HU189110B - Process for the production of /amido/-n-substituted-bleomycin derivatives - Google Patents

Process for the production of /amido/-n-substituted-bleomycin derivatives Download PDF

Info

Publication number
HU189110B
HU189110B HU841839A HU183984A HU189110B HU 189110 B HU189110 B HU 189110B HU 841839 A HU841839 A HU 841839A HU 183984 A HU183984 A HU 183984A HU 189110 B HU189110 B HU 189110B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
propyl
amino
bleomycin
amido
methyl
Prior art date
Application number
HU841839A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT34223A (en
Inventor
Akio Fujii
Yasuhiko Muraoka
Tokuji Nakatani
Katsutoshi Takahashi
Hamao Umezawa
Original Assignee
Nippon Kayaku Kk,Jp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nippon Kayaku Kk,Jp filed Critical Nippon Kayaku Kk,Jp
Publication of HUT34223A publication Critical patent/HUT34223A/hu
Publication of HU189110B publication Critical patent/HU189110B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C21—METALLURGY OF IRON
    • C21B—MANUFACTURE OF IRON OR STEEL
    • C21B2100/00—Handling of exhaust gases produced during the manufacture of iron or steel
    • C21B2100/40—Gas purification of exhaust gases to be recirculated or used in other metallurgical processes
    • C21B2100/44—Removing particles, e.g. by scrubbing, dedusting
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P10/00—Technologies related to metal processing
    • Y02P10/20—Recycling

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás új (amino)-N-helyettesített-bleomicin-származékok és hatóanyagként a fenti származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Közelebbről, a találmány az (I) általános képletű, alacsony toxicitású új (amido)-N-helyettesített-bleomicin-származékok előállítására vonatkozik. Az (I) általános képletben
BM jelentése (a) képletű csoport,
X jelentése adott esetben 1-4 szénatomos alkilamino-csoporttal, di(l—4 szénatomos)alkil-aminocsoporttal vagy di(l—4 szénatomos)-alkil-amino(1-4 szénatomos)alkil-amino-csoporttal helyettesített 1-10 szénatomos alkilcsoport, a fenti helyettesítő csoportokban az alkilcsoportok adott esetben fenilcsoporttal vagy halogén-fenil-csoporttal lehetnek szubsztituálva,
R, jelentése 6-10 szénatomos cikloalkilcsoport, fenil-(l—4 szénatomosjalkil-csoport, vagy egy vagy két halogénatommal, cianocsoporttal vagy benziloxi-csoporttal szubsztituált fenilcsoport, és
R2 jelentése hidrogénatom vagy —CH2—R, általános képletű csoport, ahol R, a fenti.
A bleomicinek a karcinosztatikus hatású antibiotikumok egyik családját alkotják, a fenti vegyületeket a jelen feltalálók egyike, Umezawa és munkatársai [J. of Antibiotics, 79(A), 200 (1966)] fedezték fel. A fenti antibiotikumokat egy sugárgomba, a Streptomyces verticillus termeli, sajátságaikat tekintve bázikus, vízben oldódó glikopeptidek, amelyek kétértékű rézionnal hajlamosak kelát-kötés kialakítására. Szokásos tenyészetekben a bleomicin-család 16 tagját lehet előállítani, melyek mindegyikét izolálták is [Umezawa és munkatársai, J. of Antibiotics, 79(A), 210 (1966)]. A fenti bleomicinek közül az Aret, A2-t, As-öt, B2-t és dezmetil-A2-t jelenleg a klinikai gyakorlatban széles körben alkalmazzák rézmentes elegyek formájában (a továb biakban a fenti vegyületeket bleomicin-komplex néven említjük) rákellenes szerként, közelebbről, főleg pikkelyes sejt-karcinóma, bőrrák, fej- és nyakrák, tüdőrák és rosszindulatú limfóma kezelésére alkalmazhatók sikeresen.
A 3 922 262 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a 30 451 számú amerikai egyesült államokbeli újravizsgált szabadalmi leírásban is ismertettek különféle bleomicin-származékokat.
A fenti bleomicineket általában réztartalmú formában állítják elő, a szokásos fermentálási eljárással. A rézmentes formát a réztartalmú forma rézmentesítésével nyerik. A leírásban használt „bleomicin” kifejezés alatt mind a réztartalmú, mind a rézmentes forma értendő, hacsak specifikusan nem jelezzük, hogy milyen bleomicinről van szó.
A fenti bleomicinek a (II) képlettel jellemezhetők, a képletben R a bleomicin terminális aminosav-maradékát jelenti, és a réztartalmú formában kelát-kötésben lévő rezet a fenti képlet nem jelöli.
A fenti bleomicinek azonban kiváló terápiás hatásuk mellett az alkalmazási módtól függően mellékhatásokkal, például tüdő-toxicitással is rendelkeznek, ennek megfelelően használatukat újabban korlátozzák. A fentiek miatt kívánatosnak tűnt a kevésbé súlyos mellékhatásokat okozó bleomicinek fejlesztése. A fenti igény kielégítése érdekében vég2 zett kutatások során fedeztük fel az (I) általános képletű új (amino)-N-helyettesített-bleomicin-származékokat.
Azt tapasztaltuk, hogy az (I) általános képletű bleomicin-származékokat jó hozammal úgy állíthatjuk elő, hogy a 3-[N-metil-N-(3-amino-propil)amino]-propil-amino-bleomicin valamely (III) általános képletű (amido)-N-helyettesített származékát - a képletben BM és X jelentése a fenti - egy (IV) általános képletű vegyülettel - a képletben R, jelentése a fenti - kondenzáljuk redukáló körülmények között.
Az (I) általános képletben BM szimbólummal jelölt bleomicin-váz-maradék (a) képletű csoportot jelent, és mind a réztartalmú, mind a rézmentes formát magában foglalja.
(IV) általános képletű cikloalkil-aldehidként például (6-10 szénatomos) cikloalkil-aldehideket, így ciklohexil-aldehidet, ciklooktil-aldehidet, ciklodekanoil-aldehidet stb. használhatunk. Fenilcsoporttal helyettesített telített alifás aldehidként, amelyben a fenilcsoport is helyettesítve lehet, például fenilcsoporttal helyettesített 1-5 szénatomos telített alifás aldehideket, így fenil-acetaldehidet, fenil-etilaldehidet vagy halogénatommal helyettesített fenilacetaldehideket, így klór-fenil-acetaldehidet használhatunk. Benzaldehidekre példaként a benzaldehidet, halogén-benzaldehideket - így p-klórbenzaldehidet, m-bróm-benzaldehidet -, cianobenzaldehidet és benzil-oxi-benzaldehideket - például m,p-di(benzil-oxi)-benzaldehidet - említhetjük.
