HU188953B - Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide - Google Patents

Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide Download PDF

Info

Publication number
HU188953B
HU188953B HU305983A HU305983A HU188953B HU 188953 B HU188953 B HU 188953B HU 305983 A HU305983 A HU 305983A HU 305983 A HU305983 A HU 305983A HU 188953 B HU188953 B HU 188953B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
mmol
glucose
reagent
cholesterol
determination
Prior art date
Application number
HU305983A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Ferenc Farago
Tamas Jancso
Gabriella Zajka
Ivan Daroczi
Original Assignee
Reanal Finomvegyszergyar,Hu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Reanal Finomvegyszergyar,Hu filed Critical Reanal Finomvegyszergyar,Hu
Priority to HU305983A priority Critical patent/HU188953B/hu
Priority to PL24942884A priority patent/PL141984B1/pl
Priority to DD26685684A priority patent/DD232558A5/de
Priority to SU843786908A priority patent/SU1505444A3/ru
Priority to FI843428A priority patent/FI77941C/fi
Priority to CS846580A priority patent/CS254978B2/cs
Priority to DE19843432348 priority patent/DE3432348A1/de
Priority to IN134/DEL/85A priority patent/IN163164B/en
Priority to CH198385A priority patent/CH669673A5/de
Publication of HU188953B publication Critical patent/HU188953B/hu

