HU182067B - Process for producing lh-rh and lh-rh- analogous compounds - Google Patents
Process for producing lh-rh and lh-rh- analogous compounds Download PDFInfo
- Publication number
- HU182067B HU182067B HU80319A HU31980A HU182067B HU 182067 B HU182067 B HU 182067B HU 80319 A HU80319 A HU 80319A HU 31980 A HU31980 A HU 31980A HU 182067 B HU182067 B HU 182067B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- gly
- dnp
- ser
- glu
- trp
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
- C07K5/06173—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Glp-amino acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
A találmány tárgya aj eljárás a luteinizáló hormont feleszabadító hormon /LII-RH hormon/, illetőleg LH-RH-analógok előállítására, oly módon, hogy két peptidet poláros oldószerben r^agáltatunk, 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1.2,3-benzotriazin /HOObt/ és valamely karbodiimid hozzáadásával.
Az LH-RH, amint ismeretes, a hipotalamusz /1/ képletű hormonja
L- f^Glu-L-His-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-Gly-L-Leu-L-Arg-L-Pro-Gly-NHg /1/, amely a hipofízisben az LH és FSH gonadotrop hormonokat' felszabadítja. {Biológiai Lexikon 2. kötet 635 old»- AkadémiaiKiadó Bp. /1975/7 · LH-RII-analógokként különös jelentőségük van az oly származékoknak, amelyekben a 6-helyzetü Gly valamely IP -aminosavra van kicserélve és amelyekben a 10-helyzetü Gly-NHg rövid szénlánca alkilcsoporttal szabsztitaálva van.
Ismeretes már, hogy az LH-RH és LH-RH-analógok előállítására különösen jól alkalmazható a Slu-His-OH dlpeptidnek a megfelelő peptidekkel, diciklohexil-karbodiimid jelenlétében, a racemizálódást csökkentő N-hidroxi-vegyületek, például N-hidroxl-szukcinimid /HONSu/,.. 1-hidroxi-benzotriazol /H0Bt/,_ J-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l,2,3-benzotriazin /HOObt/ vagy N-hidroxi~5-norbornén-endo-2,3-dikarboximid /HONB/ hozzáadásával történő reagáltatása, vö: Biochem. Biophys. Rés. Commun. 45,767-775/1971/.
Nagynyomása folyadék-kromatográfiai vizsgálattal azonban megállapították, hogy ennél az eljárásnál nem kerülhető el a j hisztidin részleges raoemizálódása vö.: az alábbi 1. és 2. tábr lázat. A hisztidin racemizálódásának a hisztidintartalmu peptiidek szintézise során történő csökkentésére az irodalom a tozilp csoport alkalmazását ajánlja az imidazol-gyürü védelmére. /Oheta. Bér. 105, 2872-2882 /1972//. A 2,4-dinitro-fenil-csoport^/Dnp/: ilyen célú alkalmazása azonban a hisztidin túlságosan erős ra—í cemizálódása és további szennyezések képzésére való hajlama mih att kevésbbé látszik alkalmasnak, vö.: Reo. Trav. Ohim. Pay-Bas 256 /1974/. , t /
Ezért igen meglepő volt, hogy a hisztidin racemizalódás.a 2 % D-hisztidin mennyiségi arány alá csökken, ha a Q1u-Hís-0Hí kiindulási vegyületben a hisztidin-csoportot az Nim 2,4-dinit-. ro-fenil-csoporttál /Dnp/ védjük és a találmány szerinti eljá-t, rás alább ismertetendő reakciókörülményei között dolgozunk. U-. gyanilyen reakciókörülmények között a tozilcsoport lPm-védőcsexportként való alkalmazása esetén a racemizálódás mértékét nem lehetett 5 % D-hisztidin alá csökkenteni.
A találmány tárgya tehát eljárás az /1/ képletü LH-RH vegyületek
L- CGlu-L-His-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-Gly-L-Leu-L-Ar g-L-Pro-Gly-NH2 /1/ és olyan LH-RH-analógok előáll!tás ára, amelyekben a 6-helyzetü Gly egy természetes 'vágy szintetikus , oldalláncában szabad karboxil- vagy aminocsoportot nem tartalmazó D-aminosavval és a 1Q-helyzetü Gly-NH? rövid szénláncu alkilcsoporttal szabsztitaálva van, két peptid poláris oldószerben -10GC és szobahőmérsék4 let közötti hőmérsékleten diciklohexil-karbodiimid, mint kondenzálószer és 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1.2.37benzotriazin, mint segédanyag jelenlétében végzett kondenzalasávál, oly módon, hogy paptidként egy
-2182.067
D- ' Glu-IIis /Dnp/-0II képletü vegyületet és egy
II-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-G^y-L-Leu-L-Arg-L -Pro-^y-lffi2 képletü vegyületet használunk, ahol a 6-helyzetü Gly és a 10helyzetü Gly-NHp a tárgyi körben megadott módon szubsztituálva lehet, és az oldalláncbeli karboxll-csoportok a peptidkémiában szokásos védőcsoportokkal védve vannak, majd a kapott reakciótermékből a dinitro-fenil-csoportot hidrazinolizissel vagy tio11zissei lehasltjuk.
