FR2840217A1

FR2840217A1 - Compositions cosmetiques comprenant au moins un oligonucleotide d'arn double brin (dsrna)et leurs utilisations

Info

Publication number: FR2840217A1
Application number: FR0206796A
Authority: FR
Inventors: Albert Duranton; Djangone Christine Collin; Francis Pruche; Jean Thierry Simmonet
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2002-06-03
Filing date: 2002-06-03
Publication date: 2003-12-05
Anticipated expiration: 2022-06-03
Also published as: US20090117063A1; US20050222071A1; US9012418B2; FR2840217B1

Abstract

L'invention se rapporte à de nouvelles compositions cosmétiques comprenant au moins un oligonucléotide d'ARN double brin (dsRNA) et à leurs utilisations. L'invention se rapporte également à un procédé de traitement cosmétique utilisant au moins un oligonucléotide d'ARN double brin.

Description

L'invention se rapporte à de nouvelles compositions cosmétiques comprenant au moins un oligonucléotide d'ARN double brin (dsRNA) et à leur utilisation.

De nombreuses substances sont utilisées en cosmétique pour palier ou prévenir certaines altérations esthétiques de la peau ou de ses annexes. Parmi elles, les substances présentant une réelle spécificité biologique sont plus particulièrement recherchées.

En effet, plus les substances présenteront une activité spécifique, telle qu'une activité biologique spécifique, moins elles risqueront de provoquer des effets secondaires indésirables. Par exemple, dans une composition visant à éclaircir le teint ou à prévenir la pigmentation indésirable, on préférera utiliser une substance dont l'action sera ciblée sur une enzyme comme la tyrosinase. On peut également citer à titre d'exemple l'utilisation d'une substance agissant de façon spécifique sur certaines métalloprotéinases ou certaines élastases pour la préparation de composition pour prévenir le vieillissement.

Jusqu'à présent, ce problème de spécificité était résolu grâce à l'utilisation d'oligonucléotides d'ARN ou d'ADN natif ou ADN anti-sens. Une telle utilisation comporte cependant des limitations.

En effet, l'utilisation d'oligonucléotides (tels que, par exemple, ceux décrits dans la demande de brevet WO 01/58918), d'ADN, d'ARN non spécifique ou d'ADN anti-sens dans des formulations cosmétiques n'a pas permis d'obtenir une efficacité souhaitable. En particulier, à la surface de la peau, des RNases dégradent l'ARN natif, les quantités atteignant les ARNm cibles ne peuvent être suffisantes pour obtenir l'effet recherché.

Une autre limitation de l'utilisation des oligonucléotides simple brin tels que ceux mentionnés ci-dessus est le risque que se produisent d'éventuels repliements secondaires (ou réappariements secondaires) de l'oligonucléotide. De ce fait, l'administration in vivo d'oligonucléotides simple brin (tels que des oligonucléotides d'ADN anti-sens) est souvent inefficace. De plus, la stabilité des effets in vivo des oligonucléotides simple brin est courte à cause d'une dégradation intracellulaire rapide des oligonucléotides, et d'une demi-vie extracellulaire courte in vivo (Khan A & al J Drug Target 2000 8 319-334).

Il existe ainsi un besoin de composition résolvant à la fois les difficultés d'administration ciblée des actifs ainsi que le problème de spécificité et adapté à une application topique.

La connaissance des oligonucléotides d'ARN double brin, aussi appelés dsRNA pour double-stranded RNA, est établie depuis longtemps chez les plantes et les organismes procaryotes (Haines D.S. et al., J. Cell Biochem. 1991 ;46 : 9-20), ils ont pour rôle d'inhiber l'expression d'un gène spécifique (Fire A., Trends in Genetic 1999 ; 15 : 358-363).

L'utilisation de dsRNA à des fins thérapeutiques a été décrite dans la demande de brevet W001/36646 qui propose une méthode d'inhibition de gènes impliqués dans des maladies, en particulier des cancers. Les exemples de mise en #uvre de cette méthode proposent l'inhibition de l'expression d'un gène dans des cellules indifférenciées, telles que des cellules embryonnaires, par l'injection intracellulaire de dsRNA visant le gène à inhiber. Les modes d'administration envisagés concernent des administrations par voie générale.

Contrairement aux compositions pharmaceutiques proposées dans ce document, une formulation cosmétique ne devra agir qu'à un niveau superficiel, c'est à dire au niveau de la peau ou ses annexes (derme, épiderme et phanères), ou même uniquement à la surface de la peau en ciblant les microorganismes qui la recouvrent. On peut également vouloir rechercher un effet au niveau d'un type cellulaire cutané spécifique, tel que le fibroblaste, le mélanocyte, le kératinocyte, la cellule de Langherrans, la cellule endothéliale, impliqué dans des altérations esthétiques particulières.

C'est pourquoi la présente invention a pour objet une composition destinée à une application topique comprenant au moins un oligonucléotide d'ARN double brin qui est active sur des cellules différenciées telles que les cellules du derme et de l'épiderme (mélanocytes, fibroblastes, kératinocytes...).

La composition selon l'invention présente à la fois les propriétés mentionnées ci-dessus et permet de surmonter les difficultés rencontrées jusqu'à ce jour : - elle vise spécifiquement l'expression de protéines des cellules du derme et de l'épiderme ou de micro-organismes à la surface de la peau, le ciblage des cellules pourra, en particulier, se faire par le choix d'un enrobage permettant le relargage des oligonucléotides d'ARN double brin dans la cellule visée ; - Les oligonucléotides d'ARN double brin permettent l'inhibition spécifique d'un gène (ou de plusieurs dans le cas d'une composition associant des oligonucléotides

d'ARN double brin ayant des séquences différentes et visant des ARNm codant pour des protéines différentes) ; - les oligonucléotides d'ARN double brin, grâce à leur structure en duplex, sont résistants aux RNases (enzymes de dégradation de l'ARN), ils ne sont pas dégradés à la surface de la peau ; - en raison de leur structure en duplex, ces oligonucléotides d'ARN double brin ne peuvent pas subir de repliement et s'autoapparier ; ainsi, la bio-disponibilité du produit actif, c'est-à-dire la quantité d'oligonucléotide d'ARN double brin produisant l'effet recherché qui parvient aux cellules, est nettement améliorée et permet l'utilisation de quantité d'oligonucléotide d'ARN double brin plus faible.

