FR3021503A1 - Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes - Google Patents
Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes Download PDFInfo
- Publication number
- FR3021503A1 FR3021503A1 FR1455046A FR1455046A FR3021503A1 FR 3021503 A1 FR3021503 A1 FR 3021503A1 FR 1455046 A FR1455046 A FR 1455046A FR 1455046 A FR1455046 A FR 1455046A FR 3021503 A1 FR3021503 A1 FR 3021503A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- plant
- mipep
- mipep319a
- peptide
- mir
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 title abstract description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 101150004048 MIPEP gene Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 267
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 131
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 85
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 68
- 101100350631 Arabidopsis thaliana miPEP319a gene Proteins 0.000 claims description 66
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 60
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 49
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 42
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 42
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 42
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 claims description 38
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 37
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 37
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 32
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 claims description 30
- 108091029991 miR319 stem-loop Proteins 0.000 claims description 29
- 108091089611 miR319a stem-loop Proteins 0.000 claims description 29
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 28
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 25
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 24
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 12
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 12
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 9
- 101100206196 Arabidopsis thaliana TCP3 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101100206197 Arabidopsis thaliana TCP4 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101100260060 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CCT3 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101100313194 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CCT4 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 abstract description 135
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 70
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 53
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 23
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 7
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 6
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 6
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 6
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 6
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 241000219828 Medicago truncatula Species 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 4
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 description 3
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 3
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 3
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 3
- 235000010624 Medicago sativa Nutrition 0.000 description 3
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 3
- 241000207746 Nicotiana benthamiana Species 0.000 description 3
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 3
- 235000002560 Solanum lycopersicum Nutrition 0.000 description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 2
- 108091007460 Long intergenic noncoding RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010021432 Immunisation reaction Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000699729 Muridae Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 101100043638 Solanum tuberosum SS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000010426 asphalt Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108091031564 miR171b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002420 orchard Substances 0.000 description 1
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000590 phytopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003128 rodenticide Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
La présente invention concerne l'utilisation de micropeptides (peptides codés par des microARNs ou « miPEPs ») pour favoriser la croissance des plantes.
Description
1 UTILISATION DE MICROPEPTIDES POUR FAVORISER LA CROISSANCE DES PLANTES La présente invention concerne l'utilisation de micropeptides (peptides codés par des 5 microARNs ou « miPEPs ») pour favoriser la croissance des plantes. Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codants, d'environ 21 nucléotides après maturation, qui contrôlent l'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel, en dégradant l'ARNm cible ou en inhibant sa traduction. 10 Les miRs sont notamment rencontrés chez les plantes. Les gènes ciblés par les miRs sont souvent des gènes clés de processus développementaux. Par exemple, les miR319 ciblent des facteurs de transcription de la famille TCP, impliqués dans la croissance cellulaire (Nag et al., Proc Natl Acad Sci USA, 106(52):22534-9, 2009). La surexpression du 15 miR3l9a conduit à un phénotype foliaire (phénotype Jaw, Palatnik et al., Nature, 425(6955) :257-63, 2003) de même qu'un phénotype floral (Nag et al., 2009). Les miRs pourraient donc, par leur action de régulation de l'expression de certains gènes, représenter une cible d'intérêt pour contrôler la croissance des plantes, et en particulier 20 pour en favoriser la croissance. La régulation de l'expression des miRs est très peu connue, mais il a été démontré que celle-ci fait intervenir, à l'instar de la plupart des gènes codants, une ARN polymerase II : cette enzyme produit un transcrit primaire, appelé «pri-miR», qui est ensuite maturé par 25 un complexe protéique contenant notamment les enzymes type Dicer. Cette maturation conduit tout d'abord à la formation d'un précurseur de miR appelé «pre-miR », ayant une structure secondaire en forme tige-boucle contenant le miR et sa séquence miR* complémentaire. Puis le précurseur est maturé, ce qui conduit à la formation d'un ARN double brin plus court contenant le miR et le miR*. Le miR est ensuite pris en charge par 30 le complexe RISC qui clive l'ARNm du gène cible ou bien inhibe sa traduction. Jusqu'à présent, les miRs, et par extension leur transcrit primaire, ont toujours été considérés, de par leur mode d'action particulier, comme des ARNs régulateurs non 3021503 2 codants et ne produisant aucun peptide. Or, les Inventeurs ont récemment mis en évidence dans la demande de brevet FR 13/60727 l'existence de micropeptides (ou « miPEPs », microRNA encoded PEPtides) capables de moduler l'accumulation des miRs.
Dans ce contexte, la présente invention a pour but de proposer de nouveaux outils efficaces et écologiques pour favoriser la croissance des plantes. L'un des aspects de l'invention est de proposer une nouvelle utilisation des miPEPs pour favoriser la croissance des plantes.
Un autre aspect de l'invention concerne également un nouveau procédé de culture de plantes. Un autre aspect de l'invention est de proposer une composition de miPEPs permettant de favoriser la croissance des plantes. L'un des autres aspects de l'invention est également de proposer une plante transgénique et 15 des parties de plantes transgéniques, et leur procédé de production. L'un des autres aspects de l'invention est également de proposer des organes, cellules et semences de plantes transgéniques. L'un des autres aspects de l'invention est de proposer des plantes modifiées écologiquement. 20 L'invention concerne donc l'utilisation d'un peptide pour favoriser la croissance d'une plante, ledit peptide étant introduit dans la plante, ledit peptide ayant une séquence d'acides aminés comprenant ou consistant en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, 25 ledit miPEP naturellement présent dans ladite plante étant un peptide de 4 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les 30 racines, la tige, les feuilles ou les fleurs. De manière surprenante et inattendue, les Inventeurs ont constaté que l'utilisation de peptides dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle de 3021503 3 miPEPs codés sur les transcrits primaires de miRs, permet de favoriser la croissance des plantes. Dans l'invention, les termes « microARN », « microARN non codant » et « miR » sont 5 équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent des petites molécules d'ARN d'environ 21 nucléotides, qui ne sont pas traduites et ne conduisent pas à un peptide ou une protéine. Cependant, sous cette forme mature, les miRs assurent une fonction de régulation de certains gènes via des mécanismes post-transcriptionnels, comme par exemple par l'intermédiaire du complexe RISC. 10 Le « transcrit primaire de miR» (ou « pri-miR ») correspond lui à la molécule d'ARN directement obtenue à partir de la transcription de la molécule d'ADN. Généralement, ce transcrit primaire subit une ou plusieurs modifications post-transcriptionnelles, qui entraînent par exemple une structure particulière de l'ARN ou un clivage de certaines parties de l'ARN par des phénomènes d'épissage, et qui conduisent à la forme précurseur du miR ou (« pre-miR »), puis à la forme mature du miR. Les termes « micropeptides » et « miPEPs » (microRNA encoded PEPtides) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent un peptide qui est codé par un cadre ouvert de lecture présent sur le transcrit primaire d'un miR, et qui est capable de moduler l'accumulation dudit miR. Les miPEPs au sens de la présente invention ne doivent être entendus comme étant nécessairement des peptides de petite taille, dans la mesure où « micro » ne correspond pas à la taille du peptide.
