FR2832628A1 - Un produit a base d'extrait d'algue rouge du genre porphyra, sa preparation et ses utilisations pour proteger les cellules - Google Patents
Un produit a base d'extrait d'algue rouge du genre porphyra, sa preparation et ses utilisations pour proteger les cellules Download PDFInfo
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Abstract
La présente invention a pour objet un produit capable de moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques sur les cellules, caractérisé en ce qu'il comprend ou est constitué d'un extrait hydroalcoolique d'algue rouge du genre Porphyra. L'invention concerne un procédé de préparation dudit produit ainsi que son utilisation dans des compléments alimentaires ou des compositions cosmétiques.
Description
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UN PRODUIT À BASE D'UN EXTRAIT D'ALGUE ROUGE DU GENRE PORPHYRA, SA PRÉPARATION ET SES UTILISATIONS POUR PROTÉGER LES CELLULES.
La présente invention concerne le domaine de la préparation de produits à base d'extraits d'algue qui sont utiles comme compléments alimentaires et dans des applications cosmétiques ou dermatologiques pour la protection cellulaire, en général.
L'algue rouge appartenant au genre Porphyra comprend plusieurs espèces dont : - Porphyra umbilicalis, ramassée en Bretagne - Porphyra purpurea, présente en Bretagne - Porphyra tenera cultivée au Japon - Porphyra yezoensis cultivée au Japon - Porphyra columbina ramassée en Australie
Les espèces alimentaires de Porphyra sont appelées également Nori. L'espèce Porphyra umbilicalis forme une lame fine lancéolée à orbiculaire de couleur violacée qui peut atteindre 60 cm de long. L'espèce Porphyra est l'algue alimentaire la plus consommée dans le monde. En France, l'espèce Porphyra umbilicalis est autorisée à la consommation alimentaire humaine. L'intérêt nutritionnel de cette algue réside dans sa richesse en composés divers tels que : - des protéines, jusqu'à 45 % de la matière sèche, - des acides gras poly-insaturés, comme l'EPA (acide eicosapentaénoïque), jusqu'à 5 % des lipides de l'algue, - des vitamines du groupe B, la vitamine B12 en particulier, - de la vitamine A et des caroténoïdes.
Les espèces alimentaires de Porphyra sont appelées également Nori. L'espèce Porphyra umbilicalis forme une lame fine lancéolée à orbiculaire de couleur violacée qui peut atteindre 60 cm de long. L'espèce Porphyra est l'algue alimentaire la plus consommée dans le monde. En France, l'espèce Porphyra umbilicalis est autorisée à la consommation alimentaire humaine. L'intérêt nutritionnel de cette algue réside dans sa richesse en composés divers tels que : - des protéines, jusqu'à 45 % de la matière sèche, - des acides gras poly-insaturés, comme l'EPA (acide eicosapentaénoïque), jusqu'à 5 % des lipides de l'algue, - des vitamines du groupe B, la vitamine B12 en particulier, - de la vitamine A et des caroténoïdes.
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On a décrit dans l'art antérieur de nombreuses propriétés d'extraits de l'algue Porphyra et les composés qu'ils contiennent, comme par exemple : - des propriétés anti-oxydantes d'un extrait méthanolique (80 %) de Porphyra tenera, - des propriétés anti-oxydantes d'extraits dans divers solvants polaires et apolaires de Porphyra yezoensis, en particulier de l'extrait méthanolique, - des propriétés anti-oxydantes d'un extrait
réalisé avec du méthanol (50 %) et de l'acétone, - la présence de concentrations élevées de taurine et de ses dérivés, soluble en milieu hydroalcoolique, connue pour ses propriétés élicitrices des protéines chaperonnes (HSP), - la présence de dérivés de sucres solubles en milieu hydroalcoolique comme le floridoside (alpha-D- galactopyranosyl- (1-2) -glycérol) et ses isomères, qui jouent un rôle essentiel pour la régulation osmotique du milieu cellulaire soumis à des stress hydriques importants, - la présence de porphyrane, polysaccharide de la famille des agars, non extrait car non soluble dans des solutions hydroalcooliques ayant une teneur en alcool supérieure à 70 %, qui présentent des propriétés immunostimulantes et anti-tumorales.