Contrairement à la technologie antisens dans laquelle des fragments d'oligonucléotides simple brin anti-sens s'hybrident à une séquence complémentaire, l'oligonucléotide d'ARN double brin - qui est un duplex du fragments anti-sens et du fragment sens de l'ARN messager réprimé - ne peut pas s'apparier avec une séquence complémentaire d'ARNm. C'est par la biais d'un mécanisme complexe qu'est mise en jeu la machinerie cellulaire induisant une inhibition de l'expression de l'ARNm correspondant.

L'administration dans une cellule d'oligonucléotide d'ARN double brin, induit un phénomène d'extinction post-transcriptionnel de l'ARNm qu'il vise.

Le mécanisme moléculaire mis en jeu fait intervenir des séquences de 21 à 23 nucléotides comprises dans les oligonucléotides d'ARN double brin, ces séquences étant responsables de la spécificité de la séquence de l'ARNm. Ces oligonucléotides d'ARN double brin, aussi appelés dsRNA ou encore siRNA (pour short interfering RNA, voir Tuschl T. Chem. Biochem. 2001 ;2 : 239-245). Le mécanisme fait intervenir un complexe dsRNA-protéine formé de manière ATP dépendante et qui déclenche une réaction de dégradation spécifique de l'ARNm visé (Nykanen A & al Cell 2001 107 309-321).

L'objet de la présente invention se rapporte tout d'abord à une composition destinée à une application topique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable au moins un oligonucléotide d'ARN double brin comportant entre 12 et 40 nucléotides, préférentiellement de 20 à 25 nucléotides, on préférera tout particulièrement les oligonucléotides d'ARN double brin comportant entre 21 et 23 nucléotides.

En particulier, il s'agira d'une composition cosmétique comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable au moins un oligonucléotide d'ARN double brin comportant

entre 12 et 40 nucléotides, préférentiellement de 20 à 25 nucléotides, on préférera tout particulièrement les oligonucléotides d'ARN double brin comportant entre 21 et 23 nucléotides.

On préférera une composition destinée à être appliquée topiquement sur la peau.

Par oligonucléotide d'ARN double brin, on entend une séquence d'acide ribonucléique ayant une structure de double hélice avec une séquence substantiellement identique à au moins une partie de l'ARN messager visé.

La séquence des oligonucléotides d'ARN double brin selon l'invention dérive généralement d'une séquence endogène, c'est-à-dire qu'elle représente tout ou partie de séquences nucléotidiques mammifères ou de micro-organismes. Il peut s'agir de séquence de gène, de séquence d'ADN codant (ADNc) produits par exemple avec la reverse transcriptase à partir d'ARN messager (ARNm) issu d'un mammifère, il peut également s'agir de séquence de gène de micro-organisme.

Lorsque la séquence de l'oligonucléotide d'ARN double brin correspond à tout ou partie de la séquence d'un gène, il pourra s'agir des introns ou des exons, néanmoins, on préférera utiliser les séquences d'un ou plusieurs exons du gène visé.

Les oligonucléotides d'ARN double brin selon l'invention pourront être des oligonucléotides d'ARN double brin comportant un ou plusieurs nucléotides modifiés par substitution, délétion ou insertion, ces modifications seront telles que la séquence l'oligonucléotide d'ARN double brin lui permettra de reconnaître spécifiquement un fragment de l'ARNm cible du mécanisme de dégradation.

Les oligonucléotides d'ARN double brin pourront également présenter un squelette modifié lui conférant, par exemple, une meilleure stabilité.

Par exemple, les liaisons phosphodiester des brins d'ARN naturels peuvent être modifiées pour inclure au moins un atome d'azote ou de soufre. De plus, les oligonucléotides d'ARN double brin selon l'invention peuvent comprendre des bases autres que les 4 bases classiques.

La structure en double brin de l'oligonucléotide d'ARN double brin peut être obtenue par l'appariement de deux brins simples d'ARN complémentaires ou bien par un unique brin simple d'ARN "autocomplémentaire", c'est-à-dire comprenant deux fragments de

séquences complémentaires pouvant s'apparier par repliement du brin simple pour former une double hélice.

Par oligonucléotide d'ARN double brin substantiellement identique à un fragment de gène, on entend un oligonucléotide d'ARN double brin dont la séquence présente un degré d'homologie (pourcentage de bases d'acide nucléiques identiques entre deux séquences, voir les méthodes de calcul proposées par Atschul et al. J. Molec. Biol. 1990,215:403) avec le fragment dudit gène compris entre 80 et 100% et préférentiellement d'au moins 90%.

Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, l'oligonucléotide d'ARN double brin présente des extrémités non appariées de 2 à 6 nucléotides.

Les oligonucléotides d'ARN double brin selon l'invention peuvent être synthétisés selon de nombreuses méthodes de synthèse in vivo ou in vitro de façon manuelle ou automatique.

Les méthodes de synthèse in vitro peuvent être chimiques ou enzymatiques, par exemple en utilisant une ARN polymérase (à titre d'exemple de T3, T7 ou SP6) qui réalisera la transcription d'un modèle de séquence d'ADN (ou d'ADNc) choisi.

De nombreuses méthodes de synthèse in vivo d'ARN double brin sont décrites dans la littérature, elles peuvent être réalisées dans divers types cellulaires de bactéries ou d'organismes supérieurs (Sambrook et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition (1989), DNA cloning, volume I and II, D. N. Glover (ed. 1985), Oliginucleotide Synthesis, M. J. Gaits (ed. 1984), Nucleic Acid Hybridation, B. D. Hames and S. J. Higgins (ed. 1984), Transcription and Translation B. D. Hames and S. J. Higgins (ed. 1984), Animal Cell Culture, R. I. Freshney (ed. 1986), Immobilised Cells and
Enzymes, IRL Press (1986), B. Pertal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984), Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, J. H. Miller and M. P. Calos, Cold Spring
Harbor Laboratory (ed. 1987), Methods in Enzymology, vo1.154, Wu and Grossman, and
155, Wu, Mayer and Walker (1987), Immunochemical Methods in Cell and Molecular
Biology, Académie Press, London, Scopes (1987), Protein Purification : Principle and
Practice, 2nd ed., Springer-Verlag, N. -Y. and Handbook of Expérimental Immunology, vol.l-IV, C. D. Weir and C. C. Blackwell (1986)). On pourra également se référer aux

méthodes de synthèses décrites dans les demandes de brevet W001/36646 et W001/75164.

La présente invention se rapporte à une composition cosmétique dans laquelle l'oligonucléotide d'ARN double brin est capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour une protéine exprimée par une cellule de la peau.

