FR2875403A1 - Composition favorisant l'angiofenese - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne une composition utilisée pour favoriser l'angiogénèse, ses applications thérapeutiques, notamment dans le traitement de certaines pathologies vasculaires et ses applications cosmétiques, notamment pour lutter contre l'alopécie androgénique ou cicatricielle.Selon l'invention, la composition comprend de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du α-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate.La composition selon l'invention ne contient que des composés naturels ou de très faible coût.
Description
La présente invention concerne une composition utilisée pour favoriser
l'angiogénèse, ses applications thérapeutiques, notamment dans le traitement de certaines pathologies vasculaires et ses applications cosmétiques.
L'angiogénèse est un processus biologique de néovascularisation permettant la création de nouveaux vaisseaux sanguins à partir de l'excroissance ou du bourgeonnement de vaisseaux préexistants. Ce processus est fondamental pour le développement des tissus car les vaisseaux sanguins, en plus du transport du sang, assurent l'apport des éléments nutritifs et éliminent les déchets du métabolisme des cellules. Chez l'être humain l'angiogénèse est essentielle au cours de phénomènes physiologiques comme le développement embryonnaire, la formation du placenta, mais surtout lors de la reconstruction tissulaire, la cicatrisation ou lors d'ischémies.
Un produit qui favorise l'angiogénèse est donc tout à fait utile dans le milieu médical pour des traitements thérapeutiques comme la cicatrisation des plaies, les inflammations mais aussi pour la régénération des tissus in situ en cas de traumatismes ou pour l'endothélialisation des prothèses par
exemple.
Les vaisseaux sanguins sont constitués de cellules endothéliales. Ces cellules sont normalement stables, c'est-à-dire qu'elles se renouvellent très lentement. L'angiogénèse active ces cellules qui se renouvellent alors beaucoup plus rapidement. Suite à leur activation, les cellules endothéliales se développent, migrent vers le lieu de création des nouveaux vaisseaux puis prolifèrent pour former un nouveau réseau vasculaire.
L'angiogénèse et l'activation des cellules endothéliales se font à la suite de stimulation par des facteurs angiogéniques. Le facteur de croissance basique des fibroblastes bFGF et le facteur de croissance de l'endothélium vasculaire VEGF ont été identifiés comme jouant un rôle central dans l'angiogénèse. Les nombreuses recherches effectuées dans ce domaine ont montré que l'angiogénèse n'est pas seulement contrôlée par ces deux facteurs mais par un ensemble de facteurs inducteurs et inhibiteurs, qui n'est pas encore parfaitement déterminé.
Il est cependant certain que la plupart de ces facteurs sont de grosses protéines ne pouvant être obtenues que par des voies de synthèses 5 extrêmement complexes et coûteuses.
La présente invention vise donc à proposer une composition ne contenant que des composés naturels ou de très faible coût et susceptible d'être employée dans des traitements pharmaceutiques, particulièrement pour des traitements pouvant bénéficier d'une angiogénèse.
Un autre but de l'invention est d'utiliser la composition selon l'invention pour fabriquer un médicament en vue de traiter des pathologies pouvant bénéficier de l'angiogénèse.
L'invention a également pour but de proposer un médicament facile à 15 préparer, simple à utiliser et pouvant éventuellement être employé dans des thérapies combinant plusieurs facteurs angiogéniques.
L'invention a encore pour but d'utiliser les propriétés proangiogénique de cette composition pour l'utiliser dans un traitement cosmétique et notamment pour lutter contre l'alopécie androgénique ou cicatricielle.
Ces buts sont atteints par une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate.
Les composés du mélange de base sont dosés dans des proportions voisines des valeurs suivantes: éthanol 20% ; acétate d'éthyle 1% ; eucalyptol 1% ; dipropylène glycole 20% ; linalol 13% ; acétate de linalol 2% ; anydride itaconique ou méthyle succinique 1% ; terpinène-4-ol 5% ; a-terpinéol 5% ; camphre 1% ; acétate de bornyle 4% ; formiate de géranyle 2% ; géraniol ou acétate de géranyle 5% ; coumarine 1% ; diethyle phtalate 20%.
Pour une utilisation dans un médicament, ce mélange de base pourra être dilué entre 0.3 % et 1 % environ avec de l'eau distillée.