réalisé avec du méthanol (50 %) et de l'acétone, - la présence de concentrations élevées de taurine et de ses dérivés, soluble en milieu hydroalcoolique, connue pour ses propriétés élicitrices des protéines chaperonnes (HSP), - la présence de dérivés de sucres solubles en milieu hydroalcoolique comme le floridoside (alpha-D- galactopyranosyl- (1-2) -glycérol) et ses isomères, qui jouent un rôle essentiel pour la régulation osmotique du milieu cellulaire soumis à des stress hydriques importants, - la présence de porphyrane, polysaccharide de la famille des agars, non extrait car non soluble dans des solutions hydroalcooliques ayant une teneur en alcool supérieure à 70 %, qui présentent des propriétés immunostimulantes et anti-tumorales.
La Demanderesse a maintenant mis en évidence qu'un extrait hydroalcoolique de l'algue rouge Porphyra umbilicalis présente la capacité de moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques diverses sur les cellules.
Cette capacité inattendue confère à ces extraits un intérêt remarquable pour la préparation de compositions actives pour protéger les cellules du stress provoqué par des contraintes physiques comme un choc thermique ou l'exposition aux rayonnements UV.
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En conséquence, l'invention a pour objet un produit capable de moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques diverses sur les cellules, caractérisée en ce qu'il comprend ou est constitué d'un extrait hydroalcoolique d'algue rouge.
L'invention concerne de préférence un extrait d'algue rouge appartenant au genre Porphyra et tout préférentiellement un extrait d'algue rouge de l'espèce Porphyra umbilicalis.
L'extrait d'algue comprend les composés suivants, dans des proportions exprimées en poids par rapport au poids total de l'extrait lorsqu'ils sont dosés : - Taurine et dérivés : 1 à 5 %, - Floridoside et dérivés : 10 à 25 %, - Caroténoïdes et AGPI (non dosés), - vitamines hydrosolubles (non dosées), - Acides aminés et dérivés, - Pigments divers.
Un produit selon l'invention comprend de 5 à 30 %, de préférence de 15 à 25 % et tout préférentiellement de l'ordre de 20 % en poids d'un extrait d'algue rouge par rapport au poids total du produit.
La Demanderesse a également mis au point un procédé de préparation d'un extrait d'algue rouge et d'un produit actif le contenant permettant de disposer d'un produit industriel efficace comme agent de modulation de l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques diverses sur les cellules.
Le procédé selon l'invention comprend les étapes suivantes : a) on prépare une suspension hydroalcoolique de l'algue rouge contenant en poids 76 % d'équivalent alcool et 5 % d'équivalent matière sèche d'algue,
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b) on place ladite suspension à une température comprise entre 0 et 500C et de préférence entre 25 et 40 C, c) on agite la suspension de façon modérée, d) on sépare la fraction soluble contenue dans l'alcool et la fraction solide par filtration ou par décantation centrifuge et l'on recueille la fraction soluble, avantageusement après pressage de la fraction solide, e) on évapore l'alcool de la fraction soluble pour obtenir un concentré aqueux dont l'extrait d'algue représente en équivalent matière sèche de 10 à 30 %, de préférence de 15 à 25 % et tout préférentiellement de l'ordre de 20 % en poids du concentré, f) on stabilise ledit concentré en éliminant l'eau pour obtenir un produit actif selon l'invention.
L'algue peut être séchée ou non avant de procéder à l'extraction ci-dessus. Une fois séchée, elle peut être broyée grossièrement et elle se présente alors sous la forme de paillettes. La teneur en eau de l'algue séchée peut varier entre 10 et 20 % (p/p).
