FR2695932A1 - Protéine liant la chitine, procédé pour sa production, et insecticide et fongicide la contenant. - Google Patents
Protéine liant la chitine, procédé pour sa production, et insecticide et fongicide la contenant. Download PDFInfo
- Publication number
- FR2695932A1 FR2695932A1 FR9302460A FR9302460A FR2695932A1 FR 2695932 A1 FR2695932 A1 FR 2695932A1 FR 9302460 A FR9302460 A FR 9302460A FR 9302460 A FR9302460 A FR 9302460A FR 2695932 A1 FR2695932 A1 FR 2695932A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- sep
- protein
- chitin
- binding
- positive
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108091011157 chitin binding proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 5
- 102000021178 chitin binding proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 title description 12
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 title 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 10
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 claims abstract description 5
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 24
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 claims description 5
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 claims description 5
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 claims description 4
- 108010089807 chitosanase Proteins 0.000 claims description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000003641 microbiacidal effect Effects 0.000 description 7
- 239000002855 microbicide agent Substances 0.000 description 7
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 6
- 229940124561 microbicide Drugs 0.000 description 6
- 101000962469 Homo sapiens Transcription factor MafF Proteins 0.000 description 5
- 102100039187 Transcription factor MafF Human genes 0.000 description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- -1 yeast extract Chemical class 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 2
- 241000254154 Sitophilus zeamais Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 2
- RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N chitotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)[C@@H](CO)O1 RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLKSXJAPRDAENT-OWGHDAAGSA-N 3-[(3r,6r,9s,16s,19r,22s,25s)-3,9-bis(2-amino-2-oxoethyl)-16-[(1r)-1-hydroxyethyl]-19-(hydroxymethyl)-6-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-13-octyl-2,5,8,11,15,18,21,24-octaoxo-1,4,7,10,14,17,20,23-octazabicyclo[23.3.0]octacosan-22-yl]propanoic acid Chemical compound C([C@H]1NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CC(NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](CC(N)=O)NC1=O)CCCCCCCC)C1=CC=C(O)C=C1 VLKSXJAPRDAENT-OWGHDAAGSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001237431 Anomala Species 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241001530056 Athelia rolfsii Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241001465180 Botrytis Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241001660259 Cereus <cactus> Species 0.000 description 1
- 101710134123 Chitin-binding lectin Proteins 0.000 description 1
- 229940125842 Chitinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000222356 Coriolus Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 101800002189 Hevein Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 229930182764 Polyoxin Natural products 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000231139 Pyricularia Species 0.000 description 1
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241001646063 Tyromyces Species 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- MDWNFWDBQGOKNZ-XYUDZHFQSA-N allosamidin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)NC(C)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H]2N=C(O[C@H]2[C@@H]1CO)N(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1NC(C)=O MDWNFWDBQGOKNZ-XYUDZHFQSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008144 egg development Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- WKMZPSWMEXVKKG-XITFREQTSA-N hevein Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)OC(=O)CC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 WKMZPSWMEXVKKG-XITFREQTSA-N 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 150000002696 manganese Chemical class 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000017448 oviposition Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- YEBIHIICWDDQOL-YBHNRIQQSA-N polyoxin Polymers O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(C=O)N)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C(O)=O)=C1 YEBIHIICWDDQOL-YBHNRIQQSA-N 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920003124 powdered cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019814 powdered cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000020275 sunflower milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
L'invention fournit une nouvelle protéine CB1 liant la chitine, ayant des propriétés spécifiques. La protéine CB1 est produite en faisant incuber des bactéries appartenant au genre Bacillus, notamment Bacillus licheniformis CB1 (FERM BP-4008), ayant la faculté de produire la protéine CB1, et en recueillant la protéine CB1 à partir de la culture. L'invention fournit également un fongicide et un insecticide contenant chacun la protéine CB1. Domaine d'application: fongicides et insecticides.
Description
La présente invention concerne une nouvelle protéine
CBl liant la chitine, possédant à la fois une propriété fongicide et une propriété insecticide, ainsi qu'un procédé pour sa production.
CBl liant la chitine, possédant à la fois une propriété fongicide et une propriété insecticide, ainsi qu'un procédé pour sa production.