A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagakét használt (III) általános képletű vegyületeket úgy állíthatjuk elő, hogy a 3-[N-metil-N-(3-aminopropil)-amino]-propil-amino-bleomicint - a továbbiakbam APMP-bleomicinnek nevezzük - egy bleomicin-inaktiváló enzim segítségével - melyet a továbbiakban inaktiváló enzimnek nevezünk; [Umezawa és munkatársai J. of Antibiotics, 27,419 (1974)] - hidrolizáljuk, és a kapott (VI) képletű
3-[N-metil-N-(3-amino-propiI)-amino]-propilamino-dezamido-bleomicint - melyet a továbbiakban APMP-dezamido-bleomicinnek nevezünk egy (V) általános képletű aminnal - a képletben X jelentése azonos az (I) általános képletre megadott jelentéssel - kondenzáljuk.
Az X szimbólum például 6-10 szénatomos alkilcsoportot vagy egy primer aminnal szubsztituált 2-6 szénatomos alkilcsoportot jelenthet. X jelentése előnyösen η-oktil-, fenil-etil-amino-propil-, 3[N-metiI-N-{3-[2-(p-klór-fenil)-etil]-amino-propil}amino]-propil- vagy di(n-butil-amino-propil)csoport lehet.
A (III) általános képletű kiindulási anyagokat például az alábbiak szerint állíthatjuk elő.
Marhamájat foszfát-pufferoldattal homogenizálunk. A homogenizátumot 8000 fordulat/perc-cel centrifugáljuk. A felülúszót foszfát-pufferral szemben dializálva nyers enzimoldatot kapunk. A nyers enzimoldathoz rézmentes formában lévő APMPbleomicint adunk, foszfát-pufferben oldva. Az elegyet 37 °C-on 5—48 órán át inkubáljuk. A reakcióelegyet ezután valamely alkalmas módszerrel fehérjementesítjük, például oly módon, hogy 5%-os tri-21
189 110 klór-ecetsawal (TCA) kicsapjuk a proteineket, a csapadékot centrifugálással eltávolítjuk, majd 5%os TCA-val háromszor mossuk, és a felülúszót a mosófolyadékkal egyesítjük. A fehérjementes reakcióelegyet semlegesítjük, majd a bleomicinhez képest feleslegben réz-acetátot adunk az elegyhez, ily módon a kívánt terméket réz-kelát formává alakítjuk. A réz-kelátos oldatot desztillált vizes E>iaionR HP-40 adszorpciós gyantával töltött oszlopon sótalanítjuk, a kívánt tennék az oszlopon adszorbeálódik. A sókat desztillált vízzel kimossuk, majd a terméket 0,02 n vizes hidrogén-klorid-oldat és metanol 1 :4 térfogatarányú elegyével eluáljuk, a 290 nm közelében adszorpciós maximumot mutató frakciókat összegyűjtjük. DowexR44 (OH-típus, Dow Chemical Co.) anioncserélő gyantával végzett semlegesítés után az egyesített frakciókat csökkentett nyomáson koncentráljuk és liofilizáljuk.
A kapott port desztillált vízben oldjuk. A kapott oldatot CM-SephadexR C-25-tel (Na+-típus, Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött oszlopra viszszük, melyet előzőleg 0,05 mól/l-es ecetsav-nátrium-acetát pufferoldattal (pH 4,5) ekvilibráltunk. Az eluálást lineáris koncentráció-gradiens módszerrel végezzük oly módon, hogy a fenti pufferoldathoz folyamatosan nátrium-kloridot adunk, mellyel a nátrium-koncentrációt fokozatosan 1,0 mól/l-re növeljük. Az UV-adszorpciót mutató frakciókat összegyűjtjük, egyesítjük, és a fentebb leírt módon DiaionR ΗΡ-40-nel végzett sómentesítés után liofilizáljuk. Kék amorf por formájában réztartalmú formában lévő APMP-dezamido-bleomicint kapunk.
A kapott APMP-dezamido-bleomicint ezután egy (V) általános képletű aminnal önmagában ismert módon kondenzálva kialakítjuk a savamidkötést. A kondenzálást például a 4 195 018 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett eljárással végezzük. A kapott terméket kívánt esetben rézmentesítve (III) általános képletű vegyületet tartalmazó reakcióelegyet kapunk.
A fenti kondenzációs reakcióban kondenzálószerként például ciklohexil-karbodiimidet, l-etil-3(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimidet, 1 -ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimidet, diizopropilkarbodiimidet, difenil-foszfor-azidátot (DPPA), dietil-foszforo-cianidátot (DEPC), 6-klór-l-(pklór-benzol-szulfonil-oxi)-benztriazolt (CCBT) vagy egyéb hasonló szert használhatunk.
A fent említett kondenzálószerek mellett adalékanyagként például p-nitro-fenolt, o,p-dinitrofenolt, pentaklór-fenolt, 2,4,5-triklór-fenolt, pentafluor-fenolt, N-hidroxi-szukcinimidet, N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximidet, 1-hidroxibenztriazolt vagy egyéb hasonló kondenzációs adalékot is használhatunk.
A kondenzálást oldószerben - például vízben, dimetil-formamidban, acetonitrilben vagy ezek elegyében - hajthatjuk végre. A reakcióhőmérséklet -20 és 50 ’C között változhat, előnyösen - 10 és 30 °C között dolgozunk. A reakcióidő nem kritikus, 1-70 óra általában elegendő a reakció lejátszódásához.
A (III) általános képletű vegyületet az alábbiak szerint izoláljuk a fenti reakcióelegyből. A reakcióelegyhez szerves oldószert - például acetont, étert vagy egyéb hasonló oldószert - adva kicsapjuk a kívánt terméket. A csapadékot desztillált vízben oldjuk. Az oldat pH-ját 6-ra állítjuk, majd sómentesítés céljából valamely adszorpciós gyantával például desztillált vizes AmberliteR XAD-2-vel (Rohm and Haas Co.) - töltött oszlopra visszük, ahol a kívánt termék adszorbeálódik. Miután a sókat desztillált vízzel kimostuk, a terméket savas kémhatású vizes metanollal - például 0,02 n vizes hidrogén-klorid-oldat és metanol 1 : 4 arányú elegyével - eluáljuk, és a 290 nm közelében abszorpciós maximumot mutató frakciókat összegyűjtjük. Az egyesített frakciókat anioncserélő gyantás kezeléssel, például DowexR 44-gyel (OH-típus, Dow Chemical Co.) semlegesítve és liofilizálva por formájú (III) általános képletű nyersterméket kapunk.
Bizonyos esetekben a fenti sómentesitési lépést elhagyhatjuk. Ekkor a fenti csapadékot desztillált vízben oldjuk, majd a következő lépés szerint kezeljük.
A fentebb kapott port desztillált vízben oldjuk. Az oldatot CM-SephadexR C-25-tel (Na+-típus, Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött oszlopra visszük, melyet előzőleg 0,05 mól/l-es ecetsav-nátrium-acetát pufferoldattal (pH 4,5) ekvilibráltunk. Az eluálást lineáris koncentráció-gradiens módszerrel végezzük, oly módon, hogy a fenti pufferoldat nátrium-koncentrációját folyamatos nátriumklorid adagolással fokozatosan 1,0 mól/l-re növeljük. Mivel az átalakulatlan anyagok és melléktermékek hamarabb eluálódnak, mint a kívánt termék, azok az ultraibolya abszorpció folyamatos mérésével elválaszthatók és eltávolíthatók. Ha a kívánt terméket tartalmazó frakciók szennyeződéseket is tartalmaznak, a fenti kromatográfiás eljárást megismételve teljesen eltávolíthatjuk a szenynyeződéseket.