La présente invention se rapporte également à une composition cosmétique dans laquelle l'oligonucléotide d'ARN double brin est capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour une protéine exprimée par un micro-organisme recouvrant la peau.

En particulier, la protéine de la peau est une protéine exprimée par des mélanocytes et/ou des kératinocytes et/ou des fibroblastes et/ou les cellules endothéliales et/ou les cellules immunitaires résidentes. De façon préférée, il s'agira d'une protéine exprimée par les kératinocytes.

Dans un mode de réalisation préféré selon l'invention, la composition est telle que l'oligonucléotide d'ARN double brin est encapsulé dans le c#ur ou la paroi d'un enrobage tel que des microsphères, des nanosphères, des oléosomes, des niosomes ou des nanocapsules.

L'oligonucléotide d'ARN double brin peut être soit : - complexé par un poly-cation (par exemple une PEI hydrophile ou du chitosane) ; A titre d'exemple, on pourra choisir les polycations dérivés de poly(4-vinylpyrridine) (Modulation of interaction of polycations with negative unilamellar lipid vesicles de Yaroslavov et al dans Colloids and surfaces B:Biointerfaces 16(1999)29-43); les polymères et copolymères de Lysine (cités dans Turbidometric analysis of polyelectrolyte complexes formed between poly(L-lysine) and DNA de Ward et al dans Colloids and surfaces B:Biointerfaces 16(1999)253-260) ; Les copolymères de vinylpyrrolidine et de vinylimidazole quaternisés tels que les Luviquat de BASF (pm entre 1000 et 1000000) ; les copolymères à base de chlorure de diallyl diméthylammonium tels que les Merquats de BASF (pm entre 10000 et 10 000 000) ; les polyglucoseamines comme le chitosane et ses dérivés ; les polyamines tels que la polyethylène imine, hydrophobées ou non ; les dérives de Guars comme par exemple les Jaguar de Rhodia ; les dérivés de cellulose cationiques tels que les Celquat de National Starch ou les Quarisoft d'Amerchol ; les copolymères de vinylpirrolidone et de diméthylaminopropyl methacrylamide comme les

Gafquat de ISP ; les dérivés cationiques de l'acide acrylique comme le HYPAN QT 100 de Kingston ; les Salcare SC92, SC95 et 96 de Allied Colloide, le PIex4739L de Rohm Gmbh ; les dérivés de diuréthane et polyuréthane tel que le Polyderme PPI-SA, le Foamox PPI-SA, le Foamtaine PPI-SA15 et le Foamquat PPI-SA de Alzo , les copolyamine commes le polyquart H-81 de Henkel ; - ce complexe peut être alors encapsulé dans des particules à c#ur aqueux comme les liposomes et en particulier les niosomes (voir la demande de brevet EP 0 582 503 ou le brevet US 5,439,672) ; - complexé à la surface de vésicules ayant une surface lamellaire contenant un polymère ou un tensio-actif lipophile cationique.

Dans ce dernier cas, les tensio-actifs lipophiles cationiques peuvent être plus particulièrement choisis dans le groupe formé par les sels d'ammonium quaternaire, les amines grasses et leurs sels.

Les sels d'ammonium quaternaire sont par exemple :

dans laquelle les radicaux R1 à R4, qui peuvent être identiques ou différents, représentent un radical aliphatique, linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 30 atomes de carbone, ou un radical aromatique tel que aryle ou alkylaryle. Les radicaux aliphatiques peuvent comporter des hétéroatomes tels que notamment l'oxygène, l'azote, le soufre, les halogènes. Les radicaux aliphatiques sont par exemple choisis parmi les radicaux alkyle, alcoxy, polyoxyalkylène(C2-C6), alkylamide, alkyl(C12-C22)amido alkyle(C2-C6), alkyl(C12- C22) acétate, hydroxyalkyle, comportant environ de 1 à 30 atomes de carbone ; X est un anion choisi dans le groupe des halogénures, phosphates, acétates, lactates, alkyl(C2C6)sulfates, alkyl-ou-alkylarylsulfonates. Comme sels d'ammonium quaternaire de formule (II), on préfère, d'une part, les chlorures de tétraalkylammonium comme par exemple les chlorures de dialkyldiméthylammonium ou d'alkyltriméthylammonium, dans lesquels le radical alkyle comporte environ de 12 à 22 atomes de carbone, en particulier les chlorures de béhényltriméthylammonium, de distéaryldiméthyl-ammonium, de cétyltriméthylammonium, de benzyl diméthyl stéaryl-ammonium ou encore, d'autre part, le chlorure de

stéaramidopropyldiméthyl (myristyl acetate) ammonium vendu sous la dénomination CERAPHYL 70 par la société VAN DYK.

(2) les sels d'ammonium quaternaire de l'imidazolinium, comme par exemple ceux de formule suivante :

dans laquelle R5 représente un radical alcényle ou alkyle comportant de 8 à 30 atomes de carbone, par exemple dérivé des acides gras du suif ; R6 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle comportant de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical alcényle ou alkyle comportant de 8 à 30 atomes de carbone ; R7 représente un radical alkyle comportant de 1 à 4 atomes de carbone ; Ra représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle comportant de 1 à 4 atomes de carbone ; X est un anion choisi dans le groupe des halogénures, phosphates, acétates, lactates, alkylsulfates, alkyl-oualkylarylsulfonates. De préférence, R5 et R6 désignent un mélange de radicaux alcényle ou alkyle comportant de 12 à 21 atomes de carbone, par exemple dérivés des acides gras du suif, R7 désigne un radical méthyle, R8 désigne l'hydrogène. Un tel produit est par exemple vendu sous la dénomination REWOQUAT W 75 par la société REWO.

(3) les sels de diammonium quaternaire de formule :

dans laquelle R9 désigne un radical aliphatique comportant environ de 16 à 30 atomes de carbone ; Rio, R11, R12, Ris, et R14 sont choisis parmi l'hydrogène ou un radical alkyle comportant de 1 à 4 atomes de carbone ; et X est un anion choisi dans le groupe des halogénures, acétates, phosphates, nitrates et méthylsulfates. De tels sels de diammonium quaternaire comprennent notamment le dichlorure de propanesuif diammonium.

L'oligonucléotide d'ARN double brin peut également être complexé à la surface de globules huileux cationiques, quelques soit leur taille (voir les demandes de brevet EP 1 010 413, EP 1 010 414, EP 1 010 415, EP 1 010 416, EP 1 013 338, EP 1 016 453, EP 1 018 363, EP 1 020 219, EP 1 025 898, EP 1 120 101, EP 1 120 102, EP 1 129 684, EP 1 160 005 et EP 1 172 077).