A találmány szerinti eljárással előállított LH-RH-analó^ gokban a 6-helyzetü Gly csoport helyettesítve lehet bármely olyan természetes vagy szintetikus, oldal-láncban szabad karboxil- vagy aminocsoportot nem tartalmazó D-amlnosavval, amely az LIí-RH-analóg biológiai hatékonyságát nem csökkenti /lásd Schally és munkatársai: Science 17%, 341 /1973/· A 6-helyzetü Gly csoport előnyös helyettesitőTt a D-Ser /Buv, D-leu, D-Ala, D-Phe, D-Trp, D-Glu/ciklohexil/, D-Glu/OBu^/ és D-Lys/Boo/ csoportok képviselik.
A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként felhasználásra kerülő ^lu-His/Dnp/-0II uj dipeptid-származékot a peptidkémiában szokásos módszerekkel, például a -Ö-lu-His-OH dipeptid 2,4-dinitro-íluor-benzollal, víztartalmú, nátrium-hidrogén-karbonáttal pufferezett oldatban történő reagáltatása utján állíthatjuk elő.
A találmány szer inti eljárásban oldószerként - a reagáló anyagok jó oldódása érdekében - poláros oldószerek, például dimetll-acetamid, dimetil-formamid, dimetil-szulfoxid, .foszforsav-trisz-/dimetil-amid/ vagy N-metil-pirrolidon alkalmazható előnyösen.
A szintézist -10 °C és a szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten folytathatjuk le. Előnyösen 0°C körüli hőmérsékleten kezdjük a reakciót es később szobahőmérsékletre hagyjuk a reakcióelegyet felmelegedni.
Kondenzálószerként előnyösen a könnyen hozzáférhető diciklóhexil-karbodllmidet /DCC/ alkalmazzuk, felhasználhatók azonban erre a célra más karbodiimidek, például 1-ciklohexll-
3-/2-morfolino-etil/-karbodiImid-toluolszulfonát vsgy 1-etil-3“/3“dimetilamlno-propll/-karbodiimid-hidroklorld is.
Közbenső termékként először oly peptideket kapunk, amelyek a hisztidin imidazol-gyürüj én dlnitro-fenil-csoporttal vannak védve. Ezt a dinitro-fenil-csoportot azután a tiolizissel /Biochem-Biophys. Rés. Commun. 29» 178 /1967/; Biochemistry j), 5122 /1970/ vagy a hidrazinolizissel /Tetrahedron Letters 44, 4121 /1971/ hasitjuk le.
A Dnjo-tartalmu közbenső terméket általában nem szükséges az előállítási reakclóelegyből elkülöníteni. A peptid-kapcsolás után a reakcióelegyhez például valamely tiolt, mint merkapto-etanolt vagy etll-merkaptánt, illetőleg hidrazint adunk és a Dnp-csoport lehasitásának befejeződése után - ami vékonyrétegkr ómat ográf iával könnyen ellenőrizhető - a reakcióelegyet a szokásos módon feldolgozzuk. Ha védőcsoport-lehasitó reagensként hidrazint alkalmazunk, akkor dimetil-formamid nem alkalmas oliószerként, mert ez a vegyület hidrazlnnal szemben nem stabil.
-3182.067 ; íjfi-RII-szlntézissel kapcsolatban különböző karboxil-koui.conousékből való kiindulással és különböző kondenzációs móHszöícl uliia Ima zásával végzett összehasonlító kísérleteink erecúményeit az alább következő I. táblázatban foglaltuk össze; e kis érietek során az egyes termékek £D-His2J.rLH-RH-t art almát nagynyomású folyadék-kromatográfiai módszerrel határoztuk meg. Az I. táblázat adatai azt mutatják, hogy kizárólag a DCC-HOObt módszer és Nim-Dnp-védelem alkalmazása esetén lehet a racemizálódás mértékét 2 % D-hisztidin alá visszaszorítani.
Ugyanezt az eredményt kapjuk az LH-RI-I-analógok egyikéinek szintézise során is, amint ezt az alább következő II. táblázat adatai mutatják.
