ES2342826T3 - Utilizacion por via topica de al menos un oligonucleotido de arn de doble helice (dsrna) anti-tirosina. - Google Patents
Utilizacion por via topica de al menos un oligonucleotido de arn de doble helice (dsrna) anti-tirosina. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2342826T3 ES2342826T3 ES03756039T ES03756039T ES2342826T3 ES 2342826 T3 ES2342826 T3 ES 2342826T3 ES 03756039 T ES03756039 T ES 03756039T ES 03756039 T ES03756039 T ES 03756039T ES 2342826 T3 ES2342826 T3 ES 2342826T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- seq
- double helix
- rna
- double
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/007—Preparations for dry skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
- A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/10—Anti-acne agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
- A61P5/28—Antiandrogens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/13—Decoys
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Birds (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº: 1, la SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15, la SEC ID Nº: 16, la SEC ID Nº: 17, la SEC ID Nº: 18, la SEC ID Nº: 19, la SEC ID Nº: 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22 para una aplicación por vía tópica para inhibir la expresión de una proteína de la piel o de sus anejos, cuya proteína es la tirosinasa.
Description
Utilización por vía tópica de al menos un
oligonucleótido de ARN de doble hélice (dsRNA)
anti-tirosina.
La invención se relaciona con una nueva
utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice
(dsRNA) para una aplicación por vía tópica, así como con
composiciones tópicas que contienen, en un medio fisiológicamente
aceptable, al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice
encapsulado.
La invención se relaciona igualmente con un
procedimiento de tratamiento cosmético que utiliza al menos un
oligonucleótido de ARN de doble hélice.
La presente invención se relaciona con una nueva
utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice
(dsRNA) para una aplicación por vía tópica, así como con
composiciones para uso tópico que contienen, en un medio
fisiológicamente aceptable, al menos un oligonucleótido de ARN de
doble hélice encapsulado.
Se utilizan numerosas substancias por vía tópica
para paliar o prevenir ciertas alteraciones estéticas o ciertos
trastornos de la piel o de sus anejos. Entre ellas, se buscan más
particularmente las substancias que presentan una especificidad
biológica real.
En efecto, cuanto más presenten las substancias
una actividad específica, tal como una actividad biológica
específica, menos riesgo tendrán de provocar efectos secundarios
indeseables. Por ejemplo, en una composición destinada a aclarar la
tez o a prevenir la pigmentación indeseable, se preferirá utilizar
una substancia cuya acción se dirija a una enzima, como la
tirosinasa. Se puede citar también a modo de ejemplo la utilización
de una substancia que actúe específicamente sobre ciertas
metaloproteinasas o ciertas elastasas para la preparación de una
composición para prevenir el envejecimiento.
Hasta ahora, este problema de especificidad se
resolvía gracias a la utilización de oligonucleótidos de ARN o de
ADN nativo o ADN antisentido. Tal utilización conlleva, sin embargo,
limitaciones.
En efecto, la utilización de oligonucleótidos
(tales como, por ejemplo, los descritos en la solicitud de patente
WO 01/58918) de ADN, de ARN no específico o de ADN antisentido en
formulaciones tópicas no ha permitido obtener una eficacia
deseable. En particular, en la superficie de la piel, ARNasas
degradan el ARN nativo; las cantidades que alcanzan los ARNm diana
no pueden ser suficientes para obtener el efecto buscado.
Otra limitación de la utilización de los
oligonucleótidos de una sola hélice, tales como los mencionados
anteriormente, es el riesgo de que se produzcan eventuales
replegamientos secundarios (o reemparejamientos secundarios) del
oligonucleótido. Por ello, la administración in vivo de
oligonucleótidos de una sola hélice (tales como oligonucleótidos de
ADN antisentido) es con frecuencia ineficaz. Además, la estabilidad
de los efectos in vivo de los oligonucleótidos de una sola
hélice es corta a causa de una degradación intracelular rápida de
los oligonucleótidos y de una vida media extracelular corta in
vivo (Khan A. y col., J. Drug Target 2000, 8,
319-334).
Se necesita así una composición que resuelva a
la vez las dificultades de administración dirigida de los
principios activos y el problema de especificidad y que se adapte a
una aplicación tópica.
Se ha establecido el conocimiento de los
oligonucleótidos de ARN de doble hélice, también llamados dsRNA por
"double-stranded RNA", desde hace mucho tiempo
en las plantas y en los organismos eucariotas (Haines D.S. y col.,
J. Cell Biochem. 1991; 46:9-20); tienen como función
inhibir la expresión de un gen específico (Fire A., Trends in
Genetic 1999; 15: 358-363).
La utilización de dsRNA con fines terapéuticos
fue descrita en la solicitud de patente WO01/36646, que propone un
método de inhibición de genes implicados en enfermedades, en
particular cánceres. Los ejemplos de aplicación de este método
proponen la inhibición de la expresión de un gen en células
indiferenciadas, tales como células embrionarias, u ovocitos, por
inyección intracelular de dsRNA dirigido al gen que se ha de
inhibir. El objetivo es obtener un efecto sistémico. Los modos de
administración contemplados se relacionan con administraciones por
vía
general.
general.
Contrariamente a las composiciones farmacéuticas
propuestas en este documento, una formulación tópica debe alcanzar
una célula diferenciada específica, sin actuar más que a un nivel
superficial, es decir, a nivel de la piel o de sus anejos (dermis,
epidermis y faneras), incluso únicamente en la superficie de la piel
dirigiéndose a los microorganismos eucariotas que la recubren.
También se puede querer buscar un efecto a nivel de un tipo celular
cutáneo específico, tal como el fibroblasto, el melanocito, el
queratinocito, la célula de Langherans o la célula endotelial,
implicado en alteraciones estéticas o trastornos dermatológicos
particulares.
En el marco de la presente invención, se ha
visto ahora que es posible utilizar oligonucleótidos de ARN de
doble hélice para inhibir específicamente la expresión de
determinadas proteínas de células diferenciadas, en particular de
células de la piel, y, por lo tanto, para la preparación de
composiciones para uso tópico externo.
\newpage
Es por lo que la presente invención tiene por
objeto la utilización para una aplicación por vía tópica de al
menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice que es activo sobre
células diferenciadas, tales como las células de la dermis y de la
epidermis (melanocitos, fibroblastos, queratinocitos...).
La utilización según la invención presenta las
propiedades antes mencionadas a la vez que permite superar las
dificultades encontradas hasta el día de la fecha:
- se dirige específicamente a la expresión de
proteínas de las células de la dermis y de la epidermis o de
microorganismos eucariotas en la superficie de la piel; se podrá
hacer el abordaje de las células, en particular, mediante la
elección de un revestimiento que permita la liberación de los
oligonucleótidos de ARN de doble hélice en la célula diana;
- los oligonucleótidos de ARN de doble hélice
permiten la inhibición específica de un gen (o de varios en el caso
de una composición que asocie oligonucleótidos de ARN de doble
hélice con secuencias diferentes y que se dirigen a ARNm
codificantes para proteínas diferentes);
- los oligonucleótidos de ARN de doble hélice,
gracias a su estructura dicatenaria, son resistentes a las ARNasas
(enzimas de degradación del ARN); no se degradan en la superficie de
la piel;
- por su estructura dicatenaria, estos
oligonucleótidos de ARN de doble hélice no pueden sufrir
replegamiento y autoemparejarse;
así, la biodisponibilidad del producto activo,
es decir, la cantidad de oligonucleótido de ARN de doble hélice que
produce el efecto buscado que llega a las células, es netamente
mejor y permite la utilización de una menor cantidad de
oligonucleótido de ARN de doble hélice.
Las composiciones que contienen el ARN de doble
hélice según la invención estarán particularmente adaptadas a un
uso cosmético o dermatológico, ya que permiten alcanzar la diana
celular sin un modo de administración invasivo, y son activas sin
tener que penetrar en el núcleo celular.
Es por medio de un mecanismo complejo a nivel
citoplásmico que actúa la maquinaria celular que induce una
inhibición de la expresión del ARNm correspondiente.
La administración a una célula de
oligonucleótido de ARN de doble hélice induce un fenómeno de
extinción postranscripcional del ARNm al que se dirige.
El mecanismo molecular puesto en juego hace
intervenir secuencias de 21 a 23 nucleótidos comprendidas en los
oligonucleótidos de ARN de doble hélice, siendo estas secuencias
responsables de la especificidad de la secuencia del ARNm. Estos
oligonucleótidos de ARN de doble hélice son también denominados
dsRNA o aún siRNA (por "short interfering RNA", véase Tuschl
T., Chem. Biochem. 2001, 2: 239-245). El mecanismo
hace intervenir a un complejo dsRNA-proteína formado
de manera dependiente de ATP y que desencadena una reacción de
degradación específica del ARNm diana (Nykanen A y col., Cell 2001,
107: 309-321).
El objeto de la presente invención se relaciona
primeramente con una utilización para una aplicación por vía tópica
de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice que lleva
generalmente al menos 10 nucleótidos, especialmente entre 12 y 40
nucleótidos, preferiblemente de 20 a 25 nucleótidos; se preferirán
muy particularmente los oligonucleótidos de ARN de doble hélice que
llevan entre 21 y 23 nucleótidos.
Por oligonucleótido de ARN de doble hélice, se
entiende una secuencia de ácido ribonucleico que tiene una
estructura de doble hélice con una secuencia substancialmente
idéntica a al menos una parte del ARN mensajero diana.
La secuencia de los oligonucleótidos de ARN de
doble hélice según la invención deriva generalmente de una
secuencia endógena, es decir, que representa todo o parte de
secuencias nucleotídicas de mamíferos o de microorganismos
eucariotas. Puede tratarse de una secuencia de gen o de una
secuencia de ADN codificante (ADNc), producidos, por ejemplo, con
la transcriptasa inversa a partir de ARN mensajero (ARNm) procedente
de un mamífero; puede tratarse igualmente de una secuencia de gen
de levadura.
En particular, cuando la secuencia del
oligonucleótido de ARN de doble hélice corresponde a todo o parte de
la secuencia de un gen, se preferirán utilizar las secuencias de
uno o más exones del gen de interés.