L'oligonucléotide d'ARN double brin peut également être complexé à la surface de nanocapsules ou nanoparticules pourvues d'un enrobage lamellaire (Voir EP 0 447 318 et EP 0 557 489) et contenant un tensio-actif cationique à la surface (voir les références citées précédemment pour les tensio-actifs cationiques).

En particulier, les vésicules préférées selon la présente invention sont : - les niosomes décrits dans le brevet EP 0 582 503 ; - les sphérules de lipides dont la méthode de synthèse est décrite dans le brevet
US 5,021,200 ; - les niosomes huile dans eau décrits dans le brevet US 5,489,426 ; - les nano-émulsions proposées dans le brevet EP 0 879 589.

On utilisera préférentiellement les lipides suivants : la PEI hydrophobée par greffage de chaînes alkyles de C10 à C22 (de 5 à 50 %) insaturées ou non, ramifiées ou non, la stéarylamine ou le Chlorure de Behenyl de triamonium.

On préférera plus particulièrement les vésicules ayant un diamètre inférieur ou égale à 2 m et préférentiellement compris entre 50 nm et 1 m.

La séquence des oligonucléotides d'ARN double brin utilisés seront choisis pour une utilisation cosmétique spécifique, avec toute méthode de biologie moléculaire. Les ARNm des cibles biologiques d'intérêt en cosmétique peuvent être, à titre d'exemple, les protéines décrites ci-après, mais aussi tout ARNm codant pour des protéines épidermiques.

On pourra également associer plusieurs oligonucléotides d'ARN double brin de séquence différente et ayant chacun un effet différent dans une même composition cosmétique.

Dans un exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la tyrosinase.

En particulier, l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 1 : 5'-UGCACCACUUGGGCCUCAAdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 2 : 5'-UUGAGGCCCAAGUGGUGCAdTdT.

La composition cosmétique selon l'invention peut également comprendre un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la TRP-1 (tyrosinase related protein 1).

De telles compositions cosmétiques sont adaptées à la dépigmentation et/ou au blanchiment de la peau et/ou des phanères.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour l'enzyme elastase neurophile.

En particulier, l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 3 : 5'-CGGCUACGACCCCGUAAACdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 4 : 5'-GUUUACGGGGUCGUAGCCGdTdT.

De telles compositions cosmétiques sont destinées à prévenir et/ou lutter contre les signes du vieillissement cutané tels que la perte de fermeté et/ou de souplesse de la peau et/ou l'atrophie de la peau et/ou la formation des rides et ridules.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour l'hyaluronidase.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour une métalloprotéinase.

Les métalloprotéinases sont notamment décrites dans l'article de Y. HEROUY et al., European Journal of Dermatology, n 3, vol. 10, Avril-Mai 2000, pp. 173-180.

La famille des métalloprotéinases est ainsi constituée de plusieurs groupes bien définis basés sur leurs ressemblances en terme de structure et de spécificité de substrat (voir Woessner J. F., Faseb Journal, vol. 5, 1991, 2145). Parmi ces groupes, on peut citer les collagénases destinées à dégrader les collagènes fibrillaires (MMP-1 ou collagénase interstitielle, MMP-8 ou collagénase de neutrophile, MMP-13 ou collagénase 3, MMP-18 ou collagénase 4), les gélatinases qui dégradent le collagène de type IV ou toute forme de collagène dénaturé (MMP-2 ou gélatinase A (72 kDa), MMP-9 ou gélatinase B (92 kDa)), les stromélysines (MMP-3 ou stromélysine 1, MMP-10 ou stromélysine 2, MMP-11 ou stromélysine 3) dont le large spectre d'activité s'adresse aux protéines de la matrice extracellulaire telles que les glycoprotéines (fibronectine, laminine), les protéoglycannes, etc., la matrilysine (MMP-7), la métalloélastase (MMP-12) ou encore les métalloprotéinases membranaires (MMP-14, MMP-15, MMP-16 et MMP-17).

Les métalloprotéinases (MMPs) sont les membres d'une famille d'enzymes protéolytiques (endoprotéases) qui possèdent un atome de zinc coordonné à 3 résidus cystéine et une méthionine dans leur site actif et qui dégradent les composants macromoléculaires de la matrice extracellulaire et des lames basales à pH neutre (collagène, élastine, etc ...). Très largement répandues dans le monde vivant, ces enzymes sont présentes, mais faiblement exprimées, dans des situations physiologiques normales comme la croissance des organes et le renouvellement des tissus. Leur surexpression chez l'homme et leur activation sont cependant liées à de nombreux processus qui impliquent la destruction et le remodelage de la matrice. Cela entraîne par exemple une résorption non contrôlée de la matrice extracellulaire.

De telles compositions cosmétiques sont destinées à prévenir et/ou lutter contre les signes du vieillissement cutané tels que la perte de fermeté et/ou de souplesse de la peau et/ou l'atrophie de la peau et/ou la formation des rides et ridules, elles sont également adaptées à une utilisation visant à induire et/ou stimuler la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou freiner leur chute.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la HMG-CoA reductase.

En particulier, l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 5 : 5'-AGCCGCGAGGGUCGUCCAAdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 6 : 5'-UUGGACGACCCUCGCGGCUdTdT.

De telles compositions cosmétiques sont destinées à prévenir et/ou lutter contre la production excessive de sébum ou de sueur au niveau des aisselles ou des pieds.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la 5 a-reductase type 1 et/ou de type II, et préférentiellement la 5 a-reductase type II.

En particulier, l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 7 : 5'-CUGCAUCCUCCUGGCCAUGdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 8 : 5'-CAUGGCCAGGAGGAUGCAGdTdT.

De telles compositions cosmétiques sont destinées à traiter les désordres androgénodépendants, en particulier, à traiter l'hyperseborrhée et/ou l'acné et/ou induire et/ou stimuler la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou freiner la chute des cheveux.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la calmodulin-like skin protein (CLSP).

En particulier, l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 9: 5'-GGCUUUCUCCGCGGUUGACdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 10 : 5'-GUCAACCGCGGAGAAAGCCdTdT.

De telles compositions cosmétiques sont destinées à lutter contre les signes du vieillissement cutané et/ou lutter contre les effets néfastes des rayonnements ultraviolets et/ou traiter les peaux sèches.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la NO synthase.

