JP5737943B2 - 脂肪酸アルキルエステルを合成するための強固な多酵素製剤 - Google Patents
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Description
1.シリカ及び不溶性ポリマーなどの固体担体への酵素の物理的吸着。
2.イオン交換樹脂への吸着。
3.酵素と、エポキシ化無機又はポリマー担体などの固体担体材料との共有結合。
4.グローイングポリマー内での酵素の捕捉。
5.膜反応器内又は半透膜ゲル内での酵素の拘束。
6.架橋結合酵素結晶(CLEC)又は凝集物(CLEA)。
1.反応器内に生体触媒を保持するが、反応媒体を反応器の外側に浸透させる、底面焼結ガラスフィルタを備えた撹拌済みのタンク反応器。そのような反応器構成は、固定化酵素から自己脱着される副産物、特にグリセロールを反応器の底面に沈め、焼結ガラスフィルタを通して外側に浸透させる。結果は、脱着形成されたグリセロール及び同様に過剰な水の、反応媒体からの連続的な除去であり、合成に対する反応のシフトをもたらし、それによって98%よりも高い変換率が達成される。この反応器内で使用された生体触媒は、その位置特異性並びにその由来を考慮して、単一又は多数のタイプのリパーゼを含んでもよい。
2.底面焼結ガラスフィルタを備えた2個の連続した撹拌済みタンク反応器。沈降タンク又は遠心分離器を、これら2個の反応器の間に使用する。第1の反応器は、単一又は多数のタイプのリパーゼを含む固定化生体触媒を含有してもよい。両方の反応器の間の沈降タンク又は遠心分離器の役割は、反応媒体から形成されたグリセロール及び過剰な水を除去することであり、それによって、98%よりも高い値への、原材料からそれに対応する脂肪酸アルキルエステルへの変換率の上昇が、第2の反応器内で妥当な反応時間でもたらされる。
ポリマー担体に固定化された単一リパーゼの調製
サーモマイセス・ラヌギノサ由来のリパーゼ((TL)、リポザイムTL 100Lを1ml)、又はサーモマイセス・ラヌギノーゼ由来のリパーゼ濃縮物(Novozymes、デンマーク)を、0.05M及びpH8のTRIS緩衝溶液(12ml)中に可溶化した。リパーゼ溶液を、室温で8時間振盪し又は撹拌することによって、酵素担体(1g、使用した様々な担体を、以下の表1に示す。)と接触させた。好ましくは、n−ヘキサンなどの疎水性有機溶媒を、固定化媒体に、それぞれ緩衝液:有機溶媒が1:10〜10:1になるよう添加する。固定化酵素を含有する担体を濾別し、デシケータ内で一晩乾燥することにより、固定化リパーゼが得られた。同じ手順を、シュードモナス種由来のリパーゼ(リパーゼPS 100mg、天野エンザイム、日本)、アルカリゲネス種由来のリパーゼ(リパーゼQLM 50mg、名糖産業、日本)、カンジダ・アンタークティカリパーゼA(CALA 1ml、Novozymes、デンマーク)、又はカンジダ・アンタークティカリパーゼB濃縮物(CALB−L 1ml、Novozymes、デンマーク)を使用して、繰り返した。これらの固定化リパーゼは、本発明の新規な方法において別々に使用することができ、又は、ワンポット反応系で若しくは連続2段階以上のプロセスで、種々の重量比で組み合せて使用することができ、それによって、脂肪酸源とアルコール、典型的にはバイオディーゼル用のメタノールとのエステル化/エステル交換反応を介して脂肪酸アルキルエステル(バイオディーゼル)を調製する。バイオディーゼルを生成するための反応器モードは、撹拌タンク反応器内でバッチごとに又は生体触媒がカラムに充填されている場合には連続的に、操作することができる。
多種リパーゼ固定化生体触媒の調製