Az I. táblázat tartalma:
Racemizálódási kísérletek az LH-RH-szintézis során
A kísérletekben az alább következő 3-5· példában megadottakhoz hasonló szintézis-körülményeket alkalmaztunk.
A nagynyomású folyadék-krómatográfiát egy 0,4 · 25 cm méretű, LiChrosorb Si 60 kereskedelmi elnevezésű, a Merek cég által gyártott, 60 a átlagos pórus-átmérőjű szilikagél adszor-4 bonssel töltött oszlopon végeztük; eluálószerként 310 tf. rész kloroform* 190 tf. rész metanol, 14 tf. rész viz,
3,1 tf. rész trietil-amin és 1 tf. rész hangyasav elegyét alkalmaztuk; az eluálási sebesség 1 ml/perc volt.
R^ /LH-RH/ = körülbelül 14,0 - 14,5 perc RT /fD-His^LH-RH/ = körülbelül 17,5 - 18 perc
I. táblázat
Karboxil-komponens | Módszer | %Fd-Hís5lH-RH |
Lg1u-Hís-0H | DCC/HOBt | 23 |
Π | DCC/II0NB | 15 |
H | DCC/IIONS u | 15 |
n | DCC/IIOObt | 12 |
lGlu-His/Tos/-OH | DCC/IIONS u | 9 |
11 | DCC/IIOObt | 5 |
lGlu-His/Dnp/-0H | DCC/HOBt | 25 |
11 | DCC/HONB | 7 |
11 | DCC/IIONS u | 6 |
11 | DCC/IIOObt | 1-2 |
i
A II. táblázat tartalma:
Racemizálódási kísérletek a ^D-Ser/But?/^7LH-RH-/l-9/-nonapeptid-etilamid szintézise során ______________A kísérletekben a.6. és 7. példában megadottakhoz hasonló szintézis-körülményeket alkalmaztunk.
A nagynyomású folyadék-kr ómat ográf iát egy 0,4 . 25 cm méretű, LiChrosorb Sí 60 kereskedelmi elnevezésű, a Merek cég által gyártott, 60 fi átlagos porus-átmérőjü szilikagél adszorbenssel töltött oszlopon végeztük; eluálószerként 410 tf. rész acetonitril, 29 tf. rész metanol, 29 tf. rész viz, 20 tf. rész kloroform, 3,7 tf. rész trietil-amin és 1 tf. rész hangyasav .elegyét alkalmaztuk. Eluálási sebesség: 2 ml/perc.
-4182.067
Ηφ rD-Ser/But/671H-DH-/l-9/-nonapeptid-etilamid = 40 perc RT 2D-Hi82,D-ser/But/^7LH-BH-/l-9/-nonapeptid-etllamid = 48 perc
II. táblázat
Karboxll-komponens % D-His2 vegyület
.....tGla-His-OH----------—
II
TI
IT lGlu-His-/Dnp/-0H
Π
Π
TI
Módszer
DCC/HOBt------------ | ------------20 - |
DGC/HONSu | 11 |
DCC/HONB | 11 |
DCC/HOObt | 6 |
DCC/HOBt | 12 |
DGC/HONSu | 4 |
DCC/I-IONB | 3 |
DCC/HOObt | 1-1,5 |
Az alábbi példák az I és II táblázatban szereplő kísérletek gyakorlati kiviteli módjait szemléltetik közelebbről. A példák közül az 1., 5·» 7· és 10. példák a találmány szerinti [aegoldást ismertetik, anélkül, hogy a találmány ezekre korlátozódna; és a 2., 3·, 4., 6., 8. és 9· példák összehasonlítási példaként szolgálnak.