De telles compositions cosmétiques sont destinées à inhiber la différentiation et/ou la prolifération cellulaire et/ou inhiber la dégradation et/ou la destruction des cellules de la peau et ainsi lutter contre le vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque et/ou freiner la chute des cheveux. Ces compositions sont également adaptées au traitement des peaux sensibles et des érythèmes, en particulier photoinduits.

Dans un autre exemple de réalisation de l'invention, la composition cosmétique contient un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour l'urokinase.

Dans d'autres exemples de réalisation de l'invention, la composition cosmétique pourra contenir un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour : - IL1 pour ses applications dans le domaine des peaux sensibles, - la 5a réductase pour ses application dans le domaine des peaux grasses, - une lipase bactérienne pour ses applications visant à lutter contre la formation de pellicules, ou encore - lox12 et/ou cox2 et/ou IL1 et/ou TGFss1pour des applications visant à lutter conter la chute des cheveux.

La composition cosmétique selon l'invention comprend entre 5.10-7 et 5 %, de préférence entre 0,0001 et 1 % d'oligonucléotide(s) d'ARN double brin en poids par rapport au poids total de la composition.

La composition selon l'invention est de préférence adaptée à une application topique sur la peau. Elle peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour ce type d'application, notamment sous forme d'une solution aqueuse ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'une émulsion siliconée, d'une microémulsion ou nanoémulsion, d'un gel aqueux ou huileux ou d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide.

On peut également utiliser des méthodes physiques d'administration intra-cutanée comme un système de propulsion gazeuse ou un patch à micro aiguilles.

Sur la figure 1, qui représente un patch à microaiguilles, les minidards (cônes) ont une hauteur correspondant à la profondeur à laquelle doit arriver le dsRNA encapsulé dans

une vésicule (épiderme superficiel, épiderme profond, derme superficiel...). La taille du patch peut, par exemple, être adaptée à la surface d'une tache pigmentaire ou d'une ride.

Lorsque la composition est destinée à être appliquée topiquement, elle peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse ou d'un gel. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau.

Ainsi, la composition selon l'invention pourra en plus de l'oligonucléotide d'ARN double brin contenir au moins un actif choisi parmi : les a-hydroxyacides ; l'acide salicylique et ses dérivés tels que l'acide n-octanoyl-5-salicylique ; l'HEPES ; la procystéine ; l'Ooctanoyl-6-D-maltose ; le sel disodique d'acide méthyl glycine diacétique ; les céramides ; les stéroïdes tels que la diosgénine et les dérivés de la DHEA ; l'acide kojique ; le N- éthyloxycarbonyl-4-para-aminophénol ; l'acide ascorbique et ses dérivés ; les extraits de myrtille ; les rétinoïdes et en particulier le rétinol et ses esters ; les polypeptides et leurs dérivés acylés ; les phytohormones ; les extraits de levure Saccharomyces cerevisiae ; les extraits d'algues ; les extraits de Vitreoscilla filiformis ; les extraits de soja, de lupin, de maïs et/ou de pois ; l'alvérine et ses sels, en particulier le citrate d'alvérine ; le resvératrol ; les caroténoïdes et en particulier le lycopène ; le tocophérol et ses esters ; le co-enzyme Q10 ou ubiquinone ; les xanthines et en particulier la caféine et les extraits naturels en contenant ; les extraits de petit houx et de marron d'Inde ; et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.

La composition selon l'invention peut en outre contenir au moins un filtre UVA et/ou UVB.

Les filtres solaires peuvent être choisis parmi les filtres organiques, les filtres inorganiques et leurs mélanges.

Comme exemples de filtres organiques actifs dans l'UV-A et/ou l'UV-B, on peut citer notamment, désignés ci-dessous par leur nom CTFA : - les dérivés de l'acide para-aminobenzoïque : PABA, Ethyl PABA, Ethyl Dihydroxypropyl PABA, Ethylhexyl Diméthyl PABA vendu notamment sous le nom ESCALOL 507 par ISP, Glyceryl PABA, PEG-25 PABA vendu sous le nom UVINUL P25 par BASF, - les dérivés salicyliques : Homosalate vendu sous le nom EUSOLEX HMS par RONA/EM INDUSTRIES, Ethylhexyl Salicylate vendu sous le nom NEO HELIOPAN

OS par HAARMANN et REIMER, Dipropyleneglycol Salicylate vendu sous le nom DIPSAL par SCHER, TEA Salicylate, vendu sous le nom NEO HELIOPAN TS par HAARMANN et REIMER, - les dérivés du dibenzoylméthane : Butyl Methoxydibenzoylmethane vendu notamment sous le nom commercial PARSOL 1789 par HOFFMANN LA ROCHE, Isopropyl Dibenzoylmethane, - les dérivés cinnamiques : Ethylhexyl Methoxycinnamate vendu notamment sous le nom commercial PARSOL MCX par HOFFMANN LA ROCHE, Isopropyl Methoxy cinnamate, Isoamyl Methoxy cinnamate vendu sous le nom commercial NEO HELIOPAN E 1000 par HAARMANN et REIMER, Cinoxate, DEA Methoxycinnamate, Diisopropyl Methylcinnamate, Glyceryl Ethylhexanoate Dimethoxycinnamate, - les dérivés de ss,ss'-diphénylacrylate: Octocrylene vendu notamment sous le nom commercial UVINUL N539 par BASF, Etocrylene, vendu notamment sous le nom commercial UVINUL N35 par BASF, - les dérivés de la benzophénone : Benzophenone-1 vendu sous le nom commercial UVINUL 400 par BASF, Benzophenone-2 vendu sous le nom commercial UVINUL D50 par BASF, Benzophenone-3 ou Oxybenzone, vendu sous le nom commercial UVINUL M40 par BASF, Benzophenone-4 vendu sous le nom commercial UVINUL MS40 par BASF, Benzophenone-5, Benzophenone-6 vendu sous le nom commercial HELISORB 11 par NORQUAY, Benzophenone-8 vendu sous le nom commercial SPECTRA-SORB UV-24 PAR AMERICAN CYANAMID, Benzophenone-9 vendu sous le nom commercial UVINUL DS-49 par BASF, Benzophenone-12, - les dérivés du benzylidène camphre : 3-Benzylidene camphor, 4-Methylbenzylidene camphor vendu sous le nom EUSOLEX 6300 par MERCK, Benzylidene Camphor Sulfonic Acid, Camphor Benzalkonium Methosulfate, Terephthalylidene Dicamphor Sulfonic Acid, Polyacrylamidomethyl Benzylidene Camphor, - les dérivés du phényl benzimidazole : Phenylbenzimidazole Sulfonic Acid vendu notamment sous le nom commercial EUSOLEX 232 par MERCK, Benzimidazilate vendu sous le nom commercial commercial NEO HELIOPAN AP par HAARMANN et REIMER, - les dérivés de la triazine : Anisotriazine vendu sous le nom commercial TINOSORB S par CIBA GEIGY, Ethylhexyl triazone vendu notamment sous le nom commercial UVINUL T150 par BASF, Diethylhexyl Butamido Triazone vendu sous le nom commercial UVASORB HEB par SIGMA 3V, - les dérivés du phényl benzotriazole : Drometrizole Trisiloxane vendu sous le nom SILATRIZOLE par RHODIA CHIMIE ,