A fenti kromatográfiás eljárás helyett adszorpciós gyantát, például AmberliteR XAD-2 gyantát használva is elvégezhetjük a kromatográfiás tisztítást. Ebben az esetben a nyerstermék vizes oldatát például 1%-os vizes ammónium-acetát-oldatban lévő gyantával töltött oszlopra felvive adszorbeáljuk a kívánt terméket. Az eluálást lineáris koncentrációgradiens módszerrel végezzük, amely szerint a fenti pufferoldathoz folyamatosan metanolt adva fokozatosan növeljük a metanol koncentrációját. Mivel ebben az esetben az átalakulatlan anyagok hamarabb, és a melléktermékek később eluálódnak, az ultraibolya abszorpciós folyamatos mérésével elválaszthatjuk azokat a kívánt terméktől. Ha a kívánt terméket tartalmazó frakciók szennyeződéseket is tartalmaznak, a fenti kromatográfiás lépést megismételhetjük a tökéletesebb tisztítás érdekében.
A fenti két tisztítási műveletet külön-külön vagy egymással kombinálva is elvégezhetjük.
A fenti módon kapott kívánt terméket tartalmazó frakciókat valamely adszorpciós gyantát, például AmberliteR XAD-2-t használva a fentebb ismertetett módon sómentesítjük, majd liofilizáljuk. Kék amorf por formájában réztartalmú formában (111) általános képletű kívánt terméket kapunk.
A fenti réztartalmú formát EDTA segítségével 3
189 110 ismert módon - például a 3 929 993 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban foglaltak szerint - rézmentes formává alakíthatjuk.
A rézmentesítést például az alábbiak szerint végezhetjük el. A réztartalmú formában lévő anyagot desztillált vízben oldjuk. Az oldatot desztillált vizes AmberliteR XAD-2-vel töltött oszlopra felvive adszorbeáljuk. A gyantát nátrium-kloridot és 5% etilén-diamin-tetraecetsav-dinátriumsót (a továbbiakban EDTA.2Na néven említjük) tartalmazó vizes oldattal mosva a réziont az EDTA.2Na-val eltávolítjuk, míg a rézmentes formában lévő kívánt anyag a gyantán marad. A gyantát nátrium-kloriddal mosva eltávolítjuk az EDTA.2Na-t, majd desztillált vízzel tovább mossuk. Ezután savas kémhatású vizes metanollal - például 0,2 n vizes hidrogénklorid-oldat és metanol 1 :4 arányú elegyével eluáljuk a gyantát és összegyűjtjük a 290 nm hullámhossz közelében abszorpciós maximumot mutató frakciókat. Az egyesített frakciók pH-ját DowexR 44 ioncserélő gyantával (OH-típus, Dow Chemical Co.) 6,0-ra állítjuk, majd csökkentett nyomáson koncentráljuk és liofilizáljuk. Fehér amorf porként rézmentes (III) általános képletű kívánt terméket kapunk, hidrogén-klorid-sója formájában.
Ha a fenti műveletben hidrogén-klorid helyett kénsavat használunk, kénsavsó formájában kapjuk a (III) általános képletű vegyületet. A sav alkalmas megválasztásával tehát bármely kívánt só formájában kinyerhetjük a (III) általános képletű vegyületet.
A találmány szerinti eljárás értelmében a fenti módon előállított (III) általános képletű vegyületet egy (IV) általános képletű aldehiddel kondenzáljuk redukáló körülmények között.
Redukálószerként a fenti kondenzációs reakcióban például bór-hidrid-vegyületeket - így nátriumciano-bór-hidridet, nátrium-bór-hidridet, lítiumbór-hidridet, kálium-bór-hidridet -, bisz(trifenilfoszfin)-tetrahidro-boráto-rezet stb. használhatunk. Katalitikus redukciót is végezhetünk, például szénhordozós palládiumkatalizátorral. Ha 1 mól (III) általános képletű vegyületre számolva 2 mól vagy kevesebb, előnyösen 1-1,5 mól (IV) általános képletű vegyületet használunk, R2 helyén lényegében hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet kapunk. 3 mól vagy annál több (IV) általános képletű vegyületet alkalmazva olyan (I) általános képletű vegyületet kapunk, amelynek képletében R2 jelentése —CH2Rj csoport. Az R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületeket előnyösen 1,2 mól, az R2 helyén —CH2R! csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületeket pedig 5-15 mól, előnyösen 10 mól (IV) általános képletű aldehidszármazékot használva állítjuk elő. Ha (IV) általános képletű aldehidként egy metanolban rosszul oldódó vegyületet - például m,p-di(benzil-oxi)-benzaldehidet használunk, a vegyület mennyiségét csökkenthetjük, de ebben az esetben hosszabb reakcióidőt kell alkalmaznunk.
A fenti kondenzációs reakcióban használt oldószert illetően nincs különösebb korlátozás, bármely, a reakció szempontjából inért oldószer használható. Oldószerként poláros oldószert - például 4 vizet, metanolt, etanolt, dimetil-formamidot, dimetil-szulfoxidot, tetrahidrofuránt, acetonitrilt, a fenti oldószerek elegyét stb. - használhatunk. A reakcióhőmérséklet — 5 és 80 °C között változhat, rendszerint 0 és 50 °C között lehet. Közelebbről, célszerűen 0 és 25 °C közötti hőmérsékleten dolgozunk az R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előállításakor, míg az R2 helyén —CH2Rj csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületeket előnyösen 35 és 50 °C közötti hőmérsékleten állítjuk elő, ha nagy sztérikus gátlású vagy rosszul oldódó aldehidet használunk. A reakcióidő 3-70 óra. Nagy sztérikus gátlású vagy roszszul oldódó aldehid esetén hosszabb reakcióidő például 150 óra - alkalmazása célszerű.
A kapott reakcióelegyből az alábbiak szerint izoláljuk az (I) általános képletű vegyületeket.
Ha redukálószerként bór-hidrid-származékot használtunk, a reakcióelegy pH-ját hidrogénkloriddal 1-re állítjuk, majd az elegyet szobahőmérsékleten 5-10 percen át keverve elbontjuk a redukálószer feleslegét. Ezután az elegyet semlegesítjük, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk a metanolt, éteres vagy butanolos extrakcióval eltávolítjuk a feleslegben lévő aldehidet és ketont, majd a következőképpen sómentesítjük. A reakcióelegyet adszorpciós gyantával, például desztillált vizes AmberliteR XAD-2-vel (Rohm and Haas Co.) töltött oszlopra víve adszorbeáljuk a kívánt terméket. A sókat desztillált vízzel kimossuk, majd a terméket savas kémhatású vizes metanollal - például 0,02 n vizes hidrogén-klorid-oldat és metanol 1 : 4 térfogatarányú elegyével eluáljuk. A bleomicinszármazékot tartalmazó kék frakciókat egyesítjük, kívánt esetben anioncserélő gyantás kezeléssel, például Dowex 44-gyel (OH-típus, Dow Chemical Co.) semlegesítjük, csökkentett nyomáson koncentráljuk és liofilizáljuk. A kívánt terméket kék por formájában kapjuk.
