FR2973376A1 - Derives utiles dans le traitement ou la prevention de tumeurs osseuses - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un composé de formule (I) suivante : ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour lequel : - X représente un atome d'halogène ou un groupe OR , SR ou NR R , - A représente un groupe (C -C )alkyle, de préférence (C -C )alkyle, - A représente un groupe -COOH, -C(O)O-((C -C )alkyle) ou -C(OH)(PO H ) , - R représente un atome d'hydrogène ou un groupe -C(O)-((C -C )alkyle), et - R et R représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe (C -C )alkyle, aryle ou aryl-(C -C )alkyle, ainsi que son utilisation en tant que médicament, notamment dans le traitement et la prévention de tumeurs osseuses, les compositions pharmaceutiques le comprenant et un procédé de synthèse de celui-ci.

Description

La présente invention concerne des dérivés utiles comme médicament, et plus particulièrement pour le traitement de tumeurs osseuses, ainsi que leur procédé de préparation.

Deux types de tumeurs osseuses sont dénombrés actuellement : d'une part les tumeurs osseuses primitives telles que les ostéosarcomes, les chondrosarcomes et les sarcomes d'Ewing ; d'autre part, les tumeurs secondaires ou métastases osseuses (particulièrement fréquentes dans l'évolution des pathologies cancéreuses) dues à la dissémination de cellules tumorales qui ont un fort tropisme osseux (ostéophiles) telles que les cellules de carcinome mammaire ou prostatique.

Dans les conditions pathologiques, l'équilibre entre formation et résorption osseuse est rompu, quelque soit l'origine des cellules tumorales (osseuses ou non). Ainsi, le remodelage osseux, continu tout au long de la vie, peut se faire soit en faveur de la formation osseuse (tumeurs ostéocondensantes), soit à l'inverse, en faveur de la résorption osseuse (tumeurs ostéolytiques). Mais dans la plupart des cas, les tumeurs sont mixtes, comme dans les cas d'ostéosarcomes ou de métastases osseuses secondaires à un carcinome. L'ostéosarcome d'origine ostéoblastique, est la plus fréquente des tumeurs osseuses primitives, et se caractérise par une formation osseuse abondante associée à des lésions ostéolytiques importantes. Le traitement standard actuel des tumeurs osseuses primitives débute par une biopsie en vue d'établir le diagnostic histologique. Une poly-chimiothérapie (OS 2006) est initiée qui comporte 10 cures au total. Quatre cures d'induction néo-adjuvantes associant l'ifosfamide et le vépéside ou le méthotrexate seul précèdent l'exérèse de la tumeur avant une nouvelle poly-chimiothérapie adjuvante de 6 cures. En fonction de la réponse de la tumeur au premier traitement, le même traitement est appliqué (bon répondeur) ou à défaut l'association adriamycine / cisplatine est utilisée (dans le cas des mauvais répondeurs au premier traitement).

Malheureusement, dans de nombreux cas, une absence de réponse aux drogues anti-tumorales est observée conduisant au développement de métastases (principalement pulmonaires) puis au décès du patient. Ainsi, la survie des patients est de 56 à 83% à 5 ans en absence de métastases pulmonaires au moment du diagnostique et de 30% à 5 ans lorsque des métastases pulmonaires sont détectées au moment du diagnostic. Il existe donc un réel besoin de développer de nouvelles molécules utiles dans le traitement et la prévention des tumeurs osseuses. La présente invention a donc pour objet un composé de formule (I) suivante : X O\ /A l'A 2 2 2 0 (1) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour lequel : X représente un atome d'halogène ou un groupe OR3, SR3 ou NR3R4, Al représente un groupe (Ci-Cio)alkyle, de préférence (Ci-C6)alkyle, A2 représente un groupe -000H, -C(0)O-((Ci-C6)alkyle) ou -C(OH)(P03H2)2, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe -C(0)-((Ci-C6)alkyle), et R3 et R4 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe (Ci-C6)alkyle, aryle ou aryl-(Ci-C6)alkyle.

Dans la présente invention, on entend désigner par « pharmaceutiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation vétérinaire de même que pharmaceutique humaine.