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/62Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/54Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/60Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/50Phenols; Naphthols; Catechols
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/90Developer
    • C12Q2326/964-Amino-antipyrine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Atalálmány tárgya új reagens glükóz, koleszterin és húgysav előnyösen biológiai mintákban történő meghatározására.
A glükóz, a koleszterin és a húgysav kimutatására és mennyiségi meghatározására számos eljárás ismert, azonban a legelteijedtebbek a kémiai színreakción alapuló módszerek, könnyű kivitelezésűk, olcsóságuk és méréstechnikai okok miatt.
Leggyakoribban az l-fenil-2,3-dimetil-3-aminopirazolin-5-on (a továbbiakban röviden: 4-aminofenazon) fenollal, fenolszármazékokkal, valamint szalacilsav-származékokkal képzett színreakcióját használják a fenti anyagok mérésére. A fenol 4amino-fenazonnal végbemenő reakcióját P. Trinder (Ann. Clin. Biochem. 6, 24 (1969)) alkalmazta először vércukor meghatározására. Ennek a metodikának az orvosi jelentősége olyan nagy, hogy számtalan hasonló módszert dolgoztak ki erre a célra.
Ezek általános hibája az, hogy mérési karakterisztikájuk nem lineáris, a keletkezett szín nem kellően stabil, illetve fényérzékeny. (Lásd: a fenti közlemény 1. sz. táblázata, illetve 3. sz. ábránk).
Felvetődött tehát a szükségessége egy, ezen hátrányokkal nem rendelkező új módszer kidolgozásának.
Vizsgálataink során arra a meglepő felismerésre jutottunk, hogy ha a színes termék képzéséhez a 4-amino-fenazont és a timolt választjuk, akkor az optimális feltételek kidolgozása esetén egy kitűnő, jól használható (stabil, nem fényérzékeny, lineáris karakterisztikájú) fotometriás reakciót hozhatunk létre, melynek érzékenysége is igen jó.
A szakirodalomból (Pharmazie 29, 424(1974)) ismert, hogy a 4-amino-fenazon kálium-ferricianid oxidálószer jelenlétében fenollal és különböző fenol-származékokkal, köztük timollal is színreakciót ad. Ezt a színreakciót a szerzők különféle drogok, gyógyszerkészítmények és vegyi anyagok fenol-tartalmának kimutatására használták fel.
Minthogy az idézett közlemény szerint a timol nem mérő reagensként, hanem kimutatandó anyagként szerepelt, nyilvánvaló, hogy a szerzők a timol optimális koncentrációjával, a képződött színes termék abszorpciós tulajdonságaival, a mérési karakterisztika linearitásával egyáltalán nem foglalkoztak. Nem vizsgálták a szerzők a timol és az oxigén felszabadítására adott esetben felhasznált enzimek kompatibilitási viszonyait sem. Az idézett közleményből csupán annyi állapítható meg, hogy 4-amino-fenazon és timol oxidálószer jelenlétében végrehajtott reakciója során színes termék képződik, ennek analitikai hasznosításáról azonban semmiféle következtetés nem vonható le
A találmány tárgya tehát reagens glükóz, koleszterin és húgysav előnyösen biológiai mintákban történő meghatározására, amely 4-amino.2 fenazont, ismert pufferoldatot, ismert stabilizálószert, ismert detergenst, adott esetben enzimkatalizátort tartalmaz. A találmány szerinti reagens reaktánsként timolt (para-izopropil-metakrezolt) tartalmaz, 2,30—2,70 mmól/liter, előnyösen 2,5 mmól/liter koncentrációban.
A találmány szerinti reagens egyik előnyös kiviteli alakjánál a timolt rövidszénláncú alkanolban, célszerűen etanolban, a többi kémiai anyagot pedig desztillált vízben oldjuk fel, és az alkoholos és vizes oldatot felhasználás előtt 1:4 arányban elkeverjük. így a reagens a timolt 2,5±0,2 mmól/liter koncentrációban tartalmazza.
Az egyéb kémiai anyagok koncentrációja a reagensben:
Foszfát-puffer 0,08 ±0,02 mól/1
4-Aminó-fenazon 0,8 ±0,2 mmól/1
Nátrium-azid 12,3±0,l mmól/1
Etanol 3300± 1000 mmól/1
A találmány szerinti reagens használatakor úgy járunk el, hogy a timolt és a 4-amino-fenazont alkalmas koncentrációkban, megfelelő pufferes közegben összehozzuk a vizsgálni kívánt anyagokkal (glükóz, koleszterin, húgysav), amelyek specifikus enzimatikus reakciókkal hidrogén- peroxid képződését eredményezik. Ebből peroxidázzal naszcensz oxigént szabadítunk fel, ami létrehozza a 4-(2’-izopropil-5’-metil-l4’-benzokinonmono-imino)-fenazont, a színes terméket. Olyan anyagok esetében, amelyek önmaguk katalizálják a hidrogén-peroxid bomlását (például: hemoglobin), enzimes kiegészítő reakcióra nincs szükség, csak a hidrogén-peroxid, valamint a színképző 4-amino-fenazon és a timol kerül a reakcióelegybe.