1. példa
FGlu-His/Dnp/-0H . 0,5 H20 g 7100 mmól/ '-Glu-His-CII előállítása . H20 és 20 g /238 mmól/ nátrium-hidrogén-karbonát 200 ml vízzel készített oldatához keverés közben 1 óra alatt hozzácsepegtettük 22,3 g /120 mmól/ 2,4— dinitro-fluor-benzol 100 ml dioxánnal készített oldatát. Ezután az elegyet 3 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten. A képződött csapadékot leszivatással kiszűrjük és a szürletet 200200 ml etil-acetáttal kétszer extraháljuk. A vizes fázist bepároljuk, a maradékot 200 ml vizben oldjuk és 120 ml n sósavoUda^ot_ad.ank hozzá. At kivált vörös szinü olajról a vizes fázist' dekantáljuk és szűrjük. A vizes szürlethez 300 ml n-butanolt adunk, a kétfázisú elegyet alaposan összerázzuk, majd éjjelen át 4 6C hőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap a képződött sárga' csapadékot leszivatással szüxjük és kevés n-butanollal mossuk. Ezután a csapadékot a még jelenlevő T-rlu-His-OH teljes eltávo-* litása céljából 300-300 ml vizzel szobahőmérsékleten 1-1 óra hosszat keverjük, minden alkalommal leszivatással szűrjük, azután pedig foszfor-jDentoxid felett vákuumban megszár itjuk. Az igy kapott 20 g -LG1 u-His/Dnp/-0H . 0,5 H20 235-241 °0-on bom-j,
1-áa—közbenolvad.—----------- foO gl = -12,2° /o i= 1, foj21 = +18,9° /o = 1, ecetsavban/ dimetil-formamidban/
2. példa tGrlu-His/Tos/-OH előállítása /összehasonlító anyag az I. táblázat szerinti kísérletekhez/
-5182.067 ., /10 mmól/ 'Glu-IIis-OII éa 2,3 g nátrium-hidrogén-karbonát 20 ml vízzel készített oldatához szobahőmérsékleten, keverés közben, lassan hozzácsepegtetjük 2,1 /10 %-os felesleg p-toluol-szulfoklorid körülbelül 10 ml dloxannal készített oldatát. A hozzáadás befejezése után az elegyet még 1 óra hosszat tovább keverjük. A reakcióelegyet azután éterrel kétszer kirázzuk, a vizes fázist 2 n sósavoldattal 2 pH-értékig savanyítjuk, majd a képződött csapadékot les Hivatással szűrjük, vízzel mos-’ suk és foszfor-pentoxid felett vákuumban megszór it juk. Ily módon 2,2 g Í&lu-His/Tos/-0H terméket kapunk. -----------------------..................—
3. példa
LH-RH szintézise ÍGlu-His-OH felhasználásával, az I. táblázat szerinti különböző kapcsolási módszerekkel.
640.mg H-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH9-ditozilát és 150 mg -Glu-His-0Ii.H90 3 ml dlmetil-acetárniddal ^készített oldatához 0,065 ml N-etTl-morfolin és 68 mg HOBt /illetőleg 81 mg HOObt, 90 mg H0NBA 57 mg IíONSu/ elegyet adjuk. Az elegyet 0 °C hőmérsékletre hűtjük, 110 mg diciklohexil-karbodiimidet.adunk hozzá, 1 óra hosszat 0 °c hőmérsékleten, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap 0,1 ml hidrazin-hidrátot a_dunk az elegyhez, szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, majd leszlvatással szűrjük. A szürletet 30 ml n-butanol es 30 ml vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk. Az N-butanolos fázist elkülönítjük, nagyvákuumban bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A kapott csapadékot leszlvatással leszűrjük és megszűr it juk, majd hig ecetsavban oldjuk és körülbelül 10 ml acetat-alakban levő Dowex 1x2 gyantán kro— matografáljuk. Vizzel eluálunk és az eluátumot fagyasztva szárítjuk. Ily módon 500-600 mg terméket kapunk, amelyet további tisztítás céljából megoszlatásos krómatográfiának vetünk alá egy hidroxi-propilezett, térhálósított dextrán-gélen, a 24 38 350 sz· német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi közzétételi irat 1. e/ példájában leirt eljárás szerint. így végűlis 250-300 mg tiszta LH-RH terméket kapunk.