Dans le procédé ci-dessus, on utilise avantageusement à l'étape (a) une solution hydroalcoolique constituée d'au moins 70 parts d'un alcool primaire ou secondaire à chaîne courte (méthanol, éthanol, propanol et isopropanol), préférentiellement éthanol dénaturé ou non avec un autre alcool cité précédemment, le reste étant constitué par de l'eau déminéralisée.
A l'étape (d) on sépare la fraction soluble contenue dans l'alcool et la fraction solide par plusieurs filtrations comprenant : - éventuellement une pré-filtration très grossière pour éliminer les particules de taille supérieure à 100 microns,
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- une filtration grossière pour éliminer les particules de taille supérieure à 25 microns, une ou plusieurs filtrations fines facultatives jusqu'à 0,2 micron environ, - avantageusement la fraction solide est pressée pour augmenter le rendement.
Après filtration, la solution hydroalcoolique obtenue est soumise à l'étape (e) à une évaporation sous pression réduite, à une température de l'ordre de 40 C, de façon à éliminer totalement l'alcool. L'évaporation est poursuivie de façon à éliminer une grande partie de l'eau encore présente.
L'étape (f) de stabilisation est nécessaire pour protéger l'extrait contre la contamination microbienne. La stabilisation peut être réalisée par : - lyophilisation ou atomisation de façon à obtenir un produit sous forme de poudre, - mélange avec un composé stabilisant comme le glycérol pour remplacer l'eau du concentré aqueux de façon à obtenir un produit sous forme liquide.
Sous forme de poudre, le produit peut être facilement incorporée dans des formulations sèches de compléments alimentaires et conditionnée en gélules, comprimés ou sachets, etc.
Sous forme liquide, le produit est utile pour des préparations cosmétiques ou le conditionnement en capsule molle.
En conséquence, l'invention se rapporte à l'utilisation d'un extrait d'algue rouge ou d'un produit le contenant pour la préparation d'une composition, notamment alimentaire ou cosmétique, destinée à moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques diverses sur les cellules. Une composition selon
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l'invention est tout particulièrement utile pour moduler les protéines de stress Hsp60, Hsp27 et Hsp70.
Ces propriétés confèrent aux compositions selon l'invention un intérêt tant chez l'homme que chez l'animal.
Les travaux de recherche réalisés dans le cadre de l'invention ont permis de mettre en évidence les capacités de l'extrait ou d'un produit le contenant à protéger les cellules contre un choc thermique, les rayonnements UV ou tout autre choc physique ou thérapeutique.
En conséquence, l'invention concerne l'utilisation pour la préparation d'une composition, notamment alimentaire ou cosmétique, destinée à protéger les cellules contre des agressions physiques en particulier un choc thermique ou les rayonnements UV.
Des compositions selon l'invention peuvent constituer des compléments alimentaires comprenant de 10 à 500 mg de préférence de 50 à 250 mg d'un produit à base de l'extrait d'algue rouge.
On considère généralement que pour des applications comme complément alimentaire, celui-ci doit être apporté à raison de 50 à 250 mg par jour chez un individu. Une composition selon l'invention constituant un complément alimentaire peut se présenter en gélules, capsules molles, comprimés ou sachets, sirop, etc.
Comme indiqué précédemment, les compositions selon l'invention peuvent aussi constituer des compositions cosmétiques, éventuellement dermatologiques, qui sont alors appliquées de manière topique sur la peau. Les compositions de l'invention permettent de protéger la peau contre des agressions physiques et plus particulièrement les chocs thermiques ou les rayonnements UV. Les compositions cosmétiques selon l'invention sont également utiles comme
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compositions anti-âges pour améliorer les qualités et l'apparence de la peau.
Des compositions cosmétiques selon l'invention comprennent de 0,1 à 5 % et de préférence de 0,5 à 2% et tout préférentiellement de l'ordre de 1% en produit à base d'algue.