A találmány szerinti új reagens használatának több előnye van. Ezeket az alábbiakban foglaljuk össze:
a) A színreakció kialakulása jól definiált pH tartományban: pH 7,0—pH 8,0 optimálisan pH = 7,5 értéknél biztosított.
b) A kialakult színes termék fényelnyelésének maximuma a 475—490 mm hullámhosszak közé esik, ezért ebben a tartományban célszerű a fotometriás méréseket végezni, optimálisan 483 mm-nél.
c) Lényeges, hogy a fotometrálható szín kialakulása aránylag gyors. Megállapítottuk, hogy szobahőfokon 25 perc, míg 37 °C-on 15 perc alatt kialakul a stabil szín.
d) Az optimális pH érték beállításához, többféle puffer jöhet szóba: tris-foszfát, dinátriumhidrogén-foszfát — kálium-hidrogén-foszfát, dikálium-hidrogén-foszfát - kálium-dihidrogén-foszfát, és nátrium-borát - sósav.
e) Sikerült megállapítanunk a legmegfelelőbb timol koncentrációt, illetve annak oldószerét is. A timol számára a legcélszerűbb oldószerként a metil-, etil-, izopropil-alkohol közül az etil-21 alkoholt találtuk. A timol-koncentráció optimalizálását az 1. táblázat mutatja, mely szerint ez 2,5 mmól/1- A méréseket adott koncentrációjú (11,10 és 27,75 mmól/1) töménységű glükóz oldattal végeztük.
1. táblázat
timol mmól/1 1,330 2,000 2,500 3,000 4,000 5,000
extinkció 11,1 mmól/1 0,330 0,365 0,370 0,370 0,370 0,370
extinkció 27,75 mmól/1 0,750 0,860 0,870 0,870 0,870 0,870
Látható, hogy mindkét glükóz-oldat esetében
2,5 mmól/l-es timol-koncentrációnál kapjuk meg a tovább már nem növekvő extinkciót (színintenzitást). 20
f) A 4-amino-fenazon koncentráció optimalizálását a 2. táblázat adataiból láthatjuk. A méréseket itt is glükóz-oldattal, és 2,5 mmól/1 töménységű timol-oldattal végeztük..
2. táblázat
4-amino-fenazon mmól/1 0,200 0,400 0,600 0,800 1,00
extinkció 11,1 mmól/1 0,350 0,370 0,370 0,370 0,370
extinkció 27,75 mmól/l 1 - - --- --- -J 0,800 0,860 0,870 0,870 0,871
A táblázat adatai szerint már 0,600 mmól/1 koncentráció is maximális, és tovább nem yáltozó extinkciót adott, de biztonsági okokból 0,800 mmól/1 koncentráció tekinthető optimálisnak. 40
g) Optimalizáltuk a glükóz, koleszterin és a húgysav rnéréséhez szükséges peroxidáz koncentrációt is. (Lásd 3. táblázat.) E szerint a legalkalmasabb töménység a 15 U/ml. 1 U = 1 nemzetközi egység, amely 1 mmól szubsztrátot 45 1 perc alatt lebont. A felhasznált peroxidáz más enzimszennyezést zavaró töménységben nem tartalmazhat,
3. táblázat
Peroxidáz aktivitás 8 U/ml 10 U/ml 12 U/ml 14 U/ml 15 U/ml 19 U/ml
extinkció 27,75 mmólfl 0,820 0,850 0,865 0,870 í 0,870 0,870
Látható az adatokból, hogy a szőlőcukorral kiváltott szín intenzitása (extinkciója) már 14 U/ml enzimaktivitásnál eléri a maximumot, de a kellő biztonság miatt a 15 U/ml aktivitás mellett döntöttünk, koleszterin és húgysav meghatározásakor pedig a 18 U/ml aktivitás mellett.
h)A koleszterin-meghatározásnál az oldékonyság megkönnyítésére detergenseket használtunk, így 9-lauriléter-polietilénglikoléter: LÓBA, Austria) vagy Brij 45. (polioxietilénlauriléter: BDH, Anglia) használható.
Ezek optimális koncentráció tartománya: 0,4—
1,2%. Találmányunk szerinti reagens gyakorlati használhatóságát az alábbi eljárásokkal vizsgáltuk. 1. Kalibrációk tapasztalatai:
2,775-33,300 mmól/1 töménységi tartományban vizsgáltuk a szőlő cukor kimutathatóságát és mennyiségi mérhetőségét. Az adatokat részben a
4. táblázatban, részben az 1. ábrán foglaltuk össze matematikai kiértékelés után. Az adatokból látható, hogy a mérési karakterisztika — az adott tartományban — lineáris. A színreakció kifogástalan működése miatt a cukor jól mérhető.
A 4. táblázatban használt jelzések az alábbiak: x: bemért cukor koncentráció; n: párhuzamos mérések száma; y: a mért extinkciók átlagai;
Y: a kalibrációs egyenes egyenletéből számított extinkciók;
d%: a mért és számított extinkciók %-os különbsége (100% a számított);
fR: a regresszió próbája;
Fj : linearitás „F” próbája;
sz.f.:linearitás szabadságfokai; ,
P: linearitás valószínűsége: mivel ez nagyobb
10%-nál, ezért nem tér el szignifikánsan az egyenestől.
4. táblázat
X mmól/I 2,775 5,550 8,325 11,100 13,875 16,650 22,200 27,750 33,300
n 3 3 3 3 3 3 3 3 3
y 0,0950 0,1833 0,2783 ^0,3683 0,4616 0,5500 0,7300 0,9133 1,1210
Y 0,0951 0,1860 0,2769 0,3679 0,4588 0,5497 0,7316 0,9135 1,0953
d% -0,10 -1,45 +0,50 +0,10 +0,61 +0,05 -0,22 -0,02. +2,32
Fr=246 895 FL=1,20746; (sz. f.: 6; 16) P0,10 ____.. ..
-3188953
2. Referens módszerhez való hasonlítás tapasztalatait
