FR3007654A1 - Composition de solute de rehydratation orale contenant des probiotiques - Google Patents

Abstract

La présente invention porte sur une composition de soluté de réhydratation orale comprenant une souche de Bacillus subtilis ou une bactérie obtenue par culture d'une souche Bacillus subtilis, ladite composition pouvant se présenter sous la forme d'un comprimé.

Description

COMPOSITION DE SOLUTE DE REHYDRATATION ORALE CONTENANT DES PROBIOTIQUES Domaine de l'Invention La présente invention concerne des compositions de soluté de réhydratation, notamment sous forme de comprimés, en particulier celles contenant des souches probiotiques, utiles dans le traitement de la diarrhée. L'invention porte également sur leur procédé de préparation et sur leur utilisation. Contexte de l'Invention La diarrhée est un problème fréquent (environ deux milliards de cas chaque année dans le monde) qui se caractérise par des selles de consistance liquide ou molle, plus volumineuses et nombreuses qu'à l'habitude (plus de 3 selles par jour). Dans les cas extrêmes, plus de 20 litres de fluide peuvent être perdus par jour. La diarrhée n'est pas une maladie, mais un symptôme. Sa cause la plus fréquente est l'ingestion d'eau ou d'aliments contaminés ; elle dure alors un ou deux jours sans nécessiter de traitement. Mais la diarrhée elle-même peut provoquer une déshydratation qui peut être mortelle, surtout chez le nourrisson où une perte de poids supérieure à 10% est une urgence hospitalière. D'après l'Organisation Mondiale de la Santé, les diarrhées sont la seconde cause de mortalité infantile dans les pays du tiers monde, et sont responsables de 18% des morts d'enfants de moins de 5 ans (Bryce et al., Lancet, 2005, 365 : 1147-1152). La déshydratation provoquée par la diarrhée intervient quand les pertes de fluide ne sont pas compensées. En situation normale, c'est au niveau du côlon que les selles sont asséchées. Les phénomènes de réabsorption de l'eau contenue dans les matières ingérées se produisent au niveau des cellules coliques par un phénomène de transport actif de sels et, par osmose, d'eau. Au niveau des cryptes des invaginations de l'épithélium colique, une sécrétion d'eau allant du sang vers le milieu extérieur a lieu. Ces deux phénomènes se compensent chez la personne en bonne santé et permettent de maintenir une hydratation convenable des selles, ce qui favorise le transit intestinal et améliore les conditions de circulation des molécules. L'OMS recommande l'utilisation de soluté de réhydratation orale (SRO) pour palier les problèmes de déshydratation liés aux épisodes de diarrhée. En effet, selon l'OMS, l'utilisation des SRO est le moyen le plus simple, le plus efficace et le moins cher pour maintenir les enfants en vie au cours d'épisodes de diarrhée sévères. La solution de SRO, qui contient du glucose et des sels de sodium et de potassium, est absorbée par l'intestin grêle remplaçant ainsi l'eau et les électrolytes perdus. Les recommandations de l'OMS ont évolué au cours du temps. La formulation actuellement préconisée contient moins de glucose et de sodium (245 mOsm/l contre 311 mOsm/l précédemment). La plus faible concentration de la nouvelle formule permet une absorption plus rapide des liquides, ce qui réduit la nécessité du recours aux perfusions et facilite le traitement des enfants souffrant de diarrhée aiguë non cholérique sans hospitalisation.

Un médicament classique pour le traitement de la diarrhée est par exemple le lopéramide, qui agit à la fois en stimulant l'absorption d'eau et d'électrolytes et en ralentissant la durée du transit. Toutefois, le ralentissement de la durée du transit peut être problématique lors d'infections sévères du genre Salmonella, Shigella ou Clostridium difficile, puisque la durée de séjour dans l'intestin de la bactérie pathogène est prolongée.

