HU179431B - Storable cholesterinoxydase preparation - Google Patents
Storable cholesterinoxydase preparation Download PDFInfo
- Publication number
- HU179431B HU179431B HU78BO1754A HUBO001754A HU179431B HU 179431 B HU179431 B HU 179431B HU 78BO1754 A HU78BO1754 A HU 78BO1754A HU BO001754 A HUBO001754 A HU BO001754A HU 179431 B HU179431 B HU 179431B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- storable
- concentration
- enzyme
- preparation
- sodium chloride
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
A találmány tárgya tárolható, vizes koleszterinoxidáz készítmény, amely puffért és stabilizálószert tartalmaz.
Egy protein enzimaktivitását az aminosavgyököknek az enzim polipeptidláncában való térbeli elrendeződése határozza meg. Ezt a „konformációt” vizes oldatban elektromosan töltött vagy töltetlen szervetlen valamint szerves molekulák jelenléte befolyásolja. Ennek következtében az enzimek vizes oldatban rendszerint nagyon érzékenyek, és könnyen aktivitáscsökkenést szenvednek. A vizes enzimkészitményeket ezért stabilizálni kell.
Kismolekulájú szervetlen sók hatására vonatkozólag ismeretes, hogy ezek anionos, valamint kationos komponensei vagy többnyire stabilizálólag vagy többnyire denaturálólag hathatnak az enzim konformációjára. Az ilyen anionokat és kationokat ezen hatásra való tekintettel az úgynevezett Hoffmeistersorba sorolták [Timasheff and Fasman, „Structure and Stability of Biological Macromolecules”, Mércéi Dekker, Inc. kiadás, New York, 1969, 427. old.]. A Hoffmeister-sor szerint az anionok és kationok egymástól függetlenül vagy többnyire stabilizálólag vagy többnyire denaturálólag hatnak. A stabilizáló hatás élén a szulfát-anion és kvatemer ammóniumionok állnak, ezeket követi az ammóniumion. Könnyen érthető ezért, hogy a kereskedelmi enzimkészítmények túlnyomó többsége stabilizálószerként ammónium-szulfátot tartalmaz, önmagában vagy adott esetben egyéb specifikus stabilizálószerekkel együtt. A kcleszterinoxidázt is kereskedelmi forgalomban levő vizes oldatban eddig ammónium-szulfáttal stabilizálták.
Kimutatták azonban, hogy a koleszterinoxidáz sta5 bi'itása ammónium-szulfát oldatban kifogásolható. A legjobb stabilizáló hatást körülbelül 1 mólos ammónium-szulfát koncentráció eredményezi, és nagyobb ammónium-szulfát koncentrációnál csökken a stabilitás. Már 1 mólos koncentrációnál is előfordulnak 0 időnként durva, rögös, zsíros enzimkiválások, amelyek azonban enzimatikusan még aktívak, de az adagolást a kiszereléskor (letöltésnél) nehezítik.
Meglepően azt észleltük, hogy ez a nehézség elkerülhető, és egyrészt a kiválás teljesen megakadályoz5 ható, másrészt kiváló stabilizálás érhető el, ha stabilizálószerként nátrium-kloridot vagy kálium-kloridot használunk 2,0 és 3,5 mól közötti koncentrációban.
A találmány tárgya ezért olyan puffért és stabilizáiószert tartalmazó, tárolható, vizes koleszterin0 oxidáz készítmény, amelyre az jellemző, hogy literenként 2-3,5 mól nátrium-kloridot vagy kálium-klondet tartalmaz stabilizálószerként. Előnyösen 2,5 és 3,2 mól közötti koncentrációban nátrium-kloridot tartalmaz.
Az említett sók kiemelkedő stabilizáló hatása nem volt várható, mivel a Hoffmeister-sor szerint a kálium és nátrium lényegesen kevésbé stabilizál, azaz erősebben inaktivál, mint az ammónium, és a klorid is sokkal erősebben inaktivál, mint a szulfát. Ehhez jön 0 még az, hogy különösen a flavinenzimeket, amelyek közé a koleszterinoxidáz is tartozik, alkáli-kloridok nagyobb koncentrációban inaktiválják [Theorell, Acta Chem. Scand. 3.1649 (1954)].