4. példa _______________LH-RH szintézise ?-Glu-His/Tos/-0H felhasználásával, az
I. táblázat szerinti különböző kapcsolási módszerekkel
640 mg H-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp-ditozilát és 210 mg ÍGlu-His/Tos/-OH 3 ml dimetil-acetáttal^készitet t oldatához 0,065 ml N-eüil-morfolin és 81 mg HOObt /illetőleg 57 mg HONSu/ elegyét adjuk. Az elegyet 0 °G hőmérsékletre hütjük, 110 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk hoqzá, majd az elegyet 0 °G hőmérsékleten 1 óra hosszat és ezt követően szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük. A reakcióelegy további feldolgozása a 3. példában leírthoz hasonló módon történik. így 275 mg /11let-őleg 250 mg/ LH-RH terméket kapunk.-----------·-----------------------------------
5. példa
LH-RH szintézise LGlu-His/Dnp/-0H felhasználásával, a találmány szerinti módszerrel g /25 mmól/ fölu-His/Dnp/-0H . 0,5 H?0 és 32 g /25 mmól/ H-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp .2 Tos-OH 150 ml dimetil-acetárniddal készített oldatához 4,07 g HOObt /= 3-hidE
-6182.067 oxi-4-oxo-3j>4-dihidr o-l,2,3-benzotriazin/ hozzáadása és az elegy 0 °C hőmérsékletre· történő lehűtése után 3,25 ml N-etll-moríollnt és 5,5 g diclklohexil-karbodiimldet adunk. Az elegyet 0 °C hőmérsékleten 1 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten ejjelen át keverjük, azután a képződött csapadékot leszlvatássál kiszűrjük és kevés dimeti1-aoetamiddal mossuk. A mosófolyasdékot egyesítjük a szürlettel, majd az elegyhez 2,5 ml 100 %-oh hidrazln-hidratot adunk és ezt az elegyet szobahőmérsékleten 4 óra hosszat keverjük. Fekete színű oldatot kapunk, ebből 1250 ml etil-acetát hozzáadásával leválasztjuk a peptidetb. A képződött csapadékot leszlvatással szűrjük, etil-acetáttal mossuk, majd 430 ml metanolban oldjak és 1400 ml etil-acetát hozzáadása utján újból leválasztjuk a peptldet. Ezt a csapadékot leszlvatással leszűrjük, majd 1000 ml n-butanolban oldjuk és az oldatot előbb 1000 ml telített vizes nátrium-hldrogén-karbonát-oldattal, majd 750 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirazzuk. Az n-butanolos fázist elkülönítjük és nagyvákuumban bepároljak. A bepárlási maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük, elkülönítjük és megszáritjuk. Ily módon körülbelül 25 g nyers LH-RH terméket kapunk. A 3· példában leírthoz hasonló módon történő tisztítás után a hozam 12-14 g tisztaamorf LH-RHj. HJ 21 _ _^ο /c = 1, 1 %-os ecetsavban/.
6. példa
LH-RH szintézise -Glu-His/Dnp/-0H felhasználásával, az
I. táblázatban megadott összehasonlítási kapcsolási módszerekkel.
Az 5· példában leírtakkal azonos módon dolgozunk, azzal a’különbséggel, hogy 4,07 g HOObt helyett 3,4 g HOBt-t, 4,5 g HONB-t, illetve 2,9 g IIONSu-t használunk.
7. példa rb-Ser/But/^7LH-RH-/l-9/-nonapeptid-etilamid szintézise -Glu-HÍs Dnp -OH felhasználásával, a találmány szerinti módszerrel g /25 mmól/ LÖla-IIis/Dnp/-OH . 0,5 H-O és 26,6 g /25 mmól/ H-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/But/-Leu-Arg-Pro-HH-C2H5.2HC1 150 ml dimetil-acetamiddal készített oldatához, 4,07 β HOOBt /= 3-hidroxi-4-oxo-3t4-dihidro-l,2,3-benzotriazin/f hozzáadása és az elegy 0 °C hőmérsékletre való lehűtése után 3,25 ml N-etil-morfolint és 5,5 g diciklohexil-karbodiImidet adunk. Az elegyet 0 °C hőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük? majd a keverést éjjelen át szobahőmérsékleten folytatjuk. Masnap a képződött csapadékot leszlvatással leszűrjük és 50 ml dimetil-acetamiddal mossak. A mosófolyadékkal egyesített szürlethez 2,5 ml 100%os hidrazin-hidrátot adunk. JÁz. elegyet szobahőmérs ékleten 4. óra hosszat keverjük, majd 1250 ml etil-acetát hozzáadásával kicsapjuk a peptldet. A csapadékot leszlvatással szűrjük és etil-acetáttal alaposan mossak. Bzatán-430 ml metanolban oldjuk és ebből az oldatból 1400 etil-acetát hozzáadásával újból lecsapjuk a peptidet. Ezt a csapadékot 1000 ml n-butanolban oldjuk es egyszer 1000 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd 750 ml telitett vizes nátrium-hidrοβén-kar bonát-oldattal még egyszer kirázzuk. Az n-butanolos fázist bepárol-r
-7182 067 juk. éa a maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük éa leszivatássa|. szűrjük, majd a szűrön maradt terméket etil-acetáttal mossuk é$ megszór ltjuk. Ily módon 18,7 g terméket kapunk.
A fenti módon kapott terméket acetáttá történő átalakítás céljából 50 ml viz és 5 ml ecetsav elegyében oldjak, majd 230 ml acetát-alakban levő Dowex 1x2 gyantán kromatografáljuk. Viz* zel elaálank, a kívánt terméket tartalmiazó eluátum-frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. Ily módon körülbelül 15,0 £ ]D-Ser/BuV°jLH-RH-/l-9/--nonapeptid-etilamidot kapunk, 23 = —40°- /o = 1, metanolban/ ·--------------------------— - -----------------------------------A kapott termék további tisztítása a 3. példában leirt módon történik; a tiszta termék hozama körülbelül 9,5 - 11 g.