Referens módszerként a nemzetközileg elfogadott Boehringer-féle hexokinázos UV tesztet használtuk. Cukortartalmú oldatként ez esetben (45 5 db, válogatás nélküli) emberi vérmintát alkalmaztunk A 2. ábra azt mutatja, hogy nincs eltérés a két módszerrel kapott eredmények között, hiszen a korrelációs koefficiens (r=40,9971 jól megközelíti az elméletileg elérhető 1,000-et, a regressziós 10 egyenes meredeksége pedig 0,4%-kal tér csak el az ideális 1,OOO-től.
3. Mérési adatainkból meghatároztuk az eljárás érzékenységét, reprodukáltságát és a torzítását is. Ezek a statisztikai számítások az alábbi eredmé- 15 nyékét adták:
Érzékenység: ±0,17 mmól/1 (cukorra vonatkoztatva)
Pontosság: ±0,18 mmól/1 (cukorra vonatkoztatva) 20
Torzítás: ±0,35% (cukorra vonatkoztatva).
Találmányunk szerinti reagens a fentieken túl még olyan jelentős előnnyel is rendelkezik, hogyi alkalmas egyrészt az emberi és állati eredetű bio-j lógiai mintákban (vér, vizelet, likvor) található 25 glükóz, koleszterin és húgysav koncentrációk mennyiségi mérésére, másrészt a glükóz (szőlőcukor) meghatározására emberi fogyasztásra alkalmas italokból (szeszes italok, szörpök, üdítő italok) illetőleg más, glükóz, vagy koleszterin, vagy 30 húgysav tartalmú oldatok mérésére is.
Kiemelésre kívánkozik az is, hogy reagensünk lényeges előnyt mutat az ismert tesztekkel szemben is. Számszerűen ez annyit jelent, hogy míg a saját módszerünk színe legalább 240 percig 35 teljesen változatlan, az ismert módszereknél egy rövid maximum után (45 perc múlva) folyamatosan csökkenő színintenzitást mutat.
A találmány szerinti reagenst, illetve annak mérésében való felhasználását az alábbi példákon 40 mutatjuk be:
1. példa: Glükóz meghatározás vérszérumból a-oldat: 0,1 mől/liter foszfát puffer-oldatban, ahol pH =' 7,5(Na2, HPO4-2H2O és KH2PO4) a következő anyagokat oldjuk: 45 glükóz-oxidáz: 10 U/ml;
peroxidáz: 18U/ml,
4-amino-fenazon: 1,0 mmól/1, ___nátriumazid: 12,3 mmól/1.
b-oldat: 12,5 mmól/1 timol 96%-os desztillált 50 etilalkoholban.
Munkareagens: az a és b oldatot felhasználás előtt 4:1 arányban elkeveqük.
Standardírozás: 11,1 mmól/1 töménységű (hidegen telített benzoésavban oldott) glükóz- 55 oldattal.
Meghatározás: kémcsövekbe, 3,0-3,0 ml munkareagenshez 0,02 ml standardot, illetve a további csövekbe 0,02 ml vérszérumot mérünk.
Az anyagokat elkeverjük, majd állni hagyjuk. 60 4' (Szobahőmérsékleten 30 percig, vagy 37 °C-on 15 percig.) Az utóbbi esetben 10 perc lehűlés után a keletkező színt vakpróbával összehasonlítva fotometriásan méljük, 1 cm-es küvettavastagságnál 483 mm hullámhosszon. Számítás:
Vérszérum glükóz mmöl/1 koncentráció =
Minta extinkció = - - x 11,1
Standard extinkcióAz eljárás 0-30 mmól/1 tartományban lineáris.
2. példa: összkoleszterin meghatározás vérszérumból
a) oldat: 0,1 mól/l-es, pH 7,5-ös foszfát-pufferben a következő anyagokat oldjuk fel: peroxidáz:
koleszterinészteráz: kolesz terinoxigáz;; 4-aminofenazon. nátriumazid 9-lauriléter:
Triton X—100: Brij—35:
U/ml,
12,5 U/ml, 6 U/ml, 1,0 mmól/1,
12,3 mmól/1, .5,0 g/1 vagy 5 tn/1, vagy 5 g/1.
b) oldat: 12,5 mmól/1 timol, 96%-os redesztillált etilakoholban.
Munkareagens: az a és b oldatot felhasználás előtt 4:1 arányban elkeverjük.
Standardírozás: 5,2 mmól/1 etilakoholban oldott koleszterin standard.
Meghatározás: 2,0-2,0 ml munkareagenshez 0,02 ml standard oldatot, illetve szérumot adunk. Elkeveqük, majd állni hagyjuk, vagy szobahőmérsékleten 30 percig, vagy 37 °C-on 15 percig. 10 perc hűlés után a keletkező színt vakpróbával összehasonlítva fotometriásan mérjük 1 cm-es küvettavastagságnál 483 mm hullámhosszon. Számítás: Vérszérum-koleszterin (mmól/1) koncentráció =
Minta extinkció -------- χ5;2
Standard extinkció
Az eljárás 0-13 mmól/1 tartományban lineáris.
3. példa: Húgysav meghatározás vérszérumból
a) oldat: 0,1 mól/l-es pH 7,5-ös foszfát-pufferben a következő anyagokat oldjuk:
peroxidáz: 18Uml, urikáz: 6 U/ml,
4-aminofenazon. 1,0 mmól/1, .
nátrium-azid: 12,3 mmól/1.
b) oldat: 12,5 mmól/1 timol 96%-os etilalkoholban. Munkareagens: a és 6 oldat 4:1 arányú keveréke. Standardírozás: 595 pmól/l húgysav standarddal. Meghatározás: 2,0-2,0 ml reagenshez 0,2 ml standard, vagy szérum mintát mérünk. Elkeverjük, majd vagy szobahőmérsékleten 60 percig, vagy 37 °C-on 30 percig állni hagyjuk. Fotometria: 1 cm-es küvettában, 483 mm-en a keletkező színt vakpróbával összehasonlítva fotometriásan méljük.
Számítás: vérszérum húgysav pmól/l koncentráció =
- MÍnta eXtinkCÍŐ y 5
Standard extinkció
Az eljárás 0-900 Mmól tartományban lineáris.

Claims (5)

Szabadalmi igénypontok
1. Reagens glükóz, koleszterin vagy húgysav előnyösen biológiai mintákban történő meghatározására, amely 4-amino-fenazont, ismert puffer-oldátot, ismert stabilizáló szert, ismert deter- 75 genst, és adott esetben enzim-katalizátort tartalmaz, azzal jellemezve, hogy reaktánsként timolt (para-izopropil-meta-krezolt) tartalmaz előnyösen rövidszénláncú alkanolban, még előnyösebben etanolban oldva, 2,30-2,70 mmól/liter, elő-20 nyösen 2,5 mmól/liter koncentrációban.
2. Az 1. igénypont szerinti reagens, azzal jellemezve, hogy
0,6-1,0 mmól/1, előnyösen 0,8 mmól/1 4-amino-fenazont,
5 0,06-0,1 mól/1 pufferoldatot, előnyösen
0,08 mól/1 Na2HPO4—KH2PO4 pufferoldatot, 11,9-12,7 mmól/1, előnyösen 12,
3 mmól/l nátrium-azidot, mint stabilizálószert, 2300-4300 mmól/1, előnyösen 3300 mmóVl 10 etanolt, 0,2-1,0%, előnyösen 0,4% polioxietilén-éter-típusú detergenst, és glükóz-meghatározás esetében 8-12 U/ml, előnyösen 10 U/ml glükóz-oxidázt és
13-19 U/ml, előnyösen 15 U/ml peroxidázt, illetve koleszterint meghatározás esetében 10-14 U/ml, előnyösen 12,5 U/ml koleszterinészterázt és
4-6 U/ml, előnyösen 5 U/ml koleszterin-oxidázt és 13-19 U/ml, előnyösen 18 U/ml peoxidázt, illetve húgysav-meghatározás esetében
4-6 U/ml, előnyösen
5 U/ml urikázt és 13—49 U/ml, előnyösen 18 U/ml peroxidázt * tartalmaz.
HU305983A 1983-09-02 1983-09-02 Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide HU188953B (en)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU305983A HU188953B (en) 1983-09-02 1983-09-02 Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide
PL24942884A PL141984B1 (en) 1983-09-02 1984-08-31 Reagent for determination of glucose,cholesterol,uric acid and haemoglobin
DD26685684A DD232558A5 (de) 1983-09-02 1984-08-31 Reagens zur bestimmung von glukose, cholesterin, harnsaeure und haemoglobin
SU843786908A SU1505444A3 (ru) 1983-09-02 1984-08-31 Способ определени глюкозы в биологических жидкост х
FI843428A FI77941C (fi) 1983-09-02 1984-08-31 Reagens foer bestaemning av glukos, kolesterol, urinsyra och hemoglobin.
CS846580A CS254978B2 (en) 1983-09-02 1984-08-31 Agent for glucose,cholesterol and haemoglobin determination
DE19843432348 DE3432348A1 (de) 1983-09-02 1984-09-03 Reagenzien zur bestimmung von glucose, cholesterin, harnsaeure und haemoglobin, vorteilhaft in biologischen proben, sowie ihre verwendung
IN134/DEL/85A IN163164B (hu) 1983-09-02 1985-02-18
CH198385A CH669673A5 (hu) 1983-09-02 1985-05-08