Az előbb megadott körülmények között jó stabilitás 4,5 és 8,5 pH-crtékek között áll fenn. A talál· 5 mány szerinti koleszterinoxidáz készítmény pH-ja előnyösen 5,0 és 6,5 között van. A puffer molaritása általában 0,01 mól és 0,2 mól közötti, előnyös a 0,01 móltól 0,1 mólig terjedő tartomány.
Puffcranyagkcnt minden olyan só használható, 10 amely a fent megadott tartományban pufféról, például kálium-foszfát puffer, nátrium-foszfát puffer, kálium-foszfát/citromsav puffer, nátrium-acetát puffer stb.
Egyes esetekben már eddig is tároltak enzimeket is alkáli-klorid oldatokban. Ilyenkor azonban eljárási okok voltak mérvadók, például papain jobb kristályosíthatósága nátrium-klorid oldatban, mint ammónium-klorid oldatban, vagy a lektinek tisztítása kromatográfiával nátrium-klorid oldatban, hogy ennek a 2o rosszabb stabilitás velejárója lehetett. Flavinenzimek esetében azonban ilyen tárolási forma eddig nem volt ismeretes, mivel ez savas pH-értékcn a prosztetikus csoport lehasadásához vezet.
A találmány szerinti koleszterinoxidáz készítménynek az ammónium-szulfáttal stabilizált koleszterinoxidáz készítményhez viszonyított kiemelkedő tárolási stabilitása kiderül a következő kísérletekből :
Egy adag 450 egység/ml enzimkoncentrációjú koJeszterinoxidázt 0,05 mólos 6 pH-jú kálium-foszfát pufferban az alábbi táblázatban felsorolt sókoncentrációkra állítunk be, és 4 héten át 4 °C-on illetve + 35 °C-on tartjuk. Az ezen idő eltelte után megállapított maradék-aktivitást mutatja az alábbi I. táblázat. (A 2 hét után mért értetek zárójelben).
A találmány szerinti előnyös stabilizálás független az enzimkoncentrációtól és az enzimgyártmánytól (az egyes gyártási adagok gyakran eltérő stabilitásúak), és ez még erősebben kifejezésre jut, ha nem 1 mólos, hanem 3 mólos ammónium-szulfát oldattal végezzük az összehasonlítást.
I. táblázat
| Tárolási hőmérséklet | 1 mólos AS | Az adalék fajtája és koncentrációja 3 mólos NaCl | 3 mólos KC1 |
| + 4 “C | (100%) 100¾ | (96%) 96% | (100%) 100% |
| zavaros | tiszta | tiszta | |
| + 33°C | (86%) 55% | (88%) 88% | (91%) 87% |
| zavaros | tiszta | tiszta |
AS - ammónium-szulfát
II. táblázat
| Adag | Enzimkoncentráció | 1 mólos AS | 3 mólos AS | 3 mólos NaCl |
| 1 | 300 egység/ml | (73%) 58% | (100%) 92% | |
| 30 egység/ml | (77%)67% | (68%) 49% | (100%) 96% | |
| 2 | 300 egység/ml | (73%) 68% | (100%) 88%. | |
| 30 egység/ml | (55%) 55% | (87%) 33% | (100%) 88% |
Két különböző enzimadagot a fent megadott puffénál 300 egység/ml illetve 30 egység/ml koncentrációra állítottunk be, és azután a fent leírtak szerint 4 hétig 35 °C-on tartottuk. Az alábbi 11. táblázat adja meg a 4 hét múlva mért maradék-aktivitásokat. Zárójelben a 2 hét után mért értékeket tüntetjük fel.