En ce qui concerne les chocs thermiques, l'invention envisage tout particulièrement les chocs thermiques froids. Ainsi, les compositions de l'invention peuvent être utilisées par les individus soumis à des environnements hostiles comme la mer ou la montagne et conviennent donc spécialement aux plongeurs ou aux skieurs, aux alpinistes et aux sportifs de haut niveau.
En ce qui concerne l'exposition aux rayonnements UV, l'invention ne concerne pas l'extrait d'algue rouge ou le produit le contenant comme filtre mais comme agent de protection du stress subi par les cellules lors d'une telle exposition.
Les compositions de l'invention destinées à protéger les cellules contre des agressions physiques en particulier un choc thermique ou les rayonnements UV peuvent être administrées par voie orale, puisque les compositions présentent l'avantage d'être alimentaires, ou par voie topique.
Des compositions cosmétiques selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie sans autre restriction galénique que l'application sur la peau du visage ou du corps. De façon avantageuse, les compositions selon l'invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une émulsion, d'un lait, d'un spray, etc....
Ces compositions peuvent aussi comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu
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et classique dans les compositions cosmétiques et dermatologiques tels que, à titre d'exemple et de façon non limitative, des adoucissants, des colorants, des actifs filmogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des agents absorbeurs de sébum, des vitamines, etc.... Grâce à ces connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent concernant la préparation d'un extrait hydroalcoolique de Porphyra umbilicalis et son activité sur la réponse au choc thermique ou au rayonnement UV de cellules en culture in vitro. Il sera fait référence dans ces exemples aux dessins en annexe dans lesquels : - La figure 1 représente un schéma détaillé du procédé de préparation d'un extrait hydroalcoolique de Porphyra umbilicalis de l'exemple 1.
- La figure 2 représente la cinétique de production de l'hormone de croissance (hGH) par les cellules.
- La figure 3 représente l'analyse par la technique du Western blot du taux des différentes HSP produites par les cellules 30 h après le choc thermique.
- La figure 4 représente l'analyse par la technique du Western blot du taux des différentes HSP produites par les cellules 30 min, 4 h et 6 h après le choc thermique.
- La figure 5 représente l'analyse par la technique du Western blot du taux des différentes HSP produites par les cellules 30 min, 4 h et 6 h après irradiation UV.
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La figure 6 représente la courbe de croissance des cellules CHO en présence ou non de l'extrait de Porphyra umbilicalis 1 %.
Exemple 1 : Préparation d'un extrait hydroalcoolique de Porphyra umbilicalis.
1) Description du procédé.
Le procédé représenté à la figure 1 comprend les étapes suivantes : - Extraction à l'éthanol - Filtration sur Buchner (250-300 microns) - Filtration sur 3 pm - Concentration par évaporation sous vide - Mélange avec des maltodextrines de telle sorte que le produit fini, après atomisation, contienne 80 % de maltodextrines, - Atomisation.
Une exemple d'extraction selon l'invention consiste à traiter l'algue en paillettes avec une solution hydroalcoolique constituée d'au moins 70 parts d'un alcool primaire ou secondaire à chaîne courte (méthanol, éthanol, propanol et isopropanol), préférentiellement éthanol dénaturé ou non avec un autre alcool cité précédemment, le reste étant constitué par de l'eau déminéralisée.
Les conditions de l'extraction sont les suivantes : - Température : 0 à 50 C, de préférence de 25 à 40 C, - Durée : 2h à 24h, de préférence de 4 à 6h - Agitation modérée, - Concentration de l'algue : 2 à 10 % de matière sèche (p/p), de préférence 4 à 6 %,
Après incubation, les opérations de purification sont les suivantes : - Pré-filtration grossière 250-500 microns,
Après incubation, les opérations de purification sont les suivantes : - Pré-filtration grossière 250-500 microns,
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- Filtrations fines jusqu'à 0,45 micron.