8. példa /D-Ser/Bu^/^LH -RH-/l-9/-nonapeptld-etilamid szintézise fGlu-His-/Dnp/-OH felhasználásával, a II. táblázatban megadott összehasonlítási kapcsolási módszerekkel _______________A 7· példában leírtakkal azonos módon dolgozunk, azzal akülönbséggel, hogy 4,07 g HOObt helyett 3,4 g IIOBt-t 4,5 g HCNB-t, illetve 2,9 g IíONSu-t használunk.
9. példa n ÍD-Ser/Bufc/67LH-BH-/l-9/-nonapeptid-etilamid szintézise IGlu-Hfs-CH felhasználásával, a II. táblázat szerinti különböző kapcsolási módszerekkel
532 mg H-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/Bufc/-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5 .
—2HG1 és 15Θ mg ÍGlu-Hie-OH . H?O 3 ml dimeti1-apetamidaal készített oldatához, 0,065 ml N-etíl-morfolin és 68’mg HOBt /illetőleg 81 mg HOOBt, 90 mg HQNB vagy 57 mg HONSu/ hozzáadása iés az elegy 0 °G hőmérsékletre történő lehűtése után 110 mg diciklohexll-karbodiimidet adunk és az elegyet 0 °C hőmérsékleten 1 óra.hosszat, majd szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük. A reakcióelegy feldolgozása és a kapott nyers termék tisztítása a 3. példában leírt módon történik. így 104 - 207 mg tiszta terméket kapunk.
’ ~~lOT~példa rGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Lys/Boc/-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2-diacetát
590 mg /0,5 mmól/ H-Trp-Ser-Tyr-D-Lys/Boc/-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp.2 HCl-t, 220 mg /0,5 mmól/ bÖlu-His/Dnp/-0H.0,5 H^O-t és 81,5 jng_ /0,5 mmól/ HOObt-t feloldunk 5 ml dimetil-acetamld* bán és 0.065 ml N-etil-morfolint és 110 mg DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet 1 órán keresztül 0 °C hőmérsékleten, ma^d egy 'éjszakán keresetül szobahőmérsékleten kevertetjük. A_ kivaló csapadékot leszúr jük, és dimeti I-ácetamidd'al~ mossuk. A szűr létet 0,5 ml 2-merkapto-etanóllal és annyi trletil-amlnnal elegyítjük, hogy az oldat kifejezett lúgos reakciót adjon /pH=8-9/« A reakcióelegyet egy éjszakán keresztül állni hagyjuk, majd máápap a peptidet ecetészterrel kicsapjuk és az 5· példában leir-l takkal analóg módon feldolgozzuk és a 3· példában leírtakkal af palóg módon tisztítjuk. Kitermelés 310 mg, forgatóképességs
-41° /c = 1, dimet il-acetamidban/.
-8182.067
Azonos eredménnyel alkalmazható a 2-merkapto-etanol helyett a 2-merkapto-etán vagy a 2-merkapto-ecetsav.
Claims (1)
- Szabadalmi igénypont1. Eljárás az /1/ képletü lutenizáló hormont felszabadító hormon /LH-BH-hormon/ L- fölu-L-His-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-Gly-12 3 4 5 6-L-Lea-L-Arg-L-Pro-Gly-NH~ /1/ és olyan analógjai előállitására - amelyekben a 6-helyzetü Gly egy természetes vagy szintetikus, oldalláncában szabad karboxil- vagy amlno-csoportot nem tartalmazó D-aminosavval és a 10-helyzetü Gly-NHo rövid szénláncu alkilcsoporttal szubsztituálva van - két peptid poláris oldószerben -10 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten diciklohexil-karbodiimid mint kondenzálószer és 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l,2,3-benzotrlazin mint segéd-anyag jelenlétében végzett kondenzálásával, és a védőcsoportok lehasitásával, azzal jellemezve, hogy peptidként egy........... 1- ‘Glu-His/Dnp/-0H képletü vegyületet és egyH-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-Gly-L-Leu-L-A r g-L-Pr 0-Gly-NHo6 10 a képletü vegyületet használunk, ahol a 6-helyzetü Gly és a 10helyzetü Gly-NHn a tárgyi körben megadott módon szubsztituálva lehet, és az oldalláncbeli karboxilcsoportok a peptidkémiában szokásos védőcsoportokkal védve vannak, majd a kapott reakciótermékből a dinltro-fenil-csoportot hidrazinolizissel vagy tlollzissel lehasitjuk. .