Les probiotiques constituent une alternative intéressante dans la prévention et/ou le traitement de la diarrhée. Les probiotiques les plus utilisés pour cette indication sont les bactéries lactiques. Les probiotiques sont généralement décrits comme ayant une action sur le système immunitaire et sur la composition de la flore intestinale. La Société Demanderesse a mis au point une méthode de sélection de souches efficaces dans le traitement de la diarrhée, comme décrit dans la demande FR 12 61916 déposée le 12 décembre 2012. Cependant, si certaines bactéries probiotiques sont utiles dans le traitement de la diarrhée, elles sont très sensibles et généralement peu résistantes aux stress chimique et mécanique. Les épisodes diarrhéiques s'accompagnent généralement de vomissements, ce qui complique encore l'observance d'un traitement médicamenteux de la diarrhée. Afin d'améliorer cette observance, les présents inventeurs ont eu l'idée d'associer à un soluté de réhydratation une bactérie probiotique utile dans le traitement de la diarrhée.

Cependant, l'environnement chimique des solutés de réhydratation orale, n'est pas favorable à la stabilité des probiotiques, notamment de par la présence de sels de potassium et de sodium, rendant difficile une telle association.

Après de longues recherches, les présents inventeurs ont trouvé qu'une souche probiotique particulière de Bacillus subtilis restait efficace même après avoir été mise en présence de sels de sodium et potassium et qu'elle présentait également une bonne résistance au stress mécanique. C'est sur la base de cette découverte que les présents inventeurs sont arrivés à mettre au point les compositions de solutés de réhydratation orale, notamment sous forme de comprimés, objet de la présente invention.

Résumé de l'Invention D'une façon générale, la présente invention repose sur la mise en évidence qu'une bactérie probiotique particulière pouvait être introduite dans un soluté de réhydratation orale, notamment sous forme de comprimé, tout en restant efficace. Plus spécifiquement, selon un premier aspect, la présente invention concerne une composition de soluté de réhydratation orale comprenant une bactérie probiotique 10 Bacillus subtilis. Selon un autre aspect, la présente invention concerne ladite composition sous la forme d'un comprimé. L'invention concerne également un procédé de préparation de cette composition. 15 Enfin l'invention concerne également l'utilisation de cette composition de soluté de réhydratation orale pour une utilisation dans le traitement de la diarrhée. Une description plus détaillée de certains modes de réalisation de l'invention est donnée ci-dessous. 20 Description Détaillée de l'Invention Selon un premier aspect, la présente invention porte sur une composition de soluté de réhydratation orale comprenant une souche probiotique Bacillus subtilis. 25 La présente invention porte également sur une composition de soluté de réhydratation orale comprenant une bactérie obtenue par culture d'une souche probiotique de Bacillus subtilis. Dans certains modes de réalisation de la composition 30 selon l'invention, la souche probiotique est une souche de Bacillus subtilis, de préférence la souche de Bacillus subtilis CU' déposée à la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15) le 25 octobre 2001 sous le numéro I-2745.