A további tisztítást az alábbiak szerint végezzük.
A fentebb kapott port desztillált vízben oldjuk. Az oldatot 0,05 mól/l-es ecetsav-nátrium-acetát pufferrel (pH 4,5) ekvilibrált CM-SephadexR C-25 (Na+-típus, Pharmacia Fine Chemicals Co.) oszlopra vive adszorbeáljuk az anyagot. Az eluálást lineáris koncentrációgradiens módszerrel végezzük, oly módon, hogy a fenti pufferoldathoz folyamatosan nátrium-kloridot adunk, mellyel a nátrium-koncentrációt fokozatosan 1,0 mól/l-re növeljük. Ha azt tapasztaljuk, hogy a kívánt terméket tartalmazó frakciók szennyeződést is tartalmaznak, a fenti kromatográfiás művelet után AmberliteR XAD-2 adszorpciós gyantán kromatografáljuk az anyagot oly módon, hogy a fentebb kapott egyesített frakciókat 4% vizes ammónium-acetátos gyantára visszük. Az eluálást lineáris koncentrációgradiens módszerrel végezzük úgy, hogy a fenti pufferoldathoz folyamatosan metanolt adva fokozatosan növeljük a metanol koncentrációját. Ebben az esetben az átalakulatlan anyagok eluálódnak először, ezt követi az R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek leoldódása, végül azok a vegyületek eluálódnak, amelyek képletében R, és R2 jelentése azonos. A fenti frakciókat az ultraibolya abszorpció köve-41
189 110 tésével megfelelően elválaszthatjuk. Ha úgy találjuk, hogy a kívánt terméket tartalmazó frakciók szennyeződést is tartalmaznak, a fenti kromatográfiás műveletet megismételve a szennyeződéseket teljesen eltávolíthatjuk. 5
Ebben a lépésben CM-SephadexR C-25 gyanta helyett CM-Sepharose” CL-6B-t (Pharmacia Fine Chemicals Co.) vagy CM-ToyopearlR 650-et (Toyo Soda Mfg. Co.) vagy hasonló gyantával töltött és 1Q metanollal mosott oszlopot is használhatunk. Ebben az esetben a reakció lejátszódása utáni sótalanítási lépés elhagyható. A reakcióelegyet közvetlenül az oszlopra visszük fel és ott adszorbeáltatjuk a kívánt terméket. Miután a reagenseket és egyéb 15 anyagokat metanollal kimostuk, a terméket 0,1 mól/1 nátrium-kloridot tartalmazó vizes metanollal eluáljuk. Az egyesített frakciókat Amberlite” XAD-2 oszlopon kromatografáljuk,
A kívánt terméket tartalmazó egyesített frakciókat ezután a fentebb ismertetett módon Diaion” ΗΡ-40-nel sómentesítjük, majd liofilizáljuk. Az (I) általános képletű (amido)-N-helyettesített-bleomicin-származékot réztartalmú formában, kék amorf porként kapjuk.
A fenti módon kapott, réztartalmú (amido)-Nhelyettesített-bleomicin-származékot a fentebb ismertetett módon rézmentesítve a rézmentes forma kívánt sóját kapjuk fehér amorf por alakjában.
A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek jellegzetes képviselőit az
1. táblázatban soroljuk fel, fizikai-kémiai jellemzőiket a 2. táblázat tartalmazza.
1. táblázat
Vegyület száma Vegyület neve Rövidítése
1. 3-{N-metil-N-[3-(p-klór-benzil)-amino-propil]-amino)-propil- -amino-(amido)N-[3-([S]-l'-fenil-etil-amino)-propil]-bleomicin dMCLBZ-PEP
2. 3-{N-metil-N-[3-(p-klór-benzil)-amino-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-[oktilj-bleomicin dMCLBZ-OCT
3. 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil)-amino-propil]-amino}- -propil-amino-(amido)N-[3-((S)-r-fenil-etil-amino)-propi!]- -bleomicin dMCLPE-PEP
4. 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil)-amino-propil]-amino}- -propíl-amino-(amido)N-[oktil]-bleomicin dMCLPE-OCT
5. 3-{N-metil-N-[3-(p-ciano-benzil-metil-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-[3-((S)-1 '-fenil-etil-amino)-propil]-bleomicin dMCNBZ-PEP
6. 3-{N-metil-N-[3-(p-ciano-benzil-metil-amino)-propil]-amino}- -propil-amino-(amido)N-[oktil]-bleomicin dMCNBZ-OCT
7. 3-{N-metil-N-[3-(ciklooktil-metil-amino)-propil]-amino}- -propil-amino-(amido)N-[3-((S)-l'-fenil-etil-amino)-propil]-bleomicin dMCO-PEP
8. 3-{N-metil-N-[3-(ciklooktil-metil-amino)-propil]-amino}- -propil-amino-(amido)N-[oktil]-bleomicin dMCO-OCT
9. 3-{N-metil-N-[3-bisz(m,p-dibenzil-oxi-benzil-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-[3-((S)-1 '-fenil-etil-amino)propilj-bleomicin dDD-PEP
10. 3-{N-metil-N-[3-bisz(m,p-dibenzil-oxi-benzil-amino)-propil]- -amino}-propil-amino-(amido)N-[n-oktil]-bleomicin dDD-OCT
11. 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil-amino)-propil]-amino}- -propil-amino-(amido)N-{3-[N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)- -etil-amino)-propil]-amino]-propil}-bleomicin dMCLPE-MCLPE
12. 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil-amino)-propil]-amino}- -propil-amino-(amido)N-[3-(di-n-butil-amino)-propil]-bleomicin dMCLPE-EPA
13. 3-{N-metil-N-[3-(p-ciano-benzil-amino)-propil]-amino}-propil- -amino-(amido)N-[3-(di-n-butil-amino)-propil]-bleomicin dMCNBZ-BPA
189 110
2. táblázat
Vegyület száma Rövidítése Rézmentes forma UV-abszorpciós maximuma, mp (E 1%/1 cm) Réztartalmú forma vékonyréteg kromatográfiás Rf-je*’ Réztartalmú forma elektroforetikus Rm-Je*2 (alanin Rm-ja 1,0)
1. dMCLBZ-PEP 289 (90) 0,53 1,16
2. ' dMCLBZ-OCT 290 (88) 0,50 1,08
3. dMCLPE-PEP 290 (79) 0,53 1,04
4. dMCLPE-OCT 290 (85) 0,52 0,96
5. dMCNBZ-PEP 291 (93) 0,69 1,10
6. dMCNBZ-OCT 292 (94) 0,59 0,95
7. dMCO-PEP 291 (89) 0,53 1,06
8. dMCO-OCT 291 (83) 0,42 0,96
9. dDD-PEP 285 (74) 0,09 0,93
10. dDD-OCT 285 (76) 0,04 0,64
11. dMCLPE-MCLPE 290 (79) 0,25 1,20
12. dMCLPE-BPA 290 (83) 0,60 1,11
13. dMCNBZ-BPA 290 (81) 0,70 1,10
Silica Gél 60F SilanizedR (Merck Co.); metanol és 6%-os ammónium-acetát-oldat 60 : 40 térfogatarányú elegye.
