CS254978B2 - Agent for glucose,cholesterol and haemoglobin determination - Google Patents
Agent for glucose,cholesterol and haemoglobin determination Download PDFInfo
- Publication number
- CS254978B2 CS254978B2 CS846580A CS658084A CS254978B2 CS 254978 B2 CS254978 B2 CS 254978B2 CS 846580 A CS846580 A CS 846580A CS 658084 A CS658084 A CS 658084A CS 254978 B2 CS254978 B2 CS 254978B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- liter
- mmol
- glucose
- cholesterol
- concentration
- Prior art date
Links
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 title claims description 24
- 239000008103 glucose Substances 0.000 title claims description 24
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 title claims description 23
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 title claims description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 title claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 13
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- IJALWSVNUBBQRA-UHFFFAOYSA-N 4-Isopropyl-3-methylphenol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(O)C=C1C IJALWSVNUBBQRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 description 15
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical group OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- -1 polyethylethylene Polymers 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 2
- WYXXLXHHWYNKJF-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-4-propan-2-ylphenol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(O)C(C)=C1 WYXXLXHHWYNKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFTNYASYRGXQAA-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1,5-dimethyl-2-phenylpyrazolidin-3-one Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1N(C(CC1=O)(N)C)C YFTNYASYRGXQAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008620 Cholesterol Assay Methods 0.000 description 1
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 description 1
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- VEQOALNAAJBPNY-UHFFFAOYSA-N antipyrine Chemical compound CN1C(C)=CC(=O)N1C1=CC=CC=C1 VEQOALNAAJBPNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229960005222 phenazone Drugs 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 229940058287 salicylic acid derivative anticestodals Drugs 0.000 description 1
- 150000003872 salicylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- SPOMEWBVWWDQBC-UHFFFAOYSA-K tripotassium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O SPOMEWBVWWDQBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGUDRSADMCSYHV-UHFFFAOYSA-N trisodium borate hydrochloride Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].Cl.[O-]B([O-])[O-] PGUDRSADMCSYHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/50—Phenols; Naphthols; Catechols
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/96—4-Amino-antipyrine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Předložený vynález se týká nového činidla ke stanovení glukózy, cholesterolu a hemoglobinu, zejména v biologických vzorcích.
К důkazu a kvantitativnímu stanovení glukózy, cholesterolu a hemoglobinu jsou známy četné postupy. Vzhledem к jednoduché proveditelnosti a levnosti i z důvodů technického měření jsou nejrozšířeněji používanými metodami spočívající na chemické barevné reakci.
К měření shora uvedených látek se obecně používá barevné reakce s l-fenyl-2,3-dimethyl-3-aminopyrazolin-5-onem (dále označovaným jako 4-aminofenazon), fenolem, deriváty fenolu a deriváty salicylové kyseliny. Reakci probíhající s fenol-4-aminofenazonem použil poprvé ke stanovení krevního cukru P. Trinder [Ann. Clin. Biochem. 8, 24 (1969)]. Důležitost této metodiky z lékařského hlediska je tak značná, že pro tento účel byly vypracovány četné podobné metody.
Obecná nevýhoda těchto metod spočívá v tom, že charakteristika měření není lineární a vznikající barva není dostatečně stálá, popřípadě je citlivá vůči světlu (srov. tabulku 1 shora citovaného článku a tabulku 3 obsaženou v další části popisu tohoto vynálezu).
Cílem tohoto vynálezu bylo vypracovat nový systém, který by odstranil nevýhody známých metod.
Vynález spočívá na překvapivém poznatku, že když se к vytvoření barevného produktu použije 4 aminofenazonu a thymolu, pak dochází za optimálních podmínek к výtečné, velmi dobře použitelné (stálé, necitlivé vůči světlu a s lineární charakteristikou) fotometrické reakci s velmi dobrou citlivostí.