Annak bemutatására, hogy a találmány szerinti kiemelkedő stabilizálás egy bizonyos koncentrációtartományra korlátozódik, egy meghatározott koncentrációjú enzimadagnál tárolási kísérleteket végeztünk 35 C-on 2 hétig, illetve 4 hétig. Az eredményeket a III. táblázat szemlélteti.
| 55 | 111. táblázat | ||
| Adalék | Maradék- | ||
| Chol-OD- | aktivitás | + 35 “C-on | |
| 60 | -oldathoz | 2 hét után | 4 hét után |
| adalék nélkül | 80% | 47% | |
| 10 mmól NaCl | 80% | 47% | |
| 0,1 mól NaCl | 85% | 50% | |
| 65 | 3 mól NaCl | 93% | 54% |
A táblázat adataiból egyértelműen kitűnik, hogy kis nátrium-klorid koncentrációnál gyakorlatilag nem érhető cl stabilizálás, ezzel szemben a találmányunk szerinti megoldással lényegesen jobb, stabilabb készítmény állítható elő. J
Claims (5)
- Szabadalmi igénypontok:1. Tárolható, vizes, puffért és stabilizálószert tar- i0 talmazó koleszterinoxidáz készítmény, azzal jellemezve, hogy literenként 2-3,5 mól nátrium-kloridot vagy kálium-kloridot tartalmaz stjpilizjílószerként.
- 2. Az I. igénypont szerinti készítmény kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy literenként 2,5-3,2 mól nátrium-kloridot tartalmaz.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti készítmény kiviteli alakja, azzal jellemezve, hugy pH-értéke 4,5 és 8,5 kozott van.
- 4. A 3. igénypont szerinti készítmény kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy pH-értéke 5 cs 6,5 között van.
- 5. Az előbbi igénypontok bármelyike szerinti készítmény kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a puffersó koncentrációja 0,01 -0,5 mól/liter.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2755799A DE2755799B1 (de) | 1977-12-14 | 1977-12-14 | Lagerfaehige Cholesterinoxidasepraeparation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU179431B true HU179431B (en) | 1982-10-28 |
Family
ID=6026143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU78BO1754A HU179431B (en) | 1977-12-14 | 1978-12-13 | Storable cholesterinoxydase preparation |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4366249A (hu) |
| EP (1) | EP0002438B1 (hu) |
| JP (1) | JPS5489015A (hu) |
| AT (1) | AT363893B (hu) |
| CA (1) | CA1108050A (hu) |
| CS (1) | CS215112B2 (hu) |
| DD (1) | DD140259A5 (hu) |
| DE (2) | DE2755799B1 (hu) |
| DK (1) | DK145614C (hu) |
| HU (1) | HU179431B (hu) |
| IL (1) | IL55946A (hu) |
| IT (1) | IT1099545B (hu) |
| ZA (1) | ZA786974B (hu) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5047327A (en) * | 1982-04-02 | 1991-09-10 | Ivan E. Modrovich | Time-stable liquid cholesterol assay compositions |
| JPS60194373U (ja) * | 1984-06-04 | 1985-12-24 | 株式会社ピ−エフユ− | フエライトコアの実装構造 |
| AU2008201734B2 (en) * | 1999-06-21 | 2012-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same |
| MXPA02000067A (es) * | 1999-06-21 | 2003-02-27 | Daiichi Pure Chemicals Co Ltd | Metodo de pretratamiento de muestra para cuantificar colesterol y metodo para cuantificar colesterol en lipoproteinas especificas utilizando el mismo. |
| JP4542234B2 (ja) * | 1999-06-21 | 2010-09-08 | 積水メディカル株式会社 | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 |
| AU2015202990B2 (en) * | 1999-06-21 | 2017-11-02 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same |
| CA2869445C (en) * | 2012-04-27 | 2020-05-05 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for stabilizing cholesterol oxidase |
| US11878381B2 (en) | 2020-08-06 | 2024-01-23 | Mate Precision Technologies Inc. | Tooling base assembly |
