FR3010999A1 - Glycoclusters et leurs utilisations pharmaceutiques en tant qu'antibacteriens - Google Patents

Abstract

Glycomimétiques répondant à la formule (I): utiles comme inhibiteurs d'infection par Pseudomonas aeruginosa, plus particulièrement comme inhibiteurs de la virulence de Pseudomonas aeruginosa.

Description

GLYCOCLUSTERS ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES EN TANT QU'ANTIBACTERIENS DOMAINE DE L'INVENTION L'invention concerne de nouveaux composés (I) de type glycocluster avec des résidus de galactose au niveau de leurs extrémités. Ces composés ont démontré une bonne affinité avec la lectine 1 (PA-IL) de Pseudomonas aeruginosa, qui est un facteur de virulence de la bactérie. L'invention concerne des procédés simples et efficaces pour la préparation de ces composés. Elle a également pour objet l'utilisation médicale des composés (I) comme inhibiteurs de l'infection par Pseudomonas aeruginosa, plus particulièrement comme inhibiteurs de la virulence de Pseudomonas aeruginosa.

ART ANTERIEUR Pseudomonas aeruginosa (PA) représente un problème majeur de santé publique en raison de son impact sur les infections nosocomiales. PA est responsable de 10-30% des infections nosocomiales (Floret, N. et al., (2009), Pathol. Biol. 57, 9- 12). Il est également le pathogène le plus fréquent, conduisant progressivement à une inflammation chronique et à la dégradation des voies respiratoires des patients atteints de fibrose kystique (Lyczak, JB et al., (2002)_Clin. Microbiol. Rev. 15, 194-222). Actuellement, l'utilisation d'antibiotiques est le seul moyen qui peut être efficace contre l'infection PA. En raison de l'émergence de la résistance aux antibiotiques de la plupart des bactéries pathogènes, en particulier PA, le développement de nouveaux agents antibactériens en mesure d'échapper aux mécanismes de résistance ou de nouveaux modes d'action devient impératif et est un défi majeur de la recherche pour traiter ou prévenir les maladies infectieuses. Par conséquent, l'inhibition de la virulence de PA a été proposée comme une stratégie alternative à la lutte contre les infections à base de PA. Pour concurrencer efficacement les glycoconjugués de surface cellulaire, les glycomimétiques doivent présenter une forte affinité avec la cible. Des interactions de faible affinité lectine - hydrate de carbone est un obstacle au développement de composés biologiquement actifs de type glycomimétique. Cependant, si les résultats de l'art antérieur confirment le fort potentiel des glycomimétiques et leurs utilisations dans la prévention et le traitement d'une infection bactérienne, des molécules de type glycomimétique avec une haute affinité avec PA- IL doivent être préparées.

La conception et la synthèse de composés capables d'interagir avec la lectine PA-IL ont été proposées. L'affinité de la lectine pour un glycomimétique dépend du nombre de groupes glucidiques de la molécule et sa capacité à interagir avec la lectine PA-IL. Elle dépend également de leur disposition dans la molécule : la nature, la longueur et la flexibilité des bras de liaison des groupes de liaison avec les hydrates de carbone. Il subsiste donc un besoin de molécules de type glycomimétique présentant une forte affinité pour les lectines de pathogènes, notamment pour les PA- IL. En particulier, il subsiste le besoin de molécules capables d'inhiber l'adhérence de P. aeruginosa, en inhibant ainsi la formation d'un biofilm de Pseudomonas aeruginosa. Ces molécules doivent être susceptibles d'être produits par des procédés simples et efficaces pour donner accès à un médicament. RESUME DE L'INVENTION Le but de la présente invention est de pallier au moins partiellement aux inconvénients mentionnés ci-dessus. L'invention concerne des molécules qui présentent une forte affinité pour les lectines de pathogènes, notamment pour les PA-IL. Plus particulièrement, l'invention concerne des ligands synthétiques envers PA-IL. Plus précisément, l'invention est dirigée vers des composés ciblant l'inhibition de l'adhésion PA. Ce but est atteint avec les glycomimétiques répondant à la formule (I): In Li L2 (I) Où o n est un entier choisi parmi 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o Gal représente un radical choisi parmi: galactopyranosyl, 1- thiogalactopyranosyl, 1-methylenegalactopyranosyl, 1-N-acétyl-galactopyranosyl: HO OH HO OH HO OH o HO HO OH OH HO CH2 OH 0 OH OH HO HO o K représente une molécule de formule (KI) ou (KIT) comprenant entre 3 et 7 groupes phosphatediester, thiophosphatediester, phosphatetriester, thionophosphatetriester, phosphoramidatediester ou phosphoramidatemonoester (Pho) choisie parmi: X x x (21-P-0Ç3L1 CDH I ço-p-dm ç3o-ii-oLi o o L-1--- ,-1-----1 Li o CD-P-i\JL1 H 0 L-F--, Dans laquelle X représente 0 ou S, Un ou deux atomes d'oxygène du groupe phosphate étant lié par une liaison covalente à un bras de liaison Li, El les groupes phosphatediester, thiophosphatediester, phosphatetriester, thionophosphatetriester, phosphoramidatediester ou phosphoramidatemonoester (Pho) étant soit tous liés à une même centre K 'tel que représenté dans la formule (KI) ici-dessous: 25 (KI) avec soit K 'une molécule comprenant de 4 à 24 atomes de carbone, de 0 à 12 atomes d'oxygène, et le nombre correspondant d'atomes d'hydrogène, 30 un atome d'oxygène de Pho étant lié par une liaison covalente à K', x = 1 ou 2 ou El les groupes phosphatediester, thiophosphatediester, phosphatetriester, thionophosphatetriester, phosphoramidatediester ou phosphoramidatemonoester (Pho) 35 forment une chaîne telle que représentée dans la formule (KIT) ci-dessous: Li (KIT) dans lequel K "représente une molécule comprenant de 4 à 12 atomes de carbone, de 0 à 6 atomes d'oxygène, de 0 à 6 atomes d'azote, et le nombre correspondant d'atomes d'hydrogène, E représente un groupe terminal comprenant de 0 à 12 atomes de carbone, de 0 à 6 atomes d'oxygène, de 0 à 6 atomes d'azote, et le nombre correspondant d'atomes d'hydrogène, m représente un nombre entier choisi parmi 2, 3, 4, 5, deux atomes d'oxygène de Pho étant lié par une liaison covalente à des groupes K "ou de E, o L1 représente un bras de liaison choisi parmi: - Un alkyle di radical linéaire, ramifié ou cyclique en C1-C18, comprenant éventuellement un ou plusieurs ponts éther-O-, - Un poly (éthylèneglycol) di radical comprenant 2 à 6 unités d'éthylène glycol, - Un poly(propyleneglycol) di radical comprenant 2 à 6 unités de propylène glycol, o T représente un groupe de liaison choisi parmi: - un triazole di-radical 20 - un pont thio -S- O L2 représente un bras de liaison répondant à la formule L21- Ar-L22représentés ci-dessous: 25 L21 L22 Où L21 représente un alkyle di radical linéaire, ramifié ou cyclique en C1-C12, éventuellement comportant un ou plusieurs groupes choisis parmi: un amide-CO-NH-, un éther -0-, un groupe thio-S-, une amine -NH-, 30 Ar représente un aromatique di radical en C6-C18 éventuellement, incluant un à 6 hétéroatomes, L22 représente une liaison covalente ou lorsque Gal représente un radical choisi parmi : galactopyranosyl, 1- thiogalactopyranosyl, L22 peut être un radical -CH2-. 35 Les modes de réalisation préférés comprennent une ou plusieurs des caractéristiques suivantes : Une molécule répondant à la formule (I), dans lequel une ou plusieurs des conditions suivantes sont vérifiées : o Gal représente un radical l -D- galactopyranosyle, ou un I3-D- thio -1- galactopyranosyl radical, de préférence un 13 -D- galactopyranosyl , o T représente un triazole di-radical o Li représente un bras de liaison choisi parmi : une chaîne linéaire en C2-C6 alkyle, le 1,1,1- (trishydroxyméthyl) éthane, un poly (éthylèneglycol) di radical comprenant de 2 à 4 unités d'éthylène glycol, o L21 représente une chaîne alkyle linéaire en Ci-C12 comprenant éventuellement une fonction amide -CO- NH-, à son extrémité reliée au groupe Ar, o Ar représente un aromatique di radical en C6-C12, de préférence Ar représente un groupe choisi parmi : un groupe phényle, naphtyl, 1,4- biphényle, o L22 représente une liaison covalente. Une molécule répondant à la formule (I), dans laquelle K est représenté par la formule (KI), x = 1 K comprend de 3 à 5 groupes Pho: o OH et K 'représente un hydrate de carbone choisi parmi: un pyranose et un furanose. Une molécule répondant à la formule (I), dans laquelle K 'représente un hydrate de carbone choisi parmi: le mannose, le galactose, le glucose, l'arabinose, le xylose, le ribose et le lactose. Une molécule répondant à la formule (I), dans laquelle K est représenté par la formule (KIT), K "représente un groupe alcane di-yle cyclique comprenant de 4 à 10 atomes de carbone et Pho linéaire ou ramifié est le suivant: o x Il Il )o-p-r,i3L1 ço-P-OL1 I H ô 0 Où X=0, S. Une molécule répondant à la formule (I), dans laquelle K "représente un groupe 35 choisi parmi le 1,4-diméthylcyclohexyle, 1,4-diethylcyclohexyl. 30 L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule générale (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un support et/ou un excipient pharmaceutiquement acceptable.

Selon un mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique est formulée pour être inhalées ou instillée dans les voies respiratoires. Selon un mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un ou plusieurs autre agent (s) antibactérien(s) ou un ou plusieurs autre(s) agent(s) antivirulent(s) ou un ou plusieurs médicament(s) de renforcement de l'immunité innée de l'hôte. L'invention a également pour objet un composé répondant à la formule (I), destiné à être utilisé pour la prévention, le retardement, l'atténuation et le traitement thérapeutique des infections dues à des agents pathogènes microbiens, en particulier les agents pathogènes bactériens. Selon un mode de réalisation préféré, le composé est destiné à traiter, retarder, de l'atténuation ou la prévention d'infections par Pseudomonas aeruginosa. Un autre objet de l'invention est une molécule répondant à la formule (II) : In Li L2 Où (II) K, n, Ga, T, Li, L2 ont la même définition que dans la revendication 1 et dans laquelle y représente un marqueur, comme une séquence d'ADN ou un colorant fluorescent.