La demanderesse a mis en évidence que cette composition favorise l'angiogénèse. Elle peut être utilisée notamment dans les cas suivants, donnés à titre indicatif et non limitatif: - favoriser la régénération tissulaire de pathologies ischémiques (maladies 10 des artères coronaires, infarctus du myocarde, occlusions des artères périphériques, maladies vasculaires cérébrales) ; - réparer les lésions des plaies cutanées, osseuses, ophtalmiques ou gastriques (cicatrisations et réparations de fractures, blessures, ulcères, lésions cornéennes ou rétiniennes, ulcères gastroduodénaux, réparations des os) ; régénérer les liaisons nerveuses; être utilisé en chirurgie reconstructive; - endothélialisation des biomatériaux et d'implants vasculaires; - transplantation d'organes.
(Tonnesen MG, Feng X, Clark R4. Angiogenesis in wound healing. J Investig Dermatol Symp proc (2000) 5:40-6; Detmar M. The role of VEGF and thrombospondins in skin angiogenesis. J Investig Dermatol Sci (2000) 24 suppl 1:S78-84).
En outre, la composition pourra être utilisée en combinaison avec d'autres principes actifs lorsque l'angiogénèse ne constituera qu'une thérapie d'appoint à une thérapie principale où une amplification de l'angiogénèse pourra accélérer la guérison.
Les voies d'administration de la composition selon la présente invention, sous forme de solution buvable ou sous une forme médicamenteuse appropriée, seront établies en fonction de la pathologie à traiter, par exemple par voie orale, intraveineuse, sous-cutanée, nasale ou autres, sous forme de comprimés, de solutions injectables, de sirops ou de gels pour des compositions destinées à accélérer la cicatrisation.
Pour ce qui concerne les concentrations d'administration, la demanderesse a constaté lors des tests effectués que l'effet angiogénique passait par un maximum pour ensuite décroître si on augmentait la concentration du mélange de base. Il faudra donc adapter la concentration à la pathologie visée et éventuellement au patient. Les concentrations optimales se situent entre 0.3 et 1 % et seront de préférence situées à environ 0.5 h.
La posologie sera adaptée en fonction de la concentration du mélange de base, de la pathologie à traiter et du profil du patient.
Par exemple, pour la cicatrisation des plaies, on utilisera de préférence un gel contenant la composition diluée à environ 0.5 % tandis que pour le traitement des pathologies ischémiques on utilisera de préférence une solution médicamenteuse contenant la composition diluée à environ 0.5 %, injectable par voie intraveineuse.
Pour son utilisation cosmétique, la composition selon l'invention peut se présenter sous forme d'une crème, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'une crème, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse, ou sous forme solide, par exemple sous la forme d'un stick.
Pour le traitement de l'alopécie androgénique, la composition sera utilisée pure ou diluée à 0.5 %, sous forme de lotion applicable deux fois par jour sur le cuir chevelu.
La plupart des composés à la base de la composition peuvent être extraits par distillation de produits naturels, par exemple: éthanol (raisin fermenté), eucalyptol (eucalyptus radiata), linalol (occimum basilicum), acétate de linalol (citrus aurantium), terpinène-4-ol (malaleuca alternifolia), a-terpinéol (citrus aurantifolia), camphre (rosmarinus officinalis), acétate de bornyle (cistus ladaniferus), formiate de géranyle (pelargonium graveolens), géraniol (citrus lemonum), acétate de géranyle (cymbopogon nardus), coumarine (fève Tonka). Les autres composés peuvent être obtenus par des procédés de fabrication simples et peu onéreux, par exemple, acétate d'éthyle (WO 01/46117A1), dipropylène glycole (US 3574772), anhydride itaconique (GB 854999), anhydride méthyle succinique (FR 2735775), diethyle phtalate (US 2618651).
Le profil toxicologique de ces différents composés n'est pas de nature à induire un risque sur la santé humaine et la formulation ne présente pas d'innovation de nature à provoquer des réactions nocives pour l'être humain. De plus, il n'est pas connu à ce jour d'interaction néfaste entre ces composés.
Ces différentes caractéristiques permettent d'obtenir une composition 15 pharmaceutique et cosmétique ne contenant que des composés naturels ou de très faible coût, facile à préparer et simple à utiliser.
