FR2937252A1 - Association d'un extrait de sureau et d'une souche de l. paracasei. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une association d'un extrait de sureau (Sambucus nigra) et d'une souche de L. paracasei, destinée à stimuler l'immunité et/ou favoriser une réponse anti-infectieuse et/ou anti-inflammatoire.

Description

La présente invention concerne une association comprenant un extrait de sureau et au moins une souche de L. paracasei, avantageusement destinée à stimuler l'immunité et/ou à favoriser une réponse anti-infectieuse et/ou anti-inflammatoire.

Le sureau ou Sambucus nigra L. appartient à la famille des Adoxaceae. Le genre Sambucus comprend 25 espèces distribuées mondialement dans les régions tempérées. Le sureau noir, S. nigra ssp. nigra, est largement cultivé en Europe (Danemark, Italie et Autriche), dans la région nordique de l'Afrique et dans la partie ouest de l'Asie. Le sureau du Canada, S. nigra ssp. canadensis, est originaire du nord-est de l'Amérique du Nord et cultivé en Oregon, Pennsylvanie et Kansas, malgré une sélection réalisée au Canada. Les différents organes du sureau : écorces, racines, tiges, fleurs, feuilles et fruits sont utilisés traditionnellement dans des domaines aussi divers que la médecine, l'alimentation et la fabrication d'outils et de jouets. Les productions industrielles les plus importantes concernent de nos jours la production d'extraits de baies de sureau à destination des marchés nutraceutiques et de l'industrie des colorants. Certaines publications font état de l'effet d'un extrait de baies de sureau sur la production de cytokines ( The effect of Sambucol, a black elderberry-based, natural product, on the production of animal cytokines : I. Inflammatory cytokines Eur. Cytokine Netw. 2001 Avril-Juin ; 12(2) : 290-296). Il a notamment déjà été démontré l'effet d'un extrait de sureau sur la diminution des symptômes liés à une infection grippale due à des virus Influenza (A et/ou B et/ou C) ainsi que son effet antiviral sur les virus de type 1 de l'herpes simplex, le virus respiratoire syncytial et les virus parainfluenza. ( Randomized Study of the Efficacy and Safety of Oral Elderberry Extract in the treatment of Influenza A et B Virus Infections The Journal of Int. Med. Res. 2004; 32:132-140).

De très nombreuses études scientifiques ont démontré les effets bénéfiques sur la santé de certains microorganismes présents dans des aliments fermentés, notamment des produits laitiers. Ces microorganismes sont communément dénommés probiotiques . Selon la définition généralement admise à l'heure actuelle, les probiotiques sont : des microorganismes vivants, qui lorsqu'ils sont consommés en quantités adéquates, ont un effet bénéfique sur la santé de l'hôte (Rapport FAO/OMS sur l'évaluation des propriétés sanitaires et nutritionnelles des probiotiques dans les aliments, y compris le lait en poudre contenant des bactéries lactiques vivantes ; Cordoba, Argentine ; 1-4 octobre 2001). Il a été montré dans les demandes de brevets WO96/20607, EP0794707, EP1283714 et FR2912657, que la consommation de produits alimentaires contenant des bactéries probiotiques peut produire des effets favorables sur la santé, par l'intermédiaire notamment du rééquilibrage de la flore intestinale, de l'amélioration de la résistance aux infections, et de la modulation de la réponse immunitaire. Les microorganismes probiotiques utilisés en alimentation humaine sont 20 généralement des bactéries lactiques, appartenant principalement aux genres Lactobacillus et Bifidobacterium, et notamment à l'espèce Lactobacillus paracasei.

Les inventeurs ont étudié l'effet in vitro de l'association comprenant un extrait de sureau et au moins une souche de Lactobacillus paracasei sur la 25 production de médiateurs de l'immunité non-spécifique (cytokines) par des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC). Les résultats de ce type de modèle in vitro sont très bien corrélés avec les effets qui peuvent être obtenus in-vivo (World J. Gastroenterol. 2007 ; 13(2) : 236-243).

Le modèle cellulaire PBMC est utilisé pour étudier la capacité de réponse des cellules du système immunitaire humain. Cette réponse se manifeste par la production de cytokines IL10 et IFN gamma. Lors d'un stress inflammatoire, l'IL-l0 est produite par les macrophages pour réguler la production des cytokines pro-inflammatoires comme le TNF-alpha. Elle favorise une diminution de présentation de l'antigène, réduit la prolifération des cellules T mais en présence d'IL-2, -4 et -7 peut agir comme un facteur de différenciation des cellules T cytotoxiques. L'IL-l0 permet d'améliorer la survie des cellules B, productrices d'anticorps.