Après filtration, la solution hydroalcoolique est soumise à une évaporation sous pression réduite, à une température de l'ordre de 40 C, de façon à éliminer totalement l'alcool qui pourra être recyclé pour de prochaines fabrications. L'évaporation est poursuivie de façon à éliminer une grande partie de l'eau encore présente. L'extrait de Porphyra peut se présenter sous 2 formes : - Forme sèche : l'extrait peut être lyophilisé ou atomisé en présence d'un excipient de séchage tel que des maltodextrines par exemple. Le produit fini contient, par unité de masse, 15 à 25 % de composés provenant de Porphyra, 70 à 80 % de maltodextrines et moins de 5 % d'eau. Cette forme peut être facilement incorporée dans des formulations sèches de compléments alimentaires et conditionnée en gélules, comprimés ou sachets, etc.
- Forme liquide : l'extrait peut également être stabilisé sous forme liquide en présence de concentrations élevées de glycérol. Le produit fini contient, par unité de masse, 15 à 25 % de composés provenant de Porphyra, 70 à 80 % de glycérol et moins de 10 % d'eau. Cette présentation est utile pour les préparations cosmétiques ou le conditionnement en capsule molle.
Comme indiqué ci-dessus, le produit final peut être présenté sous forme de poudre ou sous forme de solution dans la glycérine. Dans l'exemple 2 qui suit concernant l'activité de l'extrait, le produit est atomisé avec des maltodextrines.
2) Bilan de la production.
- Paillettes de Porphyra umbilicalis : 90 kg (M. S : 74 kg) - Poudre finale : 40 kg - Extrait de Porphyra : 9 kg - Rendement d'extraction : 12%
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Exemple 2 : Activité de l'extrait hydroalcoolique de Porphyra umbilicalis sur la réponse au choc thermique et au rayonnement UV de cellules en culture in vitro
Pour réaliser les expérimentations décrites dans cet exemple, on utilise l'extrait de Porphyra en solution hydroalcoolique pur ou dilué dans l'eau déminéralisée. L'extrait pur non dilué contient 70 % d'éthanol (v/v) et 1,2 % de matière sèche provenant de l'algue. Cette préparation contient donc 1,2 g de matière sèche pour 100 g de solution (volume d'environ 117 ml).
Pour réaliser les expérimentations décrites dans cet exemple, on utilise l'extrait de Porphyra en solution hydroalcoolique pur ou dilué dans l'eau déminéralisée. L'extrait pur non dilué contient 70 % d'éthanol (v/v) et 1,2 % de matière sèche provenant de l'algue. Cette préparation contient donc 1,2 g de matière sèche pour 100 g de solution (volume d'environ 117 ml).
Plusieurs dilutions de l'échantillon ont été préparées : - solution mère (70 % d'alcool, 1,2 % de matière sèche), - solution à 20 % dans l'eau stérile, soit une concentration finale de 14 % d'alcool et 0,24 % de matière sèche, - solution à 10 % dans l'eau stérile, soit une concentration finale de 7 % d'alcool et 0,12 % de matière sèche, - solution à 1 % dans l'eau stérile, soit une concentration finale de 0,7 % d'alcool et 0,012 % de matière sèche.
Des solutions de contrôle ne contenant pas le produit ont aussi été préparées contenant respectivement 70,7 % et 0,7 % d'alcool (v/v).
1) Protocole expérimental.
Les différentes solutions alcooliques préparées ci-dessus ont été ajoutées au milieu de culture de cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) génétiquement manipulées. Le génome de ces cellules contient le promoteur de stress humain Hsp70 placé devant le gène rapporteur codant pour l'hormone de croissance humaine (hgH) (Technologie TPSc). Ces cellules poussent en boîte de Pétri sous forme
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adhérente. Le milieu de culture utilisé est le Ham F12 (Life Technology).
L'hormone de croissance, synthétisée suite à un stress thermique, est relâchée dans le milieu de culture.
On récolte alors un aliquote du milieu de culture à différents temps après le stress thermique et l'hormone de croissance est dosée avec un kit Elisa (Boehringer-Roche).