サーモマイセス・ラヌギノサ由来のリパーゼ(リポザイムTL 100Lを1ml、Novozymes、デンマーク)、及びカンジダ・アンタークティカBリパーゼ濃縮物(1ml、CALB−L、Novozymes、デンマーク)を、0.05M及びpH8の緩衝溶液(12ml)中に可溶化した。両方の酵素を含有する溶液を、共にRohm及びHaas、米国(1g)のAmberlite XAD 7HP又はAmberlite XAD 1600などの担体と、室温で8時間振盪し又は撹拌することによって接触させた。好ましくは、n−ヘキサンなどの疎水性有機溶媒を、固定化媒体に、それぞれ緩衝液:有機溶媒が1:10〜10:1になるよう添加する。固定化酵素を含有する担体を濾別し、デシケータ内で一晩乾燥することにより、固定化多種リパーゼ製剤が得られた。同じ手順を、リパーゼPS(100mg、天野エンザイム、日本)及びカンジダ・アンタークティカBリパーゼ濃縮物(1ml、CALB−L、Novozymes、デンマーク)、リパーゼPS(100mg、天野エンザイム、日本)及びサーモマイセス・ラヌギノサリパーゼ濃縮物(1ml、CALB−L、Novozyme、デンマーク)を共に含有する溶液を使用して、繰り返した。その他の多酵素系は、例えばアルカリゲネス種由来のリパーゼ(50mg、リパーゼQLM、名糖産業、日本)をリパーゼPS又はリパーゼTLと組み合せて使用するなどして、調製することができる。その他のリパーゼ製剤は、同様の又は異なる担体に全て固定化された3種の異なる酵素、特にリパーゼTL、CAL−A、及びCAL−B、又はリパーゼPS、CAL−A、及びCAL−Bを含有していてもよい。
固定化リパーゼを使用した脂肪酸メチルエステル(FAME、バイオディーゼル)の調製
表1は、異なる担体に別々にそれぞれ固定化された、サーモマイセス・ラヌギノーゼ(TL)、シュードモナス種(PS)、及びカンジダ・アンタークティカB(CALB)由来のリパーゼを使用した、エステル交換反応で形成された脂肪酸メチルエステルのパーセンテージ(FAME%)を示す。反応は、多孔度が70〜100μmの焼結ガラスフィルタを底面に備えた二重ジャケット付きガラス反応器内で、固定化リパーゼ(30g)を大豆油(220g)及びメチルアルコール(23.9g)(化学量論比は、油トリグリセリドとメタノールとの間でそれぞれ1:3である。)に添加することにより、実施した。メタノールを、各バッチが化学量論量の1/3であるバッチに添加し、又は1滴ずつ滴定した。全ての反応系中の水の濃度は、0.1〜2%の範囲にあった。反応系を、30℃で機械的に撹拌する。原材料の変換プロセスは、上記条件下での8時間の反応時間の後にGCを使用して、脂肪酸メチルエステル、部分グリセリド、及びトリグリセリドのパーセンテージを測定することにより決定される。
固定化多種リパーゼ製剤を使用した脂肪酸メチルエステル(バイオディーゼル)の合成
表2は、別々に又はワンポット系内の同じ担体に一緒に固定化された、サーモマイセス・ラヌギノーゼ(TL)リパーゼ及びカンジダ・アンタークティカリパーゼB(CALB)、又はシュードモナス種(PS)リパーゼ及びカンジダ・アンタークティカリパーゼBを含む、Amberlite XAD 7HPに固定化された多種リパーゼ製剤を使用した、エステル交換反応で形成された脂肪酸メチルエステルのパーセンテージ(FAME%)を示す。また、CALBの代わりに、アルカリゲネス種由来のリパーゼ(リパーゼQLM、名糖産業、日本)を、リパーゼPS又はTLと組み合せて使用した。反応は、多孔度70〜100μmの焼結ガラスフィルタを底面に備えた二重ジャケット付きガラス反応器内で、固定化リパーゼ製剤(30g)を大豆油(220g)及びメチルアルコール(23.9g)に添加することにより実施した。メタノールをバッチごとに添加したが、各バッチは化学量論量の1/3であり、又は1滴ずつ滴定した。反応系を、30℃で機械的に撹拌した。原材料の変換の進行は、上述の条件下で2、3、及び6時間の反応時間の後にガスクロマトグラフィ(GC)を使用して、脂肪酸メチルエステル、部分グリセリド、及びトリグリセリドのパーセンテージを測定することにより決定される。
同じバッチの生体触媒を使用したバッチ反応における固定化リパーゼの反復エステル化活性
生体活性のエステル化活性は、Amberlite XAD 7HP(250mg)に固定化された3種のリパーゼ(TL、PS、CALB)の1種を、オレイン酸(2.5g)及び化学量論の1/3のメタノール(285mg)が入っているスクリューキャップバイアルに添加することによって試験した。メタノールの量の残り2/3を、2時間及び4時間の反応時間の後に、2つの均等なバッチに添加した。反応混合物の組成を、6時間後に分析した。反応媒体をバイアルから廃棄し、新しいバッチの新鮮な基質を、同じバッチの酵素を使用して導入した。図1は、Amberlite XAD 7HPにそれぞれ個別に固定化された同じバッチのリパーゼPS、リパーゼTL、又はCALBを使用した、50回の反応サイクルにおける反応媒体中のFAME%を示す。
同じバッチの生体触媒を使用したバッチ反応における固定化リパーゼの反復エステル交換活性
反復使用における生体触媒のエステル交換活性は、Amberlite XAD 7HPに固定化された3種のリパーゼの1種(250mg)を、大豆油(2.5g)及びメタノールの化学量論量の1/3(91g)が入っているスクリューキャップバイアルに添加することによって試験した。メタノールの量の残り2/3は、2時間及び4時間の反応時間の後に2つの均等なバッチに添加した。反応混合物の組成を6時間後に分析した。反応媒体をバイアルから廃棄し、新しいバッチの新鮮な基質を、同じバッチの酵素を使用して導入した。
脂肪酸及びアルコールのエステル化反応のための、エステル交換活性欠如CALBの使用
例6に記述された、11回の反応サイクル後にそのエステル交換活性を失ったAmberlite XAD 7HPに固定化されたCALB(250mg)を、オレイン酸(2.5g)及びメタノール(285mg)のエステル化に使用した。同じバッチの生体触媒を、10回の反応サイクルに使用した。予期せぬことに、分析結果は、生体触媒が高いエステル化活性を有することを示すが、先の実験ではそのエステル交換活性を失ったことが示される。同じバッチの生体触媒を使用した、10回の連続実験操作の平均FAME%は、85%であった。
部分グリセリド及びアルコールのエステル交換反応のための、エステル交換活性欠如CALBの使用
例6に記述された、11回の反応サイクル後にそのエステル交換活性を失ったAmberlite XAD 7HPに固定化されたCALB(250mg)を、モノオレイン(3g)及びメタノール(270mg)のエステル交換に使用した。同じバッチの生体触媒を、10回の反応サイクルに使用した。予期せぬことに、分析結果は、生体触媒が部分グリセリド及びメタノールに対して高いエステル交換活性を有することを示すが、先の実験ではトリグリセリド及びメタノールのそのエステル交換活性を失ったことが示される。同じバッチの生体触媒を使用した、10回の連続実験操作の平均FAME%は、80%よりも高かった。
同じバッチの生体触媒を使用したバッチ反応における、固定化多種リパーゼ製剤の反復エステル交換活性
固定化多種リパーゼ製剤のエステル交換活性は、例1及び2による、全てがAmberlite XAD 7HPに固定化されたリパーゼPS及びCALB又はリパーゼTL及びCALB(250mg)を、大豆油(2.5g)及びメタノールの化学量論量の1/3(91mg)が入っているスクリューキャップバイアルに添加することによって試験した。メタノールの量の残り2/3を、2時間及び4時間の反応時間の後に2つの均等なバッチに添加した。反応媒体を、反応の6時間後にバイアルから廃棄し、新しいバッチの新鮮な基質を、同じバッチの酵素を使用して導入した。図3は、50サイクル中に同じバッチの生体触媒を使用した反応媒体でのFAME%を示す。図3に示される結果は、両方の多種リパーゼ製剤のエステル交換活性が、予期せぬことに、同じバッチの生体触媒を使用した50回の反応サイクルで安定であることを示す。
2段階プロセスで固定化多種リパーゼ製剤を使用した、脂肪酸メチルエステル(バイオディーゼル)の合成
表3は、別々に固定化され又はワンポット系内に固定化されたリパーゼTL及びCALB又はリパーゼPS及びCALBを含む、Amberlite XAD 7HPに固定化された多種リパーゼ製剤を使用した、エステル交換反応媒体のFAME%を示す。反応は、多孔度が70〜100μmの底面に焼結ガラスフィルタを備えた二重ジャケット付きガラス反応器内で、固定化リパーゼ製剤(30g)を大豆油(220g)及びメチルアルコール(23.9g)に添加することにより実施した。メタノールをバッチに添加し、各バッチは化学量論量の1/3のものであり、又は1滴ずつ滴定した。反応系を、30℃で2時間、機械的に撹拌した。基質変換率が好ましくは70%よりも高い値に達した場合、窒素圧力を加えることによって、又は焼結ガラスフィルタへのその重力によって、反応媒体を反応器底面から濾過する。反応媒体を、遠心分離にかけ、又は相分離が生ずるようにする。グリセロールを含有する下相を除去し、未反応のグリセリド及びFAMEを含有する有機相を、固定化リパーゼを載せた第2の連続底面焼結ガラスフィルタに導入する。第2の反応器中の媒体を、最初に必要とされたメタノールの化学量論量の3分の1と共に、30℃で2時間機械的に撹拌する。反応の進行は、2時間後にGCを使用して、脂肪酸メチルエステル、部分グリセリド、及びトリグリセリドのパーセンテージを測定することによって追跡した。
同じ生体触媒を連続バッチで使用する2段階プロセスで固定化多種リパーゼ製剤を使用した、脂肪酸メチルエステル(バイオディーゼル)の合成
図4は、別々に又はワンポット系内に固定化されたリパーゼPS及びCALBを含む、Amberlite XAD 7HPに固定化された多種リパーゼ製剤を使用した、エステル交換反応媒体に関する、段階1及び2でのFAME%を示す。反応は、底面に多孔度70〜100μmの焼結ガラスフィルタを備えた二重ジャケット付きガラス反応器内で、生体触媒(30g)を大豆油(220g)及びメチルアルコール(23.9g)に添加することによって実施した。メタノールをバッチに添加し、各バッチは化学量論量の1/3のものであり、又は1滴ずつ滴定した。反応系を、30℃で2時間、機械的に撹拌した。基質変換率が好ましくは80%超に達する場合、反応媒体を、窒素圧力によって又は焼結ガラスフィルタへのその重力によって、濾過する。反応媒体を、遠心分離にかけ、又は相分離が生ずるようにする。グリセロールを含有する下相を除去し、未反応のグリセリド及びFAMEを含有する有機相を、同じ生体触媒を載せた第2の連続底面焼結ガラスフィルタに導入する。第2の反応器内の媒体を、最初に必要とされたメタノールの化学量論量の3分の1と共に、30℃で2時間、機械的に撹拌する。反応媒体を、同じ生体触媒を維持する反応器から除去する。この手順を、少なくとも100サイクル繰り返した。図4は、2段階プロセスの各サイクルにおける、2時間の反応時間の後のFAME%を示す。図4の結果は、第1の段階の後のFAMEのパーセンテージが、平均して約88%であり、第2のステップの後に平均して約99%に達したことを示す。予期せぬことに、結果は、多種リパーゼ固定化製剤の活性が非常に高く、著しい活性損失は、同じバッチの生体触媒を使用する100回の反応サイクル中に観察されなかったことを示す。
異なる基質特異性のリパーゼを使用したバイオディーゼルの生成
表4は、様々な基質選択性の種々の多種リパーゼ製剤を使用した、大豆油トリグリセリド及びメタノールのエステル交換反応のための、異なる時間間隔の後に形成された脂肪酸メチルエステルのパーセンテージを示す。リパーゼは、Amberlite XAD 1600などの多孔質疎水性担体を使用して、例2に記述した方法より固定化させた。
表4:例2により調製されたAmberlite XAD1600(15重量%)に固定化された、異なる多種リパーゼ製剤を使用した、大豆油トリグリセリド(2.5g)及びメタノール(285mg)を含むエステル交換反応系に関する、異なる時間間隔の後に形成された脂肪酸メチルエステルのパーセンテージ。メタノールを、2時間の反応時間中に、3つの均等なバッチに添加した。反応混合物を振盪し、30℃でインキュベートした。種々の酵素製剤間の重量比は、60%PS:40%CALB及び60%PS:20%CALB:20%CALAであった。TL:CALB及びTL:CALB:CALAの間も同様の重量比を使用した。
Claims (23)
- 無溶媒微水系内で、脂肪酸のアルキルエステルを調製するための方法であって、
脂肪酸トリグリセリド源を提供するステップと、遊離アルコール又はアルコール供与体を、リパーゼ製剤の存在下で前記脂肪酸源に段階的に添加するステップと、前記脂肪酸トリグリセリド源中のトリグリセリドが脂肪酸アルキルエステルに変換されるまで、適切な条件下で反応を進行させるステップとを含み、前記リパーゼ製剤は、少なくとも2種のリパーゼを含むものであり、前記リパーゼは、疎水性の脂肪族ポリマーベースの担体及び疎水性の芳香族ポリマーベースの担体のいずれか1種である担体に別々に又は一緒に固定化されており、前記リパーゼの少なくとも1種は、部分グリセリドに対して高い親和性を有しており、前記リパーゼの少なくとも1種はsn−1,3位特異的であり、前記リパーゼ製剤は、任意選択でグリセロール主鎖のsn−2位に対して高い選択性を有する第3のリパーゼを含み、前記sn−1,3位特異的リパーゼは、サーモマイセス・ラヌギノーゼ(Thermomyces lanuginose)、リゾムコア・ミーヘイ(Rhizomucor miehei)、ムコア・ミーヘイ(Mucor miehei)、シュードモナス種(Pseudomonas sp.)、リゾープス種(Rhizopus sp.)、ムコア・ジャバニカス(Mucor java nicus)、ペニシリウム・ロックフォルティ(Penicillium roqueforti)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アクロモバクター種(Acromobacter sp.)、及びブルクホルデリア種(Burkholderia sp.)のいずれかに由来するリパーゼからから選択され、部分グリセリドに対して高い親和性を有する前記リパーゼは、カンジダ・アンタークティカB(Candida antarctica B)、カンジダ・アンタークティカA(Candida antarctica A)、アルカリゲネス種(Alcaligenes sp.)、及びペニシリウム・カメムベルティー(Penicillium camembertii)のいずれかに由来するリパーゼから選択される上記方法。 - 前記アルコールが、短鎖アルコールであり、前記脂肪酸アルキルエステルが、脂肪酸短鎖アルキルエステルである、請求項1に記載の方法。
- 前記アルコールが、メタノールであり、前記脂肪酸アルキルエステルが、脂肪酸メチルエステル(FAME)である、請求項1又は2に記載の方法。
- sn−2位に対して高い選択性を有する前記第3のリパーゼが、カンジダ・アンタークティカA(Candida antarctica A)又はシュードザイマ種(Pseudozyma sp.)に由来する、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- 前記脂肪酸源が、大豆油、キャノーラ油、菜種油、オリーブ油、ヒマシ油、パーム油、ヒマワリ油、落花生油、綿実油、ジャトロファ油、動物由来脂肪、廃食用油、非食用植物源由来の油トリグリセリドの少なくとも1種、又はこれらの少なくとも2種の任意の混合物を含む、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
- 前記リパーゼが、前記担体に一緒に固定化されている、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- 前記リパーゼのそれぞれが1つの前記担体に固定化されており、前記リパーゼが固定化されている担体は同一であり又は異なっている、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- 前記担体が、多孔質担体であり、前記担体は、エポキシ及び/又はアルデヒド基から選択された活性官能基、又はイオン性基を任意選択で含有してもよい、請求項1から7のいずれかに記載の方法。
- 無溶媒微水系内で、脂肪酸メチルエステルを調製するための方法であって、脂肪酸トリグリセリド源を提供するステップと、メタノールを、リパーゼ製剤の存在下で前記脂肪酸トリグリセリド源に段階的に添加するステップと、前記脂肪酸トリグリセリド源に含まれる脂肪酸アシル基から脂肪酸メチルエステルへの変換率が少なくとも70%に達するまで、適切な条件下で反応を進行させるステップとを含み、前記リパーゼ製剤は、担体に一緒に若しくは別々に固定化された少なくとも2種のリパーゼの混合物を含み、前記担体は、疎水性の脂肪族ポリマーベースの担体及び疎水性の芳香族ポリマーベースの担体のいずれか1種であり、前記リパーゼの少なくとも1種は、部分グリセリドに対する親和性を増し、前記リパーゼの少なくとも1種はsn−1,3−位特異的であり、前記リパーゼ製剤は、ランダムリパーゼよりもsn−2位に対して高い選択性を有する第3のリパーゼを任意に含む上記方法。
- 前記リパーゼ製剤が、少なくとも3種のリパーゼを含み、前記リパーゼは、前記担体に別々に又は一緒に固定化されている、請求項9に記載の方法。
- 前記第3のリパーゼは、ランダムリパーゼよりもsn−2位に対して高い選択性を有する、請求項9又は10に記載の方法。
- 前記sn−1,3位特異的リパーゼが、サーモマイセス・ラヌギノーゼ(Thermomyces lanuginose)、リゾムコア・ミーヘイ(Rhizomucor miehei)、ムコア・ミーヘイ(Mucor miehei)、シュードモナス種(Pseudomonas sp.)、リゾープス種(Rhizopus sp.)、ムコア・ジャバニカス(Mucor java nicus)、ペニシリウム・ロックフォルティ(Penicillium roqueforti)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アクロモバクター種(Acromobacter sp.)、及びブルクホルデリア種(Burkholderia sp.)のいずれかに由来するリパーゼから選択され、部分グリセリドに対して高い親和性を有する前記リパーゼは、カンジダ・アンタークティカB(Candida antarctica B)、アルカリゲネス種(Alcaligenes sp.)、及びペニシリウム・カメムベルティー(Penicillium camembertii)のいずれかに由来するリパーゼから選択され、ランダムリパーゼよりもsn−2位に対して高い選択性を有する前記任意選択の第3のリパーゼは、カンジダ・アンタークティカA(Candida antarctica A)及びシュードザイマ種(Pseudozyma sp.)のいずれかに由来する、請求項9に記載の方法。
- 前記脂肪酸源が、大豆油、キャノーラ油、菜種油、オリーブ油、ヒマシ油、パーム油、ヒマワリ油、落花生油、綿実油、ジャトロファ油、動物由来脂肪、廃食用油、非食用植物源由来の油トリグリセリドの少なくとも1種、又はこれらの少なくとも2種の任意の混合物を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記リパーゼのそれぞれが、各前記担体に固定化され、前記リパーゼが固定化される担体は、同一又は異なっている、請求項9に記載の方法。
- 請求項1から11までのいずれか一項に記載の方法において使用する際の不溶性担体に固定化されたリパーゼの混合物を調製するための方法であって、前記不溶性担体が、多孔質で網状の疎水性脂肪族又は疎水性芳香族ポリマーベースの担体であり、前記混合物は、カンジダ・アンタークティカB(Candida antarctica B)由来のリパーゼと、シュードモナス種(Pseudomonas sp.)、アルカリゲネス種(Alcaligenes sp.)、ブルクホルデリア種(Burkholderia sp.)、及びサーモマイセス・ラヌギノサ(Thermomyces lanuginosa)のいずれか由来の少なくとも1種のリパーゼとを含み、
(a)カンジダ・アンタークティカB(Candida antarctica B)由来のリパーゼと、シュードモナス種(Pseudomonas sp.)、アルカリゲネス種(Alcaligenes sp.)、ブルクホルデリア種(Burkholderia sp.)、及びサーモマイセス・ラヌギノサ(Thermomyces lanuginosa)のいずれか由来の少なくとも1種のリパーゼとを含有する緩衝溶液を、疎水性の脂肪族ポリマーベースの担体及び疎水性の芳香族ポリマーベースの担体であるポリマー担体に接触させるステップ;
(b)ステップ(a)で得られた系を少なくとも4時間、室温で混合するステップ;
(c)固定化されたリパーゼ混合物を濾別し、乾燥して含水率を5%未満にするステップ