Los oligonucleótidos de ARN de doble hélice
según la invención podrán ser oligonucleótidos de ARN de doble
hélice que lleven uno o más nucleótidos modificados por
substitución, deleción o inserción; estas modificaciones serán
tales que la secuencia del oligonucleótido de ARN de doble hélice le
permitirá reconocer específicamente un fragmento del ARNm diana del
mecanismo de degradación.
Los oligonucleótidos de ARN de doble hélice
podrán también presentar un esqueleto modificado que confiera, por
ejemplo, una mejor estabilidad.
\global\parskip0.930000\baselineskip
Por ejemplo, las uniones fosfodiéster de las
hebras de ARN naturales pueden ser modificadas para incluir al
menos un átomo de nitrógeno o de azufre. Además, los
oligonucleótidos de ARN de doble hélice según la invención pueden
incluir bases distintas de las 4 bases clásicas.
La estructura en doble hélice del
oligonucleótido de ARN de doble hélice puede ser obtenida por
emparejamiento de dos hebras simples de ARN complementarias, o bien
el oligonucleótido de ARN de doble hélice puede ser obtenido por
replegamiento y emparejamiento de una única hebra simple de ARN
"autocomplementaria", es decir, que tiene dos fragmentos de
secuencias complementarias que pueden emparejarse por repliegue de
la hebra simple para formar una doble hélice.
Por oligonucleótido de ARN de doble hélice
substancialmente idéntico a un fragmento de gen, se entiende un
oligonucleótido de ARN de doble hélice cuya secuencia presenta un
grado de homología (porcentaje de bases de ácidos nucleicos
idénticas entre dos secuencias, véanse los métodos de cálculo
propuestos por Atschul y col., J. Molec. Biol. 1990, 215: 403) con
el fragmento de dicho gen comprendido entre el 80 y el 100%, y
preferiblemente de al menos el 90%.
En un modo de realización preferido de la
invención, el oligonucleótido de ARN de doble hélice presenta
extremos no emparejados de 2 a 6 nucleótidos.
El oligonucleótido de ARN de doble hélice según
la invención puede igualmente ser modificado por adición de un
polietilenglicol, tal como definen Garrett y col. (Bioorg. Med.
Chem., Julio de 2000, 8(7): 19779-97), con
el fin de mejorar la eficacia de su transfección en la célula
huésped.
Los oligonucleótidos de ARN de doble hélice
según la invención pueden ser sintetizados según numerosos métodos
de síntesis in vivo o in vitro de forma manual o
automática.
Los métodos de síntesis in vitro pueden
ser químicos o enzimáticos, por ejemplo utilizando una ARN
polimerasa (a modo de ejemplo T3, T7 o SP6), que realizará la
transcripción de un modelo de secuencia de ADN (o de ADNc)
seleccionado.
Se describen en la literatura numerosos métodos
de síntesis in vivo de ARN de doble hélice; pueden ser
llevados a cabo en diversos tipos celulares de bacterias o de
organismos superiores (Sambrook y col., Molecular Cloning, A
Laboratory Manual, Segunda Edición (1989); DNA Cloning, volúmenes I
y II, D. N. Glover (ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis, M. J.
Gaits (ed. 1984); Nucleic Acid Hybridation, B. D. Hames y S. J.
Higgins (ed. 1984); Transcription and Translation, B. D. Hames y S.
J. Higgins (ed. 1984); Animal Cell Culture, R. I. Freshney (ed.
1986); Immobilised Cells and Enzymes, IRL Press (1986); B. Pertal, A
Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Gene Transfer Vectors
for Mammalian Cells, J. H. Miller y M. P. Calos, Cold Spring Harbor
Laboratory (ed. 1987); Methods in Enzymology, vol. 154, Wu y
Grossman, y 155, Wu, Mayer y Walker (1987); Immunochemical Methods
in Cell and Molecular Biology, Academic Press, London, Scopes
(1987); Protein Purification: Principle and Practice, 2ª ed.,
Springer-Verlag, N.-Y., y Handbook of Experimental
Immunology, vol. I-IV, C. D. Weir y C. C. Blackwell
(1986)). Se podrá igualmente hacer referencia a los métodos de
síntesis descritos en las solicitudes de patente WO01/36646 y
WO01/75164.
La secuencia de los oligonucleótidos de ARN de
doble hélice utilizados será seleccionada para una utilización
tópica específica con cualquier método de biología molecular. Los
ARNm de las dianas biológicas de interés en el ámbito cosmético o
dermatológico pueden ser, a modo de ejemplo, los de las proteínas
descritas a continuación, pero también cualquier ARNm codificante
de otras proteínas cutáneas.
Se podrá utilizar igualmente una asociación de
varios oligonucleótidos de ARN de doble hélice de secuencia
diferente y cada uno con una actividad diferente, con el fin, por
ejemplo, de obtener un efecto complementario o sinérgico.
En particular, la presente invención se
relaciona con la utilización por vía tópica de al menos un
oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir la expresión
de un ARN mensajero codificante de una proteína expresada por una
célula de la piel o de sus anejos.
La presente invención se relaciona también con
una composición cosmética en la cual el oligonucleótido de ARN de
doble hélice es capaz de inhibir la expresión de un ARN mensajero
codificante de una proteína expresada por un microorganismo
eucarionte que se encuentra en la superficie de la piel o del cuero
cabelludo.
En particular, la proteína de la piel es una
proteína expresada por melanocitos y/o queratinocitos y/o
fibroblastos y/o las células endoteliales y/o las células
inmunitarias residentes, tales como las células de Langherans.
Preferiblemente, se tratará de una proteína expresada por los
queratinocitos.
Las proteínas y/o los oligopéptidos, cuya
síntesis se puede reducir o inhibir, son los implicados en los
fenómenos de proliferación o de diferenciación celular, como por
ejemplo:
- los factores de crecimiento EGF,
TNF-\alpha, TGF, endotelina, NGF, HGF, IGF y
VEGF;
- las citokinas, por ejemplo de tipo IL1, IL6,
IL8...;
\global\parskip1.000000\baselineskip
- los receptores de tipo EGFr, TGFr, PAR, PPAR,
FXR, RXR, CB1R, CB2R, VR1, CRAB2...;
- las proteínas de unión al calcio de tipo
calmodulina, CLP y CLSP y las de la familia de las proteínas S100,
tales como S100A8, S100A9 y S100A7;
- la calcineurina;
- las transglutaminasas, por ejemplo las
transglutaminasas 1, 3 ó 5;
- las proteínas que aseguran la cohesión/unión
intercelular, tales como ocludinas, lamininas, caveolinas,
desmogleínas, desmocolinas, corneodesmosinas, placoglobinas,
desmoplaquinas...;
- las enzimas implicadas en las modificaciones
posteriores a la traducción de las proteínas, tales como las
fosfatasas o proteína-fosfatasas, por ejemplo la
calcineurina, las fosforilasas, las proteína-kinasas
(ej.: PKC), las glucosil-transferasas, las
peptidil-arginina-desiminasas...;
- las proteasas (MMP, por ejemplo 1, 2, 3 y 9),
elastasas, proteasas de ácido aspártico, como la
catepsina-E y la catepsina-D,
proteasas de cisteína de tipo catepsina-L, B o H,
catepsina L2, SCCL, equivalentes de quimotripsina, por ejemplo de
tipo SCCE (calicreína 7), de tipo tripsina, por ejemplo de tipo SCTE
(calicreína 5), urokinasa, SASPasa, caspasa, más particularmente
caspasa 14, calpaínas, las proteasas implicadas en la hidrólisis de
la filagrina de tipo proproteína-convertasa de tipo
subtilisina, como la furina, PACE4, PC5/6 y PC7/8, las proteasas de
la familia de las proteasas de serina de tipo transmembrana, por
ejemplo la matriptasa y/o sus inhibidores endógenos, como TIMP,
PAI1 y PAI2, antileucoproteasa, elafina, LEKTI, cistatina A,
cistatina M/E...;
- las exo- y las endoglicosidasas, por ejemplo
de tipo heparanasa, hialuronidasas, condroitinasas,
aspartil-glucosaminidasa, B glicosidasa, A
glicosidasas... y sus inhibidores endógenos;
- las enzimas del metabolismo de los lípidos,
tales como HMG-CoA-reductasa,
colesterol-sulfatasas o -sulfotrans-
ferasas, esfingomielinasas, ceramidasas...;
ferasas, esfingomielinasas, ceramidasas...;
- la tirosinasa, TRP-1 o -2;
- las enzimas del metabolismo de los
eicosanoides, como por ejemplo las ciclooxigenasas, las
lipo-oxigenasas, las fosfolipasas, la
15-PGDH...;
- las enzimas del metabolismo hormonal, tales
como 5 \alpha-reductasa de tipo 1 ó 2;
- las proteínas de la matriz de tipo elastinas,
colágeno...;
- las proteínas de diferenciación de los
queratinocitos de tipo citoqueratina;
- las proteínas implicadas en la hidratación de
la piel, tales como la filagrina, las acuaporinas...;
- las proteínas implicadas en las defensas
antibacterianas de la piel hBD2, hBD3, dermcidina, ARNasa 7....
Se dan otros ejemplos no limitativos de
proteínas o de péptidos cuya expresión y/o actividad se desean
inhibir en "Textbook of Dermatology", ed. RH Champion, JL
Burton, DA Burns y SM Breathnach, sexta edición, 1998, Blackwell
Science LtD., ISBN
0-632-03796-2.
A nivel de la dermis, el ARN mensajero, cuya
expresión se podrá reducir o inhibir, puede ser el de los
fibroblastos o de otras células presentes en la dermis, las células
de los vasos o las células de los anejos epidérmicos (ejemplos:
sebocitos, glándulas sudoríparas,...), pudiendo las células migrar a
la dermis, como las células implicadas en la inmunidad o la
inflamación.
Las proteínas y/o los oligopéptidos, cuya
síntesis se puede reducir o inhibir, son los implicados en los
fenómenos de proliferación o de diferenciación celular, como por
ejemplo los descritos para los queratinocitos, y más aún:
- los factores de crecimiento EGF, TGF,
endotelina, NGF, HGF, FGF...