- les dérivés anthraniliques : Menthyl anthranilate vendu sous le nom commercial commercial NEO HELIOPAN MA par HAARMANN et REIMER, - les dérivés d'imidazolines : Ethylhexyl Dimethoxybenzylidene Dioxoimidazoline Propionate, - les dérivés du benzalmalonate : Polyorganosiloxane à fonctions benzalmalonate vendu sous la dénomination commerciale PARSOL SLX par HOFFMANN LA ROCHE, - et leurs mélanges.

Les filtres UV organiques plus particulièrement préférés sont choisis parmi les composés suivants : - Ethylhexyl Salicylate, - Butyl Methoxydibenzoylmethane, - Ethylhexyl Methoxycinnamate, @ - Octocrylene, - Phenylbenzimidazole Sulfonic Acid, - Terephthalylidene Dicamphor Sulfonic, - Benzophenone-3, - Benzophenone-4, - Benzophenone-5, - 4-Methylbenzylidene camphor, - Benzimidazilate, - Anisotriazine, - Ethylhexyl triazone, - Diethylhexyl Butamido Triazone, - Methylene bis-Benzotriazolyl Tetramethylbutylphenol, - Drometrizole Trisiloxane, - et leurs mélanges.

Les filtres inorganiques utilisables dans la composition selon l'invention sont en particulier les nanopigments (taille moyenne des particules primaires : généralement entre 5 nm et 100 nm, de préférence entre 10 nm et 50 nm) d'oxydes métalliques enrobés ou non comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium. Des agents d'enrobage sont par ailleurs l'alumine et/ou le stéarate d'aluminium. De tels nanopigments d'oxydes métalliques, enrobés ou non enrobés, sont en particulier décrits dans les demandes de brevets EP-A-0518772 et EP-A-0518773.

De façon connue, la composition de l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les pigments, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition.

Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse ou dans la phase aqueuse. Ces adjuvants, ainsi que leurs concentrations, doivent être tels qu'ils ne nuisent pas aux propriétés avantageuses de l'acide pantéthéine sulfonique ou de ses sels.

Comme huiles utilisables dans la composition de l'invention, on peut citer par exemple : - les huiles hydrocarbonées d'origine animale, telles que le perhydrosqualène ; - les huiles hydrocarbonées d'origine végétale, telles que les triglycérides liquides d'acides gras comportant de 4 à 10 atomes de carbone et la fraction liquide du beurre de karité ; - les esters et les éthers de synthèse, notamment d'acides gras, comme les huiles de formules R1COOR2 et R1OR2dans laquelle R1 représente le reste d'un acide gras comportant de 8 à 29 atomes de carbone, et R2représente une chaîne hydrocarbonée, ramifiée ou non, contenant de 3 à 30 atomes de carbone, comme par exemple l'huile de Purcellin, l'isononanoate d'isononyle, le myristate d'isopropyle, le palmitate d'éthyl-2hexyle, le stéarate d'octyl-2-dodécyle, l'érucate d'octyl-2-dodécyle, l'isostéarate d'isostéaryle ; les esters hydroxylés comme l'isostéaryl lactate, l'octylhydroxystéarate, l'hydroxystéarate d'octyldodécyle, le diisostéaryl-malate, le citrate de triisocétyle, les heptanoates, octanoates, décanoates d'alcools gras ; les esters de polyol, comme le dioctanoate de propylène glycol, le diheptanoate de néopentylglycol et le diisononanoate de diéthylèneglycol ; et les esters du pentaérythritol comme le tétraisostéarate de pentaérythrityle ; - les hydrocarbures linéaires ou ramifiés, d'origine minérale ou synthétique, tels que les huiles de paraffine, volatiles ou non, et leurs dérivés, la vaseline, les polydécènes, le polyisobutène hydrogéné tel que l'huile de parléam ; - les alcools gras ayant de 8 à 26 atomes de carbone, comme l'alcool cétylique, l'alcool stéarylique et leur mélange (alcool cétylstéarylique), l'octyldodécanol, le 2-butyloctanol, le 2-hexyldécanol, le 2-undécylpentadécanol, l'alcool oléique ou l'alcool linoléique ;

- les huiles fluorées partiellement hydrocarbonées et/ou siliconées comme celles décrites dans le document JP-A-2-295912 ; - les huiles de silicone comme les polyméthylsiloxanes (PDMS) volatiles ou non à chaîne siliconée linéaire ou cyclique, liquides ou pâteux à température ambiante, notamment les cyclopolydiméthylsiloxanes (cyclométhicones) telles que la cyclohexasiloxane ; les polydiméthylsiloxanes comportant des groupements alkyle, alcoxy ou phényle, pendant ou en bout de chaîne siliconée, groupements ayant de 2 à 24 atomes de carbone ; les silicones phénylées comme les phényltriméthicones, les phényldiméthicones, les phényltriméthylsiloxydiphényl-siloxanes, les diphényl-diméthicones, les diphénylméthyldiphényl trisiloxanes, les 2-phényléthyltriméthyl-siloxysilicates, et les polyméthylphénylsiloxanes ; - leurs mélanges.

Comme émulsionnants et coémulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple les émulsionnants H/E tels que les esters d'acide gras et de polyéthylène glycol, notamment le stéarate de PEG-100, et les esters d'acide gras et de glycérine tels que le stéarate de glycéryle, ainsi que les émulsionnants E/H tels que le poly(méthylcétyl)(diméthyl)méthylsiloxane oxyéthyléné disponible sous la dénomination commerciale ABIL WE09 auprès de la société Degussa Goldschmidt ou le mélange de stéarate d'éthylène glycol acétyle et de tristéarate de glycéryle commercialisé par la société Guardian sous la dénomination commerciale UNITWIX.

Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras, la silice hydrophobe et les polyéthylènes.

Comme charges qui peuvent être utilisées dans la composition de l'invention, on peut citer par exemple, outre les pigments, la poudre de silice ; le talc ; l'amidon réticulé par l'anhydride octénylsuccinique commercialisé par la société National Starch sous la dénomination DRY FLO PLUS (28-1160) ; les particules de polyamide et notamment celles vendues sous la dénomination ORGASOL par la société Atochem ; les poudres de polyéthylène ; les micro-sphères à base de copolymères acryliques, telles que celles en copolymère diméthacrylate d'éthylène glycol/ methacrylate de lauryle vendues par la

société Dow Corning sous la dénomination de POLYTRAP ; les poudres expansées telles que les microsphères creuses et notamment, les microsphères commercialisées sous la dénomination EXPANCEL par la société Kemanord Plast ou sous la dénomination MICROPEARL F 80 ED par la société Matsumoto ; les microbilles de résine de silicone telles que celles commercialisées sous la dénomination TOSPEARL par la société Toshiba Silicone ; et leurs mélanges. Ces charges peuvent être présentes dans des quantités allant de 0 à 20 % en poids et de préférence de 1 à 10 % en poids par rapport au poids total de la composition ou de la préparation selon l'invention.

L'homme du métier veillera à utiliser des ingrédients et des actifs qui ne nuiront pas à l'activité des oligonucléotides d'ARN double brin présents dans les compositions selon l'invention.

Un autre objet de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un oligonucléotide d'ARN double brin pour la préparation d'une composition destinée à être appliquée topiquement.

En particulier, cette composition sera adaptée à des traitements non thérapeutiques tels que la dépigmentation et/ou le blanchiment de la peau et/ou les phanères, à la prévention et/ou la lutte contre les signes cutanés du vieillissement, l'induction et/ou la stimulation de la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou le ralentissement de la chute des cheveux.

Ainsi l'invention se rapporte à un procédé de traitement de dépigmentation et/ou de blanchiment de la peau ou des phanères caractérisé en ce qu'on applique sur la zone à traiter une composition selon l'invention, en particulier, une composition comprenant un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la tyrosinase et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la TRP-1.

L'invention se rapporte aussi à un procédé de traitement pour prévenir et/ou lutter contre les signes cutanés du vieillissement caractérisé en ce qu'on applique sur la zone à traiter une composition comprenant un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la neutrophile élastase et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour l'hyaluronidase et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber

l'expression d'un ARN messager codant pour une metalloprotéinase et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la HMG-CoA réductase et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la calmodulin-like skin protein (CLSP) et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la NO-synthase.

L'invention se rapporte également à un procédé de traitement pour induire et/ou stimuler la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou freiner la chute des cheveux caractérisé en ce qu'on applique sur la zone à traiter une composition comprenant un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour une metalloprotéinase et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la 5 a-reductase type # ou Il et/ou un oligonucléotide d'ARN double brin capable d'inhiber l'expression d'un ARN messager codant pour la NO-synthase Figure : La figure 1 représente un patch à microaiguilles pouvant être utilisé pour l'administration d'oligonucléotides d'ARN double brin.

Exempte 1 - efficacité d'une formulation cosmétique Les conditions expérimentales sont celles décrites par Tuschl et al. (Journal of Cell Science 2001,114, 4557-4565), à la différence que les oligonucléotides d'ARN double brin utilises sont encapsulés dans des vésicules utilisées en cosmétique.

Les oligonucléotides d'ARN double brin à une concentration molaire efficace dans une solution aqueuse sont complexés avec une polyéthyléne imine (PEI) d'un poids moléculaire 200 à 100000 g/M. La nature de la PEI et sa proportion de 10-4 à 1% sont fonction du type de solution aqueuse initiale contenant les oligonucléotides d'ARN double brin et de la formulation cosmétique envisagée. La complexation pourra être objectivée par l'opalescence de la solution initiale.

Une fois la complexation réalisée, ce complexe est encapsulé dans des particules à c#ur aqueux, comme des niosomes, ou complexé à la surface de vésicules ayant une surface

lamellaire contenant un polymère ou un tensio actif lipophile cationique comme par exemple les PEI hydrophobés. On comparera ces deux types de conditions à une méthode de transfection de référence.

Les vésicules préparées ci-dessus sont mises en présence de cellules pendant 24 à 48 H pour objectiver selon la méthodologie de Tuschl et al. l'extinction spécifique de l'ARNm cible.

Exemple 2 - Compositions Composition 1 : L'oligonucléotide d'ARN double brin est complexé à la surface de vésicules cationiques : Préparation des vésicules : Isostéarate de PEG 400 8 % Polyéthylène Imine (PEI de PM 200 à 100000) amidifié par acide isostéarique 2 % Eau distillée qsp100% Oligonucléotides d'ARN double brin de SEQ ID n 1 et SEQ ID n 2 avec un ratio dsRNA/PEI compris entre 0,1 et 1000.

Etapes de réalisation des vésicules : - solubilisation des lipides dans un mélange méthanol/chloroforme ; - évaporation du solvant à l'évaporateur rotatif sous pression réduite pour obtenir un film lipidique ; - hydratation du film sous agitation Ultra Son (US) ; - contrôle du diamètre des vésicules (moins de 1 m, de préférence, de 200 nm) ; - ajout de la solution de oligonucléotides d'ARN double brin.

Composition cosmétique: Les vésicules sont ensuite incorporée dans une formulation cosmétique adaptée à une application topique.

Une application quotidienne de préférence le soir de cette préparation permet l'atténuation des taches pigmentaires, une application régulière et durable conduit à la disparition de ces taches pigmentaires.

Composition 2 : Le dsRNA est complexé à l'intérieur de vésicules cationiques A) Encapsulation d'un complexe polycation / oligonucléotides d'ARN double brin Stéarate de POE (8) 5,5% Cholestérol 4% Polyéthylène Imine (PM 200 à 100000) amidifié par acide isostéarique 0.5% Solution aqueuse A : eaudistillée 30%, PEI (PM 200 à 100000) 1% et oligonucléotide d'ARN double brin QSP.

Solution aqueuse B : eaudistillée qsp 100% B) étapes de préparation des vésicules : voir la préparation de la composition 1. Dans ce cas, l'étape d'hydratation se fait à la température adaptée au mélange lipidique et avec la solution A sous agitation ultrason puis s'ajoute une étape de dilution avec la solution aqueuse B.