を含む上記方法。 - 請求項15の方法において、ステップ(a)が、緩衝液:有機溶媒が1:10から10:1の比でそれぞれ固定化媒体に添加された疎水性有機溶媒の存在下で実施される方法。
- 前記有機溶媒が、n−ヘキサンである請求項16の方法。
- 前記脂肪酸アルキルエステルが、脂肪酸メチル、エチル、イソプロピル、又はブチルエステルである、請求項1及び7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂肪酸アルキルエステルが、脂肪酸ヘキシル、n−オクチル、n−デシル、n−ドデシル、n−テトラデシル、n−ヘキサデシル、又はn−オクタデシルエステルである、請求項1及び7のいずれか一項に記載の方法。
- 脂肪酸短鎖アルキルエステルを無溶媒系内で調製するための方法であって、脂肪酸トリグリセリド源を提供するステップと、遊離短鎖アルコール又は短鎖アルコール供与体を、リパーゼ製剤の存在下で前記脂肪酸トリグリセリド源に段階的に添加するステップと、前記脂肪酸トリグリセリド源中のトリグリセリドが脂肪酸短鎖アルキルエステルに変換されるまで、適切な条件下で反応を進行させるステップとを含み、前記リパーゼ製剤は、第1のリパーゼ及び第2のリパーゼを含み、前記リパーゼは、疎水性の脂肪族ポリマーベースの担体及び疎水性の芳香族ポリマーベースの担体のいずれか1種である疎水性担体に別々に又は一緒に固定化されるものであり、前記第1のリパーゼは、部分グリセリドに対するその活性に比べ、トリグリセリドに対してより高いエステル交換活性を示し、前記第2のリパーゼは、トリグリセリドに対するその活性に比べ、部分グリセリドに対してより高いエステル交換活性を示し、前記2種のリパーゼは、最終生成物を得るのにそれらのエステル交換活性において相乗効果を示す上記方法。
- 脂肪酸短鎖アルキルエステルを無溶媒系内で調製するための方法であって、脂肪酸トリグリセリド源を提供するステップと、遊離短鎖アルコール、又は任意のその他の短鎖アルコール供与体を、リパーゼ製剤の存在下で前記脂肪酸トリグリセリド源に段階的に添加するステップと、前記脂肪酸源中のトリグリセリドが脂肪酸短鎖アルキルエステルに変換されるまで、適切な条件下で反応を進行させるステップとを含み、前記リパーゼ製剤は、第1のリパーゼ及び第2のリパーゼを含み、前記リパーゼは、疎水性の脂肪族ポリマーベースの担体及び疎水性の芳香族ポリマーベースの担体のいずれか1種である疎水性担体に別々に又は一緒に固定化されるものであり、前記第1のリパーゼは、第1のエステル交換反応のポリマーベースの担体においてモノグリセリド及びジグリセリドの少なくとも1種である中間体であって脂肪酸アルキルエステルを形成するアルコールとのエステル交換のために前記第2のリパーゼに好まれる中間体を放出する上記方法。
- 脂肪酸短鎖アルキルエステルを無溶媒系内で調製するための方法であって、脂肪酸トリグリセリド源を提供するステップと、遊離短鎖アルコール、又は任意のその他の短鎖アルコール供与体を、リパーゼ製剤の存在下で前記脂肪酸トリグリセリド源に段階的に添加するステップと、前記脂肪酸源中のトリグリセリドが脂肪酸短鎖アルキルエステルに変換されるまで、適切な条件下で反応を進行させるステップとを含み、前記リパーゼ製剤は、第1のリパーゼ及び第2のリパーゼを含み、前記リパーゼは、疎水性の脂肪族ポリマーベースの担体及び疎水性の芳香族ポリマーベースの担体のいずれか1種である疎水性担体に別々に又は一緒に固定化されるものであり、前記リパーゼは、一緒に使用したときにトリグリセリドに対してそれらのエステル交換活性を維持する異なる基質特異性を示し、同時に、前記2種のリパーゼの少なくとも一方は、基質としてトリグリセリドを用いたときに別々に使用した場合、エステル交換反応媒体中で減衰するが、基質として部分グリセリド及び脂肪酸を用いた場合にそれぞれ高いエステル交換/エステル化活性を示す上記方法。
- 前記短鎖アルコールが、メタノールであり、前記短鎖脂肪酸アルキルエステルが、脂肪酸メチルエステルである、請求項20から22のいずれかに記載の方法。
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