On entend désigner par « sels pharmaceutiquement acceptables » d'un composé, des sels qui sont pharmaceutiquement acceptables, comme défini ici, et qui possèdent l'activité pharmacologique souhaitée du composé parent. De tels sels comprennent : (1) les hydrates et les solvates, (2) les sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable formés avec des acides inorganiques pharmaceutiquement acceptables tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique et similaires ; ou formés avec des acides organiques pharmaceutiquement acceptables tels que l'acide acétique, l'acide benzènesulfonique, l'acide benzoïque, l'acide camphresulfonique, l'acide citrique, l'acide éthane-sulfonique, l'acide fumarique, l'acide glucoheptonique, l'acide gluconique, l'acide glutamique, l'acide glycolique, l'acide hydroxynaphtoïque, l'acide 2-hydroxyéthanesulfonique, l'acide lactique, l'acide maléique, l'acide malique, l'acide mandélique, l'acide méthanesulfonique, l'acide muconique, l'acide 2-naphtalènesulfonique, l'acide propionique, l'acide salicylique, l'acide succinique, l'acide dibenzoyl-L-tartrique, l'acide tartrique, l'acide p- toluènesulfonique, l'acide triméthylacétique, l'acide trifluoroacétique et similaires, ou (3) les sels d'addition de base pharmaceutiquement acceptable formés lorsqu'un proton acide présent dans le composé parent est soit remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin, un ion de métal alcalino-terreux ou un ion d'aluminium ; soit coordonné avec une base organique ou inorganique pharmaceutiquement acceptable. Les bases organiques acceptables comprennent la diéthanolamine, l'éthanolamine, N-méthylglucamine, la triéthanolamine, la trométhamine et similaires. Les bases inorganiques acceptables comprennent l'hydroxyde d'aluminium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium et l'hydroxyde de sodium. Par « atome d'halogène », on entend, au sens de la présente invention, les atomes de fluor, de chlore, de brome et d'iode. Par groupement « (Ci-Cio)alkyle » ou « (Ci-C6)alkyle », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée saturée, linéaire ou ramifiée, comportant 1 à 10, respectivement 1 à 6, et de préférence 1 à 4, atomes de carbone. A titre d'exemple, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle, tert-butyle, pentyle ou encore hexyle.

Par « aryle », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné aromatique, comportant de préférence de 6 à 10 atomes de carbone, et comprenant un ou plusieurs cycles accolés, comme par exemple un groupement phényle ou naphtyle. Avantageusement, il s'agit du phényle.

Par « aryl-(Ci-C6)alkyle », on entend, au sens de la présente invention, un groupe aryle, tel que défini ci-dessus, lié à la molécule par l'intermédiaire d'une chaîne (Ci-C6)alkyle, telle que définie ci-dessus. A titre d'exemple, on peut citer le groupe benzyle.

De préférence, X représentera un atome d'halogène, tel qu'un atome de chlore. Avantageusement, Al représentera un groupe éthyle. Avantageusement, A2 représentera un groupe -COOH. De préférence, R1 représentera un atome d'hydrogène. Le composé de formule (I) pourra plus particulièrement être le composé suivant (I-1, dénommé ligérine : O OH

O La présente invention a également pour objet un composé de formule (I) selon la présente invention pour son utilisation comme médicament, notamment dans le 20 traitement ou la prévention d'une tumeur osseuse.

La présente invention concerne également l'utilisation d'un composé de formule (I) selon l'invention pour la préparation d'un médicament, destiné notamment à traiter ou prévenir une tumeur osseuse.

La présente invention concerne également une méthode de traitement ou de 25 prévention d'une tumeur osseuse, comprenant l'administration à une personne en ayant besoin d'une quantité efficace d'au moins un composé de formule (I) selon l'invention.

La tumeur osseuse pourra être une tumeur osseuse primitive telle qu'un ostéosarcome, un chondrosarcome et un sarcome d'Ewing ; ou une tumeur osseuse secondaire ou des métastases osseuses telles que les cellules de carcinome mammaire ou prostatique.

La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) selon l'invention et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être formulées pour une administration orale ou parentérale telle qu'intraveineuse, destinée aux mammifères, y compris l'homme. La posologie varie selon le traitement et selon l'affection en cause. L'ingrédient actif peut être administré sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux ou aux êtres humains. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, et les formes d'administration parentérale telle qu'intraveineuse. Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif. On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié. Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient 30 actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, de même qu'avec des correcteurs du goût ou des édulcorants.