- las fosfatasas;
- las transglutaminasas;
- las fosforilasas;
- las proteínas implicadas en la renovación de
la matriz extracelular (proteasas: metaloproteasas MMP,
serina-proteasas como la urokinasa, tPA y las
hialuronidasas;
- las proteínas de estructura de la dermis, como
el colágeno, o de la substancia fundamental, como las proteínas de
los proteoglicanos;
- las proteínas implicadas en la maduración de
la dermis, como la lisil-oxidasa y la
lisil-hidroxilasa.
A nivel de estructuras complejas, como el
folículo piloso, se concibe la utilización de un conjunto de siRNA,
dirigido cada uno a un mensajero conocido por codificar una proteína
reguladora y/o estructural del tallo piloso, con el fin de obtener
el efecto deseado:
- anticrecimiento: por ejemplo, las proteínas
implicadas en el ciclo celular y/o el receptor de IGF y/o el
receptor tiroideo para T4;
- anticaída: por ejemplo los siRNA dirigidos
contra citokinas IL1, IL6, TNF-alfa, MCP1 y/o
proteasas MMP, urokinasa y/o lipooxigenasa;
- rebrote: por ejemplo, las proteínas implicadas
en la degradación de la PGF2-alfa- y/o
-5-alfa-reductasa; las proteínas
implicadas en la morfogénesis, como la
alfa-3-beta-1-integrina,
la beta-catenina, la laminina-10 y
LEF-1;
- modelado del tallo piloso, como el rizado o el
desrizado: por ejemplo, las proteínas implicadas en la
diferenciación del tallo piloso, tales como las queratinas del pelo
ácidas o básicas, así como las enzimas asociadas al entrecruzamiento
de las proteínas del tallo (ej.:
tiol-oxidorreductasas y transglutaminasa 3 y 5).
Se puede hacer referencia como lista no
limitativa de este tipo de proteínas a "Jamora C, DasGupta R,
Kocieniewski P y Fuchs E., Nature, Marzo de 2003, 20,
422(6929): 317-22").
A nivel de estructuras complejas, como la
glándula sebácea, se concibe la utilización de un conjunto de
siRNA, dirigido cada uno contra las proteínas implicadas en la
síntesis del sebo, como por ejemplo la HMG Co
A-reductasa y la
escualeno-sintasa.
Para todos estos tipos celulares, se puede
contemplar, según la invención, la utilización de siRNA dirigidos
contra la expresión de proteínas y/o de oligopéptidos patológicos,
en particular los correspondientes a la acción de virus (ej. HPV de
verrugas) o a células cancerosas, o los sobreexpresados en ciertas
patologías. Se pueden citar, por ejemplo, determinadas citokinas
(por ejemplo, IL1, TNF-alfa -308,
TNF-beta +252), proteínas receptoras (por ejemplo,
receptores tipo Toll -TLR-), determinadas proteínas implicadas en la
proliferación, como la
fosfatidilinositol-3-kinasa, las
moléculas de adhesión (por ejemplo, CDw60), proteasas, especialmente
las serina-proteasas (stratum corneum chimotrypsine
enzyme SCCE) o las metaloproteasas (en particular
MMP-9 y MMP-19, implicadas en la
psoriasis), o también proteínas ligadas al calcio (calmodulin like
serine protease CLSP).
Para todos estos tipos celulares, se puede
contemplar también la utilización según la invención de siRNA
dirigidos contra la expresión de proteínas y/o de oligopéptidos
implicados en la desactivación de un medicamento destinado al
tratamiento de la piel, por ejemplo proteínas de detoxificación,
como el citocromo P450 o el citocromo CYP2S1 en el caso de la
psoriasis.
Para todos estos tipos celulares, se puede
contemplar, según la invención, la utilización de siRNA dirigidos
contra la expresión de proteínas y/o de oligopéptidos inducidos por
alteraciones externas, por ejemplo siRNA dirigidos contra el
receptor purinérgico P2X tras alteración mecánica/química de la
barrera córnea.
Los microorganismos que se encuentran en su
superficie, cuya síntesis de proteínas y/o de oligopéptidos se
puede reducir o inhibir, son Eucariotas como, por ejemplo, las
levaduras o los hongos. Se pueden citar de manera no
limitativa:
- Los organismos dermatofitos, que son los
agentes responsables de las micosis (las especies de Trichophyton,
entre ellas T. rubrum y T. mentagrophytes). Los
dermatofitos son hongos filamentosos queratinófilos, es decir, que
tienen un tropismo preferente por las faneras (pelos y uñas) y la
capa córnea.
Tres tipos de dermatofitos están en el origen de
las dermatofitosis (o dermatofitias).
1. Los dermatofitos antropófilos: éstos son
estrictamente de origen humano. Los agentes son, por ejemplo:
- Trichophyton rubrum, Trichophyton interdigitale, Trichophyton violaceum, T. rosaceeum, T. tonsurans, T. soudanensae, Trichophyton schoenleinii y Epidermophyton floccosum microsporum audouinii.
2. Los dermatofitos zoófilos que se transmiten
al hombre por los animales. Los agentes responsables son, por
ejemplo, Microsporum canis, Trichophyton mentagrophytes y
Trichophyton ochraceum.
3. Los dermatofitos geófilos que se transmiten
al hombre por el suelo. El principal agente es el Microsporum
gypseum.
- Los no dermatofitos (las especies de Candida,
como C. albicans..., y las especies de Scopulariopsis, como
S. brevicaulis y Malassezia spp.). Se trata de las
levaduras representadas por el género Candida y por Malassezia
furfur (antiguamente llamada Pityrosporon). La cándida afecta a
la piel, las faneras y las mucosas. Malassezia furfur,
saprófito frecuente de la piel, sobre todo seborreica, es el agente
de la pitiriasis versicolor.
Si bien es totalmente normal que se desprendan
partículas de piel muerta tanto del cuero cabelludo como del resto
de la piel, sucede que este proceso permanente de renovación de la
epidermis adquiere proporciones molestas. Carentes de estética, la
caspa se acompaña también a veces de problemas más serios del cuero
cabelludo, tales como irritaciones, enrojecimientos y prurito. Se
habla entonces de dermatitis seborreica, una afección cutánea
favorecida por el hongo Pityrosporum ovale.
- Los mohos, más raramente implicados en las
afecciones de la capa córnea. Son responsables de ciertas
onicomicosis y de las micosis invasivas.
Se concibe según la invención una inhibición de
proteínas específicas de estos organismos, como por ejemplo la
escualeno-epoxidasa, la
14-alfa-esterol-desmetilasa
dependiente del citocromo P450 de C. albicans, proteínas de
detoxificación de los agentes antimicóticos, como las esterasas de
Trichophyton rubrum, las
aspártico-proteinasas, la fosfolipasa D, la
fosfolipasa B de Candida y las
2,3-oxidoescualeno-ciclasas, como
el
22,23-epoxi-2-aza-2,3-dihidroescualeno
(EAS) y el alcohol azaescualénico (ASA). Se encontrará una lista
más completa a modo de ejemplos no limitativos de organismos
eucariotas en "Textbook of Dermatology", ed. RH Champion, JL
Burton, DA Burns y SM Breathnach, sexta edición, 1998, Blackwell
Science LtD ISBN
0-632-03796-2.
Más en general según la invención, los siRNA son
seleccionados y/o asociados según el efecto previsto por vía
tópica. Se concibe fácilmente con el estado de la técnica la
utilización de un método molecular de cribado de los ARN mensajeros
inducidos y/o reprimidos por un farmacóforo o por una causa de
efectos indeseables (método de las matrices de ADN) para determinar
la elección y el ensamblaje de los siRNA correspondientes al efecto
que se ha de obtener y/o impedir.
Los dsRNA utilizados serán seleccionados para
una utilización tópica específica, con cualquier método de biología
molecular conveniente y tal como se hace para cualquier ARN
mensajero en particular según su estructura primaria. Los ARNm de
las dianas biológicas de interés en cosmética pueden ser, a modo de
ejemplo y esto en una lista no limitativa, los de: la tirosinasa,
la TRP-1, la elastasa, la hialuronidasa, la
metaloproteasa, la
Hmo-CoA-reductasa, la 5
\alpha-reductasa, la SCCE, la
NO-sintasa o la urokinasa, el ARNm de proteínas
epidérmicas....
En un ejemplo de realización de la invención, se
utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
tirosinasa.
En particular, el oligonucleótido de ARN de
doble hélice es tal que su hebra 5' sentido tiene por secuencia la
SEC. ID. nº 1: 5'-UGCACCACUUGGGCCUCAAdTdT y su hebra
5' antisentido tiene por secuencia la SEC. ID. nº 2:
5'-UUGAGGCCCAAGUGGUGCAdTdT.
La utilización según la invención puede también
incluir un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir
la expresión de un ARN mensajero codificante de la
TRP-1 (tyrosinase related protein 1).
Tales utilizaciones por vía tópica están
adaptadas a la despigmentación y/o al blanqueamiento de la piel y/o
de las faneras.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la enzima
elastasa neutrofílica.
En particular, el oligonucleótido de ARN de
doble hélice es tal que su hebra 5' sentido tiene por secuencia la
SEC. ID. nº 3: 5'-CGGCUACGACCCCGUAAACdTdT y su hebra
5' antisentido tiene por secuencia la SEC. ID. nº 4:
5'-GUUUACGGGGUCGUAGCCGdTdT.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
prevenir y/o a luchar contra los signos del envejecimiento cutáneo,
tales como la pérdida de firmeza y/o de flexibilidad de la piel y/o
la atrofia de la piel y/o la formación de las arrugas y pequeñas
arrugas.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
hialuronidasa.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
prevenir y/o a luchar contra los signos del envejecimiento cutáneo,
tales como la pérdida de firmeza y/o de flexibilidad de la piel y/o
la atrofia de la piel y/o la formación de las arrugas y pequeñas
arrugas.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de una
metaloproteinasa.
Las metaloproteinasas (MMP) están especialmente
descritas en el artículo de Y. HEROUY y col., European Journal of
Dermatology, nº 3, vol. 10, Abril-Mayo de 2000, pp.
173-180.