Comme indiqué dans la demande de brevet FR 13/60727, dont le contenu doit être considéré comme faisant partie de la présente demande, les miPEPs sont des peptides : - de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 60 acides aminés, notamment de 4 à 59 acides aminés, - codés par un cadre ouvert de lecture contenu dans le transcrit primaire d'un miR, de 30 préférence dans la partie 5' du transcrit primaire dudit miR, et - capables de moduler l'accumulation dudit miR dans une cellule eucaryote. 3021503 4 Les termes « cadre ouvert de lecture » ou « ORF » (open reading frame) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils correspondent à une séquence de nucléotides dans une molécule d'ADN ou d'ARN pouvant potentiellement coder un peptide ou une protéine: ledit cadre ouvert de lecture débute par un codon start (le codon start codant 5 généralement une méthionine), suivi d'une série de codons (chaque codon codant un acide aminé), et se termine par un codon stop (le codon stop n'étant pas traduit). Dans l'invention, les ORFs peuvent être dénommés de manière spécifique « miORFs » lorsque ceux-ci sont présents sur les transcrits primaires de miR. 10 Les miORFs tels que définis dans l'invention peuvent avoir une taille de 15 à 303 nucléotides. Un acide aminé étant codé par un codon de 3 nucléotides, les miORFs de 15 à 303 nucléotides codent des miPEPS de 4 à 100 acides aminés. En particulier, les miORFs ont une taille de : 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 47, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 15 87, 90, 93, 96, 99, 102, 105, 108, 111, 114, 117, 120, 123, 126, 129, 132, 135, 138, 141, 144, 147, 150, 153, 156, 159, 162, 165, 168, 171, 174, 177, 180, 183, 186, 189, 192, 195, 198, 201, 204, 207, 210, 213, 216, 219, 222, 225, 228, 231, 234, 237, 240, 243, 246, 249, 252, 255, 258, 261, 264, 267, 270, 273, 276, 279, 282, 285, 288, 291, 294, 297, 300 ou 303 nucléotides, et codent respectivement des miPEPs ayant une taille de : 20 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100 acides aminés. 25 Un miPEP peut également avoir une taille de 3 acides aminés. Compte tenu de la dégénérescence du code génétique, un même miPEP peut être codé par plusieurs séquences nucléotidiques. De telles séquences nucléotidiques, différentes entre 30 elles d'au moins un nucléotide mais codant un même peptide, sont appelées « séquences dégénérées ». 3021503 5 Dans l'invention, le terme « plante » fait référence de manière générale à tout ou partie d'une plante quel que soit son stade de développement (y compris la plante sous forme de graine ou de jeune pousse), à un ou plusieurs organes de la plante (comme par exemple les feuilles, les racines, la tige, les fleurs), à une ou plusieurs cellules de la plante, ou encore à 5 un amas de cellules de la plante. Dans l'invention, le terme « croissance » fait référence au développement de tout ou partie d'une plante au cours du temps. La croissance de la plante peut ainsi être déterminée et quantifiée par le suivi de paramètres évolutifs observables pour certaines parties, cellules ou organes de la plante, tels que les feuilles, les racines, les tiges ou encore les fleurs. 10 De manière non limitative, les paramètres permettant de déterminer et quantifier la croissance d'une plante peuvent être notamment : - la taille, la surface, le volume, la masse et le nombre de feuilles, - la taille et le nombre de fleurs, 15 - la taille de la tige (ou de la hampe florale), - la longueur et le nombre de racines, - la précocité de la germination, - la précocité du bourgeonnement, - la précocité de l'induction florale (ou transition florale), 20 - ou encore le nombre de cellules. Par ailleurs, dans l'invention, l'expression «favoriser la croissance de la plante », ou « améliorer la croissance de la plante », indique : - soit une accélération du développement (comme par exemple une taille des feuilles plus 25 importante pour une plante à un instant donné par rapport à une plante de référence), - soit à un accroissement du développement (comme par exemple une taille de feuilles plus importante pour une plante qui ne peut être atteinte par une plante de référence), - soit à une accélération et un accroissement du développement de la plante.
Il est important de noter que l'utilisation selon l'invention possède l'avantage d'être écologique, en comparaison des méthodes chimiques classiquement utilisées dans l'industrie botanique ou dans l'agriculture, car le miPEP est un peptide qui est présent naturellement chez la plante.
3021503 6 L'invention concerne également l'utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour en favoriser la croissance, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, 5 lequel miPEP naturellement présent est un peptide de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties 10 végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent.
15 Dans l'invention, l'expression « miPEP introduit par voie exogène » fait référence à un miPEP introduit artificiellement dans la plante, que celui-ci existe ou non naturellement dans la plante.
20 Si le miPEP existe naturellement chez la plante, il s'agit d'un « miPEP d'origine endogène ». Si le miPEP n'existe pas naturellement chez la plante, il s'agit d'un « miPEP d'origine exogène ».
25 Lorsqu'il est introduit dans la plante un « miPEP d'origine exogène », il est alors nécessaire d'introduire également le miR correspondant et son transcrit primaire. L'introduction d'un miPEP par voie exogène dans la plante implique donc une étape technique, laquelle étape n'est pas un phénomène naturel et ne correspond ni à un 30 croisement, ni à une sélection. Le miPEP introduit par voie exogène peut être soit un peptide produit hors de la plante (comme par exemple un peptide isolé et/ou purifié, un peptide synthétique ou un peptide 3021503 7 recombinant), soit un peptide produit dans la plante suite à l'introduction non naturelle d'un acide nucléique codant ledit miPEP dans ladite plante. La plante dans laquelle le miPEP n'a pas été introduit possède une quantité basale dudit 5 miPEP, qui correspond à celle dudit miPEP naturellement présent. L'utilisation d'un miPEP comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle dudit miPEP entraîne une augmentation de la quantité totale de miPEP, ce qui module l'accumulation du miR dont le transcrit primaire contient la séquence codant ledit miPEP.
10 Par ailleurs, le miPEP introduit se retrouve dans la plante et son introduction n'a pas d'impact sur sa stabilité. Dans l'invention, par « accumulation », on entend la production d'une molécule, telle qu'un miR ou un miPEP, dans la cellule.
15 Ainsi, la « modulation de l'accumulation » d'une molécule dans une cellule correspond à une modification de la quantité de cette molécule dans la cellule. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit miR est une diminution ou une 20 augmentation de l'accumulation dudit miR, en particulier une augmentation. Une « diminution de l'accumulation du miR» correspond à une baisse de la quantité de ladite molécule dans la cellule. A l'inverse, une « augmentation de l'accumulation du miR» correspond à une hausse de la 25 quantité de ladite molécule dans la cellule. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession 30 n'AT1G53230.1) et TCP4 (Accession n'AT3G15030.1) (numéros d'accession selon la banque de données The Arabidopsis Information Resource « TAIR »).
3021503 8 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans laquelle ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1.
5 En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit ledit miR319a possède une séquence nucléotidique présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence nucléotidique SEQ ID NO: 1.
10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est le miPEP319a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle 15 ledit miPEP319a possède une d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère telle qu' Arabidopsis thaliana, une plante légumineuse telle que Glycine max (soja), Medicago truncatula et Medicago sativa 20 (luzerne) ou une plante solanacée telle que Nicotiana benthamiana (tabac), Solanum tuberosum (pomme de terre), Solanum lycopersicum (tomate) ou Solanum melongena (aubergine). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 25 dans laquelle ladite plante est une plante crucifère. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est Arabidopsis thaliana.
30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana, 3021503 9 ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, ladite séquence du miPEP319a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au 5 moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d'Arabidopsis thaliana, la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP319a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP319a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par voie externe dans la plante, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support inerte.
15 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par arrosage et par pulvérisation. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 20 dans laquelle ledit miPEP est introduit par arrosage et par l'ajout d'un engrais. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par pulvérisation et par l'ajout d'un engrais.
25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit, par arrosage, par pulvérisation et par l'ajout d'un engrais. Les Inventeurs ont en effet constaté de manière inattendue qu'il est possible d'appliquer 30 directement une composition comprenant un miPEP sur la plante pour moduler l'accumulation du miR correspondant dans la plante, ce qui indique que le miPEP est capté par la plante.
3021503 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la plante est traitée avec une composition comprenant 10-9 M à 10-4 M dudit miPEP, notamment 10-9 M, 10-8 M, 10-7 M, 10-6 M, 10-5 M ou 10-4 M dudit miPEP.
5 De préférence, les compositions ont une concentration de 10-8 M à 10-5 M pour une application par arrosage ou par pulvérisation sur la plante. De manière complémentaire, des compositions plus ou moins concentrées peuvent être envisagées pour traiter la plante avec le miPEP. Par exemple, et de manière non limitative, 10 des compositions plus concentrées comprenant 10-1 M à 10-3 M, notamment 10-2 M de miPEP, peuvent être utilisées dans le cas où le miPEP introduit par voie exogène est administré à la plante par épandage. Les propriétés de solubilité des miPEPs sont déterminées notamment par leur composition 15 en acides aminés. Les miPEPs hydrophiles peuvent être solubilisés et conditionnés dans des solutions aqueuses, telles que l'eau. Les miPEPs hydrophobes peuvent être solubilisés et conditionnés dans des solvants, tels que les solvants organiques. Pour un traitement des plantes par les miPEPs, les solvants organiques sont des solvants 20 non toxiques pour les plantes en faibles quantités, c'est-à-dire qu'ils n'ont pas d'effet délétères sur le développement de la plante. De manière non limitative, les solvants organiques peuvent être choisis parmi l'acétonitrile et l'acide acétique. De manière non limitative, les solvants organiques peuvent être choisis parmi l'acétonitrile et l'acide acétique.
