FR2963021A1 - Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu. - Google Patents
Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu. Download PDFInfo
- Publication number
- FR2963021A1 FR2963021A1 FR1056099A FR1056099A FR2963021A1 FR 2963021 A1 FR2963021 A1 FR 2963021A1 FR 1056099 A FR1056099 A FR 1056099A FR 1056099 A FR1056099 A FR 1056099A FR 2963021 A1 FR2963021 A1 FR 2963021A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- monolith
- enzyme
- catalyst
- continuous flow
- coupling agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 75
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 36
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 37
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 36
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 35
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 35
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 claims description 18
- BPSIOYPQMFLKFR-UHFFFAOYSA-N trimethoxy-[3-(oxiran-2-ylmethoxy)propyl]silane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOCC1CO1 BPSIOYPQMFLKFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 15
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 15
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 13
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 13
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 12
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 12
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 9
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 9
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 8
- YYLGKUPAFFKGRQ-UHFFFAOYSA-N dimethyldiethoxysilane Chemical compound CCO[Si](C)(C)OCC YYLGKUPAFFKGRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 7
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 claims description 6
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 claims description 5
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 4
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 3
- 241001123663 Penicillium expansum Species 0.000 claims description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- WIBFFTLQMKKBLZ-SEYXRHQNSA-N n-butyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCCCC WIBFFTLQMKKBLZ-SEYXRHQNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000344 soap Substances 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 108090000531 Amidohydrolases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004092 Amidohydrolases Human genes 0.000 claims description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims description 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000589513 Burkholderia cepacia Species 0.000 claims description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 2
- 241000146387 Chromobacterium viscosum Species 0.000 claims description 2
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 claims description 2
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 2
- 240000000064 Penicillium roqueforti Species 0.000 claims description 2
- 235000002233 Penicillium roqueforti Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims description 2
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 claims description 2
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 claims description 2
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 claims description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 108010003977 aminoacylase I Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 2
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000009884 interesterification Methods 0.000 claims description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000006276 transfer reaction Methods 0.000 claims description 2
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 28
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 16
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 14
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 description 13
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- -1 -COOH fatty acids Chemical class 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002638 heterogeneous catalyst Substances 0.000 description 6
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 6
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 6
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 6
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 5
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 5
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000984201 Thermomyces lanuginosus Lipase Proteins 0.000 description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 238000007210 heterogeneous catalysis Methods 0.000 description 5
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 5
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000011949 solid catalyst Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 2
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000008162 cooking oil Substances 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004692 intercellular junction Anatomy 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- HBOQXIRUPVQLKX-BBWANDEASA-N 1,2,3-trilinoleoylglycerol Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC HBOQXIRUPVQLKX-BBWANDEASA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000072 Aldehyde-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000003677 Aldehyde-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004031 Carboxy-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000489 Carboxy-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004308 Carboxylic Ester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000863 Carboxylic Ester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100031375 Endothelial lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004867 Hydro-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090001042 Hydro-Lyases Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241001635529 Orius Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 101100386054 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CYS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006087 Silane Coupling Agent Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N Zirconium Chemical compound [Zr] QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M dodecyltrimethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- FMMOOAYVCKXGMF-MURFETPASA-N ethyl linoleate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC FMMOOAYVCKXGMF-MURFETPASA-N 0.000 description 1
- 229940031016 ethyl linoleate Drugs 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000007172 homogeneous catalysis Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012155 injection solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052622 kaolinite Inorganic materials 0.000 description 1
- FMMOOAYVCKXGMF-UHFFFAOYSA-N linoleic acid ethyl ester Natural products CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC FMMOOAYVCKXGMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBOQXIRUPVQLKX-UHFFFAOYSA-N linoleic acid triglyceride Natural products CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC HBOQXIRUPVQLKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 108010031620 mandelonitrile lyase Proteins 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229910003455 mixed metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical class CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025509 omega-amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 1
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- 238000002336 sorption--desorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 101150035983 str1 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004441 surface measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002411 thermogravimetry Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- JJYFFSQOTJCZSJ-UHFFFAOYSA-M triethoxy-[3-(3-methylimidazol-3-ium-1-yl)propyl]silane;chloride Chemical compound [Cl-].CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN1C=C[N+](C)=C1 JJYFFSQOTJCZSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052726 zirconium Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6418—Fatty acids by hydrolysis of fatty acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6454—Glycerides by esterification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/649—Biodiesel, i.e. fatty acid alkyl esters
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Catalysts (AREA)
Abstract
La présente invention est relative à un catalyseur enzymatique hétérogène constitué d'un monolithe de silice macroporeux incorporant une enzyme immobilisée par l'intermédiaire d'un agent de couplage, à un procédé de préparation de ce catalyseur enzymatique, à l'utilisation de ce catalyseur pour la réalisation de réactions chimiques par catalyse enzymatique hétérogène en flux continu et à un procédé de catalyse enzymatique hétérogène en flux continu mettant en œuvre ledit catalyseur.
Description
B10029FR 1 La présente invention est relative à un catalyseur enzymatique hétérogène constitué d'un monolithe de silice macroporeux incorporant une enzyme immobilisée par l'intermédiaire d'un agent de couplage, à un procédé de préparation de ce catalyseur enzymatique, à l'utilisation de ce catalyseur pour la réalisation de réactions chimiques par catalyse enzymatique hétérogène en flux continu et à un procédé de catalyse enzymatique hétérogène en flux continu mettant en oeuvre ledit catalyseur. Etant donné que les carburants dérivés du pétrole sont des sources d'énergie non renouvelable et que leur utilisation génère une accumulation de dioxyde de
