FR2989001A1 - Microparticules et nanoparticules constituees de polysaccharides hydrophobises et d'une alpha-cyclodextrine - Google Patents

Microparticules et nanoparticules constituees de polysaccharides hydrophobises et d'une alpha-cyclodextrine Download PDF

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Abstract

L'invention concerne des microparticules et nanoparticules constituées de polysaccharide hydrophobisé et d'une alpha-cyclodextrine, obtenues par auto-association dans un milieu aqueux, ledit polysaccharide hydrophobisé étant obtenu par greffage de chaînes alkyles provenant d'acides gras, par réaction d'acylation. Ces microparticules et nanoparticules constituent des systèmes utilisés pour l'encapsulation de substances d'intérêt, notamment dans le domaine pharmaceutique, et leur vectorisation à des fins thérapeutiques.

Description

Microparticules et nanoparticules constituées de polysaccharides hydrophobisés et d'une alpha-cyclodextrine L'invention concerne des microparticules et des nanoparticules constituées de polysaccharides hydrophobisés et d'une alpha-cyclodextrine. L'invention concerne également leur utilisation comme système d'encapsulation. Actuellement, les particules capables de contenir et de vectoriser un principe actif font l'objet de recherches actives. Ces particules doivent être capables de piéger une substance d'intérêt, de la véhiculer dans l'organisme jusqu'à la cellule ou jusqu'au tissu cible, puis de la libérer sans qu'il y ait altération de sa structure. Il est important que ces particules ne soient pas toxiques. Mais il existe un gros désavantage lié à leur préparation. En effet, celle-ci nécessite souvent, au cours d'une étape au moins, l'utilisation d'un solvant organique ou/et l'utilisation de tensioactifs, non biocompatibles, parfois dans des conditions d'acidité très importantes.
L'élimination des molécules de solvant et/ou de tensioactif est souvent longue, incomplète et ajoute un coût à la production de la particule. Les traces rémanentes, toxiques, peuvent par ailleurs contribuer à dégrader les substances actives immobilisées dans les particules. C'est pourquoi on cherche à produire ces particules en milieu aqueux préférentiellement, à partir de polymères biocompatibles et biodégradables.
Les polysaccharides sont largement utilisés en tant que polymères biocompatibles et biodégradables. Parmi eux, le chitosane est avantageux en raison de sa biocompatibilité, de sa non-toxicité et de ses propriétés muco-adhésives. Les polysaccharides greffés par des chaînes hydrophobes sont des systèmes amphiphiles capables de s'auto-associer spontanément en milieu aqueux sous forme de micelles de type coeur-couronne pouvant accueillir un principe actif. Mais leur solubilité en milieu aqueux décroît à cause de la présence des chaînes greffées, hydrophobes. L'utilisation de polysaccharides cycliques, tels que les cyclodextrines, entraîne la formation de particules constituant des systèmes d'inclusion, solubles en milieu aqueux. Ces systèmes, de taille variable, allant de la nanoparticule à l'hydrogel, sont capables de vectoriser une substance d'intérêt. Gref et al (US2005/004348A1) décrivent des particules obtenues par greffage d'un ou plusieurs (par exemple deux) polysaccharides cycliques, tel que la béta-cyclodextrine, sur un polymère biodégradable tel que la poly(c-caprolactone) et leur utilisation en tant que vecteurs de substances actives. Dans ce cas, le polysaccharide cyclique est lié de façon covalente au polymère biodégradable. Ce même brevet décrit la formation de nanoparticules par mélange d'un dextrane portant des chaînes lauryle et d'un polymère de béta-cyclodextrine, non-commercial. Bochot et al (US2006/0188464A1 ; EP1590077B1 ; International Journal of Pharmaceutics, 2007, 339, 121) décrivent, dans leur publication et leurs demandes, des billes dont la taille varie de 1 à 3 mm, obtenues en mélangeant une huile et une solution d'alpha-cyclodextrine. Ils n'utilisent pas de polysaccharide linéaire tel que le chitosane et, d'autre part, la taille des particules formées est millimétrique. L'un des buts de l'invention est de fournir des complexes d'inclusion entre un polysaccharide et une cyclodextrine.
L'un des autres buts de l'invention est de proposer des nanoparticules formées à partir des susdits complexes d'inclusion. L'un des autres buts est de fournir un procédé de préparation simple desdites particules sans utiliser obligatoirement des solvants organiques ou des tensioactifs non biocompatibles. En outre, l'invention a pour objet l'utilisation desdites particules pour encapsuler une ou plusieurs substance(s) d'intérêt. L'invention concerne un complexe d'inclusion entre ^ un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente audit polysaccharide, ^ une cyclodextrine (CD) sous forme de monomère, le polysaccharide et la cyclodextrine étant liés de façon non-covalente. Le terme "complexe d'inclusion" désigne un système constitué d'une molécule hôte capable d'accueillir une espèce chimique. Le terme « polysaccharide » désigne une macromolécule glucidique formée par l'enchaînement d'un grand nombre de sucres élémentaires. Les polysaccharides sont hydrophiles car ils portent des groupes -OH et/ou -NH2, ou des groupes dérivés de ces derniers. La nature de ces groupes permet de les différencier d'un point de vue structural et d'un point de vue propriétés physico-chimiques et biologiques. Le terme « polysaccharide » désigne ici un polysaccharide linéaire. L'expression « polysaccharide comportant des groupes hydrophobes » signifie que le polysaccharide a été "hydrophobisé" par greffage, sur les groupes -OH et/ou -NH2, de chaînes alkyles qui, par nature, sont hydrophobes en raison de leur caractère apolaire. Le « polysaccharide comportant des groupes hydrophobes » est donc un polysaccharide amphiphile. Ces polysaccharides sont capables d'auto-association pour former des micelles de type coeur-couronne en milieu aqueux.
Une « cyclodextrine » (ou cycloamylose) est un oligosaccharide cyclique de P-D-glucopyranose reliés par des liaisons a(1-4). C'est une molécule-cage d'origine naturelle qui permet d'encapsuler diverses molécules, notamment des molécules d'intérêt thérapeutique. Il en existe de différentes tailles, chacune ayant la forme d'un « abat-jour ». Elle porte des groupes hydrophiles (-OH) localisés à l'extérieur, l'ensemble délimitant une cavité relativement hydrophobe. Ce caractère amphiphile permet à la cyclodextrine d'inclure dans sa cavité des molécules hydrophobes pour former des complexes d'inclusion solubles dans l'eau. Son caractère biodégradable la prédispose à des applications importantes dans les domaines agro-alimentaires et pharmaceutiques. L'encapsulation dans les cyclodextrines permet en effet de protéger des molécules fragiles ou d'assurer leur libération lente et contrôlée. Le fait d'utiliser l'alpha-cyclodextrine au lieu d'un polymère de cyclodextrine représente un avantage évident d'un point de vue économique et réglementaire car cette cyclodextrine est disponible dans le commerce et reconnue comme étant un excipient pharmaceutique accepté par la majorité des pharmacopées.
L'expression « Le polysaccharide et la cyclodextrine étant liés de façon non-covalente » signifie que les interactions entre ces deux molécules sont de type Van der Waals et/ou de type liaisons hydrogène, et non pas des liaisons covalentes. Ces complexes d'inclusion sont ainsi exclusivement formés par des liaisons non-covalentes par simple mélange d'alpha-cyclodextrine et de polysaccharide greffé par des groupements hydrophobes. Ainsi, en utilisant le même mode opératoire et en faisant varier le type de ces interactions non-covalentes, nous pouvons former des particules de taille et de structure variées. De façon avantageuse, dans le complexe d'inclusion selon l'invention, le polysaccharide est composé d'au moins 3 unités saccharidiques, sa masse molaire étant en 25 particulier comprise de 5 kDa à 100 000 kDa, et notamment égale à 20 kDa, 145 kDa ou 250 kDa. De façon avantageuse, le rapport entre la concentration de la cyclodextrine et la concentration du polysaccharide est compris de 0,01 à 1500, en particulier compris de 4 à 15, et notamment égal à 10. 30 Ce paramètre est très important car il permet de moduler la taille des particules obtenues à partir des susdits complexes d'inclusion en modifiant le rapport de concentration entre la cyclodextrine et le polysaccharide. La taille moyenne des particules pourrait augmenter quand le rapport entre la concentration de la cyclodextrine et la concentration du polysaccharide diminue.
Si le rapport est inférieur à 0,01, on ne forme pas de particules. Si le rapport est supérieur à 20, on forme des particules. Au-delà de 1500, l'alpha-cyclodextrine n'est plus soluble dans l'eau. La solubilité du polysaccharide n'est pas un facteur limitant dans la formation des particules, car celles-ci se forment même si le polysaccharide est utilisé sous forme de suspension dans l'eau. L'invention concerne en particulier un complexe d'inclusion dans lequel le polysaccharide est choisi parmi le chitosane, le dextrane, l'acide hyaluronique, l'amylose, l'amylopectine, le pullulane, l'héparine, la chitine, les dérivés de la cellulose, l'amidon, la pectine, les alginates, les carraghénanes, le fucane, le curdlane, le xylane, l'acide polyguluronique, le xanthane, l'arabinane, l'acide polymannuronique, et leurs dérivés, et est notamment le chitosane. Ils peuvent être neutres (dextrane par exemple), ou globalement chargés positivement (chitosane par exemple) ou négativement (héparine, l'acide hyaluronique, la pectine).