La familia de las metaloproteinasas está así
constituida por varios grupos bien definidos basados en sus
semejanzas en términos de estructura y de especificidad de substrato
(véase Woessner J. F., Faseb Journal, vol. 5, 1991, 2145). Entre
estos grupos, se pueden citar las colagenasas destinadas a degradar
los colágenos fibrilares (MMP-1 o colagenasa
intersticial, MMP-8 o colagenasa de neutrófilos,
MMP-13 o colagenasa 3, MMP-18 o
colagenasa 4), las gelatinasas que degradan el colágeno de tipo IV o
cualquier forma de colágeno desnaturalizado (MMP-2
o gelatinasa A (72 kDa), MMP-9 o gelatinasa B (92
kDa)), las estromolisinas (MMP-3 o estromolisina 1,
MMP-10 o estromolisina 2, MMP-11 o
estromolisina 3) cuyo amplio espectro de actividad se dirige a las
proteínas de la matriz extracelular, tales como las glicoproteínas
(fibronectina, laminina), los proteoglicanos, etc., la matrilisina
(MMP-7), la metaloelastasa (MMP-12)
o también las metaloproteinasas de membrana (MMP-14,
MMP-15, MMP-16 y
MMP-17).
Las metaloproteinasas (MMP) son los miembros de
una familia de enzimas proteolíticas (endoproteasas) que poseen un
átomo de zinc coordinado con 3 residuos de cisteína y una metionina
en su sitio activo y que degradan los componentes macromoleculares
de la matriz extracelular y de las láminas basales a pH neutro
(colágeno, elastina, etc....). Muy ampliamente extendidas en el
mundo vivo, estas enzimas están presentes, aunque se expresan
débilmente, en situaciones fisiológicas normales, como el
crecimiento de los órganos y la renovación de los tejidos. Su
sobreexpresión en el hombre y su activación están, sin embargo,
ligadas a numerosos procesos que implican la destrucción y el
remodelado de la matriz. Ello conlleva, por ejemplo, una resorción
no controlada de la matriz extracelular.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
prevenir y/o a luchar contra los signos del envejecimiento cutáneo,
tales como la pérdida de firmeza y/o de flexibilidad de la piel y/o
la atrofia de la piel y/o la formación de las arrugas y pequeñas
arrugas; están igualmente adaptadas a una utilización destinada a
inducir y/o estimular el crecimiento del cabello y/o de los pelos
y/o a frenar su caída.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
HMG-CoA-reductasa.
En particular, el oligonucleótido de ARN de
doble hélice es tal que su hebra 5' sentido tiene por secuencia la
SEC. ID. nº 5: 5'-AGCCGCGAGGGUCGUCCAAdTdT y su hebra
5' antisentido tiene por secuencia la SEC. ID. nº 6:
5'-UUGGACGACCCUCGCGGCUdTdT.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
prevenir y/o luchar contra la producción excesiva de sebo o de
sudor a nivel de las axilas o de los pies.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
5\alpha-reductasa de tipo I y/o de tipo II, y
preferiblemente la 5\alpha-reductasa de tipo
I.
En particular, el oligonucleótido de ARN de
doble hélice es tal que su hebra 5' sentido tiene por secuencia la
SEC. ID. nº 7: 5'-CUGCAUCCUCCUGGCCAUGdTdT y su hebra
5' antisentido tiene por secuencia la SEC. ID. nº 8:
5'-CAUGGCCAGGAGGAUGCAGdTdT.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
tratar los trastornos andrógeno-dependientes, en
particular a tratar la hiperseborrea y/o el acné y/o a inducir y/o
estimular el crecimiento del cabello y/o de los pelos y/o a frenar
la caída del cabello.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
calmodulin-like skin protein (CLSP).
En particular, el oligonucleótido de ARN de
doble hélice es tal que su hebra 5' sentido tiene por secuencia la
SEC. ID. nº 9: 5'-GGCUUUCUCCGCGGUUGACdTdT y su hebra
5' antisentido tiene por secuencia la SEC. ID. nº 10:
5'-GUCAACCGCGGAGAAAGCCdTdT.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
luchar contra los signos del envejecimiento cutáneo y/o a luchar
contra los efectos nefastos de las radiaciones ultravioletas y/o a
tratar las pieles secas.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
NO-sintasa.
Tal utilización por vía tópica está destinada a
inhibir la diferenciación y/o la proliferación celular y/o a
inhibir la degradación y/o la destrucción de las células de la piel
y así luchar contra el envejecimiento intrínseco y/o extrínseco y/o
frenar la caída del cabello. Estas composiciones están igualmente
adaptadas al tratamiento de las pieles sensibles y de los eritemas,
en particular fotoinducidos.
En otro ejemplo de realización de la invención,
se utilizará un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de una
serina-proteasa, tal como la urokinasa. Las
composiciones de este tipo estarán particularmente adaptadas al
tratamiento cosmético y al mejoramiento del aspecto de las pieles
secas y/o irritadas.
En otros ejemplos de realización de la
invención, se podrá utilizar un oligonucleótido de ARN de doble
hélice capaz de inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante
de:
- la IL1 por sus aplicaciones en el campo de las
pieles sensibles,
- la 5\alpha-reductasa por sus
aplicaciones en el campo de las pieles grasas,
- una lipasa bacteriana por sus aplicaciones
destinadas a luchar contra la formación de caspa, o también
- la lox12 y/o la cox2 y/o la IL1 y/o el
TGF\beta1 por aplicaciones destinadas a luchar contra la caída
del cabello.
Para la utilización según la invención, el
oligonucleótido de ARN de doble hélice podrá estar presente en una
composición a una concentración comprendida entre el 5.10^{-7} y
el 5%, preferentemente entre el 0,0001 y el 1%, de
oligonucleótido(s) de ARN de doble hélice en peso con
respecto al peso total de la composición.
Tal composición puede presentarse bajo todas las
formas galénicas normalmente utilizadas para este tipo de
aplicación, especialmente en forma de solución acuosa u oleosa, de
emulsión de aceite-en-agua o de
agua-en-aceite o múltiple, de
emulsión siliconada, de micro-emulsión o
nanoemulsión, de gel acuoso u oleoso o de producto anhidro líquido,
pastoso o sólido.
En otro de sus objetos, la presente invención se
relaciona con una composición destinada a ser aplicada tópicamente
que contiene, en un medio fisiológicamente aceptable, un
oligonucleótido de ARN de doble hélice encapsulado.
En un modo de realización preferido según la
invención, la composición es tal que el oligonucleótido de ARN de
doble hélice está encapsulado en el corazón o en la pared de un
revestimiento tal como microesferas, nanoesferas, oleosomas,
niosomas o nanocápsulas.
Los oligonucleótidos de ARN de doble hélice a
una concentración molar eficaz en una solución acuosa pueden
acomplejarse con una polietilenimina (PEI) de un peso molecular de
200 a 100.000 g/M. La naturaleza de la PEI y su proporción del
10^{-4} al 1% van en función del tipo de solución acuosa inicial
que contiene los oligonucleótidos de ARN de doble hélice y de la
formulación cosmética contemplada. La acomplejación podrá ser
objetivada por la opalescencia de la solución inicial.
Una vez realizada la acomplejación, se encapsula
este complejo en partículas con núcleo acuoso, como niosomas, o se
acompleja en la superficie de vesículas que tienen una superficie
lamelar que contiene un polímero o un tensioactivo lipófilo
catiónico, como por ejemplo las PEI hidrofóbicas.
Así, el oligonucleótido de ARN de doble hélice
puede:
- o bien acomplejarse con un policatión (por
ejemplo, una PEI hidrofílica o quitosano);
A modo de ejemplo, se podrán seleccionar los
policationes derivados de
poli(4-vinilpirridina) (Modulation of
interaction of polycations with negative unilamellar lipid vesicles,
de Yaroslavov y col., en Colloids and surfaces B: Biointerfaces 16
(1999), 29-43); los polímeros y copolímeros de
lisina (citados en Turbidometric analysis of polyelectrolyte
complexes formed between poly(L-lysine) and
DNA, de Ward y col., en Colloids and surfaces B: Biointerfaces 16
(1999), 253-260); los copolímeros de
vinilpirrolidina y de vinilimidazol cuaternizados, tales como los
Luviquat de BASF (PM entre 1.000 y 1.000.000); los copolímeros a
base de cloruro de dialildimetilamonio, tales como los Merquat de
BASF (PM entre 10.000 y 10.000.000); las poliglucosaminas como el
quitosano y sus derivados; las poliaminas tales como la
polietilenimina, hidrofóbicas o no; los derivados de guares, como
por ejemplo los Jaguar de Rhodia; los derivados de celulosa
catiónicos, tales como los Celquat de National Starch o los
Quarisoft de Amerchol; los copolímeros de vinilpirrolidona y de
dimetilaminopropilmetacrilamida, como los Gafquat de ISP; los
derivados catiónicos del ácido acrílico, como el HYPAN QT 100 de
Kingston; los Salcare SC92, SC95 y 96 de Allied Colloids;, el
Plex4739L de Rohm Gmbh; los derivados de diuretano y poliuretano,
tales como el Polyderme PPI-SA, el Foamox
PPI-SA, el Foamtaine PPI-SA15 y el
Foamquat PPI-SA de Alzo; y las copoliaminas, como
el Polyquart H-81 de Henkel;
- se puede encapsular entonces este complejo en
partículas de núcleo acuoso, como los liposomas y en particular los
niosomas (véase la solicitud de patente EP 0.582.503 o la patente
EE.UU. 5.439.672);
- o bien acomplejarse en la superficie de
vesículas que tienen una superficie lamelar que contiene un polímero
o un tensioactivo lipofílico catiónico.
En este último caso, los tensioactivos
lipofílicos catiónicos pueden ser más particularmente seleccionados
entre el grupo formado por las sales de amonio cuaternario, las
aminas grasas y sus sales.