25 En particulier, le miPEP319a est solubilisé dans une solution comprenant 50 % d' acétonitrile, 10% d'acide acétique et 40% d'eau (volume/volume/volume). Les miPEPs peuvent également être solubilisés et conditionnés dans des mélanges de 30 solvants organiques, comme par exemple un mélange d' acétonitrile et d'acide acétique. En particulier, les miPEPs peuvent être solubilisés dans une solution comprenant 50 % d' acétonitrile, 10% d'acide acétique et 40% d'eau (volume/volume/volume).
3021503 11 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante.
5 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la taille de la tige est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le nombre de feuilles est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de feuilles d'une 15 plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la taille des feuilles est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans 20 laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le nombre de racines est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit 25 ledit miPEP par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 30 dans laquelle la longueur des racines est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la longueur 3021503 12 des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. L'augmentation des paramètres permettant de déterminer et quantifier la croissance chez la 5 plante dans laquelle a été introduit le miPEP (tels que la taille de la tige, le nombre et la taille des feuilles, ou encore le nombre et la longueur des racines) est de préférence mis en évidence par comparaison avec une plante identique (c'est-à-dire une plante de la même espèce et/ou variété), de même âge et cultivée dans les mêmes conditions mais dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit.
10 L'invention concerne également l'utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour en favoriser la croissance, ledit miPEP étant codé par le transcrit primaire, introduit artificiellement dans la plante, d'un miR, ledit transcrit primaire, ledit miR et ledit miPEP étant absents naturellement chez la plante, 15 ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs. Dans un mode de réalisation particulier, ledit transcrit primaire du miR, le miR et ledit 201 miPEP sont introduits dans la plante à l'aide d'un vecteur. Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé pour favoriser la croissance d'une plante, comprenant une étape d'introduction d'un miPEP dans une plante par voie exogène, ledit miPEP étant également présent naturellement dans ladite plante, 25 ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide de 4 à 100 acides aminés dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, laquelle séquence du miPEP naturellement présent est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins 30 un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, 3021503 13 la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent.
5 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession n'AT1G53230.1) et TCP4 (Accession n'AT3 G15030.1).
10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans lequel ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans 15 lequel ledit miPEP est le miPEP319a, en particulier, dans lequel ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère telle qu' Arabidopsis thaliana, une plante légumineuse telle que Glycine max (soja), Medicago truncatula et Medicago sativa 20 (luzerne) ou une plante solanacée telle que Nicotiana benthamiana (tabac), Solanum tuberosum (pomme de terre), Solanum lycopersicum (tomate) ou Solanum melongena (aubergine). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans 25 lequel ladite plante est une plante crucifère. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est Arabidopsis thaliana.
30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans lequel le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana, 3021503 14 ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, lequel miPEP319a naturellement présent est un peptide de 4 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, 5 ledit miPEP319a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d' Arabidopsis thaliana, la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP319a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit 10 miPEP319a naturellement présent. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit par voie externe dans la plante, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un 15 support inerte. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est administré à la plante sous la forme d'une composition comprenant 10-9 M à 10-4 M dudit miPEP, en particulier 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 ou 10-4 M dudit 20 miPEP. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante.
25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille de la tige est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la tige d'une plante 30 identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de feuilles est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans 3021503 15 laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans 5 laquelle la taille des feuilles est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de racines est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
15 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la longueur des racines est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la longueur des racines 20 d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un autre aspect, l'invention concerne une plante dans laquelle a été introduit un miPEP selon l'utilisation ou le procédé pour favoriser la croissance d'une plante décrits ci-dessus.
25 Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique comprenant: a) une étape d'introduction d'un acide nucléique codant un miPEP de 4 à 100 acides aminés dans une plante, ou dans au moins une cellule de ladite plante, dans des 30 conditions permettant l'expression dudit miPEP, ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler 3021503 16 l'accumulation dudit miR dans la plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à 5 l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante transgénique. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique obtenue à l'étape b) a une croissance améliorée par rapport à une plante identique dans laquelle ledit 10 acide nucléique n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'étape a) est réalisée à l'aide d'un vecteur contenant ledit acide nucléique, de préférence un plasmide.
15 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'expression dudit acide nucléique de l'étape a) est placée sous le contrôle d'un promoteur fort, de préférence un promoteur fort constitutif tel que le promoteur 35S.
20 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession n'AT1G53230.1) et TCP4 (Accession 25 n'AT3G15030.1). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR3l9a, en particulier, dans lequel ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en 30 SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP319a, en 3021503 17 particulier, dans lequel ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante 5 transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique introduit à l'étape a) comprend une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 3. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère telle qu'Arabidopsis thaliana, une plante légumineuse telle que Glycine max (soja), Medicago truncatula et Medicago sativa 10 (luzerne) ou une plante solanacée telle que Nicotiana benthamiana (tabac), Solanum tuberosum (pomme de terre), Solanum lycopersicum (tomate) ou Solanum melongena (aubergine). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante 15 transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique est une plante crucifère. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique est Arabidopsis 20 thaliana. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, comprenant : a) une étape d'introduction d'un acide nucléique contenant la séquence nucléotidique 25 SEQ ID NO : 3, codant le miPEP319a consistant en la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, dans une plante Arabidopsis thaliana, ou dans au moins une cellule de ladite plante Arabidopsis thaliana, dans des conditions permettant l'expression du miPEP319a, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis 30 thaliana, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, ledit miPEP319a étant capable de moduler l'accumulation dudit miR319, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d' Arabidopsis thaliana, et 3021503 18 b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante Arabidopsis thaliana transgénique.
5 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante 10 transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille de la tige est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
15 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de feuilles est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par 20 rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille des feuilles est augmentée chez 25 la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de racines est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par 3021503 19 rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante 5 transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la longueur des racines est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
10 Dans un aspect, l'invention concerne également une plante transgénique telle qu'obtenue par le procédé de production tel que défini ci-dessus. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition, en particulier une 15 composition phytosanitaire, comprenant le miPEP319a en tant que substance active, ledit miPEP319a consistant de préférence en SEQ ID NO : 2. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP319a est à une concentration de 10-9M à 10-4M, en particulier 1020 9, 108, 107, 106, 10-5 OU 104 M. De préférence, une composition telle que définie ci-dessus a une concentration de 10-8 M à 10-5 M pour une application par arrosage ou par pulvérisation sur la plante.
25 De manière complémentaire, des compositions plus ou moins concentrées peuvent être envisagées pour traiter la plante avec le miPEP. Par exemple, et de manière non limitative, des compositions plus concentrées comprenant 10-1 M à 10-3 M, notamment 10-2 M de miPEP, peuvent être utilisées dans le cas où le miPEP introduit par voie exogène est administré à la plante par épandage.
30 Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant.
3021503 20 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus formulée de façon à former un enrobé. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison 5 une quantité de semences d'une plante et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent chez ladite plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant en 10 combinaison une quantité de semences d'une plante crucifère, notamment A. thaliana, et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle du miPEP319a. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, 15 comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus formulée de façon à former une semence enrobée.
20 L'enrobage peut être réalisé selon les procédés classiquement utilisées dans l'industrie agroalimentaire et peut être obtenu en utilisant un matériau apte à se désagréger dans un solvant ou dans la terre, tel qu'un liant ou de l'argile. Selon l'invention, l'enrobage peut être utilisé pour par exemple conférer des propriétés 25 particulières à une composition de miPEP, ou encore à une composition de semences en combinaison avec un miPEP. Dans un autre aspect, l'invention concerne un protocole de production d'un peptide recombinant, dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP tel que défini ci-dessus, comprenant une étape de transformation d'un 30 organisme avec un vecteur d'expression codant ledit peptide recombinant.