| US11759914B2 (en) | 2020-08-06 | 2023-09-19 | Mate Precision Technologies Inc. | Vise assembly |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2344567A1 (fr) * | 1976-03-17 | 1977-10-14 | Mitsubishi Chem Ind | Procede de preservation de glucose-isomerase et solution de glucose-isomerase |
| US4077842A (en) * | 1976-03-19 | 1978-03-07 | Cory Robert Paul | Stabilized glucose isomerase enzyme concentrate |
| JPS52143285A (en) * | 1976-05-26 | 1977-11-29 | Kikkoman Corp | Stabilization of cholesterol-oxydase |
-
1977
- 1977-12-14 DE DE2755799A patent/DE2755799B1/de active Granted
-
1978
- 1978-10-03 AT AT0712678A patent/AT363893B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-10-04 EP EP78101065A patent/EP0002438B1/de not_active Expired
- 1978-10-04 DE DE7878101065T patent/DE2860583D1/de not_active Expired
- 1978-10-26 IT IT29156/78A patent/IT1099545B/it active
- 1978-11-02 DK DK489278A patent/DK145614C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-11-08 CA CA315,983A patent/CA1108050A/en not_active Expired
- 1978-11-14 IL IL55946A patent/IL55946A/xx unknown
- 1978-11-30 DD DD78109434A patent/DD140259A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-12-08 CS CS788159A patent/CS215112B2/cs unknown
- 1978-12-12 JP JP15275878A patent/JPS5489015A/ja active Granted
- 1978-12-13 ZA ZA00786974A patent/ZA786974B/xx unknown
- 1978-12-13 HU HU78BO1754A patent/HU179431B/hu unknown
-
1982
- 1982-01-15 US US06/339,760 patent/US4366249A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT7829156A0 (it) | 1978-10-26 |
| DK489278A (da) | 1979-06-15 |
| CA1108050A (en) | 1981-09-01 |
| EP0002438A1 (de) | 1979-06-27 |
| US4366249A (en) | 1982-12-28 |
| AT363893B (de) | 1981-09-10 |
| ATA712678A (de) | 1981-02-15 |
| EP0002438B1 (de) | 1981-04-01 |
| ZA786974B (en) | 1979-12-27 |
| IL55946A (en) | 1981-11-30 |
| DE2755799B1 (de) | 1978-08-03 |
| DK145614C (da) | 1983-06-13 |
| DE2755799C2 (hu) | 1979-04-12 |
| DD140259A5 (de) | 1980-02-20 |
| IL55946A0 (en) | 1979-01-31 |
| DE2860583D1 (en) | 1981-04-23 |
| IT1099545B (it) | 1985-09-18 |
| JPS5724760B2 (hu) | 1982-05-26 |
| CS215112B2 (en) | 1982-07-30 |
| DK145614B (da) | 1982-12-27 |
| JPS5489015A (en) | 1979-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1303582B1 (en) | Stabilization of enzymes | |
| HU179431B (en) | Storable cholesterinoxydase preparation | |
| HUT69402A (en) | Process for producing stabilized pharmaceutical formulations comprising growth hormone and histidine | |
| ATE340587T1 (de) | Stabilisierte wachstumshormon zubereitung und verfahren zu deren herstellung | |
| EP1035847B1 (en) | Stable solution of zinc and bicarbonate ions | |
| EP0591956B1 (en) | Method for cleaning, preserving and disinfecting contact lenses | |
| PT92305B (pt) | Metodo para solubilizacao e naturacao da somatotropina | |
| KR880001154B1 (ko) | 항생물질의 안정화 방법 | |
| EP0755396B1 (en) | Stable aqueous folinate solution | |
| JPH1169973A (ja) | 酵素の安定化方法 | |
| JP2635009B2 (ja) | 安定なエルカトニン製剤 | |
| CA2001671C (en) | Aqueous elcatonin solution composition | |
| US4219621A (en) | Stabilized thymidine phosphorylase preparation and culture medium | |
| US7157416B2 (en) | Stabilization of enzymes | |
| HU205857B (en) | Process for producing liofilized products containing etoposide-2-dimethyl-amino derivative as active component | |
| JPH10511549A (ja) | 酵素の安定化 | |
| US2123214A (en) | Stabilized soluble stannite depilatory | |
| JPH0150209B2 (hu) | ||
| JPH0440893A (ja) | 酵素水溶液の安定化 | |
| JP4832015B2 (ja) | オキシグルタチオン含有水溶液 | |
| JPS62163689A (ja) | アミノアシラ−ゼ溶液の安定化法 | |
| JPH0822229B2 (ja) | 安定化された酵素水溶液 | |
| JP2635009C (hu) | ||
| JPH078807B2 (ja) | エルカトニン組成物 | |
| JPH0643339B2 (ja) | カルシトニン類水溶液組成物の安定化法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 |