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2905502A DE2905502C2 (de) | 1979-02-14 | 1979-02-14 | Verfahren zur Herstellung von LH-RH bzw. LH-RH-Analoga und Pyroglutamyl-N↑i↑m↑-dinitrophenyl-histidin |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU182067B true HU182067B (en) | 1983-12-28 |
Family
ID=6062835
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU80319A HU182067B (en) | 1979-02-14 | 1980-02-13 | Process for producing lh-rh and lh-rh- analogous compounds |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4275001A (hu) |
EP (1) | EP0014911B1 (hu) |
JP (2) | JPS55111449A (hu) |
AR (1) | AR227386A1 (hu) |
AT (1) | ATE2316T1 (hu) |
AU (1) | AU532335B2 (hu) |
CA (1) | CA1144160A (hu) |
DE (2) | DE2905502C2 (hu) |
DK (1) | DK148085C (hu) |
ES (1) | ES488382A1 (hu) |
HU (1) | HU182067B (hu) |
IL (1) | IL59362A (hu) |
ZA (1) | ZA80817B (hu) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3020941A1 (de) * | 1980-06-03 | 1981-12-17 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Nonapeptid, verfahren zu seiner herstellung, dieses enthaltendes mittel und seine verwendung |
DE3421303A1 (de) * | 1984-06-08 | 1985-12-12 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Salze aus 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazin und amino-verbindungen |
GB2187461A (en) * | 1986-02-03 | 1987-09-09 | Medical Res Council | Monitoring method for the synthesis of a linear of amino acid residues |
AT388918B (de) * | 1987-10-08 | 1989-09-25 | Hoechst Ag | Aminosaeure-oobt-ester |
US20050020524A1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-01-27 | Monash University | Hematopoietic stem cell gene therapy |
US20040265285A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-30 | Monash University | Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration |
US20040241842A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-02 | Monash University | Stimulation of thymus for vaccination development |
US20070274946A1 (en) * | 1999-04-15 | 2007-11-29 | Norwood Immunoloty, Ltd. | Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation |
AUPR074500A0 (en) * | 2000-10-13 | 2000-11-09 | Monash University | Treatment of t cell disorders |
US20040258672A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration |
US20040259803A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Disease prevention by reactivation of the thymus |
US20060088512A1 (en) * | 2001-10-15 | 2006-04-27 | Monash University | Treatment of T cell disorders |
US20080279812A1 (en) * | 2003-12-05 | 2008-11-13 | Norwood Immunology, Ltd. | Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation |
RU2442791C1 (ru) * | 2010-07-08 | 2012-02-20 | Закрытое Акционерное Общество "Фарм-Синтез" | Способ получения бусерелина и промежуточные соединения для его получения |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2211101A1 (de) * | 1972-03-08 | 1973-09-13 | Hoechst Ag | Neues dekapeptid mit hormon-wirkung |
NO139560C (no) * | 1972-04-29 | 1979-04-04 | Takeda Chemical Industries Ltd | Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater |
US3888836A (en) * | 1972-05-30 | 1975-06-10 | Merck & Co Inc | Pentapeptide intermediate of lhrh and derivatives thereof |
US3931138A (en) * | 1973-03-13 | 1976-01-06 | Abbott Laboratories | N-carbobenzoxy-pyroglutamyl-histidine |
IT1045531B (it) * | 1973-10-19 | 1980-05-10 | Serono Ist Farm | Prodesso per la preparazione di l.piroslutamil.l.istidil.l.prolinamide sintetica,trh |
US4083967A (en) * | 1973-11-01 | 1978-04-11 | Burroughs Wellcome Co. | Nona- and decapeptides |
US3959248A (en) * | 1974-04-03 | 1976-05-25 | Merck & Co., Inc. | Analogs of thyrotropin-releasing hormone |
NL7505590A (nl) * | 1974-05-18 | 1975-11-20 | Hoechst Ag | Werkwijze voor het bereiden van peptiden met lh-rh/fsh-rh-werking. |
ZA754724B (en) * | 1974-08-28 | 1976-06-30 | Hoffmann La Roche | Amide |
NZ181036A (en) * | 1975-06-12 | 1978-12-18 | A Schally | Luteinising hormone releasing hormone analogues and intermediates therefor |
GB1559610A (en) * | 1975-10-31 | 1980-01-23 | Armour Pharma | Synthesis of peptides |
US4218439A (en) * | 1977-07-14 | 1980-08-19 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptide which inhibits gonadal function |