*2: Avicel SFR (FMC Co.); 27 : 75 : 900 térfogatarányú hangyasav-ecetsav-víz elegy, 800 V, 15 perc.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek biológiai tulajdonságait az alábbiak szerint határozzuk meg.
1. Mycobacterium smegmatis ATCC607 és Bacillus subtilis elleni antibakteriális hatás
A baktériumellenes hatást a fent említett baktériumokkal határozzuk meg, agarlemezen. Az aktivitás definíciója azon a feltételezésen alapul, hogy a standard bleomicin A2 (rézmentes forma) aktivitása lOOOpg/mg.
2. HeLa S3 sejttenyészet elleni növekedésgátló hatás
Műanyag Petri-csészében lévő 10% borjúszérumot tartalmazó minimál alaptáptalajt beoltunk
HeLa S3 sejtekkel. Két nap múlva a csészébe bleomicint mérünk. Három napos inkubálás után sejtszámolást végzünk. A százalékos növekedésgátlást az alábbi egyenlettel számoljuk ki:
A a vizsgált anyag hozzáadása után 3 nappal mért sejtszám;
B a kontroliban (vizsgált anyag nélkül) mért sejtszám;
C a vizsgált anyag hozzáadásának időpontjában mért sejtszám.
Az ID50 értéket (50%-os gátló koncentráció) grafikusan határozzuk meg oly módon, hogy a vizsgált minta koncentrációjának fiiggvényében ábrázoljuk a %-os gátlást.
A kapott eredményeket a 3. táblázatban közöl45 jük.
3. táblázat
Vegyület száma Rövidítése Rézmentes forma baktériumellenes hatása (pg/mg) Rézmentes forma HeLa S, elleni 50%-os növekedésgátló koncentrációja (pg/ml)
Mycobacterium smegmatis ATCC 607 ellen Bacillus subtilis ellen
1. dMCLBZ-PEP 14 880 2590 0,53
2. dMCLPE-OCT 38 200 1808 0,43
3. dMCLPE-PEP 15 593 4267 0,37
4. dMCLPE-OCT 38 750 1898 0,23
5. dMCNBZ-PEP 21*877 11 056 0,60
6. dMCNBZ-OCT 49 270 381 0,28
7. dMCO-PEP 54 345 7273 0,33
8. dMCO-OCT 65 733 5473 0,23
9. dDD-PEP 115 23 0,058
.! 3. táblázat folytatása
Vegyület száma Rövidítése Rézmentes forma baktériumellenes hatása Gug/mg) Rézmentes forma HeLa S3 elleni 50%-os növekedésgátló koncentrációja (//g/ml)
Mycobacterium smegmatis ATCC 607 ellen Bacillus subtilis ellen
10. dDD-OCT 153 13 0,30
11. dMCLPE-MCLPE 650 270 0,30
12. dMCLPE-BPA 31 690 3690 0,40
13. dMCNBZ-BPA 14 730 4755 1,10
3. Tüdő-toxicitás (tüdőfibrózis) egéren 15
A toxicitás meghatározását 15 hetes hím ICR egéren végezzük, csoportonként 9 állatot használunk a vizsgálathoz. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket 10 egymást követő napon 20 naponta egyszer intraperitoneális injekció formájában adagoljuk az állatoknak, 5 mg/kg dózisban.
A kezelés befejeztével az állatokat 5 héten át megfigyelés alatt tartjuk, majd leöljük és felboncoljuk, a tüdőfibrózis előfordulásának és mértékének meg- 25 határozása céljából. Az értékelést annak alapján végezzük, hogy hány állatnál található tüdőfibrózís, és az milyen mértékű. Az eredményeket a 4. táblázatban közöljük. A toxicitás mértékét az alábbi skála szerint határozzuk meg:
0: nincs fibrózis
I: a tüdőalveolusokban váladék gyűlik össze és az alveolaris septumban fibrózis-szerű elváltozás figyelhető meg
2: néhány területen fibrózis látható
4: szóródott fibrózis
6: fibrózis a teljes terület több, mint 2/s részén.
A 4. táblázatban feltüntetett arányt a bleomicinkomplex-szel összehasonlítva számoltuk ki.
4. táblázat
Vegyület száma Tüdőfibrózis
előfordulása fibrózisos egerek száma (%-a) mértéke összesített pontszám/összes minta száma(%) arány
1. 2/9 (20) 2/27 (7) 0,07
3. 0/1 (0) 0/3 (0) 0
6. 0/9 (0) 0/27 (0) 0
7. 0/9 (0) 0/27 (0) 0
8. 0/9 (0) 0/27 (0) 0
9. 0/9 (0) 0/27 (0) 0
10. 0/9 (0) 0/27 (0) 0
A fenti eredményekből látható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek HeLa S3 sejtek ellen erős növekedésgátló hatással rendelkeznek, és antibakteriális hatásuk is kifejezett, ugyan- 50 akkor toxicitásuk alacsony, fenti tulajdonságaik következtében gyógyászati célokra alkalmazhatók.
A találmány szerinti eljárást részleteiben - a korlátozás szándéka nélkül - az alábbi kiviteli példa segítségével kívánjuk ismertetni. 55
Példa
A) lépés
800 g friss marhamájat 1,6 1 0,05 mól/l-es foszfátpuflferoldattal (pH 7,2) homogenizálunk. A homogenizátumot 8000 fordulat/perc-cel 30 percen át centrifugáljuk. A felülúszót cellulóz-membránon 0,05 mól/l-es foszfát-pufferral szemben dializálva 65 nyers enzimoldatot kapunk, 1,51 nyers enzimoldathoz 32,7 g AMPM-bleomicint adunk. A reakcióelegyet 37 °C-on 24 órán át inkubáljuk. A reakcióelegyhez ezután 150 ml 5%-os triklór-ecetsav-oldatot (továbbiakban TCA) adva kicsapjuk a fehérjét. A csapadékot centrifugálással eltávolítjuk, és 5%os TCA-val háromszor mossuk. A felülúszót és a mosófolyadékokat egyesítjük, 4n nátrium-hidroxid-oldattal semlegesítjük, majd 5 g (bleomicinhez képest 1,2 ekvivalens) réz-acetáttal réz-keláttá alakítjuk. A réz-kelátos oldatot sómentesítés céljából vizes DiaionR HP-40 adszorpciós gyantával (Mitsubishi Chemical Co.) töltött 7 1-es oszlopra visszük, ahol a kívánt termék adszorbeálódik. A sót 14 1 desztillált vízzel kimossuk. Az eluálást 0,02 n vizes hidrogén-klorid-oldat és metanol 1 : 4 arányú elegyével végezzük, a 290 nm közelében abszorpciós maximumot mutató frakciókat egyesítjük, DowexR
189 110
44-gyel (OH-típus, Dow Chemical Co.) semlegesítjük, majd csökkentett nyomáson koncentráljuk.