Selon un autre mode de réalisation particulier, dans le complexe d'inclusion de l'invention, le degré de substitution du polysaccharide par les groupes hydrophobes est compris de 0,1 à 70 %, notamment égal à 2 %, 13 % ou 17 %. Le degré de substitution reflète le nombre de groupes hydrophobes liés à 100 unités saccharidiques de la chaîne polysaccharidique. Il est déterminé par les conditions 20 expérimentales du greffage et peut être mesuré par résonance magnétique nucléaire (RMN) ou par analyse élémentaire par exemple. C'est aussi un paramètre permettant de moduler la taille moyenne des particules formées à partir des complexes d'inclusion. Quand le degré de substitution augmente, leur taille moyenne est susceptible de diminuer. 25 Selon un mode de réalisation particulier, dans le complexe d'inclusion de l'invention, les groupes hydrophobes sont des groupes alkyles, linéaires ou ramifiés, notamment linéaires, contenant de 2 à 20 atomes de carbone, ou des groupes alcényles linéaires ou ramifiés, notamment linéaires, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non. 30 Les acides gras utilisés pour le greffage des chaînes hydrophobes sur le polysaccharide sont notamment l'acide laurique, l'acide palmitique, l'acide oléique, l'acide stéarique, l'acide linoléique, cette liste n'étant en aucun cas exhaustive et limitante. Acide gras Formule Acide laurique (12:0) Acide palmitique (16:0) Acide stéarique (18:0) Acide linoléique (18:2 49,12) ..-- -- Acide linolénique (18:3 49,12,15) Acide oléique (18:1 49) Selon un mode de réalisation particulier, dans le complexe d'inclusion de l'invention, les groupes hydrophobes sont fixés de façon covalente au polysaccharide par un atome d'azote dudit polysaccharide.
Ceci concerne les polysaccharides comportant des groupes amino, en particulier le chitosane et l'héparine. Ces groupes amino peuvent subir une réaction de N-acylation par réaction avec un acide gras ou un dérivé d'acide gras tel qu'un chlorure d'acide gras ou un anhydride d'acide gras. Selon un autre mode de réalisation particulier, dans le complexe d'inclusion de l'invention, les groupes hydrophobes sont fixés de façon covalente au polysaccharide par un ou plusieurs atomes d'oxygène dudit polysaccharide. Les groupes -OH sont nombreux sur les polysaccharides. Ils réagissent avec les acides gras ou des dérivés d'acides gras tels que les chlorures d'acide, les anhydrides d'acide, pour donner des esters. Le groupe hydrophobe de l'acide gras ou de son dérivé est donc greffé au polysaccharide par un de ses atomes d'oxygène, sous forme d'un groupe acyle : c'est une réaction de "O-acylation". La réaction de 0-acylation conduit à la formation de liaisons ester facilement dégradables par les estérases après administration in vivo. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, dans le complexe d'inclusion de l'invention, les groupes hydrophobes sont fixés de façon covalente au polysaccharide par un atome d'azote et par des atomes d'oxygène dudit polysaccharide dans les proportions de 0,5 à 20 °A.
Lorsque le polysaccharide contient des groupes amino et des groupes hydroxyles, par réaction avec les acides gras ou des dérivés d'acides gras tels que les chlorures d'acide, les anhydrides d'acide, il peut subir à la fois une N-acylation et une 0-acylation. Cependant, les groupes amino sont plus réactifs que les groupes hydroxyles.
Lorsqu'on utilise le méthanesulfonate, la 0-acylation est majoritaire. Selon un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion de l'invention, la cyclodextrine CD a pour formule : dans laquelle - p est un entier compris de 6 à 8, - Ri, R2 et R3, identiques ou différents, notamment identiques, sont des atomes d'hydrogène, des groupes alkyles comportant 1 à 3 atomes de carbone, choisis parmi méthyles, éthyles, propyles, isopropyles, des groupes amino -NH2, des groupes ammonium -NH3+, ou des groupes sulfate -5042-, et sont notamment des atomes d'hydrogène ou des groupes méthyles, ladite CD étant notamment l'alpha-cyclodextrine (a-CD) sous forme de monomère. Les "cyclodextrines" (CD) sont des oligomères cycliques de P-D-glucopyranoses reliés par des liaisons a(1-4). Trois familles sont principalement utilisées. Il s'agit des a-, p- et ycyclodextrines formées respectivement de 6, 7 ou 8 sous-unités glucopyranose. p=6 correspond à la a-cyclodextrine; p=7 correspond à la p -cyclodextrine et p=8 correspond à la y -cyclodextrine. Elles sont schématisées ci-après : Leur géométrie est comparable à un tronc de cône délimitant une cavité en son centre. Elle est décrite dans la figure 10. Ce sont donc des molécules cages, capables d'accueillir des espèces chimiques par phénomène d'inclusion, espèces notamment moléculaires et hydrophobes. La taille de la cavité dépend de la nature de la cyclodextrine. La partie interne de la cavité est hydrophobe, la partie externe est hydrophile. Les groupes -OH peuvent être substitués, notamment par des groupes méthyles, hydroxypropyles ou sulfobutyles. Les substitutions peuvent augmenter la solubilité de la cyclodextrine. C'est notamment avantageux dans le cas de la béta-cyclodextrine qui présente une solubilité limitée. La cyclodextrine avantageusement utilisée dans l'invention est l'a-cyclodextrine. L'avantage de cette cyclodextrine est lié à sa petite taille qui lui permet d'interagir avec les chaînes hydrophobes liées au polysaccharide.
Selon un mode de réalisation particulier dans le complexe d'inclusion de l'invention, la cyclodextrine est fonctionnalisée par un ligand choisi parmi des anti-corps, des fragments d'anti-corps, des récepteurs, des lectines, de la biotine ou ses dérivés. Le terme "ligand" désigne une molécule capable de se lier de façon covalente à la CD. Le ligand est choisi parmi des composés protéiniques intervenant notamment dans la 20 reconnaissance et/ou la neutralisation d'agents pathogènes (anti-corps ou fragments, récepteurs, lectines), intervenant dans le métabolisme des acides gras (biotine et dérivés). Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, dans le complexe d'inclusion : ^ le polysaccharide est un chitosane portant des groupes hydrophobes, ^ la cyclodextrine est notamment l' a-CD. Le chitosane, polysaccharide linéaire d'origine naturelle, composé aléatoirement d'unités désacétylées D-glucosamines liées en B-(1-4) à des unités acétylées N-acétyl-D-glucosamines, est produit par désacétylation chimique ou enzymatique de la chitine. Le chitosane est biocompatible, biodégradable. Il est non-toxique, bio-adhésif en raison de l'interaction entre les charges positives en milieu acide (pH< 6,0-6,5) portées par les fonctions amines et les charges négatives portées par les membranes biologiques. Il présente aussi une activité antibactérienne et antivirale.
Le chitosane est soluble dans une solution aqueuse d'acide acétique en faible concentration par protonation des groupes amino présents. La chaîne glucosidique du chitosane est essentiellement hydrophile. Mais il est possible de greffer des groupements, en particulier hydrophobes, sur les groupes amino et hydroxyles. Le polysaccharide devient alors amphiphile et peut former des micelles, des nanoparticules mais aussi des hydrogels à plus grande concentration par auto-association en milieu aqueux. Il est donc possible d' encapsuler des principes actifs dans les objets qu'il forme. Il peut être utilisé pour encapsuler des principes actifs (paclitaxel, ibuprofène,...). Selon un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion de l'invention, le chitosane porte des groupes hydrophobes greffés au niveau de certains atomes d'azote et a 20 pour formule dans laquelle ^ m représente le nombre de motifs d'unités désacétylées, ^ n représente le nombre de motifs d'unités acétylées, 25 sous réserve que le degré de désacétylation (DDA) représentant le pourcentage de m par rapport au nombre total d'unités soit supérieur à 50 %, ^ R4 représente le groupe hydrophobe et est choisi parmi : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes - (CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3. Le DDA de 50 % désigne la limite entre la chitine et le chitosane : lorsque le DDA est inférieur à 50 %, on parle de chitine, sinon on parle de chitosane. Le groupe -(CH2)14-CH3 provient de l'acide palmitique, -(CH2)16-CH3 provient de l'acide stéarique, -(CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 provient de l'acide linoléique, -(CH2)7-CH=CH(CH2)7-CH3 provient de l'acide oléique. Le chitosane N-acylé est obtenu à partir d'une réaction de type N-acylation en présence d'un agent de couplage, l'EDCI (1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide), qui réagit avec les groupements carboxyliques de l'acide gras (oléique ou palmitique par exemple) pour former un ester intermédiaire capable de se lier aux fonctions amino libres du chitosane (Lee, K.Y., et al., Structural Determination and Interior Polarity of Self-Aggregates Prepared from Deoxycholic Acid-Modified Chitosan in Water., Macromolecules, 1998, 31, 2, 378-383). Le schéma ci-après représente la suite de réactions réalisée pour obtenir un chitosane N-acylé, greffé par des chaînes provenant de l'acide oléique. On procède de la même façon avec les autres acides gras tel que l'acide palmitique par exemple. schéma : N-acylation du chitosane par l'acide oléique en présence de l'EDCI.