Une substance chitineuse est contenue dans la paroi cellulaire de champignons et l'integument d'insectes, d mais, en général, ne se rencontre pas chez les animaux et végétaux supérieurs. L'élaboration de produits chimiques capables d'inhiber la biosynthèse de la chitine et son métabolisme a été tentée, mais il n'a été mentionné jusqu'à présent qu'un inhibiteur de chitine-synthétase nommé polyoxine (The Journal of Antibiotics, Vol. 18, page 131, 1965) et un inhibiteur de chitinase nommé allosamidine (The Journal 0f Antibiotics, Vol. 40, page 296, 1982).
Il a été signalé une substance microbicide (dont le nom n'est pas donné) produite par des bactéries du genre Bacillus, ayant une propriété microbicide envers les moisissures (Journal of Pesticide Science, Vol. 15, page 1, 1990). Cependant, cette substance diffère de la protéine CB1 de la présente invention , car elle est à peine extraite par le butanol et reste en grande partie dans la phase aqueuse lors de l'extraction au butanol (Journal of Pesticide
Science, Vol. 15, page 7, 1990) et son poids moléculaire est d'environ 52 000 (Proceeding of Annual Meeting of Japan
Society for Bioscience, page 308, 1989). Une substance microbicide dérivée de Bacillus subtilis (brevet des E.U.A.
Science, Vol. 15, page 7, 1990) et son poids moléculaire est d'environ 52 000 (Proceeding of Annual Meeting of Japan
Society for Bioscience, page 308, 1989). Une substance microbicide dérivée de Bacillus subtilis (brevet des E.U.A.
NO 5 061 495) a un poids moléculaire supérieur d'environ 10 000 ou plus à celui de la protéine CBî et la composition en acides gras de la première est très différente de celle de la seconde.
La bacillomycine est connue comme un lipopeptide fongicide produit par des bactéries du genre Bacillus (The Journal of Antibiotics, Vol. 27, page 1600, 1984).
Cependant, cette substance présente un bas poids moléculaire de 10 000 ou moins et diffère également de la protéine CBî de la présente invention par comparaison de leurs compositions respectives en acides gras constitutifs.
De nouvelles substances fongicides et insecticides en rapport avec la chitine sont toujours recherchées comme agents chimiques agissant spécifiquement sur les champignons et les insectes sans agir sur les animaux et les végétaux supérieurs. Le but de la présente invention est de fournir une nouvelle protéine cbl liant la chitine, possédant à la fois une propriété fongicide et une propriété insecticide, et un procédé pour sa production.
La Demanderesse a conduit des études sérieuses et réitérées pour atteindre ce but, et elle a ainsi découvert qu une substance inhibant la croissance de champignons et d'insectes se trouve dans une culture de cellules d'une souche du genre Bacillus. La substance peut être extraite de la culture par le butanol. Après avoir été isolée et purifiée, la substance s'est révélée être une substance protéique qui est liée à la chitine, mais ne possède pas d'activité chitinase, D'après ses diverses propriétés physico-chimiques et biologiques, elle a été identifiée comme une nouvelle protéine et a été appelée CB1.
En conséquence, la présente invention fournit une protéine cBl liant la chitine, ayant les propriétés physico-chimiques mentionnées ci-dessous et possédant à la fois une propriété fongicide et une propriété insecticide, un procédé de production de la protéine CBî par culture de bactéries du genre Bacillus ayant la faculté de produire la protéine CB1 puis séparation de la protéine CBî à partir de la culture des cellules, et un fongicide et un insecticide contenant chacun la protéine CBî comme ingrédient actif.
Sur les dessins annexés :
la Figure 1 montre un spectre d'absorption dans l'ultraviolet de la protéine CBî dissoute dans l'eau ; et
la Figure 2 montre un spectre d'absorption dans l'infrarouge de la protéine CBî par une pastille de bromure de potassium.
la Figure 1 montre un spectre d'absorption dans l'ultraviolet de la protéine CBî dissoute dans l'eau ; et
la Figure 2 montre un spectre d'absorption dans l'infrarouge de la protéine CBî par une pastille de bromure de potassium.