L'IFN-gamma ou IFN de type II a une certaine activité antivirale et inhibe la prolifération cellulaire. Cependant, l'IFN-gamma est essentiellement immunomodulateur, à l'inverse des IFN de type I (IFN-alpha et ùbeta) qui exercent surtout une activité antivirale. L'IFN-gamma active les macrophages et les cellules NK : il influence donc les mécanismes cytotoxiques. Il module la prolifération et la différenciation des cellules T et est connu pour favoriser les réponses immunitaires de type 1 et, à l'inverse pour inhiber celles de type 2.

Les deux composants (extrait de sureau et souche L. paracasei) agissent sur des cellules du système immunitaire humain pour potentialiser les réponses immunitaires afin de mieux préparer l'organisme à toute agression infectieuse ou tout processus inflammatoire pathologique. Les résultats obtenus ont montré que, de manière très surprenante et inattendue, ces composants, dans une même composition, agissent en synergie sur les réponses immunitaires non spécifiques.

La présente invention concerne donc une association comprenant un extrait de sureau et au moins une souche de L. paracasei. Avantageusement, une telle association est une association synergique. La présente invention concerne également une composition comprenant une telle association et avantageusement une composition comprenant un extrait de sureau et au moins une souche de L. paracasei.

Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention peut être préparée par le procédé comprenant les étapes suivantes : a) préparation de l'association b) ajout de l'association dans la composition selon la présente invention.

Dans ce cas l'association est donc préparée avant son ajout dans la composition. Toutefois il est également possible de préparer une composition selon la présente invention par ajout de chacun des constituants de l'association de manière séparée dans la composition, c'est-à-dire sans préparer l'association au préalable.

Préférentiellement, la composition selon l'invention est destinée à l'administration par voie orale.

Avantageusement la composition selon la présente invention est un aliment, 15 un complément alimentaire, un médicament ou un produit OTC (Over The Counter).

Avantageusement, l'extrait de sureau selon la présente invention est obtenu à partir des baies et/ou fleurs de sureau, et préférentiellement à partir des baies de 20 sureau. De façon avantageuse, l'extrait de sureau selon la présente invention est un extrait hydrosoluble.

L'extrait de sureau utilisé dans le cadre de la présente invention peut être caractérisé par sa teneur d'une part en anthocyanes et d'autre part en grosses 25 molécules telles que des protéines (en particulier des lectines). Avantageusement, l'extrait de sureau comprend des anthocyanes, de façon avantageuse de la famille des pelargonidines et des cyanidines, en une quantité comprise entre environ 0,5 % et environ 25 %, de façon avantageuse entre environ 3% et environ 25 % et de façon encore plus avantageuse entre environ 8% et 30 environ 16 % en poids, par rapport à la matière sèche de l'extrait. De préférence, la teneur en anthocyanes est égale à environ 12 % en poids, par rapport à la matière sèche de l'extrait. Ces teneurs sont exprimées en cyanidin-3-glucoside selon la méthode HPLC décrite dans J. Agric. Food Chem. 2004, 52, 7846-7856. Avantageusement, l'extrait de sureau comprend des protéines en une quantité comprise entre 2 et 10% en poids, préférentiellement entre 5% et 10% en poids, et plus préférentiellement entre 5% et 7% en poids, exprimés par rapport à la matière sèche (N x 6.25 selon la méthode de Kjeldahl : Protéines végétales, Coord. B. Godon, Collection Sciences et Techniques Agro-alimentaires, Technique et Documentation Lavoisier, Paris, 1985).

Dans le cadre de la présente invention, l'extrait de sureau est disponible dans le commerce ou peut être obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes : Les baies de sureau fraîches ou congelées peuvent subir un pressage afin d'obtenir un jus après filtration. Il peut subir une étape d'hydrolyse enzymatique (pectinase ou mélange pectin méthylesterase et polygalacturonase) afin de le clarifier avant filtration (Girard B. and Fukumoto L.R. Membrane processing of fruit juices and beverages: a review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2000, 40(2):91-157). On peut également réaliser une extraction aqueuse des baies séchées et broyées, suivie d'une séparation solide / liquide par filtration.

Les extraits ainsi obtenus peuvent être utilisés tels quel ou concentrés, ou séchés sous forme de poudre. La teneur en anthocyanes, à ce stade, est comprise entre 0,5% et 3% en poids par rapport à la matière sèche de l'extrait, et avantageusement égale à environ 1 % (dosage HPLC, exprimé en cyanidin-3-glucoside).

L'extrait de sureau peut être enrichi, en particulier en anthocyanes et/ou en molécules de haut poids moléculaires (protéines, polyphénols, polysaccharides). Pour cela, plusieurs méthodes sont possibles bien connues de l'homme du métier: - Ultrafiltration : étape de diafiltration sur du jus préalablement dilué puis 30 surconcentration sur membrane organique ou minérale avec un seuil de coupure compris entre 1 et 20 kDa, et préférentiellement compris entre 3 et 10 kDa (Girard B. and Fukumoto L.R. Membrane processing of fruit juices and beverages: a review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2000, 40(2):91-157). - Passage sur colonne de résine polymérique absorbante de type Amberlite XAD. - Extraction hydro-alcoolique (mélange en toutes proportions d'eau et d'alcool en Cl à C4) ou solutions aqueuses à pH acide (Bronnum-Hansen K. and Flink J.M. Anthocyanin colorants from elderberry (Sambucus nigra L.) IV. Further studies on production of liquid extracts, concentrates and freeze dried powders. Int. J. Food Sci Tech 1986, 21(2):605-614; Lee J. and Wrolstad R.E. Extraction of Anthocyanins and polyphenolics from blueberry processing waste. J. Food Sci.2004, 69(7):564-573). Cette extraction peut être avantageusement réalisée directement sur les baies séchées et broyées ou sur de la purée réalisée à partir des baies fraîches. L'extrait ainsi obtenu peut être concentré thermiquement (à une température n'excédant pas 50°C et sous vide) afin d'augmenter les degrés Brix et le stabiliser vis à vis de contaminations microbiologiques. Il peut également être séché seul ou sur un support (par exemple maltodextrine, lactose...).

Le jus enrichi obtenu se situe préférentiellement entre 40 et 60° Brix, entre 3 et 25% d'anthocyanes et entre 5 et 10% de protéines (méthode de Kjeldahl, N x 6,25) exprimés en poids par rapport à la matière sèche.

Avantageusement, la quantité d'extrait sec de sureau par dose unitaire présente dans la composition, selon l'invention, est comprise entre environ 100 mg et environ 1g. Plus avantageusement, la composition comprend entre environ 150 mg et environ 500 mg d'extrait sec de sureau par dose unitaire et de façon avantageuse, entre environ 150 et 300 mg d'extrait sec de sureau par dose unitaire, de façon encore plus avantageuse entre 200 mg et 250 mg d'extrait sec de sureau par dose unitaire.

Dans le cadre de la présente invention, le terme dose unitaire représente la quantité de composition selon l'invention administrée en une seule prise. Avantageusement une dose unitaire selon la présente invention peut correspondre par exemple à un yaourt de 100 ou 125 ml ou à un comprimé de 2 g. Ainsi, quel que soit le poids de la composition, la quantité d'extrait sec de sureau et/ ou de souche de L. paracasei par dose unitaire reste constante.

Une souche de L. paracasei convenant tout particulièrement dans le cadre de la présente invention est la souche de L. paracasei déposée le 30 décembre 1994, auprès de la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, Paris), sous le numéro I-1518. Cette souche également connue sous le numéro DN-114 001 ou L. casei defensis (nom commercial) fait l'objet du brevet EP 0 794 707. Les effets de cette souche pour renforcer une réponse immunitaire systémique spécifique vis à vis de micro-organismes pathogènes des voies respiratoires (dont le virus de la grippe) ont été décrits dans le brevet EP1 283 714 et ses effets pour renforcer la protection contre la grippe après vaccination ont été décrits dans la demande de brevet FR 2 912 657. La nomenclature des Lactobacillus casei et des paracasei a été jusque là l'objet de requêtes en modification et elle donne toujours lieu à débats. La grande majorité des souches désignées comme L. casei ou L. paracasei subsp. paracasei dans la littérature sont actuellement membres de la même espèce qui pourrait être appelée Lactobacillus paracasei subsp. paracasei de manière à respecter l'actuelle nomenclature. Ces souches de bactéries peuvent être utilisées en association avec d'autres bactéries lactiques, ou en association avec des ferments du yogourt, à savoir Lactobacillus bulgaricus et Streptococcus thermophilus. Ainsi, lorsque L. casei est utilisée en association avec des ferments du yogourt, ladite composition peut comprendre en outre au moins 10' et de préférence entre 5x107 et 2x108 cellules de S. thermophilus par ml, et au moins 5x104 et de préférence entre 105 et 5x105 cellules de L. bulgaricus par ml.

Les bactéries de ces souches peuvent être utilisées sous forme entières, vivantes ou non, et aussi sous forme de lysat bactérien, ou sous forme de fractions bactériennes. Ces bactéries peuvent également être enrobées par une matière grasse 5 végétale comme décrit dans la demande de brevet WO 2005/070221, afin d'améliorer leur survie.

Avantageusement, la composition comprendra 1.10' à 1.1011 CFU de L. paracasei par dose unitaire, préférentiellement 5.109 à 1.1010 CFU/dose unitaire. 10 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition comprend, par dose unitaire, - 100 mg à 1 g d'extrait sec de sureau, préférentiellement 150 mg à 500 mg, avantageusement 150 mg à 300 mg et plus préférentiellement 200 mg à 250 15 mg ; et - 1.10' à 1.1011 de L. paracasei, préférentiellement 5.109 à 1.1010 CFU/dose unitaire.

Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition 20 comprend, par dose unitaire, - de 3 mg à 200 mg d'anthocyanes de sureau, préférentiellement de 10 à 100 mg et plus préférentiellement de 20 mg à 50 mg ; - de 2 mg à 100 mg de protéines de sureau, préférentiellement de 10 mg à 20 mg; 25 et - 1.10' à 1.1011 de L. paracasei, préférentiellement 5.109 à 1.1010 CFU/dose unitaire.

On observe alors de façon avantageuse un effet de synergie. 30 L'association d'un extrait de sureau et d'une souche de L. paracasei selon l'invention a montré de bonnes capacités à induire / stimuler une réponse immunitaire non spécifique démontrant ainsi son intérêt dans les domaines alimentaire et/ou pharmaceutique. La composition selon la présente invention peut avantageusement se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines alimentaire et/ou pharmaceutique pour une administration par voie orale ou sublinguale. 10 Dans le cas d'un aliment, il peut s'agir notamment de produits laitiers frais, de produits laitiers fermentés, de yaourts, de laits fermentés, de laits infantiles, de poudres, de pastilles, des jus végétaux, des boissons et de leurs mélanges, avantageusement dans le groupe constitué des produits laitiers frais, des jus de 15 fruits et/ou de légumes ou des compotes de fruits. De façon avantageuse, le fruit est choisi dans le groupe constitué par pomme, orange, fruits rouges, fraise, pêche, abricot, prune, framboise, mure, groseille, citron, pamplemousse, banane, ananas, kiwi, poire, cerise, noix de coco, fruits de la passion, mangue, figue, rhubarbe, melon, fruits exotiques, litchi, raisins, 20 myrtille ou leurs mélanges.

Avantageusement, l'aliment selon l'invention est un produit laitier frais. De façon avantageuse, il s'agit d'un produit laitier fermenté. De façon encore plus avantageuse, il s'agit d'un produit laitier frais aux fruits. 25 Avantageusement dans le cadre des produits laitiers frais aux fruits, l'extrait de sureau est introduit dans le produit final par l'intermédiaire d'une préparation de fruit. La souche de L. paracasei est quant à elle introduite en tant que ferment dans la base laitière.

30 Par "produit laitier fermenté", on entend plus particulièrement un produit laitier fermenté prêt à la consommation humaine, c'est-à-dire un aliment laitier5 fermenté. Dans la présente demande, sont plus particulièrement visés les laits fermentés et yoghourts. Lesdits aliments laitiers fermentés peuvent alternativement être des fromages blancs ou des petits-suisses. On donne aux termes "laits fermentés" et " yoghourts " leurs significations usuelles dans le domaine de l'industrie laitière, c'est à dire des produits qui sont destinés à la consommation humaine, et qui sont issus de la fermentation lactique acidifiante d'un substrat laitier. Ces produits peuvent contenir des ingrédients secondaires tels que fruits, végétaux, sucre, etc. On peut par exemple se reporter au Décret français n°88-1203 du 30 décembre 1988 relatif aux laits fermentés et au yaourt ou yoghourt, publié au Journal Officiel de la République Française du 31 décembre 1988. On peut également se reporter au "Codex Alimentarius " (préparé par la Commission du Codex Alimentarius sous l'égide de la FAO et de l'OMS, et publié par la Division Information de la FAO, disponible en ligne sur http://www.codexalimentarius.net; cf. plus particulièrement le volume 12 du Codex Alimentarius "Normes Codex pour le lait et les produits laitiers ", et la norme " CODEX STAN A -1 1(a)-1975 "). Le terme "lait fermenté" est ainsi réservé dans la présente demande au produit laitier préparé avec un substrat laitier qui a subi un traitement au moins équivalent à la pasteurisation, ensemencé avec des microorganismes appartenant à l'espèce ou aux espèces caractéristiques de chaque produit. Un "lait fermenté" n'a subi aucun traitement permettant de soustraire un élément constitutif du substrat laitier mis en oeuvre, et notamment n'a pas subi un égouttage du coagulum. La coagulation des "laits fermentés" ne doit pas être obtenue par d'autres moyens que ceux qui résultent de l'activité des microorganismes utilisés. Dans la pratique, le terme "lait fermenté" est donc généralement utilisé pour désigner les laits fermentés autres que yoghourts, et peut prendre, selon les pays, le nom de "Kefir", "Kumiss", "Lassi", "Dahi", "Leben", "Filmjôlk", "Villi", "Acidophilus milk" par exemple. Le terme "yoghourt" est quant à lui réservé au lait fermenté obtenu, selon les usages locaux et constants, par le développement des bactéries lactiques thermophiles spécifiques dites Lactobacillus bulgaricus et Streptococcus thermophilus, qui doivent se retrouver vivantes dans le produit fini, à raison d'au moins 10 millions de bactéries par gramme rapportées à la partie lactée. Dans certains pays, la réglementation autorise l'ajout d'autres bactéries lactiques dans la production de yoghourt, et notamment l'utilisation additionnelle de souches de Bifidobacterium et/ou de Lactobacillus acidophilus. Ces souches lactiques additionnelles sont destinées à conférer au produit fini diverses propriétés, telles que la propriété de favoriser l'équilibre de la flore intestinale, ou de moduler le système immunitaire. La quantité d'acide lactique libre contenue dans le substrat laitier fermenté ne doit pas être inférieure à 0,6 g pour 100 g lors de la vente au consommateur, et la teneur en matière protéique apportée à la partie lactée ne doit pas être inférieure à celle d'un lait normal. La dénomination "fromage blanc" ou "petit-suisse" est, dans la présente demande, réservée à un fromage non affiné, non salé, qui a subi une fermentation par des bactéries lactiques uniquement (pas d'autre fermentation que la fermentation lactique). La teneur en matière sèche des fromages blancs peut être abaissée jusqu'à 15 g ou 10 g pour 100 g de fromage blanc, selon que leur teneur en matière grasse est 25% supérieure à 20 g, ou au plus égale à 20 g, pour 100 g de fromage blanc, après complète dessiccation. La teneur en matière sèche d'un fromage blanc est comprise entre 13 et 20 %. La teneur en matière sèche d'un petit- suisse quant à elle n'est pas inférieure à 23 g pour 100 g de petit-suisse. Elle est généralement comprise entre 25 et 30 %. Les fromages blancs et petits suisses sont généralement regroupés sous la dénomination fromages frais utilisée de manière classique dans le domaine technique de la présente invention. Avantageusement, le produit laitier frais est choisi parmi les yaourts dont les yaourts brassés, les yaourts à boire, les fromages frais et les laits fermentés.

Par complément alimentaire , on entend au sens de la présente invention une denrée alimentaire dont le but est de compléter le régime alimentaire normal et qui constitue une source concentrée de nutriments ou d'autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique seuls ou combinés.

Avantageusement, le complément alimentaire peut comprendre des vitamines et/ou des minéraux et/ou des oligoéléments. Parmi ces vitamines, on peut, en particulier, citer les vitamines A, E, C et les vitamines du groupe B, en particulier la vitamine B6. De façon avantageuse, il 5 s'agit des vitamines C, E et B6. La vitamine A (rétinol ou caroténoïdes), la vitamine E et la vitamine C sont les 3 majeures vitamines anti-oxydantes. En effet, ces vitamines anti-oxydantes ont la capacité de contrôler la production des radicaux libres issus du métabolisme de l'oxygène, et dont la surproduction est responsable de très nombreux troubles, 10 notamment au niveau cardio-vasculaire, immunité, cancer, cutané, vieillissement accéléré, maladies neuro-dégénératives, etc. En particulier, la vitamine C est un antioxydant bien connu, soluble dans l'eau. Les humains dépendent de sources externes de vitamine C pour satisfaire leurs besoins en vitamine C. Ainsi, l'acide ascorbique, l'ascorbate de 15 sodium, ou leur mélange sont une source de vitamine C. La vitamine E est également un antioxydant bien connu. La vitamine E peut opérer en synergie avec la vitamine C afin de protéger la fonction cellulaire vitale contre les oxydants normaux. L'acétate d'alpha-tocophéryle, l'acétate de triméthyl-tocophéryle et/ou le succinate de vitamine E sont des sources de 20 vitamine E. Les vitamines B forment un groupe de vitamines hydrosolubles parmi lesquelles on peut trouver la vitamine B1 ou thiamine, la vitamine B2 ou riboflavine, la vitamine B3 (PP) ou nicotinamide, la vitamine B5 ou acide pantothénique, la vitamine B6 ou pyridoxine, la vitamine B8 (H) ou biotine, la 25 vitamine B9 ou acide folique, vitamine B12 ou cyanocobalamine.

Avantageusement, les minéraux, sont choisis parmi le fer, le zinc, le sélénium, le chrome et leurs mélanges. Le zinc joue un rôle antioxydant en tant que cofacteur des enzymes qui 30 participent directement à la défense contre les oxydants. L'oxyde de zinc, le gluconate de zinc, le citrate de zinc, l'acétate de zinc, le chlorure de zinc, le lactate de zinc ou le sulfate de zinc peuvent être utilisés seuls ou en mélange dans les compositions selon la présente invention. Avantageusement, il s'agit du gluconate de zinc. Le sélénium joue aussi un rôle antioxydant en tant que cofacteur des enzymes (telles que la glutathione peroxydase) qui participent directement à la défense contre les oxydants.

Dans le cas d'un complément alimentaire ou d'un médicament, les formes galéniques suivantes peuvent être envisagées : comprimés à avaler, comprimés à croquer, comprimés effervescents, gélules, pastilles, pilules, poudres, granules, les solutions ou suspensions orales et les formes d'administration sublinguale et buccales. Les formes galéniques préférentielles sont les comprimés.

Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on peut mélanger l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif. On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié. Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, de même qu'avec des correcteurs du goût ou des édulcorants.30 Un autre objet de la présente invention est une composition selon la présente invention pour utilisation comme médicament.

Un autre objet de la présente invention est une composition selon la 5 présente invention pour stimuler l'immunité et/ou renforcer les défenses immunitaires et/ou favoriser une réponse anti-infectieuse et/ou anti-inflammatoire.

Un autre objet de la présente invention est une composition pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention des infections respiratoires et/ou intestinales. 10 Un autre objet de la présente invention est une composition pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention des symptômes provoqués notamment par une infection par le virus de type 1 de l'herpes simplex, le virus respiratoire syncytial et les virus Influenza (A et/ou B et/ou C) et parainfluenza, 15 avantageusement les symptômes des états grippaux, notamment provoqués par les virus Influenza (A et/ou B et/ou C).

La composition selon l'invention est particulièrement appropriée au traitement et/ou à la prévention des symptômes des états grippaux provoqués par 20 une infection par des virus Influenza (Orthomyxovirus , Influenzae A, B ou C). Ces symptômes comprennent les rhumes, rhinites, toux, les inflammations de la muqueuse nasale (rhinorée, obstruction nasale, crise éternuements), maux de gorge (différentes manifestations : picotements, difficultés à déglutir), fièvre, maux de tête, courbatures, fatigues. 25 Ces maux de l'hiver sont associés à l'affaiblissement de nos défenses immunitaires.

Un autre objet de la présente invention est l'utilisation d'une composition pour la préparation d'un aliment, d'un complément alimentaire ou d'un 30 médicament.

Un autre objet de la présente invention est l'utilisation de la composition pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des infections respiratoires et/ou intestinales.

Un autre objet de la présente invention est l'utilisation de la composition pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des symptômes une infection par le virus de type 1 de l'herpes simplex, le virus respiratoire syncytial et les virus Influenza (A et/ou B et/ou C) et parainfluenza, avantageusement les symptômes des états grippaux, notamment provoqués par les virus Influenza (A et/ou B et/ou C).

Un autre objet de la présente invention est l'utilisation de la composition pour la préparation d'un médicament pour son utilisation pour stimuler l'immunité et/ou favoriser une réponse anti-infectieuse et/ou anti-inflammatoire.

C'est enfin un autre objet de la présente invention que de fournir un procédé de renforcement des défenses immunitaires qui consiste en une administration par voie orale d'une composition à base d'une association d'un extrait de sureau et d'au moins une souche de L. paracasei.

La description se réfère aux figures annexées sur lesquelles : La figure 1 représente la production d'IL-10 induite par un extrait de sureau seul ou en association avec un ratio de L paracasei : PBMC de 4,5:1 Légende de la figure 1 20 25 e Extrait sureau sureau + L. paracasei CNCM I-1518) théorique (sureau + L. paracasei CNCM I-1518) expérimentale 30 La figure 2 représente la production d'IFN-gamma induite par du L. paracasei seul ou en association avec un extrait de sureau à 10 tg/ml

Légende de la figure 2 5 L. paracasei CNCM I-1518 (L. paracasei CNCM I-1518 + sureau) théorique (L. paracasei CNCM I-1518 + sureau) expérimentale 10 L'invention pourra être mieux comprise à l'aide des exemples non limitatifs qui suivent et qui constituent des modes de réalisation particuliers des compositions selon l'invention.

EXEMPLE 1 : Préparation d'un extrait de sureau utilisé dans le cadre de la 15 présente invention L'extrait de sureau est obtenu à partir de jus de baies de sureau enrichi en anthocyanes et séché sur maltodextrine. L'enrichissement a été effectué par un procédé de filtration membranaire selon la méthode suivante : 26 litres de jus de sureau clarifié sont dilués avec 284 litres d'eau (11 volumes 20 d'eau pour 1 volume de jus). Les 310 litres ainsi obtenus sont agités et chauffés à 45°C puis diafiltrés sur une première membrane de 5 kDa en rajoutant 7 volumes d'eau par volume de jus (soit 181 L). Le perméat de dialyse est ensuite concentré par ultrafiltration sur membrane de 5 kDa (membrane pilote de 5/10 kDa de surface unitaire 5.8 m2). Le retentât de l'ultrafiltration est concentré thermiquement sous 25 vide à une température n'excédant pas 50°C, puis atomisé sur un support maltodextrine tel que la quantité de maltodextrine soit inférieure ou égale à 30% (p/p) Les caractéristiques de l'extrait ainsi obtenu sont : - Teneur en anthocyanes : 10-14% en poids par rapport à la matière sèche de 30 l'extrait (exprimés en cyanidine-3-glucoside selon la méthode HPLC décrite dans JAgric Food Chem 2004, 52, 7846-7856) - Teneur en protéines : 5-7% en poids par rapport à la matière sèche de l'extrait (N x 6.25 selon la méthode de Kjeldahl)

EXEMPLE 2 : Etude in vitro des effets immunomodulateurs combinés de la 5 souche L. paracasei CNCM I-1518 avec un extrait de sureau dans des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC)

Matériel et méthode Des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) sont isolées de 10 sujets sains, remises en suspension et réparties dans des plaques à 24 puits à raison de 0,5.106 cellules/puits. Ces PBMC sont incubées toute la nuit à 37°C avec soit différentes concentrations d'extrait de sureau (3 ù 10 ù 30 ù 100 g/ml de surnageant de culture de cellules PBMC) en présence ou non d'une concentration de L. paracasei (4,5 L. paracasei pour 1 PBMC), soit, inversement, avec différents 15 ratios de L. paracasei :PBMC (0,5 :1 ù 1 :1 ù 2 :1 ù 4,5 :1) en présence ou non d'extrait de sureau à 10 g/ml de surnageant de culture de cellules PBMC. L'extrait de sureau utilisé a été préparé selon l'exemple 1. Les surnageants de culture sont récupérés pour doser les cytokines (IL-10 et IFN-gamma) par cytométrie en flux. 20 Afin de déterminer si l'association extrait de sureau + L. paracasei produit un effet de synergie, les inventeurs ont comparé les résultats expérimentaux selon la méthode décrite dans la publication de Etievant C, Kruczynski A, Barret JM et al. F 11782, a dual inhibitor of topoisomerases I and II with an original 25 mechanism of action in vitro, and markedly superior in vivo antitumour activity, relative to three other dual topoisomerase inhibitors, intoplicin, aclarubicin and TAS-103 Cancer Chemother.Pharmacol. 2000; 46: 101-113. La construction des courbes théoriques consiste à additionner à chaque point expérimental de la courbe du sureau seul ou du L. paracasei seul, la 30 contribution apportée par respectivement le L. paracasei ou l'extrait de sureau.

Résultats Les figures 1 et 2 présentent les résultats obtenus : - la figure 1 montre la production d'IL-10 induite par un extrait de sureau seul ou en association avec un ratio de L paracasei:PBMC de 4,5:1 - la figure 2 représente la production d'IFN-gamma induite par du L. paracasei seul ou en association avec un extrait de sureau à 10 g/ml L'effet sur la réponse immunitaire non spécifique induit par l'extrait de sureau seul ou en association avec un ratio particulier de L. paracasei : PBMC (4,5 :1) a été étudié. La concentration en cytokine obtenue avec le ratio L. paracasei : PBMC égal à 4,5 :1 est de 2,4 pg/ml. La comparaison des résultats obtenus expérimentalement avec les valeurs de la courbe théorique montrent que le L. paracasei potentialise l'effet de l'extrait de sureau seul : l'association permet d'obtenir une production d'IL 10 largement supérieure à la somme des 2 effets (extrait de sureau d'une part et L. paracasei d'autre part).

Les inventeurs ont également examiné l'effet de différents ratios L. 20 paracasei :PBMC, seul ou en association avec une concentration d'extrait de sureau déterminée (10 g/ml) sur la production d'interféron-gamma. La concentration en cytokine obtenue avec l'extrait de sureau à la concentration de 10 g/ml est de 5 pg/ml. La comparaison des différents courbes obtenues montrent que l'extrait de 25 sureau potentialise l'effet du L. paracasei : l'association permet d'obtenir une production d'IFN-gamma supérieure à la somme des 2 effets (L. paracasei d'une part et extrait de sureau d'autre part).

Conclusion : 30 L'extrait de sureau et le L paracasei CNCM I-1518 (DN-114 001) agissent en synergie sur les réponses immunitaires non spécifiques, permettant ainsi de rendre les cellules du système immunitaire humain plus réactives aux agressions infectieuses ou aux processus inflammatoires pathologiques. 200,0 mg EXEMPLE 3 : Complément alimentaire La dose unitaire correspond à un comprimé de 2 g. La composition de ce comprimé est la suivante : Extrait sec de sureau (selon exemple 1) Poudre de lait fermenté contenant du L. paracasei DN-114 001 150,0 mg Mix vitamines (vitamines C, E et B6) 60,0 - 80,0 mg Gluconate de Zinc (Zinc) 15,0 ù 25,0 mg Sélénate de Sodium (Selenium) 0,5 ù 3,0 mg Agent d'enrobage qs Saccharose, édulcorant, parfum 150- 250 mg Ce comprimé est fabriqué par des méthodes bien connues de l'homme du métier. En particulier la souche de L. paracasei et l'extrait de sureau sont ajoutés indépendamment l'un de l'autre dans la composition destiné à obtenir le comprimé.

20 EXEMPLE 4 : Produit laitier fermenté La dose unitaire correspond à 10oml du produit laitier fermenté. Il faut noter cependant que, par exemple, 100g d'Actimel correspond à 94-97 ml de produit en fonction de la formule light ou standard considérée.

25 Le produit laitier fermenté comprend (en % en poids): - 95% de produit laitier fermenté par une souche de L. paracasei DN 114 001 (CNCM I-1518) (produit du type Actimel ) et par des souches commerciales de Lactobacillus bulgaricus et de Streptococcus thermophilus. - 5% d'une préparation de fruits rouges classique contenant 5% de jus concentré 30 d'extrait de sureau tel que décrit dans l'exemple 1. Le taux d'extrait sec du produit laitier fermenté est d'environ 17% avant séchage. 10 Donc la population en L. paracasei DN-114 001 du comprimé est de 4x101° CFU 15 Composition du produit laitier fermenté (ingrédients standard en % en poids) : - 77% de lait écrémé standard (3,64% de protéines de lait) - 9,6% de crème pasteurisée - 5,7% de lait écrémé concentré - 0,6% de protéines de lait écrémé - 6,6% de sucrose - 0,5% de dextrose (Cargill) - Ferment DN 114 001 (CNCM I-1518) : 108-109 CFU/dose unitaire - Ferment composé de plusieurs souches commerciales de L. bulgaricus et S. thermophilus à des populations respectivement de 1.105 CFU/dose unitaire et 5.10' CFU/dose unitaire. La préparation de fruits classique, supplémentée en jus concentré d'extrait de sureau, est ajoutée dans le produit laitier fermenté après avoir subi un traitement 15 thermique.

Caractéristiques du produit fini : 250 mg d'extrait sec de sureau pour 100 g de ce produit c'est-à-dire pour une dose unitaire, soit 1.47% en poids d'extrait sec de sureau par rapport au poids de la 20 matière sèche de la dose unitaire. Teneur en anthocyanes : 25 mg/100g c'est-à-dire pour une dose unitaire, soit 0.147% en poids d'anthocyanes par rapport au poids de la matière sèche de la dose unitaire. Population de L. paracasei : 108 cfu/dose unitaire

Claims (11)

1. REVENDICATIONS1. Association comprenant un extrait de sureau et au moins une souche de Lactobacillus paracasei.
2. 2. Composition comprenant une association selon la revendication 1.
3. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait de sureau comprend une teneur en anthocyanes comprise entre 0,5 et 25 % en 10 poids par rapport à la matière sèche de l'extrait et une teneur en protéines comprise entre 2 et 10% en poids par rapport à la matière sèche de l'extrait.
4. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité de L. paracasei comprise entre 1.107 15 à 1.101 CFU/dose unitaire.
5. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce qu'il s'agit d'un aliment, d'un complément alimentaire ou d'un médicament. 20
6. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisée en ce qu'il s'agit d'un aliment choisi dans le groupe constitué des produits laitiers, des produits laitiers fermentés, des yaourts, des laits fermentés, des laits infantiles, de poudres, des pastilles, de jus végétaux, de boissons et de 25 leurs mélanges, avantageusement dans le groupe constitué des produits laitiers frais, des jus de fruits et/ou des légumes ou des compotes de fruits.
7. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisée en ce qu'il s'agit d'un complément alimentaire ou d'un médicament sous 30 une forme galénique choisie dans le groupe constitué par les comprimés à avaler, comprimés à croquer, comprimés effervescents, gélules, pastilles,5pilules, poudre, granules, les solutions ou suspensions orales et les formes d' administration sublinguale et buccales.
8. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 150 mg et 300 mg d'extrait sec de sureau par dose unitaire, préférentiellement entre 200 mg et 250 mg, et entre 1.107 et 1.1011 CFU de L. paracasei par dose unitaire, préférentiellement entre 5.109 et 1.1010 CFU de L. paracasei par dose unitaire.
9. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 8 pour utilisation comme médicament.
10. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, pour stimuler l'immunité et/ou renforcer les défenses immunitaires et/ou favoriser une réponse anti-infectieuse et/ou anti-inflammatoire.
11. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention des symptômes des états grippaux provoqués notamment par une infection par des virus Influenza.