Les spectres IR et RMN des chitosanes greffés permettent de mettre en évidence la fonction amine secondaire obtenue après N-acylation et la présence des chaînes alkyles greffées. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, dans le complexe d'inclusion, le chitosane porte des groupes hydrophobes greffés au niveau d'atomes d'oxygène provenant des 5 groupes -OH et/ou des groupes -CH2OH fixés au cycle du chitosane, et ayant pour formule Q- dans laquelle n, m et R4 ont les significations désignées ci-dessus. Dans "Biomacromolecules 2002, 3, 1126-1128", Sashiwa et al. décrivent la réaction « one-pot » d'O-acylation du chitosane. Le méthylsulfonate, MeS031-1, permet de protéger le - 10 NH2 de la N-acylation pour donner majoritairement des composés greffés au niveau des atomes d'oxygène du chitosane, et plus particulièrement au niveau de la fonction -OH primaire du chitosane (-CH2OH). La réaction est décrite dans le schéma ci-après : Acyle-chitosme 15 Les spectres infrarouge (IR) des produits obtenus montrent une bande caractéristique d'une liaison ester à 1700 cm-1. D'autre part, les spectres RMN du proton comparés à celui du chitosane natif permettent d'établir la présence des chaînes alkyles. Selon un autre mode de réalisation particulier, dans le complexe d'inclusion de l'invention, le chitosane porte des groupes hydrophobes greffés au niveau de certains atomes 20 d'oxygène et de certains atomes d'azote, et a pour formule OH , HO I'TH Chitosane dans laquelle dans laquelle n, m et R4 ont les significations désignées ci-dessus. Selon encore un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion ^ le polysaccharide est un dextrane portant des groupes hydrophobes, fixés par des atomes d'oxygène dudit dextrane et représentant des groupes de formule dans laquelle ^ R4 a les significations désignées ci-dessus, * représente le dextrane, ^ la cyclodextrine est notamment l' a-CD. Le dextrane est un polymère de dextrose. Le spectre IR de l'O-palmitoyle-dextrane montre une bande d'absorption correspondant au carbonyle du groupe ester.
Selon un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion ^ le polysaccharide est l'acide hyaluronique portant des groupes hydrophobes, fixés par des atomes d'oxygène dudit acide hyaluronique et représentant des groupes de formule dans laquelle ^ R4 a les significations désignées ci-dessus, * représente l'acide hyaluronique, ^ la cyclodextrine est notamment l' a-CD. Selon encore un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion de l'invention ^ le polysaccharide est une amylopectine portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'oxygène de ladite amylopectine et représentant des groupes de formule dans laquelle R4 a les significations désignées ci-dessus, ^ * représente l'acide hyaluronique, ^ la cyclodextrine est notamment l' a-CD. Par comparaison des spectres IR de l'O-palmitoyle-amylopectine et de l'amylopectine native, on établit la présence du carbonyle du groupe ester chez le produit obtenu.
Selon un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion de l'invention ^ le polysaccharide est un pullulane portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'oxygène dudit pullulane et représentant des groupes de formule dans laquelle R4 a les significations désignées ci-dessus, ^ * représente le pullulane, ^ la cyclodextrine est notamment l' a-CD. Le pullulane est constitué d'unités de maltotriose. Les trois unités de glucose qui composent le maltotriose sont reliées par une liaison osidique du type a-1,4, tandis que les maltotrioses sont connectés entre eux par des liaisons osidiques du type a-1,6. Il est greffé, notamment par l'acide palmitique. Par comparaison des spectres IR de l'O-palmitoyle-pullulane et du pullulane natif, on établit la présence du carbonyle du groupe ester chez le produit obtenu. Selon un autre mode de réalisation, dans le complexe d'inclusion de l'invention ^ le polysaccharide est une héparine portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'azote de ladite héparine et représentant des groupes de formule dans laquelle R4 a les significations désignées ci-dessus, * représente l'héparine, ^ ou bien le polysaccharide est une héparine portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'oxygène de ladite héparine, ces oxygènes pouvant provenir des groupements hydroxyles ou carboxyles de l'héparine, et représentant des groupes de formule dans laquelle R4 a les significations désignées ci-dessus, * représente l'héparine, ^ et la cyclodextrine est notamment l' a-CD.
L'invention concerne aussi une particule de taille comprise de 50 nm à 10000 nm contenant des complexes d'inclusion entre ^ un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente audit polysaccharide, éventuellement fonctionnalisé par un ligand choisi parmi des anti-corps, des fragments d'anti-corps, des récepteurs, des lectines ou de la biotine ou ses 15 dérivés, ^ une cyclodextrine sous forme de monomère, éventuellement fonctionnalisée par un ligand choisi parmi des anti-corps, des fragments d'anti-corps, des récepteurs, des lectines ou de la biotine ou ses dérivés. L'invention concerne des particules nanométriques, de taille comprise de 50 nm à 1000 20 nm et des particules micrométriques de taille comprise de 1000 nm à 10000 nm. Les tailles des particules formées ont été évaluées par diffusion quasi-élastique de la lumière (DQEL) d'une part et par microscopie électronique à transmission (MET) d'autre part. La taille joue un rôle très important concernant la quantité de principe actif encapsulé et les applications envisagées, et la voie d'administration du principe actif 25 L'invention concerne aussi un système d'encapsulation contenant une ou plusieurs particules précédemment définie(s), et une substance utilisée pour ses propriétés dans les domaines pharmaceutique, médical, cosmétique, vétérinaire, agro-alimentaire, des pesticides, des cosméto-textiles, de la parfumerie, environnemental (dépollution des eaux par exemple) ou dans l'industrie des peintures, du bâtiment ou de l'automobile. 30 Selon un aspect avantageux, la substance a des propriétés pharmaceutiques et est choisie parmi les composés inorganiques et les composés organiques, synthétiques ou naturels.
Le système d'encapsulation précédemment défini selon l'invention peut être utilisé pour préparer des compositions appropriées dans les domaines pharmaceutique, médical, cosmétique, vétérinaire, agro-alimentaire, des pesticides, des cosméto-textiles, de la parfumerie, environnemental (dépollution des eaux par exemple) ou dans l'industrie des peintures, du bâtiment et de l'automobile. La substance encapsulée peut posséder des propriétés pharmaceutiques et être un principe actif à usage thérapeutique. Elle peut appartenir, la liste suivante n'étant en aucun cas limitante, au groupe des composés à propriétés vitaminiques, notamment la vitamine A, la vitamine E, la vitamine C, anti-tumorales, notamment le paclitaxel, le docétaxel, le tamoxifène, la doxorubicine, antidouleurs, notamment le paracétamol, anti-inflammatoires, notamment le diclofénac, l'ibuprofène, le kétoprofène, antibiotiques, notamment les pénicillines, les tétracyclines, antifongiques, notamment le kétoconazole, le clotrimazole, antiparasitaires, notamment l'albendazole, le métronidazole, enzymatiques, notamment la phosphatase alcaline, l'acetylcholinesterase, l'alcool déshydrogénase, hormonales, notamment la testostérone, le lévonorgestrel, anxiolytiques, notamment les benzodiazépines, antidiabétiques, notamment le glicazide, anti-hypertenseurs, notamment la nifédipine, ou vaccinales. Cette substance à usage thérapeutique peut être utilisée chez l'homme et chez l'animal. La substance encapsulée peut aussi posséder des propriétés cosmétiques et appartenir au groupe des composés à propriétés anti-inflammatoires, anti-âge, anti-UV, dépigmentantes, cicatrisantes, hydratantes, parfumantes, désodorisantes, antibactériennes, anti-transpirants, nettoyantes, colorantes, conservatrices. Dans un système d'encapsulation particulier, la substance possède des propriétés alimentaires et appartient au groupe des composés à propriétés vitaminiques, enzymatiques, édulcorantes.
Elle peut aussi être une huile essentielle, un colorant, un conservateur, un anti-oxydant, un probiotique. Les domaines d'utilisation des compositions contenant le système d'encapsulation avec le principe actif sont donc le domaine médical, vétérinaire, cosmétique, les cosméto-textiles, le domaine environnemental notamment lié à la dépollution des eaux, le domaine des peintures, du bâtiment ou de l'automobile, la parfumerie. Quelques molécules ou familles de molécules pouvant être encapsulées sont : la molsidomine, le kétoconazole, le gliclazide, le diclofénac, le lévonorgestrel, le paclitaxel, le docétaxel, le tamoxifène, l'hydrocortisone, pancratistatin, le kétoprofène, le diazépam, l'ibuprofène , nifédipine, la testostérone, le tamoxifène, le furosémide, le tolbutamide, le chloramphénicol, les benzodiazépines, le naproxène, la dexaméthasone, le diflunisal, l'anadamide, la pilocarpine, la daunorubicine, la doxorubicine , les huiles essentielles, les terpènes, les terpénoïdes. L'invention concerne aussi une composition pharmaceutique contenant à titre de substance active la substance encapsulée dans les particules, sous forme solide, ou sous forme de solution ou de suspension dans un milieu physiologique, éventuellement enrichi avec un excipient tel que le glucose, le saccharose ou tout autre excipient pharmaceutiquement acceptable, utilisable pour les voies : parentérale, orale, cutanée, sous-cutanée, nasale, pulmonaire ou oculaire et, pour toute administration au niveau d'une muqueuse, ou au niveau d'un site précis (tumeur, lumière de certains vaisseaux sanguins), sous forme de pilules, capsules molles, capsules dures (gélules), poudres, granules, comprimés solubles ou dispersibles, patch, implant, suppositoires, solutions, suspension, sirop, pâtes, crèmes, gels, émulsions, sprays, lotions, pommades, shampoings.