io carbone, de polluants et de composés potentiellement cancérigènes dans l'environnement, des efforts considérables ont été déployés pour développer des carburants « verts » alternatifs, c'est-à-dire des carburants renouvelables, biodégradables et non toxiques. Dans ce contexte, le biodiesel (esters méthyliques ou éthyliques d'acides gras), carburant naturel obtenu à partir de végétaux ou
15 d'huiles végétales usagées, a suscité une attention considérable au cours des dix dernières années. Le biodiesel est obtenu par transestérification des triglycérides des huiles végétales avec un alcool tel que le méthanol ou l'éthanol. Les triglycérides des huiles sont des esters de glycérol (encore désigné sous le nom de glycérine) et d'acides gras R-COOH. 20 A titre d'exemple, la réaction de transestérification des triglycérides des huiles par le méthanol peut être représentée par le schéma réactionnel suivant : H3C-OCO-CH2 HO-CH2 R-OCO-CH3
H3C-OCO-CH + 3 CH3OH HO-CH + R-OCO-CH3 I I H3C-OCO-CH2 HO-CH2 R-OCO-CH3
Triglycérides Méthanol Glycérol Esters méthyliques
Il est existe deux grands types de procédé de production de biodiesel : les procédés de catalyse en phase homogène, mettant en oeuvre des catalyseurs
25 solubles dans le milieu réactionnel et les procédés de catalyse en phase hétérogène mettant en oeuvre des catalyseurs non solubles dans le milieu réactionnel. A l'heure actuelle, la production de biodiesel est principalement réalisée par catalyse en phase homogène. Elle consiste à réaliser la transestérification des triglycérides en présence de catalyseurs acides tels que des acides minéraux (HC1, 30 H2SO4) ou des acides sulfoniques, ou bien des catalyseurs basiques tels que des hydroxydes, des alcoolates, des savons de métaux alcalins ou alcalino-terreux ou bien encore des amines de la famille des guanidines par exemple. Une plus grande réactivité est généralement obtenue en milieu basique. Les catalyseurs acides sont B10029FR 2 moins souvent utilisés du fait de leur moindre réactivité (ils sont environ 4000 fois moins rapides que les catalyseurs basiques) et des risques élevés de corrosion des installations industrielles. Ces procédés peuvent être mis en oeuvre en flux discontinus ou en flux continus. Bien que les procédés de production de biodiesel par catalyse en phase homogène alcaline soient peu chers à mettre en oeuvre et très réactifs, ils présentent cependant l'inconvénient majeur d'être très consommateurs en énergie. De plus, la présence à la fois d'eau et d'acides gras dans le milieu réactionnel génère une réaction partielle de saponification entraînant une perte de l'efficacité catalytique (H. Fukuda et al., Journal of Bioscience and Bioengineering, 2001, 92, 405-416). Récemment, des procédés de transestérification enzymatique mettant en oeuvre une lipase ont été présentés comme une alternative intéressante pour la synthèse du biodiesel car ces procédés permettent de s'affranchir des inconvénients rencontrés avec le procédé de catalyse homogène (M.S. Antczak et al., Renewable Energy, 2009, 34, 1185-1194). Les lipases permettent de catalyser l'hydrolyse des huiles végétales de façon spécifique et en conditions douces, d'une part en libérant du glycérol et d'autre part, en présence d'un alcool à chaine courte, de favoriser la formation d'esters à chaînes linéaires. De plus, à l'issue de la réaction, il est facile de récupérer le glycérol, qui est le sous produit de la réaction de transestérification, et la purification des esters d'acides gras est simple à réaliser. Le principal obstacle à l'industrialisation de ces procédés est le coût de production des enzymes, ainsi que le contrôle rigoureux des paramètres réactionnels pendant la réaction de transestérification. Une des solutions à ce problème consiste à immobiliser les enzymes sur un support solide. On parle alors de catalyse enzymatique hétérogène. La catalyse enzymatique hétérogène consiste à réaliser la transestérification des triglycérides des huiles végétales en présence d'un catalyseur insoluble dans le milieu réactionnel. La catalyse enzymatique hétérogène présente des avantages significatifs en matière de respect de l'environnement. En particulier, elle répond aux critères associés aux nouveaux concepts de « chimie verte », car la pureté des produits obtenus, associée à des rendements de synthèse élevés, conduit à une disparition pratiquement totale de rejets polluants. De plus, l'absence de sels dans les produits de réaction, n'impose pas, à la différence de la catalyse en phase homogène, des traitements coûteux de purification, et élargit les possibilités de débouchés industriels.
B10029FR 3 Il a par exemple déjà été proposé, notamment par Chen G. et al., Biodiesel. Appl., Biochem. Biotech., 2006, 132 (1-3), 911-921, un procédé de conversion d'huiles de cuisson en biodiesel par une lipase de Rhizopus orzyae immobilisée sur un support solide. Les auteurs indiquent que dans les conditions les plus optimales, le taux de conversion en esters méthylique est de 88-90 %. La nature du support solide sur lequel la lipase est immobilisée n'est pas indiquée dans cet article. Plus récemment, Li et al., Process Biochem., 2009, 44 (6), 685-688, ont proposé un procédé de conversion enzymatique d'huiles de cuisson en biodiesel en milieu solvant organique utilisant une lipase de Penicillium expansum adsorbée dans un
io gel de silice. Les auteurs indiquent cependant que la présence de l'eau issue de la réaction d'estérification nuit à l'obtention d'un taux élevé en esters méthyliques. Les différents systèmes catalytiques enzymatiques actuellement proposés sont constitués d'un support solide généralement poreux (matrices polymères, silice colloïdale, silicate de calcium, zéolithes, zirconium, kaolinite, verre poreux,
15 alumine, etc...), sur lequel une enzyme est immobilisée. Les supports solides des catalyseurs mis en oeuvre en catalyse hétérogène sont notamment des zéolites acides, des hétéropolyacides, des résines échangeuses ions et des acides sulfoniques immobilisés sur des supports solides, des zircones sulfatées et des oxydes métalliques mixtes. Le plus souvent, les catalyseurs solides dans lesquels le support
20 solide est une zéolithe se présentent sous la forme de poudre et doivent être dispersés dans le milieu réactionnel dans lequel ils doivent être présents pour catalyser une réaction. Compte tenu de la petite taille des particules, la récupération de ces catalyseurs dans le milieu réactionnel est une étape contraignante. Les autres supports solides utilisables en catalyse hétérogène ne donnent par ailleurs pas
25 entièrement satisfaction d'un point de vue de leur résistance mécanique et à la température. Afin d'atteindre des niveaux de production élevés, notamment en biodiesel, il est important de pouvoir faire fonctionner ces catalyseurs hétérogènes en flux continu. 30 Or, tous les supports solides sur lesquels il est possible d'immobiliser des enzymes ne sont cependant pas compatibles avec un procédé de catalyse hétérogène en flux continu. Par ailleurs, les supports utilisables en flux continu ne permettent pas toujours d'atteindre des taux de conversion élevés et stables dans le temps. En effet, la première condition sine qua none est d'avoir un matériau
35 monolithique. La seconde condition est que ce matériau ait une macroporosité interconnectée de façon à permettre l'écoulement du milieu réactionnel. La B10029FR 4 troisième condition est que les propriétés mécaniques du monolithe supportent le flux imposé et la température sur longue durée.
Il existe donc un besoin pour un catalyseur enzymatique hétérogène :
- qui soit utilisable dans un procédé de catalyse en flux continu (ne nécessitant pas d'étape de régénération intermédiaire), notamment pour catalyser la production de biodiesel par transestérification des triglycérides d'acides gras présents dans les huiles végétales ;
- qui soit utilisable sur une longue durée sans perte significative de l'activité catalytique ;
io - qui puisse être préparé selon un procédé simple à mettre en oeuvre,
- qui permettent l'utilisation d'enzymes non purifiées avec une très grande efficacité catalytique.
Ce but atteint par le catalyseur enzymatique hétérogène qui fait l'objet de la présente invention et qui va être décrit ci-après.
15 La présente invention a pour objet un catalyseur enzymatique hétérogène caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un monolithe alvéolaire constitué d'une matrice de silice, ledit monolithe étant exempt de micropores et comprenant des macropores ayant une dimension moyenne dA de 1 µm à 100 µm et des mésopores ayant une dimension moyenne dE de 2 à 50 nm, lesdits macropores étant 20 interconnectés, et dans lequel la surface interne des macropores est fonctionnalisée par un agent de couplage choisi parmi les silanes sur lequel est fixée une enzyme, par l'intermédiaire d'une liaison covalente ou électrostatique.
Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, l'enzyme immobilisée est une enzyme non purifiée. En effet, ainsi que cela est démontré dans 25 les exemples illustrant la présente demande, l'utilisation d'un tel monolithe rend possible la mise en oeuvre d'une enzyme non purifiée pour la catalyse en flux continu d'une réaction chimique, et tout particulièrement, lorsque l'enzyme est une lipase, d'une réaction de transestérification des triglycérides d'acides gras.
Au sens de la présente invention, on entend par « enzyme non purifiée », 30 tout matériel protéique comprenant au moins une enzyme non isolée, n'ayant subi aucune étape de purification.
On entend par « monolithe », un objet solide ayant une dimension moyenne d'au moins 1 mm.