Composition cosmétique : Les vésicules sont ensuite incorporée dans une formulation cosmétique adaptée à une application topique.

LISTE DE SEQUENCES SEQ ID n 1 :5'-UGCACCACUUGGGCCUCAAdTdT SEQ ID n 2 : 5'-UUGAGGCCCAAGUGGUGCAdTdT SEQ ID n 3 : 5'-CGGCUACGACCCCGUAAACdTdT SEQ ID n 4 : 5'-GUUUACGGGGUCGUAGCCGdTdT SEQ ID n 5 : 5'-AGCCGCGAGGGUCGUCCAAdTdT SEQ ID n 6 : 5'-UUGGACGACCCUCGCGGCUdTdT SEQ ID n 7 : 5'-CUGCAUCCUCCUGGCCAUGdTdT SEQ ID n 8 : 5'-CAUGGCCAGGAGGAUGCAGdTdT SEQ ID n 9 : 5'-GGCUUUCUCCGCGGUUGACdT SEQ ID n 10 : 5'-GUCAACCGCGGAGAAAGCCdTdT.

Claims

REVENDICATIONS 1. Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle est destinée à une application topique et qu'elle comprend dans un milieu cosmétiquement acceptable au moins un oligonucléotide d'ARN double brin comportant entre 12 et 40 nucléotides reproduisant un fragment de séquence nucléotidique mammifère codant pour une protéine exprimée par une cellule de la peau choisie parmi la tyrosinase, la TRP-1 (tyrosinase related protein 1), l'enzyme elastase neutrophile, l'hyaluronidase, une metalloprotéinase, la HMG-CoA réductase, la 5 a-reductase type II, la calmodulin-like skin protein (CLSP), la NO synthase et l'urokinase et inhibant l'expression d'un ARN messager codant pour ladite protéine.
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'oligonucléotide présente des extrémités non appariées de 2 à 6 nucléotides.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la protéine de la peau est exprimée par des mélanocytes et/ou des kératinocytes et/ou des fibroblastes et/ou les cellules endothéliales et/ou les cellules immunitaires résidentes.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'oligonucléotide d'ARN double brin est encapsulé dans un enrobage tel que des microsphères, des nanosphères, des oléosomes ou des nanocapsules.
5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'enrobage dans lequel l'oligonucléotide d'ARN double brin est encapsulé a un diamètre inférieur ou égale à 2 m.
6. Composition cosmétique selon l'une quelconques des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est la tyropsinase et que l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 1 : 5'UGCACCACUUGGGCCUCAAdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 2: 5'-UUGAGGCCCAAGUGGUGCAdTdT.
7. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que la protéine est la tyrosinase ou la TRP-1 (tyrosinase related protein 1) et qu'elle est destinée à dépigmentation et/ou au blanchiment de la peau ou les phanères.

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8. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est l'enzyme elastase neutrophile et que l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 3: 5'CGGCUACGACCCCGUAAACdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 4 : 5'-GUUUACGGGGUCGUAGCCGdTdT.
9. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 8, caractérisée en ce que la protéine est l'enzyme elastase neutrophile, l'hyaluronidase ou une métalloprotéase et qu'elle est destinée à prévenir et/ou lutter contre les signes du vieillissement cutané tels que la perte de fermeté et/ou de souplesse de la peau et/ou l'atrophie de la peau et/ou la formation des rides et ridules.
10. Composition cosmétique selon la revendication 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est une métalloprotéase et qu'elle est destinée à induire et/ou stimuler la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou freiner leur chute.
11. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est la HMG-CoA réductase et que l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 5: 5'AGCCGCGAGGGUCGUCCAAdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 6 : 5'-UUGGACGACCCUCGCGGCUdTdT.
12. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 11, caractérisée en ce que la protéine est la HMG-CoA réductase et qu'elle est destinée à prévenir et/ou lutter contre la production excessive de sébum ou de sueur au niveau des aisselles ou des pieds.
13. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est la 5 a-reductase type Il et que l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 7: 5'CUGCAUCCUCCUGGCCAUGdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 8 : 5'-CAUGGCCAGGAGGAUGCAGdTdT.
14. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 13, caractérisée en ce que la protéine est la a-reductase type Il et qu'elle est destinée à traiter les désordres androgéno-dépendant.

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15. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 13 ou 14, caractérisée en ce que la protéine est la a-reductase type Il et qu'elle destinée à traiter l'hyperseborrhée et/ou l'acné et/ou induire et/ou stimuler la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou freiner la chute des cheveux.
16. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est la calmodulin-like skin protein (CLSP) et que l'oligonucléotide d'ARN double brin est tel que son brin 5' sens a pour séquence SEQ ID n 9 : 5'-GGCUUUCUCCGCGGUUGACdTdT et que son brin 5' antisens a pour séquence SEQ ID n 10 : 5'-GUCAACCGCGGAGAAAGCCdTdT.
17. Composition cosmétique selon la revendication 1 à 5 ou 16, caractérisée en ce que la protéine est la calmodulin-like skin protein (CLSP) et qu'elle est destinée à lutter contre les signes du vieillissement cutané et/ou lutter contre les effets néfastes des rayonnements ultraviolets et/ou traiter les peaux sèches.
18. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la protéine est la NO synthase et qu'elle est destinée à inhiber la différentiation et/ou la prolifération cellulaire et/ou inhiber la dégradation et/ou la destruction des cellules de la peau et/ou lutter contre le vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque et/ou freiner la chute des cheveux
19. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 18, caractérisée en ce que la protéine est la NO synthase et qu'elle est destinée au traitement des peaux sensibles et des érythèmes, en particulier photoinduits.
20. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisée en ce que le ou les oligonucléotide(s) d'ARN double brin représentent entre 5.10-7 et 5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
21. Procédé de traitement de dépigmentation et/ou de blanchiment de la peau ou les phanères caractérisé en ce qu'on applique sur la zone à traiter une composition selon la revendication 7.

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22. Procédé de traitement pour prévenir et/ou lutter contre les signes cutanés du vieillissement caractérisé en ce qu'on applique sur la zone à traiter une composition selon l'une des revendications 9 ou 18.
23. Procédé de traitement pour ou induire et/ou stimuler la croissance des cheveux et/ou des poils et/ou freiner la chute des cheveux caractérisé en ce qu'on applique sur la zone à traiter une composition selon l'une des revendications 10, 14 ou 15.