3021503 21 Dans un mode de réalisation, ledit organisme est choisi parmi le groupe comprenant les bactéries, les levures, les champignons (autre que levures), les cellules animales, les plantes et les animaux.
5 Dans un mode de réalisation, ledit organisme est Escherichia En particulier, l'invention concerne un protocole de production d'un peptide recombinant tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes : - l'acide nucléique codant ledit peptide recombinant est lié à un acide nucléique 10 codant une étiquette, telle que la GST, - le vecteur d'expression contenant ledit acide nucléique codant ledit peptide recombinant est introduit dans la bactérie E. coh, - la bactérie E. coli contenant le vecteur d'expression est cultivée dans du milieu LB de préférence jusqu'à une DO comprise entre 0.2 et 0.4, 15 - la production du peptide recombinant est induite avec de l'IPTG, de préférence pendant 4 à 5 heures, - les bactéries E. coli sont centrifugées et lysées, - le surnageant est filtré, - ledit peptide recombinant est purifié sur une colonne d'affinité glutathion 20 sepharose, - si nécessaire, cliver la GST avec une protéase. Dans un autre aspect, l'invention concerne un anticorps reconnaissant spécifiquement le miPEP319a, en particulier ledit miPEP319a consistant en SEQ ID NO : 2.
25 Un tel anticorps peut être obtenu à partir d'un procédé connu de l'homme du métier, comme par exemple en injectant ledit miPEP319a à un animal non humain pour déclencher une réaction d'immunisation et la production d'anticorps par ledit animal.
30 Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé d'immunolocalisation du miPEP319a comprenant une étape de marquage d'un échantillon biologique d'une plante avec un anticorps reconnaissant spécifiquement ledit miPEP319a.
3021503 22 Les séquences du miPEP319a, de son cadre ouvert de lecture, du miR319a et des transcrits primaires du miR319a chez Arabidopsis thaliana sont indiquées dans le tableau 1. miR319a uuggacugaagggagcucccu SEQ ID NO : 1 miPEP319a MNIHTYHHLLFPSLVFHQ S SDVPNAL SLHIHT YEYIIVVIDPFRITLAFR SEQ ID NO : 2 miORF319a ATGAATATACATACATACCATCATCTTCTTT TCCCATCTCTAGTTTTTCATCAATCTTCTGAT GTTCCAAACGCTCTATCTCTTCATATACATA CATACGAATATATTATTGTTGTCATAGATCC ATTTAGAATCACTTTAGCTTTTAGATGA SEQ ID NO : 3 pri-miR319a TTGTATCCGCAGTGTATTTCCTCGCATCTAC CATCCCTTTTCTACGCCTCTCTCCCTCTCTCT CTTTCTCCATCAAATCTTGTTTTGTTCAAAC TCTCTCTCTCTCATCTATTCTCTCCATACAAT ACATGAATATACATACATACCATCATCTTCT TTTCCCATCTCTAGTTTTTCATCAATCTTCTG ATGTTCCAAACGCTCTATCTCTTCATATACA TACATACGAATATATTATTGTTGTCATAGAT CCATTTAGAATCACTTTAGCTTTTAGATGAG ATCTAGGGTTTCTTTGTTTTCTTTCAAATTTT GTTGCATATTCTTCTAAATCATGGTTTTTCG CTTGCTAGGTTATAGATCCATGCAAATATG GAGTAGATGTACAAACACACGCTCGGACGC ATATTACACATGTTCATACACTTAATACTCG CTGTTTTGAATTGATGTTTTAGGAATATATA TGTAGAGAGAGCTTCCTTGAGTCCATTCAC AGGTCGTGATATGATTCAATTAGCTTCCGAC TCATTCATCCAAATACCGAGTCGCCAAAAT TCAAACTAGACTCGTTAAATGAATGAATGA TGCGGTAGACAAATTGGATCATTGATTCTCT TTGATTGGACTGAAGGGAGCTCCCTCT SEQ ID NO : 4 Tableau 1.
5 10 3021503 23 5 10 Les pages 24 à 43 correspondent à des extraits de la demande de brevet 15 français n° FR 13/60727 déposée le 31 octobre 2013 pour « Micropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes » 20 25 30 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 24 L'objet de la demande FR 13 60727 concerne des micropeptides (peptides codés par des microARNs ou « miPEPs ») et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes. Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codants, d'environ 21 nucléotides après 5 maturation, qui contrôlent l'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel, en dégradant l'ARNm cible ou en inhibant sa traduction. Les miRs sont rencontrés chez les plantes et les animaux. Les gènes cibles sont souvent des gènes clés de processus développementaux. Ils codent 10 par exemple des facteurs de transcription ou des protéines du protéasome. La régulation de l'expression des miRs est très peu connue, mais on sait notamment que celle-ci fait intervenir, à l'instar de la plupart des gènes codants, une ARN polymerase : cette enzyme produit un transcrit primaire, appelé « pri-miR », qui est ensuite maturé par 15 un complexe protéique contenant notamment les enzymes type Dicer. Cette maturation conduit tout d'abord à la formation d'un précurseur de miR appelé « pre-miR », ayant une structure secondaire en forme tige-boucle contenant le miR et sa séquence miR * complémentaire. Puis le précurseur est maturé, ce qui conduit à la formation d'un ARN double brin plus court contenant le miR et le miR*. Le miR est ensuite pris en charge par 20 le complexe RISC qui clive l'ARNm du gène cible ou bien inhibe sa traduction. Par ailleurs, il a été montré que la présence d 'introns dans le transcrit primaire du microARN augmente l'expression du microARN mature (Schwab et al., EMBO Rep., 14(7): 615-21, 2013). Cependant, du fait de difficultés expérimentales, les transcrits 25 primaires de microARNs, ou pri-miRs, sont très peu étudiés. Environ 50% des gènes eucaryotes possèdent, au sein de leur région 5 'UTR (5' UnTranslated Region) en amont de la séquence codante, de petits cadres ouverts de lecture. Ces petits cadres ouverts de lecture (ou « uORFs » pour upstream ORFs) peuvent 30 jouer un rôle de régulateur de la traduction, principalement en cis, en modulant la fixation et la vitesse des ribosomes sur l'ARNm, mais également en trans selon un mécanisme encore inconnu, par l'intermédiaire de peptides codés par lesdits uORFs (Combier et al., 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 25 Gene Dev, 22:1549-1559, 2008). Par définition, les uORFS sont présents en amont de gènes codants. Récemment, il a également été découvert de petits ORFs dans de longs ARN non codants 5 intergéniques (lincRNAs) dont la fonction putative, si elle existe, n'est pas connue (Ingolia et al., Cell, 147(4): 789-802, 2011 ; Guttman & Rinn, Nature, 482 (7385):339-46, 2012). Toutefois, aucun exemple n'a encore été rapporté concernant l'existence d 'ORFs codant des peptides au sein de microARNs non codants. Jusqu'à présent, les microARNs, et par 10 extension leur transcrit primaire, ont toujours été considérés, de par leur mode d'action particulier, comme des ARNs régulateurs non codants ne produisant aucun peptide. L'un des aspects de l'objet de la demande FR 13 60727 est de proposer des peptides capables de moduler l'expression des microARNs.
15 Un autre aspect de l'objet de la demande FR 13 60727 est de proposer un moyen permettant de moduler l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles d'un microARN. L'objet de la demande FR 13 60727 présente l'avantage de permettre un contrôle plus facile et plus efficace de 1 'expression de gènes ciblés par les microARNs, à l'aide d'un moyen autre que le microARN.
20 L'objet de la demande FR 13 60727 concerne ainsi un procédé de détection et d'identification d'un micropeptide (miPEP) codé par une séquence nucléotidique contenue dans la séquence du transcrit primaire d'un microARN, comprenant : 25 - a) une étape de détection d'un cadre ouvert de lecture de 15 à 303 nucléotides contenu dans la séquence du transcrit primaire dudit microARN, puis - b) une étape de comparaison entre : - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, 30 en présence d'un peptide codé par une séquence nucléotidique identique ou dégénérée par rapport à celle dudit cadre ouvert de lecture, ledit peptide étant présent dans la cellule indépendamment de la transcription du transcrit primaire dudit microARN, et 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 26 - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, en absence dudit peptide, dans lequel, une modulation de 1 'accumulation dudit microARN en présence dudit peptide 5 par rapport à l'accumulation dudit microARN en absence dudit peptide indique l'existence d'un micropeptide codé par ledit cadre ouvert de lecture. Dans une première étape, le procédé de détection et d'identification d'un micropeptide consiste donc à détecter sur le transcrit primaire d'un microARN l'existence d'un cadre 10 ouvert de lecture codant potentiellement un peptide. La deuxième étape permet, quant à elle, de caractériser ledit peptide, c 'est-à-dire de déterminer si ledit peptide correspond a un peptide réellement produit dans la cellule, en recherchant un effet dudit peptide sur l'accumulation dudit microARN.
