23 | Process for producing composition containing purified detoxicated endotoxin |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6072825A (hu) |
| KR (1) | KR880002223B1 (hu) |
| AT (1) | AT389228B (hu) |
| AU (1) | AU554039B2 (hu) |
| BE (1) | BE900377A (hu) |
| CA (1) | CA1225592A (hu) |
| CH (1) | CH660125A5 (hu) |
| DE (2) | DE3448164C2 (hu) |
| DK (1) | DK389384A (hu) |
| ES (1) | ES8606883A1 (hu) |
| FI (1) | FI843204A (hu) |
| FR (1) | FR2550945B1 (hu) |
| GB (1) | GB2147806B (hu) |
| HU (1) | HU191713B (hu) |
| IL (1) | IL72675A (hu) |
| IN (1) | IN157910B (hu) |
| IT (1) | IT1177974B (hu) |
| NL (1) | NL192326C (hu) |
| NO (1) | NO843243L (hu) |
| NZ (1) | NZ209233A (hu) |
| SE (1) | SE8404090L (hu) |
| ZA (1) | ZA846309B (hu) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4629722A (en) * | 1984-07-12 | 1986-12-16 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Method of inhibiting the onset of acute radiation syndrome |
| US4806352A (en) * | 1986-04-15 | 1989-02-21 | Ribi Immunochem Research Inc. | Immunological lipid emulsion adjuvant |
| US4803070A (en) * | 1986-04-15 | 1989-02-07 | Ribi Immunochem Research Inc. | Immunological emulsion adjuvants for polysaccharide vaccines |
| DE10115310A1 (de) * | 2001-03-28 | 2002-10-10 | Nodar A Daniela | Bakteriophagen-Präparation |
| KR100868443B1 (ko) * | 2002-05-27 | 2008-11-11 | 주식회사 포스코 | 폭과 길이가 가변 조정되는 런치박스 제작장치 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2160326B1 (hu) * | 1971-11-19 | 1975-02-07 | Anvar | |
| BE793260A (fr) * | 1971-12-24 | 1973-06-22 | Pasteur Institut | Agent immunostimulant, medicaments le contenant et procede de fabrication de cet agent immunostimulant |
| GB1516507A (en) * | 1974-06-20 | 1978-07-05 | Anvar | Process for obtaining mycobacterial fractions with anti-tumor anti-viral and adjuvant activities and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2393065A1 (fr) * | 1977-05-31 | 1978-12-29 | Merieux Inst | Procede de separation de lipides d'endotoxines bacteriennes et notamment d'endotoxine de bordetella pertussis |
| US4436727A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
| US4436728A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
| US4435386A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-06 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
-
1984
- 1984-08-10 CA CA000460820A patent/CA1225592A/en not_active Expired
- 1984-08-13 DK DK389384A patent/DK389384A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-08-14 IN IN567/CAL/84A patent/IN157910B/en unknown
- 1984-08-14 NO NO843243A patent/NO843243L/no unknown
- 1984-08-14 ES ES535124A patent/ES8606883A1/es not_active Expired
- 1984-08-14 FI FI843204A patent/FI843204A/fi not_active Application Discontinuation
- 1984-08-14 SE SE8404090A patent/SE8404090L/xx not_active Application Discontinuation
- 1984-08-14 IL IL72675A patent/IL72675A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-08-14 GB GB08420612A patent/GB2147806B/en not_active Expired
- 1984-08-14 ZA ZA846309A patent/ZA846309B/xx unknown
- 1984-08-15 NZ NZ209233A patent/NZ209233A/en unknown
- 1984-08-16 NL NL8402515A patent/NL192326C/nl not_active IP Right Cessation
- 1984-08-17 BE BE0/213506A patent/BE900377A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-08-21 CH CH4001/84A patent/CH660125A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-21 AU AU32215/84A patent/AU554039B2/en not_active Expired
- 1984-08-23 DE DE3448164A patent/DE3448164C2/de not_active Expired
- 1984-08-23 DE DE19843431058 patent/DE3431058A1/de active Granted
- 1984-08-23 HU HU843169A patent/HU191713B/hu unknown
- 1984-08-23 FR FR8413133A patent/FR2550945B1/fr not_active Expired
- 1984-08-24 IT IT48757/84A patent/IT1177974B/it active
- 1984-08-25 JP JP59175877A patent/JPS6072825A/ja active Granted
- 1984-08-25 KR KR1019840005189A patent/KR880002223B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-08-27 AT AT0273384A patent/AT389228B/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4866034A (en) | Refined detoxified endotoxin | |
| CA1217136A (en) | Refined detoxified endotoxin product | |
| FI76494C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av renat, detoxifierat endotoxin. | |
| Nowotny et al. | Relation of Structure to Function in Bacterial Endotoxins: VIII. Biological Activities in a Polysaccharide-Rich Fraction | |
| CA1225591A (en) | Refined detoxified endotoxin product | |
| US4877611A (en) | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants | |
| DE3434766C2 (de) | Pharmazeutisches Präparat | |
| US4505900A (en) | Refined detoxified endotoxin product | |
| US4505899A (en) | Refined detoxified endotoxin product | |
| US4504473A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
| HU191713B (en) | Process for producing composition containing purified detoxicated endotoxin | |
| Hamada et al. | Chemical properties and immunobiological activities of streptococcal lipoteichoic acids | |
| US4001395A (en) | Hydrosoluble extracts of mycobacteria | |
| GB2122897A (en) | Treatment of cancer with microorganism obtained products |