A kapott koncentrátumot előzőleg 0,05 mól/l-es ecetsav-nátrium-acetát-pufferrel (pH 4,5) ekvilibrált CM-Sephadex C-25-tel (Na+-típus, Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött 3 1-es oszlopra visszük, ahol a kívánt anyag adszorbeálódik. Az eluálást lineáris koncentrációgradiens módszerrel végezzük, amely szerint a fenti pufféroldat nátriumkoncentrációját folyamatosan adagolt nátriumkloriddal 1,0 mól/l-re növeljük. A 0,6 mól/1 nátrium-koncentráció közelében eluálódó kék frakciókat összegyűjtjük és egyesítjük. Az egyesített frakciókat a fentebb ismertetett módon Diaion* HP-40nel sómentesítjük, majd liofilizáljuk. 21,7 g réztartalmú formában lévő APMP-dezamido-bleomicint kapunk, amorf, kék por formájában. A hozam 66%.
Ultraibolya abszorpciós spektrum: Xmaxnrn (E 1%/1 cm): 241 (127) és 292 (104), vizes oldatban
Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) 9maicm-': 3350,1725,1650, 1560, 1460, 1380, 1200, 1140, 1100, 1060, 1020, 990, 880, 770.
Az egyéb fizikai-kémiai jellemzők az 5. táblázatban találhatók.
5. táblázat
Szintetizált vegyület Réztartalmú forma vékonyréteg- kromatográfiás Rr-je*’ Réztartalmú forma elektroferetikus Rm-je*2 (alanin Rm-je 1,0)
A PMP-dezami- 0,28 0,93
do-bleomicin
dAPMP-PEP 0,23 1,17
dAPMP-OCT 0,37 1,00
*’ Silica Gél 60F 254 Silanized* (Merck Co.); metanol és 6%-os ammónium-acetát-oldat 60 : 40 tf. arányú elegye.
*2 Avicel SFR (FMC Co.); 27 : 75 : 900 térfogatarányú hangyasav-ecetsav-víz elegy, 800 V, 15 perc.
B) lépés g A) lépésben kapott réztartalmú formában lévő APMP-dezamido-bleomicint és 8,3 g (a bleomicinhez viszonyítva 10 mólekvivalens) 3-[(S)-Tfenil-etil-amino]-propil-amin-hidrogén-kloridot (továbbiakban PEP-amin-hidrogén-klorid) 100 mi dimetil-formamidban oldunk. A kapott oldatot 4° C-ra hütjük és keverés közben hozzáadunk
13,4 g (bleomicinhez viszonyítva 30 mólekvivalens) 1-hidroxi-benztriazolt és 3,63 ml N-metil-morfolint, majd ezt követően 6,8 g (a bleomicinhez viszo nyítva 10 mólekvivalens) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 6 órán át keverjük.
A reakcióelegyből 10 térfogat acetonnal kicsapjuk a kívánt terméket. A csapadékot acetonnal alaposan átmossuk, majd desztillált vízben oldjuk. Az oldatot 0,05 mól/I-es ecetsav-nátrium-acetát pufferral (pH 4,5) ekvilibrált CM-Sephadex C-25tel (Na+-típus, Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött 500 ml-es oszlopon adszorbeáljuk. Az eluálást lineáris koncentrációgradiens módszerrel végezzük, amely szerint a fenti pufferoldathoz folyamatosan nátrium-kloridot adva a nátriumkoncentrációt fokozatosan 1,0 mól/l-re növeljük. A 0,7 mól/1 nátrium-koncentráció közelében eluálódó kék frakciókat összegyűjtjük és egyesítjük. Az egyesített frakciókat a fentebb ismertetett módszerrel Diaion* ΗΡ-40-nel (500 ml) sómentesítjük, majd liofilizáljuk. 3,3 g réztartalmú formában lévő 3-[(N-metil-amino)-propil-amino]-propil-amino(amido)N-{3-[(S)-1 '-fenil-etil-aminoj-propilj-bleomicint (továbbiakban dAPMP-PEP) kapunk, kék amorf por formájában. A hozam 66%.
Ultraibolya abszorpciós spektrum Xmax nm (E 1%/1 cm): 214 (108), 292 (87), desztillált vízben.
Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) 9maxCm~': 3350, 1725, 1645> 1560, I460’ 1380> 1250, 1140, 1100, 1060, 1015, 990, 880, 765, 700.
A termék többi fizikai-kémiai jellemzője az 5. táblázatban található.
A fenti B) lépésben a PEP-amin-hidrogén-kloridot és N-metil-morfolint n-oktil-aminnal helyettesítve 3-[(N-metil-amino)-propil]-amino-propilamino-(amido)N-(n-oktil)-bleomicint (továbbiakban dAPMP-OCT) kapunk.
Ultraibolya abszorpciós spektrum Xmax nm (E 1%/1 cm): 241 (118) és 292 (95), desztillált vízben.
Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) ,9max (cm·1): 3350, 2940, 1720, 1640, 1555, 1460, 1370, 1250, 1115, 1100, 1060, 1010, 995, 930, 880 és 760.
A többi fizikai-kémiai jellemző az 5. táblázatban található.
A B) lépésben a PEP-amin-hidrogén-kloridot 3[di(n-butil)-amino]-propil-aminnal vagy N-{3-[Nmetil-N-{3-[2-(p-klór-fenil)-etil]-amino}-propiljaminoj-propil-aminnal helyettesítve megfelelő APMP-dezamido-bleomicin-származékokat kapunk.
C) lépés g B) lépés szerint előállított réztartalmú formában lévő dAPMP-PEP-et 100 ml metanolban oldunk. Az oldathoz 700 mg (bleomicinre számolva kb. 4 ekvivalens) m,p-di(benzil-oxi)-benzaldehidet, majd 46 mg (bleomicinhez viszonyítva kb. 1,3 ekvivalens) ciano-bór-hidridet adunk. A reakcióelegyet 48 órán át 40 °C-on tartjuk. Az elegyet ezután metanollal mosott CM-ToyopearIR 650-nel (Na+típus, Toyo Soda Mfg.) töltött 100 ml-es oszlopra visszük, ahol a kívánt termék adszorbeálódik. Az oszlopot 200 ml metanollal mossuk. Az eluálást lineáris kocentrációgradiens módszerrel végezzük, oly módon, hogy 500 ml 7 : 3 arányú metanol-víz elegyhez folyamatosan 500 ml, 0,2 mól/1 nátriumkloridot tartalmazó 7 : 3 arányú metanol-víz elegyet adunk. A 0,12 mól/1 sókoncentráció közelében eluálódó 130 ml térfogatú kék frakciókat AmberliteR XAD-2-vel töltött 160 ml-es oszlopra vive ad-81
189 1 ί szorbeáljuk a kívánt terméket. Az eluálást lineáris I koncentrációgradiens módszerrel végezzük, amely szerint 1 liter 0,05 mól/l-es ecetsav-nátrium-acetát pufferoldathoz (pH 4,5) folyamatosan 1 liter metanolt adva a metanol-koncentrációt lineárisan nő- 5 véljük. A 90% metanol-koncentráció közelében eluálódó kék frakciókat AmberliteR XAD-2-vel töltött 100 ml-es oszlopra vive adszorbeáljuk a kívánt terméket. Az oszlopot 200 ml vízzel mossuk, majd 0,02 n hidrogén-klorid-oldat és metanol 1 :4 10 térfogatarányú elegyével eluálva összegyűjtjük a kék frakciókat. Az egyesített frakciókat DowexR 44-gyel (OH-típus, Dow Chemical Co.) semlegesítjük és szárazra pároljuk. 670 mg kék port kapunk.