Las sales de amonio cuaternario son, por
ejemplo:
donde los radicales R_{1} a
R_{4}, que pueden ser idénticos o diferentes, representan un
radical alifático lineal o ramificado de 1 a 30 átomos de carbono o
un radical aromático, tal como arilo o alquilarilo. Los radicales
alifáticos pueden llevar heteroátomos tales como especialmente el
oxígeno, el nitrógeno, el azufre o los halógenos. Los radicales
alifáticos son, por ejemplo, seleccionados entre los radicales
alquilo, alcoxi,
polioxialquileno(C_{2}-C_{6}),
alquilamida,
alquil(C_{12}-C_{22})amidoalquilo(C_{2}-C_{6}),
alquil(C_{12}-C_{22})acetato o
hidroxialquilo que llevan aproximadamente de 1 a 30 átomos de
carbono; X es un anión seleccionado entre el grupo de los haluros,
fosfatos, acetatos, lactatos,
alquil(C_{2}-C_{6})sulfatos y
alquil- o alquil-aril- sulfonatos. Como sales de
amonio cuaternario de fórmula (II), se prefieren, por una parte, los
cloruros de tetraalquilamonio, como por ejemplo los cloruros de
dialquildimetilamonio o de alquiltrimetilamonio, en los cuales el
radical alquilo lleva aproximadamente de 12 a 22 átomos de carbono,
en particular los cloruros de beheniltrimetilamonio, de
diestearildimetilamonio, de cetiltrimetilamonio o de
bencildimetilestearilamonio, o también, por otra parte, el cloruro
de estearamidopropildimetil(miristilacetato)amonio
vendido bajo la denominación "CERAPHYL 70" por la sociedad VAN
DYK.
(2) Las sales de amonio cuaternario del
imidazolinio, como por ejemplo las de las fórmula siguiente:
en la cual R_{5} representa un
radical alquenilo o alquilo de 8 a 30 átomos de carbono, por ejemplo
derivado de los ácidos grasos del sebo; R_{6} representa un átomo
de hidrógeno, un radical alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o un
radical alquenilo o alquilo de 8 a 30 átomos de carbono; R_{7}
representa un radical alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R_{8}
representa un átomo de hidrógeno o un radical alquilo de 1 a 4
átomos de carbono; X es un anión seleccionado entre el grupo de los
haluros, fosfatos, acetatos, lactatos, alquilsulfatos o alquil- o
alquilaril- sulfonatos. Preferentemente, R_{5} y R_{6} designan
una mezcla de radicales alquenilo o alquilo de 12 a 21 átomos de
carbono, por ejemplo derivados de los ácidos grasos del sebo,
R_{7} designa un radical metilo y R_{8} designa hidrógeno. Tal
producto es, por ejemplo, vendido bajo la denominación "REWOQUAT
W 75" por la sociedad
REWO.
(3) Las sales de diamonio cuaternario de
fórmula:
en la cual R_{9} designa un
radical alifático que lleva aproximadamente de 16 a 30 átomos de
carbono; R_{10}, R_{11}, R_{12}, R_{13} y R_{14} son
seleccionados entre hidrógeno o un radical alquilo de 1 a 4 átomos
de carbono, y X es un anión seleccionado entre el grupo de los
haluros, acetatos, fosfatos, nitratos y metilsulfatos. Tales sales
de diamonio cuaternario incluyen especialmente el dicloruro de
propanosebodiamonio.
\newpage
El oligonucleótido de ARN de doble hélice puede
también acomplejarse en la superficie de glóbulos oleosos
catiónicos, sea cual sea su tamaño (véanse las solicitudes de
patente EP 1.010.413, EP 1.010.414, EP 1.010.415, EP 1.010.416, EP
1.013.338, EP 1.016.453, EP 1.018.363, EP 1.020.219, EP 1.025.898,
EP 1.120.101, EP 1.120.102, EP 1.129.684, EP 1.160.005 y EP
172.077).
El oligonucleótido de ARN de doble hélice puede
también acomplejarse en la superficie de nanocápsulas o
nanopartículas provistas de un recubrimiento lamelar (véanse EP
0.447.318 y EP 0.557.489) y que contienen un tensioactivo catiónico
en la superficie (véanse las referencias citadas anteriormente para
los tensioactivos catiónicos).
En particular, las vesículas preferidas según la
presente invención son:
- los niosomas descritos en la patente EP
0.582.503;
- las esférulas de lípidos cuyo método de
síntesis está descrito en la patente EE.UU. 5.021.200;
- los niosomas de
aceite-en-agua descritos en la
patente EE.UU. 5.489.426;
- las nanoemulsiones propuestas en la patente EP
0.879.589.
\vskip1.000000\baselineskip
Se utilizarán preferiblemente los lípidos
siguientes: la PEI convertida en hidrofóbica por injertación de
cadenas de alquilo C_{10} a C_{22} (de un 5 a un 50%),
insaturadas o no, ramificadas o no, la estearilamina o el cloruro
de beheniltriamonio.
Se preferirán más particularmente las vesículas
que tienen un diámetro inferior o igual a 2 \mum y
preferiblemente comprendido entre 50 nm y 1 \mum.
Se pueden utilizar igualmente métodos físicos de
administración intracutánea, como un sistema de propulsión gaseosa
o un parche de microagujas.
En la figura 1, que representa un parche de
microagujas, los minidardos (conos) tienen una altura
correspondiente a la profundidad a la cual debe llegar el dsRNA
encapsulado en una vesícula (epidermis superficial, epidermis
profunda, dermis superficial...). El tamaño del parche puede, por
ejemplo, estar adaptado a la superficie de una marca pigmentaria o
de una arruga.
De un modo más detallado, la composición
destinada a ser aplicada tópicamente puede ser más o menos fluida y
tener el aspecto de una crema blanca o coloreada, de una pomada, de
una leche, de una loción, de un suero, de una pasta, de una espuma
o de un gel. Puede ser eventualmente aplicada sobre la piel en forma
de aerosol. Puede también presentarse en forma sólida, y por
ejemplo en forma de barra. Puede ser utilizada como producto de
cuidado y/o como producto de maquillaje de la piel.
Así, la composición según la invención podrá
contener, además del oligonucleótido de ARN de doble hélice, al
menos un principio activo seleccionado entre: los
\alpha-hidroxiácidos; el ácido salicílico y sus
derivados, tales como el ácido
5-n-octanoilsalicílico; el HEPES; la
procisteína; la
O-octanoil-6-D-maltosa;
la sal disódica de ácido metilglicinodiacético; las ceramidas; los
esteroides tales como la diosgenina y los derivados de la DHEA; el
ácido cójico; el
N-etiloxicarbonil-4-paraamino-fenol;
el ácido ascórbico y sus derivados; los extractos de arándano; los
retinoides, y en particular el retinol y sus ésteres; los
polipéptidos y sus derivados acilados; las fitohormonas; los
extractos de levadura Saccharomyces cerevisiae; los extractos
de algas; los extractos de Vitreoscilla filiformis; los
extractos de soja, de altramuz, de maíz y/o de guisante; la
alverina y sus sales, en particular el citrato de alverina; el
resveratrol; los carotenoides y en particular el licopeno; el
tocoferol y sus ésteres; la coenzima Q10 o ubiquinona; las xantinas
y en particular la cafeína y los extractos naturales que la
contienen; los extractos de rusco y de castaño de Indias; y sus
mezclas, sin que esta lista sea limitativa.
La composición según la invención puede además
contener al menos un filtro UVA y/o UVB. Los filtros solares pueden
ser seleccionados entre los filtros orgánicos, los filtros
inorgánicos y sus mezclas.
Como ejemplos de filtros orgánicos activos en el
UV-A y/o el UV-B, se pueden citar
especialmente, designados a continuación por su nombre CTFA:
- los derivados del ácido paraaminobenzoico:
PABA, etil-PABA,
etildihidroxipropil-PABA,
etilhexildimetil-PABA, vendido especialmente bajo
la denominación "ESCALOL 507" por ISP,
gliceril-PABA y
PEG-25-PABA, vendido bajo la
denominación "UVINUL P25" por BASF;
- los derivados salicílicos: homosalato, vendido
bajo la denominación "EUSOLEX HMS" por RONA/EM INDUSTRIES,
salicilato de etilhexilo, vendido bajo la denominación "NEO
HELIOPAN OS" por HAARMANN & REIMER, salicilato de
dipropilenglicol, vendido bajo la denominación "DIPSAL" por
SCHER, y salicilato de TEA, vendido bajo la denominación "NEO
HELIOPAN TS" por HAARMANN & REIMER;
\global\parskip0.970000\baselineskip
- los derivados del dibenzoilmetano:
butilmetoxidibenzoilmetano, vendido especialmente bajo la
denominación comercial "PARSOL 1789" por HOFFMANN LA ROCHE, e
isopropildibenzoilmetano;
- los derivados cinámicos: metoxicinamato de
etilhexilo, vendido especialmente bajo la denominación comercial
"PARSOL MCX" por HOFFMANN LA ROCHE, metoxicinamato de
isopropilo, metoxicinamato de isoamilo, vendido bajo la
denominación comercial "NEO HELIOPAN E 1000" por HAARMANN &
REIMER, cinoxato, metoxicinamato de DEA, metilcinamato de
diisopropilo y etilhexanoato dimetoxicinamato de glicerilo;
- los derivados de
\beta,'-difenilacrilato: octocrileno, vendido
especialmente bajo la denominación comercial "UVINUL N539" por
BASF, y etocrileno, vendido especialmente bajo la denominación
comercial "UVINUL N35" por BASF;
- los derivados de la benzofenona:
benzofenona-1, vendida bajo la denominación
comercial "UVINUL 400" por BASF,
benzofenona-2, vendida bajo la denominación
comercial "UVINUL D50" por BASF, benzofenona-3
u oxibenzona, vendida bajo la denominación comercial "UVINUL
M40" por BASF, benzofenona-4, vendida bajo la
denominación comercial "UVINUL MS40" por BASF,
benzofenona-5, benzofenona-6,
vendida bajo la denominación comercial "HELISORB 11" por
NORQUAY, benzofenona-8, vendida bajo la denominación
comercial "SPECTRA-SORB UV-24"
por AMERICAN CYANAMID, benzofenona-9, vendida bajo
la denominación comercial "UVINUL DS-49" por
BASF, y benzofenona-12;
- los derivados del bencilidenalcanfor:
3-bencilidenalcanfor,
4-metilbencilidenalcanfor, vendido bajo la
denominación "EUSOLEX 6300" por MERCK, ácido
bencilidenalcanforsulfónico, metosulfato de alcanforbenzalconio,
ácido tereftalilidendialcanforsulfónico y
poli-acrilamidometilbencilidenalcanfor;
- los derivados del fenilbencimidazol: ácido
fenilbencimidazolsulfónico, vendido especialmente bajo la
denominación comercial "EUSOLEX 232" por MERCK, y
bencimidacilato, vendido bajo la denominación comercial "NEO
HELIOPAN AP" por HAARMANN & REIMER;
- los derivados de la triazina: anisotriazina,
vendida bajo la denominación comercial "TINOSORB S" por CIBA
GEIGY, etilhexiltriazona, vendida especialmente bajo la denominación
comercial "UVINUL T150" por BASF, y
dietilhexilbutamidotriazona, vendida bajo la denominación comercial
"UVASORB HEB" por SIGMA 3V;
- los derivados del fenilbenzotriazol:
drometrizol trisiloxano, vendido bajo la denominación
"SILATRIZOLE" por RHODIA CHIMIE;
- los derivados antranílicos: antranilato de
mentilo, vendido bajo la denominación comercial "NEO HELIOPAN
MA" por HAARMANN & REIMER;
- los derivados de imidazolinas:
dimetoxibencilidendioxoimidazolinopropionato de etilhexilo;
- los derivados del benzalmalonato:
poliorganosiloxano con funciones benzalmalonato, vendido bajo la
denominación comercial "PARSOL SLX" por HOFFMANN LA ROCHE;
- y sus mezclas.