Pour une administration parentérale, notamment intraveineuse, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacologiquement compatibles.

Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports additifs. Les composés de l'invention en tant que principes actifs peuvent être utilisés à des doses comprises entre 0,01 mg et 1000 mg par jour, donnés en une seule dose une fois par jour ou administrés en plusieurs doses tout au long de la journée, par exemple deux fois par jour en doses égales. La dose administrée par jour est avantageusement comprise entre 5 mg et 500 mg, encore plus avantageusement entre 10 mg et 200 mg. Il peut être nécessaire d'utiliser des doses sortant de ces gammes ce dont l'homme du métier peut se rendre compte lui-même. La composition pharmaceutique selon l'invention pourra en outre contenir un autre principe actif tel qu'un agent anticancéreux.

La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'invention comprenant les étapes successives suivantes : (a) ouverture de l'époxyde et halogénation du composé de formule (II) suivante : O (II) pour laquelle AI et A2 sont tels que définis précédemment, pour donner un composé de formule (Ia) suivante : (Ia) pour laquelle Al et A2 sont tels que définis précédemment et Hal représente un atome d'halogène, les composés de formule (Ia) correspondant à des composés de formule (I) selon l'invention avec X = Hal et R1 = H, (b) éventuellement substitution nucléophile de la fonction OH ou Hal du composé de formule (Ia) obtenu à l'étape précédente pour donner un composé de formule (I) pour lequel X Hal et/ou R1 H, et (c) éventuellement salification du composé de formule (I) ou (Ia) obtenu à l'étape précédente pour obtenir un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci. 10 Etape (a) : Cette étape sera réalisée en présence d'un réactif d'halogénation dans des conditions bien connues de l'homme du métier. Cette réaction pourra notamment être réalisée en présence d'un acide tel que 15 l'acide acétique et d'un sel d'halogénure tel que M-Hal avec M choisi parmi Li, K, Na, Rb, Cs, ou NH4. M-Hal représentera notamment Li-Cl. Dans ce cas, la réaction pourra être réalisée dans un solvant tel que le tétrahydrofurane, notamment à une température comprise entre 0 et 30°C. Toute autre condition réactionnelle d'halogénation connue de l'homme du 20 métier pourra cependant être utilisée. Le composé de formule (II) peut être obtenu par couplage de la fonction OH du fumagillol de formule 2 suivante : O yAl,A2 O avec la fonction COOH de l'acide carboxylique de formule (III) suivante : HO r \ /A1,A 2 O (III) pour laquelle Al et A2 sont tels que définis précédemment, A2 étant éventuellement sous 5 une forme protégée qui sera déprotégée une fois la réaction réalisée ou ultérieurement, ou encore avec l'anhydride de formule (IV) suivante O O (IV), pour laquelle Al est tel que défini précédemment, pour donner dans ce cas un composé de formule (II) avec A2 = COOH. 10 Ce couplage pourra être réalisé par des techniques bien connues de l'homme du métier et notamment en présence de diméthylaminopyridine (DMAP) dans la pyridine comme solvant dans le cas d'une réaction avec un anhydride de formule (IV). La réaction sera réalisée notamment à température ambiante, c'est-à-dire à une température comprise entre 15 et 40°C, notamment entre 20 et 30°C. 15 Le composé de fumagillol 2, quant à lui, peut être obtenu à partir de la fumagilline 1 selon une procédure décrite dans les exemples ci-après. Avantageusement, le couplage sera réalisé avec un composé de formule (III) pour lequel A2 = COOH éventuellement sous forme protégée, ou encore de préférence avec un anhydride de formule (IV). La fonction COOH pourra alors être estérifiée 20 ultérieurement pour donner accès à un composé de formule (I) pour lequel A2 = CO- ((Ci-C6)alkyle) dans des conditions d'estérification bien connue des l'homme du métier. De même la fonction COOH pourra être transformée en fonction acide 2 hydroxybisphosphonique (-C(OH)(P03H2)2) dans des conditions bien connues de l'homme du métier telles que celles décrites dans WO 2009/083613. Etape (b) : Cette étape de substitution pourra être réalisée par des techniques bien connues 5 de l'homme du métier. Si nécessaire, certaines fonctionnalités présentes sur la molécule et sensibles aux conditions de la réaction de substitution pourront être protégées auparavant puis être déprotégées une fois la substitution réalisée. Etape (c) : 10 Cette étape pourra être réalisée par des techniques bien connues de l'homme du métier en présence d'une base ou d'un acide pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment. En outre, le composé de formule (I) ainsi obtenu pourra être séparé du milieu réactionnel par des méthodes bien connues de l'homme du métier, comme par exemple 15 par extraction, évaporation du solvant ou encore par précipitation et filtration. Le composé pourra être par ailleurs purifié si nécessaire par des techniques bien connues de l'homme du métier, comme par recristallisation, par chromatographie sur colonne sur gel de silice ou encore par chromatographie liquide haute performance (HPLC). 20 La présente invention sera mieux comprise à la lumière des figures et exemples non limitatifs qui suivent.