La présente invention sera expliquée en détail ci-dessous.
Les microorganismes utilisés dans la présente invention ne sont pas spécifiquement définis : ils appartiennent au genre Bacillus et ont la faculté de produire la protéine CB1. A titre d'exemple, on mentionne la souche
Bacillus licheniformis CBî qui a été isolée par la Demanderesse. Ses propriétés microbiennes sont les suivantes (1) Caractéristiques Morphologiques
On utilise des cellules de la souche cultivée dans un milieu de bouillon nutritif gélosé. La forme des cellules est bacillaire et leurs dimensions sont de 0,5 à 1,0 Fm x 2,0 à 7,0 Fm. Les cellules se tiennent souvent en channe.
Bacillus licheniformis CBî qui a été isolée par la Demanderesse. Ses propriétés microbiennes sont les suivantes (1) Caractéristiques Morphologiques
On utilise des cellules de la souche cultivée dans un milieu de bouillon nutritif gélosé. La forme des cellules est bacillaire et leurs dimensions sont de 0,5 à 1,0 Fm x 2,0 à 7,0 Fm. Les cellules se tiennent souvent en channe.
Elles sont mobiles et leurs flagelles sont disposées sur leur pourtour. Elles forment des spores sphériques ou ovales ayant chacune des dimensions de 0,5 à 1,0 m x 0,5 à 1,0 Fm.
Elles sont positives à la coloration de Gram.
(2) Conditions de Croissance dans des Milieux
Culture sur plaque de bouillon nutritif gélosé
La croissance des cellules est bonne et donne des colonies blanches et rugueuses. La surface de chaque colonie n1 est pas brillante et elle est plissée. Aucun colorant diffusif n'est reconnu dans les colonies développées.
Culture sur plaque de bouillon nutritif gélosé
La croissance des cellules est bonne et donne des colonies blanches et rugueuses. La surface de chaque colonie n1 est pas brillante et elle est plissée. Aucun colorant diffusif n'est reconnu dans les colonies développées.
Culture liquide en bouillon nutritif : Les cellules croissent sur la surface du milieu en formant une pellicule sur celui-ci.
Culture en piqûre sur bouillon nutritif à la gélatine : Les cellules croissent sur la surface du milieu en formant des couches liquéfiées.
Lait tournesolé : Le milieu devient presque incolore et transparent à cause de la peptonisation et de la réduction du tournesol.
(3) Propriétés Physiologiques et Biochimiques
Réduction des nitrates : Positif
Dénitrogénation : Négatif
Test MR : Positif
Test VP : Positif
Formation d'indole : Négatif
Formation d'hydrogène sulfuré : Négatif
Hydrolyse de l'amidon : Positif
Consommation d'acide citrique
Milieu de Koser : Positif
Milieu de Christensen : Positif
Consommation de sources d'azote minérales
Nitrates (nitrate de sodium) : Positif
Sels d'ammonium (sulfate d'ammonium) : Positif
Formation de colorants : Négatif
Uréase : Positif
Oxydase : Négatif
Catalase : Positif
Intervalles de Croissance
pH 4 : Pas de croissance
pH 5 : Croissance
pH 6 : Croissance
pH 7 : Croissance
pH 8 : Croissance
pH 9 : Croissance
150C : Pas de croissance
200C : Croissance
300C : Croissance
400C : Croissance
500C : Croissance
550C : Croissance
600C : Pas de croissance
Réaction à l'oxygène : Anaérobie facultatif
Test O-F : Fermentescible
Formation d'acides à partir de saccharides
L-arabinose : Positif
D-xylose : Positif
D-glucose : Positif
D-mannose : Positif
D-fructose : Positif
D-galactose : Négatif
Maltose : Positif
Saccharose : Positif
Lactose : Négatif
Tréhalose : Positif
D-sorbitol : Positif
D-mannitol : Positif
Inositol : Positif
Glycérol : Positif
Amidon : Positif
E n t r a i t a n t ces saccharides, la formation de gaz n'est pas observée.
Réduction des nitrates : Positif
Dénitrogénation : Négatif
Test MR : Positif
Test VP : Positif
Formation d'indole : Négatif
Formation d'hydrogène sulfuré : Négatif
Hydrolyse de l'amidon : Positif
Consommation d'acide citrique
Milieu de Koser : Positif
Milieu de Christensen : Positif
Consommation de sources d'azote minérales
Nitrates (nitrate de sodium) : Positif
Sels d'ammonium (sulfate d'ammonium) : Positif
Formation de colorants : Négatif
Uréase : Positif
Oxydase : Négatif
Catalase : Positif
Intervalles de Croissance
pH 4 : Pas de croissance
pH 5 : Croissance
pH 6 : Croissance
pH 7 : Croissance
pH 8 : Croissance
pH 9 : Croissance
150C : Pas de croissance
200C : Croissance
300C : Croissance
400C : Croissance
500C : Croissance
550C : Croissance
600C : Pas de croissance
Réaction à l'oxygène : Anaérobie facultatif
Test O-F : Fermentescible
Formation d'acides à partir de saccharides
L-arabinose : Positif
D-xylose : Positif
D-glucose : Positif
D-mannose : Positif
D-fructose : Positif
D-galactose : Négatif
Maltose : Positif
Saccharose : Positif
Lactose : Négatif
Tréhalose : Positif
D-sorbitol : Positif
D-mannitol : Positif
Inositol : Positif
Glycérol : Positif
Amidon : Positif
E n t r a i t a n t ces saccharides, la formation de gaz n'est pas observée.
La présente souche est un bacille Gram-positif, comportant des flagelles autour de la cellule. Ses proprié tés sont caractéristiques des bactéries du genre
Bacillus, qui croissent en conditions aérobies et forment des endospores. La comparaison des propriétés de Bacillus licheniformis décrites dans "Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology", Vol. 2 avec les propriétés susmentionnées de la présente souche montre que les résultats sont identiques, et il a donc été jugé que la présente souche est susceptible d'appartenir à l'espèce Bacillus licheniformis. La présente souche a été déposée à l'institut de Recherche sur les
Fermentations du Japon en tant que Bacillus licheniformis CBî (FERM BP-4008).Dans la présente invention, on peut également utiliser des mutants naturels ou artificiels dérivés de la présente souche, pourvu qu'ils aient la faculté de produire la protéine CB1.
Bacillus, qui croissent en conditions aérobies et forment des endospores. La comparaison des propriétés de Bacillus licheniformis décrites dans "Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology", Vol. 2 avec les propriétés susmentionnées de la présente souche montre que les résultats sont identiques, et il a donc été jugé que la présente souche est susceptible d'appartenir à l'espèce Bacillus licheniformis. La présente souche a été déposée à l'institut de Recherche sur les
Fermentations du Japon en tant que Bacillus licheniformis CBî (FERM BP-4008).Dans la présente invention, on peut également utiliser des mutants naturels ou artificiels dérivés de la présente souche, pourvu qu'ils aient la faculté de produire la protéine CB1.
Pour la culture des cellules productrices de CB1, on utilise convenablement comme sources de carbone des saccharides tels que le glucose, le maltose et l'amidon.
Comme sources d'azote, on utilise des composés organiques d'azote et des composés minéraux d'azote tels que l'extrait de levure, l'extrait de boeuf, l'extrait de malt, la peptone, le sulfate d'ammonium, le chlorure d'ammonium et l'urée, séparément ou en association de deux ou plusieurs d'entre eux. De plus, on peut facultativement ajouter au milieu divers sels de métaux lourds tels que des sels de fer et de manganèse, ainsi que des vitamines telles que la vitamine B et la biotine.
Les cellules productrices de CBî sont de préférence cultivées en conditions aérobies, par exemple par culture sous secousses ou culture agitée par l'air. La température de culture est de préférence de 25 à 450C, et le pH du milieu est de préférence de 6 à 9. La durée de culture peut être de 15 à 120 heures, de préférence de 72 à 96 heures.