Los filtros UV orgánicos más particularmente
preferidos son seleccionados entre los compuestos siguientes:
- Salicilato de etilhexilo,
- Butilmetoxidibenzoilmetano,
- Metoxicinamato de etilhexilo,
- Octocrileno,
- Ácido fenilbencimidazolsulfónico,
- Ácido tereftalilidendialcanforsulfónico,
- Benzofenona-3,
- Benzofenona-4,
- Benzofenona-5,
- 4-Metilbencilidenalcanfor,
- Bencimidacilato,
\global\parskip1.000000\baselineskip
- Anisotriazina,
- Etilhexiltriazona,
- Dietilhexilbutamidotriazona,
-
Metilenbisbenzotriazoliltetrametilbutilfenol,
- Drometrizol trisiloxano
- y sus mezclas.
Los filtros inorgánicos utilizables en la
composición según la invención son, en particular, los nanopigmentos
(tamaño medio de las partículas primarias: generalmente entre 5 nm
y 100 nm, preferentemente entre 10 nm y 50 nm) de óxidos metálicos
recubiertos o no, como por ejemplo nanopigmentos de óxido de titanio
(amorfo o cristalizado en forma de rutilo y/o anatasa), de hierro,
de zinc, de zirconio o de cerio. Son agentes de recubrimiento, por
otra parte, la alúmina y/o el estearato de aluminio. Tales
nanopigmentos de óxidos metálicos, recubiertos o no recubiertos,
están en particular descritos en las solicitudes de patentes
EP-A-0.518.772 y
EP-A-0.518.773.
De forma conocida, la composición de la
invención puede contener igualmente los adyuvantes habituales en
los ámbitos cosmético y dermatológico, tales como los gelificantes
hidrofílicos o lipofílicos, los conservantes, los antioxidantes,
los solventes, los tensioactivos, los espesantes, los perfumes, las
cargas, los pigmentos, los absorbentes de olor y las materias
colorantes. Las cantidades de estos diferentes adyuvantes son las
clásicamente utilizadas en los ámbitos considerados, y por ejemplo
de un 0,01 a un 20% del peso total de la composición. Estos
adyuvantes, según su naturaleza, pueden ser introducidos en la fase
grasa o en la fase acuosa. Estos adyuvantes, así como sus
concentraciones, deben ser tales que no alteren las propiedades
ventajosas del ácido panteteinosulfónico o de sus sales.
Cuando la composición de la invención es una
emulsión, la proporción de la fase grasa puede ir del 5% al 80% en
peso y preferentemente del 5% al 50% del peso total de la
composición. Los aceites, los emulsionantes y los coemulsionantes
utilizados en la composición en forma de emulsión son seleccionados
entre los clásicamente utilizados en el ámbito considerado. El
emulsionante y el coemulsionante están presentes en la composición
en una proporción que va del 0,3% al 30% en peso y preferentemente
del 0,5% al 20% del peso total de la composición.
Como aceites utilizables en la composición de la
invención, se pueden citar, por ejemplo:
- los aceites hidrocarbonados de origen animal,
tales como el perhidroescualeno;
- los aceites hidrocarbonados de origen vegetal,
tales como los triglicéridos líquidos de ácidos grasos de 4 a 10
átomos de carbono y la fracción líquida de la manteca de karité;
- los ésteres y los éteres de síntesis,
especialmente de ácidos grasos, como los aceites de fórmulas
R^{1}COOR^{2} y R^{1}OR^{2}, en donde R^{1} representa el
resto de un ácido graso de 8 a 29 átomos de carbono y R^{2}
representa una cadena hidrocarbonada, ramificada o no, de 3 a 30
átomos de carbono, como por ejemplo el aceite de Purcellin, el
isononanoato de isononilo, el miristato de isopropilo, el palmitato
de 2-etilhexilo, el estearato de
2-octildodecilo, el erucato de
2-octildodecilo y el isoestearato de isoestearilo;
los ésteres hidroxilados, como el lactato de isoestearilo, el
hidroxiestearato de octilo, el hidroxiestearato de octildodecilo, el
malato de diisoestearilo, el citrato de triisocetilo y los
heptanoatos, octanoatos y decanoatos de alcoholes grasos; los
ésteres de poliol, como el dioctanoato de propilenglicol, el
diheptanoato de neopentilglicol y el diisononanoato de
dietilenglicol; y los ésteres del pentaeritritol, como el
tetraisoestearato de pentaeritritilo;
- los hidrocarburos lineales o ramificados de
origen mineral o sintético, tales como los aceites de parafina,
volátiles o no, y sus derivados, la vaselina, los polidecenos y el
poliisobuteno hidrogenado, tal como el aceite de Parleam;
- los alcoholes grasos de 8 a 26 átomos de
carbono, como el alcohol cetílico, el alcohol estearílico y su
mezcla (alcohol cetilestearílico), el octildodecanol, el
2-butiloctanol, el 2-hexildecanol,
el 2-undecil-pentadecanol, el
alcohol oleico o el alcohol linoleico;
- los aceites fluorados parcialmente
hidrocarbonados y/o siliconados, como los descritos en el documento
JP-A-2-295.912;
- los aceites de silicona, como los
polimetilsiloxanos (PDMS) volátiles o no de cadena siliconada lineal
o cíclica, líquidos o pastosos a temperatura ambiente,
especialmente los ciclopolidimetilsiloxanos (ciclometiconas), tales
como el ciclohexasiloxano; los polidimetilsiloxanos que llevan
grupos alquilo, alcoxi o fenilo pendientes o en el extremo de la
cadena siliconada, grupos que tienen de 2 a 24 átomos de carbono;
las siliconas feniladas, como las feniltrimeticonas, las
fenildimeticonas, los feniltrimetilsiloxidifenilsiloxanos, las
difenildimeticonas, los difenilmetildifeniltrisiloxanos, los
2-feniletiltrimetilsiloxisilicatos y los
polimetilfenilsiloxanos;
- sus mezclas.
Como emulsionantes y coemulsionantes utilizables
en la invención, se pueden citar, por ejemplo, los emulsionantes
Ac/Ag, tales como los ésteres de ácido graso y de polietilenglicol,
especialmente el estearato de PEG-100, y los
ésteres de ácido graso y de glicerina, tales como el estearato de
glicerilo, así como los emulsionantes Ag/Ac, tales como el
poli(metilcetil)(dimetil)me-tilsiloxano
oxietilenado disponible bajo la denominación comercial ABIL WE09 de
la sociedad Degussa Goldschmidt, o la mezcla de acetilestearato de
etilenglicol y de triestearato de glicerilo comercializada por la
sociedad Guardian bajo la denominación comercial UNITWIX.
Como gelificantes hidrofílicos, se pueden citar
en particular los polímeros carboxivinílicos (carbómeros), los
copolímeros acrílicos tales como los copolímeros de
acrilatos/alquilacrilatos, las poliacrilamidas, los polisacáridos,
las gomas naturales y las arcillas, y, como gelificantes
lipofílicos, se pueden citar las arcillas modificadas, como las
bentonas, las sales metálicas de ácidos grasos, la sílice
hidrofóbica y los polietilenos.
Como cargas que pueden ser utilizadas en la
composición de la invención, se pueden citar, por ejemplo, aparte
de los pigmentos, el polvo de sílice; el talco; el almidón
entrecruzado por anhídrido octenilsuccínico comercializado por la
sociedad National Starch bajo la denominación DRY FLO PLUS
(28-1160); las partículas de poliamida, y
especialmente las vendidas bajo la denominación ORGASOL por la
sociedad Atochem; los polvos de polietileno; las microesferas a
base de copolímeros acrílicos, tales como las de copolímero de
dimetacrilato de etilenglicol/metacrilato de laurilo vendidas por
la sociedad Dow Corning bajo la denominación de POLYTRAP; los
polvos expandidos, tales como las microesferas huecas y
especialmente las microesferas comercializadas bajo la denominación
EXPANCEL por la sociedad Kemanord Plast o bajo la denominación
MICROPEARL F 80 ED por la sociedad Matsumoto; las microperlas de
resina de silicona, tales como las comercializadas bajo la
denominación TOSPEARL por la sociedad Toshiba Silicone; y sus
mezclas. Estas cargas pueden estar presentes en cantidades del 0 al
20% en peso y preferentemente del 1 al 10% en peso con respecto al
peso total de la composición o de la preparación según la
invención.
El experto en la técnica velará por utilizar
ingredientes y principios activos que no afecten a la actividad de
los oligonucleótidos de ARN de doble hélice presentes en las
composiciones según la invención.