La lecture est faite au spectrophotomètre (X = 405 nm).
24 heures au minimum avant l'expérience, les cellules CHO, de deuxième ou troisième génération, ont été remises en culture à raison de 106 cellules par boîte de 60 mm de diamètre. Les différents essais sont les suivants : - boites de cellules de contrôle conservées à 37 C, - boîtes de cellules de contrôle conservées à 37 C en présence des différentes dilutions du produit, - boîtes de cellules exposées au choc thermique, - boîtes de cellules exposées au choc thermique en présence des différentes dilutions du produit.
Il a été ajouté 50 pl des différentes solutions préparées aux 5 ml de milieu de culture que contiennent les boîtes, soit une dilution additionnelle des solutions de 1/100èrne.
La concentration finale de l'extrait dans les cultures est donc égale à : - Extrait pur : 0, 7% d'alcool et 0, 012% de produit (indiqué 1% + P dans les Figures).
- Dilution 1/5 : 0, 14% d'alcool et 0, 0024% de produit (indiqué 0, 5% + P).
- Dilution 1/10 : 0, 07% d'alcool et 0, 0012% de produit (indiqué 0, 1% + P).
- Dilution 1/100 : 0, 007% d'alcool et 0, 00012% de produit (indiqué 0, 01% + P).
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P : Produit. Les contrôles en alcool sont indiqués par 1 % ; 0, 5 % ; 0, 1 % et 0, 01 %.
Ces dilutions ont été rendues nécessaires car il est impératif de rester en dessous de la limite de 1 % d'alcool dans les cultures. En effet, l'alcool peut induire une réponse du même type que celle induite par un choc thermique. Il peut également aggraver fortement la cytotoxicité engendrée par la choc thermique.
Les 50 pl des différentes dilutions ont été ajoutés 15 min avant d'exposer les cellules à un choc thermique à 430C pendant 90 min dans un bain-marie thermostaté. Ensuite, les cellules sont remises dans un incubateur à cellules maintenu à 37 C. Dans le cas des cellules de contrôle, les cellules sont conservées dans l'incubateur à 370C et les 50 pl des différentes dilutions de l'extrait ont été ajoutés en même temps que dans le cas des cellules soumises au choc thermique.
2) Analyse du choc thermique
La Figure 2 montre que le produit n'altère pas la production de l'hormone de croissance (hGH) dans les conditions du contrôle. Suite au choc thermique, on n'observe pas d'effet du produit lorsqu'il est dilué à plus de 1 %. Par contre, une dilution de 1 % induit une très forte diminution de la synthèse thermique de hGH. Il est important de souligner que la morphologie des cellules n'est pas affectée par ce manque de production d'hGH.
La Figure 2 montre que le produit n'altère pas la production de l'hormone de croissance (hGH) dans les conditions du contrôle. Suite au choc thermique, on n'observe pas d'effet du produit lorsqu'il est dilué à plus de 1 %. Par contre, une dilution de 1 % induit une très forte diminution de la synthèse thermique de hGH. Il est important de souligner que la morphologie des cellules n'est pas affectée par ce manque de production d'hGH.
Ce résultat obtenu trois fois suggère que l'induction thermique du promoteur de stress Hsp70 est fortement réduite lorsque le milieu cellulaire contient la solution 1 % soit 0,012 % de matière sèche. Une plus faible dilution du produit n'a pas d'effet. De plus, ce phénomène ne peut être attribué à l'alcool présent dans la solution.
Afin de vérifier que ce résultat n'était pas une conséquence d'un blocage de la sécrétion cellulaire par le produit, nous avons récupéré les cellules à la fin de
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l'expérience, c'est à dire 30 heures après le choc thermique, et les protéines totales cellulaires ont été analysées par la technique de Western blot (anticorps antiHsp70, anti-Hsp60, anti-Hsp27, anti-Hsp90) (figure 3). La dilution 1/100ème n'a pas été testée dans cette expérience.