DESCRIPTION DES DESSINS La figure 1 décrit la structure générale de certains galactoclusters basés sur le mannose avec la nature et la longueur de leurs séquences de liaison La figure 2 décrit la structure schématique des galactosides aromatiques La figure 3 décrit la réparation des S-phényl, 0-benzyl et S-benzyl galactosides 2 à 4 La figure 4 décrit la préparation des 0-biphényl, 0-naphthyl galactosides 5 et 6 La figure 5 décrit la préparation des phosphoramidites di- et tri-éthylèneglycol propargyl 32 et 33 La figure 6 décrit la préparation des phosphorodiamidites 41 et 42 La figure 7 décrit la préparation des phosphoramidites 44 et 45 La figure 8 décrit la préparation des dérivées S-biphenyl et S-naphthyl galactoside azide 5S et 6S La figure 9 décrit la préparation des glycomimes oligonucléotides G1-G24 La figure 10 décrit la préparation des glycomimes à structure DMCH G25-G48 La figure 11 est un schéma illustrant la synthèse d'un composé de formule (I) avec K répondant à la formule (KI). La figure 12 est un schéma illustrant la synthèse d'un composé de formule (I) avec K répondant à la formule (KIT). DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les molécules préférées répondant à la formule (I) selon l'invention sont énumérées ci-dessous: Man(PSEG2MTzAcNPhe-CH2-Gal)4 (G6) Man(PSEG3MTzAcNPhe-CH2-Gal) 4 (G8) Man(EG2MTzAcNPhe-CH2-Gal) 4 (G5) Man(EG3MTzAcNPhe-CH2-Gal) 4 (G7) Man(EG2MTzAcNPhe-CH2-SGal) 4 (G13) Man(EG3MTzAcNPhe-CH2-SGal) 4 (G15) Man(PSEG3MTzAcNPh-Gal) 4 (G4) Man(PSEG3MTzAcNPhe-CH2-SGal) 4 (G16) Man(PSEG2MTzAcNPhe-CH2-SGal) 4 (G14) Man(PSEG3MTzAcNPh-SGal) 4 (G12) Man(PSEG2MTzAcNPh-Gal) 4 (G2) Man(PSEG2MTzAcNPh-SGal) 4 (G10) Man(EG2MTzAcNPh-SGal) 4 (G9) Man(EG3MTzAcNPh-SGal)4 (G11) Man(EG3MTzproNCONapht-OGal) 4 (G23) Man(EG3MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G19) Man(PSEG3MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G20) Man(PSEG2MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G1) Man(EG2MTz AcNPh-Gal) 4 (G18) Man(PSEG3MTzproNCONapht-OGal) 4 (G24) Man(EG3MTz AcNPh-Gal) 4 (G3) Man(PSEG2MTzproNCONapht-OGal) 4 (G22) Man(EG2MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G17) Man(EG2MTzproNCONapht-OGal) 4 (G21) (DMCH-POProTzAcNPhe-OGal) 4 (G25) (DMCH-PSProTzAcNPhe-OGal) 4 (G26) (DMCH-PODMCHMTzAcNPhe-OGal) 4 (G27) (DMCH-PSDMCHMTzAcNPhe-OGal) 4 (G28) (DMCH-POProTzAcNPhe-SGal) 4 (G29) (DMCH-PSProTzAcNPhe-SGal) 4 (G30) (DMCH-PODMCHMTzAcNPhe-SGal) 4 (G31) (DMCH-PSDMCHMTzAcNPhe-SGal) 4 (G32) (DMCH-POProTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G33) (DMCH-PSProTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G34) (DMCH-PODMCHMTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G35) (DMCH-PSDMCHMTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G36) (DMCH-POProTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G37) (DMCH-PSProTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G38) (DMCH-PODMCHMTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G39) (DMCH-PSDMCHMTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G40) (DMCH-POProTzProNCONapht-OGal) 4 (G41) (DMCH-PSProTzProNCONapht-OGal) 4 (G42) (DMCH-PODMCHMTzProNCONapht-OGal) 4 (G43) (DMCH-PSDMCHMTzProNCONapht-OGal) 4 (G44) (DMCH-POProTzProNCONapht-SGal) 4 (G45) (DMCH-PSProTzProNCONapht-SGal) 4 (G46) (DMCH-PODMCHMTzProNCONapht-SGal) 4 (G47) (DMCH-PSDMCHMTzProNCONapht-SGal) 4 (G48) Dans lesquelles DMCH représente 1,4-diméthylcyclohexyle, Man représente le mannose, Gal représente galactose; Pro représente le 1,3-n-propyle, Hex représente le 1,6 -n-hexyle, THME représente le tris-(hydroxyméthyl) éthane; Tz représente le triazole L1 PO représente un groupe phosphatediester ou triester PS représente un groupe phosphorothioatediester ou triester EG2 représente un groupe diéthylène glycol, EG3 représente un groupe triéthylèneglycol EG4 représente un groupe tétraéthylèneglycol AcNPhe représente un groupe acétamidophényle: Gal C 2 Tz o M représente un groupe méthylène, -0-Gal représente un groupe galactopyranosyl, S-Gal représente un groupe 1-thiogalactopyranosyl -CH2-0-Gal représente un groupe 1-methylenegalactopyranosyl 10 -CH2-S-Gal représente un groupe 1-methylenethiogalactopyranosyl -NAc-Gal représente un groupe 1-N-acetylgalactopyranosyl -NCO représente un groupe amide -Napht représente un group naphthyl -Biphe représente un groupe 1-4-biphényl Les glycoclusters linéaires (DMCH) ont des liens phosphoramidate (PN), les 20 liaisons phosphotriester (PO) ou thionophosphotriester (PS) et les glycoclusters de type hexose (Man, Gal, Glc) ont des liens phosphate (PO) ou thionophosphate liens (P S). La préparation de ces molécules est décrite de façon détaillée dans la partie expérimentale ci-dessous. 25 La figure 11 illustre un schéma de préparation de molécules répondant à la formule (I) dans laquelle K est une structure de base représentée par la formule (KI). Schématiquement, le noyau K' OH-fonctionnalisé est greffé sur un support solide e à l'étape 1). Cependant, cette étape n'est pas obligatoire et la synthèse peut être réalisée en solution. Ensuite, à l'étape 2) les groupes alcyne Li phosphoramidites sont 30 greffés sur les fonctions hydroxyles portées par K'. Seule un bras alcyne par groupe de Pho est illustrée sur la figure 11. A l'étape 3) une réaction de chimie click (cycloaddition azide alcyne catalysée par Cu(I)) est réalisée avec : L2 -N3 35 où Gal * représente un résidu Gal avec ou sans groupement acétyles sur les OH. Les modes de fonctionnement détaillés sont illustrés dans la figure 1 et dans la partie expérimentale. Alternativement, un résidu Gal sans groupe protecteur pourrait être utilisé. Le triazole Tz est formé par cette réaction avec la substitution suivante: Li c L2-Nr\i%N La substitution inverse peut être obtenue par inversion de N3 et de résidus alcyne. Dans ce cas l'alcyne est porté par le galactose et des bras bromo ou tosyl Li phosphoramidites sont utilisés. Le brome ou le tosyl est substitué par un azoture après introduction du bras. Une liaison thioéther peut être obtenue, en remplacement de Tz d'une manière connue par réaction d'un thiol avec un halogène, notamment avec un brome. Dans l'étape 5), les groupes protecteurs sont éliminés à partir de Gal s'il est présent, et le cas échéant la liaison avec le support solide est clivée. En variante, une liaison thioéther peut être obtenue, en remplacement de Tz d'une manière connue par réaction d'un thiol avec un halogène, notamment avec un brome. A l'étape 7), les groupes protecteurs sont éliminés et la liaison au support solide est hydrolysé. Selon une variante, la synthèse peut être réalisée sur un support solide en utilisant K "alcyne-L1 phosphoramidite fonctionnalisé tel que décrit dans la figure 12. À l'étape 1) un K" dérivé d'alcyne est mis à réagir avec un groupe d'extrémité support solide et oxydé en un phosphatetriester ou un thionophosphatetriester. Dans l'étape 2) un groupe protecteur R est éliminé et à l'étape 3) un second K "dérivé d'alcyne est ajouté et oxydé, puis R est enlevé à l'étape 4), les étapes 3) et 4) sont répétées pour obtenir le (m) d'une valeur souhaitée. Dans l'étape 5) une réaction de chimie click (cycloaddition azide alcyne catalysée par Cu(I)) est réalisé avec L2 - N3 Dans lequel Gal * représente un résidu Gal avec des groupes de protection (acétyle) de fonctionnalités OH. Alternativement, un résidu Gal sans groupe protecteur pourrait être utilisé. Le triazole Tz est formé par cette réaction avec la substitution suivante: Ki c L2-Nr\i%N La substitution inverse peut être obtenue par inversion de N3 et un résidu alcyne. Dans ce cas, un phosphoramidite bromo ou tosyle est d'abord préparé et après incorporation converti en un azido par substitution par un réactif de type azoture.

En variante, une liaison thioéther peut être obtenue, en remplacement de Tz d'une manière connue par réaction d'un thiol avec un halogène, notamment avec un brome. Dans l'étape 6), les groupes protecteurs sont éliminés et de la liaison au support solide est hydrolysé. Selon une variante préférée, la synthèse est réalisée sur un support solide par greffage préalable du premier groupe K "de la chaîne sur un support solide. L'invention concerne également des molécules répondant à la formule (II): In Li L2 où (II) K, n, Ga, T, Li, L2 ont la même signification que ci-dessus et dans laquelle y représente un marqueur. Un marqueur peut être par exemple une séquence d'ADN ou un colorant fluorescent. Une telle molécule peut être utilisée à des fins de test, notamment à des fins de diagnostic. Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule générale (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un support et/ou excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdites compositions pharmaceutiques sont avantageusement formulées pour être administrées sous forme orale, topique, transdermique, sublinguale, rectale, parentérale, y compris les itinéraires intraveineuse, intramusculaire, intrapéritonéale et sous-cutanée, avec des doses unitaires appropriées pour le patient à traiter. De préférence, le médicament est administré par la voie respiratoire ou pulmonaire. Ces composés (I) et les compositions pharmaceutiques les contenant, sont formulés pour être inhalés ou instillés dans les voies respiratoires pour le traitement ou la prévention des infections à partir de Pseudomonas aeruginosa, en particulier chez 30 les patients atteints de fibrose kystique (ou mucoviscidose), ou patients sous assistance respiratoire, qui sont souvent victimes d' infections nosocomiales. Les composés (I) et les compositions pharmaceutiques les contenant, sont utiles en tant qu'agents antibactériens pour la prévention, le retardement, l'atténuation et le traitement thérapeutique des infections dues à des agents pathogènes microbiens, en 35 particulier des infections par des agents pathogènes qui utilisent des lectines dans les premières étapes de l'infection, et plus particulièrement les infections par une bactérie Pseudomonas aeruginosa.

L'invention a pour objet un composé de formule (I) ou une composition pharmaceutique comprenant, à son utilisation pour la prévention, le retardement, l'atténuation et / ou l'inhibition de la virulence de Pseudomonas aeruginosa. Plus précisément, l'invention concerne un composé de formule (I) ou une composition pharmaceutique comprenant, à son utilisation pour la prévention, le retardement, l'atténuation et / ou l'inhibition de la formation d'un biofilm produite par une bactérie Pseudomonas aeruginosa. L'invention concerne en outre une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule générale (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un support et /ou excipient pharmaceutiquement acceptable et au moins une ou plusieurs autre agent (s) antibactérien ou avec un ou plusieurs autre agent (s) de antivirulence ou avec un ou plusieurs médicament (s) de renforcement de l'immunité innée de l'hôte. Plus précisément, l'invention concerne en outre une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule générale (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un support et/ou excipient pharmaceutiquement acceptable et au moins un antibiotique. Un autre objet de l'invention est l'utilisation des composés (I) dans la prévention de retarder, d'atténuation et de traitement d'infections bactériennes humaines ou animales, en association avec un ou plusieurs médicament (s) et plus particulièrement avec un ou plusieurs agent (s) antibactérien ou avec un ou plusieurs agent(s) antivirulent(s) ou avec un ou plusieurs médicament (s) de renforcement de l'immunité innée de l'hôte.