B10029FR Dans ce monolithe, les parois des macropores ont généralement une épaisseur de 0,5 à 40 µm, et de préférence de 2 à 25 µm.
La surface spécifique du monolithe est généralement de 200 à 1000 m2/g environ, préférentiellement de 100 à 300 m2/g environ.
5 Selon l'invention, la liaison assurant la fixation de l'agent de couplage avec la silice est une liaison iono-covalente.
Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, l'agent de couplage est choisi parmi les silanes choisis dans le groupe constitué par le y-glycidoxypropyltriméthoxysilane ; les liquides ioniques silylés tels que par exemples le chlorure de 1-méthyl-3-(3-triéthoxysilylpropyl)imidazolium, 1'hexafluorophosphate de 1-méthyl-3-(3-triéthoxysilylpropyl)imidazolium ; les silanes de formule Si(OR2)3R3 dans laquelle R2 représente un groupement alkyle en C1-C2, et R3 représente un groupement -(CH2OH-CH2OH)q CH2OH ou -(CH2OH-CH2OH)gCH2CH3 dans lesquels q est un nombre entier variant de 1 à 10.
Parmi de tels silanes, le y-glycidoxypropyltriméthoxysilane, également connu sous la dénommination « Glymo », est particulièrement préféré.
La nature de l'enzyme pouvant être immobilisée sur le monolithe de silice par l'intermédiaire de l'agent de couplage n'est pas critique à partir du moment où elle comporte au moins un groupement fonctionnel apte à réagir avec un groupement fonctionnel complémentaire porté par l'agent de couplage pour former une liaison iono-covalente. Lorsque l'agent de couplage utilisé est un liquide ionique silylé, il s'agit de liaisons électrostatiques.
Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, l'enzyme est choisie 25 parmi :
i) les hydrolases (classe E.C. 3 de la classification établie par la Commission des Enzymes, Bruxelles), telles que les estérases (E.C. 3.1), et en particulier les hydrolases d'esters carboxyliques (E.C. 3.1.1) telles que les lipases (E.C. 3.1.1.3 ou triacylglycérol acylhydrolases) ; les amino-acylases (E.C. 3.5.1.14), les amidases 30 (E.C. 3.5.1.4 ; E.C. 3-5-1-3 ou oméga-amidase ; E.C. 3-5-1-11 ou pénicillineamidase) ; les nitrilases (classe E.C. 3.5.5.1.) qui catalysent l'hydrolyse des nitriles en acides carboxyliques ;
ii) les lyases (classe E.C. 4) comprenant notamment les carboxy-lyases (E.C. 4.1.1), les aldéhydes-lyases (E.C. 4.1.2.) telles que les oxynitrilases (classes B10029FR 6 E.C. 4-1-2-10 et E.C. 4-1-2-37) catalysant la synthèse de cyanohydrines chirales ; et les hydro-lyases (E.C. 4.2.1) ;
iii) les isomérases (E.C. 5) comprenant notamment les épimérases et les racémases (E.C. 5.1.), et en particulier les épimérases et les racémases de la classe E.C. 5.1.1. catalysant la formation d'énantiomères d'amino-acides ; et
iv) les oxydoréductases (E.C. 1) comprenant notamment les glucose oxydases (E.C. 1.1.3.4) telles que la glucose oxydase d'Aspergillus piger et les peroxydases (E.C. 1.11.1) telles que la peroxydase de raifort.
Selon une forme de réalisation particulièrement préférée de l'invention, le io catalyseur hétérogène est destiné à être utilisé dans un procédé de production de biodiesel par transestérification de triglycérides d'acides gras et l'enzyme est choisie parmi les lipases d'origine microbienne ou végétale, et en particulier, parmi les lipases de Candida Rugosa, Candida antartica, Aspergillus piger, Aspergillus oryzae, Thermomyces Lanuginosus, Chromobacterium viscosum, Rhizomucor 15 miehei, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas cepacia, Penicillium roqueforti, Penicillium expansum, Rhizopus arrhizus et les lipases de germe de blé.
La quantité d'enzymes immobilisée au sein du catalyseur conforme à l'invention peut être déterminée par analyse thermogravimétrique et par analyse élémentaire. Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, la quantité 20 d'enzyme immobilisée varie de 1 à 40 % massique environ et plus préférentiellement de 3 à 20 % massique environ par rapport à la masse totale du catalyseur.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un catalyseur enzymatique hétérogène conforme à l'invention et tel que défini ci- 25 dessus, ledit procédé comportant les étapes suivantes :
1) une première étape de préparation d'un monolithe alvéolaire constitué d'une matrice de silice, ledit monolithe étant exempt de micropores et comprenant des macropores ayant une dimension moyenne dA de 1 µm à 100 µm et des mésopores ayant une dimension moyenne dE de 2 à 50 nm, lesdits pores étant
30 interconnectés, ladite première étape comprenant les sous-étapes suivantes :
la) la préparation d'une émulsion en introduisant une phase huileuse dans une solution aqueuse de tensioactif,
lb) l'ajout d'une solution aqueuse d'au moins un précurseur d'oxyde de silice à la solution de tensioactif, avant ou après la préparation de 35 l'émulsion, B10029FR 7 1c) l'introduction du mélange réactionnel dans un moule,
1 d) le repos du mélange réactionnel dans le moule jusqu'à la condensation dudit précurseur de silice sous la forme dudit monolithe,
1 d) le lavage dudit monolithe, en flux continu, avec un solvant organique ;
2) une deuxième étape de fonctionnalisation de la surface interne des macropores par un agent de couplage choisi parmi les silanes, par imprégnation du monolithe alvéolaire, en flux continu, par une solution de l'agent de couplage dans un solvant organique ; et
3) une troisième étape d'immobilisation d'au moins une enzyme sur l'agent io de couplage par l'intermédiaire d'une liaison covalente, par imprégnation du monolithe ainsi fonctionnalisé, en flux continu, par une solution aqueuse ou une dispersion aqueuse d'au moins une enzyme.
Selon une forme particulière et préférée de l'invention, le moule utilisé lors de la première étape est lui-même confiné à l'intérieur d'un dispositif permettant la 15 circulation d'un liquide en flux continu, tel que par exemple une colonne de chromatographie.
Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, les flux continus mentionnés aux étapes 2) et 3) dudit procédé sont des flux continus ascendants de façon à optimiser la répartition de l'agent de couplage, puis de l'enzyme dans
20 l'ensemble du volume des macropores du monolithe de silice alvéolaire.
Au cours des étapes 2) et 3), la vitesse du flux varie de préférence de 0,02 à 0,1 mL/min.
L'étape 2) de fonctionnalisation est de préférence réalisée à température ambiante, et pendant une durée de 24 heures et encore plus préférentiellement 25 pendant une durée d'environ 72 heures.
L'étape 3) d'immobilisation est de préférence réalisée à température ambiante, et pendant une durée de 72 heures et encore plus préférentiellement pendant une durée d'environ 120 heures (5jours). Eventuellement, cette étape peut être réitérée deux fois. Dans ce cas, le procédé comprend en outre, avant la 30 réalisation de l'étape 3) pour la seconde fois, une étape supplémentaire d'imprégnation du monolithe en flux continu par une solution d'un aldéhyde, tel que par exemple le glutaraldéhyde. Cette étape entraîne la fixation de l'aldéhyde sur les groupements aminés de l'enzyme préalablement fixée sur l'agent de B10029FR 8 couplage et permet l'immobilisation subséquente d'une deuxième couche d'enzymes.