Les formes avantageuses dans le domaine pharmaceutique sont les comprimés, les capsules molles, les capsules dures (les gélules), les poudres, les granules, les patchs, les implants, les suppositoires, les solutions, les suspensions, les sirops, les pâtes, les crèmes, les gels, les émulsions, les sprays, les lotions et les pommades. Les formes avantageuses dans le domaine vétérinaire sont les formes orales (comprimés, poudres, capsules molles, capsules dures (gélules), granules, pâtes, solutions, suspensions), injectables (solutions, suspensions) et topiques dont l'action peut être locale ou systémique (spray, colliers, boucles auriculaires, poudres, lotions, pommades, shampooings, patch, émulsions, lait, gel, crème). Les formes avantageuses dans le domaine alimentaire sont les solutions, les émulsions, les pâtes, les gels, les poudres utilisées seules ou inclues dans des préparations alimentaires; dans le domaine des compléments alimentaires : les formes orales principalement (poudres, comprimés, gélules, granules, capsules molles ou capsules dures (gélules), pâtes, solutions, suspensions, infusions). L'invention concerne aussi une composition cosmétique contenant à titre de substance active la substance encapsulée dans les particules, et contenant des excipients cosmétiquement acceptables, utilisable sous forme de gels, pâtes, pommades, lotions, crèmes, laits, sticks, shampoings, poudres, aérosols, patchs. L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comportant une étape de mélange ^ d'un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente par un atome d'azote ou par un ou plusieurs atomes d'oxygène audit polysaccharide, ^ et d'une cyclodextrine (CD) sous forme de monomère, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel lesdits polysaccharide et cyclodextrine sont liés de façon non-covalente. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation de l'invention d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange ^ d'un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente au polysaccharide par un atome d'azote dudit polysaccharide, ^ et d'une cyclodextrine (CD) sous forme de monomère, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel lesdits polysaccharide et cyclodextrine sont liés de façon non-covalente. Selon un autre mode de réalisation, le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange ^ d'un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente au polysaccharide par des atomes d'oxygène dudit polysaccharide, ^ et d'une cyclodextrine (CD) sous forme de monomère, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel lesdits polysaccharide et cyclodextrine sont liés de façon non-covalente. Selon un mode particulier de réalisation, le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange ^ de plusieurs polysaccharides comportant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente aux susdits polysaccharides par un atome d'azote ou/et par un ou plusieurs atomes d'oxygène desdits polysaccharides, les polysaccharides étant le chitosane, le dextrane, l'acide hyaluronique, l'amylose, l'amylopectine, le pullulane, l'héparine, la chitine, les dérivés de la cellulose, l'amidon, la pectine, les alginates, les carraghénanes, le fucane, le curdlane, le xylane, l'acide polyguluronique, le xanthane, l'arabinane, l'acide polymannuronique, et leurs dérivés, ^ une cyclodextrine (CD), pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel les polysaccharides et la cyclodextrine sont liés de façon non-covalente. L'utilisation de plusieurs polysaccharides peut présenter l'avantage de moduler les propriétés des particules en modifiant le rapport entre les polysaccharides. Ainsi, il est attendu que la taille, la charge globale et les applications visées de ces particules peuvent être modulées.
Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange ^ d'un polysaccharide choisi parmi le chitosane, le dextrane, l'acide hyaluronique, l'amylose, l'amylopectine, le pullulane, l'héparine, la chitine, les dérivés de la cellulose, l'amidon, la pectine, les alginates, les carraghénanes, le fucane, le curdlane, le xylane, l'acide polyguluronique, le xanthane, l'arabinane, l'acide polymannuronique, et leurs dérivés, et est notamment le chitosane, ledit polysaccharide comportant des groupes hydrophobes de formule * o dans laquelle ^ * représente le polysaccharide, ^ R4 représente : - un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, - un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes -(CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3, ^ d' une cyclodextrine (CD) ayant pour formule dans laquelle - p est un entier compris de 6 à 8, - Ri, R2 et R3, identiques ou différents, notamment identiques, sont des atomes d'hydrogène, des groupes alkyles comportant 1 à 3 atomes de carbone, choisis parmi méthyles, éthyles, propyles, isopropyles, des groupes amino -NH2, des groupes ammonium - NH3+, ou des groupes sulfate -5042-, et sont notamment des atomes d'hydrogène ou des groupes méthyles, ladite CD étant notamment l'alpha-cyclodextrine (a-CD) sous forme de monomère, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel lesdits polysaccharide et cyclodextrine sont liés de façon non-covalente.
Le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange du polysaccharide ^ en solution aqueuse à la concentration comprise de 1 à 150 g/L, en particulier comprise de 5 à 50 g/L, et notamment environ égale à 10 g/L, le solvant aqueux étant choisi parmi l'eau pure, une solution aqueuse de pH compris de 1 à 7 ou de 7 à 12, notamment compris de 5 à 7, ou une solution de sérum physiologique éventuellement enrichie de glucose ou contenant tout autre excipient à usage pharmaceutique, cosmétique, agro-alimentaire ou vétérinaire, ^ ou en dispersion dans un milieu aqueux choisi parmi l'eau pure, une solution aqueuse de pH compris de 1 à 7 ou de 7 à 12, notamment compris de 5 à 7, ou une solution de sérum physiologique éventuellement enrichie de glucose ou contenant tout autre excipient à usage pharmaceutique, cosmétique, agro-alimentaire ou vétérinaire, avec une cyclodextrine, notamment l'a-CD. Dans le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion, l'étape de mélange du polysaccharide en solution ou dispersion aqueuse se fait à une concentration comprise de 1 à 150 g/L, en particulier comprise de 5 à 50 g/L, et notamment environ égale à 10 g/L, avec une cyclodextrine, notamment l'a-CD, à la concentration comprise de 1 à 150 g/L, en particulier comprise de 5 à 50 g/L, et notamment environ égale à 10 g/L. Selon un autre mode de réalisation, le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange du polysaccharide en dispersion dans un milieu aqueux, la masse dudit polysaccharide étant comprise de 1 à 150 g/L de milieu aqueux, en particulier étant comprise de 1 à 10 g/L de milieu aqueux, et notamment étant environ égale à 1 g/L ou environ égale à 10 g/L de milieu aqueux, avec une cyclodextrine, notamment l'a-CD, à la concentration comprise de 1 à 150 g/L de milieu aqueux, en particulier comprise de 1 à 50 g/L de milieu aqueux, et notamment égale à environ 10 g/L de milieu aqueux. Les complexes se forment aussi lorsque le polysaccharide est utilisé sous forme d'une suspension.
Le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange du polysaccharide avec une cyclodextrine, notamment l'a-CD, - le pourcentage massique dudit polysaccharide étant compris de 0,1 % à 15 %, et notamment de 0,5 % à 5 %, - le pourcentage massique de la cyclodextrine étant compris de 0,1 % à 15 %, 35 et notamment de 0,5 % à 5 %, - le pourcentage massique de l'eau ou du milieu aqueux étant compris de 70 % à 99,9 %, et notamment de 90 % à 99 %. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation d'un complexe d'inclusion, l'étape de mélange du polysaccharide avec une cyclodextrine, notamment l'a-CD, est effectuée sous agitation, notamment magnétique, à une vitesse d'agitation comprise de 50 à 1000 tours/minute, en particulier à une vitesse d'agitation comprise de 100 à 500 tours/minute, et notamment à une vitesse d'agitation environ égale à 200 tours/minutes, à une température comprise de 4 à 60 °C, en particulier à une température comprise de 10 à 35 °C, et notamment à une température environ égale à 20 °C, la durée de l'agitation étant comprise de 24 heures à 15 jours, en particulier comprise de 24 heures à 48 heures, et notamment environ égale à 36 heures. Le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte aussi une étape de préparation d'un polysaccharide portant des groupes hydrophobes, par réaction de N-acylation ^ entre le polysaccharide et un chlorure d'acide de formule R4-C(0)C1, dans laquelle R4 représente : - un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, - un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes -(CH2)7-CH-CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7- CH=CH-(CH2)7-CH3, ^ ou entre le polysaccharide et un acide gras de formule R4-CO2H, dans laquelle R4 a les significations désignées ci-dessus, en présence d'un agent de couplage tel que le chlorure de N-(3-dimethylaminopropyle)-N- éthylcarbodiimide (EDCI) à température ambiante pendant 24 heures, ^ ou bien entre le polysaccharide et un anhydride cyclique d'acide de formule R4-00-0-00- R4, dans laquelle R4 a les significations désignées ci-dessus, pour donner un polysaccharide portant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente au polysaccharide par un atome d'azote dudit polysaccharide. La réaction de N-acylation concerne en particulier le chitosane. Elle est réalisée par action d'un chlorure d'acide (Li, Y-Y. et al. , 2006, 1 Appl. Polym. Sci. 102, 1968-1973), d'un acide carboxylique, moins réactif que le chlorure d'acide, en présence de l'agent de couplage EDCI, ou par action d'anhydrides d'acides (Lee, K.Y. et al., 1995, Biomaterials 16, 1211- 1216 ; Lee, M.Y. et al., 2005, Int. I Biol. Macromol., 36, 152-158 ; Mourya, V.K and Inamdar, N.N. (2008). React. Funct. Polym. 