EXPERIENCES Des composés (I) de type glycocluster renfermant un radical galactopyranosyl présentant différent aglycons aromatiques ont été synthétisés. Pour cela en plus du galactoside 0-phenyl azoture 1 déjà décrits dans la demande EP13306296 non publiée (Figure 2), cinq nouveaux galactosides présentant un S-phenyl, 0-benzyl, S-benzy, 0- biphényl ou 0-naphthyl et une fonction azoture ont été synthétisés (Figure 2). Leur synthèse s'effectue en quelques étapes avec en premier lieu la glycosylation du para-nitro aromatique correspondant puis la réduction en amino suivi de la formation du dérivé bromo acetamide qui est finalement converti en dérivé azido acetamide aromatique galactosides qui après désacétylation donnent les galactosides 2, 3, ou 4 (figure 3).

Pour les galactosides biphenyl et naphthyl la stratégie utilise les aromatiques carboxylique correspondant préalablement converti en ester benzylic. Ainsi après la glycosylation, le benzyl est enlevé et la 3'-azido-propylamine est couplée par formation d'une fonction amine pour donner après désacétylation les galactosides 5 et 6 (figure 4). Ces galactosides ont été ensuite introduits sur des plates-formes tétraalcynes composés d'un coeur mannose et de bras di- ou tri-éthylèneglycol phosphodiester ou phosphorothioate diesters. Les phosphoramidites di- ou tri-éthylèneglycol propargyl 32 et 33 ont été préparés en deux étapes à partir du di- et tri-éthylèneglycol sur lequel le bromure de propargyl a été introduit les monopropargyl di- ou tri-éthylèneglycol ont ensuite été convertis en phosphoramidite (figure 5). Ensuite, le propargyl-P-D-mannoside 34 a été immobilisé sur le support azide 35 par cycloaddition catalysée par le Cu(I) pour donner le support solide mannosyl 36 sur lequel les phosphoramidite di- ou tri-éthylèneglycol propargyl 32 et 33 ont ensuite été couplés (figure 9) Les liens phosphitetriesters intermédiaires ont été oxydés en phosphatetriester (36 et 38) ou en thionophosphatetriester (37 et 39) puis la séquence oligonucléotidique a été construite et marquée par la Cy3. Après déprotection, les plates-formes tétraalcynes ont été conjuguées aux six galactosides aromatiques donnant lieu à 24 glycomimes-oligonucléotides différents (G1-G24). Dans la série de glycomimes linéaire à base d'unité dimethylcyclohexane (DMCH) ceux présentant des bras propyl-triazole et DMCH methoxytriazole et les aromatiques 0-phényl, S-phényl, 0-bi-phényl et 0-naphthyl galactoside ont été synthétisés à partir des unités de construction phosphoramidite correspondantes préalablement synthétisées. Dans un premier temps le 1,4-diméthanolcyclohexane a été alkyle par du bromure de propargyl en présence de NaH pour donner le composé 40 que a été converti en phosphorodiamidite 41 par réaction avec du bis-diisopropylamine chlorophosphine en présence de diisopropyléthylamine (figure 6) . L e phosphorodiamidite du pent-4-yn-ol 42 a été préparé de la même manière. Le 1-diméthoxytrityle-4-diméthanolcyclohexane 43 a été mis en réaction avec les deux phosphorodiamidites 41 et 42 en présence de sel de tétrazolide de diisopropylammonium pour donner les deux phosphoramidites désirés dimethoxytrityl oxymethylclycohexanyl pentynyl 44 et propargyloxydimethylcylohexane 45 (figure 7).

A partir d'un support dipropanol, les phosphoramidites DMCH 44 et 45 ont été couplés par la chimie des phosphoramidites et l'oligonucléotide a été construit et marqué à la Cy3 pour donner après déprotection aux oligonucléotides tetraalcyne DMCH 46-49. Les différents galactosides aromatiques ont ensuite été conjugués avec les galactosides aromatiques 1, 2, 5, 6, 5S ou 6S par cycloaddition catalysée par le Cu(I) (figure 10). Les glycoclusters ont ensuite été hybridés à des oligonucléotides de séquences complémentaires greffées sur une surface donnant lieu à leur immobilisation par formation d'une double hélice. Le microsystème résultant permet d'évaluer l'affinité de chaque glycocluster pour la lectine 1 de Pseudomonas aeruginosa (PA-IL ou LecA) en déterminant les valeurs d'IC50 et de Kd.

Section Expérimentale 1-(4-Nitro-benzyl) -2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D-ga1actopyranoside (8): Sous atmosphère d'azote, à 0 ° C du trifluorure de bore éthérate de diéthyle (1,5 mL, 12 mmol) on a ajouté goutte à goutte dans une solution de fl-D-galactose penta-acétate (1,561 g, 4 mmol) et d'alcool p-nitro-benzyle (1,225 g, 8 mmol) dans 20 mL de CH2C12. Après quelques minutes, le mélange a été chauffé à reflux et a été maintenu sous agitation pendant 7 h. La réaction a ensuite été désactivée avec de l'eau et on l'extrait avec CH2C12.Le produit a été recueillie, séchée avec du Na2504, et concentrée sous vide. Le résidu résultant a été purifié par Chromatographie sur colonne de gel de silice (0 à 15% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit sous forme d'un solide blanc (1,148 g, 59%). Rf= 0.36 (AcOEt/cyclohexane, 1:1, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.21 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.47 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.42 (dd, J = 3.4 et 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.32 (dd, J = 10.5 et 7.9 Hz, 1H, H2), 5.04 (dd, J = 10.5 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.02-4.72 (2xd, J = 13.2 Hz, 2H, H-7), 4.60 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.21 (dd, J = 11.2 et 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.15 (dd, J = 11.2 et 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.94 (dt, J = 0.8 et 6.5 Hz, 1H, H-5), 2.17 (s, 3H, CH3C0), 2.06 (s, 6H, 2xCH3C0), 1.99 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 x CO-Ac), 147.7 (C-11), 144.6 (C-8), 127.7 (C-9), 123.8 (C10), 100.8 (C-1), 71.1 (C-5), 70.9 (C-3), 69.6 (C-7), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 61.4 (C- 6), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7(4 x CH3-Ac). HRMS (ESI+) : calculé pour C21H25N012Na [M + Na]+ 506.1274, trouvé 506.1282. [a]D20 = -19.1° (c 0.009, Me0H).

Procédure générale pour l'hydrogénolyse (méthode A). Les composés 8 ou 9 (Ibatullin 2001, Ibatullin 2003) ou 10 (Denekamp 2005; Cao, 1994)ont été dissous dans CH2C12 distillé puis 10 % de palladium sur charbon (10 % p / p) a été ajouté. De l'hydrogène gazeux a été mis à barboter dans le mélange réactionnel jusqu'à absence des matières de départ. Le mélange réactionnel a été filtré sur un tampon de célite et lavé avec du CH2C12. Les produits bruts ont été purifiés par gel chromatographie flash sur colonne de silice pour donner le produit souhaité. Procédure générale pour la synthèse de 4 - aryl- bromoacétamido - 2 ,3,4,6 -tétra -0 -acétyl-P-D- galactopyranoside (Méthode B). Une solution de 11 ou 12 (1 éq.). Dans CH2C12was distillée purgée à l'argon, on refroidit à 0 ° C, et de Et3N (1,4 éq.) a été ajouté. Le bromure de bromoacétyle (1,3 éq.) a été ajouté goutte à goutte et le mélange a été agité pendant 1 hàO° C. On laisse le mélange se réchauffer à température ambiante pendant 1 h. Le mélange brut dans CH2C12 a été lavée avec HC1 1 N (2 x 25 mL), de l'eau (2 x 25 mL) et de la saumure (25 mL). Après séchage (Na2SO4), et la suppression totale du CH2C12 sous vide, le résidu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice pour donner le produit souhaité. Procédure générale pour la synthèse de 4 - azidooacetamido -aryl- 2 ,3,4,6 -tétra -0 -acétyl-P-D- galactopyranoside (Méthode C). On a agité une solution de 14 ou 15 ou 16 (1 éq.) et TMGN3 (3 éq.) dans du CH3CN anhydre à 80 °C pendant 15 minutes sous assistance de micro-ondes. Après concentration sous vide, le résidu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice pour donner le produit souhaité.

Procédure générale pour la désacétylation d'hydrates de carbone (méthode D) Le glycoside acétyle. (4 - (azidoacetamide) phényl-P-D- galactoside, (Cecioni, et al. Chem. Eur. J. 2012, 18, 6250-6263) une solution de 17 à 19 et 28 à 29 a été mis en suspension dans du Me0H ou 1, 4 -dioxane et une solution d'ammoniaque à 30% a été ajouté (1:1, v / v). Le mélange a été agité sous argon à température ambiante pendant 6 heures à 1 jour. Le solvant a été évaporé sous vide pour donner le produit souhaité. Procédure générale pour glycosidation (méthode E). A une solution de 7 (1 éq.), 22 ou 23 (2 éq.), et tetrabutylammoniumhydrogensulfate (1 éq.) dans du CH2C12 à 0°C 1 M aq on a ajouté une solution de NaOH. Le mélange biphasique a été agité à température ambiante pendant 36 h, puis dilué avec du CH2C12, lavé avec du NaOH 1 M (2 x 30 mL) et séchées sur Na2SO4. Le solvant a été éliminé sous pression réduite et le produit brut a été purifié par Chromatographie sur colonne de gel de silice pour donner le produit souhaité. Procédure générale pour azidation de biarylgalactopyranosides (Méthode F) ). 26 ou 27 (1 éq) a été dissous dans du DMF anhydre, suivi par l'addition de 1- éthy1-3- (3'- diméthylaminopropyl) carbodiimide (1,6 éq) et hydroxybenzotriazole (1,1 éq. ). 3 -Azidopropylamine (2 éq.) a été ajouté et le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 12 h. Le mélange réactionnel a été concentré puis trempé avec de l'eau et extrait avec du DCM. La couche organique a été séchée avec du sulfate de sodium, concentrée et purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice pour donner le produit souhaité. 1 - (4-Amino-benzyl) -2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D-ga1actopyranoside (11) obtenu sous la forme d'un solide blanc (412 mg, 45%) suivant la méthode A: 8 (968 mg, 2,00 mmol), Pd / C 10% (96,8 mg), dans du CH2C12 distillée (30 m1). Le mélange a été traité, la couche aqueuse a été extraite avec CH2C12 et le poduit brut traité (0 à 5% de Me0H dans CH2C12) pour donner le produit pur.. Rf= 0.43 (AcOEt/cyclohexane, 6:4, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-10, H-12), 6.60 (d, J = 8.1, 2H, H-9, H-13), 5.32 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.18 (dd, J = 10.4 et 8.3 Hz, 1H, H-2), 4.91 (dd, J = 10.4, 3.3, 1H, H-3), 4.71-4.46 (2xd, J = 11.9, 2H, H-7), 4.42 (d, J =7.9, 2H, H-1), 4.15 (dd, J = 11.2 et 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.10 (dd, J = 11.2 et 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.81 (t, J = 6.5, 1H, H-5), 2.09 (s, 3H, CH3C0), 2.01 (s, 3H, CH3C0), 1.94 (s, 3H, CH3C0), 1.91 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.4, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 146.6 (C-11), 129.8 (C-8), 126.3 (C-9), 115.0 (C-10), 99.2 (C-1), 71.1 (C-5), 70.8 (C-3), 70.7 (C-7), 69.0 (C-2), 67.3 (C-4), 61.5 (C-6), 20.8, 20.8, 20.7, 20.6 (4 CH3C0). HRMS (ESI+) : calculé pour C21H28N010 [M + H]+454.1713, trouvé 454.1718. [ci]D20 = -25.0° (c 0.004, Me0H). 4-Amino-benzy1-1-thio-2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D-galactopyranoside (12) obtenu sous la forme d'une huile incolore (314 mg, 79%) suivant la méthode A: 9 (425 mg, 0,851 mmol), de Pd / C 10% (42,5 mg), dans du CH2C12 distillée (15 m1). Le mélange a été purifié sur gel de silice (0 à 5% de Me0H dans CH2C12) pour donner le produit pur.