Selon l'invention, le ou les précurseur(s) de silice sont choisis parmi le tetraméthoxyorthosilane (TMOS), le tetraéthoxyorthosilane (TEOS), le diméthyldiéthoxysilane (DMDES), les mélanges du DMDES avec le TEOS ou le TMOS, les mélanges du TMOS ou du TEOS avec le y-glycidoxypropyltriméthoxysilane, et les mélanges du DMDES ou du y-glycidoxypropyltriméthoxysilane avec un silicate.
Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, le précurseur de silice io est le TEOS.
La concentration en précurseur(s) d'oxyde de silice au sein de la solution aqueuse est, de préférence, supérieure à 10 % en masse par rapport à la masse de la phase aqueuse. Cette concentration varie plus préférentiellement de 17 à 35 % en masse par rapport à la masse de la phase aqueuse.
15 La phase huileuse de l'émulsion préparée à l'étape 1) est de préférence constituée par un ou plusieurs composés choisis parmi les alcanes linéaires ou ramifiés ayant au moins 12 atomes de carbone. A titre d'exemple, on peut citer le dodécane et l'hexadécane. La phase huileuse peut en outre être constituée par une huile de silicone de faible viscosité, c'est-à-dire inférieure à 400 centipoise.
20 La quantité de phase huileuse présente au sein de l'émulsion peut être ajustée en fonction du diamètre des macropores que l'on souhaite obtenir pour la matrice de silice, étant entendu que plus la fraction volumique huile/eau sera élevée, plus le diamètre des gouttelettes d'huile au sein de l'émulsion sera faible et plus le diamètre des macropores sera faible également.
25 De manière générale, la phase huileuse représente de 60 à 90 % en volume par rapport au volume total de l'émulsion. Cette quantité d'huile permet d'obtenir une matrice de silice dans laquelle le diamètre moyen des macropores varie de 1 à 100 µm environ.
Le composé tensioactif peut être un tensioactif cationique choisi notamment 30 parmi le bromure de tetradécyltriméthylammonium (TTAB), le bromure de dodécyltriméthylammonium ou le bromure de cétyl-triméthylammonium. Lorsque le composé tensioactif est cationique, le milieu réactionnel est porté à un pH inférieur à 3, de préférence inférieur à 1. Le bromure de tetradécyltriméthylammonium est particulièrement préféré.
B10029FR 9 Le composé tensioactif peut enfin être un tensioactif non ionique choisi parmi les tensioactifs à tête éthoxylée, et les nonylphénols. Parmi de tels tensioactifs, on peut en particulier citer les copolymères blocs d'éthylèneglycol et de propylèneglycol vendus par exemple sous les dénominations commerciales Pluronic® P123 et Pluronic® F127 par la société BASF. Lorsque le composé tensioactif est non ionique, le milieu réactionnel est porté à un pH supérieur à 10 ou inférieur à 3, de préférence inférieur à 1 et contient en outre, de préférence, du fluorure de sodium afin d'améliorer la condensation des précurseurs de l'oxyde de silice.
La quantité totale de tensioactif présente au sein de l'émulsion peut également être ajustée en fonction du diamètre des macropores que l'on souhaite obtenir dans l'empreinte de silice. Cette quantité est également variable en fonction la nature du tensioactif utilisé.
De manière générale, la quantité de tensioactif varie de 1 à 10 % en masse, 15 de préférence de 3 à 6 % en masse, par rapport à la masse totale de l'émulsion.
L'étape de condensation du ou des précurseur(s) d'oxyde de silice est effectuée avantageusement à une température proche de la température ambiante. La durée de cette étape peut varier de quelques heures (2 à 3 heures) à quelques semaines (2 à 3 semaines) en fonction du pH du milieu réactionnel.
20 Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, le solvant organique utilisé pour le lavage de la matrice de silice obtenue à la fin de la première étape est choisi parmi le tetrahydrofurane, l'acétone et leurs mélanges.
Le solvant de la solution d'agent de couplage utilisé lors de l'étape 2) de fonctionnalisation est un solvant organique, de préférence choisi parmi le 25 chloroforme, le toluène et leurs mélanges. De façon préférentielle, ledit solvant est le chloroforme.
La quantité d'agent de couplage dans la solution utilisée pour l'étape de fonctionnalisation peut être ajustée en fonction du diamètre des macropores du monolithe de silice et de la quantité d'enzyme que l'on souhaite immobiliser. De 30 manière générale, cette quantité peut varier de 0,02 M à 0,5 M, et de préférence de 0,05 M à 0,2 M.
Selon une forme de réalisation particulière et préférée de l'invention, on utilise une solution d'agent de couplage à 0,05 M dans le chloroforme.
Selon une forme de réalisation préférée du procédé conforme à l'invention, 35 le monolithe fonctionnalisé par l'agent de couplage, tel qu'obtenu à l'issue de B10029FR 10 l'étape 2) de fonctionnalisation, est lavé, sous flux continu, avec un solvant organique tel que par exemple le tetrahydrofurane, le chloroforme ou l'acétone, puis ensuite à l'eau distillée.
Egalement de manière préférée, à la fin de l'étape 3) d'immobilisation, le 5 monolithe est de préférence lavée, en flux continu, avec de l'eau distillée.
Le catalyseur enzymatique hétérogène conforme à la présente invention peut être utilisé pour la réalisation de réactions chimiques catalysées en phase hétérogène en flux continu. La nature des réactions chimiques susceptibles d'être catalysées par le catalyseur conforme à l'invention variera bien entendu en fonction
io de la nature de l'enzyme non purifiée qui est immobilisée.
Ainsi lorsque l'enzyme non purifiée est une lipase, le catalyseur conforme à l'invention est utilisé pour catalyser l'hydrolyse de triglycérides d'acides gras, des réactions d'estérification entre un acide et un alcool, des réactions de transestérification entre un ester et un alcool, des réactions d'inter-estérification 15 entre deux esters ou des réactions de transfert d'un groupement acétyle d'un ester sur une amine ou sur un thiol.
En particulier, lorsque l'enzyme est une lipase, ledit catalyseur peut être utilisé par exemple pour catalyser :
- la synthèse du butyloléate qui est un lubrifiant pour les biodiesels ;
20 - l'hydrolyse des dérivés de l'ester glycérolinoléique pour conduire à des savons ou à des détergents :
- des réactions de trans-estérification de triglycérides d'acides gras par un alcool, lesdites réactions étant impliquées dans la synthèse de biodiesels à faible viscosité.
25 Enfin la présente invention a pour objet un procédé de catalyse enzymatique hétérogène mettant en oeuvre ledit catalyseur. Ce procédé est caractérisé en ce qu'il est réalisé par passage d'un milieu réactionnel liquide en flux continu ascendant au travers dudit catalyseur hétérogène.
La vitesse du flux peut varier en fonction de la nature de l'enzyme 30 immobilisée dans le catalyseur. De façon générale, la vitesse du flux varie de 0,02 à 0,2 mL/min.
Selon une forme de réalisation particulière et préférée de l'invention, le procédé de catalyse hétérogène est un procédé de production de biodiésel, alors B10029FR 11 milieu réactionnel comprend des triglycérides d'acides gras et l'enzyme incorporée dans le catalyseur hétérogène est une lipase.
La présente invention est illustrée par les exemples de réalisation suivants, auxquels elle n'est cependant pas limitée.