Předložený vynález se týká činidla ke stanovení glukózy, cholesterolu a hemoglobinu, zejména v biologických vzorcích, které obsahuje 4-aminofenazon, roztok pufru, stabilizátor, detergent a popřípadě enzymatický katalyzátor, jehož podstata spočívá v tom, že jako indikátor obsahuje p-isopropyl-m-kresol (thymol).
Podle výhodné formy provedení činidel podle vynálezu se thymol rozpustí v nižším alkoholu, zvláště v ethanolu; ostatní chemické látky se rozpustí v destilované vodě a alkoholické a vodné roztoky se navzájem smísí v poměru 1:4. Takto vyrobené činidlo obsahuje thymol v koncentraci 2,5 + 0,2 mmolu/litr.
molu/litr mmolu/litr mmolu/litr mmolu/litr
Koncentrace dalších chemických látek v činidle je následující:
fosfátový pufr 0,08 +0,02
4-aminofenazon 0,8 +0,2 azid sodný 9,85 +0,1 ethanol 330,0+ 20
Činidlo podle vynálezu se používá následujícím způsobem:
Thymol a 4-aminofenazon se uvedou ve styk v pufrovaném prostředí ve vhodných koncentracích vzhledem ke stanovovaným látkám (glukóza, cholesterol). Tím se specifickými enzymatickými reakcemi tvoří peroxid vodíku. Ze vzniklého peroxidu vodíku se pomocí peroxydázy uvolňuje nascentní kyslík, který vytváří 4-(2‘-isopropyl-5*-methyl-l‘,4‘-benzochinonmonoímino)fenazon, tj. barevný produkt. V případě látek, které jsou samy schopny katalyzovat rozklad peroxidu vodíku (například hemoglobin), není doplňující enzymatická reakce nutná, a к reakční směsi se přidává jen peroxid vodíku, barvotvorný 4-aminofenazon a thymol.
Nové činidlo podle vynálezu má četné výhody, které je možno shrnout následovně:
a) barevná reakce se uskutečňuje v dobře definovaném rozsahu pH (pH = 7,0 až 8,0, výhodně 7,5);
b) maximum absorpce světla vzniklého barevného produktu spadá do rozsahu vlnových délek 465 až 480 nm; je proto účelné provádět fotometrické měření v tomto rozmezí, zejména při 475 nm;
c) je zvlášť důležité, aby se fotometricky prokazatelná barva tvořila poměrně rychle. Bylo zjištěno, že stálá barva vzniká při teplotě místnosti během 25 minut a při teplotě 37 °C během 15 minut.
d) к úpravě optimální hodnoty pH přicházejí v úvahu různé pufry (jako například tris-fosfát, Na2HPO4 — KH2PO4, K2HPO4 — KH2PO4 a boritan sodný — chlorovodíková kyselina);
e) podařilo se zjistit příznivou koncentraci thymolu, popřípadě jeho rozpouštědla. Je účelné rozpouštět thymol v methanolu, ethanolu nebo isopropanolu, zejména v ethanolu. Optimalizace koncentrace thymolu je uvedena v tabulce 1; optimální hodnota činí mmol/litr. Měření se provádí s roztokem glukózy uvedené koncentrace (11,10 a 27,75 mmol/litr).
Tabulka 1
| Thymol mmol/litr | 1,330 | 2,000 | 2,500 | 3,000 | 4,000 | 5,000 |
| extinkce 11,1 mmolu/litr | 0,330 | 0,365 | 0,370 | 0,370 | 0,370 | 0,370 |
| extinkce 27,75 mmolu/litr | 0,750 | 0,860 | 0,870 | 0,870 | 0,870 | 0,870 |
Je zřejmé, že v případě obou roztoků glukózy se získá nejvyšší, dále již nestoupající extinkce (intenzita barevné reakce) při koncentraci thymolu 2,5 mmolu/litr;
f) Optimalizace koncentrace 4-aminofe nazonu je uvedena v tabulce 2. Měření se i v tomto případě provádějí s roztokem glukózy a s roztokem thymolu o koncentraci
2,5 mmolu/litr.