Lorsque la composition selon l'invention comprend une bactérie obtenue par culture d'une souche de Bacillus subtilis, celle-ci peut être obtenue par culture de la souche de Bacillus subtilis CU' déposée à la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15) le 25 octobre 2001 sous le numéro I-2745. En particulier, la composition selon l'invention comprend une quantité efficace d'une bactérie obtenue par 10 culture de la souche de Bacillus subtilis CU' déposée à la CNCM le 25 octobre 2001 sous le numéro I-2745. La quantité efficace de Bacillus subtilis, qui peut être administrée en une ou plusieurs doses, peut être déterminée par le médecin. La quantité exacte à administrer 15 peut varier d'un patient à un autre, en fonction de l'âge, du poids, de la condition générale du patient, de la nature et de la gravité de la diarrhée, etc. Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend 1.1012 à 1.108 20 spores/g, de préférence de 1,5.1011 à 1.109 spores/g de B. subtilis. Par "composition de soluté de réhydratation orale", on entend une composition sèche, qui par dissolution dans de l'eau permet d'obtenir une solution de réhydratation orale. 25 La composition selon l'invention comprend les ingrédients nécessaires à un soluté de réhydratation orale, à savoir une source de glucides et des sels de potassium et de sodium. La composition de l'invention comprend donc une souche 30 probiotique Bacillus subtilis ou une bactérie obtenue par culture d'une souche probiotique de Bacillus subtilis, une source de glucides et des sels de potassium et de sodium. Par "source de glucides" on entend un ingrédient apportant des glucides qui peut être choisi dans le groupe comprenant le glucose, le sucre, le saccharose éventuellement en mélange avec dextrine-maltose, et leurs mélanges. De préférence on utilise le glucose. Le sel de potassium est choisi dans le groupe 5 comprenant le benzoate de potassium, gluconate de potassium, chlorure de potassium et leurs mélanges. Le sel de sodium est choisi dans le groupe comprenant le chlorure de sodium, gluconate de sodium, benzoate de sodium et leurs mélanges. 10 Les teneurs en source de glucides et en sels de potassium et de sodium doivent être choisies pour permettre de lutter contre la déshydratation. Ces teneurs sont de préférence celles recommandées par l'OMS pour les solutés de réhydratation. 15 En particulier, pour une composition permettant la préparation d'un soluté de réhydratation orale, les quantités respectives préconisées par l'OMS sont d'environ 111 mmol/L de glucose, 90 mmol/L de sodium et 20 mmol/L de potassium. 20 La quantité de sels est telle que, après dissolution de la composition selon l'invention dans 200 mL d'eau, l'osmolarité est de 220 et 350, de préférence de 240 à 340 et plus préférentiellement encore de 260 à 320 mOsm. La composition selon l'invention se présente sous la 25 forme d'une poudre. Avantageusement cette poudre est présentée dans des sachets unitaires qui sont destinés à être dissous dans l'eau avant absorption. De façon surprenante, il s'est avéré que la souche Bacillus subtilis présentait une bonne résistance au stress 30 mécanique. En particulier, elle reste efficace même après mélange avec les ingrédients d'une composition de soluté de réhydratation suivi d'une compression. Ainsi, selon un autre mode de réalisation de l'invention, la composition est sous la forme d'un comprimé.

Le comprimé présente un temps de désintégration dans 200 mL d'eau de moins de 4 minutes, de préférence de moins de 3 minutes, et plus préférentiellement encore de moins de 2 minutes.