FIGURES 25 La Figure 1 représente le pourcentage de viabilité cellulaire pour 3 lignées de cellules tumorales (L929, POS1 et SaOS2) en fonction de la concentration de composé I-1 selon l'invention administrée en utilisant une échelle semi-logarithmique. La Figure 2 représente le suivi pondéral (poids en grammes) du groupe de souris 30 contrôle et du groupe de souris ayant reçu le composé I-1 selon l'invention au cours de l'étude (temps en jours).

La Figure 3 représente le taux de survie des souris du groupe de souris contrôle et du groupe de souris ayant reçu le composé I-1 selon l'invention en fonction du temps.

EXEMPLES 1. Préparation des composés selon l'invention 1.1. Préparation par extraction à partir d'une souche de Penicillium

10 - Souche utilisée La souche utilisée est un micromycète saprotrophe d'origine marine. Elle a été isolée à partir d'un prélèvement d'eau de mer effectué en janvier 1997 sur le site de La Prée, Loire-Atlantique (Sallenave, 1999). Elle est conservée dans la mycothèque marine du laboratoire MMS-EA2160 de l'Université de Nantes sous le code MMS 351 ainsi que 15 dans la collection du Museum National d'Histoire Naturelle (MNHN, Paris) sous la cote LCP 99.43.43, et a été identifiée morphologiquement comme appartenant à l'espèce Penicillium waksmanii Zaleski. - Préparation du milieu de culture Le milieu de culture utilisé est le milieu solide semi-synthétique YES/eau de mer 20 (Frisvad J.C., 1981, Applied and Environmental Microbiology, 41 (3) : 568-579 ; Filtenborg O. et al., 1990, In Modern concepts in Penicillium and Aspergillus classification, Samson R.A., Pitt J.I. eds, Plenum Press, New York, USA : 433-440) dont la composition massique est la suivante : 25 Extrait de levure : 2,0 g Sucrose (D (+)-saccharose) : 15,0 g MgSO4, 7H20 : 0,05 g CuSO4, 5H20 : 0,0005 g ZnSO4, 7H20 : 0,001 g Agar bactériologique type E : 2,0 g 30 Eau de mer stérile : 100 mL. - Ensemencement et incubation5 Les cultures ont été mises à incuber à 27°C sous exposition à la lumière naturelle après ensemencement des milieux stériles répartis à hauteur de 50 mL par Erlenmeyer de 250 mL. - Protocole d'extraction des cultures fongiques L'extraction des cultures de la souche MMS 351 a été effectuée après 11 jours d'incubation. L'ensemble des cultures (biomasse et gélose) a été mis en contact avec 100 mL d'acétate d'éthyle; pendant 1h30, puis broyé. Le tout a été placé sur un banc d'agitation pendant 1h à 150 rpm, puis soumis à l'action des ultrasons pendant 30 min. Après filtrations successives (papier filtre, puis membrane de cellulose régénérée de porosité 0,45 µm) et adsorption de l'eau résiduelle à l'aide de sulfate de sodium anhydre, le solvant a été évaporé à l'évaporateur rotatif jusqu'à siccité, aboutissant à l'obtention d'un extrait brut. - Méthodes séparatives d'analyse et de purification utilisées et tests de cytotoxicité réalisés sur les lignées cellulaires - Chromatographie liquide à basse pression 1 (CLBP 1) La première étape de fractionnement de l'extrait brut a consisté en une chromatographie liquide à basse pression (CLBP) réalisée sur une colonne de verre remplie de 1,5 kg de silice de porosité 60 À et de granulométrie 35-70 µm (Chromagel, SDS). Le dépôt sec a consisté en 33 g d'extrait brut adsorbés sur 30 g de silice. L'élution a été réalisée par un gradient discontinu de solvants de polarités croissantes : hexane/EtOAc (0, 5, 10, 15, 20, 30, 40 et 50% d'EtOAc en volume) puis CH2C12/MeOH (0, 30 et 100% de MeOH en volume) ; un volume de 4 L a été utilisé pour chacun des 6 premiers mélanges de solvants, 8L pour le mélange hexane/EtOAc 60 :40 (v/v) et le mélange hexane/EtOAc 50 :50 (v/v), 6L pour le CH2C12 pur et 12L pour le mélange CH2C12/MeOH 70 :30 (v/v) et le MeOH pur. Les fractions obtenues ont été évaporées jusqu'à siccité. - Tests de cytotoxicité Les fractions ont été solubilisées dans de l'éthanol absolu puis elles ont été testées sur deux lignées cellulaires : - une lignée fibroblastique d' origine murine : L929 (lignée non tumorale) ; - une lignée issue d'un ostéosarcome de souris : POS1 (lignée tumorale). Pour réaliser les tests de cytotoxicité, les différentes lignées cellulaires ont été ensemencées à TO dans des plaques 96 puits, puis incubées dans une atmosphère humide à 37°C délivrant 5% de CO2.