68 (6), 1013-1051). Un autre mode du procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de préparation d'un polysaccharide portant des groupes hydrophobes, par réaction de O- acylation entre ledit polysaccharide dissous dans du méthanesulfonate et 1 à 20 équivalents par unité de polysaccharide, de chlorure d'acide gras, la réaction étant effectuée à température ambiante, lesdits polysaccharide et chlorure d'acide étant désignés précédemment, pour donner un polysaccharide portant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente au polysaccharide par un ou plusieurs atomes d'oxygène dudit polysaccharide. Un autre mode du procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange ^ d'un chitosane comportant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente au chitosane par un atome d'azote ou/et par un ou plusieurs atomes d'oxygène dudit chitosane, ^ une cyclodextrine (CD), pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel le chitosane et la cyclodextrine sont liés de façon non-covalente. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation d'un complexe d'inclusion comporte une étape de mélange entre - un chitosane de formule I ou un chitosane de formule II dans lesquelles ^ m représente le nombre de motifs d'unités désacétylées, ^ n représente le nombre de motifs d'unités acétylées, sous réserve que le degré de désacétylation représentant le pourcentage de m par rapport au nombre total d'unités soit supérieur à 50 %, ^ R4 représente un groupe hydrophobe et est choisi parmi : ^ un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, ^ un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes - (CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3, - et une cyclodextrine (CD) de formule dans laquelle - p est un entier compris de 6 à 8, - Ri, R2 et R3, identiques ou différents, notamment identiques, sont des atomes d'hydrogène, des groupes alkyles comportant 1 à 3 atomes de carbone, choisis parmi méthyles, éthyles, propyles, isopropyles, des groupes amino -NH2, des groupes ammonium - NH3+, ou des groupes sulfate -S042-, et sont notamment des atomes d'hydrogène ou des groupes méthyles, ladite CD étant notamment l'alpha-cyclodextrine (a-CD) sous forme de monomère, à la concentration comprise de 1 à 150 g/L de milieu aqueux, en particulier comprise de 1 à 50 g/L de milieu aqueux, et notamment égale à environ 10 g/L de milieu aqueux, lesdits chitosanes de formule I ou II étant - en solution aqueuse à la concentration comprise de 1 à 150 g/L, en particulier étant comprise de 1 à 10 g/L, et notamment étant environ égale à 1 ou environ égale à 10 g/L, le solvant aqueux étant choisi parmi l'eau pure, une solution aqueuse de pH compris de 1 à 7 ou de 7 à 12, notamment compris de 5 à 7, ou une solution de sérum physiologique éventuellement enrichie de glucose ou contenant tout autre excipient à usage pharmaceutique, cosmétique, agro-alimentaire ou vétérinaire, - ou en dispersion dans un milieu aqueux choisi parmi l'eau pure, une solution aqueuse de pH compris de 1 à 7 ou de 7 à 12, notamment compris de 5 à 7, ou une solution de sérum physiologique éventuellement enrichie de glucose ou contenant tout autre excipient à usage pharmaceutique, cosmétique, agro-alimentaire ou vétérinaire, la masse dudit polysaccharide étant comprise de 1 à 150 g/L de milieu aqueux, en particulier étant comprise de 1 à 10 g/L de milieu aqueux, et notamment étant égale à 1 g/L ou 10 g/L de milieu aqueux, - le pourcentage massique dudit polysaccharide étant compris de 0,1 % à 15 %, et notamment de 0,5 % à 5 %, - le pourcentage massique de la cyclodextrine étant compris de 0,1 % à 15 %, et notamment de 0,5 % à 5 %, - le pourcentage massique de l'eau ou du milieu aqueux étant compris de 70 % à 99,9 %, et notamment de 90% à 99%, ledit mélange étant effectué sous agitation, notamment magnétique, à une vitesse d'agitation comprise de 50 à 1000 tours/minute, en particulier à une vitesse d'agitation comprise de 100 à 500 tours/minute, et notamment à une vitesse d'agitation environ égale à 200 tours/minutes, à une température comprise de 4 à 60 °C, en particulier à une température comprise de 10 à 35 °C, et notamment à une température environ égale à 20 °C, la durée de l'agitation étant comprise de 24 heures à 15 jours, en particulier comprise de 24 heures à 48 heures, et notamment environ égale à 36 heures, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel le chitosane de formule I ou II et la cyclodextrine sont liés de façon non-covalente. L'invention concerne également un chitosane portant des groupes hydrophobes ayant pour formule II II dans laquelle ^ R4 représente - un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, - un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes -(CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7- CH=CH-(CH2)7-CH3, ^ m représente le nombre de motifs d'unités désacétylées, ^ n représente le nombre de motifs d'unités acétylées, sous réserve que le degré de désacétylation représentant le pourcentage de m par rapport au nombre total d'unités soit supérieur à 50 %. L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'un système d'encapsulation comportant une étape de mélange de particules contenant des complexes d'inclusion selon l'invention, avec une substance utilisée pour ses propriétés dans les domaines pharmaceutique, médical, cosmétique, vétérinaire, agro-alimentaire, des pesticides, des cosméto-textiles, de la parfumerie, environnemental (dépollution des eaux par exemple) ou dans l'industrie des peintures, du bâtiment et de l'automobile, ladite substance étant préalablement dissoute dans un milieux aqueux tel que l'eau, le sérum physiologique, ledit milieu étant éventuellement enrichi de glucose ou contenant tout autre excipient à usage pharmaceutique, cosmétique, agro-alimentaire ou vétérinaire, ledit milieu contenant éventuellement un co-solvant choisi parmi l'éthanol ou l'acétone, ou un tensio-actif choisi parmi les dérivés de polysorbates, notamment le Tween 80 ou le Tween 40, pour obtenir des particules contenant des complexes d'inclusion contenant ladite substance. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation d'un système d'encapsulation selon l'invention comporte une étape de mélange : - d'un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente au polysaccharide par un atome d'azote et par des atomes d'oxygène dudit polysaccharide, ledit polysaccharide étant choisi parmi le chitosane, le dextrane, l'acide hyaluronique, l'amylose, l'amylopectine, le pullulane, l'héparine, la chitine, les dérivés de la cellulose, l'amidon, la pectine, les alginates, les carraghénanes, le fucane, le curdlane, le xylane, l'acide polyguluronique, le xanthane, l'arabinane, l'acide polymannuronique, et leurs dérivés, et est notamment le chitosane, - d'une cyclodextrine désignée ci-dessus, - d'une substance utilisée pour ses propriétés dans les domaines pharmaceutique, médical, cosmétique, vétérinaire, agro-alimentaire, des pesticides, des cosméto-textiles, de la parfumerie, environnemental (dépollution des eaux) ou dans l'industrie des peintures, du bâtiment et de l'automobile, - le pourcentage massique dudit solvant étant compris de 0 à 50 % et notamment environ égal à 25 %, - le pourcentage massique dudit polysaccharide étant compris de 0,1 % à 15 %, et notamment de 0,5 % à 5 %, - le pourcentage massique de la cyclodextrine étant compris de 0,1 % à 15 %, et notamment de 0,5 % à 5 %, - le pourcentage massique de l'eau ou du milieu aqueux étant compris de 30 % à 99,9 %, et notamment de 90 % à 99 %, pour obtenir un complexe d'inclusion contenant ladite substance. L'étape de mélange du procédé de préparation d'un système d'encapsulation comporte une étape de dissolution du principe actif en milieu aqueux, suivie de l'addition dans le milieu du polysaccharide amphiphile et de l'a-cyclodextrine. Le mélange est placé sous agitation magnétique pendant 3 jours. Mais de façon pratique, il est possible de mélanger tous les composants en même temps. Les particules peuvent alors être isolées - soit par sédimentation, soit par centrifugation s'il s'agit de microparticules 30 (diamètre hydrodynamique supérieur au micromètre), - soit par ultracentrifugation ou par des méthodes de séparations membranaires telles que l'ultrafiltration et la microfiltration, s'il s'agit de nanoparticules (diamètre hydrodynamique inférieur au micromètre).
DESCRIPTION DES FIGURES : Figure 1 La figure 1 représente le spectre IR caractéristique du chitosane N-acylé par l'acide oléique (1) en comparaison avec celui du chitosane natif (2).
Figure 2 La figure 2 représente la formule du chitosane non-modifié et son spectre 1I-I-RMN (300 MHz) dans le DC1 à 1 % v/v dans le D20. Les atomes d'hydrogène sont numérotés sur la formule du composé, ces numéros apparaissant sur les pics du spectre de RMN. Figure 3 La figure 3 représente le spectre 1I-I-RMN (300 MHz) du chitosane après N-acylation par l'acide oléique solubilisé dans le DC1 à 1 % v/v dans le D20. Figure 4 La figure 4 représente le spectre IR du O-palmitoyle-chitosane (1) en comparaison avec le chitosane natif (2).