Rf= 0.26 (AcOEt/cyclohexane, 6:4, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-9, H-13), 6.63 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-10, H-12), 5.40 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.26 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H2), 4.96 (dd, J = 9.9 et 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.27 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.3 et 6.6 Hz, 1H, H-6), 4.11 (dd, J = 11.3 et 6.6 Hz, 1H, H-6), 3.86 (d, J = 12.9 Hz, 1H, H-7), 3.81 (t, J = 6.6 Hz, 1H, H-5), 3.75 (d, J = 12.9 Hz, 1H, H-7), 2.14 (s, 3H, CH3C0), 2.06 (s, 3H, CH3C0), 2.01 (s, 3H, CH3C0), 1.96 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.4, 170.2, 169.7 (4 CO Ac), 145.8 (C-11), 130.3 (C-9), 126.5 (C-8), 115.3 (C-10), 82.5 (C-1), 74.5 (C-5), 72.0 (C-3), 67.5 (C-4), 67.3 (C-2), 61.8 (C-6), 33.7 (7), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3C0). HRMS (ESI+): calculé pour C21H28N09S [M + H]+ 470.1485, trouvé 470.1489. [a]D20 = -73.8° (c 0.01, Me0H). 10 4-Bromoacetamidobenzy1-2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D-galactopyranoside (14) obtenu sous la forme d'une huile jaune pâle (238 mg, 79%) suivant la méthode B: 11 (239 mg, 0.527mmo1), Et3N (0,103 mL, 0,738 mmol), de bromure de bromoacétyle (0,059 mL, 0,685 mmol) dans CH2C12 (30 mL ). Le mélange a été traité, et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 60% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour 15 donner le produit souhaité. Rf= 0.31 (AcOEt/cyclohexane, 6:4, v/v). 1E1 NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.23 (s, 1H, H-14), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.37 (dd, J = 3.4 et 0.9 Hz, 1H, H-4), 5.25 (dd, J = 10.4 et 7.9 Hz, 1H, H-2), 4.97 (dd, J= 10.4 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.85-4.59 (2xd, J = 12.2 Hz, 2H, H-7), 4.50 (d, J= 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.19 (dd, J = 11.2 et 6.5 Hz, 1H, H- 20 6), 4.13 (dd, J= 11.2 et 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.99 (s, 2H, H-16), 3.88 (dt, J= 0.9 et 6.5 Hz, 1H, H-5), 2.13 (s, 3H, CH3C0), 2.04 (s, 3H, CH3C0), 2.00 (s, 3H, CH3C0), 1.96 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm : 170.6, 170.4, 170.3, 169.6 (4 x CO-Ac), 163.8 (C-15), 137.0 (C-11), 133.7 (C-8), 128.7 (C-9), 120.2 (C-10), 100.0 (C-1), 71.1 (C-3), 71.0 (C-5), 70.4 (C-7), 69.0 (C-2), 67.3 (C-4), 61.5 (C-6), 29.6 (C- 25 16), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 x CH3-Ac). HRMS (ESI+): calculé pour C23H29BrN0ii [M + 574.0924, trouvé 574.0933. [a]D2° = -13.1° (c0.03, Me0H). 4-Bromoacetamidobenzy1-1-thio-2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D- galactopyranoside (15) obtenu sous la forme d'une huile jaune (367 mg, 93%) 30 suivant la méthode B: 12 (314 mg, 0,669 mmol), de Et3N (0,130 mL, 0,937 mmol), de bromure de bromoacétyle (0,075 mL, 0,869 mmol) dans du CH2C12 (10 m1). Le mélange a été traité, et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 40% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.28 (AcOEt/cyclohexane, 1:1, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.23 (s, 1H, H-14), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 35 2H, H-10, H-12), 7.26 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.37 (dd, J = 3.3 et 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.23 (t, J = 10.0 Hz, 1H, H-2), 4.94 (dd, J = 10.0 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.25 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.12 (dd, J = 11.4 et 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.05 (dd, J = 11.4 et 6.45 Hz, 1H, H-6), 3.98 (s, 2H, H-16), 3.90, 3.81 (2 x d, J = 13.0 Hz, each 1H, H-7), 3.78 (m, 1H, H-5), 2.12 (s, 3H, CH3C0), 2.03 (s, 3H, CH3C0), 1.99 (s, 3H, CH3C0), 1.93 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 170.6, 170.4, 170.2, 169.8 (4 CO Ac), 163.74 (C-15), 136.4 (C-11), 133.9 (C-8), 130.0 (C-9), 120.3 (C-10), 82.6 (C-1), 74.6 (C-5), 72.0 (C-3), 67.5 (C-4), 67.3 (C-2), 61.7 (C-6), 33.4 (C-7), 29.6 (C- 16), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3C0). HRMS (ESI+): calculé pour C23H29N010BrS [M + H]+ 590.0696, trouvé 590.0688. [a]D20 = -56.7° (c 0.02, Me0H). 4-Bromoacetamidopheny1-1-thio-2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D- 10 galactopyranoside (16): Une solution de 10 (497 mg, 1,02 mmol) dans du CH2C12 anhydre (20 mL) a été dégazée puis Pd / C 10% (49,7 mg) a été ajouté. La solution a été soumise à une atmosphère d'hydrogène et agité à température ambiante pendant 3 jours. Après disparition totale du produit de départ, le mélange de 13 a été balayé avec de l'argon, refroidie à 0 ° C, et de Et3N (0,043 mL, 0,308 mmol) a été ajouté. Du 15 bromure de bromoacétyle (0,025 mL, 0,286 mmol) a été ajouté goutte à goutte et le mélange a été agité pendant I hàO° C. On laisse le mélange se réchauffer à température ambiante pendant 1 h, puis a été filtré à travers un tampon de célite et lavé avec du CH2C12. Le mélange brut dans CH2C12 a été lavée avec HC1 1 N (2 x 25 ml), de l'eau (2 x 25 ml) et de la saumure (25 mL). Après séchage (Na2SO4), la 20 concentration et la suppression totale du CH2C12 sous vide, le résidu a été purifié par Chromatographie sur colonne de gel de silice (0 à 30% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit sous forme d'une huile jaune (505,6 mg, 86% total). Rf = 0.33 (AcOEt/cyclohexane, 6:4, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.15 (s, 1H, H13), 7.52 (m, 2H, H-9, H-11), 7.51 (m, 2H, H-8, H-12), 5.40 (dd, J = 3.3 et 0.8 Hz, 25 1H, H-4), 5.19 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H-2), 5.04 (dd, J = 9.9 et 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.65 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.4 et 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.11 (dd, J = 11.4 et 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.01 (s, 2H, H-15), 3.91 (dt, J = 0.8 et 6.9 Hz 1H, H-5), 2.11 (s, 3H, CH3C0), 2.09 (s, 3H, CH3C0), 2.05 (s, 3H, CH3C0), 1.96 (s, 3H, CH3C0). 13C 30 (ESI+): calculé pour C22H26N010NaSBr [M + Na]+ 598.0358, trouvé 598.0360. [a]D20 = -13.0° (c 0.02, Me0H) 35 4-Azidoacetamidobenzy1-2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D-galactopyranoside (17) obtenu sous la forme d'un solide blanc (148 mg, 94%) suivant la méthode C: 14 (168 mg, 0,292 mmol), TMGN3 (138,6 mg, 0,876 mmol) dans du CH3CN anhydre (4 mL).

NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 163.5 (C-14), 137.4 (C-10), 134.3 (C-8), 128.2 (C-7), 120.3 (C-9), 86.7 (C-1), 74.7 (C-5), 72.1 (C- 3), 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 29.5 (C-15), 21.0, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3C0). HRMS Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 40% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.28 (AcOEt/cyclohexane, 1:1, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.05 (s, 1H, H14), 7.50 (d, J= 8.8 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.24 (d, J= 8.8 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.35 (d, J= 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.23 (dd, J= 10.4 et 7.9 Hz, 1H, H-2), 4.95 (dd, J= 10.4 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.83 (d, J= 12.2 Hz, 1H, H-7), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H, H-7), 4.48 (d, J= 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J= 11.2 et 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.13 (dd, J= 11.2 et 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.10 (s, 2H, H-16), 3.85 (t, J = 6.4 Hz, 1H, H-5), 2.12 (s, 3H, CH3C0), 2.03 (s, 3H, CH3C0), 1.98 (s, 3H, CH3C0), 1.94 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR 70.2 (C-7), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 61.3 (C-6), 53.0 (C-16), 20.8, 20.7, 20.7, 20.6 (4 CH3C0). HRMS (ESI+): calculé pour C23H29N40ii [M + 537.1833, trouvé 537.1840. [a]D2° = -18.0° (c 0.01, Me0H). 4-Azidoacetamidobenzyl-3-D-galactopyranoside 3. HRMS (ESI +): calculé pour Ci5H2iN407 [M + H] 369.1410, trouvé 369,1411. 4-Azidoacetamidobenzy1-1-thio-2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D- galactopyranoside (18) obtenu sous la forme de cristaux brun clair (99 mg 94%) suivant la méthode C. 15 (112 mg, 0,190 mmol), TMGN3 (90,2 mg, 0,570 mmol) dans du CH3CN anhydre (5 ml). Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 40% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.26 (AcOEt/cyclohexane, 1:1, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.20 (s, 1H, H-14), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.39 (d, J= 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.25 (t, J= 10.0 Hz, 1H, H2), 4.96 (dd, J= 10.0 et 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.28 (d, J= 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.13 (dd, J= 11.4 et 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.10 (s, 2H, H-16), 4.07 (dd, J= 11.4 et 6.7 Hz, 1H, H-6), 3.92, 3.81 (2xd,J= 13.0 Hz, each 1H, H-7), 3.80 (d, J= 6.7 Hz, 1H, H-5), 2.14 (s, 3H, CH3C0), 2.05 (s, 3H, CH3C0), 2.01 (s, 3H, CH3C0), 1.95 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR (101 MHz, CDC13) ppm: 170.4, 170.3, 170.1, 169.7 (4C0 Ac), 164.9 (C-15), 136.1 (C11), 133.6 (C-8), 129.8 (C-9), 120.2 (C-10), 82.4 (C-1), 74.4 (C-5), 71.2 (C-3), 67.4 (C-4), 67.09 (C-2), 61.6 (C-6), 52.90 (C-16), 33.3 (C-7), 20.8, 20.7, 20.7, 20.6 (4 CH3C0). HRMS (ESI+): calculé pour C23H29N4010S [M + 553.1604, trouvé 553.1621. [a]D2° = -53.4° (c 0.01, Me0H). (151 MHz, CDC13) ppm: 170.4, 170.3, 170.1, 169.4 (4 CO Ac), 164.6 (C-15), 136.6 (C-11), 133.4 (C-8), 128.6 (C-9), 120.0 (C-10), 99.8 (C-1)), 70.9 (C-3), 70.8 (C-5), 4-Azidoacetamidobenzy1-1-thio-13-D-galactopyranoside 4. HRMS (ESI+): calculé pour Ci5H2iN406S [M + H] 385.1182, trouvé 385.1185. 4-Azidoacetamidopheny1-1-thio-2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D- galactopyranoside (19) obtenu sous la forme d'huile incolore (56 mg 55%) suivant la méthode C: 16 (109 mg, 0,189 mmol), TMGN3 (89,7 mg, 0,567 mmol) dans du CH3CN anhydre (4 mL). Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 40% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.28 (AcOEt/cyclohexane, 6:4, v/v). 1E1 NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.08 (s, 1H, H-13), 7.51 (m, 2H, H-9, H-11), 7.49 (m, 2H, H-8, H-12), 5.39 (dd, J= 3.3 et 0.9 Hz, 1H, H-4), 5.18 (t, J= 9.9 Hz, 1H, H-2), 5.03 (dd, J = 9.9 et 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.64 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.16 (dd, J = 11.4 et 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.13 (s, 2H, H-15), 4.09 (dd, J = 11.4 et 6.9 Hz, 1H, H-6), 3.90 (dt, J = 0.8 et 6.69 Hz, 1H, H-5), 2.10 (s, 3H, CH3C0), 2.08 (s, 3H, CH3C0), 2.03 (s, 3H, CH3C0), 1.95 (s, 3H, CH3C0). 13C NMR 0.01, Me0H). 4-Azidoacetamidopheny1-1-thio-13-o-ga1actopyranoside 2. HRMS (ESI+): calculé pour Ci4Hi9N406S [M + H] 371.1025, trouvé 371.1031. Benzyle 4'-(2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D-galactopyranosyloxy)-biphény1-4- carboxylate d'éthyle 24 obtenu sous la forme d'un solide blanc (2,189 g, 99%) suivant la méthode E: 7 (1,439 g, 3,5 mmol), benzyle 4'-hydroxy-biphényle-4- carboxylate (2,464 g, 7.05mmol ), tetrabutylammoniumhydrogensulfate (1,188 g, 3,5 mmol) dans du CH2C12 distillé (15 ml), une solution aqueuse 1 M. solution de NaOH (5 ml). Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 30% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.39 (AcOEt/cyclohexane, 1:1, v/v). 1E1 NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.13 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-12, H-16), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H-22, H-26), 7.40 (t, J = 7.2 Hz, 2H, H-23, H25), 7.34 (t, J= 7.2 Hz, 1H, H-24), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-8, H-18), 5.52 (dd, J = 10.4 et 8.0 Hz, 1H, H-2), 5.48 (dd, J = 3.4 et 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.39 (s, 2H, H-20), 5.14 (dd, J = 10.4 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H, H-1), 4.25 (dd, J= 11.2 et 7.0 Hz, 1H, H-6), 4.18 (dd, J= 11.2 et 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.09 (ddd, J= 7.0 et 6.4 et 0.8 Hz, 1H, H-5), 2.19 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, (151 MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.3, 170.1, 169.5 (4 CO Ac), 164.7 (C-14), 137.3 (C-10), 134.2 (C-8), 128.0 (C-7), 120.4 (C-9), 86.7 (C-1), 74.6 (C-5), 72.1 (C-3), 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 53.08 (C-15), 20.9, 20.8, 20.7, 20.7 (4 CH3C0). HRMS (ESI+): calculé pour C22H27N4010S [M + 539.1448, trouvé 539.1450. [a]D2° = -12.3° (c COCH3), 2.02 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm:170.4, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 166.4 (C-19), 157.2 (C-7), 145.1 (C-11), 136.3 (C-21), 135.3 (C-10), 130.4 (C-13), 128.9 (C-14), 128.7 (C-23), 128.6 (C-9), 128.4 (C-24), 128.3 (C-22), 126.9 (C-12), 117.5 (C-8), 99.7 (C-1), 71.3 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 66.8 (C-20), 61.5 (C-6), 20.9, 20.8, 20.7, 20.6 (4 CH3C0). HRMS (ESI+) : calculé pour C34H34012Na [M + Na] 657.1948, trouvé 657.1948. [a]D2° = +6.0° (c 0.01, 1,4-dioxane). 4'-(2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D-galactopyranosyloxy)-biphény1-4- 10 carboxylique (26) obtenu sous la forme d'un solide blanc (691 mg, 37%) suivant la méthode A: 24 (2,189 g, 3,45 mmol), Pd / C 10% (219 mg), dans du CH2C12 distillée (30 m1). Le mélange a été traité, la couche aqueuse a été extraite avec du CH2C12 et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 50% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.44 (Me0H/CH2C12, 1:9, v/v). 1F1 NMR (600 15 MHz, CDC13) ppm: 8.17 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.65 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-12, H-16), 7.58 (d, J= 8.7 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.11 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-8, H-18), 5.53 (dd, J = 10.4 et 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.48 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.15 (dd, J= 10.4 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.12 (d, J= 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.26 (dd, J = 11.4 et 7.0 Hz, 1H, H-6), 4.19 (dd, J = 11.4 et 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.11 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, 20 COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.03 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 171.3 (C-19), 170.5, 170.4, 170.3, 169.5 (4 CO Ac), 157.3 (C-7), 145.8 (C-11), 135.2 (C-10), 131.0 (C-13), 128.7 (C-9), 127.9 (C-14), 127.0 (C- 12), 117.5 (C-8), 99.7 (C-1), 71.3 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.5 (C- 6), 20.9, 20.8, 20.7, 20.7 (4 CH3C0). HRMS (ESI+) : calculé pour C27H28012Na [M + 25 Na] 567.1478, trouvé 567.1489. [a]D2° = +6.6° (c 0.01, 1,4-dioxane). 4'-(2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D-galactopyranosyloxy)-biphény1-4- carboxylique Benzyl 3-azido-propyl-amide (28) obtenu sous la forme d'un solide blanc (47 mg, 74%) suivant la méthode F: 26 (131 mg, 0,102 mmol), du 1-éthy1-3-(3'- 30 diméthylaminopropyl) carbodiimide (25,3 mg, 0,163 mmol), l'hydroxybenzotriazole (15,1 mg, 0,112 mmol), de 3-azidopropylamine (20,4 mg, 0.204mmol) dans du DMF anhydre (5 mL). Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 50% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.34 (Me0H/CH2C12, 2:98, v/v). 1F1 NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 35 2H, H-13, H-15), 7.58 (d, J= 8.2 Hz, 2H, H-12, H-16), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.06 (d, J= 8.7 Hz, 2H, H-8, H-18), 6.46 (t, J = 5.7 Hz, 1H, H-20), 5.49 (dd, J = 10.4 et 8.0 Hz, 1H, H-2), 5.45 (d, J= 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.11 (dd, J= 10.4 et 3.4 Hz,5 1H, H-3), 5.08 (d, J= 8.0, 1H, H-1), 4.22 (dd, J= 11.3 et 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.15 (dd, J = 11.3 et 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.08 (t, J= 6.7 Hz, 1H, H-5), 3.56 (q, J= 6.4 Hz, 2H, H21), 3.44 (t, J= 6.4 Hz, 2H, H-23), 2.17 (s, 3H, COCH3), 2.06 (s, 3H, COCH3), 2.04 (s, 3H, COCH3), 2.00 (s, 3H, COCH3), 1.91 (p, J= 6.4 Hz, 2H, H-22). 13C NMR (151 (ESI+): calculé for C30F135N4011 [M + H] 627.2302, trouvé 627.2304. [a]D2° = +3.8° (c0.03, 1,4-dioxane) Benzyl 4'-(13-n-galactopyranosyloxy)-biphenyl-4-carboxylic acid 3-azido- propyl-amide 5. HRMS (ESI+) : calculé pour C22H27N407 [M + H] 459.1880, trouvé 459.1884.