D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront mieux à la lecture de la description et des exemples suivants, faits à titre indicatif et non limitatif, en regard des dessins annexés, sur lesquels: la figure 1 est un tableau montrant l'effet des produits de références et l'effet de la composition selon l'invention sur la formation des tubules dans le modèle d'étude décrit à l'exemple 1; la figure 2 montre des diagrammes illustrant l'effet des produits de références et l'effet de la composition selon l'invention sur la formation des tubules dans le modèle d'étude décrit à l'exemple 1; EXEMPLE 1: Evaluation de l'effet de la composition selon l'invention sur l'angiogénèse dans un modèle de cellules, endothéliales humaines en co-culture.
En l'absence d'hypothèse formulée par la demanderesse sur les mécanismes d'action des produits, le système d'essai standard retenu pour l'étude est un modèle in vitro d'angiogénèse constitué de cellules endothéliales humaines en co-culture avec des fibroblastes humains.
Le VEGF a été utilisé comme activateur de référence de la formation de tubules et la suramine a été utilisée comme inhibiteur de référence de la formation des tubules.
1 Matériels et méthodes.
1.1 références bibliographiques.
L'évaluation a été réalisée selon la méthodologie préconisée dans: Villaschi S, Nicosia RF Paracrine interactions between fibroblasts andendothelial celis in a serum free coculture mode/. Modulation of angiogenesis and collagen gel contraction. Lab. Invest (1994) 71:291-9.
1.2 principe.
Des cellules endothéliales et des fibroblastes en co-culture forment spontanément des structures capillaires (tubules) qui s'anastomosent et forment des réseaux. Les modifications de la longueur des tubules en présence des produits à l'essai sont quantifiées par analyse d'image.
1.3 produit à l'essai.
Le mélange de base de la composition objet de l'invention est dosé dans des proportions voisines des valeurs suivantes: Composés de base % masse éthanol 20 acétate d'éthyle 1 eucalyptol 1 dipropylène glycole 20 linalol 13 acétate de linalol 2 anydride itaconique ou méthyle 1 succinique 5 terpinène-4-ol a-terpinéol 5 camphre 1 acétate de bornyle 4 formiate de géranyle 2 géraniol ou acétate de géranyle 5 coumarine 1 diethyle phtalate 20 Ce mélange de base sera ensuite dilué avec de l'eau distillée avant d'être testé.
1.4 Réactifs.
Les réactifs utilisés sont les produits de test angiogénique de Biopredic Internationnal ainsi que d'autres réactifs tels que Carlo-Erba ou Sigma , de qualité analytique.
1.5 Système d'essais.
Des cellules endothéliales sont mises en co-culture avec des fibroblastes (produits de test angiogénique de Biopredic Internationnal : cellules, milieux, produits de référence et anticorps pour la coloration des tubules).
1.6 Produits de référence et composition à l'essai.
Le VEGF utilisé comme activateur de référence est dilué dans le milieu de culture et testé à 2 ng/mL. 10
La suramine utilisée comme inhibiteur de référence est diluée dans le milieu de culture et testée à 20 pM.
Le mélange de base de la composition objet de l'invention est dilué dans le milieu de culture et testé à 0.3 %, 0.5 % et 1 %.
1.7 Evaluation des effets.
Des photographies sont prises après 10 jours d'incubation, par un microscope à balayage électronique, pour chaque concentration étudiée.
La longueur des tubules et le nombre de jonctions sont mesurés par un système d'analyse d'image.
Les valeurs sont exprimées en unités arbitraires (pixels) de longueur de tubules par champ microscopique, en nombre de jonctions par champ de comptage et en pourcentage du groupe témoin.
Ces valeurs sont moyennées sur trois tests similaires.
2 Résultats.
Les résultats sont illustrés sur les figures 1 et 2.
Le VEGF utilisé comme activateur de référence augmente la longueur des tubules de 112 %. La suramine utilisée comme inhibiteur de référence diminue la longueur des tubules de 59 %. Ces effets attendus permettent de valider le test.
La composition testée augmente la longueur des tubules de 18 %, 36 % et 27 % respectivement pour les concentrations de 0.3 k, 0.5 % et 1 %. Cette composition, à sa concentration optimale de 0.5 %, peut donc être considérée comme un facteur inducteur d'angiogénèse.
EXEMPLE 2: Evaluation de l'effet de la composition selon l'invention sur l'angiogénèse dans un modèle in vivo réalisé chez des patients humains.
Les résultats d'une étude in vivo réalisée sur 10 patients humains atteints d'alopécie de type V, VI et VII selon l'échelle d'Hamilton, ont mis en évidence le fort pouvoir pro angiogénique de la composition selon l'invention.