En fonction des types cellulaires, l'ensemencement des puits différait : - Cellules d'ostéosarcome de souris (POS1) : 2500 cellules/puits Milieu RPMI complémenté avec 5% de sérum de veau foetal (SVF) - Cellules fibroblastiques de souris (L929) : 1000 cellules/puits Milieu RPMI complémenté avec 5% de SVF A T=24h, les milieux de culture ont été renouvelés puis les différentes fractions ont été mises en contact avec les lignées cellulaires à différentes concentrations. Le pourcentage d'éthanol était identique dans chaque puits pour chaque concentration à savoir 0,1% d'éthanol par puits. Un contrôle solvant a été réalisé en parallèle. Un test de cytotoxicité (XTT - hydroxyde de tétrazolium, Cell proliferation kit II, Roche-Applied Sciences) a été réalisé conformément aux prescriptions du fabricant à T=96h, après 72h de mise en contact des cellules avec les différents extraits aux différentes concentrations. - Chromatographie liquide à basse pression 2 (CLBP 2) La deuxième étape de purification de la fraction active (éluée par le mélange hexane/EtOAc 60 :40 v/v) a consisté en une deuxième chromatographie liquide à basse pression, sur une colonne de verre remplie de 20 g de silice de porosité 60 À et de granulométrie 35-70 µm (Chromagel, SDS). Le dépôt sec a consisté en 272 mg d'échantillon adsorbés sur 600 mg de silice. L'élution a été réalisée par un gradient discontinu de solvants de polarités croissantes (400 mL de chaque solvant) : CH2C12/MeOH (0,5, 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 40, 70 et 100% de MeOH en volume). Après évaporation du solvant jusqu'à siccité, les fractions ont été reprises dans de l'éthanol absolu et testées sur les lignées POS1 et L929 en suivant le même protocole que celui décrit précédemment. - Chromatographie liquide à haute performance (CLHP) La troisième étape de fractionnement a consisté en une chromatographie liquide à haute performance. Les fractions issues de la CLBP 2 ayant présenté une activité intéressante sur la lignée tumorale ont été fractionnées par CLHP dotée d'un détecteur à barrettes de diode sur phase inverse (silice greffée C18) avec un gradient MeOH/eau+0,005%TFA (acide trifluoroacétique) dans les conditions suivantes : - De t = 0 à t = 5min : MeOH/eau+TFA 30 :70 (v/v) - Augmentation du pourcentage de MeOH jusqu'à atteindre 100% de MeOH à t = 30 min - Plateau à 100% de MeOH pendant 5 min (t = 30 min à t = 35 min) - Diminution du pourcentage de MeOH de t = 35min à t = 53 min afin de revenir aux conditions initiales, c'est-à-dire MeOH/eau+TFA 30 :70 (v/v) - Conditions initiales MeOH/eau+TFA 30 :70 (v/v) pendant 10 min (de t = 53 min à t = 63 min) Cette étape de CLHP a permis l'obtention de la molécule I-1, dénommée ligérine (tRz28 min ; 10 mg). Le rendement d'obtention de cette molécule pure, à ce stade non optimisé, est donc de 0,03% par rapport à l'extrait brut de culture de la souche fongique. - Elucidation structurale Les analyses effectuées sur cette molécule ont permis de déterminer la structure chimique de ce composé comme suit : Cl HO '--'"''''o' o O~OH 0 (I-1). Les données de résonance magnétique nucléaire (RMN) 1D (1H et 13C) du composé I-1 sont reportées dans le tableau ci-dessous (analyse réalisée sur un spectromètre 500 MHz avec cryosonde, Bruker): 4' O_ o