Benzy1-6-hydroxy-2-naphtoate de méthyle (23): A une solution d'acide 6- hydroxy-2-naphtoïque (1,882 g, 10 mmol) a été ajoutée dans du methanol aqueux à 90% (20 mL), CS2CO3 (1,629 g, 5 mmol). On a agité la solution à la température ambiante pendant 30 min. Le solvant a été évaporé sous pression réduite, puis co- évaporé avec du toluène (2 x 10 mL). Le sel de césium obtenu a été mis en suspension dans du DMF anhydre (10 mL), refroidie à 0 ° C et du bromure de benzyle (1,19 mL, 10 mmol) a été ajouté. Après 1 h d'agitation, on a laissé la solution se réchauffer à la température ambiante et l'agitation a été poursuivie pendant encore 10 h avant d'éliminer le solvant sous pression réduite. Le résidu a été repris dans de l'eau (2 x 20 mL) puis extrait avec de l'AcOEt (200 mL) et les couches organiques combinées ont été séchées sur Na2SO4 et le solvant a été éliminé sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (0 à 30% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit sous forme d'un solide blanc (2,095 g, 75%).Rf = 0.47 (cyclohexane/ AcOEt, 1:1, v/v). 1F1 NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.57 (d, J= 1.7 Hz, 1H, H-5), 8.05 (dd, J= 8.6 et 1.7 Hz, 1H, H-7), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H, H-4), 7.69 (d, J= 8.6 Hz, 1H, H-8), 7.50 (d, J= 7.3 Hz, 1H, H-14), 7.42 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-15), 7.36 (t, J= 7.3 Hz, 1H, H-16), 7.18 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8.8 et 2.4 Hz, 1H, H-3), 5.63 (s, 1H, OH), 5.43 (s, 2H, H-12). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm : 167.1 (C-11), 155.9 (C-2), 137.4 (C-9), 136.3 (C-13), 131.7 (C- 4), 131.4 (C-5), 128.8 (C-15), 128.4 (C-16), 128.4 (C-14), 128.0 (C-11), 126.7 (C-8), MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5(4 CO Ac), 167.4 (C-19), 157.1 (C-7), 143.6 (C-11), 135.3 (C-10), 133.0 (C-14), 128.5 (C-9), 127.6 (C-13), 127.1 (C-12), 117.4 (C-8), 99.7 (C-1), 71.2 (C-5), 70.9 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.5 (C-6), 49.8 (C-23), 38.0 (C-21), 28.9 (C-22), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3C0). HRMS 126.2 (C-7), 125.2 (C-16), 118.9 (C-3), 109.7 (C-1), 67.1 (C-12). HRMS (ESI+) :calculé. for Ci8H1503 [M + H] 279.1021; trouvé 279.1024. Benzy1-6-(2,3,4,6-tétra-0-acétyl-13-D-galactopyranosyloxy)-2-naphtoate de méthyle (25) obtenu comme un solide blanc (1,239 mg, 77%) après la méthode E: 7 (1.082 g, 2,63 mmol), 23 (1,464 g, 5.26mmol), tetrabutylammoniumhydrogensulfate (0,823 g, 2,63 mmol) dans CH2C12 distillé (15 mL), un 1 M aq. solution de NaOH (5 ml). Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 30% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.38 (AcOEt/cyclohexane, 1:1, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm:8.59 (d, J = 1.6 Hz, 1H, H-12), 8.09 (dd, J= 8.7 et 1.6 Hz, 1H, H-10), 7.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H, H-13), 7.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H, H-9), 7.49 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H-20, H-24), 7.41 (t, J= 7.2 Hz, 2H, H-21, H-23), 7.37 (d, J= 2.4, 1H, H-8), 7.36 (m, 1H, H-22), 7.24 (dd, J= 8.8 et 2.4 Hz, 1H, H-14), 5.56 (dd, J= 10.4 et 7.9, 1H, H-2), 5.50 (dd, J= 3.4 et 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.42 (s, 2H, H-18), 5.24 (d, J= 7.9 Hz, 1H, H-1), 5.17 (dd, J= 10.4 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.27 (dd, J= 11.1 et 6.8 Hz, 2H, H-6), 4.18 - 4.15 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, COCH3), 2.03 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 170.5, 170.4, 170.3, 169.6 (4 CO Ac), 166.70 C32H32012Na [M + Na] 631.1791, found 631.1788. [a]D2° = -11.2° (c 0.01, Me0H) 6 - (2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D-galactopyranosyloxy)-2-naphtoïque (27) obtenu sous la forme d'un solide blanc (806 mg, 76%) suivant la méthode A: 25 (1,239 g, 2,04 mmol), Pd / C 10% (124 mg), dans du CH2C12 distillée (15 ml). Le mélange a été traité, la couche aqueuse a été extraite avec du CH2C12 et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 50% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.44 (Me0H/CH2C12, 6:94, v/v). 1H NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 8.66 (d, J= 1.6 Hz, 1H, H-12), 8.11 (dd, J= 8.6 et 1.6 Hz, 1H, H-10), 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H, H-13), 7.80 (d, J= 8.6 Hz, 1H, H-9), 7.39 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-8), 7.27 (dd, J= 9.0 et 2.4 Hz, 1H, H-14), 5.57 (dd, J= 10.4 et 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.51 (d, J= 3.5 Hz, 1H, H-4), 5.26 (d, J= 7.8 Hz, 1H, H-1), 5.18 (dd, J= 10.4 et 3.5 Hz, 1H, H- 3), 4.30 - 4.19 (m, 2H, H-6), 4.19 - 4.17 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.04 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm: 171.6 (C-17), 170.6, 170.4, 170.3, 169.6 (4 CO Ac), 157.0 (C-7), (C-17), 156.7 (C-7), 136.9 (C-15), 136.3 (C-19), 131.5 (C-13), 131.2 (C-12), 129.3 (C-16), 128.9 (C-21), 128.50 (C-20), 127.5 (C-9), 126.6 (C-10), 126.5 (C-11), 119.8 (C-14), 111.2 (C-8), 99.5 (C-1), 71.5 (C-5), 71.0 (C-3), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 67.1 (C-18), 61.8 (C-6), 20.9, 20.9, 20.9, 20.8 (4 CH3 CO). HRMS (ESI+) : calculé pour 137.3 (C-15), 132.14 (C-12), 131.7 (C-13), 129.3 (C-16), 127.6 (C-9), 126.6 (C-10), 125.6 (C-11), 119.9 (C-14), 111.2 (C-8), 99.5 (C-1), 71.6 (C-5), 71.1 (C-3), 68.9 (C- 2), 67.2 (C-4), 61.8 (C-6), 21.0, 20.9, 20.9, 20.8 (4 CH3C0). HRMS (EST-): calculé for C25H25012 [M - Hf 517.1346, trouvé 517.1344. [a]D2° = -6.4° (c0.01, Me0H) 6 - (2,3,4,6-tétra-0-acéty1-13-D-ga1actopyranosy1oxy)-2-naphtoïque l'acide 3- azido-propyl-amide (29) obtenu sous la forme d'un solide blanc (182 mg, 79%) suivant la méthode F: 27 (200 mg, 0,386 mmol), du 1-éthy1-3-(3'- diméthylaminopropyl) carbodiimide (96 mg, 0,618 mmol), l'hydroxybenzotriazole (57,4 mg, 0,425 mmol), de 3-azidopropylamine (77,3 mg, 0,772 mmol) dans du DMF anhydre (5 mL). Le mélange a été traité et le produit brut a été purifié sur gel de silice (0 à 50% d'AcOEt dans du cyclohexane) pour donner le produit souhaité. Rf= 0.32 (Me0H/CH2C12, 2:98, v/v). 1F1 NMR (600 MHz, CDC13) ppm: 7.83 (d, J = 9.0 Hz, 1H, H-13), 7.80 (dd, J= 8.5 et 1.5 Hz, 1H, H-10), 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H, H-9), 7.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-8), 7.22 (dd, J = 9.0 et 2.4 Hz, 1H, H-14), 6.52 (t, J= 5.7 Hz, 1H, NH), 5.53 (dd, J= 10.4 et 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.47 (dd, J= 3.4 et 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.19 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 5.13 (dd, J = 10.4 et 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.24 (dd, J= 11.2 et 7.1 Hz, 1H, H-6), 4.16 (dd, J= 11.2 et 6.0 Hz, 1H, H-6), 4.14 (dd, J= 6.0 et 0.8 Hz, 1H, H-5), 3.59 (quad, J = 6.1 Hz, 2H, H-19), 3.46 (t, J = 6.1 Hz, 2H, H-21), 2.17 (s, 3H, COCH3), 2.05 (s, 3H, COCH3), 2.05 (s, 3H, COCH3), 2.01 (s, 3H, COCH3), 1.93 (p, J = 6.1 Hz, 2H, H-20). 13C NMR (151 MHz, CDC13) ppm:170.5, 170.4, 170.3, 169.5 (5 CO ester), 167.6 (C-17), 156.1 (C-7), 135.9 (C-15), 130.9 (C- 13), 130.7 (C-11), 129.4 (C-16), 127.7 (C-9), 127.4 (C-12), 124.5 (C-10), 119.9 (C- 14), 111.1 (C-8), 99.5 (C-1), 71.4 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.6 (C- 6), 49.8 (C-21), 38.1 (C-19), 29.0 (C-20), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3C0). HRMS (ESI+) : calculé C28H33N40ii [M + H] 601.2146, trouvé 601.2150. [a]D2° = -7.0° (c 0.01, Me0H) 6-(13-n-galactopyranosyloxy)-2-naphthoic acid 3-azido-propyl-amide 6.

HRMS (ESI+) : calculé for C20H25N407 [M + H] 433.1723, trouvé 433.1722. 0-2-cyanoéthy1-0'-(3,6,9-trioxadodecan-11-yny1)-N, N-diisopropyl- phosphoramidite (33). Une solution de 3,6,9-trioxadodecan-11-yn-1-ol 31 (376 mg, 2 mmol) est ajoutée dans du dichlorométhane sec (20 mL) en présence de tamis moléculaire 4 À et sous atmosphère d'argon, de la diisopropyléthylamine (520 pl, 3 mmol) et ensuite 0-(2-cyanoéthyl)-N, N-diisopropyl-chlorophosphoramidite (480 ul, 2 mmol) a été ajouté goutte à goutte. Après 2 h d'agitation à température ambiante, 1 ml d'eau ont été ajoutés. Après 10 min, la solution a été diluée avec du dichlorométhane (40 ml) et ensuite lavé avec une solution aqueuse saturée de NaHCO3 (75 ml). La couche organique a été extraite avec du dichlorométhane (2 x 100 mL), séchée sur Na2SO4 et évaporée à sec sous pression réduite. Le produit brut est chromatographié sur gel de silice, 0 à 50% d'acétate d'éthyle dans du cyclohexane contenant 4% de Et3N, ce qui donne 33 comme sirop incolore 563 mg, 73%. TLCTLC : Rf = 0.55 Cyclo/AcOEt/Et3N 5:4:1, v/v/v. 1H-NMR (CDC13, 300 MHz): ô 1.14 (dd, 12H, J = 6.8 Hz, Isopropyl), 2.36 (t, 1H, J = 2.4 Hz, -CCH), 2.59 (t, 2H, J = 6.5 Hz, -CH2-CN), 3.5-3.81 (m, 16H, -CH-, -0-CLIa-CLIa-0-, -O-CH-P), 4.14 (d, 2H, J = 2.5 Hz, HCC-CH2). 13C-NMR (CDC13, 100 MHz): ô 18.17, 18.26, 22.4, 22.4, 22.5, 22.6, 40.9, 41, 56.3, 56.5, 60.4, 60.6, 67, 68.3, 68.5, 68.6, 69, 69.2, 72.4, 77.5, 115.6. 31P-NMR (CDC13, 121 MHz): ô 148.67 ppm. HRMS TOF-ES positive mode calculé pour C18F136N206P [M+H2O+H] 407.2311 trouvé 407.2270.

Synthèse de conjugués d'oligonucléotides glycocluster de galactoside aromatique à coeur mannose Immobilisation de 35 sur support solide d'azoture de Propargyl de mannoside par Cycloaddition. Une solution aqueuse de propargyle a-D-mannopyranoside 34 T.