15 Pour mettre en évidence un effet du peptide sur l'accumulation du microARN, une quantité importante de peptide est introduite dans une première cellule exprimant ledit microARN. L 'accumulation du microARN dans cette première cellule est ensuite mesurée et comparée avec l'accumulation du microARN dans une deuxième cellule identique à la première, mais 20 ne contenant pas ledit peptide. L 'observation d'une variation des quantités de microARN entre les cellules en présence et en absence du peptide indique ainsi (i) qu'il existe un peptide codé sur le transcrit primaire dudit microARN, (ii) que la séquence de ce peptide est codée par le cadre ouvert de lecture 25 identifié sur le transcrit primaire dudit microARN, et (iii) que ledit peptide agit sur l'accumulation dudit microARN. L'objet de la demande FR 13 60727 repose donc sur la double observation inattendue faite par les Inventeurs que d'une part, il existe des cadres ouverts de lecture susceptibles de 30 coder des micropeptides présents sur les transcrits primaires de microARNs, et d'autre part que lesdits micropeptides sont capables de moduler l'accumulation desdits microARNs.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 27 Dans la demande FR 13 60727, les termes « microARN », « microARN non codant » et « miR » sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent des petites molécules d'ARN d'environ 21 nucléotides, qui ne sont pas traduites et ne conduisent pas à un peptide ou une protéine.
5 Cependant, sous cette forme mature, les microARNs assurent une fonction de régulation de certains gènes via des mécanismes post-transcriptionnels, comme par exemple par l'intermédiaire du complexe RISC. Le transcrit primaire du microARN ou « pri-miR » correspond lui à la molécule d 'ARN 10 directement obtenue à partir de la transcription de la molécule d'ADN. Généralement, ce transcrit primaire subit une ou plusieurs modifications post-transcriptionnelles, qui entraînent par exemple une structure particulière de 1 'ARN ou un clivage de certaines parties de 1 'ARN par des phénomènes d'épissage, et qui conduisent à la forme précurseur du microARN ou « pre-miR », puis à la forme mature du microARN ou « miR ».
15 Les termes « micropeptides » et « miPEPs » (microRNA encoded PEPtides) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent un peptide qui est codé par un cadre ouvert de lecture présent sur le transcrit primaire d'un microARN, et qui est capable de moduler l'accumulation dudit microARN. Les micropeptides au sens de la 20 demande FR 13 60727 ne doivent être entendus comme étant nécessairement des peptides de petite taille, dans la mesure où « micro » ne correspond pas à la taille du peptide. Compte tenu de la dégénérescence du code génétique, un même micropeptide peut être codé par plusieurs séquences nucléotidiques. De telles séquences nucléotidiques, 25 différentes entre elles d'au moins un nucléotide mais codant un même peptide, sont appelées « séquences dégénérées ». Les termes « cadre ouvert de lecture » ou « ORF » (open reading frame) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils correspondent à une séquence de nucléotides 30 dans une molécule d'ADN ou d'ARN pouvant potentiellement coder un peptide ou une protéine: ledit cadre ouvert de lecture débute par un codon start, suivi d'une série de codons, et se termine par un codon stop.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 28 Dans la demande FR 13 60727, les ORFs peuvent être dénommés de manière spécifique « miORFs » lorsque ceux-ci sont présents sur les transcrits primaires de microARN. Dans la demande FR 13 60727, par « accumulation », on entend la production d'une 5 molécule, telle qu'un microARN ou un micropeptide, dans la cellule. Ainsi, la « modulation » de l'accumulation d'une molécule dans une cellule correspond à une modification de la quantité de cette molécule présente dans la cellule. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 10 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit microARN, en particulier une augmentation. Une « diminution de l'accumulation » correspond à une baisse de la quantité de ladite 15 molécule dans la cellule. A l'inverse, une « augmentation de l'accumulation » correspond à une hausse de la quantité de ladite molécule dans la cellule. Dans un mode de réalisation avantageux, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un 20 procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une augmentation de 1 'accumulation dudit microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 25 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la présence dudit peptide dans la cellule résulte - de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit peptide, ou - de l'introduction dans la cellule dudit peptide 30 De manière à caractériser un miPEP, il est nécessaire de disposer d'un modèle cellulaire exprimant un microARN et dans lequel ledit peptide à tester est présent. Pour cela, il est possible d'introduire un peptide dans la cellule, soit en mettant la cellule en contact avec 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 29 le dit peptide, soit en introduisant dans la cellule un acide nucléique codant ledit peptide, lequel acide nucléique sera alors traduit en peptide à l'intérieur de la cellule. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 5 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel le dit cadre ouvert de lecture de l'étape a) est contenu dans la partie 5' ou 3' dudit transcrit primaire du microARN, de préférence dans la partie 5'. Les parties 5' ou 3' du transcrit primaire du microARN correspondent aux parties 10 terminales de la molécule de l'ARN qui sont clivées au cours de la maturation du microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit 15 microARN est présent dans une cellule végétale sauvage. Dans la demande FR 13 60727, une cellule végétale sauvage correspond à une cellule végétale qui n'a pas été modifiée génétiquement par l'homme.
20 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite cellule eucaryote déterminée, et ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b, sont des cellules végétales, de préférence des cellules de Medicago truncatula ou d'Arabidopsis thaliana.
25 Dans le procédé de détection et d'identification d'un micropeptide tel que défini ci-dessus, après avoir identifié un ORF susceptible de coder un peptide sur le transcrit primaire d'un microARN, il est nécessaire de disposer d'un modèle cellulaire possédant ledit microARN et ledit peptide, pour pouvoir démontrer un effet éventuel du peptide sur ledit microARN.
30 Deux options sont donc envisageables : - le modèle cellulaire dans lequel a été identifié le miORF et celui dans lequel est mis en évidence l'effet du peptide sur le miR sont identiques, ou 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 30 - le modèle cellulaire dans lequel a été identifié le miORF et celui dans lequel est mis en évidence l'effet du peptide sur le miR sont différents. Dans la première option, le modèle cellulaire utilisé pour observer un effet du peptide est 5 le même que celui dans lequel le transcrit primaire dudit microARN a été isolé. Dans ce modèle cellulaire, les cellules eucaryotes déterminées contiennent naturellement ledit microARN et seul le peptide à tester doit être introduit dans ces cellules. Dans ce contexte, ledit microARN est qualifié « d'origine endogène » car celui-ci existe naturellement dans les cellules. Néanmoins, dans une cellule, d'autres copies d'un microARN d'origine 10 endogène peuvent être ajoutées, comme par exemple en introduisant dans la cellule un vecteur codant ledit microARN d'origine endogène. Dans la deuxième option, le modèle cellulaire utilisé pour observer un effet du peptide est différent de celui dans lequel le transcrit primaire dudit microARN a été isolé. Dans ce 15 modèle cellulaire, les cellules eucaryotes déterminées ne contiennent ni le microARN, ni le peptide à tester. Ces deux éléments doivent donc être introduits dans ces cellules. Dans ce contexte, ledit microARN est qualifié « d'origine exogène » car celui-ci n'existe pas naturellement dans les cellules.
20 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b).
25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN est d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b), lesdites cellules eucaryotes contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN.
30 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 31 l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une RT-PCR quantitative ou un Northern blot.
5 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une puce à ADN ou à ARN.
10 L'accumulation dudit microARN peut être déterminée à l'aide des techniques de biologie moléculaire permettant le dosage de molécules d'acides nucléiques spécifiques.