O OH 0 RMN 1H, 8 (ppm) dans CDC13 le signal de CHC13 résiduel est calibré à 7.26 ppm RMN 13C, 8 (ppm) dans CDC13 le signal de CDC13 est calibré à 77.04 ppm 1 massif 1.82-1.86 (2H) 23.35 2a(ax) 1.96 m 29 213(éq) 1.40 m 3 - 76.11 4a(ax) 2.39 (large) 43.28 513(ax) 3.28 m 78.44 613(éq) 5.48 m 66.40 7 3.50 d et 3.83 d J2 = 11 Hz 50.43 8 3.26 s (3H) 56.65 1' - 63.99 2' 2.95 t J3 = 6.3 Hz 62.30 3' 2.16 m et 2.44 m 27.43 4' 5.17mJ3=7.4Hz 118.19 5' - 134.81 6' 1.73 s (élargi) 25.82 7' 1.65 s (élargi) 17.92 8' 1.48 s (3H) 22.23 1" 171.49 2" 2.71 s (élargi) (2H) 29 3" 2.71 s (élargi) (2H) 29 4" - 177.18 OH 4.15 - Le point de fusion du composé I-1 a été mesuré à 89,6 °C sur un bloc Electrothermal Thermo Scientific 9300. L'analyse par spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) a permis de déterminer 5 la formule brute du composé I-1, comme étant C20H31C107. (observation de l'adduit sodium [M+Na]+ de m/z = 441,16507 (A mmu=0,02 soit A ppm=0,045).

1.2. Synthèse par voie chimique Le composé I-1 selon l'invention a également été préparé par hémisynthèse à partir de la fumagilline selon le schéma réactionnel suivant : a)N C H/H b)L F/Py Etape a) : La fumagilline 1 (100 mg) a été mise en solution dans du NaOH (0,1N, 10 ml) et agitée à température ambiante pendant 4 h. Le produit final a été extrait avec de l'éther, la solution a été filtrée à travers un mélange NaHCO3/Na2SO4anh. et concentrée sous vide. Le fumagillol 2 a été obtenu sous forme d'une huile jaune (57 mg, rendement = 93%). Etape b) : Le fumagillol 2 (145 mg, 0,514 mmol, 1 éq.) a été mis en contact avec de la diméthylaminopyridine (DMAP) (80 mg, 0,655 mmol, 1,27 éq.) et de l'anhydride succinique (200 mg, 2 mmol, 3,9 éq.) dans 1 mL de pyridine (Py) anhydre. Le tout a été agité pendant 16 h à température ambiante. Une chromatographie sur gel de silice a été réalisée avec une phase mobile consistant en un gradient de polarité croissante (du cyclohexane à un mélange CH2C12/MeOH 10 :1 v/v). Le composé II-1 a été obtenu sous forme d'une huile incolore (130 mg, rendement = 66%). Etape c) : Le composé II-1 (65 mg, 0,17 mmol, 1 éq.) a alors été mis en contact avec de l'acide acétique (50 µl, 54 mg, 0,9 mmol, 5,3 éq.), du LiC1 (30 mg, 0,715 mmol, 4,2 éq.) dans 0,5 mL de tétrahydrofurane (THF) à 0°C sous agitation. Le mélange réactionnel a été réchauffé progressivement à la température ambiante, puis agité pendant 24 h à cette température. Le mélange a alors été soumis à une chromatographie sur gel de silice avec comme phase mobile un gradient allant du cyclohexane à un mélange CH2C12/MeOH 10 :1 (v/v). Le composé I-1 selon l'invention a été obtenu sous forme d'une huile incolore (44 mg, rendement = 62%).

Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) obtenus correspondent à ceux obtenus à partir de la molécule isolée de la souche MMS 351.

II. Evaluation de l'activité biologique des composés selon l'invention I1.1. Evaluation de l'activité biologique in vitro Le composé I-1 a été testé in vitro sur les lignées tumorales POS1 (ostéosarcome de souris), SaOS2 (ostéosarcome humain, ATCC n°HTB-85) et AT6-1 (carcinome prostatique de rat) et sur la lignée non tumorale L929 (fibroblastes murins, ATCC n°CCL-1) aux dix concentrations suivantes : 0,125 ng/mL, 0,625 ng/mL, 1,25 ng/mL, 6,25 ng/mL, 12,5 ng/mL, 25 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL, 500 ng/mL et 1000 ng/mL (N.B. : le composé I-1 n'a pas été testé aux concentrations 0,125 ng/mL et 1,25 ng/mL sur les AT6-1). Les tests de cytotoxicité (XTT - hydroxyde de tétrazolium, Cell proliferation kit II, Roche-Applied Sciences) ont été réalisés conformément aux prescriptions du fabricant, en triplicats.

Les résultats sont présentés sur la Figure 1. Il montre que le composé I-1 présente une activité antiproliférative associée à un effet-dose sur les 4 lignées cellulaires. L'activité du composé sur la lignée tumorale d'ostéosarcome murin POS1 est la plus importante, avec une CI50 de 9 ng/mL. A 1000 ng/mL la diminution de la viabilité cellulaire est de 71%. La diminution de la viabilité cellulaire des SaOS2 est de 48% à 1000 ng/mL. Le composé I-1 présente cependant une activité antiproliférative moins importante sur la lignée non tumorale L929. A la plus forte concentration testée (1000 ng/mL), on note une diminution de la viabilité cellulaire de 34%.

Le composé I-1 présente une activité antiproliférative plus faible sur la lignée de carcinome prostatique de rat AT6-1. A la plus forte concentration testée (1000 ng/mL) on note une diminution de la viabilité cellulaire de 20%.

I1.2. Evaluation de l'activité biologique in vivo Le composé I-1 a été testé in vivo dans un modèle d'ostéosarcome chez la souris immunocompétente selon le protocole décrit dans Ory et al. Cancer, 2005,104(11), 2522-2529. Le modèle consiste en la transplantation de cellules tumorales murines (POS1) à proximité des tibias de souris C3H/HeN. La tumeur se développe environ 14 jours après la transplantation et progresse rapidement. Dans le contexte de l'ostéosarcome, les cellules tumorales utilisées induisent une ostéolyse. Le composé I-1 a été utilisé en traitement préventif dès la transplantation des tumeurs, c'est-à-dire que les injections ont commencées le jour de la transplantation. Pour cela, le mode d'administration du composé (en solution dans une solution de NaCl à 0,9%) est le suivant : 3 injections par semaine par voie intra-péritonéale à 30 mg/kg (10 mL/kg) espacées chacune de 24h, pendant toute la durée de l'étude. Un groupe contrôle négatif a été constitué avec des injections de NaCl 0,9% (véhicule seul). Au début de l'expérimentation (transplantation des fragments de tumeurs), le groupe contrôle était constitué de 12 animaux et le groupe traité avec le composé I-1 de 14. Le volume tumoral a été calculé de la façon suivante : volume = (12xL)/2, avec 1 la petite longueur et L la grand longueur de la tumeur. Les animaux ont été euthanasiés lorsque l'une des conditions suivantes a été observée : - le volume de la tumeur est supérieur à 2500 mm3, - une des longueurs de la tumeur est supérieure à 25 mm, ou - la tumeur nécrose.