Figure 5 La figure 5 représente le spectre RMN du proton dans le DMSO-d6, du O-palmitoyle- chitosane. Figure 6 La figure 6 représente le spectre IR du 0-palmitoyle-pullulane (1) en comparaison avec celui du pullulane natif (2). Figure 7 La figure 7 représente le spectre IR du O-palmitoyle-amylopectine (1) en comparaison avec celui de l'amylopectine native (2). Figure 8 La figure 8 représente le spectre IR du O-palmitoyle-dextrane (1) en comparaison avec celui du dextrane natif (2). Figure 9 La figure 9 représente les images obtenues en microscopie électronique à transmission de différentes préparations de particules. figure 10 La figure 10 représente les a, f3 et y cyclodextrines. Dans la figure, les dimensions sont indiquées en Angstrôms.35 EXEMPLES Signification des abréviations utilisées : CDC13 : chloroforme deutéré CM : chitosane modifié Da : unité de masse molaire en dalton, qui correspond au g/L DC1 : acide chlorhydrique deutéré DDA : degré de désacétylation DMSO-d6 : diméthylsulfoxyde deutéré DS : degré de substitution EDCI : 1-éthy1-3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide Mm : masse molaire MHz : Mégahertz NaNO2 : Nitrite de sodium RMN : résonance magnétique nucléaire : déplacement du proton, exprimé en ppm M', : masse molaire AP : acide palmitique AO : acide oléique Caractéristiques/types des appareils d'analyse utilisés : 11I-RMN (Bruker ARX, 300 MHz ou 500 MHz) : Tous les composés obtenus ont été analysés par RMN du proton. Selon la solubilité des polysaccharides acyles, plusieurs solvants peuvent être utilisés tels que l'eau deutérée (D20) avec 1 % v/v de DC1, le chloroforme deutéré (CDC13), le diméthylsulfoxyde deutéré (DMSO-d6). Les spectres sont réalisés à température ambiante. Si le polysaccharide acyle est faiblement soluble ou si viscosité est élevée, on chauffer les échantillons jusqu'à 85°C et on travaille avec un champ électromagnétique de 500 MHz. Les spectres IR (ATR-FTIR, spectromètre FT/IR-4100, JASCO): le principe consiste à mettre en contact un cristal (diamant) avec l'échantillon à analyser, avant d'être traversé par le faisceau infrarouge. Mesures de taille des particules : Les tailles des particules ont été évaluées par le diamètre hydrodynamique. Les mesures des diamètres hydrodynamiques moyens des nanoparticules ont été réalisées avec un Zetasizer nanoséries Nano-ZS90 de la société Malvern instruments SA (Orsay, France) par diffusion quasi-élastique de la lumière. Les diamètres hydrodynamiques des microparticules ont été mesurés par un granulomètre laser (MasterSizer 2000) de la société Malvern instruments SA (Orsay, France).
La microscopie électronique par transmission (MET) a été utilisée pour observer les microparticules et nanoparticules à l'aide d'un microscope Philips EM208 et d'une caméra. Lyophilisation des polysaccharides greffés par des groupements hydrophobes : Certains dérivés de polysaccharides synthétisés ont été lyophilisés en utilisant un lyophilisateur Alpha 1-2 (Avantec, France) pendant 48 heures après avoir congelé les solutions pendant au moins 12 heures. Détails sur les produits utilisés : Les principes actifs, vitamine B6, paracétamol, kétoprophène, indométacine, caféine ont été obtenus chez la société INRESA, Bartenheim, France. Le Parsol 1789 provient de la société DSM Nutritional Products, Allemagne.
Tous les solvants : le diméthylformamide anhydre, l'éther diéthylique, l'éthanol, le méthanol, l'ammoniaque, l'acide acétique glacial (98 % (m/m)) proviennent de VWR, France. Le chitosane (de viscosité moyenne, de masse molaire M,i1=250 kDa), le pullulane, l'amylopectine, le dextrane, le chlorure de N-(3-dimethylaminopropyle)-N-éthylcarbodiimide (EDCI), l'acide palmitique (99 % (m/m)), l'acide oléique (> 98 % (m/m)), le bicarbonate de sodium, l'hydroxyde de sodium, le chlorure de sodium, le nitrite de sodium (NaNO2), l'acide méthanesulfonique, le chlorure de palmitoyle, le chlorure d'oléoyle, l'eau deutérée, l'acide chlorhydrique deutéré (DC1), le chloroforme deutéré (CDC13), le diméthylesulfoxyde deutéré (DMSO-d6), la pyridine anhydre, la triéthylamine, ont été fournis par Sigma-Aldrich Chemical Co, Saint quentin Fallavier, France.
Les autres chitosanes (20 et 145 kDa) ont été obtenus après dépolymérisation du chitosane commercial Mm=250 kDa selon la technique développée par Huang et al (Pharmaceutical Research, 2004, 21(2), 344): 2 g de chitosane commercial sont solubilisés toute une nuit dans 100 mL d'acide acétique (6 % v/v), cette solution de chitosane est ensuite dépolymérisée par réaction chimique pendant 1 h avec 10 mL de NaNO2 (85 mg/mL). Le chitosane dépolymérisé est ensuite précipité par augmentation du pH jusqu'à 9 à l'aide d'une solution d'hydroxyde de sodium (4 mol/L) et récupéré par filtration (filtre en verre fritté n°4, sous vide). Il est ensuite solubilisé dans 20 mL d'acide acétique (0,1 mol/L) et dialysé (membrane de dialyse Spectra/Por, MWCO 3500, lot 3228543, Spectrum laboratories Inc®) contre 1 L d'eau distillée deux fois pendant 1h30 puis toute une nuit puis lyophilisé.
La masse molaire du chitosane dépolymérisé est déterminée par viscosimétrie capillaire. Le temps d'écoulement (t) dans un microtube 1.1-Ubbelohde (type 53710/1, n° 1016187, R=0,01022 mm2/s2, Schott Ger te) de solutions de chitosane dans un mélange acide acétique 0,1 mol/L et NaC1 0,2 mol/L à différentes concentrations (c = 0,25/0,50/1,00/1,50/2,00 g/L) est mesuré à 20 °C (bain CT1450 Schott Gerâte et système de refroidissement CK100 Schott Gerâte) à l'aide d'un viscosimètre AVS400 (Schott Gerâte). Pour chaque concentration, le temps d'équilibration est de 5 min et cinq mesures successives sont réalisées. A partir des résultats obtenus la viscosité intrinsèque [rd est déduite en prenant l'ordonnée à l'origine de la droite (t-to)/(toxc) en fonction de la concentration avec to le temps d'écoulement du mélange d'acide acétique 0,1 mol/L et de NaC1 0,2 mol/L. La masse molaire est ensuite calculée en utilisant l'équation de Mark-Houwink-Sakurada [rd-KxMa, avec l<=1,81.10-6 et a=0,93. Synthèse des polysaccharides portant des groupes hydrophobes Exemple 1 : Synthèse et caractérisation du chitosane N-acylé Le protocole consiste à dissoudre 1 g de chitosane (M,2=20, 145, 250 kDa), dont le degré de désacétylation (DDA) est égal à 85 %, dans une solution aqueuse d'acide acétique à 1 % v/v (100 mL) diluée avec du méthanol (75 mL). L'acide oléique ou palmitique est dissous dans 10 mL de méthanol et ajouté à la solution de chitosane. Un nombre de mole d'EDCI égal à celui de l'acide gras, est ajouté goutte à goutte au mélange acide gras et chitosane sous agitation magnétique continue. Après 24 heures de réaction, le produit est précipité dans un mélange méthanol/ammoniaque 7/3 v/v. Le précipité est filtré sur un filtre en verre fritté et lavé successivement avec l'eau, le méthanol puis l'éther diéthylique. Enfin, le produit est séché sous vide pendant 48 heures. Lors de cette réaction plusieurs paramètres ont été modifiés. Ainsi, il est possible d'obtenir plusieurs types de chitosanes N-acylés en fonction du type d'acide gras greffé, du taux de greffage (degré de substitution) et de la masse molaire du chitosane. Les spectres IR des chitosanes greffés obtenus ont été enregistrés. Les deux courbes de la figure 1 font apparaître une bande très large entre 3430 cm-1 et 3440 cm-1 correspondant aux groupements OH (Figure 1). Le chitosane natif présente une faible absorption au niveau de la vibration des groupements NH vers 1578 cm-1. Après N-acylation, il faut noter la faible absorption de ses dérivés aux bandes 3000 cm-1 et 3600 cm-1 et l'apparition de deux bandes 1636 cm-1 et 1657 cm-1, caractéristiques des groupements carbonyles et amides secondaires respectivement et qui confirment bien la formation de la liaison amide. Quant aux bandes à 2922 cm-1, 2853 cm-1,1457 cm-1 et 1198 cm-1, elles correspondent aux chaînes alkyles de l'acide gras. La comparaison des spectres RMN du proton (figures 2 et 3) montre un signal supplémentaire par rapport au spectre du chitosane non modifié à 8=1,017 ppm. Il correspond au signal du groupe méthyle du bout de la chaîne d'acide gras. Exemple 2 : tableau 1, caractéristiques des chitosanes modifiés CM1-CM9 Les caractéristiques des chitosanes modifiés CM1-CM9 sont regroupés dans le tableau 1 ci-dessous. Le degré de substitution a été calculé à partir des résultats de l'analyse élémentaire du chitosane N-acylé et du chitosane natif. Chitosane modifié Groupement M. Chitosane utilisé (kDa) Degré de hydrophobe substitution greffé (%) CM! Acide oléique 250 1,19 CM2 Acide oléique 250 1,67 CM3 Acide oléique 250 7,43 CM4 Acide oléique 145 13,47 CM5 Acide oléique 20 5,61 CM6 Acide oléique 20 6,35 CM7 Acide palmitique 250 0,55 CM8 Acide palmitique 250 13,12 CM9 Acide palmitique 250 17,01 Tableau 1 Exemple 3 : préparation des échantillons de chitosanes modifiés, CM1-CM9. 