Les matières premières utilisées dans les exemples qui suivent sont listées ci-après :
- Bromure de tetradécyltriméthylammonium à 98 % (TTAB) : société Fluka ;
- Tetraéthoxyorthosilane à 98 % (TEOS) : société Fluka ;
- Dodécane à 99 % : société Fluka ;
- Agent de couplage : y-glycidoxypropyltriméthoxysilane vendu sous la dénomination commerciale Glymo par la société Sigma Aldrich (St-Louis, MO) ;
- Lipase de Candida Rugosa, E.C.3.1.1.3, Type VII, à 700 U/mg, Société Sigma Chemical (St Louis, MO) ;
- Lipase de Thermomyces Lanuginosus, solution à au moins 100000 U/g, société Sigma Aldrich (St. Louis, MO) ;
- Acide oléique, trilinoléate de glycéryle (98 %), linoléate d'éthyle (> 98%), acide linoléique (> 99 %), n-heptane, éthanol, 1-butanol, Société Sigma Aldrich (Paris, France).
Les autres produits chimiques et solvants utilisés dans les exemples étaient tous de grade analytiques ou de grade HPLC.
Ces matières premières ont été utilisées telles que reçues des fabricants, sans 25 purification supplémentaire.
B10029FR Caractérisations : La macroporosité a été caractérisée de manière qualitative par une technique de microscopie électronique à balayage (MEB) à l'aide d'un microscope électronique à balayage vendu sous la référence JSM-840A par la société JEOL, fonctionnant à 10 kV. Les échantillons ont été revêtus d'or ou de carbone avant leur caractérisation. La macroporosité a été quantifiée par des mesures d'intrusion de mercure, à l'aide d'un appareil commercialisé sous la dénomination Micromeritics Autopore IV, pour atteindre les caractéristiques des cellules macroscopiques composant le io squelette du monolithe. Les mesures de surface spécifique et les caractérisations à l'échelle mésoscopique ont été faites par des techniques d'adsorption-désorption d'azote à l'aide d'un appareil commercialisé sous la dénomination Micromeritics ASAP 2010 ; le dépouillement étant fait par les méthodes de calcul B.E.T ou B.J.H. 15 La mésoporosité a été caractérisée de manière qualitative par une technique de microscopie électronique à transmission (MET) à l'aide d'un microscope vendu sous la référence H7650 par la société Hitachi, ayant une tension d'accélération de 80 kV, et couplé à une caméra vendue sous la référence Orius 11 MPX par la société Gatan Inc. 20 Des analyses par chromatographie liquide haute performance (High Performance Liquid Chromatography » : HPLC) ont été réalisées sur un système équipé de pompes à solvants 600 à injection manuelle (Waters, Milford, MA, USA), en régime isocratique, et en utilisant de l'acétonitrile comme phase mobile. Les composés ont été séparés sur une colonne de chromatographie Atlantis dC18 25 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm) avec une colonne de garde Atlantis dC18 (Waters). Les colonnes ont été utilisées à température ambiante. Le logiciel Empower® (Waters) a été utilisé pour l'acquisition et le traitement des données. Les standards ont été dissous dans le méthyléther de t-butyle (MTBE). Toutes les solutions ont été filtrées au travers d'une membrane de 0,45 µm et dégazées avant usage. Le débit de 30 la phase liquide a été fixé à 1 ml/min et le volume des échantillons injectés était de 20 µl. Les réactions catalysées d'estérification ont été suivies à l'aide d'un réfractomètre vendu sous la référence 410 par la société Waters (Milford, MA, USA). Pour la détection des produits issus des réactions catalysées d'hydrolyse et de trans-estérification, le système a été équipé d'un détecteur ultraviolet (UV) à 35 barrettes de diodes (WAT996, Waters, Milford, MA, USA). Les mesures ont été réalisées à une longueur d'onde de 204 nm, ce qui correspondait à l'absorbance 12 B10029FR 13 maximum. Le gradient d'élution suivant a été utilisé : (Solvant A : acétonitrile, solvant B : MTBE) : A/B : 100/0 (v/v) isocratique pendant 4 min., A/B : 70/30 (v/v) gradient pendant 2 min., A/B : 70/30 (v/v) puis A/B : 100/0 (v/v) gradient pendant 5 min. La colonne a été équilibrée dans les conditions données ci-dessus pendant 10 minutes. Exemple 1 Préparation d'un monolithes de silice intégrant une lipase de Candida Rugosa Dans cet exemple on illustre la préparation d'un monolithe de silice et l'immobilisation d'une lipase de Candida Rugosa dans les macropores de ce io monolithe. 1) Première étape : Synthèse du monolithe de silice (MSi). 5,0 g de TEOS ont été ajoutés à 16,0 g d'une solution aqueuse de TTAB à 35 % massique préalablement acidifiée par 7 g d'une solution d'acide chlorhydrique concentré à 37 %. On a laissé l'hydrolyse se dérouler sous agitation
15 pendant environ 5 minutes jusqu'à obtention d'un milieu hydrophile monophasique (phase aqueuse de l'émulsion). On a ensuite ajouté à cette phase aqueuse, 35,0 g de dodécane (phase huileuse de l'émulsion) au goutte à goutte et sous agitation. Le mélange a été transféré dans un récipient cylindrique en Téflon ® (L = 251,0 mm ; r = 9,65 mm) servant de moule macroscopique, ledit récipient étant lui-même
20 confiné dans une colonne de chromatographie en acier de longueur utile 300 mm et de diamètre interne 19 mm vendue par la société Interchim (Montluçon, France). On a ensuite laissé l'émulsion se condenser sous forme d'un monolithe de silice pendant 1 semaine à température ambiante. Le monolithe de silice ainsi synthétisé a ensuite été lavé pendant 4 jours par circulation en flux continu d'un mélange
25 tetrahydrofurane/acétone (50/50: v/v) à raison de 0,1 mL/min afin d'extraire la phase huileuse du monolithe. Le monolithe ainsi obtenu présentait les caractéristiques morphologiques suivantes : - porosité : 94 % 30 - densité du monolithe : 0,07 g.cm 3 - densité du squelette de silice : 1,23 g.cm 3 - Surface spécifique : 210 m2.g 1 (BET) et 190 m2.g 1 (B.J.H.).
B10029FR 14 Les résultats des mesures d'intrusion au mercure effectuées sur ce monolithe sont présentés sur la figure 1 annexée sur laquelle, le volume différentiel des pores (en unités arbitraires) est fonction du diamètre des pores (en nm).
On peut constater que le monolithe obtenu est exempt de micropores.
2) Deuxième étape : Fonctionnalisation du monolithe de silice par un agent de couplage de type silane
Le monolithe de silice obtenu ci-dessus à l'étape précédente a ensuite été fonctionnalisé par du Glymo.
Pour ce faire, on a fait passer à travers la colonne de chromatographie io contenant le monolithe obtenu ci-dessus à l'étape précédente, en flux continu et en circuit fermé, 200 ml d'une solution de Glymo à 0,05 M dans le chloroforme à une vitesse de 0,1 mL.min-1 pendant 3 jours.
Le monolithe a ensuite été lavé au chloroforme, puis à l'acétone, et enfin à l'eau en flux continu à une vitesse de 0,5 mL.mn-1.
15 On a obtenu ainsi un monolithe de silice dont la surfaces des macropores est fonctionnalisée par du Glymo (MSi-Glymo).