Hasegawa, M. Numata, S. Okumura, T. Kimura, K. Sakurai and S. Shinkai, Org. Biomol. Chem. 2007, 5, 2404-2412. (100 mM, 175 ul), des solutions aqueuses fraîchement préparées de CuSO4 (100 mM, 14 pt) et de l'ascorbate de sodium (500 mM, 14 pl), d'eau (147 pL) et du Me0H (350 pt) ont été ajoutés à 3,5 pmol de support solide de l'azoture 35. G. Pourceau, A. Meyer, J. J. Vasseur and F. Morvan, Org. Chem. 2009, 74, 6837-6842. Le mélange obtenu dans un tube scellé a été chauffé à 60 °C pendant 45 min en utilisant un synthétiseur à micro-ondes (Monowave 300, Anton Paar). La température a été contrôlée avec une sonde infrarouge interne. La solution a été retirée, et des billes de CPG ont été lavées avec H20 (3 x 2 mL), du Me0H (3 x 2 mL) et du CH3CN (3 x 2 mL), et séché pour donner le mannoside sur support solide 36. Procédure générale pour l'introduction de Alcynyle phosphoramidites sur mannose hydroxylés. Le mannoside sur support solide 36 (échelle de 1 umol) a été traitée avec l'alcynyle phosphoramidites 32 (B. Gerland, et al. Bioconjugate Chem. 2014, 25, 379- 392) ou 33, sur un synthétiseur d'ADN (ABI 394) selon la chimie des phosphoramidites. Seuls le couplage et l'oxydation ont été réalisées. Pour l'étape de couplage, le benzylmercaptotetrazole (BMT) a été utilisé comme activateur (0,3 M dans du CH3CN anhydre) et le phosphoramidite 32 ou 33 (0,2 M dans du CH3CN anhydre ), est déposé trois fois (3 x 40 pmol) avec un temps de couplage 180 s (3 x 180 s). L'oxydation a été effectuée avec une solution commerciale d'iodure (0,1 M 12, THF / pyridine / eau 90:5:5) pendant 15s pour former phophostriesters ou avec de la 3H -1 ,2- benzodithiole -3-one - 1, 1, - dioxyde avec (réactif de Beaucage, 0,05 M dans l'acétonitrile sec) R. P. Iyer, W. Egan, J. B. Regan and S. L. Beaucage, J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 1253-1254. pendant 60 secondes pour former thionophosphotriesters.

Procédure générale pour l'élongation de séquences d'ADN et d'étiquetage avec Cy3. Les séquences d'ADN ont été synthétisées sur des échafaudages de tetraalkynyl sur support solide à l'échelle de 1 [tmol sur un synthétiseur d'ADN (ABI 394) par la chimie au phosphoramidite standard. Pour l'étape de couplage, BMT a été utilisé comme activateur (0,3 M dans du CH3CN anhydre), les nucléosides phosphoramidites (0,075 M dans du CH3CN anhydre) ont été introduites avec un temps de couplage de 20s et Cy3 amidite (0,067 M dans du CH3CN anhydre) avec un un temps de couplage de 180 s. L' étape de capping a été réalisée avec l'anhydride acétique en utilisant une solution commerciale (Cap A: Ac20/pyridine/THF, 10:10:80 et Cap B : 10 % de Nméthylimidazole dans le THF) pendant 15 s. L'oxydation a été réalisée pendant 15 s à l'aide de 0,1 M 12, THF / pyridine / eau 90:5:5. La détritylation a été réalisée avec 2,5% DCA dans CH2C12 pendant 35 s.

Procédure générale pour la déprotection des oligonucléotides sur support solide. Les billes de CPG portant des oligonucléotides modifiés ont été transférées dans un flacon à vis de 4 ml et traités avec 2 ml d'ammoniaque concentrée pendant 15 h à température ambiante et chauffés à 55 ° C pendant 2 h. Pour chaque composé, le surnageant a été retiré et on l'évaporé à siccité. Le résidu a été dissous dans de l'eau pour une analyse ultérieure et la caractérisation.

Procédure générale pour la réaction CuAAC Procédure pour l'introduction des dérivés de azido aromatique 13-D-galactoside 1-6 : A une solution de l'oligonucléotide 5'- fluorescent -3'- tetraalcyne 36-39(100 nmoles dans 100 ul de H20) ont été ajoutés galactosides azido - fonctionnalisé 1-6 (3 équiv. par fonction alcyne, 100 mM dans du Me0H), - 0,1 mg de Cu (0) nanopoudre, un tampon d'acétate de triéthylammonium 0,1 M, pH 7,7 (25 uL), de l'eau et Me0H pour obtenir un volume final de 250 [iL (de Me0H de l'eau, une : 1, y / v). Le tube contenant la préparation résultante a été scellé et placé dans un synthétiseur à micro-ondes à partir de 300 Monowave Anton Paar à 60 ° C pendant 60 min.

Purifications HPLC EDTA (400 [iL) a été ajouté aux mélanges et après centrifugation, les surnageants ont été retirés pour éliminer Cu (0) et on dessale par Chromatographie d'exclusion stérique sur Sephadex G25 (NAP10 ). Après évaporation, les oligonucléotides 5'- fluorescent 3'tetragalactomimétique à coeur mannose (G1-G24) ont été dissous dans de l'eau et purifiés par C18 à phase inverse HPLC preparative en utilisant un gradient linéaire de 8% à 32 % d'acétonitrile dans un tampon TEAAc pH 7 pendant 20 minutes. Les résidus ont été dissous dans de l'eau pour des analyses ultérieures.

Fabrication des DDI-microarrays Fabrication des lames de verre microstructurées Les lame de verre microstructurées sont présentés avec 40 puits carrés (largeur de 3 mm, 60 ± 1 profondeur de iam, avec un espacement de 4,5 mm entre chaque microréacteur ). Les microréacteurs ont été fabriqués par photolithographie et processus de gravure humide sur des lames de verre. Ces méthodes sont détailléesdans R. Mazurczyk, G. E. Khoury, V. Dugas, B. Hannes, E. Laurenceau, M. Cabrera, S. Krawczyk, E. Souteyrand, J. P. Cloarec and Y. Chevolot, Sens. Actuators, B 2008, 128, 552-559. et, J. Vieillard, R. Mazurczyk, C. Morin, B. Hannes, Y. Chevolot, DesbèneP-L. and S. Krawczyk, J. Chromatogr. B 2007, 845, 218-225. (2007). La silanisation de lames de verre : est effectuée selon Dugas et al. V. Dugas and Y. Chevalier, J. Colloid Interface Sci. 2003, 264, 354-361. Immobilisation d'amino- oligonucléotides modifiés : Sept oligonucléotides modifiés ont été achetés chez Eurogentec (références cZip1.1- cZip1.6 et cZip1.10). Des oligonucléotides correspondant à 25 pM dans PBS1OX (pH 8,5) sont placés au fond de chaque réacteur avec le robot de spotting : Scienion SciFlex Arrayer s3. La réaction de substitution a été effectuée pendant une nuit à température ambiante dans une atmosphère saturée en eau, et ensuite, on a laissé l'eau s'évaporer lentement. Le lavage des lames a été réalisé avec une solution SDS 0.1 % à 70 °C pendant 30 min et brièvement de l'eau. Etape de blocage: Afin d'éviter une adsorption non spécifique au cours de l'étape d'hybridation, les lames ont été bloquées avec de l'albumine de sérum bovin (BSA). Le blocage a été réalisé avec de la BSA à 4% en PBS1X (pH 7,4), à 37 °C pendant 2 h. Les étapes de lavage sont: 3x3min dans PBS-Tween 0.05% suivi par 3x3min dans PBS1X. Hybridation des glycomimetiques Etape d'hybridation: 2 pl d'une solution de chaque glycoconjugué portant une étiquette de l'ADN, à une !AM dans PBS1X (pH 7,4), ont été placés au fond du puits correspondant et on le laisse s'hybrider pendant une nuit à température ambiante dans une chambre saturée de vapeur d'eau. Les échantillons ont été lavés dans 2 x de solution saline citrate de sodium - (SSC 2X SDS 0.1 %), à 51 ° C pendant 1 min, suivis par SSC 2X à la température ambiante pendant une 5min supplémentaires et enfin rincés à l'eau avant d'être séchée par centrifugation. Etape de blocage: Après hybridation, les lames ont été de nouveau bloquée par de l'albumine de sérum bovin (BSA). Le blocage a été réalisé avec de la BSA à 4% en PBS1X (pH 7,4), à 37 ° C pendant 1 h. Les étapes de lavage : 3 x 3 min dans du PBS- Tween0.05 %, suivi par 3 x 3 min dans PBS 1X, brièvement rincées à l'eau déminéralisée avant séchée par centrifugation. Marquage par l'Alexa 647 de la lectine PA- IL: la lectine PA- IL est marquée avec le kit 647 Microscale protéine de marquage (A30009) d'Invitrogen Alexa Fluor®. 100 pi d'une solution de lmg/m1 de PA- IL (MW : 51 kDa, PA- IL a été aimablement fourni par le Dr Anne Imberty, CERMAV, Grenoble) dilué dans PBS 1X (pH 7,4) a été mélangé avec 10 pi de 1M sodium bicarbonate (pH 8,3 ). Le volume approprié de la solution de colorant réactif à 7,94 nmol / pl a été transféré dans le tube de réaction contenant la protéine. Le mélange réactionnel a été mélangé pendant 15 minutes à température ambiante avant purification sur une colonne de centrifugation pour séparer la protéine marquée du colorant n'ayant pas réagi.

La concentration de lectine et du colorant ont été estimées par la densité optique en utilisant un spectrophotomètre UV Safas Monaco (lecture absorbance à 281 nm et 650 nm). Détermination des CIso Préparation des solutions d'incubation : lectine PA- IL (concentration finale de 0,12 pm), la BSA (2% de concentration finale) et CaC12 (1!..tg/mL concentration finale) a été dilué dans PBS1X (pH = 7,4). Dans chaque tube, on a ajouté le micro lactose d'inhibiteur à la concentration finale désirée (0; 1.10-5; 1.10-4; 5.10-4; 1.10-3; 5.10-3; 1.10-2; 5.10-2; 0.1; 1; 5; 10; 50; 102; 5.102; 103; 5.103; 104; 105; 3.105).

Les complexes lectine - glycoconjugué sont incubés à 37 °C dans une chambre saturée de vapeur d'eau pendant 3 heures. Les étapes de lavage sont les suivantes: PBS- Tween0.02 % 5min à 4 °C, puis brièvement dans de l'eau et séché par centrifugation.

Balayage de fluorescence: La lame de verre a été numérisée à 532nm puis à 635 avec le scanner de puces à ADN, logiciel GenePix 4100A (Axon Instruments; Xe' 532/635 nm et Xe', 575/670 nm). Le signal de fluorescence de chaque conjugué a été déterminée comme étant la moyenne du signal de fluorescence moyenne de soixante-quatre points.

Les valeurs de CI50 ont été déterminées à l'aide du programme "BioDataFit 1.02 ". Le modèle choisi était "Sigmoidal": Y= a + (b - a) / [1 + 10^(x - c)] avec a = FI,,,', b FImax, x = log[PA-IL] et c = log(IC50). FImin / max. est le signal minimum / maximum de fluorescence Alexa-647 observée pour un galactomimetique.

III-B Biological test protocols: Test 1: Les propriétés d'hybridationde ces galactoclusters à PA-IL ont été étudiées par une glycopuce DDI (DNA directed immobilisation). Après leur immobilisation sur la puce, l'Alexa 647 -PA-IL a été ajouté et après lavage, l'intensité de fluorescence de chaque glycocluster a été lue. Le signal de fluorescent (excitation 635 nm, émission 675 nm) est corrélée à la liaison avec PA-IL. Test 2: La valeur de CI50 des glycoclusters a été déterminée en utilisant le lactose comme inhibiteur. Dans notre cas, la valeur CI50 correspond à la concentration en lactose nécessaire pour déplacer 50% de PA-IL du glycocluster. Par conséquent, plus la valeur de la CI50 est élevée, plus l'affinité du glycocluster pour PA-IL est grande.