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU305983A HU188953B (en) 1983-09-02 1983-09-02 Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU188953B true HU188953B (en) 1986-05-28

Family

ID=10962331

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU305983A HU188953B (en) 1983-09-02 1983-09-02 Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide

Country Status (9)

Country Link
CH (1) CH669673A5 (hu)
CS (1) CS254978B2 (hu)
DD (1) DD232558A5 (hu)
DE (1) DE3432348A1 (hu)
FI (1) FI77941C (hu)
HU (1) HU188953B (hu)
IN (1) IN163164B (hu)
PL (1) PL141984B1 (hu)
SU (1) SU1505444A3 (hu)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0218083A1 (en) * 1985-09-03 1987-04-15 Abbott Laboratories Stabilized cholesterol reagent and method for determining total cholesterol using the reagent

Also Published As

Publication number Publication date
FI843428A0 (fi) 1984-08-31
IN163164B (hu) 1988-08-20
PL141984B1 (en) 1987-09-30
FI77941B (fi) 1989-01-31
FI843428A (fi) 1985-03-03
PL249428A1 (en) 1985-05-21
SU1505444A3 (ru) 1989-08-30
FI77941C (fi) 1989-05-10
CS254978B2 (en) 1988-02-15
DE3432348A1 (de) 1985-03-21
DD232558A5 (de) 1986-01-29
CS658084A2 (en) 1987-07-16
CH669673A5 (hu) 1989-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4517287A (en) Method and reagent for the enzymatic determination of enzyme substrates
JPH02174695A (ja) 酵素酸化によるアナライトの比色定量方法および試剤、およびそのための還元発色性電子受容体
Matsubara et al. Spectrophotometric determination of hydrogen peroxide with titanium 2-((5-bromopyridyl) azo)-5-(N-propyl-N-sulfopropylamino) phenol reagent and its application to the determination of serum glucose using glucose oxidase
US8883439B2 (en) Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method
WO1980001389A1 (en) Test piece for measuring glucose
US4273868A (en) Color stable glucose test
US4698300A (en) Process and reagent for the determination of α-amylase
AU6602890A (en) Haloperoxidase acid optimum chemiluminescence assay system
JPS6134799B2 (hu)
US3630847A (en) Diagnostic agent for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances
JPS6315168A (ja) 血液又は血液から誘導された試料中の血清フルクトサミン含量を特異的に測定する際に蛋白質基質効果を回避するための方法及び製剤
US4291121A (en) Bilirubin-resistant determination of uric acid and cholesterol
US3862012A (en) Quantitative determination of uric acid
Reljic et al. New chromogen for assay of glucose in serum
HU188953B (en) Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide
GB2049180A (en) Bilirubin-resistant determination of uric acid
Kovar et al. Determination of cholesterol in sera
RU2122740C1 (ru) Способ определения мочевины в биологических жидкостях и набор реактивов для его осуществления
US6379915B1 (en) Diagnostic compositions and devices utilizing same
US3592741A (en) Method for analysis of urea
Krug et al. Enzyme-based fiber-optic device for the determination of total and free cholesterol
US6030802A (en) Liquid reagent set for L-lactate determination
JP4544598B2 (ja) 液状試薬および保存方法
AU595993B2 (en) Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation
JPH02276597A (ja) 体液中のカルシウム測定方法

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee