FR2915684A1 - Particules a base de polyelectrolytes et de principe actif a liberation modifiee et formulations pharmaceutiques contenant ces particules - Google Patents

Particules a base de polyelectrolytes et de principe actif a liberation modifiee et formulations pharmaceutiques contenant ces particules Download PDF

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Abstract

La présente invention concerne de nouvelles particules de polymères polyélectrolytes transporteurs de principe actif (PA), en particulier protéinique et peptidique, ainsi que de nouvelles formulations pharmaceutiques à libération modifiée contenant lesdites microparticules de PA.Ces nouvelles particules chargées en PA libèrent le PA sur une durée prolongée de plusieurs jours, voire plusieurs semaines.L'invention concerne dans un premier aspect des particules comprenant:a) un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) formant spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8;b) un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH;c) au moins un principe actif (PA) associé de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1);lesdites particules étant obtenues par mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules associées au principe actif (PA) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale.L'invention concerne également le procédé de préparation de ces particules, une formulation pharmaceutique comprenant de telles particules et un procédé de préparation de médicaments.

Description

1 PARTICULES A BASE DE POLYELECTROLYTES ET DE PRINCIPE ACTIF A LIBÉRATION
MODIFIEE ET FORMULATIONS PHARMACEUTIQUES CONTENANT CES PARTICULES DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne de nouveaux transporteurs de principe(s) actif(s) -PA-, en particulier protéinique(s) et peptidique(s), ainsi que de nouvelles formulations pharmaceutiques à libération modifiée contenant lesdits transporteurs de PA.
La demande concerne également les applications, notamment thérapeutiques, de ces formulations pharmaceutiques. Ces formulations pharmaceutiques actives concernent aussi bien la thérapeutique humaine que vétérinaire. La référence PA utilisée dans tout le présent exposé, vise au moins un principe actif. ETAT DE LA TECHNIQUE
Dans le domaine de la libération prolongée des PAs pharmaceutiques notamment des peptides/protéines thérapeutiques, on cherche très souvent à reproduire au mieux chez 20 le patient, une concentration plasmatique en peptide ou en protéine proche de la valeur observée chez le sujet sain. Cet objectif se heurte à la faible durée de vie des protéines dans le plasma qui conduit à injecter de façon répétée la protéine thérapeutique. La concentration plasmatique en protéine thérapeutique présente alors un profil "en dents de scie" caractérisé par des pics 25 élevés de concentration et des minima de concentration très bas. Les pics de concentration, très supérieurs à la concentration basale chez le sujet sain, ont des effets nocifs très marqués du fait de la toxicité élevée des protéines thérapeutiques telles que certaines cytokines. Par ailleurs, les minima de concentration sont inférieurs à la concentration nécessaire pour avoir un effet thérapeutique, ce qui entraîne une mauvaise couverture 30 thérapeutique du patient et des effets secondaires graves à long terme. Aussi, pour reproduire chez le patient une concentration plasmatique en protéine thérapeutique proche de la valeur idéale pour le traitement du patient, il importe que la formulation pharmaceutique considérée permette de libérer la protéine thérapeutique sur une durée prolongée, de façon à limiter les variations de concentration plasmatique au 35 cours du temps. Par ailleurs, cette formulation active doit, de préférence, satisfaire au cahier des charges suivant, déjà connu de l'homme de l'art : 1 libération prolongée d'une protéine thérapeutique active et non dénaturée, par15
2 exemple humaine ou synthétique, de sorte que la concentration plasmatique est maintenue au niveau thérapeutique ; 2 û viscosité à l'injection suffisamment basse pour être aisément injectable; 3 - forme biocompatible et biodégradable présentant un excellent profil de toxicité et de tolérance.
Pour tenter d'atteindre ces objectifs, l'une des meilleures approches proposées dans l'art antérieur fut de développer des formes à libération prolongée de protéine(s) thérapeutique(s) constituées par des suspensions, liquides et peu visqueuses de nanoparticules chargées en protéines thérapeutiques. Ces suspensions ont permis l'administration aisée de protéines thérapeutiques natives. Ainsi, la société Flamel Technologies a proposé une voie, dans laquelle la protéine thérapeutique est associée à des nanoparticules d'un copolyaminoacide comprenant des groupements hydrophobes et des groupements hydrophiles.
La demande de brevet US 2006/0099264 divulgue des polyaminoacides amphiphiles comprenant des unités aspartique et/ou des unités glutamiques, au moins une partie de ces unités étant porteuses de greffons comportant au moins un motif alpha-tocophérol, e.g. : (polyglutamate ou polyaspartate greffé par l'alpha tocophérol d'origine synthétique ou naturelle). Ces homopolyaminoacides "modifiés hydrophobes" forment spontanément dans l'eau une suspension colloïdale de nanoparticules, lesquelles sont aptes à s'associer aisément en suspension aqueuse à pH 7,4, avec au moins une protéine active (insuline). La durée de libération in vivo de la (ou les) protéine(s) active(s) (e.g. insuline) "vectorisée" par les suspensions selon US 2006/0099264 gagnerait à être augmentée. L'augmentation de la durée de libération a été partiellement obtenue par les formes pharmaceutiques décrites dans la demande PCT WO-A-05/051416. Dans cette demande, est divulguée une suspension colloïdale de nanoparticules (0,001-0,5 m) de poly(L-glutamate de sodium) modifiée hydrophobe et injectée à une concentration telle qu'après injection sous cutanée, il se forme in situ chez le patient un gel au contact de l'albumine endogène. La protéine est alors lentement libérée sur une période typique d'une semaine.
Cependant, lorsque la concentration en protéine thérapeutique à administrer est relativement élevée, comme c'est le cas par exemple pour l'hormone de croissance humaine, la durée de libération est limitée à quelques jours. La durée de libération de ces formes gagnerait à être encore augmentée.
BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION
L'un des objectifs de l'invention est de proposer de nouvelles particules chargées en PA, libérant le PA sur une durée prolongée de plusieurs jours, voire plusieurs semaines.
3 Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles particules formant une suspension stable en solution aqueuse. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles particules chargées en PA et stables sous forme lyophilisée.
Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles particules aptes à être conservées sous forme lyophilisée. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles particules facilement redispersables après lyophilisation. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles particules libérant une protéine ayant préservé son activité biologique. Un autre objectif de l'invention est de proposer un nouveau procédé de préparation de ces microparticules. Un autre objectif de l'invention est de proposer une formulation pharmaceutique solide pour la libération prolongée de PA en particulier une forme poudre sèche pour inhalation et administration pulmonaire. Pour atteindre ces objectifs, parmi d'autres, les inventeurs ont eu le mérite de découvrir, après de longues et laborieuses recherches, que, de façon tout à fait surprenante et inattendue, le mélange dans des conditions spécifiques, de deux polymères polyélectrolytes, de polarité opposée, au moins l'un étant porteur de groupements hydrophobes associés à au moins un PA (par exemple de copolyamino-acides) conduit à des particules de taille comprise entre 1 et 100 microns, capables de libérer in vitro ou in vivo une protéine ou un peptide sur une durée prolongée. D'où il s'ensuit que l'invention concerne tout d'abord des particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisées en ce qu'elles comprennent: a) un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PEI) formant spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8; b) un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; à la condition que, si le premier polymère électrolyte (PE1) est un polyaminoacide, alors le second polymère polyélectrolyte (PE2) n'est ni la polylysine ni la polyéthylène imine; c) au moins un principe actif (PA) associé de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1);
4 lesdites particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA) étant obtenues par mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules associées au principe actif (PA) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale.
L'invention concerne également un procédé de préparation de particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA). ces particules étant en particulier celles décrites ci-dessus, comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8, d'une solution colloïdale aqueuse d'un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) étant capable de former spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8; 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au premier polymère polyélectrolyte (PE1) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit premier polymère polyélectrolyte (PE1); 3) la préparation d'un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; à la condition que, si le premier polymère électrolyte (PE1) est un polyaminoacide, alors le second polymère polyélectrolyte (PE2) n'est ni la polylysine ni la polyéthylène imine; 4) le mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules associées au principe actif (PA) obtenu à l'étape 2) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale obtenu à l'étape 3). 30 L'invention concerne également des particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisées en ce qu'elles comprennent: a) un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte 35 (PEI) formant spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8; b) un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), porteur de groupements hydrophobes (GH) 1.0 15 20 25 latéraux, ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; c) au moins un principe actif (PA) associé de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1); 5 lesdites particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA) étant obtenues par mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules associées au principe actif (PA) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale. L'invention concerne également un procédé de préparation de particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), ces particules étant en particulier celles décrites ci-avant, comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8, d'une solution colloïdale aqueuse d'un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) étant capable de former spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur, pHm, du pH comprise entre 3 et 8, 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au premier polymère polyélectrolyte (PEI) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit premier polymère polyélectrolyte (PE1); 3) la préparation d'un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; 4) le mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules auxquelles est associé le principe actif (PA) obtenu à l'étape 2) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale obtenu à l'étape 3).
L'invention concerne également une formulation pharmaceutique pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), ladite formulation comprenant des particules telles que décrites ci-dessus. L'invention concerne également un procédé de préparation de médicaments, en particulier pour administration parentérale, mucosale, sous-cutanée, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou dans une tumeur, voire par voie orale,
6 nasale, pulmonaire, vaginale, transdermique ou oculaire, consistant essentiellement à mettre en oeuvre au moins une formulation telle que décrite ci-dessus.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Définitions Dans la présente description, on entend par solution un mélange homogène solvant et polymère sous forme de chaîne individuelle. Dans la présente description, on entend par solution colloïdale une suspension de particules dont le diamètre moyen mesuré par le test T' est inférieur ou égal à 0,5 m. Dans la présente description, on entend par pH de demi neutralisation, le pH auquel la moitié des groupements ionisables est ionisée. Dans la présente description, on entend par pHm le pH auquel s'effectue le mélange du premier polymère polyélectrolyte (PE1) auquel est associé le principe actif 15 (PA) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2). Dans la présente description, on définit le pH physiologique comme étant par exemple égal à 7,2 0,4. Dans la présente description, on entend par polyélectrolyte un polymère porteur de groupements capables de s'ioniser dans l'eau, ce qui crée une charge sur le polymère. 20 Dans la présente description, on entend par polyampholyte un polyélectrolyte porteur d'au moins deux types de groupements qui se dissocient respectivement en groupements anioniques et cationiques. Dans la présente description, l'expression être porteur signifie que le groupement porté est pendant, c'est-à-dire que ledit groupement est un groupement latéral 25 par rapport à la chaîne principale du polymère. En particulier, lorsque le polymère est un polyaminoacide comprenant des unités "acide aminé", ledit groupement pendant est un groupement latéral par rapport aux unités "acide aminé" et est un substituant de la fonction carbonyle en y de l'unité "acide aminé" qui le porte. Dans la présente description, on entend par polarité d'un polyélectrolyte, la polarité 30 de la charge globale portée par ce polyélectrolyte à la valeur pHm du pH. Dans la présente description, on entend par densité apparente le volume occupé par 1 g de particules. La densité apparente est mesurée par toute méthode connue de l'Homme du métier, telle que la méthode de gradient de densité.
35 Pour mesurer la taille des particules selon l'invention, résultant de l'association du premier polymère polyélectrolyte (PE1) et du second polymère polyélectrolyte (PE2), on utilise le test T. Pour évaluer la taille des particules de la solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1), on utilise de préférence le test T'.
7 Le résultat du test T est un diamètre médian D50, tel que 50% de particules présentes dans l'échantillon ont une taille inférieure ou égale à cette valeur (D50). Le résultat du test T' est un diamètre hydrodynamique moyen.
Test T de mesure de la taille des microparticules par diffraction laser: On obtient les données relatives au D50 qui est le diamètre en dessous duquel se trouvent 50% des objets analysés. Ce diamètre des particules selon l'invention est mesuré selon le mode opératoire défini ci-après : Les solutions de particules sont préparées en diluant 4001.1l de l'échantillon à analyser dans un tube à essai de 5ml avec 6000 d'eau déminéralisée, puis en passant la préparation au vortex pendant 10 secondes (10 5). Ces solutions sont ensuite introduites au goutte à goutte dans la cellule de mesure jusqu'à ce que l'obscuration soit comprise entre 5% et 20%, puis elles sont analysées par diffraction de la lumière grâce à un appareil de type Malvern Mastersizer 2000, fonctionnant avec deux longueurs d'onde 466 et 632 nm. Le D50 des particules est calculé à partir de la théorie de Mie en utilisant les indices de réfraction suivants : nflujde = 1.33 + i.0, npolymère = 1.59 + i.0 et les approximations de Fraunhofer, comme décrit dans la norme ISO 13320. Test T' de mesure de la taille des nanoparticules par diffusion quasi-élastique de la lumière:
Le diamètre hydrodynamique moyen des particules de polymère selon l'invention est mesuré selon le Mode opératoire Md défini ci-après : Les solutions de polymère sont préparées à des concentrations de 1 ou 2 mg/ml en milieu NaCl 0,15M et laissées sous agitation pendant 24 h. Ces solutions sont ensuite filtrées sur 0,8-0,2 m, avant de les analyser en diffusion dynamique de la lumière grâce à un appareil de type Malvern Compact Goniometer System, fonctionnant avec un faisceau laser He-Ne de longueur d'onde 632.8 nm et polarisé verticalement. Le diamètre hydrodynamique des nanoparticules de polymère est calculé à partir de la fonction d'autocorrélation du champ électrique par la méthode des cumulants, comme décrit dans l'ouvrage Surfactant Science Series volume 22, Surfactant Solutions, Ed. R. Zana, chap. 3, M. Dekker, 1984. Test L de mesure de la libération du principe actif: On injecte 50 l de formulation dans un cube de 1,5 cm de côté de mousse polyuréthane-polyéther (PU-PE) baigné par un flux de 2,83 ml/h d'un milieu aqueux
8 contenant 30 mg/g d'albumine bovine fraction V (Aldrich), 0,01M de tampon phosphate, 0,0027M de chlorure de potassium, 0,137M de chlorure de sodium (PBS de Aldrich) et 0,015M d'acétate d'ammonium (Aldrich). On prélève régulièrement de la phase continue dont la teneur en protéine est analysée par ELISA (kit Immunotech IM3193).
On peut alors tracer la masse totale de protéine relarguée en sommant celle trouvée dans chacun des prélèvements et la rapporter à la quantité totale injectée
Au sens de l'invention, le terme "protéine" désigne aussi bien une protéine qu'un peptide, qu'il s'agisse d'un oligo ou d'un polypeptide. Cette protéine ou ce peptide peuvent être modifiés ou non, par exemple, par greffage d'un ou de plusieurs groupements polyoxyéthylèniques. Les premier et second polymères polyélectrolytes (PE1) et (PE2) sont des polymères linéaires, biocompatibles et biodégradables, porteurs de groupements ionisables anioniques et/ou cationiques, par exemple des fonctions amines ou acides carboxyliques.
De préférence, le polymère PEl ou PE2 est porteur de groupements ionisables d'une polarité donnée (anionique ou cationique). De tels polymères sont par exemples des polyaminoacides, des polysaccharides anioniques tels que le sulfate de dextran, la carboxyméthylcellulose, la gomme arabique, l'acide hyaluronique et ses dérivés, les polygalacturoniques, les polyglucuroniques, ou des polysaccharides cationiques tels que le chitosan, ou également du collagène et ses dérivés de type gélatine. Il n'est pas exclu qu'un polymère porteur de groupements ionisables d'une polarité donnée, soit également porteur d'une petite fraction de 1 à 30% molaire de groupements ionisables de la polarité opposée. En plus des groupements ionisables anioniques ou cationiques et des groupements hydrophobes, le premier ou second polymère polyélectrolyte (PE1) ou (PE2) peut éventuellement être également porteur de groupements non ionisables, tels que des groupements obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, d'un alkylène glycol, ou d'un polyalkylène glycol.
La charge nette du polymère dépend de la valeur du pH par rapport au pH de demi neutralisation du polymère. Ainsi pour un polyélectrolyte porteur de fonctions anioniques carboxyliques, la charge nette du polymère sera voisine de zéro à un pH deux unités au dessous du pH de demi neutralisation. Quasiment toutes les fonctions anioniques seront ionisées deux unités de pH au dessus du pH de demi neutralisation. Pour un polymère porteur de fonctions cationiques, au contraire, la charge nette s'annule lorsque le pH dépasse de deux unités environ le pH de demi neutralisation. Dans la présente invention, le nombre de charges portées par le premier ou second
9 polymère polyélectrolyte (PE1, PE2) dans les conditions de mélange à la valeur pHm du pH, est obtenue par la méthode classique de titration acido basique : Une solution de polyélectrolyte concentrée à 2 mg/ml et contenant 0.15M de chlorure de sodium est portée à pH 3 par ajout d'acide acétique 1M ou de soude 1M. On procède ensuite à la titration de cette solution par une solution de soude 0,05M en enregistrant l'évolution du pH en fonction du volume de soude rajouté. La détection du point d'équivalence (volume et pH), par exemple par la méthode de la double tangente, permet de détecter le pH pour lequel tous les groupements ionisables sont ionisés, c'est-à dire où le degré d'ionisation est égal à 1. On peut alors, à partir de ce point remonter au degré d'ionisation du polyélectrolyte pour toute valeur du pH. On peut alors définir le pH de demi-neutralisation, c'est-à-dire le pH pour lequel le degré d'ionisation est égal à 0,5. On peut aussi définir le degré d'ionisation du polyélectrolyte pour la valeur pHm du pH. Dans le cas particulier où le point d'équivalence est hors d'une gamme de pH compris entre 3 et 9, on considère que tous les groupements ionisables sont ionisés sur cette gamme de pH, c'est-à dire que le degré d'ionisation est égal à 1 pour des pH compris entre 3 et 9.
D'une manière avantageuse, les premier et second polymères polyélectrolytes (PEI, PE2) peuvent être des alpha polyaminoacides linéaires, en rappelant que si PE1 est un polyaminoacide linéaire, PE2 n'est pas la polylysine.
Au sens de l'invention et dans tout le présent exposé, le terme polyaminoacide couvre aussi les polyaminoacides naturels que les polyaminoacides synthétiques, ainsi que les oligoaminoacides comprenant de 2 à 20 unités "acide aminé" au même titre que les polyaminoacides comprenant plus de 20 unités "acide aminé". De préférence, les polyaminoacides utilisés dans la présente invention sont des oligomères ou des homopolymères comprenant des unités récurrentes acide glutamique ou aspartique ou des copolymères comprenant un mélange de ces deux types d'unités "acide aminé". Les unités considérées dans ces polymères sont des acides aminés ayant la configuration D ou L ou D/L et sont liées par leurs positions alpha ou gamma pour l'unité glutamate ou glutamique et alpha ou bêta pour l'unité aspartique ou aspartate.
Les unités "acide aminé" préférées de la chaîne polyaminoacide principale sont celles ayant la configuration L et une liaison de type alpha. Suivant un mode encore plus préféré de réalisation de l'invention, les premier et second polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) peuvent être des polyaminoacides dont la chaîne principale est formée par des unités choisies dans le groupe comprenant les unités aspartiques, les unités glutamiques et leurs combinaisons, au moins une partie de ces unités étant modifiées par greffage d'au moins un groupement hydrophobe (GH) pour au moins le premier polymère polyélectrolyte (PE1).
10 Il est possible que le polymère PE2 soit également porteur de groupes hydrophobes latéraux. Selon une première variante, ces polyaminoacides sont du type de ceux décrits dans la demande de brevet PCT WO-A-00/30618, selon laquelle les groupements hydrophobes (GH) sont identiques ou différents entre eux et sont sélectionnés dans le groupe comprenant : (i) les alkyles, les acyles ou les alcényles linéaires ou ramifiés, de préférence linéaires en C1-C20 et, plus préférentiellement encore en C2-C18 ; (ii) les groupements hydrocarbonés contenant un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence ceux contenant de l'oxygène et/ou du soufre et, plus préférentiellement encore, ceux de formule suivante: -~CùCH2O )q CùCH2OR60 R60 R60 dans laquelle: - les radicaux R60 sont identiques ou différents entre eux et correspondent à l'hydrogène ou à un radical répondant à la même définition que celle donnée supra au point (i), -q=1à100; (iii) les aryles, les aralkyles ou les alkylaryles, de préférence les aryles ; (iv) les dérivés naturels hydrophobes, de préférence le cholestérol, les phosphatidylcholines et les diacylglycérols. Par "groupements hydrocarbonés", on entend au sens de la présente invention, des groupements comprenant notamment des atomes d'hydrogène et de carbone. De préférence, dans cette variante, les groupements hydrophobes sont sélectionnés dans le groupe de radicaux suivants : méthyle, éthyle, propyle, docédyle, hexadécyle, octadécyle. D'une manière particulièrement préférée, les groupements hydrophobes (GH) sont choisis dans le groupe comprenant : • les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, • les alkylaryles ou arylalkyles en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, • et les (poly) cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome.
Plus précisément, au moins l'un des groupements hydrophobes (GH) est obtenu par greffage, à partir d'un précurseur choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le 11 dodécanol, le tétradécanol, l'héxadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol.
Selon une variante de l'invention, l'un des polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) 5 répond à la formule générale (I) suivante: NHR1 [GH] 7 R4 (I) dans laquelle : 10 ^ RI représente un H, un alkyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à CIO, benzyle, -R4-[GH], ou RI forme avec NH une unité acide aminé terminale; ^ R2 représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à C10, un pyroglutamate ou -R4-[GH] ; 15 ^ R3 est un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe 20 comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine; R4 représente une liaison directe ou un "espaceur" à base de 1 à 4 unités acide aminé ; A représente indépendamment un radical -CH2- (unité aspartique) ou - CH2-CH2- (unité glutamique) ; n/(n+m) est défini comme le taux de greffage molaire et sa valeur est suffisamment basse pour que le polymère mis en solution dans l'eau à pH 7 et à 25 C, forme une suspension colloïdale de particules de polymère; 25 30 12 n + m varie de 10 à 1000, de préférence entre 50 et 300 ; ^ GH représente un groupement hydrophobe comportant 6 à 30 atomes de carbone. Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule 5 (I), on se reportera utilement aux demandes de brevet FR 02 07008 et FR 03 50190. Selon une autre possibilité, le polymère polyélectrolyte PE2 répond à l'une des formules générales (II),(III) et (IV) suivantes : [GH] NR4 COOR3 R4 [GH] n. COOR3 H H A O N,\ R3 M' O A N _ H N O H 10 COOR3 A COOR3 / O O A H N /[GH]
~ a m' R H [GH] a N R N RSâ i O H H O 15 20 25 3' COOR H A/ O [G H] N R a--- dans lesquelles : ^ GH représente un groupement hydrophobe comportant 6 à 30 atomes de carbone; ^ R30 est un groupement alkyle linéaire en C2 à C6 ; ^ R3 ' est un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : - les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, n/N [G H] O H
13 • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine; ^ R50 est un groupement alkyle, dialcoxy ou diamine en C2 à C6 ; ^ R4 représente une liaison directe ou un "espaceur" à base de 1 à 4 unités acide aminé ; ^ A représente indépendamment un radical -CH2- (unité aspartique) ou - CH2-CH2- (unité glutamique) ; ^ n' + m' ou n"est défini comme le degré de polymérisation et varie de 10 à 1000, de préférence entre 50 et 300. Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (I), (II) et (IV), on se reportera utilement à la demande de brevet FR 03 50641. Selon une autre possibilité, l'un des polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) répond à la formule générale (V) suivante: 1.5 O\ R7 O\ OR80 O D s H - r V 20 dans laquelle : ^ E représente indépendamment : un groupement NHR dans laquelle R représente un H, un alkyle linéaire en C2 à C10 ou ramifié en C3 à C10 ou un benzyle, une unité acide aminé terminale liée par l'azote et dont la fonction(s) 25 acide(s) est éventuellement modifiée par une amine ou un alcool répondant aux définitions NHR et OR respectivement; ^ B est un groupement de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les radicaux suivants : 5 1.0 20 25 30 35 14 -0-, -NH-, -N-alkyle- (Cl à C5), un résidu d'acide aminé (de préférence naturel), un diol, un triol, une diamine, une triamine, un aminoalcool ou un hydroxyacide comportant de 1 à 6 atomes de carbone, ^ D représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à CIO, ou un pyroglutamate; ^ GH représente un groupement hydrophobe comportant 6 à 30 atomes de carbone; ^ R70 identiques ou différents entre eux, représentent les groupes obtenus à partir des composés suivants : une diamine linéaire de 2 à 6 carbones, de préférence la putrescine, - l' agmatine, l'éthanolamine liée par l'oxygène, - la choline liée par l'oxygène, - l'histidine, un dérivé de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide, - un acide aminé ou dérivé dont la chaîne latérale est chargé positivement à pH neutre, i.e. la lysine, l'arginine, l'ornithine, leurs dérivés esters et amides, lié par la fonction amine en position alpha; • le contre-anion du groupement R70 étant de préférence un chlorure, un sulfate, un phosphate ou un acétate; ^ R80 représente un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : - les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium ; - les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine; ^ R90 représente les groupes obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, un polyalkylène glycol; ^ p, q, r et s sont des entiers positifs; ^ (p)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements hydrophobes GH varie de 2 à 99 % molaire, et de préférence entre 5 et 50 %
15 sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes; ^ (q)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements cationiques et varie de 1 à 99 % molaire; ^ (p+q+r+s) varie de 10 à 1000, de préférence entre 30 et 500 ; ^ (r)/(p+q+r+s) varie de 0 à 98 % molaire; ^ (s)/(p+q+r+s) varie de 0 à 98 % molaire.
Les dérivés de la lysine, de l'ornithine, et de l'arginine peuvent être par exemple des esters éthyliques et méthyliques, des amides, et des amides méthylées. De préférence selon cette variante, les groupements hydrophobes GH et les groupements cationiques sont disposés de façon aléatoire en groupements pendants. Il est par ailleurs préférable que le taux de greffage molaire en motif hydrophobe des polyglutamates soit compris entre 2 et 99 %, et de préférence entre 5 et 50 % sous condition que chaque chaîne de polymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes. Le rapport (q)/(p+q+r+s) des polyglutamates signifie qu'ils peuvent contenir de 1 à environ 97 % molaire de groupements contenant une charge cationique. Le rapport (s)/(p+q+r+s) des polyglutamates signifie qu'ils peuvent être anioniques, neutres ou cationiques à pH neutre.
Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (V) dérivés de l'histidine, on se reportera utilement à la demande de brevet FR 05 53302. Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (V) autres que ceux dérivés de l'histidine, on se reportera utilement à la demande de brevet française déposée par la demanderesse le même jour que la présente demande et intitulée "Acides polyglutamiques fonctionnalisés par des groupes cationiques et des groupements hydrophobes et leurs applications, notamment thérapeutiques".
Suivant une variante intéressante, le groupement R4 ou B représenté dans les formules précédentes représente une liaison directe. Selon une autre possibilité, l'un des polymères polyélectrolytes (PEI, PE2) comprend des unités hydroxyalkyl (de préférence éthyl) glutamine et une multiplicité de groupements hydrophobes (GH) pendants et identiques ou différents entre eux. Les unités hydroxyalkylglutamine sont également porteuses de groupements hydroxyalkylamine. Ces groupements hydroxyalkylamine sont, de préférence, liés au copolymère par l'intermédiaire d'une liaison amide. Les groupements hydroxyalkylamine utilisables pour fonctionnaliser les unités glutamates de ces unités hydroxyalkylglutamine sont identiques
16 ou différents entre eux et sont par exemple choisis parmi les groupements suivants: le 2-hydroxyéthylamine, le 3-hydroxypropylamine, le 2,3-dihydroxypropylamine, le tris(hydroxyméthyl)aminométhane et le 6-hydroxyhexylamine. Avantageusement, au moins l'un des groupements hydrophobes GH utilisé dans la présente invention est inclus dans un greffon hydrophobe comprenant au moins une rotule (ou motif) d'espacement ("spacer") permettant de relier le groupement hydrophobe GH à une chaîne de copolyglutamates (par exemple une chaîne principale û squelettecopolyglutamates). Cette rotule peut comprendre, e.g. au moins une liaison covalente directe et/ou au moins une liaison amide et/ou au moins une liaison ester. Par exemple, la l0 rotule peut être du type de celles appartenant au groupe comportant notamment: les unités "acide aminé" différentes de l'unité monomérique constitutive du copolyglutamate, les dérivés des aminoalcools, les dérivés des polyamines (par exemple les diamines), les dérivés des polyols (par exemple les diols) et les dérivés des hydroxyacides. Le greffage des GH sur la chaîne copolyglutamate ou polyalkylglutamine peut passer par la mise en 15 oeuvre de précurseurs de GH, aptes à se lier à la chaîne copolyglutamates ou aux unités hydroxyalkylglutamines. Les précurseurs des GH sont, en pratique et sans que cela ne soit limitatif, choisis dans le groupe comprenant les alcools et les amines, ces composés pouvant être fonctionnalisés facilement par l'homme de l'art. Pour plus de détails sur ces unitéshydroxyalkyl(de préférence éthyl)glutamine, on se référera au FR-A-2.881.140. 20 Suivant une variante avantageuse, notamment selon au moins l'une des différentes possibilités susvisées, tout ou partie des groupements hydrophobes (GH) utilisés dans la présente invention sont choisis de façon indépendante dans le groupe de radicaux comportant : ^ un alcoxy linéaire ou ramifié comportant de 6 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S) et/ou au moins une insaturation, ^ un alcoxy comportant 6 à 30 atomes de carbone et ayant un ou plusieurs carbocycles annelés et contenant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ^ un alcoxyaryle ou un aryloxyalkyle de 7 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S).
Suivant une autre variante avantageuse, notamment selon au moins l'une des 35 différentes possibilités susvisées, le groupement hydrophobe (GH) est issu d'un précurseur alcoolique choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'hexadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol, et R4 représente une liaison directe. 25 30 Suivant une autre variante avantageuse, les groupements hydrophobes (GH), notamment selon au moins l'une des différentes possibilités susvisées, représentent chacun indépendamment les uns des autres un radical monovalent de formule suivante : H O 1 s R R5
(GH)
dans laquelle :
R5 représente un méthyle(alanine), isopropyle (valine), isobutyle (leucine), secbutyle (isoleucine), benzyle (phénylalanine) ;
R6 représente un radical hydrophobe comportant de 6 à 30 atomes de carbone;
1 varie de 0 à 6.
Selon une caractéristique remarquable de l'invention, tout ou partie des radicaux hydrophobes R6 des groupements hydrophobes (GH) sont choisis de façon indépendante dans le groupe de radicaux comportant :
15 ^ un alcoxy linéaire ou ramifié comportant de 6 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S) et/ou au moins une insaturation,
^ un alcoxy comportant 6 à 30 atomes de carbone et ayant un ou plusieurs
carbocycles annelés et contenant éventuellement au moins une insatu-
20 ration et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S),
^ un alcoxyaryle ou un aryloxyalkyle de 7 à 30 atomes de carbone et
pouvant comporter au moins une insaturation et/ou au moins un hétéro-
atome (de préférence O et/ou N et/ou S).
En pratique et sans que cela ne soit limitatif, ledit radical hydrophobe R6 est issu
25 d'un précurseur alcoolique choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'hexadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol.
Avantageusement, la chaîne principale des polyaminoacides polyélectrolytes (PE1, PE2) utilisés dans l'invention est choisie parmi le groupe comprenant les homopolymères d'alpha-L-glutamate, les homopolymères d'alpha-L-glutamique, les homopolymère d'alpha-
30 L-aspartate, les homopolymères d'alpha-L-aspartique, les copolymères d'alpha-L- aspartate/alpha-L-glutamate et les copolymères d'alpha-L-aspartique/alpha-L-glutamique.
De manière remarquable, la distribution des unités aspartiques et/ou glutamiques de la chaîne polyaminoacide principale du polymère polyélectrolyte PEl ou PE2 est telle que le polymère ainsi constitué est soit aléatoire, soit de type bloc, soit de type multibloc. 10
18 De façon similaire, la distribution des différents groupements, notamment les groupements hydrophobes, sur la chaîne principale des polyélectrolytes utilisés dans l'invention est telle que le polyélectrolyte ainsi constitué est soit aléatoire, soit de type bloc, soit de type multibloc. Ainsi, les formules générales décrites ci-dessus ne doivent pas être interprétées comme représentant uniquement des copolymères séquencés (ou blocs), mais également des copolymères aléatoires ou des copolymères multiblocs. Selon un autre mode de définition, le polymère polyélectrolyte PEI ou PE2 a une masse molaire qui se situe entre 2 000 et 100 000 g/mole, et de préférence entre 5 000 et 40 000 g/mole.
Le degré de polymérisation des premier et second polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) est compris entre 50 et 500, de préférence entre 70 et 300. La fraction molaire des chaînons de la chaîne principale substitués par des groupements hydrophobes est comprise entre 1 et 40 % molaire, de préférence entre 3 et 30% molaire.
Les polymères utilisés dans la présente invention sont choisis parmi les différentes familles décrites ci-dessus de sorte qu'ils sont globalement cationiques ou anioniques à la valeur de pH égale à pHm. Une caractéristique essentielle du premier polymère polyélectrolyte (PE1) porteur de groupements hydrophobes latéraux, est de pouvoir former spontanément dans l'eau une solution colloïdale. Sans vouloir être lié par la théorie, on peut avancer que l'association supramoléculaire des groupements hydrophobes pour former des domaines hydrophobes, conduit à la formation de nanoparticules. Chaque nanoparticule est constituée par une ou plusieurs chaînes de polymères PEI plus ou moins condensées autour de ses domaines hydrophobes. Il convient de comprendre que les polymères utilisés dans l'invention contiennent des fonctions ionisables qui sont, selon le pH et la composition, soit neutres (par exemple COOH, NH2), soit ionisées (par exemple COO", NH3+). Pour cette raison, la solubilité dans une phase aqueuse est directement fonction du taux de fonctions ionisées et donc du pH. En solution aqueuse, dans le cas de fonctions carboxyliques, le contre-ion peut être un cation métallique tel que le sodium, le calcium ou le magnésium, ou un cation organique tel que la triéthanolamine, la tris(hydroxyméthyl)-aminométhane ou une polyamine tel que la polyéthylèneimine. Le contre-anion des groupements cationiques est de préférence choisi parmi le groupe comprenant un chlorure, un sulfate, un phosphate ou un acétate.
Connaissant le pH de demi neutralisation, l'homme de l'art sait ajuster le pH afin que le degré d'ionisation du polymère soit suffisamment élevé et assure la stabilité de la solution colloïdale.
19 Les polyélectrolytes de type polyaminoacide susceptibles d'être utilisés dans la présente invention sont obtenus, par exemple, par des méthodes connues de l'homme de l'art. Les polyaminoacides statistiques peuvent être obtenus par greffage du greffon hydrophobe, préalablement fonctionnalisé par "l' espaceur", directement sur le polymère par une réaction classique de couplage. Les polyélectrolytes polyaminoacides blocs ou multiblocs peuvent être obtenus par polymérisation séquentielle des anhydrides de N-carboxy-aminoacides (NCA) correspondants. On prépare par exemple un polyaminoacide, homopolyglutamate, homopolyaspartate ou un copolymère glutamate/aspartate, bloc, multibloc ou aléatoire selon des méthodes classiques. Pour l'obtention de polyaminoacide de type alpha, la technique la plus courante est basée sur la polymérisation d'anhydrides de N-carboxy-aminoacides (NCA), décrites, par exemple, dans l'article "Biopolymers, 1976, 15, 1869 et dans l'ouvrage de H.R. Kricheldorf "alpha Aminoacid-N-carboxy Anhydrides and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Les dérivés d'NCA sont de préférence des dérivés NCA-O-Me, NCA-O-Et ou NCA-O-Bz (Me = Méthyl, Et = Ethyle et Bz = Benzyle). Les polymères sont ensuite hydrolysés dans des conditions appropriées pour obtenir le polymère sous sa forme acide. Ces méthodes sont inspirées de la description donnée dans le brevet FR-A-2 801 226 de la demanderesse. Un certain nombre de polymères utilisables selon l'invention, par exemple, de type poly(alpha-L-aspartique), poly(alpha-L-glutamique), poly(alpha-D-glutamique) et poly(gamma-L-glutamique) de masses variables sont disponibles commercialement. Le polyaspartique de type alpha-bêta est obtenu par condensation de l'acide aspartique (pour obtenir un polysuccinimide) suivie d'une hydrolyse basique (cf. Tomida et al. Polymer 1997, 38, 4733-36).
Le couplage du greffon hydrophobe GH avec une fonction acide du polymère est réalisé aisément par réaction du polyaminoacide en présence d'un carbodiimide comme agent de couplage et optionnellement, un catalyseur tel que le 4-diméthylaminopyridine et dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide (DMF), la N-méthylpyrrolidone (NMP) ou le diméthylsulfoxide (DMSO). Le carbodiimide est par exemple, le dicyclohexylcarbo-diimide ou le diisopropylcarbodiimide. Le taux de greffage est contrôlé chimiquement par la stoechiométrie des constituants et réactifs ou le temps de réaction. Les greffons hydrophobes fonctionnalisés par un "espaceur" sont obtenus par couplage peptidique classique ou par condensation directe par catalyse acide. Le couplage des groupes cationiques et éventuellement neutres avec une fonction acide du polymère est réalisé simultanément dans une deuxième étape en présence d'un chloroformiate comme agent de couplage et dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide, la N-méthylpyrrolidone (NMP) ou le diméthylsulfoxide (DMSO).
20 Dans le cas où le groupe cationique contient deux fonctions amines non différenciées chimiquement (e.g diamine linéaire), il peut être introduit sous une forme dans laquelle une des deux fonctions est protégée. Une dernière étape de clivage du groupement protecteur est alors ajoutée.
La chimie de polymérisation et les réactions de couplage des groupements sont classiques et bien connues de l'homme de l'art (voir par exemples les brevets ou demandes de brevet de la demanderesse cités précédemment).
Pour la synthèse de copolymère bloc ou multibloc, on utilise des dérivés NCA préalablement synthétisé avec le greffon hydrophobe. Par exemple, le dérivé NCA-hydrophobe est copolymérisé avec le NCA-O-Benzyl puis on enlève par hydrolyse sélectivement les groupements benzyliques. Des exemples d'associations particulièrement préférées de polymères polyélectrolytes (PEI et PE2) selon l'invention sont décrits dans les exemples ci-après.
Une caractéristique essentielle des polymères utilisés dans l'invention est que le premier polymère polyélectrolyte (PEI) est sous forme de solution colloïdale, et que le second polymère polyélectrolyte (PE2) est sous forme de solution ou de solution colloïdale pour au moins une valeur, pHm, du pH comprise entre 3 et 8. Afin de remplir cette condition, le pH de demi neutralisation du polymère cationique sera suffisamment élevé, par exemple supérieur à 5,5, de préférence supérieur à 6, ou encore supérieur à 8 ; et le pH de demi neutralisation du polymère anionique sera suffisamment faible, par exemple inférieur à 6,5, de préférence inférieur à 6,0 ou encore inférieur à 5,5. Plus particulièrement, dans une variante selon laquelle le premier polymère polyélectrolyte (PE1) est anionique, ce dernier est choisi de sorte qu'il présente un pH de demi neutralisation compris entre 3 et 6,5, et de préférence entre 4,5 et 6,5. Selon cette variante, le premier polymère polyélectrolyte (PEI) forme une solution colloïdale pour une valeur pHm du pH comprise entre 6 et 8. Un tel polymère PE1 est notamment décrit dans l'exemple la).
Dans ce cas, et selon une première possibilité, le second polymère électrolyte (PE2) est cationique et forme une solution colloïdale à pH inférieur à 8. De préférence, le second polymère polyélectrolyte (PE2) est choisi de sorte qu'il présente un pH de demi neutralisation supérieur à 8. Un tel polymère PE2 est notamment décrit dans l'exemple ld). Ainsi selon cette première possibilité, le premier polymère polyélectrolyte (PE1) forme une solution colloïdale et le second polymère polyélectrolyte (PE2) forme une solution ou une solution colloïdale pour la valeur pHm du pH comprise entre 6 et 8. Dans ce cas, selon une caractéristique importante de l'invention, le rapport de la masse du premier polymère polyélectrolyte (PE1) à la masse du second polymère
21 polyélectrolyte (PE2) est choisi afin que le rapport de charge Z, rapport du nombre de moles de groupements ionisés cationiques au nombre de moles de groupements ionisés anioniques, mesurés à pHm, soit compris entre 0,25 et 3, et de préférence compris entre 0,25 et 1,5.
Selon une deuxième possibilité, le second polymère polyélectrolyte (PE2) est cationique et forme une solution colloïdale à pH inférieur à 6 et un précipité à pH supérieur à 6,5. De préférence, le second polymère polyélectrolyte (PE2) est choisi de sorte qu'il présente un pH de demi neutralisation compris entre 5,5 et 7. Un tel polymère PE2 est notamment décrit dans l'exemple 1c). Dans ce cas, selon une caractéristique importante de l'invention, le premier polymère polyélectrolyte (PE1) forme une solution colloïdale et le second polymère polyélectrolyte (PE2) forme une solution ou une solution colloïdale pour une valeur du pH, pHm, comprise entre 3 et 6. Le rapport de la masse du premier polymère polyélectrolyte (PE1) à la masse du second polymère polyélectrolyte (PE2) est choisi afin que le rapport de charge Z, mesuré à pHm, soit compris entre 3,5 et 30, de préférence compris entre 5 et 15, et plus préférentiellement encore compris entre 8 et 12. Dans une autre variante selon laquelle le premier polymère polyélectrolyte (PE1) est cationique, ce dernier est choisi de sorte qu'il présente un pH de demi neutralisation supérieur à 5. Dans ce cas, le second polymère électrolyte (PE2) est anionique et est choisi de sorte qu'il présente un pH de demi neutralisation compris entre 3 et 6,5, et de préférence entre 4,5 et 6, 5. Les particules selon l'invention présentent, à pH physiologique, une taille, mesurée dans un test T, comprise entre 1 et 100 microns. D'une manière avantageuse, les particules selon l'invention ne sont pas réticulées chimiquement.
Dans une réalisation particulière de l'invention, les particules présentent, à pH physiologique, une densité apparente en polymère élevée, comprise entre 0,15 et 1,1, de préférence comprise entre 0,3 et 1,0, et plus préférentiellement encore comprise entre 0,5 et 1,0. Une densité en polymère élevée traduit l'existence au sein des particules d'un réseau dense de chaînes polymères. Sans vouloir être lié par la théorie, on peut supposer que ce réseau dense ralentit la diffusion du principe actif (PA) contenu dans les particules selon l'invention vers le milieu extérieur et contribue ainsi à ralentir sa libération. Un aspect surprenant des particules denses selon l'invention est que le réseau de chaînes de polymères qui les constitue, permet de ralentir la libération du principe actif (PA) sans pour autant piéger ce même principe actif (PA) au coeur des particules. Ainsi le transporteur selon l'invention permet d'obtenir à la fois une libération prolongée du principe actif (PA) et une bonne biodisponibilité. Dans une réalisation particulière de l'invention, la concentration totale en polymère (PE1 + PE2) contenue dans la formulation est comprise entre 4 et 15 mg/ml, notamment
22 lorsque le principe actif (PA) est une protéine thérapeutique. Dans cette gamme de concentration, la formulation est aisément injectable par une aiguille de faible diamètre, par exemple une aiguille de Gauge 27, voire 29, et même 31. Les exemples 3 et 4 décrivent en détails de telles formulations.
Concernant le principe actif (PA), il est de préférence choisi dans le groupe comprenant: les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol [de préférence polyéthylèneglycol (PEG) : "protéines-PEGylées"], les peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les oligonucléotides, les polynucléotides et leurs mélanges, et, plus préférentiellement encore, dans le sous-groupe des érythroproïétines, telles que l'époétine alpha, l'époétine béta, la darbépoétine, le raffimère d'hémoglobine, leurs analogues ou leurs dérivés; oxytocine, vasopressine, hormone adrénocorticotropique, facteur de croissance épidermal, facteur de croissance des plaquettes (PDGF), les facteurs stimulants de l'hématopoïèse et leurs mélanges, les facteurs sanguins, tels que alteplase, tenecteplase, facteur VII(a), facteur VII; hémoglobine, les cytochromes, les albumines prolactine, luliberine, hormone relargant l'hormone lutéinisante (LHRH) en analogues, tels que leuprolide, goséréline, triptoréline, buseréline, nafaréline; antagonistes de la LHRH, les concurrents de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaine, porcine ou bovine, le facteur relargant l'hormone de croissance, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines ou leurs mélanges (IL-2, IL-11, IL-12), les interférons, tels que l'interféron alpha, alpha-2b, bêta, bêta-la, ou y; la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, l'enkephaline, les endomorphines, les angiotensines, l'hormone relargant la thyrotropine (TRH), le facteur nécrosant des tumeurs (TNF), le facteur de croissance des nerfs (NGF), les facteurs de croissance tels que beclapermine, trafermine, ancestim, le facteur de croissance des kératinocytes, le facteur stimulant les colonies granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages granulocytaires (GM-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages (M-CSF), heparinase, la protéine morphogénique de l'os (BMP), hANP, le peptide ressemblant au glucagon (GLP-1), VEG-F, l'antigène recombinant de l'hépatite B (rHBsAg), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymixines, les colistines, la tyrocidine, les gramicidines, l'étanercept, l'imiglucérase, la drotrécogine alpha, les cyclosporines et analogies synthétiques, les modifications et fragments actifs pharmaceutiquement d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, d'antigènes et de vaccins, les anticorps tels que rituximab, infliximab, trastuzumab, adalimumab, omalizumab, tositumomab, efalizumab, et cetuximab. D'autres principes actifs sont les polysaccharides (par exemple, l'héparine) et les oligo- ou polynucléotides, ADN, ARN, iARN, antibiotiques, et cellules vivantes. Une autre classe de principes actifs comprend les substances pharmaceutiques agissant sur le système
23 nerveux central, par exemple, rispéridone, zuclopenthixol, fluphénazine, perphénazine, flupentixol, halopéridol, fluspirilene, quétiapine, clozapine, amisulprid, sulpirid, ziprasidone, etc. Selon une variante, le principe actif est une "petite" molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile du type de celles appartenant à la famille des anthracyclines, des taxoïdes ou des camptothécines ou du type de celles appartenant à la famille des peptides telles que la leuprolide ou la cyclosporine et leurs mélanges. Au sens du présent exposé, une "petite" molécule est notamment une petite molécule non protéinique, par exemple exempte d'acides aminés.
Selon une autre variante, le principe actif est avantageusement choisi parmi au moins l'une des familles de substances actives suivantes : les agents de traitement de l'abus d'alcool, les agents de traitement de la maladie d'Alzheimer, les anesthésiques, les agents de traitement de l'acromégalie, les analgésiques, les antiasthmatiques, les agents detraitement des allergies, les agents anticancéreux, les anti-inflammatoires, les anticoagulants et antithrombotiques, les anti-convulsivants, les antiépileptiques, les antidiabétiques, les antiémétiques, les antiglaucomes, les antihistaminiques, les antiinfectieux, les antibiotiques, les antifongiques, les antiviraux, les antiparkinsoniens, les anti-cholinergiques, les antitussifs, les inhibiteurs de l'anhydrase carbonique, les agents cardiovasculaires, les hypolipémiants, les anti-arythmiques, les vasodilatateurs, les antiangineux, les anti-hypertenseurs, les vasoprotecteurs, les inhibiteurs de cholinestérase, les agents de traitement des désordres du système nerveux central, les stimulants du système nerveux central, les contraceptifs, les promoteurs de fécondité, les inducteurs et inhibiteurs du travail utérin, les agents de traitement de la mucoviscidose, les agonistes des récepteurs de la dopamine, les agents de traitement de l'endométriose, les agents de traitement des dysfonctionnements érectiles, les agents de traitement de la fertilité, les agents de traitements des troubles gastro-intestinaux, les immunomodulateurs et les immunosuppresseurs, les agents de traitement des troubles de la mémoire, les antimigraineux, les relaxants des muscles, les analogues de nucléosides, les agents de traitement de l'ostéoporose, les parasympathomimétiques, les prostaglandines, les agents psychothérapeutiques, les sédatifs, les hypnotiques et tranquillisants, les neuroleptiques, les anxiolytiques, les psychostimulants, les antidépresseurs, les agents de traitements dermatologiques, les stéroïdes et les hormones, les amphétamines, les anorexiques, les anti-douleurs non analgésiques, les anti-épileptiques, les barbituriques, les benzodiazépines, les hypnotiques, les laxatifs, les psychotropes et toutes les associations de ces produits. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé de préparation de particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif, ces particules étant en particulier celles décrites ci-dessus, ledit procédé comprenant les étapes suivantes:
24 1) la préparation, à une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8, d'une solution colloïdale aqueuse d'un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) étant capable de former spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur, pHm, du pH comprise entre 3 et 8; 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au premier polymère polyélectrolyte (PE1) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit premier polymère polyélectrolyte (PE1); 3) la préparation d'un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur, pHm, du pH; à la condition que, si le premier polymère électrolyte (PEI) est un polyaminoacide, alors le second polymère polyélectrolyte (PE2) n'est ni la polylysine ni la polyéthylène imine; 4) le mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules auxquelles est associé le 20 principe actif (PA) obtenu à l'étape 2) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale obtenu à l'étape 3). L'invention a également pour objet un procédé de préparation de particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), ces particules correspondant en 25 particulier à certaines décrites ci-dessus, comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8, d'une solution colloïdale aqueuse d'un premier polymère polyélectrolyte (PEI) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) étant capable de former 30 spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur, pHm, du pH comprise entre 3 et 8; 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au premier polymère polyélectrolyte (PE1) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit premier 35 polymère polyélectrolyte (PEI); 3) la préparation d'un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) 10 15
25 formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; 4) le mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules auxquelles est associé le principe actif (PA) obtenu à l'étape 2) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale obtenu à l'étape 3).
Une caractéristique essentielle du procédé selon l'invention est de former des particules, spontanément, par simple mélange à pHm d'une solution colloïdale de particules du premier polymère polyélectrolyte (PE1) chargées en principe actif (PA) et d'une solution ou d'une solution colloïdale du second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée. Les principes actifs tels que des protéines, des peptides ou des petites molécules, peuvent s'associer spontanément au premier polymère (PE1) de type polyaminoacides. Le chargement des nanoparticules du premier polymère polyélectrolyte (PE 1) par le principe actif (PA) s'effectue par simple mélange d'une solution de principe actif (PA) avec une solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1). Cette association est purement physique et n'implique pas de création de liaison covalente entre le principe actif (PA) et le polymère (PE1). Sans être lié par la théorie, on peut supposer que cette association non spécifique s'effectue par interaction hydrophobe et/ou électrostatique entre le polymère (PE1) et le principe actif (PA). Il est à noter qu'il n'est pas nécessaire, et souvent même non souhaitable, de lier le PA aux nanoparticules de PEl par des récepteurs spécifiques de nature peptidique ou de type antigène/anticorps ou encore enzyme/substrat.
Dans un mode de réalisation préféré du procédé selon l'invention, il n'est pas prévu d'étape de réticulation chimique des particules obtenues. Les particules selon l'invention ne sont donc pas réticulées chimiquement et libèrent néanmoins le principe actif (PA) sur une durée prolongée. Cette absence de réticulation chimique est un avantage décisif des particules selon l'invention. En effet, l'absence de réticulation chimique permet d'éviter la dégradation chimique du principe actif (PA) lors de l'étape de réticulation des particules contenant le principe actif (PA). Une telle réticulation chimique est en effet généralement conduite par activations d'entités polymérisables et met en jeu des agents potentiellement dénaturants tel que les rayonnements UV, ou du glutaraldehyde. Avantageusement, le procédé selon l'invention comprend une étape de déshydratation de la suspension de particules obtenues (par exemple par lyophilisation ou atomisation), afin de les obtenir sous forme de poudre sèche. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet une formulation pharmaceutique pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), comprenant
26 une suspension aqueuse de particules telles que décrites ci-dessus ou celles obtenues par le procédé décrit ci-dessus. La présente invention concerne également une formulation pharmaceutique solide pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), comprenant une forme poudre sèche: • à base de particules contenant au moins un principe actif (PA), ces particules étant celles décrites ci-dessus ou celles obtenues par le procédé décrit ci-dessus; • ou obtenue à partir de la formulation comprenant une suspension en solution aqueuse évoquée ci-dessus.
Avantageusement, une telle formulation pharmaceutique solide est utilisée pour inhalation et administration pulmonaire. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé de préparation de médicaments, en particulier pour administration parentérale, mucosale, sous-cutanée, intramusculaire, intradermique, transdermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou dans une tumeur, voire par voie orale, nasale, pulmonaire, vaginale ou oculaire, ledit procédé consistant essentiellement à mettre en oeuvre au moins l'une des formulations décrites ci-dessus.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1: Relargage in vitro d'IFN-a à partir des formulations de particules de l'exemple 2 (ronds blancs), de l'exemple 3.1 (triangles noirs), de l'exemple 3.2 (losanges noirs), de l'exemple 3.3 (carrés noirs), de l'exemple 4 (ronds noirs) et de l'exemple 5 (traits).
25 EXEMPLES
1) Synthèses: a) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PEI A porteur de groupements hydrophobes, 30 anionique, (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine synthétique) On solubilise 15 g d'un acide alpha-L-polyglutamique (de masse équivalente à environ 16 900 Da par rapport à un standard en polyoxyéthylène et obtenu par polymérisation de NCAGIuOMe suivie d'une hydrolyse comme décrits dans la demande de brevet 35 FR-A-2 801 226) dans 288 ml de diméthylformamide (DMF) en chauffant à 80 C jusqu'à solubilisation du polymère. On refroidit la solution à 15 C et on ajoute successivement 2,5 g de D, L-alpha-tocophérol (> 98 % obtenu de Fluka ) préalablement solubilisé dans 8 ml20
27 de DMF, 280 mg de 4-dimethylaminopyridine préalablement solubilisé dans 1 ml de DMF et 1,6 g de diisopropylcarbodiimide préalablement solubilisé dans 6 ml de DMF. Après 3 heures sous agitation, le milieu réactionnel est versé dans 1200 ml d'eau contenant 15 % de chlorure de sodium et d'acide chlorhydrique (pH 2). Le polymère précipité est ensuite récupéré par filtration, lavé par de l'acide chlorhydrique 0, 1 N, de l'eau et par de l'éther diisopropylique. Le polymère est ensuite séché à l'étuve sous vide à 40 C. On obtient un rendement de l'ordre de 90 %. La masse molaire mesurée par la chromatographie d'exclusion stérique est de 15500 par rapport à un standard polyoxyéthylène. Le taux de tocophérol greffé, estimé par la spectroscopie RMN du proton, est de 5,1 % molaire. b) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PEl -B anionique (polyglutamate de sodium) On adapte la synthèse d'un acide alpha-L-polyglutamique comme décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226. La masse molaire mesurée par la chromatographie d'exclusion stérique est de 16 900 Da par rapport à un standard en polyoxyéthylène. c) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PE2-A cationique (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine synthétique et par de l'histidinamide) O OIT N H o m Indices et groupements : m = 11, p = 209, q = 0, T = D,L-alpha-tocophérol (T)
3 g d'un poly(acide glutamique) de DP 220 greffé à 5% de façon statistique avec de 25 l'alpha-tocophérol racémique sont solubilisés par chauffage à 80 C dans 38 ml de NMP. À cette solution refroidie à 0 C, sont ajoutés 2,74 g d'isobutyl chloroformate puis 2,2 mL de N-méthyl morpholine. Le milieu réactionnel est agité 10 minutes en maintenant la
28 température à 0 C. En parallèle, 8,65 g du dichlorhydrate d'histidinamide sont suspendus dans 108 mL de NMP. 10,6 ml de triéthylamine sont ensuite ajoutés et la suspension obtenue est agitée à 20 C pendant quelques minutes puis refroidie à 0 C. On procède ensuite à l'ajout de la solution de polymère activé sur la suspension d'histidinamide. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à 0 C, puis 1 nuit à 20 C. On ajoute ensuite 0,62 mL d'HCl 35 %, puis 83 mL d'eau. On verse ensuite la solution obtenue dans 500 mL d'eau à pH 3-4. La solution est ensuite diafiltrée contre 8 volumes d'eau salée (0,9% NaCl) et 4 volumes d'eau. La solution de polymère est ensuite concentrée jusqu'à un volume de 300 mL (la concentration en polymère est de 18 mg/g). Le pourcentage d'histidinamide greffée, déterminé par RMN'H dans D20 est de 95 %. d) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PE2-B cationique (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine synthétique et par de l'arginine) NH HN) NH3+ CI- CONH2 Off/ NH OONa O T O N /~/OH H Indices et groupements : T = D,L-a-tocophérol, p = s = 11 ,q = 198, r = 0 Dix grammes d'un poly(acide glutamique) de DP 220 greffé à 5 % de façon statistique avec de l'a-tocophérol racémique sont solubilisés dans 125 mL de NMP à 80 C. Cette solution est refroidie à 0 C, et 8,7 mL de chloroformiate d'iso-butyle puis 7,35 mL de N-méthyl morpholine sont ajoutés. Ce mélange réactionnel est agité 15 minutes à 0 C. En parallèle, 24,67 g de dichlorhydrate d'argininamide sont suspendus dans 308 mL de NMP et 14,7 mL de triéthylamine sont ajoutés. La suspension obtenue est agitée quelques minutes à 20 C puis refroidie à 0 C. La suspension laiteuse de polymère activé est alors additionnée à cette suspension, et le mélange réactionnel est agité pendant H J - P O q O O H N H N H2N
29 2 h à 0 C, puis une nuit à 20 C. Après ajout de 2,1 mL d'une solution d'HCl 35 % puis 100 mL d'eau, le mélange réactionnel est versé goutte à goutte dans 1,6 L d'eau. La solution obtenue est diafiltrée contre 8 volumes d'eau salée (0,9 %) puis 4 volumes d'eau, et concentrée jusqu'à un volume d'environ 250 mL. Le pourcentage d'argininamide greffée, déterminé par RMN du proton dans D20, est de 90 %.
2) Exemple 1 (comparatif): préparation de particules avec des polyélectrolytes ne présentant pas de groupement hydrophobe (1) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PEI-B: On utilise le polymère PEI-B obtenu selon la synthèse b) ci-dessus. Ce polymère a un pH de demi-neutralisation égal à 5,985. Une solution colloïdale de polymère PEl-B est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,63 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est ajustée à 100 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PE1-B est ajustée à 8,38 mg/g.
(2) Association de la protéine au polymère PE1-B: On ajoute à la solution colloïdale de polymère PEI-B précédente de la protéine IFN-a (PC 20 GEN) concentrée à 2,4 mg/g. On obtient l'association ayant les caractéristiques suivantes : [PE 1-B] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH 4,55 1,1 7,17 L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation.
25 (3) Préparation d'une solution colloïdale de poly-L-arginine (Aldrich P7637):
Ce polymère a un pH de demi-neutralisation supérieur à 9. Une solution colloïdale de poly-L-arginine est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant premièrement le pH à 0,92 avec une solution de HC1, puis en le remontant à pH 30 égal à 6,91 avec une solution de NaOH et en chauffant la solution à 45 C pendant 15 mn. La concentration en polymère poly-L-arginine est ajustée à 5,13 mg/g.
(4) Mélange pour obtenir les particules On ajoute goutte à goutte sous agitation 1,37 g de la solution de poly-L-arginine sur 1,06 g 35 de la solution de IFN-a/PE1-B, à 45 C. On agite 15 mn à 45 C. Puis, on agite une nuit à 4 C.
30 Le tableau I ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues:
Le rapport de charge Z est le rapport du nombre de moles de groupements ionisés cationiques au nombre de moles de groupements ionisés anioniques, mesurés à pHm égal à 6, 95. La taille des particules est mesurée selon le test T. Tableau I [polymère] [IFN-a] Z pHm Taille (mg/g) (mg/g) ( m) 4,8 0,48 1,06 6,95 15,92 (5) Quantification de l'encapsulation de la protéine On centrifuge la suspension 15 mn à 8000 rpm et on dose l'IFN-a dans le surnageant par la méthode décrite dans la Pharmacopée Européenne (dosage colorimétrique par absorbance UV). [IFN-a] totale [IFN-a] libre Rendement (mg/g) (mg/g)_ (%) 0,48 0,15 71 Presque un tiers de la protéine introduite n'est pas encapsulé dans les microparticules formées. Cette proportion ne peut conduire à un relargage contrôlé.
3) Exemple 2 : préparation de particules avec un seul polyélectrolyte (PEI) présentant des 25 groupements hydrophobes
(1) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE1-A: On utilise le polymère PE1-A obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Ce polymère a un pH de demi-neutralisation égal à 5,445. 30 Une solution colloïdale de polymère PE1-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,53 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est 10 15 20
31 ajustée à 101 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PE1-B est ajustée à 8,41 mg/g.
(2) Association de la protéine au polymère PE1-A: On ajoute à la solution colloïdale de polymère PEI-A précédente de la protéine IFN-a (PC GEN) concentrée à 2,4 mg/g. On obtient l'association ayant les caractéristiques suivantes : [PE 1-A] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH 4,58 1,1 7,17 L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation. (3) Préparation d'une solution colloïdale de poly-L-arginine (Aldrich P7637): On prépare la solution de façon identique à celle décrite dans l'exemple 1.
(4) Mélange pour obtenir les particules On ajoute goutte à goutte sous agitation 1,24 g de la solution de poly-L-arginine sur 1,07 g 15 de la solution de IFN-a/PE1-A, à 45 C. On agite 15 mn à 45 C. Puis, on agite une nuit à 4 C.
Le tableau II ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues:
20 Le rapport de charge Z est mesuré à pHm égal à 6,88. La taille des particules est mesurée selon le test T.
Tableau II [polymère] [IFN-a] Z pHm Taille (mg/g) (mg/g) _ ( m) 4,7 0,505 1,00 6,88 18,24 (5) Quantification de l'encapsulation de la protéine On centrifuge la suspension 15 mn à 8000 rpm et on dose l'IFN-a dans le surnageant par la méthode décrite dans la Pharmacopée Européenne (dosage colorimétrique par absorbance UV). 25 30 [IFN-a] totale [IFN-a] libre Rendement (mg/g) (mg/g) (%) 0,505 0,01 98 La totalité de la protéine introduite est encapsulée dans les microparticules formées.
4) Exemple 3: préparation de particules à base de PEI-A et de PE2-A, contenant de 5 l'IFN-a
4.1) Exemple 3.1: concentration finale en polymère environ égale à 10 mg/g, Z étant égal à 1 environ
10 (1) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PEI-A: On utilise le polymère PEI-A obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Ce polymère a un pH de demi-neutralisation égal à 5,445. Une solution colloïdale de polymère PE1-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,45 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est 15 ajustée à 108 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PE1 est ajustée à 23,88 mg/g.
(2) Association de la protéine au polymère PE1-A: On ajoute à la solution colloïdale de polymère PE1-A précédente de la protéine IFN-a (PC 20 GEN) concentrée à 2,4 mg/g et du NaCl à 89 mOsm. On obtient l'association ayant les caractéristiques suivantes : [PE1-A] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) 13,33 1,01 _6,51 322 L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation. L'association est ensuite ajustée à pH égal à 5,07. (3) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE2-A: On utilise le polymère PE2-A obtenu selon la synthèse c) ci-dessus. Ce polymère a un pH de demi-neutralisation égal à 6,05. 25 30
33 Une solution colloïdale de polymère PE2-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 5,17. L'osmolarité de la solution est ajustée à 289 mOsm et la concentration en polymère PE2-A est ajustée à 5,70 mg/g. (4) Mélange pour obtenir les particules On ajoute goutte à goutte sous agitation 4,98 g de la solution de PE2-A sur 4,61 g de la solution de IFN-a/PE1-A. On agite une nuit à 4 C.
Le tableau III ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues: Le rapport de charge Z est mesuré à pHm égal à 5,17. La taille des particules est mesurée selon le test T.
15 Tableau III [polymère] [IFN-a] Z pHm Osmolarité Taille (mg/g) (mg/g) (mOsm) ( m) 9,1 0,46 0,83 5,17 370 7,7 4.2) Exemple 3.2: concentration finale en polymère égale à 5 mg/g, Z étant égal à 10 environ 20 (1) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE1-A: On utilise le polymère PEI-A obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PEI est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,52 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est 25 ajustée à 108 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PE I est ajustée à 20,21 mg/g.
(2) Association de la protéine au polymère PE1-A: On ajoute à la solution colloïdale de polymère PE1-A précédente de la protéine IFN-a (PC 30 GEN) concentrée à 2,4 mg/g et du NaCl à 89 mOsm. On obtient l'association ayant les caractéristiques suivantes : [PEI-A] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) 1,7 0,1 5,45 32410 L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation. L'association est ensuite ajustée à pH égal à 4,88. (3) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE2-A: On utilise le polymère PE2-A obtenu selon la synthèse c) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PE2-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 5,07. L'osmolarité de la solution est ajustée à 287 mOsm et la concentration en polymère PE2-A est ajustée à 8,11 mg/g. (4) Mélange pour obtenir les particules On ajoute goutte à goutte sous agitation 5,19 g de la solution de PE2-A sur 5,02 g de la solution de IFN-a/PEI-A. On agite une nuit à 4 C.
Le tableau IV ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues:
Le rapport de charge Z est mesuré à pHm égal à 4,81. La taille des particules est mesurée selon le test T.
Tableau IV [polymère] [IFN-a] Z pHm Osmolarité Taille (mg/g) (mg/g) (mOsm) ( m) 5,0 0,49 13,43 4,81 306 15,1 4.3) Exemple 3.3: concentration finale en polymère égale à 10 mg/g, Z étant égal à 10 environ (1) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE1-A: On utilise le polymère PEl-A obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PE1-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,52 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est ajustée à 108 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PE1-A est ajustée à 20,21 mg/g. (2) Association de la protéine au polymère PE1-A: On ajoute à la solution colloïdale de polymère PEI-A précédente de la protéine IFN-a (PC GEN) concentrée à 2,4 mg/g et du NaCl à 89 mOsm. On obtient l'association ayant les 35 caractéristiques suivantes : [PEl-A] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) 3,39 1,01 5,83 347 L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation. L'association est ensuite ajustée à pH égal à 5,07. (3) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE2-A: On utilise le polymère PE2-A obtenu selon la synthèse c) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PE2-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 5,08. L'osmolarité de la solution est ajustée à 288 mOsm et la 10 concentration en polymère PE2-A est ajustée à 16,37 mg/g.
(4) Mélange pour obtenir les particules On ajoute goutte à goutte sous agitation 5,25 g de la solution de PE2-A sur 5,19 g de la solution de IFN-a/PEI-A. On agite une nuit à 4 C.
Le tableau V ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues:
Le rapport de charge Z est mesuré à pHm égal à 4,95. La taille des particules est mesurée selon le test T. Tableau V [polymère] [IFN-a] Z pHm Osmolarité Taille (mg/g) (mg/g) (mOsm) ( m) 9,9 0,5 8,20 4,95 314 10,3 25 5) Exemple 4 : préparation de particules à base de PE1-A et de PE2-B, contenant de l7FN--a, concentration finale en polymère égale à 5 mg/g, Z = 1
(1) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE1-A: On utilise le polymère PE1-A obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. 30 Une solution colloïdale de polymère PE1-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,52 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est 15 20
36 ajustée à 108 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PEl-A est ajustée à 20,21 mg/g.
(2) Association de la protéine au polymère PE1-A: On ajoute à la solution colloïdale de polymère PE1-A précédente de la protéine IFN-a (PC GEN) concentrée à 2,4 mg/g et du NaCl à 89 mOsm. On obtient l'association ayant les caractéristiques suivantes : [PEl-A] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) 3,715 1,01 5,89 335 L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation. L'association est ensuite ajustée à pH égal à 6,89. (3) Préparation d'une solution colloïdale de polymère PE2-B: On utilise le polymère PE2-B obtenu selon la synthèse d) ci-dessus. Ce polymère a un pH 15 de neutralisation supérieur à 9. Une solution colloïdale de polymère PE2-B est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 6,98. L'osmolarité de la solution est ajustée à 288 mOsm et la concentration en polymère PE2-B est ajustée à 6,33 mg/g.
20 (4) Mélange pour obtenir les particules On ajoute goutte à goutte sous agitation 4,06 g de la solution de PE2-B sur 4,59 g de la solution de IFN-a/PEI-A. On agite une nuit à 4 C.
Le tableau VI ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues:
Le rapport de charge Z est mesuré à pHm égal à 6,85. La taille des particules est mesurée selon le test T.
Tableau VI [polymère] [IFN-a] Z pHm Osmolarité Taille (mg/g) (mg/g) (mOsm) ( m) 5 0,46 1,01 6,85 360 17,1 25 30 6) Exemple 5 (comparatif) : préparation de particules à base de PE1-A seul, contenant de l'IFN- a
On utilise le polymère PE1-A obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PE1-A est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,52 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est ajustée à 108 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PE1-A est ajustée à 29,05 mg/g. On ajoute à la solution colloïdale de polymère PE1 précédente de la protéine IFN-a (PC GEN) concentrée à 2,4 mg/g. L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C, sous agitation.
Le tableau VII ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues: La taille des particules est mesurée selon le test T'.
Tableau VII [PE1-A] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) Taille (nm) 23 0,5 7,20 300 40 7) Résultats in vitro pour les exemples 2, 3, 4 et 5 Pour cela, on mesure la libération du principe actif à partir des particules selon l'invention en utilisant le test L.
La figure 1 montre le relargage dans le test L sous la forme du pourcentage de protéine relarguée au cours du temps.
La formulation de l'exemple comparatif 2 où un seul des polymères est porteur de groupements hydrophobes présente un profil de relargage très faible, avec 1.6% de la protéine relarguée au bout de 23 heures. La formulation de l'exemple comparatif 5, contenant 23 mg/g de particules dePEl présente 30 un profil similaire aux particules de l'exemple 3.1 (PE1IPE2-A, Z=1 à 10 mg/g) (respectivement 93% en 10 heures et 72% en 48 heures). Dans le cas des particules des exemples 3.2 (PEI/PE2-A, Z = 10 et 5 mg/g) et 3.3 (PE1/PE2-A, Z = 10 et 10 mg/g), on observe la création d'un flux constant de relargage, qui n'est pas nul à la fin de l'expérience : respectivement 65 et 19% de la protéine injectée 35 en 48 heures. 37
38 Dans le cas des particules de l'exemple 4 (PE1/PE2-B, Z = 1 et 5 mg/g), on observe la création d'un flux constant de relargage, qui n'est pas nul à la fin de l'expérience, avec un relargage de 7% de la protéine injectée en 48 heures. 8) Résultats in vivo pour les exemples 3, 4 et 5
44 rats ont été séparés en 5 groupes de 8 ou 12 animaux et ont reçu en parallèle une formulation à libération immédiate IR ou une formulation à relargage prolongée correspondant à l'exemple comparatif 5 ou une des formulations des exemples de l'invention 3 et 4, à la dose de 300 g/kg.
Les résultats pharmaco-cinétiques sont regroupés dans le tableau VIII ci-dessous: 15 Tableau VIII Exemple N Cmax Tmax AUC T50%Auc RBA (%) (ng/mL) médian (ng x (hr) (intervalle) h/mL) (heure) IFN IR 12 100,6 05 (0,25- 255,9 1,5 100 (0,5) 1) Ex 4 8 1,8 3 (3-6) 13,6 9,0 5 Ex 3.1 8 7,6 3 (3-6) 126,4 11,4 49 Ex 3.2 8 6,1 3 (3-6) 128,4 18,6 50 Ex 3.3 8 1,7 3 (3-12) 74,2 30,7 > 29 Ex 5 8 3,5 12 (6-24) 95,7 18,4 62 Cmax représente la concentration plasmatique maximale moyenne en protéine sur l'ensemble des animaux. 20 Tmax médian représente la médiane du temps pour lequel la concentration plasmatique passe par son maximum. AUC représente l'aire moyenne sous la courbe de la concentration plasmatique en fonction du temps. T50%Auc représente le temps moyen au bout duquel l'aire sous la courbe atteint 25 50% de sa valeur totale.
39 RBA représente le rapport de l'aire sous la courbe de la formulation considérée à l'aire sous la courbe de la formulation IFN IR. Toutes les formulations présentent un profil de libération prolongée accompagné d'une baisse du C. par rapport à l'IR.
A l'exception de la formulation de l'exemple 3.1 (PE1/PE2-A, Z=1 à 10 mg/g) dont le profil de libération est proche de celle de la formulation de l'exemple comparatif 5, la pente terminale est plus faible, ce qui indique une absorption résiduelle prolongée. On notera pour la formulation de l'exemple 3.3 (PE1/PE2-A, Z = 10 et 10 mg/g) un relargage jusqu'à plus d'une semaine.10

Claims (14)

REVENDICATIONS
1 - Particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisées en ce qu'elles comprennent: a) un premier polymère polyélectrolyte (PEI) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) formant spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8; b) un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; à la condition que, si le premier polymère électrolyte (PE1) est un polyaminoacide, alors le second polymère polyélectrolyte (PE2) n'est ni la polylysine ni la polyéthylène imine; c) au moins un principe actif (PA) associé de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1); lesdites particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA) étant obtenues par mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules associées au principe actif (PA) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale.
2 - Particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisées en ce qu'elles comprennent: a) un premier polymère polyélectrolyte (PEI) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PEI) formant spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8; b) un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; c) au moins un principe actif (PA) associé de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale du premier polymère polyélectrolyte (PE1); lesdites particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA) étant obtenues par mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules associées au principe actif (PA) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale.
3 - Particules selon la revendication 1 ou 2, caractérisées en ce que les premier et second polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) sont des alpha polyaminoacides linéaires.
4 - Particules selon la revendication précédente, caractérisées en ce que les premier et second polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) sont des polyaminoacides dont la chaîne principale est formée par des unités choisies dans le groupe comprenant les unités aspartiques, les unités glutamiques et leurs combinaisons, au moins une partie de ces unités étant modifiées par greffage d'au moins un groupement hydrophobe (GH) pour au moins le premier polymère polyélectrolyte (PEI).
5 - Particules selon la revendication précédente, caractérisées en ce que les groupements hydrophobes (GH) sont identiques ou différents entre eux et sont sélectionnés dans le groupe comprenant: (i) les alkyles, les acyles ou les alcényles linéaires ou ramifiés, de préférence linéaires en C1-C20 et, plus préférentiellement encore en C2-C18 ; (ii) les groupements hydrocarbonés contenant un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence ceux contenant de l'oxygène et/ou du soufre et, plus préférentiellement encore, ceux de formule suivante: H H ~CùCH20ù;\ ùq ÇùCH2OR6o R60 R60 dans laquelle: - les radicaux R60 sont identiques ou différents entre eux et correspondent à l'hydrogène ou à un radical répondant à la même définition que celle donnée supra au point (i), - q=1à100; (iv) les aryles, les aralkyles ou les alkylaryles, de préférence les aryles ; (v) les dérivés naturels hydrophobes, de préférence le cholestérol, les phosphatidylcholines et les diacylglycérols.
6 - Particules selon la revendication 4, caractérisées en ce que l'un des polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) répond à la formule générale (I) suivante:NHR1 (1) dans laquelle : ^ RI représente un H, un alkyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à CIO, benzyle, -R4-[GH], ou RI forme avec NH une unité acide aminé terminale; ^ R2 représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à C10, un pyroglutamate ou -R4-[GH] ; ^ R3 est un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, - les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : 15 • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine; 20 ^ R4 représente une liaison directe ou un "espaceur" à base de 1 à 4 unités acide aminé ; ^ A représente indépendamment un radical -CH2- (unité aspartique) ou - CH2-CH2- (unité glutamique) ; ^ n/(n+m) est défini comme le taux de greffage molaire et sa valeur est 25 suffisamment basse pour que le polymère mis en solution dans l'eau à pH 7 et à 25 C, forme une suspension colloïdale de particules de polymère; ^ n + m varie de 10 à 1000, de préférence entre 50 et 300 ; GH représente un groupement hydrophobe comportant 6 à 30 atomes de carbone. 30
7 - Particules selon la revendication 4, caractérisées en ce que le polymère polyélectrolyte PE2 répond à l'une des formules générales (II), (III) et (IV) suivantes : 10/COOR3 /COOR3 O A H H A O [GH] NR4 NN~ N - m, R3 O O H _ 1 1 [GH] R4 COOR3 A/ O O A H N [G H] m' R 3' COOR O N I/ H n' R5 10 15 20 25 H [GH] 4 /N R 3' COOR H A/ O [GH] 1 - \Ra--N n.~~Ra/[GH] O H dans lesquelles : ^ GH représente un groupement hydrophobe comportant 6 à 30 atomes de carbone; ^ R3 est un groupement alkyle linéaire en C2 à C6 ; ^ R3 ' est un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : - les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine; ^ R50 est un groupement alkyle, dialcoxy ou diamine en C2 à C6 ; ^ R4 représente une liaison directe ou un "espaceur" à base de 1 à 4 unités acide aminé ; ^ A représente indépendamment un radical -CH2- (unité aspartique) ou - CH2-CH2- (unité glutamique) ; ^ n' + m' ou n"est défini comme le degré de polymérisation et varie de 10 à 1000, de préférence entre 50 et 300.
8 - Particules selon la revendication 4, caractérisées en ce que l'un des polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) répond à la formule générale (V) suivante: Rio O~~OR80 H 7N O - a P O B O R9O GH N H ùr O D s V dans laquelle : ^ E représente indépendamment : - un groupement NHR dans laquelle R représente un H, un alkyle linéaire en C2 à c 10 ou ramifié en C3 à c 10 ou un benzyle, une unité acide aminé terminale liée par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une amine ou un alcool répondant aux définitions NHR et OR respectivement; ^ B est un groupement de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les radicaux suivants : -0-, -NH-, -N-alkyle- (Cl à C5), un résidu d'acide aminé (de préférence naturel), un diol, un triol, une diamine, une triamine, un aminoalcool ou un hydroxyacide comportant de 1 à 6 atomes de carbone; ^ D représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à c 10 ou ramifié en C3 à CIO, ou un pyroglutamate; ^ GH représente un groupement hydrophobe comportant 6 à 30 atomes de carbone; ^ R70 identiques ou différents entre eux, représentent les groupes obtenus à 25 partir des composés suivants : - une diamine linéaire de 2 à 6 carbones, de préférence la putrescine, 1' agmatine, - l'éthanolamine liée par l'oxygène,- la choline liée par l'oxygène, - l'histidine, un dérivé de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide, un acide aminé ou dérivé dont la chaîne latérale est chargé positivement à pH neutre, i.e. la lysine, l'arginine, l'ornithine, leurs dérivés esters et amides, lié par la fonction amine en position alpha; • le contre-anion du groupement R70 étant de préférence un chlorure, un sulfate, un phosphate ou un acétate; ^ R80 représente un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : - les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium ; - les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis 20 dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine; ^ R90 représente les groupes obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, un polyalkylène glycol; ^ p, q, r et s sont des entiers positifs; 25 ^ (p)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements hydrophobes GH varie de 2 à 99 % molaire, et de préférence entre 5 et 50 % sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes; ^ (q)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements 30 cationiques et varie de 1 à 99 % molaire; ^ (p+q+r+s) varie de 10 à 1000, de préférence entre 30 et 500 ; ^ (r)/(p+q+r+s) varie de 0 à 98 % molaire; ^ (s)/(p+q+r+s) varie de 0 à 98 % molaire. 35
9 - Particules selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisées en ce que le groupement R4 ou B représente une liaison directe.
10 - Particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisées en ce que l'un des polymères polyélectrolytes comprend des unités hydroxyalkyl (de 10 15préférence éthyl) glutamine et une multiplicité de groupements hydrophobes (GH) pendants et identiques ou différents entre eux.
11 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que tout ou partie des groupements hydrophobes (GH) sont choisis de façon indépendante dans le groupe de radicaux comportant : ^ un alcoxy linéaire ou ramifié comportant de 6 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S) et/ou au moins une insaturation, ^ un alcoxy comportant 6 à 30 atomes de carbone et ayant un ou plusieurs carbocycles annelés et contenant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ^ un alcoxyaryle ou un aryloxyalkyle de 7 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins une insaturation et/ou au moins un hétéro- atome (de préférence O et/ou N et/ou S).
12 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le groupement hydrophobe (GH) est issu d'un précurseur alcoolique choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'hexadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol, et en ce que R4 ou B représente une liaison directe.
13 - Particules selon l'une quelconque des revendications 6 à 11, caractérisées en ce que les groupements hydrophobes (GH) représentent chacun indépendamment les uns des autres un radical monovalent de formule suivante : H O 1 6 R R5 (GH) dans laquelle : - R5 représente un méthyle(alanine), isopropyle (valine), isobutyle (leucine), secbutyle (isoleucine), benzyle (phénylalanine) ; - R6 représente un radical hydrophobe comportant de 6 à 30 atomes de carbone; 1varie de0à6. 47
14 - Particules selon la revendication 13, caractérisées en ce que tout ou partie des radicaux hydrophobes R6 des groupements hydrophobes (GH) sont choisis de façon indépendante dans le groupe de radicaux comportant : ^ un alcoxy linéaire ou ramifié comportant de 6 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S) et/ou au moins une insaturation, ^ un alcoxy comportant 6 à 30 atomes de carbone et ayant un ou plusieurs carbocycles annelés et contenant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ^ un alcoxyaryle ou un aryloxyalkyle de 7 à 30 atomes de carbone et pouvant comporter au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S). - Particules selon la revendication 13 ou 14, caractérisées en ce que ledit 15 radical hydrophobe R6 est issu d'un précurseur alcoolique choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'hexadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol. 16. Particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 15, caractérisées en ce que la chaîne principale des premier et second polymères polyélectrolytes (PE1, PE2) est choisie parmi le groupe comprenant les homopolymères d'alpha-L-glutamate, les homopolymères d'alpha-L-glutamique, les homopolymère d'alpha-L-aspartate, les homopolymères d'alpha-L-aspartique, les copolymères d'alpha-L-aspartate/alpha-L-glutamate et les copolymères d'alpha-L-aspartique/alpha-L-glutamique. 17 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le premier polymère polyélectrolyte (PE1) est anionique et présente un pH de demi neutralisation compris entre 3 et 6,5, et de préférence entre 4,5 et 6,5. 18 - Particules selon la revendication 17, caractérisées en ce que le second polymère polyélectrolyte (PE2) est cationique et forme une solution colloïdale à pH inférieur à 8. 19 - Particules selon la revendication 18, caractérisées en ce que le second polymère polyélectrolyte (PE2) est cationique et présente un pH de demi neutralisation supérieur à 8. 48 20 -Particules selon l'une quelconque des revendications 17 à 19, caractérisées en ce que le premier polymère polyélectrolyte (PE1) forme une solution colloïdale et le second polymère polyélectrolyte (PE2) forme une solution ou une solution colloïdale pour la valeur pHm du pH comprise entre 6 et 8, et en ce que le rapport de la masse du premier polymère polyélectrolyte (PE1) à la masse du second polymère polyélectrolyte (PE2) est choisi afin que le rapport de charge Z, rapport du nombre de moles de groupements ionisés cationiques au nombre de moles des groupements ionisés anioniques, mesurés à pHm, soit compris entre 0,25 et 3, et de préférence compris entre 0,25 et 1,5. 21 - Particules selon la revendication 17, caractérisées en ce que le second polymère polyélectrolyte (PE2) est cationique et forme une solution colloïdale à pH inférieur à 6 et un précipité à pH supérieur à 6, 5. 22 - Particules selon la revendication 21, caractérisées en ce que le second polymère polyélectrolyte (PE2) est cationique et présente un pH de demi neutralisation compris entre 5,5 et 7. 23 - Particules selon la revendication 17 et l'une quelconque des revendications 20 à 21, caractérisées en ce que le premier polymère polyélectrolyte (PE1) forme une solution colloïdale et le second polymère polyélectrolyte (PE2) forme une solution ou une solution colloïdale pour une valeur du pH, pHm, comprise entre 3 et 6, et en ce que le rapport de la masse du premier polymère polyélectrolyte (PE1) à la masse du second polymère polyélectrolyte (PE2) est choisi afin que le rapport de charge Z, mesuré à pHm, soit compris entre 3,5 et 30, de préférence compris entre 5 et 15, et plus préférentiellement encore compris entre 8 et 12. 24 -Particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisées en ce que le premier polymère polyélectrolyte (PE1) est cationique et présente un pH de demi neutralisation supérieur à 5. 25 Particules selon la revendication 24, caractérisées en ce que le second polymère polyélectrolyte (PE2) est anionique et présente un pH de demi neutralisation compris entre 3 et 6, 5, et de préférence entre 4,5 et 6, 5. 35 26 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'elles présentent, à pH physiologique, une taille, mesurée dans un test T, comprise entre 1 et 100 microns.3027 -Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'elles présentent, à pH physiologique, une densité apparente comprise entre 0,15 et 1,1. 28 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'elles ne sont pas réticulées chimiquement. 