A port 50 ml vízben oldjuk. Az oldatot AmberliteR XAD-2-vel töltött 100 ml-es oszlopra vive adszorbeáljuk a kívánt anyagot. Az oszlopot 300 ml 5%os vizes EDTA.2Na-oldattal, 100 ml 2%-os vizes nátrium-klorid-oldattal, végül 200 ml vízzel mos- 2q suk. Ezután az anyagot 0,02 n vizes hidrogén-klorid-oldat és metanol 1 : 4 arányú elegyével eluáljuk, a 290 nm közelében abszorpciós maximumot mutató frakciókat összegyűjtjük. Az egyesített frakciók pH-ját DowexR 44-gyel (OH-típus) 6,0-ra állítjuk, 2p majd liofilizáljuk. 640 mg rézmentes formában lévő dDD-PEP-hidrogén-kloridot kapunk, fehér amorf por formájában. A hozam 64%.
Ultraibolya abszorpciós spektrum kmaxnm (E 1%/1 cm): 285 (74,4) desztillált vízben. 3C
Infravörös abszorpciós spektrum (KBr)
9maxcrn'': 3400, 2900, 11 710, 1650, 1545, 1505, 1450, 1380,1260, 1135, 1060, 1010, 800,730 és 690.
A többi fizikai-kémiai jellemző a 2. táblázatban található. 35
Ha a C) lépésben bleomicin-származékként dAPMP-OCT-t használunk, dDD-OCT-t kapunk.
Ha a C) lépésben
1. kiindulási anyagként B) lépésben kapott megfelelő APMP-dezamido-bleomicin-származékokat 4C használunk,
2. aldehidként a kívánt terméktől függően ciklooktil-aldehidet, p-klór-benzaldehidet és p-cianobenzaldehidet használunk,
3. a fenti aldehideket 1 mól APMP-dezamido- 4E bleomicinre számolva 1,2 mól mennyiségben használjuk, és
4. a reakciót a fentebb ismertetett módon folytatjuk le, az 1. táblázatban ismertetett (I) általános képletű vegyületeket állíthatjuk elő. 5C
Ha a c) reakciólépésben ciano-bór-hidrid helyett bisz(trifluor-foszfin)-tetrahidro-boráto-rezet használunk, hasonlóképpen (I) általános képletű vegyületeket kapunk.

Claims (10)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás az (I) általános képletű új (amido)-Nhelyettesített-bleomicin-származékok - a képletben
    BM jelentése (a) képletű csoport, 6C
    X jelentése adott esetben 1-4 szénatomos alkilamino-csoporttal, di(l-4 szénatomos)alkil-aminocsoporttal vagy di(l~4 szénatomos)alkil-amino(1-4 szénatomos)alkil-amino-csoporttal helyettesített 1-10 szénatomos alkilcsoport, a fenti helyette- 6' sítő csoportokban az alkilcsoportok adott esetben fenilcsoporttal vagy halogén-fenil-csoporttal lehetnek szubsztituálva,
    R, jelentése 6-10 szénatomos cikloalkilcsoport, fenil-(l-4 szénatomos)alkil-csoport, halogén-fenil(1-4 szénatomos)alkil-csoport, vagy egy vagy két halogénatommal, cianocsoporttal vagy benzil-oxicsoporttal szubsztituált fenílcsoport, és
    R2 jelentése hidrogénatom vagy —CH2—R, általános képletű csoport, ahol R, a fenti - előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (III) általános képletű (amido)-N-helyettesített 3-[N-metil-N-(3amino-propil)-amino]-propil-amino-bleomicinszármazékot - a képletben BM és X jelentése a tárgyi körben megadott - egy (IV) általános képletű aldehiddel - a képletben R, jelentése a tárgyi körben megadott - kondenzálunk redukáló körülmények között, célszerűen egy bór-hidrid vagy bisz(trifenil-foszfin)-tetrahidro-boráto-réz jelenlétében.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (IV) általános képletű aldehidként 5-13 szénatomos cikloalkil-aldehidet, fenil- vagy halogén-fenil-csoporttal helyettesített 1-5 szénatomos telített alifás aldehidet, vagy adott esetben egy vagy több halogénatommal, ciano- vagy benzil-oxicsoporttal helyettesített benzaldehidet használunk.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (III) általános képletű vegyületként olyan vegyületet használunk, amelynek képletében X jelentése 6-10 szénatomos alkilcsoport vagy olyan amino-(rövidszénláncú)alkil-csoport, amelyben az aminocsoport egy vagy két 1-5 szénatomos alkilcsoporttal van szubsztituálva, és az aminocsoporton lévő alkilcsoportok is tartalmazhatnak szubsztituálatlan (rövidszénláncú)alkil-amino-, fenil(rövidszénláncú)alkil-amino- vagy halogén-fenil(rövidszénláncú)alkil-amino-csoport szubsztituenseí.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (III) általános képletű kiindulási anyagként olyan vegyületet használunk, amelynek képletében X jelentése oktil-, fenil-etil-amino-propil-,
    N-metil-N-[3-di(klór-fenil-etil)-amino-propil]amino-propil- vagy dibutil-amino-propil-csoport.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (III) általános képletű kiindulási anyagként olyan vegyületet használunk, amelynek képletében X jelentése oktil-, fenil-etil-amino-propil-, N-metil-N-[3-di(klór-feniI)-amino-propil]-aminopropil- vagy dibutil-amino-propil-csoport, és (IV) általános képletű aldehidként Rj helyén ciklooktilmetil-, halogeno-fenil-etil- vagy di(benzil-oxi)fenil-metil-csoportot tartalmazó ciklooktil-aldehidet, halogeno-fenil-acetaldehidet vagy di(benziloxi)-benzaldehidet használunk.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-[3-((S)-1 '' -fenil-etil-amino)-propil]-bleomicin,
    3{N-metil-N-[3-(p-ciano-benzil-amino)-propil]-smino}-propil-amino-(amido)N-[3-((S)-l'-fenil-etil-amino)-propil]-bleomicin, vagy 3-{N-metiI-N-[3-(ciklooktíl-metiI-amino)-propil]-amino}-propiI-amino-(amido)N-[3-((S)-l'-91
    189 110
    -fenil-etil-amino)-propil]-bleomicin előállítására, azzal jellemezve, hogy a 3-(N-metil-amino-propilamino)-propil-(amido)N-[3-((S)-r-fenil-etilamino)-propil]-bleomicint p-klór-benzaldehiddel, p-ciano-benzaldehiddel vagy ciklooktil-aldehiddel kondenzáljuk redukáló körülmények között.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás 3-{N-metil-N-[3-(ciklooktil-metil-amino)-propil]-amino}-propíl-amino-(amido)N-(oktil)-bleomicin, 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-(oktil)-bleomicin,
    3 -{N-metil-N-[3 - (p-ci ano-benzil-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-(oktil)-bleomicin g vagy
    3-{N-metil-N-[3-bisz(m,p-dibenziI-oxi-benzil)-amino-propilj-amino}-propil-amino-(amido)N-(n-oktil)-bleomicin előállítására, azzal jellemezve, hogy a 3-(N-metil-amino-propil)-amino-propil- 20 amino-(amido)N-(n-oktil)-bleomicint ciklooktilaldehiddel, p-klór-fenil-acetaldehiddel, p-cianofenil-benzaldehiddel vagy m,p-di(benzil-oxi)benzaldehiddel kondenzáljuk redukáló körülmények között.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás 5
    3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etiI-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-[3-(di-n-butil-amino)-propil]-bleomicin vagy
    3-{N-metil-N-[3-(p-ciano-benziI-amino)-propilj-amino}-propil-amino-(amido)N-[3-(di-n-butil-amino)-propil]-bleomicin előállítására, azzal jellemezve, hogy a 3-(N-metil-amino-propil)-aminopropil-amino-(amino)N-[3-(di-n-butil-amino)propilj-bleomicint p-klór-fenil-acetaldehiddel vagy p-ciano-benzaldehiddel kondenzáljuk redukáló körülmények között.