Tabulka 2
| 4-aminofenazon | 0,200 | 0,400 | 0,600 | 0,800 | 1,000 |
| mmol/litr | |||||
| extinkce | 0,350 | 0,370 | 0,370 | 0,370 | 0,370 |
| 11,1 mmolu/litr | |||||
| extinkce | 0,800 | 0,860 | 0,870 | 0,870 | 0,871 |
27,75 mmolu/litr
Podle této tabulky se maximální extinkce, která se dále již nemění, dosáhne při koncentraci 0,600 mmolu/litr. Pro jistotu se jako· optimální posuzuje koncentrace 0,800 mmolu/litr.
g) Koncentrace peroxidu potřebná pro měření glukózy a cholesterolu se rovněž optimalizuje (viz tabulku 3). Jako optimální se ukázala koncentrace 15 j./ml (1 j. = = 1 internacionální jednotka; tj. množství, které během 1 minuty nahradí 1 mmol substrátu). Používaná peroxidáza nesmí obsahovat další enzymatické nečistoty v rušivých koncentracích.
Tabulka 3
| Aktivita peroxidázy extinkce 27,75 mmolu/litr | 8 j./ml 0,820 | 10 j./ml 0,850 | 12 j./ml 0,865 | 14 j./ml 0,870 |
| aktivita peroxidázy | 15 j./ml | 17 j./ml | ||
| extinkce 27,75 mmolu/litr | 0,870 | 0,870 |
Ze shora uvedené tabulky je patrno, že maximální intenzity (extinkce) barvy vytvářené pomocí glukózy se dosahuje již při aktivitě enzymu 14 j./ml. Pro jistotu se používá aktivity 15 j./ml.
h) Při stanovení cholesterolu se používá detergentu, aby se zvýšila rozpustnost. Pro tento účel lze použít 9-lauryletherpolydekanolu (Sigma, (JSA), Triton X-100 (oktylfenolpolyethylethylenglykolether, LOBA, Rakousko) nebo Brij 35 (polyoxyethylenlaurylether, BDH, Velká Británie).
Optimální rozsah koncentrace shora uvedeného prostředku činí 0,4 až 1,2 %.
Praktická použitelnost činidel podle vy nálezu je objasněna dále uvedenými pnstuРУ:
1. Zkušenosti získané s 'kalibrací
Dokazovatelnost a kvantitativní měřitelnost glukózy se určuje v rozmezí 'koncentrací od 2,775 do 33,300 mmolu/litr. Údaje jsou dílem obsaženy v tabulce 4 a> dílem jsou uvedeny na obr. 1 (po matematickém vyhodnocení). Ze shora uvedených údajů je patrné, že charakteristika měření je —v uvedeném rozsahu — lineární. Barevná reakce probíhá úplně a glukóza je výtečně měřitelná.
о со гЧ Ю со сл сч Y-Ч CZ СО
СО гН т—Г СЧ~ +
со со ю со со гЧ гЧ СЧ СТ) СП о θ' θ' θ'
SS5
LO UO Ю in Ó 00 θ' θ' CD +
Tabulka 4
V tabulce 4 bylo použito následujících zkratek:
x = koncentrace navážené glukózy n = počet paralelních měření у = průměrná hodnota naměřených extinkcí
Y = extinkce vypočtené z rovnice kalib- rační přímky d % = procentuální rozdíl mezi naměřenou a vypočtenou extinkcí (vypočteno = 100 %)
Fr = zkouška regrese
Fl = „F:‘ zkouška linearity F. G. = stupeň volnosti linearity
P = pravděpodobnost linearity; vzhledem к tomu, že tato hodnota není vyšší než 10 %, neodchyluje se křivka statisticky významně od přímky.