29 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce le principe actif (PA) est choisi dans le groupe comprenant: les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol [de préférence polyéthylèneglycol (PEG): "protéines-PEGylées"], les peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les oligonucléotides, les polynucléotides et leurs mélanges, et, plus préférentiellement encore, dans le sous-groupe des érythroproïétines, telles que l'époétine alpha, l'époétine béta, la darbépoétine, le raffimère d'hémoglobine, leurs analogues ou leurs dérivés; oxytocine, vasopressine, hormone adrénocorticotropique, facteur de croissance épidermal, facteur de croissance des plaquettes (PDGF), les facteurs stimulants de l'hématopoïèse et leurs mélanges, les facteurs sanguins, tels que alteplase, tenecteplase, facteur VII(a), facteur VII; hémoglobine, les cytochromes, les albumines prolactine, luliberine, hormone relargant l'hormone lutéinisante (LHRH) en analogues, tels que leuprolide, goséréline, triptoréline, buseréline, nafaréline; antagonistes de la LI-IRH, les concurrents de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaine, porcine ou bovine, le facteur relargant l'hormone de croissance, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines ou leurs mélanges (IL-2, IL-11, IL-12), les interférons, tels que l'interféron alpha, alpha-2b, bêta, bêta-la, ou y; la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, l'enkephaline, les endomorphines, les angiotensines, l'hormone relargant la thyrotropine (TRH), le facteur nécrosant des tumeurs (TNF), le facteur de croissance des nerfs (NGF), les facteurs de croissance tels que beclapermine, trafermine, ancestim, le facteur de croissance des kératinocytes, le facteur stimulant les colonies granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages granulocytaires (GM-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages (M-CSF), heparinase, la protéine morphogénique de l'os (BMP), hANP, le peptide ressemblant au glucagon (GLP-1), VEG-F, l'antigène recombinant de l'hépatite B (rHBsAg), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymixines, les colistines, la tyrocidine, les gramicidines, l'étanercept, l'imiglucérase, la drotrécogine alpha, les cyclosporines et analogies synthétiques, les modifications et fragments actifs pharmaceutiquement d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, d'antigènes et de vaccins, lesanticorps tels que rituximab, infliximab, trastuzumab, adalimumab, omalizumab, tositumomab, efalizumab, et cetuximab. 30 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le principe actif (PA) est une "petite" molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile. 31 - Particules selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le principe actif (PA) est choisi parmi au moins l'une des familles de substances actives suivantes : les agents de traitement de l'abus d'alcool, les agents de traitement de la maladie d'Alzheimer, les anesthésiques, les agents de traitement de l'acromégalie, les analgésiques, les antiasthmatiques, les agents de traitement des allergies, les agents anticancéreux, les anti-inflammatoires, les anticoagulants et antithrombotiques, les anti-convulsivants, les antiépileptiques, les antidiabétiques, les antiémétiques, les antiglaucomes, les antihistaminiques, les anti-infectieux, les antibiotiques, les antifongiques, les antiviraux, les antiparkinsoniens, les anti-cholinergiques, les antitussifs, les inhibiteurs de l'anhydrase carbonique, les agents cardiovasculaires, les hypolipémiants, les anti-arythmiques, les vasodilatateurs, les antiangineux, les anti-hypertenseurs, les vasoprotecteurs, les inhibiteurs de cholinestérase, les agents de traitement des désordres du système nerveux central, les stimulants du système nerveux central, les contraceptifs, les promoteurs de fécondité, les inducteurs et inhibiteurs du travail utérin, les agents de traitement de la mucoviscidose, les agonistes des récepteurs de la dopamine, les agents de traitement de l'endométriose, les agents de traitement des dysfonctionnements érectiles, les agents de traitement de la fertilité, les agents de traitements des troubles gastro-intestinaux, les immunomodulateurs et les immunosuppresseurs, les agents de traitement des troubles de la mémoire, les antimigraineux, les relaxants des muscles, les analogues de nucléosides, les agents de traitement de l'ostéoporose, les parasympathomimétiques, les prostaglandines, les agents psychothérapeutiques, les sédatifs, les hypnotiques et tranquillisants, les neuroleptiques, les anxiolytiques, les psychostimulants, les antidépresseurs, les agents de traitements dermatologiques, les stéroïdes et les hormones, les amphétamines, les anorexiques, les anti-douleurs non analgésiques, les antiépileptiques, les barbituriques, les benzodiazépines, les hypnotiques, les laxatifs, les psychotropes et toutes les associations de ces produits. 32 - Procédé de préparation de particules pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), ces particules étant en particulier selon l'une quelconque des revendications 1 et 3 à 31, comprenant les étapes suivantes:1) la préparation, à une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8, d'une solution colloïdale aqueuse d'un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit premier polymère polyélectrolyte (PE1) étant capable de former spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur, pHm, du pH comprise entre 3 et 8; 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au premier polymère polyélectrolyte (PE1) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit premier polymère polyélectrolyte (PE1); 3) la préparation d'un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH, à la condition que, si le premier polymère électrolyte (PEI) est un polyaminoacide, alors le second polymère polyélectrolyte (PE2) n'est ni la polylysine ni la polyéthylène imine; 4) le mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE1) sous forme de solution colloïdale de particules auxquelles est associé le principe actif (PA) obtenu à l'étape 2) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale obtenu à l'étape 3). 33 - Procédé de préparation de particules pour la libération prolongée d'au moins 25 un principe actif (PA), ces particules étant en particulier selon l'une quelconque des revendications 2 à 31, comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur pHm du pH comprise entre 3 et 8, d'une solution colloïdale aqueuse d'un premier polymère polyélectrolyte (PE1) à l'état chargé, porteur de groupements hydrophobes (GH) latéraux, ledit 30 premier polymère polyélectrolyte (PE1) étant capable de former spontanément dans l'eau une solution colloïdale de particules à au moins une valeur, pHm, du pH comprise entre 3 et 8; 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au premier polymère polyélectrolyte (PE1) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de 35 façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit premier polymère polyélectrolyte (PE1); 3) la préparation d'un second polymère polyélectrolyte (PE2) de polarité opposée au premier polymère polyélectrolyte (PE1), porteur de groupements 10 15 20 52 hydrophobes (GH) latéraux, ledit second polymère polyélectrolyte (PE2) formant dans l'eau une solution ou une solution colloïdale à au moins ladite valeur pHm du pH; 4) le mélange à pH égal à pHm du premier polymère polyélectrolyte (PE 1) sous forme de solution colloïdale de particules auxquelles est associé le principe actif (PA) obtenu à l'étape 2) avec le second polymère polyélectrolyte (PE2) sous forme de solution ou de solution colloïdale obtenu à l'étape 3). 34 - Procédé selon la revendication 32 ou 33, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de déshydratation de la suspension des particules obtenues. 35 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 32 à 34, caractérisé en ce qu'il ne comprend pas d'étape de réticulation chimique des particules obtenues. 36 - Formulation pharmaceutique pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisée en ce qu'elle comprend une suspension aqueuse de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 31 ou celles obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications 32 à 35. 20 37 - Formulation pharmaceutique solide pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisée en ce qu'elle comprend une forme poudre sèche: • à base de particules contenant au moins un principe actif (PA), ces particules étant celles selon l'une quelconque des revendications 1 à 31 ou celles obtenues par le procédé 25 selon l'une quelconque des revendications 32 à 35; • ou obtenue à partir de la formulation selon la revendication 36. 38 - Formulation pharmaceutique solide selon la revendication 37 pour inhalation et administration pulmonaire. 30 39 - Procédé de préparation de médicaments, en particulier pour administration parentérale, mucosale, sous-cutanée, intramusculaire, intradermique, transdermique intrapéritonéale, intracérébrale ou dans une tumeur, voire par voie orale, nasale, pulmonaire, vaginale ou oculaire, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à mettre 35 en oeuvre au moins une formulation selon l'une quelconque des revendication 36 à 38.15
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AU2008248602A AU2008248602B2 (en) 2007-05-03 2008-05-05 Modified-release particles based on polyelectrolytes and on an active principle and pharmaceutical formulations containing these particles
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KR1020097025178A KR20100017574A (ko) 2007-05-03 2008-05-05 고분자 전해질 및 활성 성분을 베이스로 하는 조절 방출 입자 및 이들 입자를 함유하는 약학 제제
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110150837A1 (en) * 2009-12-23 2011-06-23 Flamel Technologies Amphiphilic polymer functionalized by methionine
FR2954325B1 (fr) 2009-12-23 2012-02-03 Flamel Tech Sa Polymere amphiphile fonctionnalise par la methionine
FR2968993B1 (fr) * 2010-12-17 2012-12-28 Flamel Tech Sa Nanoparticules comportant au moins un actif et au moins deux polyelectrolytes
FR2968994B1 (fr) 2010-12-17 2012-12-28 Flamel Tech Sa Procede de preparation de nanoparticules
CN107583039A (zh) * 2012-01-09 2018-01-16 阿道恰公司 Ph为7且至少含pi为5.8至8.5之基础胰岛素和取代共聚(氨基酸)的可注射溶液

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003104303A1 (fr) * 2002-06-07 2003-12-18 Flamel Technologies Polyaminoacides fonctionnalisés par de l'alpha-tocopherol et leurs applications notamment thérapeutiques
WO2004013206A2 (fr) * 2002-07-30 2004-02-12 Flamel Technologies Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement hydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques
FR2862535A1 (fr) * 2003-11-21 2005-05-27 Flamel Tech Sa Formulations pharmaceutiques pour la liberation prolongee d'interleukines et leurs applications therapeutiques
FR2862541A1 (fr) * 2003-11-21 2005-05-27 Flamel Tech Sa Formulations pharmaceutiques pour la liberation prolongee d'interferons et leurs applications therapeutiques
WO2005051416A1 (fr) * 2003-11-21 2005-06-09 Flamel Technologies Formulations pharmaceutiques pour la libération prolongée de principe(s) actif(s), ainsi que leurs applications notamment therapeutiques
FR2881140A1 (fr) * 2005-01-27 2006-07-28 Flamel Technologies Sa Copolyhydroxyalkylglutamines fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques
WO2007051923A2 (fr) * 2005-10-31 2007-05-10 Flamel Technologies Acides polyglutamiques fonctionnalises par des derives de l'histidine et des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2786098B1 (fr) 1998-11-20 2003-05-30 Flamel Tech Sa Particules a base de polyaminoacide(s) et susceptibles d'etre utilisees comme vecteurs de principe(s) actif(s), suspension colloidale les comprenant et leurs procedes de fabrication
FR2801226B1 (fr) 1999-11-23 2002-01-25 Flamel Tech Sa Suspension colloidale de particules submicroniques de vectorisation de principes actifs et son mode de preparation
FR2855521B1 (fr) * 2003-05-28 2005-08-05 Flamel Tech Sa Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement h ydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques.
FR2860516B1 (fr) * 2003-10-03 2006-01-13 Flamel Tech Sa Homopolyaminoacides telecheliques fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques
IL162390A0 (en) * 2004-06-07 2005-11-20 Medigus Ltd Multipurpose endoscopy suite
FR2873704B1 (fr) * 2004-07-30 2006-12-08 Flamel Technologies Sa Polyaminoacides fonctionnalises par des greffons hydrophobes portant une charge anionique et leurs applications notamment therapeutiques
FR2902007B1 (fr) * 2006-06-09 2012-01-13 Flamel Tech Sa Formulations pharmaceutiques pour la liberation prolongee de principe(s) actif(s) ainsi que leurs applications notamment therapeutiques
FR2915748B1 (fr) * 2007-05-03 2012-10-19 Flamel Tech Sa Acides polyglutamiques fonctionnalises par des groupes cationiques et des groupements hydrophobes et leurs applications, notamment therapeutiques

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003104303A1 (fr) * 2002-06-07 2003-12-18 Flamel Technologies Polyaminoacides fonctionnalisés par de l'alpha-tocopherol et leurs applications notamment thérapeutiques
WO2004013206A2 (fr) * 2002-07-30 2004-02-12 Flamel Technologies Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement hydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques
FR2862535A1 (fr) * 2003-11-21 2005-05-27 Flamel Tech Sa Formulations pharmaceutiques pour la liberation prolongee d'interleukines et leurs applications therapeutiques
FR2862541A1 (fr) * 2003-11-21 2005-05-27 Flamel Tech Sa Formulations pharmaceutiques pour la liberation prolongee d'interferons et leurs applications therapeutiques
WO2005051416A1 (fr) * 2003-11-21 2005-06-09 Flamel Technologies Formulations pharmaceutiques pour la libération prolongée de principe(s) actif(s), ainsi que leurs applications notamment therapeutiques
FR2881140A1 (fr) * 2005-01-27 2006-07-28 Flamel Technologies Sa Copolyhydroxyalkylglutamines fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques
WO2007051923A2 (fr) * 2005-10-31 2007-05-10 Flamel Technologies Acides polyglutamiques fonctionnalises par des derives de l'histidine et des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques

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