Otro objeto de la invención se relaciona con un
procedimiento de tratamiento cosmético consistente en la aplicación
tópica sobre una zona que se ha de tratar de una composición que
contiene, en un medio fisiológicamente aceptable, al menos un
oligonucleótido de ARN de doble hélice tal como se ha definido
anteriormente. Ventajosamente, la composición será aplicada sobre
la piel y/o el cuero cabelludo y/o las faneras, de forma única o
repetida en el tiempo.
Podrá tratarse de un procedimiento de
despigmentación y/o de blanqueamiento de la piel o de las faneras
caracterizado por aplicar sobre la zona que se ha de tratar una
composición según la invención, en particular una composición que
contiene un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir
la expresión de un ARN mensajero codificante de la tirosinasa y/o
un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir la
expresión de un ARN mensajero codificante de la
TRP-1.
La invención se relaciona también con un
procedimiento de tratamiento cosmético para prevenir y/o luchar
contra los signos cutáneos del envejecimiento, caracterizado por
aplicar sobre la zona que se ha de tratar una composición que
contiene un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir
la expresión de un ARN mensajero codificante de la elastasa de
neutrófilos y/o un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de
inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
hialuronidasa y/o un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz
de inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de una
metaloproteinasa y/o un oligonucleótido de ARN de doble hélice
capaz de inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
HMG-CoA-reductasa y/o un
oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir la expresión
de un ARN mensajero codificante de la
calmodulin-like skin protein (CLSP) y/o un
oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir la
expresión de un ARN mensajero codificante de la
NO-sintasa.
La invención se relaciona igualmente con un
procedimiento de tratamiento cosmético para inducir y/o estimular
el crecimiento del cabello y/o de los pelos y/o para frenar la caída
del cabello, caracterizado por aplicar sobre la zona que se ha de
tratar una composición que contiene un oligonucleótido de ARN de
doble hélice capaz de inhibir la expresión de un ARN mensajero
codificante de una metaloproteinasa y/o un oligonucleótido de ARN
de doble hélice capaz de inhibir la expresión de un ARN mensajero
codificante de la 5\alpha-reductasa tipo I o II
y/o un oligonucleótido de ARN de doble hélice capaz de inhibir la
expresión de un ARN mensajero codificante de la
NO-sintasa.
Los ejemplos siguientes están destinados a
ilustrar la invención. En estos ejemplos, se hará referencia a las
figuras siguientes:
- Figura 1: representa un parche de microagujas
que puede ser utilizado para la administración de oligonucleótidos
de ARN de doble hélice.
- Figura 2: extinción específica de la expresión
de la tirosinasa en los melanocitos humanos (MeWo) por ARN de
interferencia.
Las condiciones experimentales son las descritas
por Tuschl y col. (Journal of Cell Science 2001, 114,
4557-4565).
Se siembran los melanocitos (células MeWo) 24 h
antes de la transfección a razón de 40.000 células/pocillo en una
placa de 24 pocillos en 500 \mul de medio DMEM + 10% de suero. Por
pocillo, se utilizan 0,84 \mug o 2,52 \mug de siRNA dicatenario
(véase la descripción que se da a continuación), o sea,
respectivamente 60 pmoles de siRNA-tirosinasa en 3
\mul de tampón de hibridación (Dharmacon) o 180 pmoles de
siRNA-tirosinasa en 9 \mul de tampón de
hibridación. Se diluyen 3 \mul o 9 \mul de siRNA
dicatenario-tirosinasa 20 \muM en 50 \mul de
Opti-MEM (Gibco). En otro tubo, se diluyen 3 \mul
de oligofectamina (Invitrogen) en 12 \mul de
Opti-MEM y se incuban durante 10 minutos a
temperatura ambiente. Se mezclan las dos soluciones y se incuban
durante 20 minutos a temperatura ambiente antes de depositarlas
sobre las células. Se incuban entonces las células durante 96 h a
37ºC con un cambio de medio después de 24 h y se lisan después en un
tampón que contiene 10 mM de Tris-HCl pH 7,2, 2% de
SDS, 1% de Tritón X-100, 10% de glicerol + 1% de
inhibidor de proteasas. Se depositan 34 \mug de proteínas por
pocillo sobre gel de poliacrilamida (geles NuPAGE Novex
bis-Tris, Invitrogen), se separan por
electroforesis y se transfieren por Western Blot según las
instrucciones del proveedor. Se analiza la presencia de tirosinasa
sobre la membrana por hibridación con un anticuerpo antitirosinasa
diluido a 1/500 (NCL-TYR, Novocastra) y se
controla la cantidad proteica depositada por hibridación con un
anticuerpo antivimentina diluido a 1/40.000 (clon VIM3B4, Cymbus
Biotechnologies). Se aclara la membrana en
PBS-Tween 20 y se hibrida con un anticuerpo
secundario antirratón copulado a peroxidasa (Goat
anti-mouse-HRP, Dako) diluido a
1/2.000. Se realiza la detección con ayuda del kit "ECL Plus
western blotting detection system" según las instrucciones del
proveedor (Amersham).
Se seleccionan los siRNA dicatenarios siguientes
a partir de la secuencia codificante del ADNc de la tirosinasa
humana (Número de acceso M27160). El número adyacente corresponde a
la posición sobre la secuencia nucleica del 1º nucleótido. Son
sintetizados por Dharmacon o a partir de oligonucleótidos de ADN
suministrados por Proligo y se transcriben a ARN con ayuda del kit
"siRNA construction Kit" (Ambion) según las instrucciones del
proveedor. Los 7 dicatenarios que comprenden una hebra sentido de
ARN y una hebra antisentido de ARN están constituidos por las
secuencias siguientes, donde AUG son bases ribonucleicas y dT una
base desoxirribonucleica:
\bullet siRNA-TYR266
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 1):
UGCACCACUUGGGCCUCAAdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 2):
UUGAGGCCCAAGUGGUGCAdTdT
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet siRNA-TYR359
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 11):
AAGUGUUUGAUGCUGGAGGdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 12):
CCUCCAGCAUCAAACACUUdTdT
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet siRNA-TYR690
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 13):
GCACCAGCUUUUCUGCCUUdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 14):
AAGGCAGAAAAGCUGGUGCdTdT
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet siRNA-TYR832
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 15):
ACUGCACAGAGAGACGACUdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 16):
AGUCGUCUCUCUGUGCAGUdTdT
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet siRNA-TYR1110
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 17):
GCACCAGCUUUUCUGCCUUdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 18):
AAGGCAGAAAAGCUGGUGCdTdT
\newpage
\global\parskip0.800000\baselineskip
\bullet siRNA-TYR1578
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 19):
AGCAGCAUGCACAAUGCCUdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 20):
AGGCAUUGUGCAUGCUGCUdTdT
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet siRNA-TYR2120
dicatenario:
5' hebra sentido siRNA (SEC. ID. Nº 21):
AGCCUGACCUCACUCUAACdTdT
5' hebra antisentido siRNA (SEC. ID. Nº 22):
GUUAGAGUGAGGUCAGGCUdTdT
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados están representados en la figura
2.
Las bandas corresponden a los productos
siguientes:
L: escala de peso molecular
C: MeWo control
1: MeWo + siRNATYR266 0,84 \mug
2: MeWo + siRNATYR266 2,52 \mug
3: MeWo + siRNATYR359 0,84 \mug
4: MeWo + siRNATYR359 2,52 \mug
5: MeWo + siRNATYR690 0,84 \mug
6: MeWo + siRNATYR690 2,52 \mug
7: MeWo + siRNATYR832 0,84 \mug
8: MeWo + siRNATYR832 2,52 \mug
9: MeWo + siRNATYR1110 0,84 \mug
10: MeWo + siRNATYR1110 2,52 \mug
11: MeWo + siRNATYR1578 0,84 \mug
12: MeWo + siRNATYR1578 2,52 \mug
13: MeWo + siRNATYR2120 0,84 \mug
14: MeWo + siRNATYR2120 2,52 \mug
\vskip1.000000\baselineskip
Se verifica la extinción de la expresión de la
tirosinasa por Western blot. Parece que, en los 7 dicatenarios
seleccionados, 1 dicatenario es ineficaz (siRNA 359), 1 dicatenario
es poco eficaz (siRNA 1578) y los otros 5 dicatenarios son
funcionales, aparentemente con una gran eficacia para los
dicatenarios 1110 y 2120, como muestra la ausencia de detección de
la tirosinasa. Se inhibe así por "el ARN de interferencia" la
expresión de proteínas por células epidérmicas, por inhibidores
específicos de la tirosinasa.
Composición
1
Oligonucleótidos de ARN de doble hélice de SEC.
ID. nº 1 y SEC. ID. nº 2 con una proporción dsRNA/PEI comprendida
entre 0,1 y 1.000.
\vskip1.000000\baselineskip
- solubilización de los lípidos en una mezcla de
metanol/cloroformo;
- evaporación del solvente en el evaporador
rotativo a presión reducida para obtener una película lipídica;
- hidratación de la película bajo agitación por
ultrasonidos (US);
- control del diámetro de las vesículas (menos
de 1 \mum, preferentemente de 200 nm);
- adición de la solución de oligonucleótidos de
ARN de doble hélice.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incorporan entonces las vesículas en una
formulación cosmética adaptada a una aplicación tópica.
Una aplicación cotidiana preferentemente por la
noche de esta preparación permite la atenuación de las manchas
pigmentarias, y una aplicación regular y duradera da lugar a la
desaparición de estas manchas pigmentarias.
\vskip1.000000\baselineskip
Composición
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Solución acuosa A: agua destilada al 30%, PEI
(PM 200 a 100.000) al 1% y oligonucleótido de ARN de doble hélice
CSP. Solución acuosa B: agua destilada csp 100%
\vskip1.000000\baselineskip
Véase la preparación de la composición 1. En
este caso, se lleva a cabo la etapa de hidratación a una
temperatura adaptada a la mezcla lipídica y con la solución A en
agitación por ultrasonidos y se añade luego una etapa de dilución
con la solución acuosa B.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incorporan entonces las vesículas en una
formulación cosmética adaptada a una aplicación tópica.