15 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également un procédé de détection et d'identification d'un microARN dont la séquence du transcrit primaire contient une séquence nucléotidique codant un miPEP, comprenant - a) une étape de détection d'un cadre ouvert de lecture de 15 à 303 nucléotides contenu 20 dans la séquence du transcrit primaire dudit microARN, puis - b) une étape de comparaison entre - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, en présence d'un peptide codé par une séquence nucléotidique identique ou 25 dégénérée par rapport à celle dudit cadre ouvert de lecture, ledit peptide étant présent dans la cellule indépendamment de la transcription du transcrit primaire dudit microARN, et - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote, de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, 30 en absence dudit peptide, dans lequel, une modulation de l'accumulation dudit microARN en présence dudit peptide par rapport à l'accumulation dudit microARN en absence dudit peptide indique l'existence 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 32 d'un microARN dont le transcrit primaire contient une séquence nucléotidique codant un micropeptide. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 5 détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit microARN, en particulier une augmentation.
10 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel la présence dudit peptide dans la cellule résulte : - de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit peptide, ou - de l'introduction dans la cellule de ledit peptide.
15 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel le dit cadre ouvert de lecture de l'étape a) est contenu dans la partie 5' ou 3' dudit transcrit 20 primaire du microARN, de préférence dans la partie 5'. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit 25 microARN est présent dans une cellule végétale sauvage. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite 30 cellule eucaryote, et ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b) sont des cellules végétales, de préférence des cellules de Medicago truncatula.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 33 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule 5 eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b). Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus dans lequel ledit 10 microARN est d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b), lesdites cellules eucaryotes contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN.
15 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une RT-PCR quantitative ou un Northern blot.
20 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une puce à ADN ou à ARN. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel qu'obtenu par la mise en oeuvre du procédé tel que défini ci-dessus.
25 30 Un autre aspect de l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également un miPEP de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 40 acides aminés, codé par une séquence 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 34 nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote.
5 Par ailleurs, il convient de noter que plusieurs miORFS peuvent être identifiés sur le transcrit primaire d'un microARN, indiquant qu'un transcrit primaire de microARN peut potentiellement coder plusieurs miPEPs. 10 il convient également de noter que l'effet d'un miPEP est généralement spécifique d'un seul microARN, à savoir celui résultant du transcrit primaire codant ledit miPEP. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel 15 que défini ci-dessus, ladite séquence nucléotidique étant contenue dans la partie 5' ou 3' dudit transcrit primaire d'un microARN, de préférence dans la partie 5'. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ladite séquence nucléotidique correspondant au premier cadre ouvert 20 de lecture présent sur ledit transcrit primaire d'un microARN. a Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ledit miPEP possédant un point isoélectrique basique, de préférence 25 supérieur à 8. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une molécule d'acide nucléique codant un miPEP tel que défini ci-dessus.
30 Dans autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un vecteur comprenant au moins une molécule d'acide nucléique tel que définie ci-dessus.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également l'utilisation d'au moins : 5 - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique, pour moduler l'expression d'au moins un gène dans une cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée étant capable d'exprimer un microARN, dont le 10 transcrit primaire contient au moins une séquence nucléotidique codant ledit au moins un miPEP et dont l'accumulation est modulée par ledit au moins un miPEP, l'expression dudit au moins un gène étant régulée par ledit microARN.
15 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également l'utilisation d'au moins : - un miPEP de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 40 acides aminés, codé par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN dans une cellule 20 eucaryote, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique, pour moduler l'expression d'au moins un gène dans une cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée étant capable d'exprimer un microARN, dont le 25 transcrit primaire contient au moins une séquence nucléotidique codant ledit au moins un miPEP et dont l'accumulation est modulée par ledit au moins un miPEP, l'expression dudit au moins un gène étant régulée par ledit microARN.
30 L'objet de la demande FR 13 60727 repose sur l'observation surprenante faite par les Inventeurs qu'il est possible de moduler l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles d'un même microARN en modulant l'accumulation dudit microARN à l'aide d'un miPEP.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 36 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ladite cellule eucaryote déterminée est une cellule végétale.
5 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN et ledit gène sont d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote déterminée.
10 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN et ledit gène sont d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée 15 contenant au moins un vecteur permettant l'expression dudit microARN et dudit gène. Dans la demande FR 13 60727, les expressions « d'origine endogène » et « d'origine exogène » sont utilisées pour distinguer lesdits microARNs et/ou les gènes d'espèces 20 différentes, étant donné la conservation des séquences entre espèces. Ainsi, le terme « d'origine endogène » indique que le microARN et/ou le gène peuvent être présents de manière naturelle dans la cellule en question. De manière artificielle, d'autres copies du microARN et/ou du gène d'origine endogène peuvent néanmoins être ajoutées dans la cellule en question, comme par exemple par clonage.
25 A l'inverse, le terme « d'origine exogène » indique que le microARN et/ou le gène ne sont jamais présents naturellement dans la cellule en question. Il s 'agit d'un microARN et/ou d'un gène identifié dans un autre type cellulaire ou dans un organisme d'une autre espèce, ce microARN et/ou ce gène sont donc nécessairement introduits artificiellement dans la cellule en question.
30 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 37 Dans la demande FR 13 60727, une cellule transformée génétiquement peut donc contenir 2 groupes de microARNs et/ou de gènes potentiellement proches en termes de séquence, l'un d'origine endogène et l'autre d'origine exogène.
5 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène régulée par un microARN dans une cellule eucaryote, comprenant la mise en oeuvre d'une étape d'accumulation d'un miPEP dans ladite cellule 10 eucaryote, ledit miPEP ayant : une taille de 4 à 100 acides aminés, de préférence 4 à 20 acides aminés, et une séquence peptidique identique à celle codée par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN régulant l'expression dudit 15 gène, et étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN, dans lequel, l'accumulation dudit miPEP dans ladite cellule eucaryote induit une modulation de l'expression dudit gène par rapport à l'expression dudit gène sans accumulation dudit miPEP.
20 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit miPEP dans la cellule résulte : 25 - de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - de l'introduction dans la cellule dudit miPEP. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 30 modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ladite cellule eucaryote est une cellule végétale.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 38 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN et ledit gène sont d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote.
5 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN et ledit gène sont d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote, ladite cellule eucaryote contenant au moins un vecteur permettant l'expression dudit microARN et dudit gène.
10 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée contenant un peptide identique à un miPEP tel que défini ci-dessus, lequel peptide est présent dans ladite cellule eucaryote indépendamment de la transcription du transcrit 15 primaire du microARN portant la séquence nucléotidique codant ledit miPEP. Dans la demande FR 13 60727, le terme « cellule eucaryote modifiée » signifie que ladite cellule eucaryote contient un miPEP introduit artificiellement dans la cellule, que ce soit 20 en tant que peptide, ou par l'intermédiaire d'un vecteur codant ledit miPEP. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit microARN est d'origine 25 endogène. Dans un autre mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN est 30 d'origine exogène, ladite cellule eucaryote modifiée contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 39 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus, ladite cellule étant une cellule végétale.
5 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une plante comprenant au moins une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition 10 comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique.
15 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition pesticide comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou 20 - un vecteur contenant ledit acide nucléique. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition phytopharmaceutique comprenant au moins : 25 - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique.
30 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition élicitrice comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 - un vecteur contenant ledit acide nucléique. Par « composition élicitrice », on désigne une composition capable de conférer à la plante 5 une meilleure aptitude à la symbiose ou une meilleure résistance à différents stress, qu'ils soient de nature thermiques, hydriques ou chimiques. A cet effet, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également des compositions agissant sur la croissance (inhibition de la croissance ou au contraire augmentation de la croissance) et la physiologie (meilleure aptitude à mycorhizer, noduler, meilleure 10 tolérance à différents stress) de la plante. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition herbicide comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, 15 - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition 20 insecticide comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique.
25 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu 'herbicide pour éliminer les plantes ou ralentir leur croissance, de préférence en tant qu'herbicide spécifique d'une espèce ou d'un genre de plantes.
30 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu'agent phytopharmaceutique, 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 41 - pour favoriser la croissance et/ou le développement des plantes, notamment pour la modulation des paramètres physiologiques d'une plante, en particulier la biomasse, la surface foliaire, la floraison, le calibre du fruit, la production et/ou la sélection de semence végétales, en particulier pour contrôler la parthénocarpie ou la 5 monoecie d'une plante, ou pour la modification des paramètres physiologiques de semences végétales, en particulier la germination, l'implantation racinaire et la résistance au stress hydrique, ou pour prévenir ou traiter les maladies des plantes, en particulier pour favoriser la résistance aux maladies infectieuses.
10 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour moduler les paramètres physiologiques d'une plante, en particulier la biomasse, la surface foliaire, ou le calibre du fruit. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour 1 'éclaircissage de vergers afin d'augmenter le calibre des fruits. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour la production et/ou la sélection de semences végétales, ladite composition étant utilisée pour contrôler la parthénocarpie ou la monoecie d'une plante.
25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, ladite composition étant administrée à ladite plante par la voie foliaire ou par la voie racinaire.
15 20 30 3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 42 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour la production et/ou la sélection de semences végétales.
5 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est utilisée pour modifier les paramètres physiologiques desdites semences végétales, en particulier l'implantation racinaire, la germination et la résistance au stress hydrique.
10 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est appliquée par enrobage ou pelliculage sur lesdites semences végétales.
15 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant que pesticide, pour éliminer les organismes nuisibles des plantes ou susceptibles d'être classés comme tels, notamment en tant qu'insecticide, arachnicide, limacide ou rodonticide.
20 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu'insecticide. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour éliminer les insectes ravageurs.
25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour éliminer les espèces animales classées nuisibles ou susceptibles d'être classées comme telles, en particulier les muridae, 30 notamment le rat.
3021503 Extraits de la demande FR 13 60727 43 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est appliquée sur une plante pour la protéger d'insectes ravageurs.
5 3021503 44 Les figures et les exemples suivants illustreront mieux l'invention, sans pour autant en limiter sa portée. LEGENDES DES FIGURES 5 FIGURE 1. Effets de la surexpression du AtmiPEP319a sur l'expression du AtmiR319a chez A. thaliana. L'axe des ordonnées indique l'expression relative du AtmiR319a chez une plante témoin (colonne de gauche) ou chez une plante dans laquelle est surexprimé AtmiPEP319a 10 (colonne de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 10). La surexpression de AtmiPEP319a induit une augmentation de l'accumulation de Atmir319a. FIGURE 2. Effets d'un traitement avec le miPEP319a sur la croissance d'Arabidopsis 15 thaliana. Les photographies présentent deux plantes (vues de dessus et vues de côté) après 3 semaines de croissance : une plante contrôle arrosée et vaporisée avec de l'eau (A) et une plante arrosée et vaporisée avec une composition de 0,1 1.1M de peptide synthétique dont la séquence est identique miPEP319a (B). L'arrosage des plantes d'Arabidopsis thaliana 20 avec le miPEP319a augmente significativement la croissance de la plante.
25 30 3021503 EXEMPLES Exemple 1 - Identification et caractérisation du miPEP319a 5 Pour identifier des miPEPs codés par des pri-miRNAs de plantes, des ORFS ont été recherchés dans des données de RACE-PCR (Xie et al., Plant Physiol, 138:2145-54, 2005), dans lesquelles les séquences de l'extrémité 5' du pri-miR de 50 miRs d'A. thaliana est disponible. Des ORFs susceptibles de coder des peptides de 4 à 59 acides aminés ont été identifiés 10 dans chacun des pri-miRs, et notamment un miORF, identifié sur le pri-miR du miR319a, susceptible de coder un peptide miPEP319a. Pour tester si ce peptide est réellement un miPEP, celui-ci a été synthétisé et a été utilisé pour rechercher une augmentation de l'accumulation du miR319a chez des racines d'A. 15 thaliana traitées avec le peptide synthétique. Les analyses par qPCR indiquent que la surexpression de AtmiPEP319a induit une augmentation de l'accumulation de Atmir319a (Figure 1). Par ailleurs, des expériences de croissance ont également été réalisées sur des plantes A. 201 thaliana et indiquent que l'arrosage et la vaporisation des plantes d'A. thaliana avec le miPEP319a augmente significativement la croissance de la plante (Figure 2). Exemple 2 - Matériel et méthodes 25 Plantes Les plantes A. thaliana Col-0 sont cultivées sur un milieu de base MS complété avec 10 g/1 de sucrose. Peptides 30 Les peptides ont été synthétisés par Smartox et dissous dans une solution d'eau 40%/ acétonitrile 50%/ acide acétique 10% (v/v/v).
3021503 46 Transcription inverse des microRNAs L'ARN a été extrait en utilisant le réactif Tri-Reagent (MRC) selon les instructions du fabricant, à l'exception de la précipitation de l'ARN qui a été réalisée avec 3 volumes d'éthanol. La transcription inverse de l'ARN a été réalisée en utilisant l'amorce spécifique 5 RTprimer171b tige boucle en combinaison avec des hexamères pour effectuer la transcription inverse de l'ARN de haut poids moléculaire. En bref, 1 lag de RNA a été ajouté à l'amorce tige boucle MIR171b (0,2 pM), l'héxamère (500 ng), le tampon RT (1X), l'enzyme SuperScript Reverse transcriptase (SSIII) (une unité), les dNTPs (0,2 mM chacun), le DTT (0,8 mM) dans un mélange réactionnel final de 10 25 pl. Pour effectuer la transcription inverse, une réaction de transcription inverse pulsée a été réalisée (40 répétitions du cycle suivant : 16°C pendant 2 minutes, 42°C pendant une minute et 50°C pendant une seconde, suivies d'une inactivation finale de la transcription inverse à 85°C pendant 5 minutes).
15 Analyses par RT-PCR quantitative (qRT-PCR) L'ARN total des racines de M truncatula ou des feuilles de tabac a été extrait en utilisant le kit d'extraction RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). La transcription inverse a été réalisée en utilisant la transcriptase inverse SuperScript II (Invitrogen) à partir de 500 ng d'ARN total. Trois répétitions (n=3) ont été réalisées avec deux répétitions techniques chacune.
20 Chaque expérience a été répétée de deux à trois fois. Les amplifications par qPCR ont été réalisées en utilisant un thermocycleur LightCycler 480 System (Roche Diagnostics) selon la méthode décrite dans Lauressergues et al. (Plant 1, 72(3):512-22, 2012). Constructions plasmidiques 25 Les fragments d'ADN d'intérêt ont été amplifiés avec la Pfu polymerase (Promega). Les fragments d'ADN ont été clonés pour une surexpression sous le contrôle du promoteur fort constitutif 35S selon la méthode décrite dans Combier et al. (Genes & Dev, 22: 1549-1559, 2008). Le miORF319a a été cloné dans pBIN19 selon la méthode décrite dans Combier et al. 30 (Genes & Dev, 22: 1549-1559, 2008).
3021503 47 Analyses statistiques Les valeurs moyennes de l'expression relative des gènes ou de la production de racines latérales ont été analysées en utilisant le test de Student ou le test de Kruskal-Wallis. Les barres d'erreurs représentent l'écart type de la moyenne (SEM, Standard Error of the 5 Mean). Les astérisques indiquent une différence significative (p<0,05). Test de croissance d'A. thaliana Les graines d' Arabidopsis thaliana ont germé sur GiFi, puis ont été repiquées en terreau et cultivées pendant 3 semaines.
10 L'arrosage a été réalisé tous les 2-3 jours et la vaporisation a été réalisée tous les jours avec de l'eau pour les plantes contrôles et avec de l'eau contenant 0,1 1.1M de peptide synthétique (dont la séquence est identique miPEP319a) pour les plantes tests. 15 20 25 30
Claims (12)
- REVENDICATIONS1. Utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour en favoriser la croissance, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, lequel miPEP naturellement présent est un peptide de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent. notamment, ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 et TCP4.
- 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans laquelle ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1.
- 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit miPEP est le miPEP319a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2.
- 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère, telle qu'Arabidopsis thaliana, une plante solanacée ou une plante légumineuse. 3021503 49
- 5. Procédé pour favoriser la croissance d'une plante, comprenant une étape d'introduction d'un miPEP dans une plante par voie exogène, ledit miPEP étant également présent naturellement dans ladite plante, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide de 4 à 100 acides aminés 5 dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, laquelle séquence du miPEP naturellement présent est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou 10 reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent, notamment, ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou 15 reproductrices de la plante étant choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 et TCP4.