La Figure 3 montre que le produit en solution à 1% inhibe fortement l'accumulation thermique de la protéine Hsp70. Ce résultat confirme la forte inhibition de la production d'hGH observée dans la Figure 2. Le taux de la protéine de stress constitutive Hsc70 n'est pas altéré et sert de contrôle interne à l'expérience.
Concernant Hsp60, on observe que le produit en solution à 0, 1% stimule fortement l'accumulation de Hsp60 suite à un stress thermique. Les autres dilutions induisent l'effet inverse, c'est à dire une diminution du taux de Hsp60.
Concernant Hsp90, il n'y a aucun effet à faible dilution. On observe une diminution de l'accumulation de cette protéine en présence du produit à 1 %. Les résultats sont semblables à ceux obtenus avec la protéine Hsp70.
Concernant Hsp27, le comportement de cette protéine ressemble à celui de Hsp60 : stimulation de l'accumulation à faible dose et inhibition à forte dose.
Afin de tester si l'effet du produit (solution 0, 1%) au niveau de Hsp60 et Hsp27 est déjà visible juste après l'exposition au choc thermique, nous avons analysé le taux de ces protéines par la technique de Western blot 30 min, 4 et 6 heures après l'exposition des cellules à 43 C pendant 90 min. Les résultats sont présentés dans la Figure 4.
On peut déduire de la Figure 4 que le produit dilué à 0, 1% stimule la production des protéines Hsp60 et Hsp27. Ce phénomène est bien visible 4 heures après un choc thermique. Aucun effet n'est détecté au niveau de Hsp70.
<Desc/Clms Page number 15>
3) Analyse du produit dans le cas d'un stress par les UV.
Afin de tester l'effet du produit sur l'induction des Hsp par le rayonnement UV, les cellules ont été exposées à 0,250 J/cm2 de rayonnement UV à une longueur d'onde de 254 nm. Pour ce faire, le milieu cellulaire est retiré pendant un court instant afin de pouvoir irradier les cellules. Les protéines totales cellulaires ont été analysées par la technique du Western blot (anticorps antiHsp70, anti-Hsp60 et anti-Hsp27).
La Figure 5 montre que le produit dilué à 0,1 % réduit fortement l'accumulation des protéines Hsp70, Hsp60 et Hsp27 en réponse à un stress par les UV.
4) Analyse du pouvoir cytotoxique du produit
Aucun effet n'a été détecté. La courbe de croissance des cellules en présence de l'extrait d'algue à 1% est normale (Figure 6).
Aucun effet n'a été détecté. La courbe de croissance des cellules en présence de l'extrait d'algue à 1% est normale (Figure 6).
Exemple 3 : Formulations de l'extrait hydroalcoolique de Porphyra umbilicalis.
1) Complément alimentaire.
30 capsules de 700 mg par étui. Poids net : 21 g. (valeurs arrondies).
Ingrédients : Extrait d'algue alimentaire selon l'invention dans le glycérol, huile vierge de bourrache.
Capsule (gélatine de poisson et amidon de pomme de terre).
Agent d'enrobage : cire jaune d'abeille.
2) Composition solaire.
45 capsules de 600 mg (TAILLE 6) par étui.
Poids net : 27 g. Ingrédients : Capsule (gélatine de poisson et amidon de pomme de terre), huile vierge de bourrache. Extrait d'algue alimentaire selon l'invention dans le glycérol, agent d'enrobage : cire d'abeille, extrait de tomate, levure cultivée sur milieu enrichi en sélénium, vitamine E.
<Desc/Clms Page number 16>
3) Composition cosmétique anti-âge pour la peau.
60 capsules de 673 mg par étui. Poids net : 40,4 g. (valeurs arrondies). Ingrédients : huile vierge de bourrache, capsule (gélatine de poisson et amidon de pomme de terre). Extrait sec de thé vert. Agent d'enrobage : cire d'abeille, extrait d'algue alimentaire selon l'invention dans le glycérol, hydrolysat de protéines de blé, levure séléniée, sulfate de zinc, sulfate de manganèse.