2. Zkušenosti získané se srovnáním s referenční metodou
Jako referenční metoda slouží mezinárodně uznávaný hexokinásový UV-test (Boehringer). Jako roztoku s obsahem cukru se v tomto případě používá 45 lidských vzorků krve (bez výběru). Z obr. 2 je patrno, že mezi výsledky získanými podle těchto dvou metod není žádný rozdíl, vzhledem к tomu, že korelační koeficient (r = = +0,9971) se téměř blíží teoretické hodnotě 1,000 a strmost regresní přímky se odchyluje od teoretické hodnoty 1,000 ipouze o 0,4 %.
3. Citlivost, reprodukuvatelnost a zkreslení postupu se určuje na základě získaných výsledků měření. Tyto statistické výpočty skýtají následující výsledky:
citlivost:
+ 0,17 mmolu/litr (vztaženo na glukózu) přesnost:
+ 0,09 iminolu/litr (vztaženo na glukózu) zkreslení:
+ 0,35 % (vztaženo na glukózu)
Činidlo podle vynálezu má kromě shora uvedených výhod ještě <také následující podstatné výhody:
Uvedené činidlo je na straně jedné vhodné ke kvantitativnímu stanovení glukózy, cholesterolu popřípadě hemoglobinu, kteréžto látky se vyskytují v biologických vzorcích lidského a zvířecího původu (jako je například krev, moč, tělní tekutiny) a na straně druhé se hodí ke zjišťování obsahu glukózy v nápojích určených pro lidskou potřebu (například v alkoholických nápojích, šťávách, osvěžujících nápojích), popřípadě к měření dalších roztoků, které obsahují glukózu či cholesterol.
Nutno zdůraznit, že činidlo podle vynále8 zu jasně předčí dosud známé testy. Z číselného srovnání vyplývá, že barva dosažená při metodě podle vynálezu zůstává zcela nezměněna alespoň 240 minut, zatímco v případě známých metod je možno pozorovat po krátké maximální fázi (po 45 minutách) kontinuální pokles barevné intenzity (srov. obr. 3).
Legenda к obrázkům:
Obr. 1:
na ose pořadnic jsou uvedeny hodnoty extinkce, na ose úseček je uvedena koncentrace mmol/litr;
Obr. 2:
na ose pořadnic jsou uvedeny hodnoty mmol/litr dosažené metodou podle vynálezu, na ose úseček jsou uvedeny hodnoty v mmol/litr dosažené za použití známé metody (Boehringer);
Obr. 3:
na ose pořadnic jsou uváděny hodnoty extinkce při koncentraci cukru 11,1 mmolu na litr, na ose úseček jsou uváděny hodnoty v minutách, křivka 1 je pro metodu podle vynálezu, křivka 2 je pro známou metodu (Sclavo), křivka 3 je pro známou metodu (Gálenopharm).
Činidlo podle vynálezu a jeho použiti ilustrují následující příklady. Tyto příklady však rozsah vynálezu v žádném směru neomezují.
Příklad 1
Stanovení glukózy v krevním séru
Roztok A:
V 0,1 molu/litr roztoku fosfátového pufru (pH = 7,5; Na2HPOd. 2 H2O а KH2PO4) se rozpustí následující látky:
| glukosidáza peroxidáza 4-aminofenazon azid sodný | 12,5 j./ml 18,0 j./ml 1,0 mmolu/litr 12,3 mmolu/litr | |
| Roztok B: |
12,5 mmolu/litr thymolu v 96% ethanolu (s destilovanou vodou)
Činidlo se připraví tak, že se smísí roztok A a roztok В v poměru 4 : 1.
Standardisace se provádí pomocí roztoku glukózy (11,1 mmolu/litr) (rozpuštěné ve studené nasycené benzoové kyselině).
Stanovení:
Do zkumavek se naváží vždy 3,0 ml činidla, 0,02 ml standardu popřípadě do dalších zkumavek 0,02 ml krevního séra.
Látky se smísí a nechají se stát (při teplotě místnosti po dobu 30 minut nebo při teplotě 37 °C po dobu 15 minut). V posléze uvedeném případě se barva vzniklá po 10minutovém chlazení srovnává fotometricky se slepým vzorkem (tloušťka kyvety 1 cm, vlnová délka 475 nm).