3) Deuxième étape : Immobilisation de la lipase dans les macropores du MSi-Glymo
500 mg de lipase non purifiée de Candida Rugosa (1CR) ont été dispersés 20 dans 200 ml d'eau distillée et mélangés pendant une heure à température ambiante jusqu'à obtention d'une solution. L'immobilisation de la lipase dans les macropores du monolithe MSi-Glymo obtenu ci-dessus à l'étape précédente a ensuite été réalisée par mise en circulation, en circuit fermé et en flux ascendant, de la solution de lipase, à une vitesse de 0,lmL.mn 1 pendant 5 jours à température ambiante.
25 La colonne de chromatographie imprégnée de la solution de lipase a ensuite été laissée au repos pendant 1 mois à 4°C. La colonne de chromatographie renfermant le monolithe a ensuite été lavée, en flux continu ascendant, avec de l'eau distillée, pour éliminer totalement les lipases qui n'auraient pas été immobilisées dans les macropores du monolithe. Le suivi de l'élimination totale 30 des lipases a été effectué par la méthode de Bradford, qui est un dosage colorimétrique des protéines, basé sur le changement d'absorbance (la mesure se fait à 595 nm), se manifestant par le changement de la couleur du bleu de Coomassie après liaison (complexation) avec les acides aminées aromatiques (tryptophane, tyrosine et phénylalanine) et les résidus hydrophobes des acides B10029FR 15 aminés présent dans la ou les protéines (M.M. Bradford, Anal. Biochem., 1976, 72, 248-254).
La colonne de chromatographie a ensuite été lavée par de l'heptane sous flux continu à une vitesse de 0,1 mL.mn-1.
On a obtenu un catalyseur hétérogène conforme à l'invention (MSi-Glymo-1RC), c'est-à-dire un monolithe de silice alvéolaire comportant des macropores et des mésopores, exempt de micropores, et dont les macropores renfermaient une lipase immobilisée par l'intermédiaire du Glymo.
Exemple 2
Préparation d'un monolithes de silice intégrant une lipase de Thermomvices Lanuginosus
Dans cet exemple on illustre la préparation d'un monolithe de silice et l'immobilisation d'une lipase de Thermomyces Lanuginosus dans les macropores de ce monolithe.
4 g de lipase non purifiée de Thermomyces Lanuginosus (1TL) ont été dispersés dans 200 ml d'eau distillée et mélangés pendant une heure à température ambiante jusqu'à obtention d'une solution. L'immobilisation de la lipase dans les macropores d'un monolithe MSi-Glymo tel qu'obtenu ci-dessus à l'issue de l'étape 2) de l'exemple 1 a ensuite été réalisée par mise en circulation, en circuit fermé et en flux ascendant, de la solution de lipase, à une vitesse de 0,1 mL.mn-1 pendant 5 jours à température ambiante.
La colonne de chromatographie imprégnée de la solution de lipase a ensuite été laissée au repos pendant 2 semaines à 4°C, puis lavée à l'eau jusqu'à disparition de l'absorbance selon la méthode de Bradford pour éliminer totalement les lipases non immobilisées.
La colonne de chromatographie renfermant le monolithe a ensuite été imprégnée par circulation en circuit fermé de 200 ml d'une solution aqueuse de glutaraldéhyde à 5 % (poids/volume), sous flux continu ascendant à une vitesse de 0,1 mi-mn-1 pendant 3 jours à température ambiante.
La colonne de chromatographie contenant le monolithe a ensuite à nouveau été imprégnée par une nouvelle solution de lipase 1TL (4 g de lipase pour 200 mL d'eau distillée) dans les mêmes conditions que précédemment.
La colonne de chromatographie a ensuite été lavée à l'eau distillée jusqu'à disparition de l'absorbance selon la méthode de Bradford pour éliminer totalement B10029FR 16 les lipases non immobilisées, puis avec de l'heptane (0,1 mL.mn-t en flux continu ascendant), pendant 3 jours.
On a obtenu un catalyseur hétérogène conforme à l'invention (MSi-Glymo-1TL), c'est-à-dire un monolithe de silice alvéolaire comportant des macropores et des mésopores, exempt de micropores, et dont les macropores renfermaient une lipase immobilisée par l'intermédiaire du Glymo.
Exemple 3
Estérification de l'acide oléique par le 1-butanol, en présence d'un catalyseur enzymatique conforme à l'invention
io Dans cet exemple on a réalisé une réaction catalysée d'estérification de l'acide oléique (1) par le 1-butanol (2) selon le schéma réactionnel suivant : H3C.. ~~(CH2)7 OH (1) (CH2)7 11 I{ O + H3COH (2) Cette réaction conduit à la formation de l'ester butylique de l'acide oléique (3).
15 Un milieu réactionnel contenant 23,0 mmol.L-t d'acide oléique (1) et 46,0 mmol.L-t de 1-butanol (2) dans l'heptane a été préparé.
Le milieu réactionnel a été passé en flux continu ascendant, à 37°C, dans la colonne de chromatographie équipée du catalyseur MSi-Glymo-1CR tel que préparé ci-dessus à l'exemple 1, et à une vitesse initiale de 0,05 mL.mn-t pendant 20 jours, 20 puis à une vitesse de 0,1 mL.mn-t pendant 25 jours, et enfin à une vitesse de 0,05 mL.min-t pendant 5 jours. La formation de l'ester (3) a été suivie par HPLC.
La réaction d'estérification a ainsi été conduite en continu pendant une durée totale de 50 jours.
La figure 2 annexée représente une photographie de l'ensemble du dispositif 25 réactionnel (figure 2a), du catalyseur solide conforme à l'invention au bout de 60 jours de réaction en flux continu : à l'intérieur de son moule et de la colonne de chromatographie (2b et 2c) et du catalyseur solide après 50 jours de catalyse en flux continu, après l'avoir sorti de son moule (2d). On constate qu'après 50 jours d'utilisation en flux continu, l'intégrité du monolithe est conservée. H3C,, ~~(CH2) CH3 (CH2)7 (3) Heptane, 37°C B10029FR 17 La figure 3 annexée représente des photographies prises en MEB du catalyseur en coupe après 50 jours de réaction en flux continu, lavage à l'eau distillée et lyophilisation (grossissement x 200 : 3a ; grossissement x 800 : 3b et grossissement x 1500: 3c). On constate également que la structure macroporeuse du monolithe est préservée. Sur les figures 3a et 3b, on peut observer les macropores interconnecté du monolithe. Sur la figure 3c, la flèche blanche représente la jonction cellulaire interne, tandis que la flèche noire en trait pointillé représente la jonction cellulaire externe.
Les résultats d'estérification obtenus sont reportés sur la figure 4 annexée.
La figure 4a présente le taux de formation de l'ester butylique de l'acide oléique (3), exprimé en pourcentage, en fonction du temps en jours. La figure 4b présente l'activité enzymatique du catalyseur (en tmol.min l.mg 1) en fonction du temps en jours. Les résultats présentés sur cette figure montrent qu'au bout de 50 jours de réaction, l'activité de l'enzyme est encore égale à 50 % de l'activité initiale, ce qui est sans précédent pour un catalyseur enzymatique utilisé en flux continu.
Exemple 4
Transestérification de triglycérides d'acide linoléique contenus dans de l'huile de carthame brute en présence d'un catalyseur enzymatique conforme à l'invention
Dans cet exemple on a réalisé la transestérification des triglycérides d'acide 20 linoléique (4) contenus dans l'huile de carthame brute (Carthamus tinctorius) par l'éthanol (2) selon le schéma réactionnel suivant : Heptane, 40°C puis 50°C OH H3C CH3 + HO OH (6) (5) Cette réaction conduit à la formation de l'ester éthylique de l'acide linoléique (5) et de glycérol (6). Une telle réaction est utilisée pour la production de 25 biodiesels qui sont des esters méthyliques ou éthyliques d'huiles végétales. Un milieu réactionnel contenant 38 % massique d'huile de carthame, 12 % massique d'éthanol et 50 % massique d'heptane a été préparé.