III-Résultats: cluster DNA-tag Galactoclusters IC50 (mM) Kd (nM) G6 cZip 1.4 Man(PSEG2MTzAcNPhe-CH2-Gal)4 5,7 170 G8 cZip 1.6 Man(PSEG3MTzAcNPhe-CH2-Gal)4 8,4 125 G5 cZip 1.3 Man(EG2MTzAcNPhe-CH2-Gal)4 8,1 99 G7 cZip 1.2 Man(EG3MTzAcNPhe-CH2-Gal)4 9,1 85 G13 cZip 1.5 Man(EG2MTzAcNPhe-CH2-SGa1)4 12,0 85 G15 cZip 1.2 Man(EG3MTzAcNPhe-CH2-SGa1)4 13,3 76 G4 cZip 1.1 Man(PSEG3MTzAcNPh-Gal)4 17,7 76 G16 cZip 1.6 Man(PSEG3MTzAcNPhe-CH2-SGa1)4 18,1 75 G14 cZip 1.5 Man(PSEG2MTzAcNPhe-CH2-SGa1)4 18,5 71 G12 cZip 1.1 Man(PSEG3MTzAcNPh-SGa1)4 19,7 70 G2 cZip 1.4 Man(PSEG2MTzAcNPh-Gal)4 36,2 63 G10 cZip 1.5 Man(PSEG2MTzAcNPh-SGa1)4 38,2 55 G9 cZip 1.2 Man(EG2MTzAcNPh-SGa1)4 45,1 51 Gll cZip 1.6 Man(EG3MTzAcNPh-SGa1)4 63,9 49 G23 cZip 1.10 Man(EG3MTzproNCONapht-OGal)4 68,0 48 G19 cZip 1.10 Man(EG3MTzproNCOBisphe-OGal)4 68,9 46 G20 cZip 1.4 Man(PSEG3MTzproNCOBispheOGal)4 81,6 43 G1 cZip 1.6 Man(PSEG2MTzproNCOBispheOGal)4 103,1 39 G18 cZip 1.1 Man(EG2MTz AcNPh-Gal)4 91,6 36 G24 cZip 1.4 Man(PSEG3MTzproNCONaphtOGal)4 129,4 31 G3 cZip 1.4 Man(EG3MTz AcNPh-Gal)4 122,7 28 G22 cZip 1.6 Man(PSEG2MTzproNCONaphtOGal)4 160,2 20 G17 cZip 1.3 Man(EG2MTzproNCOBisphe-OGal)4 160,3 20 G21 cZip 1.3 Man(EG2MTzproNCONapht-OGal)4 178,3 14 Table 1: Valeurs des CI50 des glycoclusters Les glyclomimes G25-G48 ont été analysés par le microsystème afin d'évaluer leur affinité pour PA-IL.

Des valeurs de Kd attendues sont de 1 à 50 nM, de préférence de 50 à 100 nM pour les composés G25-G30 et de 1 à 50 nM, de préférence 1 à 100 nM pour les composés G31-G48.

Conclusion: Les deux techniques d'évaluation des affinités donnent des résultats concordants.

Les glycomimes par ordre décroissant d'affinité pour PA-IL sont ceux présentant des aromatiques 0- naphthyl (G21-G24), 0-biphényl (G17-G20) et phosphodiester 0- phényl (G1 et G3) avec de valeurs de Kd de 14 à 48 nM, suivi par les glycomimes Sphényl (G9-G12) et phosphorothioate EG2 0-phényl (G2) avec des valeurs de Kd de 49 à 70 nM puis les S-benzyl (G13-G16) et phosphorothioate EG3 0-phényl (G4) avec des valeurs de Kd de 71 à 85 nM et enfin les 0-benzyl (G5-G8) avec des valeurs de Kd de 85 à 170 nM.

Claims (2)

1. REVENDICATIONS1. Un glycomimétique répondant à la formule (I): Li L2 (I) Où o n est un entier choisi parmi 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o Gal représente un radical choisi parmi: galactopyranosyl, 1- thiogalactopyranosyl, 1-methylenegalactopyranosyl, 1-N-acétyl-galactopyranosyl: HO OH HO OH HO OH o OH HO OH 0 HO OH HO HO HO CH2 OH OH o K représente une molécule de formule (KI) ou (KIT) comprenant entre 3 et 7 groupes phosphate, thiophosphate, phosphoramidate (Pho) choisie parmi: X -dm ç3o-ii-dm 3c1-P-0Ç3L1 CDH Li o H 0 Dans laquelle X représente 0 ou S, Un ou deux atomes d'oxygène du groupe phosphate étant lié par une liaison covalente à un bras de liaison Li, El les groupes phosphate, thiophosphate, ou phosphoramidate (Pho) étant soit tous liés à une même centre K 'tel que représenté dans la formule (KI) ici-dessous:35 33 (KI) avec soit K 'une molécule comprenant de 4 à 24 atomes de carbone, de 0 à 12 atomes d'oxygène, et le nombre correspondant d'atomes d'hydrogène, un atome d'oxygène de Pho étant lié par une liaison covalente à K', x = 1 ou 2 ou El les groupes phosphate, thiophosphate, ou phosphoramidate (Pho) forment une chaîne telle que représentée dans la formule (KIT) ci-dessous: Li (KII) dans lequel K "représente une molécule comprenant de 4 à 12 atomes de carbone, de 0 à 6 atomes d'oxygène, de 0 à 6 atomes d'azote, et le nombre correspondant d'atomes d'hydrogène, E représente un groupe terminal comprenant de 0 à 12 atomes de carbone, de 0 à 6 atomes d'oxygène, de 0 à 6 atomes d'azote, et le nombre correspondant d'atomes d'hydrogène, m représente un nombre entier choisi parmi 2, 3, 4, 5, deux atomes d'oxygène de Pho étant lié par une liaison covalente à des groupes K "ou de E, o L1 représente un bras de liaison choisi parmi: - Un alkyle di radical linéaire, ramifié ou cyclique en C1-C18, comprenant éventuellement un ou plusieurs ponts éther-O-, - Un poly (éthylèneglycol) di radical comprenant 2 à 6 unités d'éthylène glycol, - Un poly(propyleneglycol) di radical comprenant 2 à 6 unités de propylène glycol, o T représente un groupe de liaison choisi parmi: - un triazole di-radical _ Sr^i,NN - un pont thio -S- o L2 représente un bras de liaison répondant à la formule L21- Ar-L22- représentés ici-dessous: L21 L22Où L21 représente un alkyle di radical linéaire, ramifié ou cyclique en C1-C12, éventuellement comportant un ou plusieurs groupes choisis parmi: un amide-CO-NH-, un éther -0-, un groupe thio-S-, une amine -NH-, Ar représente un aromatique di radical en C6-C18 éventuellement, incluant un à 6 hétéroatomes, L22 représente une liaison covalente ou lorsque Gal représente un radical choisi parmi : galactopyranosyl, 1- thiogalactopyranosyl, L22 peut être un radical -CH2-.
2. 2. Un glycomimétique selon la revendication lchoisi parmi les composes: Man(PSEG2MTzAcNPhe-CH2-Gal)4 (G6) Man(PSEG3MTzAcNPhe-CH2-Gal) 4 (G8) Man(EG2MTzAcNPhe-CH2-Gal) 4 (G5) Man(EG3MTzAcNPhe-CH2-Gal) 4 (G7) Man(EG2MTzAcNPhe-CH2-SGa1) 4 (G13) Man(EG3MTzAcNPhe-CH2-SGa1) 4 (G15) Man(PSEG3MTzAcNPh-Gal) 4 (G4) Man(PSEG3MTzAcNPhe-CH2-SGa1) 4 (G16) Man(PSEG2MTzAcNPhe-CH2-SGa1) 4 (G14) Man(PSEG3MTzAcNPh-SGa1) 4 (G12) Man(PSEG2MTzAcNPh-Gal) 4 (G2) Man(PSEG2MTzAcNPh-SGa1) 4 (G10) Man(EG2MTzAcNPh-SGa1) 4 (G9) Man(EG3MTzAcNPh-SGa1)4 (G11) Man(EG3MTzproNCONapht-OGal) 4 (G23) Man(EG3MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G19) Man(PSEG3MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G20) Man(PSEG2MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G1) Man(EG2MTz AcNPh-Gal) 4 (G18) Man(PSEG3MTzproNCONapht-OGal) 4 (G24) Man(EG3MTz AcNPh-Gal) 4 (G3) Man(PSEG2MTzproNCONapht-OGal) 4 (G22) Man(EG2MTzproNCOBisphe-OGal) 4 (G17) Man(EG2MTzproNCONapht-OGal) 4 (G21)(DMCH-POProTzAcNPhe-OGal) 4 (G25) (DMCH-PSProTzAcNPhe-OGal) 4 (G26) (DMCH-PODMCHMTzAcNPhe-OGal) 4 (G27) (DMCH-PSDMCHMTzAcNPhe-OGal) 4 (G28) (DMCH-POProTzAcNPhe-SGal) 4 (G29) (DMCH-PSProTzAcNPhe-SGal) 4 (G30) (DMCH-PODMCHMTzAcNPhe-SGal) 4 (G31) (DMCH-PSDMCHMTzAcNPhe-SGal) 4 (G32) (DMCH-POProTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G33) (DMCH-PSProTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G34) (DMCH-PODMCHMTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G35) (DMCH-PSDMCHMTzProNCOBisphe-OGal) 4 (G36) (DMCH-POProTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G37) (DMCH-PSProTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G38) (DMCH-PODMCHMTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G39) (DMCH-PSDMCHMTzProNCOBisphe-SGal) 4 (G40) (DMCH-POProTzProNCONapht-OGal) 4 (G41) (DMCH-PSProTzProNCONapht-OGal) 4 (G42) (DMCH-PODMCHMTzProNCONapht-OGal) 4 (G43) (DMCH-PSDMCHMTzProNCONapht-OGal) 4 (G44) (DMCH-POProTzProNCONapht-SGal) 4 (G45) (DMCH-PSProTzProNCONapht-SGal) 4 (G46) (DMCH-PODMCHMTzProNCONapht-SGal) 4 (G47) (DMCH-PSDMCHMTzProNCONapht-SGal) 4 (G48) Dans lesquelles DMCH représente 1,4-diméthylcyclohexyle, Man représente le mannose, Glc représente glucose; Pro représente le 1,3-n-propyle, Hex représente le 1,6 -n-hexyle, THME représente le tris-(hydroxyméthyl) éthane; Tz représente le triazole L1 L2i\J r\j%N PN représente un groupe phosphoramidate PO représente un groupe phosphate PS représente un groupe phosphorothioate EG2 représente un groupe diéthylène glycol, EG3 représente un groupe triéthylèneglycol36 EG4 représente un groupe tétraéthylèneglycol AcNPhe représente un groupe acétamidophényle: Gal C 2 Tz o M représente un groupe méthylène, -0-Gal représente un groupe galactopyranosyl, S-Gal représente un groupe 1-thiogalactopyranosyl -CH2-0-Gal représente un groupe 1-methylenegalactopyranosyl 10 -CH2-S-Gal représente un groupe 1-methylenethiogalactopyranosyl -NAc-Gal représente un groupe 1-N-acetylgalactopyranosyl -NCO représente un groupe amide -Napht représente un group naphthyl -Biphe représente un groupe 1-4-biphényl 15