HU177134B (en) * | 1977-07-18 | 1981-07-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for preparing angiotensin ii analogues containing alpha-hydroxy-acid in position 1 with angiotensin ii antagonist activity |
-
1979
- 1979-02-14 DE DE2905502A patent/DE2905502C2/de not_active Expired
-
1980
- 1980-02-07 EP EP80100635A patent/EP0014911B1/de not_active Expired
- 1980-02-07 AT AT80100635T patent/ATE2316T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-07 DE DE8080100635T patent/DE3061712D1/de not_active Expired
- 1980-02-08 ES ES488382A patent/ES488382A1/es not_active Expired
- 1980-02-11 IL IL59362A patent/IL59362A/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-02-12 AR AR279939A patent/AR227386A1/es active
- 1980-02-12 US US06/120,924 patent/US4275001A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-02-13 AU AU55481/80A patent/AU532335B2/en not_active Expired
- 1980-02-13 DK DK61180A patent/DK148085C/da active
- 1980-02-13 ZA ZA00800817A patent/ZA80817B/xx unknown
- 1980-02-13 CA CA000345595A patent/CA1144160A/en not_active Expired
- 1980-02-13 HU HU80319A patent/HU182067B/hu unknown
- 1980-02-14 JP JP1611780A patent/JPS55111449A/ja active Granted
-
1987
- 1987-02-12 JP JP62028396A patent/JPS62277397A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU532335B2 (en) | 1983-09-29 |
ZA80817B (en) | 1981-01-28 |
ES488382A1 (es) | 1980-10-01 |
IL59362A (en) | 1982-12-31 |
DK61180A (da) | 1980-08-15 |
JPS6345398B2 (hu) | 1988-09-09 |
DK148085B (da) | 1985-02-25 |
EP0014911B1 (de) | 1983-01-26 |
EP0014911A2 (de) | 1980-09-03 |
IL59362A0 (en) | 1980-05-30 |
US4275001A (en) | 1981-06-23 |
AR227386A1 (es) | 1982-10-29 |
DE2905502C2 (de) | 1982-07-15 |
JPS55111449A (en) | 1980-08-28 |
CA1144160A (en) | 1983-04-05 |
AU5548180A (en) | 1980-08-21 |
ATE2316T1 (de) | 1983-02-15 |
EP0014911A3 (en) | 1980-11-26 |
JPS6317839B2 (hu) | 1988-04-15 |
DK148085C (da) | 1985-08-12 |
DE2905502A1 (de) | 1980-09-04 |
JPS62277397A (ja) | 1987-12-02 |
DE3061712D1 (en) | 1983-03-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
US4086219A (en) | Nonapeptides and methods for their production | |
HU182067B (en) | Process for producing lh-rh and lh-rh- analogous compounds | |
IE40257L (en) | Nona and decapeptide amides | |
Dutta et al. | Synthesis and biological activity of highly active. alpha.-aza analogs of luliberin | |
EP0106404B1 (en) | Peptides | |
US4093610A (en) | Process for producing triglycyl-lysine vasopressin and intermediates therefor | |
US4215038A (en) | Peptides which inhibit gonadal function | |
CA2014590C (en) | Novel peptides, and antidementia agents containing the same | |
EP0000252B1 (en) | Peptides, pharmaceutical compositions containing the peptides and a process for the preparation of the peptides | |
US4439359A (en) | Cyclic octapeptide analogs of neurotensin | |
US4072668A (en) | LH-RH Analogs | |
US4322342A (en) | Analgesic compounds | |
US3364193A (en) | Undeca- and dodecapeptides related to methionyl-lysyl-bradykinin | |
US4261888A (en) | Organic compounds | |
US4758552A (en) | Gonadoliberin derivatives containing an aromatic aminocarboxylic acid in the 6-position, pharmaceutical and veterinary compositions containing them and process for preparing same | |
EP0227410A2 (en) | Peptide derivatives, their production and use | |
US4111923A (en) | Octapeptides and methods for their production | |
JPS60218399A (ja) | ペプチド中間体の製法 | |
DE1922562C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Cystinhaltigen Peptiden | |
Moersch et al. | Synthesis and biological activity of peptide antagonists of luliberin (luteinizing hormone-releasing hormone) | |
SUZUKI et al. | The β-p-Nitrobenzyl Ester to Minimize Side Reaction during Treatment of Aspartyl Peptides with Methanesulfonic Acid | |
US3341510A (en) | L-alanyl-l-phenylalanyl-l-isoleucyl-glycyl-l-leucyl-l-methioninamide and a protectedderivative thereof | |
Ferderigos et al. | The effect of modifications of the A 5 and A 19 amino acid residues on the biological activity of insulin.[Leu 5-A] and [Phe 19-A] sheep insulins | |
US3752799A (en) | Nalpha-acetyl-2-o-methyltyrosine-oxytocin |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HU90 | Patent valid on 900628 |