Dans ces expériences, la composition objet de l'invention est dosé dans des proportions voisines des valeurs suivantes: Composés de base % masse éthanol 20 acétate d'éthyle 1 eucalyptol 1 dipropylène glycole 20 linalol 13 acétate de linalol 2 anydride itaconique ou méthyle 1 succinique 5 terpinène-4-ol a-terpinéol 5 camphre 1 acétate de bornyle 4 formiate de géranyle 2 géraniol ou acétate de géranyle 5 coumarine 1 diethyle phtalate 20 Cette composition a été appliquée 2 fois par jour (matin et soir) pendant 3 mois sur le cuir chevelu de patients atteints d'alopécie 25 androgénique.
Une étude du cuir chevelu et une étude du bulbe pileux ont été mises en oeuvre pour déterminer l'effet angiogénique de la composition selon l'invention.
Après trois mois d'application: la composition a induit une repousse significative des cheveux chez 100% des patients sur les zones temporales, pariétales et frontales du crâne. 15 20
- 10 - une vascularisation développée est apparue autour du bulbe pileux alors que cette vascularisation était peu importante avant que les patients ne commencent les tests.
Ces premiers tests semblent donc prouver que la composition selon l'invention induit une vascularisation caractéristique de l'angiogénèse.
La composition peut donc être utilisée dans un traitement cosmétique et notamment pour lutter contre l'alopécie androgénique ou l'alopécie cicatricielle.
En conclusion, dans les conditions expérimentales retenues, la composition selon l'invention, a un fort pouvoir pro-angiogénique qui se manifeste sur la formation et le développement des vaisseaux sanguins.
La combinaison des différents constituants donne à la composition objet de l'invention un maximum d'effets utiles qui n'avaient pas été découverts à ce jour.
- 11 -
Claims (13)
1. Composition pharmaceutique comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate.
2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est utilisée pour le traitement des pathologies pouvant bénéficier d'une angiogénèse.
3. Composition pharmaceutique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que les composés sont dosés dans les proportions voisines de: éthanol 20% ; acétate d'éthyle 1% ; eucalyptol 1% ; dipropylène glycole 20% ; linalol 13% ; acétate de linalol 2% ; anydride itaconique ou méthyle succinique 1% ; terpinène-4-ol 5% ; a-terpinéol 5% ; camphre 1% ; acétate de bornyle 4% ; formiate de géranyle 2% ; géraniol ou acétate de géranyle 5% ; coumarine 1% ; diethyle phtalate 20%.
4. Médicament renfermant la composition selon la revendication 1 ou 3 pour le traitement des pathologies pouvant bénéficier d'une angiogénèse.
5. Médicament selon la revendication 4, caractérisé en ce que la composition est diluée entre 0.3 % et 1 % avec de l'eau distillée.
6. Médicament selon la revendication 4, caractérisé en ce que la composition est diluée à environ 0.5 % avec de l'eau distillée.
- 12 -
7. Médicament selon l'une des revendications 4 à 6, caractérisé en ce que les voies d'administration peuvent être orales, intraveineuses, sous- cutanées, nasales ou autres, sous forme de comprimés, de solutions injectables, de sirops ou de gels.
8. Utilisation de la composition selon la revendication 1 ou 3 pour la fabrication d'un médicament en vue de son utilisation pour le traitement des pathologies pouvant bénéficier d'une angiogénèse.
9. Utilisation selon la revendication 8 caractérisée en ce que la composition est diluée entre 0.3 % et 1 % avec de l'eau distillée.
10.Utilisation selon la revendication 8 caractérisée en ce que la 15 composition est diluée à environ 0.5 % avec de l'eau distillée.
11. Composition cosmétique comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate.
12. Composition cosmétique selon la revendication 11, caractérisée en ce que les composés sont dosés dans les proportions voisines de: éthanol 20% ; acétate d'éthyle 1% ; eucalyptol 1% ; dipropylène glycole 20% ; linalol 13% ; acétate de linalol 2% ; anydride itaconique ou méthyle succinique 1% ; terpinène-4-ol 5% ; a-terpinéol 5% ; camphre 1% ; acétate de bornyle 4% ; formiate de géranyle 2% ; géraniol ou acétate de géranyle 5% ; coumarine 1% ; diethyle phtalate 20%.
- 13 - 13.Composition cosmétique selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce qu'elle est utilisée pour le traitement de l'alopécie androgénique ou de l'alopécie cicatricielle.
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