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás 3-{N-metil-N-[3-(2-(p-klór-fenil)-etil-amino)-propil]-amino}-propil-amino-(amido)N-{3-[NmetiI-N-[3-2-(p-klór-fenil)-etil-amino)-propil]-amino]-propil}-bleomicin előállítására, azzal jellemezve, hogy a 3-(N-metil-amino-propil)-amino-propilamino-(amido)N-{3-[N-metil-N-[3-)2-(p-klór-fenil)etil-amino)-propil]-amino]-propil}-bleomicint pklór-fenil-acetaldehiddel kondenzáljuk redukáló körülmények között.
  10. 10. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű (amido)-N-helyettesített-bleomicin-származékot a képletben BM, X, R, és R2 jelentése az 1. igénypont szerinti - a gyógyszerkészítésben szokásosan használt hordozó- és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk.
HU841839A 1983-05-14 1984-05-11 Process for the production of /amido/-n-substituted-bleomycin derivatives HU189110B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58084605A JPS59210100A (ja) 1983-05-14 1983-05-14 新規アミドｎ置換ブレオマイシン類の製造法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT34223A HUT34223A (en) 1985-02-28
HU189110B true HU189110B (en) 1986-06-30

Family

ID=13835313

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU841839A HU189110B (en) 1983-05-14 1984-05-11 Process for the production of /amido/-n-substituted-bleomycin derivatives

Country Status (9)

Country Link
JP (1) JPS59210100A (hu)
KR (1) KR910001725B1 (hu)
AT (1) AT380886B (hu)
CA (1) CA1276400C (hu)
CS (1) CS241086B2 (hu)
DK (1) DK237184A (hu)
ES (1) ES532369A0 (hu)
HU (1) HU189110B (hu)
YU (1) YU43845B (hu)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58116496A (ja) * 1981-12-29 1983-07-11 Nippon Kayaku Co Ltd アミドｎ置換ブレオマイシン類
JPS636078A (ja) * 1986-06-27 1988-01-12 Nippon Zeon Co Ltd 半導体用薬剤の収納容器部材

Also Published As

Publication number Publication date
AT380886B (de) 1986-07-25
JPS59210100A (ja) 1984-11-28
YU43845B (en) 1989-12-31
CS346884A2 (en) 1985-06-13
ES8506308A1 (es) 1985-07-01
CA1276400C (en) 1990-11-13
CS241086B2 (en) 1986-03-13
DK237184D0 (da) 1984-05-11
KR840009304A (ko) 1984-12-26
YU83784A (en) 1987-02-28
ATA157084A (de) 1985-12-15
KR910001725B1 (ko) 1991-03-22
JPH03879B2 (hu) 1991-01-09
DK237184A (da) 1984-11-15
HUT34223A (en) 1985-02-28
ES532369A0 (es) 1985-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6620916B1 (en) Modified physiologically active proteins and medicinal compositions containing the same
EP3610889A1 (en) Protein-active agent conjugates and method for preparing the same
EP0513543A1 (de) Amidinophenylalaninderivate, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und diese enthaltende Mittel als Antikoagulantien
HU196229B (en) Process for producing n-acylamino-glukuronyl aglykones of antibiotikum a 40926, aglycone of antibiotikum a 40926 and pharmaceutical compositions containing them as active components
AU622197B2 (en) BU-3608 derivatives
HU189110B (en) Process for the production of /amido/-n-substituted-bleomycin derivatives
KR0137779B1 (ko) 무레이도 마이신 그룹의 새로운 항생제, 그의 제조 및 그의 치료적 용도
JPS643879B2 (hu)
US3932374A (en) Bleomycinic acid and process for preparing thereof
EP0536455A1 (en) Novel microorganisms (Bacillus subtilis), antifungal peptides and processes for producing them
JPS595150A (ja) 抗微生物性ジスルフイドプロドラツグ
US3886133A (en) Process for preparing 3-aminopropyl ester of bleomycinic acid and bleomycinic acid including an acid salt and a copper complex thereof
EP0144750B1 (de) Neue Antibiotika, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung als Arzneimittel und Zwischenprodukte zu ihrer Herstellung
US4537880A (en) Aminopropylaminobleomycin derivatives and process for preparation thereof
US4500452A (en) (Amido)N-substituted bleomycins, salts thereof and process for preparation thereof
JPH03878B2 (hu)
Ishida et al. Isolation and characterization of lymphomycin
USRE30413E (en) Bleomycinic acid and process for preparing thereof
HU196217B (en) Process for production of new vinblastin-ensime-conjugates and their derivatives and medical compounds containing such substances
JPH0428000B2 (hu)
EP0135675B1 (en) Novel 3-(4'-aminobutylamino)-propylamino-bleomycin derivatives, a process for their preparation and their use as medicaments
JP2913101B2 (ja) 抗生物質ｔａｎ―１１７１およびその製造法
US3867257A (en) Bleomycinic acid and process for preparing thereof
JPS6260399B2 (hu)
JPS6261038B2 (hu)

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee