FR2755142A1 - Souche bacterienne marine du genre alteromonas, exopolysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations - Google Patents
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Abstract
La présente invention est relative à une souche bactérienne marine d'origine hydrothermale, appartenant au genre Alteromonas, et à un exopolysaccharide produit par ladite souche. Cet exopolysaccharide est utilisable en particulier pour la capture des métaux lourds, ainsi que comme médicament.
Description
SOUCHE BACTERIENNE MARINE DU GENRE ALTEROMONAS,
EXOPOLYSACCHARIDES HYDROSOLUBLES PRODUITS PAR CETTE SOUCHE,
ET LEURS UTILISATIONS.
EXOPOLYSACCHARIDES HYDROSOLUBLES PRODUITS PAR CETTE SOUCHE,
ET LEURS UTILISATIONS.
La présente invention est relative à une nouvelle souche bactérienne du genre Alteromonas, aux exopolysaccharides produits par ladite souche, et à leurs utilisations.
Le milieu hydrothermal sous-marin profond se caractérise par de très hautes pressions, des gradients de température importants, et de fortes concentrations en éléments toxiques, tels que des sulfures et des métaux lourds. Certains micro-organismes issus de ce milieu produisent des biomolécules dont la structure et la composition particulières leur conférent des propriétés d'un grand intérêt industriel potentiel ; parmi ces biomolécules, on trouve une grande variété de polysaccharides, dont certains ont déjà fait l'objet d'études visant à déterminer leur structures et leurs propriétés. On citera en particulier des travaux auxquels ont participé les
Inventeurs, qui ont conduit à la caractérisation de différents types de polysaccharides produits par différentes sous-espèces du genre Alteromonas.
Inventeurs, qui ont conduit à la caractérisation de différents types de polysaccharides produits par différentes sous-espèces du genre Alteromonas.
Les études citées ci-après ont concerné plus spécifiquement les exopolysaccharides (EPS) excrétés par ces bactéries cultivées en conditions de laboratoire, et en particulier sur milieu enrichi en glucose.
VINCENT et al. [Appl. Environ. Microbiol., 60, 4134-4141 (1994)] ont ainsi décrit un exopolysaccharide, dénommé EPS-1545, excrété par une souche, désignée sous la référence HYD-1545, d'une bactérie du genre Alteromonas.
L'EPS, obtenu par précipitation à l'éthanol comprend entre 49 et 55% d'oses neutres, et entre 32,5 et 39% d'acides uroniques ; sa composition en monosaccharides, déterminée après méthanolyse acide, est la suivante : entre 0,3 et 0,5W de rhamnose, entre 13 et 17% de glucose, entre 5,3 et 9,4W de galactose, entre 0,6 et 1% de mannose, environ 4,3 de galactose portant un substituant pyruvate, 4% d'acide glucuronique, et 2,4 à 2,5% d'acide galacturonique. La principale fraction obtenue après purification de cet EPS par chromatographie d'échange d'ions suivie de filtration sur gel comprend environ 40% d'acides uroniques, 50% d'oses neutres, et 10% de galactose portant un substituant pyruvate.
D'autres études ont été effectuées pour comparer les EPS produits par différentes bactéries du genre
Alteromonas [GUEZENNEC et al. Carbohydrate Polymers, 24, 287-294 (1994)]. Ces EPS ont été classés en 5 groupes différents sur la base de leur composition : le groupe 1 est constitué d'EPS comprenant entre 50 et 60% environ d'oses neutres, environ 10% d'acides uroniques, entre 0,5 et 3,7W d'osamines, et entre 11,5 et 21,5% de sulfates ; le groupe 2 est constitué d'EPS comprenant environ 50% d'oses neutres, possédant une faible teneur en acides uroniques (8%), comprenant entre 1 et 3,2W d'osamines, et dont la teneur en sulfates est comprise entre moins de 10% et 13% ; les EPS du groupe 3 comprennent entre 40 et 50% d'oses neutres, ont une très faible teneur en acides uroniques (entre 5 et 7 ), comprennent entre 1,2 et 1,7% d'osamines, et ont une teneur en sulfates variant entre 8,9 et 17,2 ; le groupe 4 est constitué d'EPS comprenant 46 à 49% d'oses neutres, possédant une teneur élevée en acides uroniques (entre 34 et 40%), comprenant entre 0,2 et 1,6% d'osamines, et ayant une teneur en sulfates comprise entre 9,7 et 13% ; le groupe 5 est constitué d'EPS à teneur relativement faible en oses neutres (38 à 47W), à teneur élevée en acides uroniques (26 à 32%), comprenant entre 1 et 1,6% d'osamines, et entre 5,2 et 10,1% de sulfates ; l'un des EPS de ce groupe comprend en outre un acide hexuronique portant un substituant lactate.
Alteromonas [GUEZENNEC et al. Carbohydrate Polymers, 24, 287-294 (1994)]. Ces EPS ont été classés en 5 groupes différents sur la base de leur composition : le groupe 1 est constitué d'EPS comprenant entre 50 et 60% environ d'oses neutres, environ 10% d'acides uroniques, entre 0,5 et 3,7W d'osamines, et entre 11,5 et 21,5% de sulfates ; le groupe 2 est constitué d'EPS comprenant environ 50% d'oses neutres, possédant une faible teneur en acides uroniques (8%), comprenant entre 1 et 3,2W d'osamines, et dont la teneur en sulfates est comprise entre moins de 10% et 13% ; les EPS du groupe 3 comprennent entre 40 et 50% d'oses neutres, ont une très faible teneur en acides uroniques (entre 5 et 7 ), comprennent entre 1,2 et 1,7% d'osamines, et ont une teneur en sulfates variant entre 8,9 et 17,2 ; le groupe 4 est constitué d'EPS comprenant 46 à 49% d'oses neutres, possédant une teneur élevée en acides uroniques (entre 34 et 40%), comprenant entre 0,2 et 1,6% d'osamines, et ayant une teneur en sulfates comprise entre 9,7 et 13% ; le groupe 5 est constitué d'EPS à teneur relativement faible en oses neutres (38 à 47W), à teneur élevée en acides uroniques (26 à 32%), comprenant entre 1 et 1,6% d'osamines, et entre 5,2 et 10,1% de sulfates ; l'un des EPS de ce groupe comprend en outre un acide hexuronique portant un substituant lactate.
Un certain nombre des souches et des polymères décrits dans les publications de VINCENT et al. et GUEZENNEC et al. citées ci-dessus font l'objet de la demande
PCT FR 94/00169.
PCT FR 94/00169.
Récemment, RAGUENES et al. [Appl. Environ.
Microbiol. 62, 67-73 (1996)] ont décrit un EPS, différent des précédents, obtenu à partir d'une bactérie du genre
Alteromonas, (Alteromonas macleodíi subsp. fijiensis). . Cet
EPS comprend environ 38% d'oses neutres, 38% d'acides uroniques, 2,3W d'osamines, et environ 5% de sulfates ; sa composition en monosaccharides, déterminée après méthanolyse acide, est la suivante : 10,5% de glucose, 11,1% de galactose, 4,4W de mannose, 5% de mannose portant un substituant pyruvate, 12,2% d'acide glucuronique, et 6,3W d'acide galacturonique. Ce polymère possède une viscosité intrinsèque élevée (2600ml/g en NaCl 0,1 M).
Alteromonas, (Alteromonas macleodíi subsp. fijiensis). . Cet
EPS comprend environ 38% d'oses neutres, 38% d'acides uroniques, 2,3W d'osamines, et environ 5% de sulfates ; sa composition en monosaccharides, déterminée après méthanolyse acide, est la suivante : 10,5% de glucose, 11,1% de galactose, 4,4W de mannose, 5% de mannose portant un substituant pyruvate, 12,2% d'acide glucuronique, et 6,3W d'acide galacturonique. Ce polymère possède une viscosité intrinsèque élevée (2600ml/g en NaCl 0,1 M).
Les Inventeurs, en poursuivant leurs recherches sur les bactéries issues du milieu hydrothermal sous-marin profond ont maintenant isolé et caractérisé une nouvelle souche, qui a été dénommée dans un premier temps GY785.
Cette souche, qui a été déposée le 17 Octobre 1995 auprès de la CNCM (Collection Nationale de Cultures de
Microorganismes, 28, rue du Docteur Roux, 75724 PARIS,
FRANCE) sous le numéro I-1628, représente une nouvelle espèce d'Alteromonas, pour laquelle l'appellation
Alteromonas infernus est proposée.
Microorganismes, 28, rue du Docteur Roux, 75724 PARIS,
FRANCE) sous le numéro I-1628, représente une nouvelle espèce d'Alteromonas, pour laquelle l'appellation
Alteromonas infernus est proposée.
Alteromonas infernus est un bacille gram négatif droit, de taille comprise entre 0,6 et 0,8 ptm de large et 1,4 à 2 pm de long ; elle est mobile à l'aide d'un flagelle polaire ; c'est une bactérie encapsulée, non-pigmentée, nonluminescente.
C'est une bactérie aérobie stricte, nonfermentative, catalase +, cytochrome oxydase +, non dénitrifiante, non-accumulatrice de poly P -hydroxybutyrate (PHB).
Elle utilise une large variété de substrats carbonés ; elle peut utiliser en particulier comme seule source de carbone l'un quelconque des substrats suivants glycérol, D-xylose, galactose, glucose, fructose, mannitol, cellobiose, maltose, lactose, mélibiose, saccharose, amidon, gentobiose, D-turanose, et gluconate.
Sa croissance est optimale à une température comprise entre 25 et 350C, un pH compris entre 6 et 8, et une salinité comprise entre 20 et 40 g/l de NaCl ; son temps de génération dans ces conditions est compris entre 31 et 34 minutes.
Les tableaux 1 à 4 en annexe illustrent les propriétés métaboliques de la souche GY785.
La teneur en G+C de son ADN est de 48
L'analyse phylogénique du gène 16S rRNA (selon le protocole établi par RUIMY et al. [Int. J. Syst.Bacteriol 44, 416-426 (1994)], et la comparaison avec les analyses effectuées précédemment sur d'autres bactéries du genre Alteromonas [GAUTHIER et al. Int. J. Syst. Bacteriol., 45, 755-761 (1995)], a permis d'établir que la souche GY785 formait avec
Alteromonas macleodii un taxon bien défini. Les résultats de cette analyse sont illustrés par la Figure 1. Le pourcentage d'homologie de l'ADN de la souche GY785 est de 52t avec celui de A. macleodii subsp. macleodii et de 33% avec celui de A. macleodii subsp. fijiensis.
L'analyse phylogénique du gène 16S rRNA (selon le protocole établi par RUIMY et al. [Int. J. Syst.Bacteriol 44, 416-426 (1994)], et la comparaison avec les analyses effectuées précédemment sur d'autres bactéries du genre Alteromonas [GAUTHIER et al. Int. J. Syst. Bacteriol., 45, 755-761 (1995)], a permis d'établir que la souche GY785 formait avec
Alteromonas macleodii un taxon bien défini. Les résultats de cette analyse sont illustrés par la Figure 1. Le pourcentage d'homologie de l'ADN de la souche GY785 est de 52t avec celui de A. macleodii subsp. macleodii et de 33% avec celui de A. macleodii subsp. fijiensis.
Les caractéristiques morphologiques, biochimiques et phylogénétiques ci-dessus permettent d'inclure la souche GY785 dans le genre Alteromonas (BAUMANN et al. : Genus Alteromonas, Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology, Vol. 1, 342-352. (1984) KRIEG, and HOIT (ed.) ; The Williams and Wilkins Co., Baltimore]
Cependant, du fait que le pourcentage d'homologie ADN/ADN avec les deux sous-espèces du genre
Alteromonas décrites (subsp. macleodii et subsp. fijiensis) est inférieur à 70%, et que les trois souches diffèrent de par leur origine, présentent également des différences au niveau métabolique, comme le montrent les tableaux 1, 2, 3 et 4, et produisent en outre des EPS dotés de propriétés chimiques différentes, comme il sera montré ci-après, la souche GY785 peut être considérée comme représentant une nouvelle espèce d'Alteromonas, pour laquelle l'appellation
Alteromonas infernus est proposée.
Bacteriology, Vol. 1, 342-352. (1984) KRIEG, and HOIT (ed.) ; The Williams and Wilkins Co., Baltimore]
Cependant, du fait que le pourcentage d'homologie ADN/ADN avec les deux sous-espèces du genre
Alteromonas décrites (subsp. macleodii et subsp. fijiensis) est inférieur à 70%, et que les trois souches diffèrent de par leur origine, présentent également des différences au niveau métabolique, comme le montrent les tableaux 1, 2, 3 et 4, et produisent en outre des EPS dotés de propriétés chimiques différentes, comme il sera montré ci-après, la souche GY785 peut être considérée comme représentant une nouvelle espèce d'Alteromonas, pour laquelle l'appellation
Alteromonas infernus est proposée.
La présente Invention a pour objet des souches de bactéries possédant les caractéristiques, définies cidessus, de l'espèce Alteromonas infernus, et en particulier de la souche GY785 ; ceci englobe en particulier les bactéries dont l'ADN a un pourcentage d'homologie supérieur à 90% avec l'ADN de la souche GY785. Cet objet englobe également les bactéries obtenues à partir de bactéries de l'espèce Alteromonas infernus, et en particulier de la souche GY785, par mutation, ou par recombinaison génétique, telles que par exemple des bactéries de l'espèce Alteromonas infernus hébergeant un plasmide portant un gène hétérologue.
La présente Invention englobe également les différents produits qui peuvent être obtenus à partir desdites bactéries, ce qui comprend notamment leurs fractions cellulaires, les enzymes ainsi que les préparations d'acides nucléiques qui peuvent en être extraites, ainsi que les produits excrétés ou sécrétés par ces bactéries.
Ceci comprend des polysaccharides susceptibles d'être obtenus à partir des surnageants de cultures d'Alteromonas infernus, et en particulier un exopolysaccharide susceptible d'être obtenu par précipitation à l'éthanol, à partir de surnageants de cultures de la souche GY785.
L'analyse faite par les Inventeurs d'un exopolysaccharide conforme à la présente invention, produit par la souche GY785, fait apparaître les caractéristiques suivantes, déterminées à partir d'une préparation dudit polysaccharide comprenant environ 4% en poids de protéines - sa teneur en oses neutres est d'environ 57 + 4% en poids - sa teneur en acides uroniques est d'environ 42 + 5% en poids - sa composition en monosaccharides, déterminée après méthanolyse acide, est la suivante : environ 16,3% de glucose, environ 15,2% de galactose, environ 10,9% d'acide galacturonique, environ 6,3W d'acide glucuronique - il ne comprend pas d'unités saccharidiques portant les substituants suivants : acétate, pyruvate, lactate, succinate - il ne comprend pas d'osamines - sa teneur en sulfates est d'environ 5,5t en poids - sa viscosité intrinsèque est de l'ordre de 280 ml/g.
- son poids moléculaire moyen est de l'ordre de 106 Da.
Ce polysaccharide possède également une capacité maximum de rétention vis à vis du plomb, du zinc et du cadmium d'environ 250 mg de plomb, d'environ 150 mg de zinc, et d'environ 70 mg de cadmium par g de poids sec de polysaccharide.
La présente invention a également pour objet des fractions du polysaccharide défini ci dessus, et en particulier des fractions de bas poids moléculaire, et fortement sulfatées.
Du fait de leurs propriétés, et en particulier de leur pouvoir de rétention des métaux, les polysaccharides conformes à l'invention et leurs fractions peuvent être utilisés en pharmacologie, par exemple comme agents détoxifiants ou dans l'industrie, par exemple pour le traitement de rejets industriels, et la récupération de métaux, incluant les métaux lourds, radioéléments, alcalins et alcalino-terreux. En outre les fractions sulfatées de bas poids moléculaires peuvent trouver des applications pharmacologiques, par exemple comme agents anti-viraux, antitumoraux, ou anti-thrombotiques.
La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples décrivant la préparation et la caractérisation de polysaccharides de conformes à l'Invention.
Il va de soi toutefois que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'Invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
EXEMPLE 1 : PREPARATION D'EXOPOLYSACCHARIDES A PARTIR DE CULTURES D'ALTEROMONAS INFERNUS a) Cultures d'Alteromonas infernus
La souche GY785 est cultivée sur milieu 2216E [OPPENHEIMER, J. Mar. Res. 11, 10-18 (1952)] enrichi avec du glucose (30 g/l). La production est effectuée à 250C et à pH 7,2 en fermenteur de 2 litres contenant 1 litre du milieu 2216E-glucose [VINCENT et al. Appl. Environ. Microbiol., 60, 4134-4141 (1994)] . Après 54 heures de culture, le moût présente une viscosité de tordre de 6 380 centipoises.
La souche GY785 est cultivée sur milieu 2216E [OPPENHEIMER, J. Mar. Res. 11, 10-18 (1952)] enrichi avec du glucose (30 g/l). La production est effectuée à 250C et à pH 7,2 en fermenteur de 2 litres contenant 1 litre du milieu 2216E-glucose [VINCENT et al. Appl. Environ. Microbiol., 60, 4134-4141 (1994)] . Après 54 heures de culture, le moût présente une viscosité de tordre de 6 380 centipoises.
b) Purification de l'exopolysaccharide
Les bactéries sont séparées du moût par une centrifugation à 20 000 g pendant 2 heures, puis le polysaccharide est précipité à partir du surnageant à l'aide d'éthanol pur, selon le procédé décrit par TALMONT et al.
Les bactéries sont séparées du moût par une centrifugation à 20 000 g pendant 2 heures, puis le polysaccharide est précipité à partir du surnageant à l'aide d'éthanol pur, selon le procédé décrit par TALMONT et al.
[Food Hydrocolloids 5, 171-172 (1991)] ou RAGUENES et al., [Appl. and Environ. Microbiol., 62, 1, 67-73 (1996)]. Après plusieurs lavages éthanol/eau, le polymère obtenu est séché sous azote et conservé à température ambiante. 5,5 g de polysaccharide purifié ont ainsi été obtenus.
EXEMPLE 2 : CARACTERISATION PHYSICO-CHIMIQUE DE
L'EXOPOLYSACCHARIDE PRODUIT PAR LA BACTERIE ALTEROMONAS
INFERNUS.
L'EXOPOLYSACCHARIDE PRODUIT PAR LA BACTERIE ALTEROMONAS
INFERNUS.
a) Analyse chimique
Les teneurs en oses neutres, oses acides, oses amines et protéines du polysaccharide obtenu comme décrit à l'exemple 1 ci-dessus, sont déterminées selon les méthodes colorimétriques suivantes:
Dosages des oses neutres
Méthode de TILLMAMNS et PHILLIPPI [Biochem. J., 215, 36-60, (1929)] modifiée par REMINGTON [Biochem. J., 25, 1062 1071, (1931)]
Modification apportée: Pour éliminer l'interférence due aux acides uroniques, ceux-ci sont dosés par la méthode de
DISCHE [J. Biol Chem. 167, 189-198, (1947) ; MONTREUIL J. et
SPIK G., Méthodes colorimétriques de dosage des glucides totaux - Microdosage des glucides, Fascicule 1. (1963)].
Les teneurs en oses neutres, oses acides, oses amines et protéines du polysaccharide obtenu comme décrit à l'exemple 1 ci-dessus, sont déterminées selon les méthodes colorimétriques suivantes:
Dosages des oses neutres
Méthode de TILLMAMNS et PHILLIPPI [Biochem. J., 215, 36-60, (1929)] modifiée par REMINGTON [Biochem. J., 25, 1062 1071, (1931)]
Modification apportée: Pour éliminer l'interférence due aux acides uroniques, ceux-ci sont dosés par la méthode de
DISCHE [J. Biol Chem. 167, 189-198, (1947) ; MONTREUIL J. et
SPIK G., Méthodes colorimétriques de dosage des glucides totaux - Microdosage des glucides, Fascicule 1. (1963)].
Réactif: Orcinol sulfurique
Référence: 1 mannose/l galactose
Dosages des oses acides:
Deux méthodes ont été utilisées 1) Méthode de DISCHE (1947 ;référence citée ci-dessus).
Référence: 1 mannose/l galactose
Dosages des oses acides:
Deux méthodes ont été utilisées 1) Méthode de DISCHE (1947 ;référence citée ci-dessus).
Modification apportée : Pour éliminer l'interférence due aux hexoses ceux-ci sont dosés, comme mentionné ci-dessus, par la méthode de TILLMANS et PHILLIPPI (1929) modifiée par
REMINGTON (1931).
REMINGTON (1931).
Réactif: Carbazol
Référence: Acide glucuronique 2) Méthode de BLUMENKRANTZ et ASBOE-HANSEN [Anal. Biochem.
Référence: Acide glucuronique 2) Méthode de BLUMENKRANTZ et ASBOE-HANSEN [Anal. Biochem.
54, 484-489, (1973)].
Réactifs: Méta-hydroxy diphényl
Tétraborate de sodium 0,0125 M dans acide sulfurique concentré
Référence : Acide glucuronique.
Tétraborate de sodium 0,0125 M dans acide sulfurique concentré
Référence : Acide glucuronique.
Dosage des osamines:
Méthode D'ELSON et MORGAN [Biochem. J. 27, 1824-1828(1933)] modifiée par BELCHER et al. (Modification de la composition du réactif d'EHRLICH).
Méthode D'ELSON et MORGAN [Biochem. J. 27, 1824-1828(1933)] modifiée par BELCHER et al. (Modification de la composition du réactif d'EHRLICH).
Modification apportée: Transformation du réactif d'EHRLICH selon le procédé de BLIX (MONTREUIL et SPIK,. Microdosage des glucides, Fascicule 1, 1963).
Réactifs: solution alcaline d'acétyl-acétone
Réactif d'Ehrlich
Référence: glucosamine.
Réactif d'Ehrlich
Référence: glucosamine.
Dosage des protéines
Méthode de LOWRY [LOWRY et al. [J. Biol. Chem. 193, 265-275, (1953)]
Réactifs: Réactif A
Réactif B
Réactif FOLIN-CIOCALTEU :1N
Référence : albumine bovine.
Méthode de LOWRY [LOWRY et al. [J. Biol. Chem. 193, 265-275, (1953)]
Réactifs: Réactif A
Réactif B
Réactif FOLIN-CIOCALTEU :1N
Référence : albumine bovine.
Ces dosages ont permis d'établir que la préparation de polysaccharides obtenus comme décrit dans l'exemple 1 possède une teneur élevée en acides uroniques (42% + 5%), et en oses neutres (57% + 4W), et de très faibles teneurs en protéines (4%).
Composition en monosaccharides.
Le polysaccharide est soumis à une méthanolyse acide afin de les mettre sous la forme de méthylglycosides
N-acétylés et 0-triméthylsilylés selon la méthode de
KAMERLING et al, [Biochem. J., 151, 491-495, (1975)] , modifiée par MONTREUIL [MONTREUIL et al., Glycoproteins, in
Carbohydrate Analysis : A practical approach : Eds CHAPLIN et KENNEDY, IRL Press, Oxford, Washington DC, p. 143-204, (1986)]
Les différents sucres obtenus sont alors analysés par chromatographie en phase gazeuse, le cas échéant par couplage chromatographie phase gazeuse/spectrométrie de masse.
N-acétylés et 0-triméthylsilylés selon la méthode de
KAMERLING et al, [Biochem. J., 151, 491-495, (1975)] , modifiée par MONTREUIL [MONTREUIL et al., Glycoproteins, in
Carbohydrate Analysis : A practical approach : Eds CHAPLIN et KENNEDY, IRL Press, Oxford, Washington DC, p. 143-204, (1986)]
Les différents sucres obtenus sont alors analysés par chromatographie en phase gazeuse, le cas échéant par couplage chromatographie phase gazeuse/spectrométrie de masse.
Ces analyses montrent la présence de glucose, galactose, acide galacturonique, acide glucuronique dans des proportions (en poids) de 16,3%, 15,2%, 10,9%, 6,3W respectivement.
b) Analyse spectroscopique : RMN et Spectroscopie Infrarouge
La présence des groupes acétate et carboxyliques a été vérifiée par Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) et
Spectroscopie Infrarouge à Transformée de Fourrier. Cette dernière méthode permet en outre de quantifier la teneur en sulfates du polysaccharide (LIJOUR et al., 1994, Anal.
La présence des groupes acétate et carboxyliques a été vérifiée par Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) et
Spectroscopie Infrarouge à Transformée de Fourrier. Cette dernière méthode permet en outre de quantifier la teneur en sulfates du polysaccharide (LIJOUR et al., 1994, Anal.
Biochem., 220, 244-248).
Le spectre infra-rouge est représenté sur la figure 2.
Ce spectre permet de mettre en évidence des groupements carboxylés, ce qui confirme la présence d'acides uroniques.
La teneur en sulfates du polysaccharide, calculée à partir des spectres Infrarouge, est de 5,5W (en poids).
Les analyses de RMN (13C et 1H) confirment également la présence d'acides uroniques, et l'absence de substituants tels que le pyruvate, l'acétate, ou le succinate.
c) Etudes de rhéologie.
La viscosité intrinsèque [n](volume hydrodynamique occupé par un gramme de polymère dans un solvant donné) de la préparation de polysaccharides obtenus comme décrit dans l'exemple 1, en solution dans l'eau distillée additionnée de NaC1 à une concentration de 0.1 M, a été déterminée, par l'établissement de courbes d'écoulement en régime dilué à différentes concentrations.
L'étude des propriétés d'écoulement de ce polymère a également été réalisée en régime semi-dilué sur une solution à 0,3% de polysaccharide. Elle se traduit par une courbe d'écoulement donnant la viscosité relative nr en fonction du taux de cisaillement, la solution ayant subi un cycle d'augmentation et de diminution de vitesse en continu.
L'ensemble des mesures a été effectué à 200C en utilisant un viscosimètre à cylindres co-axiaux LOW SHEAR 40 (CONTRAVES).
La viscosité intrinsèque a ainsi été évaluée à 280 ml/g
Les courbes d'écoulement de ce polysaccharide en solution à 0,3% dans NaCl 0,1M sont représentées sur la
Figure 3.
Les courbes d'écoulement de ce polysaccharide en solution à 0,3% dans NaCl 0,1M sont représentées sur la
Figure 3.
EXEMPLE 3 : ETUDE DU POUVOIR DE BIOSORPTION, VIS A VIS DE
METAUX LOURDS, DU POLYSACCHARIDE PRODUIT PAR ALTEROMONAS INFERNUS.
METAUX LOURDS, DU POLYSACCHARIDE PRODUIT PAR ALTEROMONAS INFERNUS.
Le pouvoir de biosorption du polysaccharide produit par Al teromonas infernus vis à vis de 3 métaux lourds (Plomb, Cadmium et Zinc) a été déterminé comme suit
Des solutions contenant 0.1% en poids de préparation de polysaccharide obtenue comme décrit dans l'exemple 1, ont été mises en présence de nitrates de plomb, cadmium ou zinc, à des concentrations comprises entre O et 1000 ppm (mg/kg). Après un temps de contact de 3 heures, les différentes solutions ont été filtrées (porosité 30 000 Da), et les ions non piégés par la préparation de polysaccharide, ont été analysés dans le filtrat par spectrophotométrie d'absorption atomique.
Des solutions contenant 0.1% en poids de préparation de polysaccharide obtenue comme décrit dans l'exemple 1, ont été mises en présence de nitrates de plomb, cadmium ou zinc, à des concentrations comprises entre O et 1000 ppm (mg/kg). Après un temps de contact de 3 heures, les différentes solutions ont été filtrées (porosité 30 000 Da), et les ions non piégés par la préparation de polysaccharide, ont été analysés dans le filtrat par spectrophotométrie d'absorption atomique.
Des expérimentations menées pour différentes concentrations en nitrates de plomb, de zinc et de cadmium ont permis de déterminer, pour ces trois éléments, les capacités maximum de biosorption du polymère.
Les résultats sont illustrés par la figure 4, qui montre que les capacités maximum de rétention de ce polymère vis à vis du plomb, du zinc et du cadmium sont respectivement de 250 mg/g (poids sec de polymère), 150 mg/g (poids sec de polymère) et 70 mg/g (poids sec polymère).
REACTIONS/ENZYMES <SEP> GY785 <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp. <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp.
<tb>
<tb>
macleodii <SEP> fijiensis
<tb> Réduction <SEP> des <SEP> nitrates <SEP> en <SEP> nitrites <SEP> - <SEP> - <SEP>
Réduction <SEP> des <SEP> nitrates <SEP> en <SEP> azote <SEP> - <SEP> - <SEP>
Production <SEP> d'indole <SEP> - <SEP> - <SEP>
Acidification <SEP> du <SEP> glucose <SEP> - <SEP> - <SEP>
Arginine <SEP> dibydrolase <SEP> - <SEP> - <SEP>
Uréase <SEP> - <SEP> - <SEP>
Hydrolyse <SEP> de <SEP> l'esculine <SEP> (ss-glucosidase) <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Hydrolyse <SEP> de <SEP> la <SEP> gélatine <SEP> (protéase) <SEP> # <SEP> + <SEP> +
<tb> ss-galactosidase <SEP> (PNPG) <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> du <SEP> glucose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> de <SEP> l'arabinose <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> mannose <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> mannitol <SEP> + <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> de <SEP> la <SEP> N-acétyl-glucosamine <SEP> - <SEP> + <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> maltose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> du <SEP> gluconate <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> du <SEP> caprate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> de <SEP> l'adipate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> malate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> citrate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> phényl-acétate <SEP> - <SEP> - <SEP> TABLEAU 1.
<tb> Réduction <SEP> des <SEP> nitrates <SEP> en <SEP> nitrites <SEP> - <SEP> - <SEP>
Réduction <SEP> des <SEP> nitrates <SEP> en <SEP> azote <SEP> - <SEP> - <SEP>
Production <SEP> d'indole <SEP> - <SEP> - <SEP>
Acidification <SEP> du <SEP> glucose <SEP> - <SEP> - <SEP>
Arginine <SEP> dibydrolase <SEP> - <SEP> - <SEP>
Uréase <SEP> - <SEP> - <SEP>
Hydrolyse <SEP> de <SEP> l'esculine <SEP> (ss-glucosidase) <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Hydrolyse <SEP> de <SEP> la <SEP> gélatine <SEP> (protéase) <SEP> # <SEP> + <SEP> +
<tb> ss-galactosidase <SEP> (PNPG) <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> du <SEP> glucose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> de <SEP> l'arabinose <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> mannose <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> mannitol <SEP> + <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> de <SEP> la <SEP> N-acétyl-glucosamine <SEP> - <SEP> + <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> maltose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> du <SEP> gluconate <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Assimilation <SEP> du <SEP> caprate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> de <SEP> l'adipate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> malate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> citrate <SEP> - <SEP> - <SEP>
Assimilation <SEP> du <SEP> phényl-acétate <SEP> - <SEP> - <SEP> TABLEAU 1.
<tb>
<SEP> SUBSTRAT <SEP> GY785 <SEP> A.macleodii <SEP> sp. <SEP> macleodii <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp. <SEP> fijiensis
<tb> Glycerol <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Erythritol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Arabinose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> L <SEP> Arabinose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Ribose <SEP> - <SEP> - <SEP> +
<tb> D <SEP> Xylose <SEP> + <SEP> + <SEP>
<tb> L <SEP> Xylose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Adonitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> ss <SEP> Methyl-D <SEP> Xyloside <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Galactose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Glucose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Fructose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Mannose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Sorbose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Rhamnose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Dulcitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Inositol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Mannitol <SEP> + <SEP> + <SEP>
<tb> Sorbitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> α <SEP> Methyl-D <SEP> Mannoside <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> α <SEP> methyl-D <SEP> glucoside <SEP> - <SEP> - <SEP> +
<tb> N <SEP> Acetyl <SEP> Glucosamine <SEP> - <SEP> + <SEP>
<tb> Amygdaline <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Arbutine <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Esculine <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Salicine <SEP> + <SEP> - <SEP> +
<tb> Cellobiose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Maltose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Lactose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Melibiose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Sucrose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Trehalose <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Inuline <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Melezitose <SEP> - <SEP> + <SEP>
<tb> Raffinose <SEP> - <SEP> - <SEP> +
<tb> Amidon <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Glycogen <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Xylitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Gentobiose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> D <SEP> Turanose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> D <SEP> Lyxose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Tagntose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Fucose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> L <SEP> Fucose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Arabitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> L <SEP> Arabitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Gluconate <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> 2 <SEP> Keto <SEP> Gluconate <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> 5 <SEP> Keto <SEP> Gluconate <SEP> - <SEP> - <SEP>
TABLEAU 2
<tb> Glycerol <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Erythritol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Arabinose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> L <SEP> Arabinose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Ribose <SEP> - <SEP> - <SEP> +
<tb> D <SEP> Xylose <SEP> + <SEP> + <SEP>
<tb> L <SEP> Xylose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Adonitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> ss <SEP> Methyl-D <SEP> Xyloside <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Galactose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Glucose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Fructose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Mannose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Sorbose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Rhamnose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Dulcitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Inositol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Mannitol <SEP> + <SEP> + <SEP>
<tb> Sorbitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> α <SEP> Methyl-D <SEP> Mannoside <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> α <SEP> methyl-D <SEP> glucoside <SEP> - <SEP> - <SEP> +
<tb> N <SEP> Acetyl <SEP> Glucosamine <SEP> - <SEP> + <SEP>
<tb> Amygdaline <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Arbutine <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Esculine <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Salicine <SEP> + <SEP> - <SEP> +
<tb> Cellobiose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Maltose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Lactose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Melibiose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Sucrose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Trehalose <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Inuline <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Melezitose <SEP> - <SEP> + <SEP>
<tb> Raffinose <SEP> - <SEP> - <SEP> +
<tb> Amidon <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Glycogen <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Xylitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Gentobiose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> D <SEP> Turanose <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> D <SEP> Lyxose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Tagntose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Fucose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> L <SEP> Fucose <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> D <SEP> Arabitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> L <SEP> Arabitol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> Gluconate <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> 2 <SEP> Keto <SEP> Gluconate <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> 5 <SEP> Keto <SEP> Gluconate <SEP> - <SEP> - <SEP>
TABLEAU 2
ENZYME <SEP> GY785 <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp. <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp.
<tb>
<tb>
macleodii <SEP> fijiensis
<tb> Phosphatase <SEP> alcaline <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Estérase <SEP> (C4) <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Estérase <SEP> lipase <SEP> (C8) <SEP> ++ <SEP> ++ <SEP> ++
<tb> Lipase <SEP> (C14) <SEP> - <SEP> - <SEP>
Leucine <SEP> arylamidase <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Valine <SEP> arylamidase <SEP> - <SEP> ++ <SEP> +
<tb> Cystine <SEP> arylamidase <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Trypsine <SEP> - <SEP> - <SEP>
Chymotrypsine <SEP> - <SEP> - <SEP>
Phosphatase <SEP> acide <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Naphtol-As-BI-phosphohydrolase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> galactosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> ss <SEP> galactosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> ss <SEP> glucuronidase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> glucosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> ss <SEP> glucosidase <SEP> - <SEP> - <SEP>
N-acetyl-ss-glucosaminidase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> mannosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> fucosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> TABLEAU 3
<tb> Phosphatase <SEP> alcaline <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Estérase <SEP> (C4) <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Estérase <SEP> lipase <SEP> (C8) <SEP> ++ <SEP> ++ <SEP> ++
<tb> Lipase <SEP> (C14) <SEP> - <SEP> - <SEP>
Leucine <SEP> arylamidase <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Valine <SEP> arylamidase <SEP> - <SEP> ++ <SEP> +
<tb> Cystine <SEP> arylamidase <SEP> - <SEP> + <SEP> +
<tb> Trypsine <SEP> - <SEP> - <SEP>
Chymotrypsine <SEP> - <SEP> - <SEP>
Phosphatase <SEP> acide <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Naphtol-As-BI-phosphohydrolase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> galactosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> ss <SEP> galactosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> ss <SEP> glucuronidase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> glucosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> ss <SEP> glucosidase <SEP> - <SEP> - <SEP>
N-acetyl-ss-glucosaminidase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> mannosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> α <SEP> fucosidase <SEP> - <SEP> - <SEP> TABLEAU 3
ANTIBIOTIQUE <SEP> [C] <SEP> mg/l <SEP> GY785 <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp. <SEP> A. <SEP> macleodii <SEP> sp.
<tb>
<tb>
macleodii <SEP> fijiensis
<tb> Amoxicilline <SEP> 4-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Amoxicilline <SEP> + <SEP> Clav. <SEP> 4-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Cefalotine <SEP> 8-32 <SEP> I <SEP> I <SEP> I
<tb> Néomycine <SEP> 8-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Tobramycine <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Gentamicine <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Netilmicine <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Chloramphénicol <SEP> 8-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Tétracycline <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Colistine <SEP> 4 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Bacitracine <SEP> 2 <SEP> R <SEP> R <SEP> R
<tb> Acide <SEP> nalidixique <SEP> 8-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Pefloxacine <SEP> 1-4 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Rifampicine <SEP> 4-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Cotrimoxacol <SEP> 2-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> S : Susceptible I : Intermédiaire R: Résistant
TABLEAU 4
<tb> Amoxicilline <SEP> 4-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Amoxicilline <SEP> + <SEP> Clav. <SEP> 4-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Cefalotine <SEP> 8-32 <SEP> I <SEP> I <SEP> I
<tb> Néomycine <SEP> 8-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Tobramycine <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Gentamicine <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Netilmicine <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Chloramphénicol <SEP> 8-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Tétracycline <SEP> 4-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Colistine <SEP> 4 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Bacitracine <SEP> 2 <SEP> R <SEP> R <SEP> R
<tb> Acide <SEP> nalidixique <SEP> 8-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Pefloxacine <SEP> 1-4 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Rifampicine <SEP> 4-16 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> Cotrimoxacol <SEP> 2-8 <SEP> S <SEP> S <SEP> S
<tb> S : Susceptible I : Intermédiaire R: Résistant
TABLEAU 4
Claims (6)
1) Souche bactérienne, possédant les caractéristiques de l'espèce dénommée Alteromonas infernus, définies ci-dessous
- bacille gram négatif droit, de taille comprise entre 0,6 et 0,8 Fm de large et 1,4 à 2 ptm de long
- mobile à l'aide d'un flagelle polaire
- bactérie encapsulée, non-pigmentée, nonluminescente
- bactérie aérobie stricte, non-fermentative, catalase +/ cytochrome oxydase +, non-dénitrifiante, nonaccumulatrice de poly ss-hydroxybutyrate (PHB)
- peut utiliser comme seule source de carbone l'un quelconque des substrats suivants : glycérol, D-xylose, galactose, glucose, fructose, mannitol, cellobiose, maltose, lactose, mélibiose, saccharose, amidon, gentobiose, Dturanose, gluconate
- son ADN a une teneur en G+C de 48,1%, un pourcentage d'homologie de 52t avec l'ADN de A. macleodil subsp. macleodii et un pourcentage d'homologie de 33% avec 1'ADN de A. macleodii subsp. fijiensis.
2) Souche bactérienne selon la revendication 1, possédant les caractéristiques de la souche GY785 déposée le 17 Octobre 1995 auprès de la CNCM sous le numéro I-1628.
3) Polysaccharide susceptible d'être obtenu par précipitation à l'éthanol, à partir de surnageants de cultures d'une souche bactérienne selon une quelconque des revendications 1 ou 2.
4) Polysaccharide selon la revendication 3, caractérisé en ce que - sa teneur en oses neutres est d'environ 57 + 4% en poids - sa teneur en acides uroniques est d'environ 42 + 5% en poids - sa composition en monosaccharides, déterminée après méthanolyse acide, est la suivante : environ 16,3% de glucose, environ 15,2% de galactose, environ 10,9% d'acide galacturonique, environ 6,3% d'acide glucuronique - il ne comprend pas d'unités saccharidiques portant les substituants suivants : acétate, pyruvate, lactate, succinate - il ne comprend pas d'osamines - sa teneur en sulfates est d'environ 5,5% en poids - sa viscosité intrinsèque est de l'ordre de 280 ml/g.
- son poids moléculaire moyen est de l'ordre de 106 Da.
5) Utilisation d'un polysaccharide selon une quelconque des revendications 3 ou 4 pour la capture de métaux à partir d'une solution contenant lesdits métaux.
6) Polysaccharide selon une quelconque des revendications 3 ou 4 pour l'utilisation comme médicament.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9613243A FR2755142B1 (fr) | 1996-10-30 | 1996-10-30 | Souche bacterienne marine du genre alteromonas, exopolysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9613243A FR2755142B1 (fr) | 1996-10-30 | 1996-10-30 | Souche bacterienne marine du genre alteromonas, exopolysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2755142A1 true FR2755142A1 (fr) | 1998-04-30 |
| FR2755142B1 FR2755142B1 (fr) | 1999-01-15 |
Family
ID=9497173
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR9613243A Expired - Lifetime FR2755142B1 (fr) | 1996-10-30 | 1996-10-30 | Souche bacterienne marine du genre alteromonas, exopolysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2755142B1 (fr) |
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|---|---|---|---|---|
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| FR2871476A1 (fr) * | 2004-06-14 | 2005-12-16 | Ifremer | Derives depolymerises sulfates d'exopolysaccharides (eps) provenant de bacteries marines mesophiles, leur procede de preparation et leurs utilisations en regeneration tissulaire |
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| US9125883B2 (en) | 2004-06-14 | 2015-09-08 | Institut Francais De Recherche Pour L'exploitation De La Mer (Ifremer) | Sulfated depolymerized derivatives of exopolysaccharides (EPS) from mesophilic marine bacteria, method for preparing same, and uses thereof in tissue regeneration |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2755142B1 (fr) | 1999-01-15 |
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