Koncentrace glukózy (v mmol glukózy na litr) v krevním séru se vypočítá podle následující rovnice:
extinkce vzorku__ χ 111 standardní extinkce ’
Průběh postupu je v rozsahu koncentrací 0 až 30 mmolů/litr lineární.
Příklad 2
Stanovení obsahu celkového cholesterolu v krevním séru
Roztok A:
Ve fosfátovém pufru (0,1 molu/litr; pH = = 7,5) se rozpustí následující látky:
peroxidáza cholesterolesteráza cholesteroloxidáza
4-aminofenazon azid sodný 9-laurylether Triton X-100
Brij-35
Roztok B:
18,0 j./ml
12,5 j./ml
6,0 j./ml
1,0 mmolu/litr
12,3 mmolu/litr
5,0 g/litr nebo
5,0 g/litr nebo
5,0 g/litr
12,5 mmolu/litr thymolu (v 96% čerstvě destilovaném ethanolu)
Činidlo se připraví tak, že se před upotřebením navzájem smísí roztok A a roztok В v poměru 4 :1.
Standardizace se provádí pomocí cholesterole vého standardu (5,2 mmolu/litr) rozpuštěného v ethanolu.
Stanovení:
Vždy к 2,0 ml činidla se přidá 0,02 ml standardního roztoku, popřípadě séra. Směs se míchá a ponechá se v klidu bud 30 minut ipri teplotě místnosti, nebo 15 minut při teplotě 37 °C. Barva vzniklá po 10 minutách chlazení se fotometricky srovnává se slepým pokusem (tloušťka kyvety 1 cm; vlnová délka: 475 nm).
Výpočet:
koncentrace cholesterolu v krevním séru (mmol/litr) = extinkce vzorku extinkce standardu
X 5,2
V rozsahu koncentrací 0 až 13 mmolu na litr je průběh postupu lineární.
Příklad 3
Stanovení močové kyseliny v krevním séru
Roztok A:
Ve fosfátovém pufru (0,1 molu/litr; pH 7,5) se rozpustí následující látky:
peroxidáza urikáza 4-aminofenazon azid sodný
18,0 j./ml
6,0 j./ml
1,0 mmolu/litr
12,3 mmolu/litr
Roztok B:
12,5 mmolu/litr thymolu (v 96% ethanolu)
Činidlo se vyrobí tak, že se roztoky А а В navzájem smísí v poměru 4 : 1.
Standardizace se provádí pomocí standardu močové kyseliny (595 ^molu/litr).
Stanovení:
Vždy к 0,2 ml činidla se přidá 0,2 ml standardu, popřípadě vzorku séra. Směs se promísí a ponechá se v klidu bud' 60 minut při teplotě místnosti, nebo po dobu 30 minut při teplotě 37 °C. Vzniklá barva se fotometricky srovnává se slepým pokusem (tloušťka kyvety 1 cm; vlnová délka 475 nm);
Výpočet:
koncentrace močové kyseliny v krevním séru v (/jmol/litr) = extinkce vzorku extinkce standardu
Postup je v rozsahu od 0 do 900 ,umol na litr lineární.
Claims (2)
1. Činidlo ke stanovení glukózy, cholesterolu a hemoglobinu, především v biologických vzorcích, obsahující 4-aminofenazon, roztok pufru, stabilizátor, detergent a popřípadě enzymatický katalyzátor, vyznačující se tím, že jako indikátor obsahuje p-isopropyl-m-kresol.
2. Činidlo podle bodu 1, vyznačující se tím, že obsahuje p-isopropyl-m-kresol rozpuštěný v nižším alkanolu, například v ethanolu, v koncentraci 2,30 až 2,70 mmolů na litr.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU833059A HU188953B (en) | 1983-09-02 | 1983-09-02 | Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS658084A2 CS658084A2 (en) | 1987-07-16 |
| CS254978B2 true CS254978B2 (en) | 1988-02-15 |
Family
ID=10962331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS846580A CS254978B2 (en) | 1983-09-02 | 1984-08-31 | Agent for glucose,cholesterol and haemoglobin determination |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| CH (1) | CH669673A5 (cs) |
| CS (1) | CS254978B2 (cs) |
| DD (1) | DD232558A5 (cs) |
| DE (1) | DE3432348A1 (cs) |
| FI (1) | FI77941C (cs) |
| HU (1) | HU188953B (cs) |
| IN (1) | IN163164B (cs) |
| PL (1) | PL141984B1 (cs) |
| SU (1) | SU1505444A3 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0218083A1 (en) * | 1985-09-03 | 1987-04-15 | Abbott Laboratories | Stabilized cholesterol reagent and method for determining total cholesterol using the reagent |
-
1983
- 1983-09-02 HU HU833059A patent/HU188953B/hu not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-31 CS CS846580A patent/CS254978B2/cs unknown
- 1984-08-31 DD DD84266856A patent/DD232558A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 FI FI843428A patent/FI77941C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 PL PL1984249428A patent/PL141984B1/pl unknown
- 1984-08-31 SU SU843786908A patent/SU1505444A3/ru active
- 1984-09-03 DE DE19843432348 patent/DE3432348A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-02-18 IN IN134/DEL/85A patent/IN163164B/en unknown
- 1985-05-08 CH CH1983/85A patent/CH669673A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS658084A2 (en) | 1987-07-16 |
| SU1505444A3 (ru) | 1989-08-30 |
| PL249428A1 (en) | 1985-05-21 |
| FI77941B (fi) | 1989-01-31 |
| CH669673A5 (cs) | 1989-03-31 |
| FI843428L (fi) | 1985-03-03 |
| DD232558A5 (de) | 1986-01-29 |
| DE3432348A1 (de) | 1985-03-21 |
| HU188953B (en) | 1986-05-28 |
| FI843428A0 (fi) | 1984-08-31 |
| FI77941C (fi) | 1989-05-10 |
| IN163164B (cs) | 1988-08-20 |
| PL141984B1 (en) | 1987-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0918881B1 (en) | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound | |
| Fossati et al. | Enzymic creatinine assay: a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement. | |
| US4353984A (en) | Composition and test piece for measuring glucose concentration in body fluids | |
| US5776719A (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| CA1157749A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| CA1048390A (en) | Method, composition, and device for determining the specific gravity of a liquid | |
| CA1114268A (en) | Glucose indicator and method | |
| Campanella et al. | New biosensor for superoxide radical used to evidence molecules of biomedical and pharmaceutical interest having radical scavenging properties | |
| CA1274457A (en) | Glucose reference control for glucose test strips | |
| US4273868A (en) | Color stable glucose test | |
| WO2000014269A1 (en) | Chromogen combinations for (per)oxidase-based determinations | |
| EP0349843B1 (en) | Composition and method of assaying aqueous liquids for specific gravity | |
| EP0036563B1 (en) | Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device | |
| CA1319594C (en) | Process and reagent for the determination of fructosamine in body fluids | |
| Jelikić-Stankov et al. | Determination of uric acid in human serum by an enzymatic method using N-methyl-N-(4-aminophenyl)-3-methoxyaniline reagent | |
| AU754237B2 (en) | Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition | |
| Reljic et al. | New chromogen for assay of glucose in serum | |
| US6753159B1 (en) | Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition | |
| US5776780A (en) | Method for quantitatively measuring white blood cells esterase activity in urine | |
| CS254978B2 (en) | Agent for glucose,cholesterol and haemoglobin determination | |
| Rehak et al. | Calorimetric enzymic measurement of uric acid in serum. | |
| GB2049180A (en) | Bilirubin-resistant determination of uric acid | |
| Kovar et al. | Determination of cholesterol in sera | |
| Rietz et al. | Fluorometric assay of serum acid or alkaline phosphatase, either in solution or on a semisolid surface | |
| US6379915B1 (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same |