15 Caractérisation par RMN du proton Pour la caractérisation du chitosane N-acylé par RMN du proton, une solution de polymère à une concentration égale à 5 g/L est préparée dans de l'eau deutérée (D20) en présence d'acide chlorhydrique deutéré (DC1). Cette étape permet l'échange des protons labiles des groupements hydroxyles par des atomes de deutérium. Les protons labiles des 20 groupements hydroxyles résonnant tous à la même fréquence, leur échange par des atomes de deutérium permet d'éliminer le signal résiduel de l'eau légère. Afin de diminuer la viscosité, les expériences ont été enregistrées à une température de 85 °C avec un nombre d'acquisition et un délai de relaxation de 5 et 1 secondes respectivement. 1H-RIVIN (300 MHz) chitosane non-modifié : la correspondance de chaque déplacement de protons est indiqué sur la figure 2. 1H-RIVIN (300 MHz) chitosane modifié : un pic supplémentaire par rapport au spectre du chitosane non modifié apparaît pour un déplacement chimique égal à 88=1,017 ppm (figure 3). Il correspond au signal de la chaîne d'acide gras. Exemple 4 : Synthèse et caractérisation du chitosane O-acylé Le chitosane (250 kDa, 2 g) est dissous dans 20 mL d'acide méthanesulfonique, à température ambiante sous agitation magnétique continue, pendant une heure. Le chlorure d'acide (oléique ou palmitique) est alors introduit dans le milieu réactionnel. Au bout de 5 heures, le mélange est refroidi dans un bain de glace pour arrêter la réaction, un précipité se forme. Le précipité est dialysé pendant 12 heures, puis neutralisé à l'aide du bicarbonate de sodium. Il est ensuite dialysé pendant 48 heures et lyophilisé. Le spectre IR (figure 4) du O-palmitoyle-chitosane montre une bande caractéristique des carbonyles d'un groupe ester à 1700 cm-1 et des bandes à 2916 cm-1, 2849 cm-1 correspondent aux chaînes alkyles de l'acide gras. Le spectre en RMN du proton (figure 5) comparé au spectre du chitosane natif (figure 2), montre l'apparition de nouveaux pics dont ceux caractéristiques du groupement CH3 du bout de chaîne à 0,88 ppm et du proton des groupements méthylène CH2 à proximité de la fonction CO à 2,8 ppm. Exemple 5 : Tableau 2, caractéristiques des chitosanes modifiés CM10-CM12 Les caractéristiques des chitosanes modifiés CM10-CM12 sont regroupés dans le tableau 2 ci-dessous. Chitosane modifié Groupement M. Chitosane utilisé (kDa) Degré de hydrophobe substitution greffé (%) CM10 Acide oléique 250 1,41 CM11 Acide palmitique 250 2,25 CM12 Acide palmitique 250 4,64 Tableau 2 Exemple 6 : Synthèse et caractérisation du pullulane greffé par l'acide palmitique Le pullulane est dissous dans le diméthylformamide anhydre à 60 °C. A la solution obtenue sont ajoutés la pyridine anhydre et le chlorure de palmitoyle. Le mélange réactionnel est mis sous agitation à 60 °C pendant 2 h puis pendant 1 h à température ambiante. Le mélange est versé dans de l'éthanol. Le précipité obtenu est extrait et lavé avec l'éthanol puis avec l'éther diéthylique. Le solide blanc obtenu est séché sous vide. Spectre IR de l'O-palmitoyle-pullulane : bande à 1739 cm-' correspondant au carbonyle du groupe ester (Figure 6) et des bandes à 2916 cm-1, 2849 cm-1, 1467 cm-1 et 1197 cm-1, correspondent aux chaînes alkyles de l'acide gras.
Exemple 7 : Synthèse et caractérisation de dérivés d'amylopectine greffée par l'acide palmitique L'amylopectine est mélangée avec le diméthylformamide anhydre. Le mélange est mis sous agitation à 70 °C jusqu'à la dissolution complète du polysaccharide. Ensuite, la triéthylamine anhydre et le chlorure de palmitoyle sont ajoutés puis chauffés sous agitation pendant 2 h. La solution est ensuite diluée dans du méthanol ce qui est à l'origine d'une précipitation du O-palmitoyle-amylopectine. Spectre IR de l'O-palmitoyle-amylopectine : bande à 1739 cm-1 correspondant au carbonyle du groupe ester (Figure 7) et notamment des bandes à 2916 cm-1, 2849 cm-1, 1462 cm-1 correspondent aux chaînes alkyles de l'acide gras.
Exemple 8 : Synthèse et caractérisation de dérivés de dextrane greffés par l'acide palmitique Le dextrane est mis en suspension dans le diméthylformamide anhydre. Le mélange est mis sous agitation à 70 °C jusqu'à la dissolution complète du polysaccharide. Ensuite, la triéthylamine anhydre et du chlorure de palmitoyle sont ajoutés puis chauffés sous agitation pendant 2 h. La solution est ensuite diluée dans du méthanol ce qui est à l'origine d'une précipitation du 0-palmitoyle-dextrane. Spectre IR de l'O-palmitoyle-dextrane : bande à 1739 cm-1 correspondant au carbonyle du groupe ester (Figure 8) et notamment des bandes à 2914 cm-1, 2853 cm-'correspondent aux chaînes alkyles de l'acide gras. Exemple 9 : Formation de microparticules et de nanoparticules à partir d'acyclodextrine et de polysaccharides acylés Les microparticules et nanoparticules ont été formées à partir d'a-cyclodextrine et de polysaccharide greffé par des acides gras. Les polysaccharides utilisés sont groupés dans le tableau ci-dessous. Le protocole consiste à peser l'a-cyclodextrine ainsi que le polysaccharide O- ou N-acylé dans un petit flacon. Par la suite, l'eau distillée est rajoutée au mélange d'acyclodextrine ainsi que le polysaccharide O- ou N-acylé. co polysaccharide Masse Acide DS Pourcentage Pourcentage Pourcentage Taille des de molaire gras (%) massique de massique d'a- massique particules (Da) polysaccharide cyclodextrine d'eau (nm)* amphiphile Pl chitosane N- 250 000 AP 13,1 0,96 5,12 93,92 327 acylé 2 P2 chitosane 0- 250 000 AO 1,41 0,92 1,94 97,14 acylé *Diamètre hydrodynamique exprimé en volume. Tableau 3 Un exemple d'image de particules observées en microscopie à transmission électronique est représenté dans la Figure 9. Exemple 10 : Encapsulation de principes actifs Le protocole adopté pour encapsuler les principes actifs hydrophiles est de dissoudre le principe actif dans l'eau à une concentration initiale telle qu'indiquée dans le tableau 4 puis de rajouter le polysaccharide amphiphile et l'a-cyclodextrine. Le mélange est maintenu sous agitation magnétique pendant 3 jours. Après les 3 jours de mélange, la concentration du principe actif qui n'a pas été encapsulée est déterminée dans le surnageant de la préparation.
Le surnageant est séparé soit par simple sédimentation ou par centrifugation des microparticules, soit après ultracentrifugation dans le cas des nanoparticules. Polysaccharide Concentration Concentration Rendement utilisé intiale (g/L) encapsulée (g/L d' encapsulation (%) Vitamine B6 CM9 2,31 1,52 65,82 Paracétamol CM11 2,34 0,78 33,33 Caféine CM9 2,33 0,51 22,23 tableau 420

Claims (15)

  1. REVENDICATIONS1. Complexe d'inclusion entre ^ un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente audit polysaccharide, ^ une cyclodextrine (CD) sous forme de monomère, le polysaccharide et la cyclodextrine étant liés de façon non-covalente, notamment dans lequel le polysaccharide est composé d'au moins 3 unités saccharidiques, sa 10 masse molaire étant en particulier comprise de 5 kDa à 100 000 kDa, et notamment égale à 20 kDa, 145 kDa ou 250 kDa, ou notamment dans lequel le rapport entre la concentration de la cyclodextrine en g/L et celle du polysaccharide est compris de 0,01 à 1500, en particulier compris de 4 à 15, et notamment égal à 10. 15
  2. 2. Complexe d'inclusion selon la revendication 1, dans lequel le polysaccharide est choisi parmi le chitosane, le dextrane, l'acide hyaluronique, l'amylose, l'amylopectine, le pullulane, l'héparine, la chitine, les dérivés de la cellulose, l'amidon, la pectine, les alginates, les carraghénanes, le fucane, le curdlane, le xylane, l'acide polyguluronique, le xanthane, 20 l'arabinane, l'acide polymannuronique, et leurs dérivés, et est notamment le chitosane, notamment dans lequel le degré de substitution du polysaccharide par les groupes hydrophobes est compris de 0,5 à 20 %, notamment égal à 2 %, 13 % ou 17 %.
  3. 3. Complexe d'inclusion selon l'une des revendications 1 ou 2, dans lequel les groupes 25 hydrophobes sont des groupes alkyles, linéaires ou ramifiés, notamment linéaires, contenant de 2 à 20 atomes de carbone, ou des groupes alcényles linéaires ou ramifiés, notamment linéaires, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non. 30
  4. 4. Complexe d'inclusion selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel les groupes hydrophobes sont fixés de façon covalente au polysaccharide par un ou plusieurs atomes d'oxygène dudit polysaccharide.
  5. 5. Complexe d'inclusion selon l'une des revendications 1 à 4, dans lequel la cyclodextrine 35 CD a pour formuledans laquelle - p est un entier compris de 6 à 8, - Ri, R2 et R3, identiques ou différents, notamment identiques, sont des atomes d'hydrogène, des groupes alkyles comportant 1 à 3 atomes de carbone, choisis parmi méthyles, éthyles, propyles, isopropyles, des groupes amino -NH2, des groupes ammonium -NH3+, ou des groupes sulfate -S042-, et sont notamment des atomes d'hydrogène ou des groupes méthyles, ladite CD étant notamment l'alpha-cyclodextrine (a-CD) sous forme de monomère, et notamment dans lequel la cyclodextrine est fonctionnalisée par un ligand choisi parmi des anti-corps, des fragments d'anti-corps, des récepteurs, des lectines, de la biotine ou ses dérivés.