B10029FR 18 Le milieu réactionnel a été passé en flux continu ascendant, à 40°C les 10 premiers jours, puis à 50°C les jours suivants, dans la colonne de chromatographie équipée du catalyseur MSi-Glymo-1TL tel que préparée ci-dessus à l'exemple 2, et à une vitesse de 0,05 mL.mn-1. La formation de l'ester (5) a été suivie par HPLC.
La réaction d'estérification a ainsi été conduite en continu pendant une durée totale de 60 jours.
Les résultats obtenus sont reportés sur la figure 5 annexée sur laquelle le taux de conversion en ester (5) exprimé en pourcentage est fonction du temps en jours.
io Ces résultats montrent que le catalyseur hétérogène MSi-Glymo-1TL peut être utilisé en flux continu pour catalyser la transestérification des triglycérides de l'huile de carthame avec un taux de conversion qui est encore de 20 % au bout de 60 Jours.
L'ensemble des résultats présentés dans ces exemples démontre que les 15 catalyseurs enzymatiques hétérogènes conformes à l'invention permettent de catalyser diverses réactions chimiques en flux continu, avec des rendements supérieurs aux rendements habituellement obtenus dans l'art antérieur.
Claims (20)
- REVENDICATIONS1. Catalyseur enzymatique hétérogène caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un monolithe alvéolaire constitué d'une matrice de silice, ledit monolithe étant exempt de micropores et comprenant des macropores ayant une dimension moyenne dA de 1 µm à 100 µm et des mésopores ayant une dimension moyenne dE de 2 à 50 nm, lesdits macropores étant interconnectés, et dans lequel la surface interne des macropores est fonctionnalisée par un agent de couplage choisi parmi les silanes sur lequel est fixée une enzyme, par l'intermédiaire d'une liaison covalente ou électrostatique.
- 2. Catalyseur selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'enzyme immobilisée est une enzyme non purifiée.
- 3. Catalyseur selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit monolithe a une surface spécifique de 200 à 1000 m2/g.
- 4. Catalyseur selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'agent de couplage est choisi parmi les silanes choisis dans le groupe constitué par le y-glycidoxypropyltriméthoxysilane ; les liquides ioniques silylés et les silanes de formule Si(OR2)3R3 dans laquelle R2 représente un groupement alkyle en C1-C2, et R3 représente un groupement -(CH2OH-CH2OH)q CH2OH ou -(CH2OH-CH2OH)gCH2CH3 dans lesquels q est un nombre entier variant de 1 à 10.
- 5. Catalyseur selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'agent de couplage est le y-glycidoxypropyltriméthoxysilane.
- 6. Catalyseur selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'enzyme est choisie parmi les hydrolases, les lyases, les 25 isomérases et les oxydoréductases.
- 7. Catalyseur selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'enzyme est une hydrolase choisie parmi les estérases.
- 8. Catalyseur selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'enzyme est une estérase choisie parmi les hydrolases d'esters carboxyliques, les amino-30 acylases, les amidases et les nitrilases.
- 9. Catalyseur selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'enzyme est choisie parmi les lipases de Candida Rugosa, Candida antartica, Aspergillus piger, Aspergillus oryzae, Thermomyces Lanuginosus, Chromobacterium viscosum,B10029FR 2 0 Rhizomucor miehei, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas cepacia, Penicillium roqueforti, Penicillium expansum, Rhizopus arrhizus et les lipases de germe de blé.
- 10. Catalyseur selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la quantité d'enzyme immobilisée varie de 1 à 40 % massique par rapport à la masse totale du catalyseur.
- 11. Procédé de préparation d'un catalyseur enzymatique hétérogène tel que défini à l'une quelconque des revendications précédentes, ledit procédé comportant les étapes suivantes : 1) une première étape de préparation d'un monolithe alvéolaire constitué d'une matrice de silice, ledit monolithe étant exempt de micropores et comprenant des macropores ayant une dimension moyenne dA de 1 µm à 100 gm et des mésopores ayant une dimension moyenne dE de 2 à 50 nm, lesdits pores étant interconnectés, ladite première étape comprenant les sous-étapes suivantes : la) la préparation d'une émulsion en introduisant une phase huileuse dans une solution aqueuse de tensioactif, lb) l'ajout d'une solution aqueuse d'au moins un précurseur d'oxyde de silice à la solution de tensioactif, avant ou après la préparation de l'émulsion, 1c) l'introduction du mélange réactionnel dans un moule, ld) le repos du mélange réactionnel dans le moule jusqu'à la condensation dudit précurseur de silice sous la forme dudit monolithe, 1d) le lavage dudit monolithe, en flux continu, avec un solvant organique ; 2) une deuxième étape de fonctionnalisation de la surface interne des macropores par un agent de couplage choisi parmi les silanes, par imprégnation du monolithe alvéolaire, en flux continu, par une solution de l'agent de couplage dans un solvant organique ; et 3) une troisième étape d'immobilisation d'au moins une enzyme sur l'agent de couplage par l'intermédiaire d'une liaison covalente, par imprégnation du monolithe ainsi fonctionnalisé, en flux continu, par une solution aqueuse ou une dispersion aqueuse d'au moins une enzyme.
- 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le moule utilisé lors de la première étape est lui-même confiné à l'intérieur d'un dispositif permettant la circulation d'un liquide en flux continu.B10029FR 2 1
- 13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce que les flux continus mentionnés aux étapes 2) et 3) dudit procédé sont des flux continus ascendants.
- 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 à 13, caractérisé en ce qu'au cours des étapes 2) et 3), la vitesse du flux varie de 0,02 à 0,1 mL/min.
- 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, caractérisé en ce que l'étape 3) d'immobilisation est réitérée deux fois et en ce que le procédé comprend en outre, avant la réalisation de l'étape 3) pour la seconde fois, une étape supplémentaire d'imprégnation du monolithe, en flux continu, par une solution d'un aldéhyde.
- 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 à 15, caractérisé en ce que le ou les précurseur(s) de silice sont choisis parmi le tetraméthoxyorthosilane, le tetraéthoxyorthosilane, le diméthyldiéthoxysilane, les mélanges du diméthyldiéthoxysilane avec le tetraéthoxyorthosilane ou le tetraméthoxyorthosilane, les mélanges du tetraméthoxyorthosilane ou du tetraéthoxyorthosilane avec le y-glycidoxypropyltriméthoxysilane, et les mélanges du diméthyldiéthoxysilane ou du y-glycidoxypropyltriméthoxysilane avec un silicate.
- 17. Procédé selon l'une quelconque des revendications I l à 16, caractérisé en ce que le monolithe fonctionnalisé par l'agent de couplage, tel qu'obtenu à l'issue de l'étape 2) de fonctionnalisation, est lavé, sous flux continu, avec un solvant organique.
- 18. Utilisation d'un catalyseur enzymatique hétérogène tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour la réalisation de réactions chimiques catalysées en phase hétérogène en flux continu.
- 19. Utilisation selon la revendication 18, caractérisée en ce que l'enzyme est une lipase, pour catalyser l'hydrolyse de triglycérides d'acides gras, des réactions d'estérification entre un acide et un alcool, des réactions de transestérification entre un ester et un alcool, des réactions d'inter-estérification entre deux esters ou des réactions de transfert d'un groupement acétyle d'un ester sur une amine ou sur un thiol.