La dureté du comprimé est suffisante pour qu'il puisse être manipulé sans se casser. La dureté est supérieure à 30 N, de préférence de 40 à 200 N et plus préférentiellement encore de 60 à 100 N. Le comprimé peut présenter une taille assez importante car il n'est pas destiné à être mis directement dans la bouche, mais à être préalablement dissous dans de l'eau potable. Ainsi, des comprimés de plusieurs grammes et de quelques centimètres de diamètre peuvent être envisagés. A titre d'exemple, on peut citer un comprimé de 5 grammes environ, de 2,3 cm de diamètre et de 8,5 mm d'épaisseur. Outre les ingrédients nécessaires à un soluté de réhydratation, la composition selon l'invention peut comprendre des excipients acceptables pour une administration orale. En particulier, elle peut comprendre des édulcorants, des agents de granulation, des agents favorisant l'écoulement, des agents effervescents, des colorants, des arômes, et leurs mélanges. Plus particulièrement, lorsque la composition est sous forme de comprimé, elle peut en outre comprendre des agents lubrifiants et des agents de désintégration. A titre d'édulcorant on peut citer la saccharine, le sucralose, l'acésulfame, notamment l'acésulfame potassique, le Rébaudioside A (stévia) et leurs mélanges. A titre d'agents de granulation, on peut citer le 30 polyéthylène glycol, notamment le PEG 4000, la cellulose microcristalline et leurs mélanges. A titre d'agents effervescents, on peut citer les couples acido-basiques tels que l'acide citrique et le bicarbonate de sodium. Les agents effervescents permettent d'améliorer le goût de la solution de réhydratation et lorsque la composition est sous forme de comprimé, ils permettent également d'améliorer leur désintégration. A titre de colorant on peut citer les colorants 5 classiquement utilisés en pharmacie, par exemple le jaune de quinoléine, le colorant de type azo, etc. A titre d'arôme, on peut citer les arômes classiquement utilisés pour les compositions pharmaceutiques orales, à savoir citron, banane, orange, tutti frutti, caramel, mais 10 aussi des arômes moins courants tels que ananas, mangue, framboise-cassis, etc. A titre d'agent désintégrant on peut citer l'amidon prégélatinisé, la croscarmellose, la crospovidone, et leurs mélanges. De préférence l'agent désintégrant est la 15 crospovidone. A titre d'agent lubrifiant on peut citer le stéarate de magnésium, le stéarate de calcium, le stéarate de zinc, l'acide stéarique, la glycine, le stérylfumarate de sodium, le béhénate de glycéryle et leurs mélanges. 20 Les différents excipients peuvent être mélangés ensemble sous forme de poudre ou bien peuvent être granulés avant mélange. La granulation permet d'améliorer l'écoulement de la poudre lors de la dilution de la composition dans l'eau avant absorption. Elle permet 25 également d'améliorer la dissolution de la composition dans l'eau. Elle peut également permettre la réalisation de comprimés ne comprenant pas d'agent lubrifiant. La présente invention porte également sur un procédé de préparation des compositions selon l'invention. 30 Le procédé selon l'invention comprend les étapes suivantes: a) la préparation d'une poudre de Bacillus subtilis, éventuellement granulée; b) le mélange à sec des ingrédients de soluté de réhydratation; c) le mélange à sec de la poudre de Bacillus subtilis éventuellement granulée avec le mélange obtenu à l'étape b) et les différents excipients; d) éventuellement la granulation de la poudre obtenue à l'étape c); e) la répartition en doses unitaires. Dans le cas où la composition est sous forme de comprimés, le procédé comprend en outre une étape de compression du mélange issu de l'étape e). La compression est réalisée avec une force de compression est de 2000 à 3000DaN, de préférence de 2500 à 3000DaN. Cette force de compression sera bien entendu adaptée en 15 fonction de la taille souhaitée des comprimés et de leur dureté. Afin de faciliter le démoulage des comprimés, un agent lubrifiant peut être ajouté dans le mélange d'excipients du comprimé ou bien peut être pulvérisé à la surface des 20 poinçons de compression. La présente invention concerne également une méthode de traitement de la diarrhée chez un patient comprenant l'administration au patient d'une quantité efficace d'une composition selon l'invention, c'est-à-dire d'une 25 composition telle que décrite précédemment, qui a été préalablement dissoute dans de l'eau potable. Une méthode de traitement de la diarrhée selon l'invention comprend l'administration, au patient, d'une quantité efficace d'une bactérie obtenue par culture d'une 30 souche de Bacillus Subtilis. D'une manière générale, toute diarrhée peut être traitée en utilisant la composition selon l'invention, y compris les diarrhées aigües et les diarrhées chroniques. On entend par « diarrhée aigüe », une diarrhée dont les symptômes durent moins de deux semaines, et par « diarrhée chronique », une diarrhée dont les symptômes durent au moins un mois. Les diarrhées aigües incluent, par exemple, les gastro5 entérites virales, les gastro-entérites bactériennes, et les toxi-infections alimentaires (ex : Salmonellose, Scombrotoxisme, Botulisme). Les diarrhées chroniques incluent, par exemple, le syndrome de malabsorption, les gastroentéropathies (maladie 10 coeliaque, maladie de Whipple, maladie de Crohn, la diarrhée motrice (c'est-à-dire une diarrhée due à une accélération du transit intestinal), la diarrhée sécrétoire (c'est-à-dire une diarrhée due à une accélération de la sécrétion hydro-électrolytique au niveau de l'intestin grêle 15 et/ou du côlon), la diarrhée osmotique(c'est-à-dire une diarrhée qui découle de la présence, dans le tractus gastro-intestinal, de solutés qui sont mal absorbés et produisent un effet osmotique). D'autres diarrhées qui peuvent être traitées en 20 utilisant une souche probiotique selon l'invention incluent, les diarrhées dues à l'anxiété ou aux émotions intenses, les diarrhées dues aux intolérances alimentaires (ex : lactose dans le lait de vache, sorbitol, gluten, etc...), les diarrhées dues à certains traitements comme la 25 magnésothérapie, la radiothérapie ou la chimiothérapie ou à certaines chirurgies comme la gastrectomie ou la résection iléale, les diarrhées dues à une surcharge ou une irritation de l'estomac, des intestins, du côlon, etc..., les diarrhées dues à une trop grande consommation de stupéfiants tels que 30 la cocaïne, l'héroïne, la marijuana ou d'autres drogues, les diarrhées dues à certains médicaments comme les antibiotiques. D'autres exemples de diarrhées qui peuvent être traitées en utilisant une souche probiotique selon l'invention incluent, les diarrhées qui accompagnent les crises de foie ou indigestions, les diarrhées qui résultent de la surconsommation de certains aliments laxatifs, et les diarrhées du sportif.

Dans certains modes de réalisation, la diarrhée traitée en utilisant la composition selon l'invention n'est pas une diarrhée induite par administration d'un antibiotique. Les compositions selon la présente invention peuvent, en outre, contenir au moins un principe actif pharmaceutique 10 supplémentaire (c'est-à-dire, en plus de la bactérie Bacillus subtills). On entend par « principe actif pharmaceutique », tout composé ou substance dont l'administration a un effet thérapeutique ou un effet bénéfique sur la santé ou condition générale d'un patient ou 15 d'un sujet auquel il est administré. Ainsi, un principe actif pharmaceutique peut être actif contre la diarrhée que l'on veut soigner par administration de la composition selon l'invention ; peut être actif contre une condition ou un symptôme associé à la diarrhée (par exemple, une fièvre, un 20 vomissement ou des crampes au ventre) ; ou peut accroître la disponibilité et/ou l'activité du ou des principes actifs de la composition pharmaceutique. Des exemples de principes actifs pharmaceutiques qui peuvent être présents dans une composition de la présente 25 invention incluent, sans limitation, des anti- inflammatoires, des antibiotiques, des agents antipyrétiques, des agents anti-émétiques, des agents antihistaminiques, des vitamines, des agents antispasmodiques, etc. 30 La composition selon l'invention peut également être administrée avec une souche probiotique, autre que Bacillus subtills. Par « souche probiotique », on entend désigner ici une souche d'un microorganisme vivant qui exerce un effet bénéfique sur la santé de l'hôte. L'hôte est généralement un être humain, mais il est concevable que l'hôte puisse être un autre mammifère, en particulier un mammifère domestique, comme par exemple, les chiens, les chats, les ruminants, en particulier moutons, chèvres, veaux, vaches, bovidés, camélidés, cervidés, les équidés, suidés en particulier porcs et porcelets, les léporidés, les muridés et les cavidés. Dans certains modes de réalisation, la souche probiotique est une souche de levure. Parmi les levures probiotiques, on peut citer, par exemple, les levures du genre Saccharomyces, en particulier les espèces Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, les levures du genre Kluyveromyces, en particulier les espèces Kluyeromyces marxianus. Dans d'autres modes de réalisation, la souche probiotique est une souche de bactérie de préférence une souche de bactérie reconnue comme sans danger pour l'homme et/ou l'animal. Parmi les bactéries probiotiques, on peut citer, par exemple, les bactéries du genre Bifidobacterium, en particulier les espèces Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum et Bifidobacterium breve ; les bactéries du genre Lactobacillus, en particulier les espèces Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaris, Lactobacillus brevis, Lactobacillus casei, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus 30 et Lactobacillus salivarius ; les bactéries du genre Weisella, en particulier les espèces Weisella ciberia, Weisella kinchii et Weisella thailandensis ; ou les bactéries du genre Bacillus, en particulier les espèces Bacillus coagulans, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus cereus et Bacillus clausii; les bactéries du genre Lactococcus, en particulier les espèces Lactococcus lactis; les bactéries du genre Enterococcus, en particulier les espèces Enterococcus faecium et Enterococcus faecalis; les bactéries du genre Streptococcus, en particulier les espèces Streptococcus thermophilus; les bactéries du genre Escherichia, en particulier les espèces Escherichia coll. Les méthodes pour la culture de souches de probiotiques sont connues dans l'art, et l'homme du métier sait optimiser les conditions de culture pour chaque souche en fonction de sa nature. De même, l'homme du métier sait déterminer les quantités optimales de bactéries pour l'administration à un animal modèle ou pour l'incubation de cellules.

Selon l' OMS et l' UNICEF, la thérapie par réhydratation orale devrait être associée à la fourniture de suppléments de zinc (20 mg de zinc par jour pendant 10 à 14 jours). Ainsi, la composition selon l'invention peut également comprendre du zinc.