Ainsi, la survie des animaux, dépendante de la taille de la tumeur, a pu été évaluée. De même, l'ostéolyse induite par les tumeurs a été déterminée par analyse des clichés radiographiques pris à différents temps au cours des expériences, à savoir à J0, J28 et J57.

Le poids de chaque animal a été déterminé deux fois par semaine pendant toute la durée de l'étude. Les résultats présentés sur la Figure 2 indiquent qu'il n'y a pas de différence significative entre les souris du groupe contrôle et celles du groupe ayant reçu l'administration du composé I-1. Dans les deux cas, l'évolution du poids correspond à un développement physiologique. La survie des animaux est étroitement liée à la vitesse de prolifération des tumeurs. Le taux de survie des souris au cours du temps est donc représenté sur la Figure 3. Cette figure montre clairement que, quelque soit le stade de l'étude, le taux de survie est supérieur pour le groupe de souris ayant reçu le composé I-1 selon l'invention comparativement au groupe de souris contrôle. En outre, à la fin de l'étude réalisée sur 54 jours, il peut être noté que le taux de survie est seulement de 8,3 % dans le groupe contrôle négatif tandis qu'il est de 21,4 % pour le groupe de souris ayant reçu le composé I-1 selon l'invention. Dans les conditions expérimentales testées, le composé I-1 selon l'invention augmente donc le taux de survie des souris comparativement aux souris du groupe contrôle.

Claims (13)

1. REVENDICATIONS1. Composé de formule (I) suivante : X OA1,A 2 O (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour lequel : X représente un atome d'halogène ou un groupe OR3, SR3 ou NR3R4, Al représente un groupe (Ci-Cio)alkyle, de préférence (Ci-C6)alkyle, A2 représente un groupe -COOH, -C(0)O-((Ci-C6)alkyle) ou -C(OH)(PO3H2)2, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe -C(0)-((Ci-C6)alkyle), et R3 et R4 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe (Ci-C6)alkyle, aryle ou aryl-(Ci-C6)alkyle.
2. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que X représente un atome d'halogène, tel qu'un atome de chlore.
3. 3. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que Al représente un groupe éthyle.
4. 4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que R1 représente un atome d'hydrogène.
5. 5. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que A2 représente un groupe COOH.25
6. 6. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il s'agit du composé suivant : O OH O
7. 7. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour son utilisation en tant que médicament.
8. 8. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour son utilisation dans le traitement ou à la prévention d'une tumeur osseuse.
9. 9. Composé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la tumeur osseuse est une tumeur osseuse primitive telle qu'un ostéosarcome, un chondrosarcome et un sarcome d'Ewing ; ou une tumeur osseuse secondaire ou des métastases osseuses telles que les cellules de carcinome mammaire ou prostatique.
10. 10. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 20
11. 11. Composition pharmaceutique selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un autre principe actif tel qu'un agent anticancéreux.
12. 12. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 comprenant les étapes successives suivantes : 25 (a) ouverture de l'époxyde et halogénation du composé de formule (II) suivante : 15O~A1,A O (II) pour laquelle Al et A2 sont tels que définis à la revendication 1, pour donner un composé de formule (Ia) suivante : Hal HO o O~A1,A 2 O (Ia) pour laquelle Al et A2 sont tels que définis à la revendication 1 et Hal représente un atome d'halogène, les composés de formule (Ia) correspondant à des composés de formule (I) selon la revendication 1 avec X = Hal et R1 = H, (b) éventuellement substitution nucléophile de la fonction OH ou Hal du composé de formule (Ia) obtenu à l'étape précédente pour donner un composé de formule (I) pour lequel X Hal et/ou R1 H, et (c) éventuellement salification du composé de formule (I) ou (Ia) obtenu à l'étape précédente pour obtenir un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
13. 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que le composé de formule (II) est obtenu par couplage de la fonction OH du fumagillol de formule 2 suivante : OH 2 avec la fonction COOH de l'acide carboxylique de formule (III) suivante :HO r \ /AI,A 2 O (III) pour laquelle AI et A2 sont tels que définis à la revendication 1.