Claims (12)
1) Un produit capable de moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques sur les cellules, caractérisé en ce qu'il comprend ou est constitué d'un extrait hydroalcoolique d'algue rouge.
2) Un produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'algue rouge appartient au genre Porphyra et de préférence à l'espèce Porphyra umbilicalis.
3) Un produit selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé que l'extrait d'algue comprend les composés suivants : - Taurine et dérivés : 1 à 5 %, - Floridoside et dérivés : 10 à 25 %, - Caroténoïdes et AGPI, - Vitamines hydrosolubles, - Acides aminés libres et dérivés, - Pigments.
4) Un produit selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend de 10 à 30 %, de préférence de 15 à 25 % et tout préférentiellement de l'ordre de 20 % en poids d'un extrait d'algue rouge par rapport au poids total du produit.
5) Procédé de préparation d'un produit capable de moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques sur les cellules, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) on prépare une suspension hydroalcoolique de l'algue rouge contenant environ en poids 76 % d'équivalent alcool et 5 % d'équivalent matière sèche d'algue,
<Desc/Clms Page number 18>
b) on place ladite suspension à une température comprise entre 0 et 500C et de préférence entre 25 et 40 C, c) on agite la suspension de façon modérée, d) on sépare la fraction soluble contenue dans l'alcool et la fraction solide par filtration et l'on recueille le filtrat, avantageusement après pressage de la fraction solide, e) on évapore l'alcool de la fraction soluble pour obtenir un concentré aqueux dont l'extrait d'algue représente en équivalent matière sèche de 10 à 30 %, de préférence de 15 à 25 % et tout préférentiellement de l'ordre de 20 % en poids du concentré, f) on stabilise ledit concentré en éliminant l'eau pour obtenir ledit produit actif.
6) Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'à l'étape (a) on utilise une solution hydroalcoolique constituée d'au moins 70 parts d'un alcool primaire ou secondaire à chaîne courte, préférentiellement l'éthanol, le reste étant constitué par de l'eau déminéralisée.
7) Procédé selon l'une des revendications 5 ou 6, caractérisé en ce qu'à l'étape (d) on sépare la fraction soluble contenue dans l'alcool et la fraction solide par plusieurs filtrations comprenant : - éventuellement une pré-filtration très grossière pour éliminer les particules de taille supérieure à 100 microns, - une filtration grossière pour éliminer les particules de tailles supérieures à 25 microns, une ou plusieurs filtrations fines facultatives jusqu'à 0,2 micron environ, - avantageusement la fraction solide est pressée pour augmenter le rendement.
<Desc/Clms Page number 19>
8) Procédé selon l'une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que l'étape (f) de stabilisation est réalisée par : - lyophilisation ou atomisation de façon à obtenir un produit sous forme de poudre, - mélange avec un composé stabilisant comme le glycérol pour remplacer l'eau du concentré aqueux de façon à obtenir un produit sous forme liquide.
9) Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou d'un produit obtenu par le procédé selon l'une des revendications 5 à 8 pour la préparation d'une composition, alimentaire ou cosmétique, destinée à moduler l'induction des protéines de stress lors de contraintes physiques sur les cellules.
10) Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou d'un produit obtenu par le procédé selon l'une des revendications 5 à 8 pour la préparation d'une composition, alimentaire ou cosmétique, destinée à protéger les cellules contre des agressions physiques en particulier un choc thermique ou les rayonnements UV.
11) Utilisation selon l'une des revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que la composition alimentaire comprend de 10 à 500 mg de préférence de 50 à 250 mg dudit produit.
12) Utilisation selon l'une des revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que la composition cosmétique comprend de 0,1 à 5 % et de préférence de 0,5 à 2% en poids dudit produit.
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