Selon un autre aspect, la présente invention porte sur un kit comprenant: - une composition de soluté de réhydratation orale telle que définie ci-dessus; un second ingrédient actif choisi dans le groupe comprenant les anti-inflammatoires, les antibiotiques, les agents antipyrétiques, les agents anti-émétiques, les agents antihistaminiques, les vitamines, les agents antispasmodiques, une souche probiotique autre que Bacillus subtilis, du zinc et leurs mélanges.

Selon un dernier aspect, la présente invention concerne une composition de soluté de réhydratation telle que décrite précédemment, ou un kit tel que décrit ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement de la diarrhée, la composition comprenant au moins une souche de Bacillus subtilis selon l'invention, ou une bactérie obtenue par culture d'une souche de Bacillus subtilis. La composition pour son utilisation dans le traitement de la diarrhée peut présenter chacune des caractéristiques 5 décrites précédemment. Les diarrhées qui peuvent être traitées selon l'invention incluent les diarrhées aigües et les diarrhées chroniques telles que mentionnées ci-dessus en référence à la méthode de traitement. 10 A moins qu'ils ne soient définis d'une autre manière, tous les termes techniques et scientifiques utilisés dans la description ont la même signification que celle couramment comprise par un spécialiste ordinaire du domaine auquel appartient cette invention. De même, toutes les 15 publications, demandes de brevet, tous les brevets et toutes autres références mentionnés ici sont incorporés par référence. EXEMPLES Les exemples suivants décrivent certains modes de 20 réalisation de la présente invention. Cependant, il est entendu que les exemples ne sont présentés qu'à titre illustratif seulement et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. 25 Exemple 1 : Préparation d'une composition de soluté de réhydratation sous forme de poudre Dans un mélangeur à sec, on a introduit du glucose, du chlorure de sodium, du chlorure de potassium et du benzoate 30 de sodium dans les quantités centésimales données dans le tableau 1 ci-dessous. On a ensuite introduit dans le mélangeur la poudre de Bacillus subtilis, de la saccharine sodique, de l'acide citrique granulé fin, du bicarbonate de sodium, deux colorants et un arôme orange. Une fois le mélange réalisé, il a été introduit dans un granulateur avec du PEG 4000. Une granulation a été réalisée jusqu'à obtention d'une taille moyenne de particules granulées de l'ordre de 710 pm. la courbe de distribution des tailles est donnée en figure 1. Les quantités respectives des différents constituants sont données dans le tableau 1 ci-dessous. Tableau 1: Composition % en poids Quantité (mg/dose unitaire) Poudre Bacillus subtilis 0,1639 10,00 PEG 4000 1,9672 120,00 Glucose 58,9344 3595,00 Chlorure de sodium 1,9672 120,00 Chlorure de potassium 4,9180 300,00 Benzoate de sodium 1,9672 120,00 Saccharine sodique 0,1639 10,00 Acide citrique granulé fin 12,6230 770,00 Bicarbonate de sodium 16,3934 1000,00 Sunset yellow 0,0820 5,00 Spectracol Quinoléine Yellow 0,0328 2,00 Arome Orange 0,7869 48,00 TOTAL 100 6100,00 Une numération de la poudre de B.subtilis dans la composition a été réalisée afin de déterminer si la bactérie résistait à l'environnement chimique auquel elle était soumise. La quantité initiale de B.subtilis introduite dans le mélange était de 10 mg soit 1,6.108 spores/g. La quantité dans la composition de l'exemple 1 est de 3,5.108 spores/g. Il n'y a donc pas eu de mortalité des cellules due à l'environnement chimique.

Trois doses unitaires de cette poudre (échantillons 1 à 3) ont été dissoutes chacune dans 200 mL d'eau du robinet et on a mesuré l'osmolarité et le pH.

Les résultats sont donnés dans le tableau 2 ci-dessous: Tableau 2: N°échantillon Osmolarité (mOsm) pH Echantillon 1 221 234 6.20 221 Echantillon 2 228 234 6.00 227 Echantillon 3 226 235 6.09 220 Moyenne 227 6.10 Exemple 2 : Préparation d'une composition de soluté de réhydratation sous forme de comprimé On a réalisé deux compositions de soluté de réhydratation par mélange des poudres, sans étape de granulation. La composition est donnée dans le tableau 3 ci-dessous, 15 la différence entre les deux compositions étaient la nature de l'arôme. Dans la composition A, l'arôme était Tutti Frutti et dans la composition B l'arôme était citron.

Tableau 3: Composition % en poids Quantité (mg/dose unitaire) Poudre Bacillus subtilis 0,1667 10,00 PEG 4000 1,9672 120,00 Glucose 60,0000 600,00 Chlorure de sodium 1,9672 120,00 Chlorure de potassium 4,9180 300,00 Benzoate de sodium 1,9672 120,00 Sucralose 0,1000 6,00 Acésulfame potassique 0,2000 12,00 Acide citrique granulé fin 13,0000 780,00 Bicarbonate de sodium 16,6667 1000,00 Sunset yellow 0,0833 5,00 Spectracol Quinoléine Yellow 0,0333 2,00 Arome 0,75 4,5 TOTAL 100 6100,00 Le mélange obtenu a été introduit dans les poinçons d'une machine à comprimer avec un poinçon de 23mm de 5 diamètre. Trois comprimés (échantillons 1 à 3) pour chacune des Compositions A et B, ont été dissous chacun dans 200 mL d'eau du robinet et on a mesuré l'osmolarité et le pH.

Les résultats sont donnés dans le tableau 4 ci-dessous: Tableau 4: Composition A: N°échantillon Osmolarité (mOsm) pH Echantillon 1 241 247 5.78 258 Echantillon 2 274 276 6.33 276 Echantillon 3 261 264 6.29 266 Moyenne 263 6.13 Composition B: N°échantillon Osmolarité (mOsm) pH Echantillon 1 253 250 6.39 251 Echantillon 2 226 228 6.58 227 Echantillon 3 322 371 6.28 377 Moyenne 278 6.42 Des tests de désintégration ont été réalisés. Les 10 résultats sont présentés dans le tableau 5 ci-dessous. 15 Tableau 5: Composition A Test Nb Unité Moyenne Min. Max. Masse moyenne (g) 10 3,04 Uniformité de masse (g) 10 3,04 2,86 3,14 Dureté N 1 62,00 na na Epaisseur (mm) 10 5,20 5,56 Diamètre (mm) 1 23,04 na na Désagrégation (en s dans 200mL 1 ND - 52s d'eau) Composition B Test Nb Unité Moyenne Min. Max. Masse moyenne (g) 10 2,90 Uniformité de masse (g) 10 2,90 2,76 3,00 Dureté N 1 25,00 na na Epaisseur (mm) 10 5,14 5,35 Diamètre (mm) 1 23,01 na na Désagrégation (en s dans 200mL 1 ND - 43s d'eau) Le temps de désintégration est satisfaisant. Chaque comprimé a été introduit dans 200 mL d'eau. Une numération des spores a été réalisée, comme dans l'exemple 10 1, dans la suspension de 200 mL. On a obtenu 2,8.106 spores/mL de solution pour la composition A et 4,9.106 spores/mL de solution pour la composition B. La quantité de spores introduite dans les comprimés 15 était de 1,2.1011 spores/g, le ratio poudre de B.subtilis/autres constituants était de 10 mg/6g, et le poids d'un comprimé de 3 g. La quantité initiale de spores était donc de 6,0.108 spores par comprimé, soit 3.106 spores /mL. 20 Le taux de survie était donc de 93% pour la composition A et supérieur à 100% pour la composition B. Ces résultats montrent que la souche B.subtilis n'est pas affectée par la mise sous forme de comprimé.

Exemple 3 : Préparation d'une composition de soluté de réhydratation On a réalisé une composition de soluté de réhydratation par mélange des poudres, sans étape de granulation.

La composition est donnée dans le tableau 6 ci-dessous. Tableau 6: Composition % en poids Quantité (mg/dose unitaire) Poudre Bacillus subtilis 0,15 7,50 Glucose anhydre 50,93 2530,00 Chlorure de sodium 10,67 530,00 Chlorure de potassium 6,04 300,00 Benzoate de sodium 2,42 120,00 Rebaudioside 0,42 21,00 Acésulfame potassique 0,2000 12,00 Acide citrique anhydre 17,01 845,00 Bicarbonate de sodium 9,46 470,00 Sunset yellow 0,10 5,00 Spectracol Quinoléine Yellow 0,04 2,00 Arôme masqueur de goût salé 1,47 73,00 Arôme orange 1,29 86,50 TOTAL 98,71 5000,00 L'osmolarité dans 200 mL d'eau est de 273 mOsm.

Le taux de survie obtenu par numération de B.subtilis était de l'ordre de 100%. Exemple 4: Comme dans l'exemple 2, on a préparé des comprimés 15 présentant la composition suivante : Composition Quantité (%) Quantité (mg/cp) Acide citrique anhydre 16,53 826,50 Glucose anhydre 49,01 2450,50 Bicarbonate de sodium 9,48 474,00 Sucralose 0,16 8,00 Acésulfame potassique 0,24 12,00 Colorant 1 :Sunset yellow 0,10 5,00 Colorant 2 : Quinoleine 0,04 2,00 Yellow Chlorure de sodium 10,69 534,50 Chlorure de potassium 6,05 302,50 Benzoate de sodium 2,42 121,00 Crospovidone 2,50 125,00 Arôme masqueur de goût salé 1,47 73,50 Arôme orange 1,31 65,50 Total 100,00 5000,00 Les comprimés obtenus ont été caractérisés de la façon suivante: Masse moyenne (mg) 506,1 Force de compression (DaN) 2800 Dureté (N) Moyenne 65,80 Min. 60,00 Max. 70,00 Diamètre (mm) Moyenne 23,14 Min. 23,14 Max. 23,15 Test de désintégration (200mL d'eau) 2 min 44s. Le taux de survie obtenu par numération de B.subtilis était de l'ordre de 80%.

Claims (13)

1. REVENDICATIONS1. Composition de soluté de réhydratation orale comprenant une souche probiotique de Bacillus subtilis.
2. 2. Composition de soluté de réhydratation orale selon la revendication 1, caractérisée en ce que la souche de Bacillus subtilis est la souche de Bacillus subtilis CU' déposée à la CNCM le 25 octobre 2001 sous le numéro I-2745.
3. 3. Composition de soluté de réhydratation orale 10 comprenant une bactérie obtenue par culture d'une souche telle que définie à la revendication 1 ou la revendication 2.
4. 4. Composition de soluté de réhydratation orale selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, se présentant 15 sous la forme d'un comprimé.
5. 5. Composition de soluté de réhydratation orale selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant 1.1012 à 1.108 spores/g, de préférence de 1,5.10n à 1.109 spores/g de Bacillus subtilis. 20
6. 6. Composition de soluté de réhydratation orale selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, comprenant une source de glucides, des sels de potassium et de sodium.
7. 7. Composition de soluté de réhydratation orale selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, dépourvue d'agent 25 lubrifiant.
8. 8. Composition de soluté de réhydratation orale selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, comprenant des excipients de formulation choisis dans le groupe comprenant les agents effervescents, les édulcorants, les colorants, 30 les arômes, les agents lubrifiants, les agents désintégrants, et leurs mélanges.
9. 9. Composition de soluté de réhydratation selon la revendication 8, dans lequel l'édulcorant est choisi dans legroupe comprenant saccharine, sucralose, acésulfame, rebausidiose, Stevia, et leurs mélanges.
10. 10. Composition de soluté de réhydratation selon la revendication 7 ou 8, dans lequel l'agent désintégrant est choisi dans le groupe comprenant l'amidon prégélatinisé, la crospovidone, la croscarmellose, et leurs mélanges, de préférence la crospovidone.
11. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, comprenant en outre un autre principe 10 actif ou du zinc.
12. 12. Kit comprenant: - une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11; - un second ingrédient actif choisi dans le groupe 15 comprenant les anti-inflammatoires, les antibiotiques, les agents antipyrétiques, les agents anti-émétiques, les agents antihistaminiques, les vitamines, les agents antispasmodiques, une souche probiotique autre que Bacillus subtilis, du zinc et leurs mélanges. 20
13. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 ou kit selon la revendication 12, pour son utilisation dans le traitement de la diarrhée.