  6. 6. Complexe d'inclusion selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel ^ le polysaccharide est un chitosane portant des groupes hydrophobes, ^ la cyclodextrine est notamment l' a-CD.
  7. 7. Complexe d'inclusion selon la revendication 6, dans lequel le chitosane porte des groupes hydrophobes greffés au niveau d'atomes d'oxygène provenant des groupes -OH et/ou 20 des groupes -CH2OH fixés au cycle du chitosane, ledit chitosane du complexe d'inclusion ayant pour formule dans laquelle ^ m représente le nombre de motifs d'unités désacétylées, 25 ^ n représente le nombre de motifs d'unités acétylées,sous réserve que le degré de désacétylation représentant le pourcentage de m par rapport au nombre total d'unités soit supérieur à 50 %, a R4 représente le groupe hydrophobe et est choisi parmi : ^ un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, ^ un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes - (CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3.
  8. 8. Complexe d'inclusion selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel a le polysaccharide est un dextrane portant des groupes hydrophobes, fixés par des atomes d'oxygène dudit dextrane et représentant des groupes de formule R4 dans laquelle . R4 a les significations désignées dans la revendication 7, ^ * représente le dextrane, a la cyclodextrine est notamment l' a-CD, ou dans lequel le polysaccharide est l'acide hyaluronique portant des groupes hydrophobes, fixés par des atomes d'oxygène dudit acide hyaluronique et représentant des groupes de formule dans laquelle R4 a les significations désignées dans la revendication 7, ^ * représente l'acide hyaluronique, a la cyclodextrine est notamment l' a-CD, ou dans lequel le polysaccharide est une amylopectine portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'oxygène de ladite amylopectine et représentant des groupes de formule * -0 --_________- R4 0 dans laquelle . R4 a les significations désignées dans la revendication 7,^ * représente une amylopectine, a la cyclodextrine est notamment l' a-CD, ou dans lequel le polysaccharide est un pullulane portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'oxygène dudit pullulane et représentant des groupes de formule dans laquelle ^ R4 a les significations désignées dans la revendication 7, ^ * représente le pullulane, a la cyclodextrine est notamment l' a-CD, ou dans lequel le polysaccharide est une héparine portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'azote de ladite héparine et représentant des groupes de formule 1-1 * -N R4 0 dans laquelle ^ R4 a les significations désignées dans la revendication 7, . * représente l'héparine, ou dans lequel le polysaccharide est une héparine portant des groupes hydrophobes fixés par des atomes d'oxygène de ladite héparine, ces oxygènes pouvant provenir des groupements hydroxyles ou carboxyles de l'héparine, et représentant des groupes de formule -R dans laquelle ^ R4 a les significations désignées dans la revendication 7, ^ * représente l'héparine, a et la cyclodextrine est notamment l' a-CD.
  9. 9. Particule de taille comprise de 50 nm à 10000 nm contenant des complexes d'inclusion entre a un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente audit polysaccharide, éventuellement fonctionnalisé par un ligand choisi parmi desanti-corps, des fragments d'anti-corps, des récepteurs, des lectines ou de la biotine ou ses dérivés, ^ une cyclodextrine sous forme de monomère, éventuellement fonctionnalisée par un ligand choisi parmi des anti-corps, des fragments d'anti-corps, des récepteurs, des lectines ou de la biotine ou ses dérivés.
  10. 10. Système d'encapsulation contenant une ou plusieurs particules selon la revendication 9, et une substance utilisée pour ses propriétés dans les domaines pharmaceutique, médical, cosmétique, vétérinaire, agro-alimentaire, des pesticides, des cosméto-textiles, de la parfumerie, environnemental (dépollution des eaux par exemple) ou dans l'industrie des peintures, du bâtiment ou de l'automobile.
  11. 11. Composition pharmaceutique contenant à titre de substance active une substance encapsulée dans des complexes d'inclusion selon l' une des revendications 1 à 8 ou dans des particules selon la revendications 9, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, notamment sous forme solide, ou sous forme de solution ou de suspension dans un milieu physiologique, utilisable notamment par les voies : parentérale, orale, cutanée, sous-cutanée, nasale, pulmonaire ou oculaire et, pour toute administration au niveau d'une muqueuse, notamment sous forme de pilules, capsules molles, capsules dures (gélules), poudres, granules, comprimés solubles ou dispersibles, patch, implant, suppositoires, solutions, suspension, sirop, pâtes, crèmes, gels, émulsions, sprays, lotions, ou pommades.
  12. 12. Procédé de préparation d'un complexe d'inclusion selon l' une des revendications 1 à 8, comportant une étape de mélange ^ d'un polysaccharide comportant des groupes hydrophobes liés de façon covalente au polysaccharide par des atomes d'oxygène dudit polysaccharide, ^ et d'une cyclodextrine (CD) sous forme de monomère, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel lesdits polysaccharide et cyclodextrine sont liés de façon non-covalente, et notamment comportant une étape de mélange ^ d'un polysaccharide choisi parmi le chitosane, le dextrane, l'acide hyaluronique, l'amylose, l'amylopectine, le pullulane, l'héparine, la chitine, les dérivés de la cellulose, l'amidon, la pectine, les alginates, les carraghénanes, le fucane, le curdlane, lexylane, l'acide polyguluronique, le xanthane, l'arabinane, l'acide polymannuronique, et leurs dérivés, et est notamment le chitosane, ledit polysaccharide comportant des groupes hydrophobes de formule - R4 dans laquelle - * représente le polysaccharide, - R4 représente - un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, - un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes -(CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3, ^ d' une cyclodextrine (CD) ayant pour formule l dans laquelle - p est un entier compris de 6 à 8, - Ri, R2 et R3, identiques ou différents, notamment identiques, sont des atomes d'hydrogène, des groupes alkyles comportant 1 à 3 atomes de carbone, choisis parmi méthyles, éthyles, propyles, isopropyles, des groupes amino -NH2, des groupes ammonium -NH3+, ou des groupes sulfate -S042-, et sont notamment des atomes d'hydrogène ou des groupes méthyles, ladite CD étant notamment l'alpha-cyclodextrine (a-CD) sous forme de monomère, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel lesdits polysaccharide et cyclodextrine sont liés de façon non-covalente.
  13. 13. Procédé de préparation selon la revendication 12, d'un complexe d'inclusion comportant une étape de préparation d'un polysaccharide portant des groupes hydrophobes, par réaction de 0-acylation entre ledit polysaccharide dissous dans le méthanesulfonate et 1 à 20 équivalents par unité de polysaccharide, de chlorure d'acide gras de formule R4-C(0)Cl,dans laquelle R4 représente : - un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, - un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes -(CH2)7-CH=CH- CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3, la réaction étant effectuée à température ambiante, ledit polysaccharide étant désigné dans la revendication 12, pour donner un polysaccharide portant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente au polysaccharide par un ou plusieurs atomes d'oxygène dudit polysaccharide.
  14. 14. Procédé de préparation selon l'une des revendications 12 ou 13, d'un complexe d'inclusion comportant une étape de mélange ^ d'un chitosane comportant des groupes hydrophobes fixés de façon covalente au chitosane par un ou plusieurs atomes d'oxygène dudit chitosane, ^ une cyclodextrine (CD), et notamment comportant une étape de mélange entre un chitosane de formule I I ou un chitosane de formule II II dans lesquelles ^ m représente le nombre de motifs d'unités désacétylées, ^ n représente le nombre de motifs d'unités acétylées, sous réserve que le degré de désacétylation représentant le pourcentage de m par rapport au nombre total d'unités soit supérieur à 50 %,^ R4 représente un groupe hydrophobe et est choisi parmi : ^ un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, ^ un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, notamment les groupes - (CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3, - et une cyclodextrine (CD) de formule dans laquelle - p est un entier compris de 6 à 8, - Ri, R2 et R3, identiques ou différents, notamment identiques, sont des atomes d'hydrogène, des groupes alkyles comportant 1 à 3 atomes de carbone, choisis parmi méthyles, éthyles, propyles, isopropyles, des groupes amino -NH2, des groupes ammonium - NH3+, ou des groupes sulfate -SO4-, et sont notamment des atomes d'hydrogène ou des groupes méthyles, ladite CD étant notamment l'alpha-cyclodextrine (a-CD) sous forme de monomère, à la concentration comprise de 1 à 150 g/L de milieu aqueux, en particulier comprise de 1 à 50 g/L de milieu aqueux, et notamment égale à environ 10 g/L de milieu aqueux, pour obtenir un complexe d'inclusion dans lequel le chitosane de formule I et la cyclodextrine sont liés de façon non-covalente.
  15. 15. Chitosane portant des groupes hydrophobes ayant pour formule II II dans laquelle ^ R4 représente- un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment les groupes -(CH2)14-CH3 ou -(CH2)16-CH3, - un groupe alcényle linéaire ou ramifié, contenant 2 à 20 atomes de carbone et portant de 1 à 4 double liaisons C=C, conjuguées ou non, 5 notamment les groupes -(CH2)7-CH=CH-CH2-(CH2)7-CH3 ou -(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3, ^ m représente le nombre de motifs d'unités désacétylées, ^ n représente le nombre de motifs d'unités acétylées, le degré de désacétylation représentant le pourcentage de m par rapport au nombre total d'unités est supérieur à 50 %.
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