- 20. Utilisation selon la revendication 19, pour catalyser : la synthèse du butyloléate ;B10029FR 22 - l'hydrolyse des dérivés de l'ester glycérolinoléique pour conduire à des savons ou à des détergents ; - des réactions de trans-estérification de triglycérides d'acides gras par un alcool, lesdites réactions étant impliquées dans la synthèse de biodiesels à faible 5 viscosité.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1056099A FR2963021B1 (fr) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu. |
| PCT/FR2011/051785 WO2012022882A1 (fr) | 2010-07-26 | 2011-07-25 | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu |
| US13/808,766 US20130210094A1 (en) | 2010-07-26 | 2011-07-25 | Heterogeneous enzymatic catalyst, process for preparing same and use for continuous flow enzymatic catalysis |
| EP11752286.2A EP2598637A1 (fr) | 2010-07-26 | 2011-07-25 | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1056099A FR2963021B1 (fr) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2963021A1 true FR2963021A1 (fr) | 2012-01-27 |
| FR2963021B1 FR2963021B1 (fr) | 2012-09-07 |
Family
ID=43420718
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR1056099A Expired - Fee Related FR2963021B1 (fr) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu. |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20130210094A1 (fr) |
| EP (1) | EP2598637A1 (fr) |
| FR (1) | FR2963021B1 (fr) |
| WO (1) | WO2012022882A1 (fr) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114736739B (zh) * | 2022-03-21 | 2023-08-25 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种油脂酶法脱酸与功能脂质同步制备的方法 |
-
2010
- 2010-07-26 FR FR1056099A patent/FR2963021B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-07-25 US US13/808,766 patent/US20130210094A1/en not_active Abandoned
- 2011-07-25 WO PCT/FR2011/051785 patent/WO2012022882A1/fr active Application Filing
- 2011-07-25 EP EP11752286.2A patent/EP2598637A1/fr not_active Withdrawn
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| BRUN N ET AL: "Enzyme-based hybrid macroporous foams as highly efficient biocatalysts obtained through integrative chemistry", CHEMISTRY OF MATERIALS 20100824 AMERICAN CHEMICAL SOCIETY USA, vol. 22, no. 16, 24 August 2010 (2010-08-24), pages 4555 - 4562, XP002617752, DOI: DOI:10.1021/CM100823D * |
| KATO KATSUYA ET AL: "Catalytic activity of aryl alcohol oxidase immobilized in 3D-mesoporous silicates", JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 108, no. 4, 1 October 2009 (2009-10-01), pages 310 - 313, XP002570884, ISSN: 1389-1723, [retrieved on 20090826], DOI: DOI:10.1016/J.JBIOSC.2009.04.012 * |
| LOIOLA A R ET AL: "Synthesis and characterization of hierarchical porous materials incorporating a cubic mesoporous phase", JOURNAL OF MATERIALS CHEMISTRY ROYAL SOCIETY OF CHEMISTRY UK, vol. 18, no. 41, November 2008 (2008-11-01), pages 4985 - 4993, XP002617751, ISSN: 0959-9428, DOI: 10.1039/b806674d * |
| SALIS A ET AL: "Role of the support surface on the loading and the activity of Pseudomonas fluorescens lipase used for biodiesel synthesis", JOURNAL OF MOLECULAR CATALYSIS. B, ENZYMATIC, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 57, no. 1-4, 1 May 2009 (2009-05-01), pages 262 - 269, XP025991207, ISSN: 1381-1177, [retrieved on 20081010], DOI: DOI:10.1016/J.MOLCATB.2008.09.015 * |
| SERRA E ET AL: "A comparative study of periodic mesoporous organosilica and different hydrophobic mesoporous silicas for lipase immobilization", MICROPOROUS AND MESOPOROUS MATERIALS, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHING, NEW YORK, US, vol. 132, no. 3, 31 March 2010 (2010-03-31) - 1 August 2010 (2010-08-01), pages 487 - 493, XP027049593, ISSN: 1387-1811, [retrieved on 20100331] * |
| UNGUREANU S ET AL: "Syntheses and characterization of new organically grafted silica foams", COLLOIDS AND SURFACES. A, PHYSICACHEMICAL AND ENGINEERING ASPECTS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 360, no. 1-3, 5 May 2010 (2010-05-05), pages 85 - 93, XP027009735, ISSN: 0927-7757, [retrieved on 20100216] * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2012022882A1 (fr) | 2012-02-23 |
| FR2963021B1 (fr) | 2012-09-07 |
| EP2598637A1 (fr) | 2013-06-05 |
| US20130210094A1 (en) | 2013-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2011004111A1 (fr) | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation | |
| Binhayeeding et al. | Improvement of biodiesel production using waste cooking oil and applying single and mixed immobilised lipases on polyhydroxyalkanoate | |
| Mustranta | Use of lipases in the resolution of racemic ibuprofen | |
| Guldhe et al. | Advances in synthesis of biodiesel via enzyme catalysis: Novel and sustainable approaches | |
| JP5737943B2 (ja) | 脂肪酸アルキルエステルを合成するための強固な多酵素製剤 | |
| KR101556799B1 (ko) | 개량되고 안정화된 활성을 갖는 고정된 계면 효소 | |
| Yücel et al. | Lipase immobilization and production of fatty acid methyl esters from canola oil using immobilized lipase | |
| CA2842032C (fr) | Transesterification enzymatique par des lipases immobilisees sur des resines hydrophobes dans des solutions aqueuses | |
| US10689607B2 (en) | Enzymatic transesterification/esterification processes employing lipases immobilized on hydrophobic resins in the presence of water solutions | |
| Sonare et al. | Transesterification of used sunflower oil using immobilized enzyme | |
| Bhatt et al. | Combining technology with liquid‐formulated lipases for in‐spec biodiesel production | |
| Aghababaie et al. | Two phase enzymatic membrane reactor for the production of biodiesel from crude Eruca sativa oil | |
| US9422584B2 (en) | Fatty acid esterification process | |
| WO2010100366A2 (fr) | Procède de production d'ester d'acide ricinoléique par transestérification enzymatique sélective | |
| FR2963021A1 (fr) | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation pour la catalyse enzymatique en flux continu. | |
| Alonazi et al. | Combined immobilized lipases for effective biodiesel production from spent coffee grounds | |
| Salis et al. | Use of lipases for the production of biodiesel | |
| Kovalenko et al. | Catalytic properties of lipase adsorbed on nanocarbon-containing mesoporous silica in esterification and transesterification reactions | |
| Taher et al. | Emerging green technologies for biodiesel production | |
| Makareviciene et al. | Application of methyl formate in the process of biotechnological interesterification of triglycerides for the production of biodiesel | |
| JP5405193B2 (ja) | バイオ燃料の製造方法 | |
| KR20080090855A (ko) | 초임계 상태에서 리파아제를 이용하여 바이오디젤을생산하는 방법 | |
| dos Santos Barbosa et al. | Influence of additives in the transesterification of crude coconut oil catalyzed by Burkholderia cepacia lipase immobilized onto agro-industrial waste fibers | |
| Banerjee et al. | Ionic liquid-mediated biocatalyzed organic transformations | |
| Charuchinda et al. | Immobilization of the Candida rugosa lipase onto a Scirpus grossus Lf fiber as biocatalyst for biodiesel synthesis via hydrolysis-esterification |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20150331 |