Así, las composiciones 1 y 2 pueden ser luego
introducidas de un modo clásico para el experto en la técnica en la
formulación siguiente. Se identifican los ingredientes según la
nomenclatura CTFA.
Claims (7)
1. Utilización de al menos un oligonucleótido de
ARN de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº:
1, la SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID
Nº: 15, la SEC ID Nº: 16, la SEC ID Nº: 17, la SEC ID Nº: 18, la
SEC ID Nº: 19, la SEC ID Nº: 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22
para una aplicación por vía tópica para inhibir la expresión de una
proteína de la piel o de sus anejos, cuya proteína es la
tirosinasa.
2. Utilización según la reivindicación anterior,
caracterizada por ser el oligonucleótido una hebra simple de
ARN autocomplementario emparejado por replegamiento.
3. Composición tópica que contiene, en un medio
fisiológicamente aceptable, al menos un oligonucleótido de ARN de
doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº: 1, la SEC
ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15, la
SEC ID Nº: 16, la SEC ID Nº: 17, la SEC ID Nº: 18, la SEC ID Nº: 19,
la SEC ID Nº: 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22, que inhibe
la expresión de la tirosinasa, encapsulado en un recubrimiento.
4. Composición según la reivindicación 4,
caracterizada por seleccionar el recubrimiento entre las
microesferas, las nanoesferas, los oleosomas o las
nanocápsulas.
5. Composición según la reivindicación 4 ó 5,
caracterizada por tener el recubrimiento un diámetro inferior
o igual a 2 \mum.
6. Composición según una cualquiera de las
reivindicaciones 3 a 5, caracterizada por representar el o
los oligonucleótido(s) de ARN de doble hélice entre un
5.10^{-7} y un 5% en peso con respecto al peso total de la
composición.
7. Procedimiento cosmético de despigmentación
y/o de blanqueamiento de la piel o de las faneras,
caracterizado por el hecho de que el oligonucleótido de ARN
de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº: 1, la
SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15,
la SEC ID Nº: 16, 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22 es capaz
de inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la
tirosinasa.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0206796 | 2002-06-03 | ||
| FR0206796A FR2840217B1 (fr) | 2002-06-03 | 2002-06-03 | Compositions cosmetiques comprenant au moins un oligonucleotide d'arn double brin (dsrna)et leurs utilisations |
| US38672002P | 2002-06-10 | 2002-06-10 | |
| US386720P | 2002-06-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2342826T3 true ES2342826T3 (es) | 2010-07-15 |
Family
ID=29713354
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03756039T Expired - Lifetime ES2342826T3 (es) | 2002-06-03 | 2003-06-02 | Utilizacion por via topica de al menos un oligonucleotido de arn de doble helice (dsrna) anti-tirosina. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1513482B1 (es) |
| JP (1) | JP4499554B2 (es) |
| AT (1) | ATE464038T1 (es) |
| AU (1) | AU2003255621A1 (es) |
| CA (1) | CA2485111A1 (es) |
| DE (1) | DE60332112D1 (es) |
| ES (1) | ES2342826T3 (es) |
| WO (1) | WO2003101376A2 (es) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10254214A1 (de) * | 2002-11-20 | 2004-06-09 | Beiersdorf Ag | Oligoribonukleotide zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz |
| GB0307914D0 (en) * | 2003-04-07 | 2003-05-14 | Univ Dundee | Cytochrome p450 |
| AU2004285134B2 (en) * | 2003-10-21 | 2012-01-19 | Dyad Pharmaceutical Corporation | Methods and compositions for treating 5alpha-reductase type 1 and type 2 dependent conditions |
| DE102004025881A1 (de) | 2004-05-19 | 2006-01-05 | Beiersdorf Ag | Oligoribonukleotide zur Beeinflussung des Haarwachstums |
| WO2006040447A1 (fr) * | 2004-10-07 | 2006-04-20 | L'oreal | Procédé de traitement cosmétique des fibres kératiniques et utilisation d'un inhibiteur de transglutaminase |
| WO2006040446A1 (fr) * | 2004-10-07 | 2006-04-20 | L'oreal | Procédé de mise en forme de fibres kératiniques |
| US9139850B2 (en) | 2005-05-19 | 2015-09-22 | L'oreal | Vectorization of dsRNA by cationic particles and topical use |
| FR2885808B1 (fr) * | 2005-05-19 | 2007-07-06 | Oreal | Vectorisation de dsrna par des particules cationiques et utilisation topique. |
| FR2885813B1 (fr) * | 2005-05-19 | 2008-01-11 | Oreal | Vectorisation de dsrna par des particules cationiques et leur utilisation sur modele de peau. |
| FR2890859B1 (fr) | 2005-09-21 | 2012-12-21 | Oreal | Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase |
| JP4981381B2 (ja) * | 2006-08-04 | 2012-07-18 | 株式会社ナリス化粧品 | 美白用皮膚外用剤 |
| JP2008115101A (ja) * | 2006-11-02 | 2008-05-22 | Naris Cosmetics Co Ltd | 美白用皮膚組成物 |
| TWI382849B (zh) * | 2007-10-29 | 2013-01-21 | Mello Biotech Taiwan Co Ltd | 產生藉由基因靜默效應以用於皮膚維護之化妝品的方法以及編碼基因靜默效應物之基因重組核苷酸 |
| FR2940977B1 (fr) * | 2009-01-13 | 2016-11-18 | Oreal | Utilisation de formes complexes de la proteine de type calmodulin-like skin protein clsp |
| FR2986233B1 (fr) * | 2012-02-01 | 2014-02-28 | Regentis Internat | Peptide bifonctionnel |
| FR3043695B1 (fr) * | 2015-11-17 | 2019-10-25 | ISP Investments LLC. | Procede d'obtention d'un extrait aqueux enrichi en petits arn a partir d'une matiere vegetal et extraits issus du procede |
| FR3106754B1 (fr) | 2020-02-04 | 2022-01-07 | Isp Investments Llc | Procede d’obtention d’un extrait aqueux de lavande, compositions comprenant un tel extrait et leurs utilisations cosmetiques |
| JPWO2021201276A1 (es) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | ||
| FR3116438B1 (fr) | 2020-11-23 | 2022-10-14 | Isp Investments Llc | Procede d’obtention d’extraits aqueux de feuilles de thes, compositions comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmetiques |
| FR3125425A1 (fr) | 2021-07-22 | 2023-01-27 | Isp Investments Llc | Extrait de feuilles de the noir, compositions le comprenant et ses utilisations cosmetiques |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9927444D0 (en) * | 1999-11-19 | 2000-01-19 | Cancer Res Campaign Tech | Inhibiting gene expression |
| FR2804960B1 (fr) * | 2000-02-11 | 2005-06-24 | Lvmh Rech | Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase- related-protein 1 comme agents depigmentants |
-
2003
- 2003-06-02 AT AT03756039T patent/ATE464038T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-06-02 JP JP2004508734A patent/JP4499554B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-06-02 CA CA002485111A patent/CA2485111A1/fr not_active Abandoned
- 2003-06-02 DE DE60332112T patent/DE60332112D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-02 AU AU2003255621A patent/AU2003255621A1/en not_active Abandoned
- 2003-06-02 WO PCT/FR2003/001648 patent/WO2003101376A2/fr active Application Filing
- 2003-06-02 EP EP03756039A patent/EP1513482B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-02 ES ES03756039T patent/ES2342826T3/es not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1513482B1 (fr) | 2010-04-14 |
| CA2485111A1 (fr) | 2003-12-11 |
| AU2003255621A8 (en) | 2003-12-19 |
| WO2003101376A3 (fr) | 2004-05-06 |
| EP1513482A2 (fr) | 2005-03-16 |
| JP2005530812A (ja) | 2005-10-13 |
| WO2003101376A2 (fr) | 2003-12-11 |
| JP4499554B2 (ja) | 2010-07-07 |
| AU2003255621A1 (en) | 2003-12-19 |
| DE60332112D1 (de) | 2010-05-27 |
| ATE464038T1 (de) | 2010-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9012418B2 (en) | Topical administration of at least one double-stranded RNA oligonucleotide (dsRNA) | |
| ES2342826T3 (es) | Utilizacion por via topica de al menos un oligonucleotido de arn de doble helice (dsrna) anti-tirosina. | |
| EP1255827B1 (fr) | Oligonucleotides et leur utilisation pour moduler l'expression de la tyrosinase intervenant dans la synthese de pigments melaniques | |
| CN102014859B (zh) | 抑制黑素生成的新组合物及其应用 | |
| JP6599874B2 (ja) | Ｍｍｐ−９タンパク質の酵素活性を阻害するアプタマー | |
| KR20180026778A (ko) | 멜라닌 생성을 억제하는 rna 복합체 | |
| KR20090056910A (ko) | 아스코르브산 2-글루코사이드 및 에르고티오네인을 포함하는 화장용 조성물 | |
| US9303261B2 (en) | Composition for controlling chromogenesis including microRNA | |
| US9732348B2 (en) | Aptamers inhibiting the enzymatic activity of tyrosinase | |
| JPWO2007013411A1 (ja) | 生物由来のアンチセンス核酸 | |
| KR101418934B1 (ko) | 탈색제로서의 새로운 타이로시네이즈-특이적인 항원성올리고뉴크레오타이드 | |
| KR101849102B1 (ko) | 마이크로 ｒｎａ를 포함하는 색소형성유전자 발현조절용 조성물 | |
| KR20090102764A (ko) | 티로시나아제-관련 단백질-1(ｔｒｐ-1)을 코딩하는 유전자와 상호작용하는 신규한 올리고뉴클레오타이드 및 이 유전자의 탈색제로서 이의 발현을 조절하기 위한 용도 | |
| FR2864540A1 (fr) | Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase-related-protein 1 comme agents depigmentants | |
| FR2930151A1 (fr) | Nouvelles compositions inhibant la melanogenese et leurs utilisations | |
| KR101800243B1 (ko) | 마이크로 ｒｎａ를 포함하는 색소형성유전자 발현조절용 조성물 | |
| FR2930152A1 (fr) | Nouvelles compositions inhibant la melanogenese et leurs utilisations | |
| KR101871920B1 (ko) | 마이크로 ｒｎａ를 포함하는 조성물 |