- 6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel ledit miR est le miR319a, ledit miR319a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1, ledit miPEP étant notamment le miPEP319a, ledit miPEP319a possédant en particulier 20 une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2 ladite plante étant notamment une plante crucifère, une plante solanacée ou une plante légumineuse.
- 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 6, pour favoriser la croissance 25 d'une plante Arabidopsis thaliana, dans lequel le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, lequel 30 miPEP319a naturellement présent est un peptide de 4 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, 3021503 50 ledit miPEP319a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d'Arabidopsis thaliana, la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle 5 dudit miPEP319a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP319a naturellement présent.
- 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante : 10 - par voie externe de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, ledit miPEP étant notamment administré à la plante sous la forme d'une composition comprenant 10-9 M à 10-4 M dudit miPEP, en particulier 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 ou 10-4 M dudit miPEP, ou - par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant 15 introduit dans la plante.
- 9. Procédé de production d'une plante transgénique comprenant: a) une étape d'introduction d'un acide nucléique codant un miPEP de 4 à 100 acides aminés dans une plante, ou dans au moins une cellule de ladite plante, dans des 20 conditions permettant l'expression dudit miPEP, ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans la plante, lequel miR régule l'expression d'au 25 moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante transgénique, 30 ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant notamment choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 et TCP4 ledit miARN étant notamment le miR319a, ledit miR319a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1, 3021503 51 ledit miPEP étant notamment le miPEP319a, ledit miPEP319a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2.
- 10. Plante transgénique telle qu'obtenue par le procédé tel que défini selon la revendication 5 9.
- 11. Composition comprenant le miPEP319a en tant que substance active, ledit miPEP319a consistant de préférence en SEQ ID NO : 2, ledit miPEP319a étant notamment à une concentration de 10-9M à 10-4M, en particulier 10 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 ou 10-4 M, en particulier, ladite composition comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant, en particulier, ladite composition étant formulée de façon à former un enrobé. 15
- 12. Composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent chez ladite plante, ledit peptide ayant notamment une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à celle du miPEP319a, 20 en particulier, ladite composition étant formulée de façon à former une semence enrobée.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1455046A FR3021503A1 (fr) | 2014-06-03 | 2014-06-03 | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes |
| US15/314,519 US10563214B2 (en) | 2014-06-03 | 2015-06-03 | Use of micropeptides for promoting plant growth |
| EP15774647.0A EP3152309B1 (fr) | 2014-06-03 | 2015-06-03 | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes |
| PCT/FR2015/051472 WO2015185861A1 (fr) | 2014-06-03 | 2015-06-03 | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes |
| ES15774647T ES2834576T3 (es) | 2014-06-03 | 2015-06-03 | Uso de micropéptidos para favorecer el crecimiento de las plantas |
| CA2950848A CA2950848C (fr) | 2014-06-03 | 2015-06-03 | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes |
| DK15774647.0T DK3152309T3 (da) | 2014-06-03 | 2015-06-03 | Anvendelse af mikropeptider til at fremme plantevækst |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1455046A FR3021503A1 (fr) | 2014-06-03 | 2014-06-03 | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR3021503A1 true FR3021503A1 (fr) | 2015-12-04 |
Family
ID=52003892
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR1455046A Pending FR3021503A1 (fr) | 2014-06-03 | 2014-06-03 | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR3021503A1 (fr) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117683103A (zh) * | 2023-11-24 | 2024-03-12 | 南京林业大学 | 一种小肽miPEP166i及其在植物组织培养中的应用 |
-
2014
- 2014-06-03 FR FR1455046A patent/FR3021503A1/fr active Pending
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| BARDOU FLORIAN ET AL: "Dual RNAs in plants", BIOCHIMIE (PARIS),, vol. 93, no. 11, 1 November 2011 (2011-11-01), pages 1950 - 1954, XP002734738 * |
| CHUNHUA YANG ET AL: "Overexpression of microRNA319 impacts leaf morphogenesis and leads to enhanced cold tolerance in rice ( O ryza sativa L.)", PLANT, CELL & ENVIRONMENT, vol. 36, no. 12, 30 May 2013 (2013-05-30), pages 2207 - 2218, XP055164112, ISSN: 0140-7791, DOI: 10.1111/pce.12130 * |
| CRAPPE J ET AL: "Little things make big things happen: A summary of micropeptide encoding genes", EUPA OPEN PROTEOMICS 2014 ELSEVIER NLD,, vol. 3, 1 January 2014 (2014-01-01), pages 128 - 137, XP002734739, ISSN: 2212-9685 * |
| DE CONINCK BARBARA ET AL: "Mining the genome of Arabidopsis thaliana as a basis for the identification of novel bioactive peptides involved in oxidative stress tolerance", JOURNAL OF EXPERIMENTAL BOTANY,, vol. 64, no. 17, 1 December 2013 (2013-12-01), pages 5297 - 5307, XP002734740 * |
| M. ZHOU ET AL: "Constitutive Expression of a miR319 Gene Alters Plant Development and Enhances Salt and Drought Tolerance in Transgenic Creeping Bentgrass", PLANT PHYSIOLOGY, vol. 161, no. 3, 4 January 2013 (2013-01-04), pages 1375 - 1391, XP055164113, ISSN: 0032-0889, DOI: 10.1104/pp.112.208702 * |
| Y. MAO ET AL: "microRNA319a-Targeted Brassica rapa ssp. pekinensis TCP Genes Modulate Head Shape in Chinese Cabbage by Differential Cell Division Arrest in Leaf Regions", PLANT PHYSIOLOGY, vol. 164, no. 2, 18 December 2013 (2013-12-18), pages 710 - 720, XP055164109, ISSN: 0032-0889, DOI: 10.1104/pp.113.228007 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117683103A (zh) * | 2023-11-24 | 2024-03-12 | 南京林业大学 | 一种小肽miPEP166i及其在植物组织培养中的应用 |
| CN117683103B (zh) * | 2023-11-24 | 2024-05-14 | 南京林业大学 | 一种小肽miPEP166i及其在植物组织培养中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3536804B1 (fr) | Micropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de genes | |
| EP3505634B1 (fr) | Methode de production d'allergenes recombinants de haute qualite dans une plante | |
| FR3096054A1 (fr) | Application du gène GhCAL-D07 pour promouvoir la floraison de plantes | |
| CA2951018C (fr) | Utilisation de micropeptides pour favoriser la symbiose mycorhizienne | |
| EP3152309B1 (fr) | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes | |
| JP7010819B2 (ja) | 除草剤耐性を有する形質転換植物 | |
| FR2787466A1 (fr) | Procede pour augmenter la teneur en cysteine, methionine et glutathion chez les plantes et plantes obtenues | |
| FR3021503A1 (fr) | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes | |
| EP0626014B1 (fr) | Plante portant des genes codant pour des enzymes de la voie de biosynthese des phytosterols, et procede d'obtention | |
| WO2016151262A1 (fr) | Nouveau procede permettant de favoriser la nodulation chez les plantes | |
| FR3021502A1 (fr) | Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes | |
| CA2320401A1 (fr) | Acide nucleique comprenant la sequence d'un promoteur inductible par un stress et une sequence d'un gene codant pour une stilbene synthase | |
| FR3012471A1 (fr) | Micropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de genes | |
| FR3021504A1 (fr) | Utilisation de micropeptides pour favoriser la symbiose mycorhizienne | |
| WO2024083985A1 (fr) | Nouveaux peptides et leur utilisation pour moduler l'accumulation d'une proteine | |
| FR3141176A1 (fr) | Nouveaux peptides et leur utilisation pour moduler l’accumulation d’une proteine | |
| FR2984076A1 (fr) | Surproduction de jasmonates dans des plantes transgeniques |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 2 |
|
| PLSC | Publication of the preliminary search report |
Effective date: 20151204 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 3 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 4 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 5 |
|
| CL | Concession to grant licences |
Name of requester: TOULOUSE TECH TRANSFER, FR Effective date: 20180716 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 7 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 8 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 9 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 10 |