La protéine CBî existe dans le surnageant résultant de la centrifugation de la culture des cellules, mais non sur les surfaces ou à l'intérieur des cellules. Par consé- quent, pour purifier et isoler CBî de la culture, on peut employer convenablement n'importe quelle technique de séparation généralement employée pour purifier une protéine extracellulaire en éliminant les microorganismes. Par exemple, des techniques applicables sont l'élimination des cellules par centrifugation, le relargage avec le sulfate d'ammonium, l'ultrafiltration, la dialyse, la chromatographie avec divers gels échangeurs d'ions ou gels de tamis moléculaires comme milieux, et l'électrophorèse sur gel.
Lorsque du n-butanol ou de l'isobutanol est ajouté à la culture et agité, presque toute la protéine CBî de la culture passe dans la phase butanol. La phase butanol est recueillie et un solvant organique tel que l'hexane y est ajouté et agité, si bien que l'eau contenue dans la phase butanol est séparée en redonnant une petite quantité d'une phase aqueuse dans laquelle CBî passe également. Il en résulte que la protéine CBî est ainsi fortement concentrée.
Étant donné que la phase aqueuse ne contient presque aucune substance de haut poids moléculaire autre que CB1, cette phase aqueuse est recueillie, puis soumise à une chromatographie, en utilisant comme milieu un gel de tamis moléculaire tel que Sephacryl S-300HR (fabriqué par Pharmacia Co.,
Suède) en même temps qu'un tampon approprié tel qu'un tampon acétate d'ammonium, pour purifier complètement CB1.
Suède) en même temps qu'un tampon approprié tel qu'un tampon acétate d'ammonium, pour purifier complètement CB1.
Les propriétés de la protéine CBî, telle qu'obtenue dans l'exemple décrit ci-dessous, sont comme suit
1) Aspect Extérieur : Poudre blanche.
1) Aspect Extérieur : Poudre blanche.
2) Point de fusion : Environ 1370C.
3) Éléments constitutifs : C, H, N, O, S.
4) Analyse élémentaire :
C 60,90 %
H 9,61 %
N 12,19 %
S 0,29 %.
C 60,90 %
H 9,61 %
N 12,19 %
S 0,29 %.
5) Poids moléculaire : Environ 45 000 (par filtration
sur gel).
sur gel).
6) pH au point isoélectrique : Environ 4,3.
7) Spectre d'absorption dans l'ultraviolet : Amax
196, 275
8) Spectre d'absorption dans l'infrarouge : (cm-1)
3310, 2950, 1730, 1660, 1540, 1470, 1390, 1200,
650.
196, 275
8) Spectre d'absorption dans l'infrarouge : (cm-1)
3310, 2950, 1730, 1660, 1540, 1470, 1390, 1200,
650.
9) Solubilité
Soluble dans l'eau, le méthanol, méthanol et le
butanol.
Soluble dans l'eau, le méthanol, méthanol et le
butanol.
Insoluble dans l'acétate d'éthyle, le chloroforme,
l'éther, le benzène et l'hexane.
l'éther, le benzène et l'hexane.
10) Extraction par solvant
Presque totalement extraite par le n-butanol et l'isobutanol.
Presque totalement extraite par le n-butanol et l'isobutanol.
Non extraite par l'acétate d'éthyle, le chloro
forme, l'éther et le benzène.
forme, l'éther et le benzène.
11) Réaction colorée
Positive dans la réaction à la ninhydrine.
Positive dans la réaction à la ninhydrine.
Négative dans la réaction au phénol-acide sulfu
rique.
rique.
12) Capacité de liaison aux polysaccharides
Capable de se lier à la chitine et au chitosane,
et la liaison n'est pas gênée par le chitotriose,
la N-acétylglucosamine et la glucosamine.
Capable de se lier à la chitine et au chitosane,
et la liaison n'est pas gênée par le chitotriose,
la N-acétylglucosamine et la glucosamine.
Incapable de se lier à la cellulose.
13) Ne possède pas d'activité de chitinase ni d'activité de
chitosanase.
chitosanase.
14) Possède une propriété fongicide.
15) Possède une propriété insecticide.
16) Contient des acides gras dans les proportions suivantes
Ci4:0 4%
Ci5:0 0%
C15:0 (ramification méthyle) li %
Cri6:0 21 %
C16:0 (ramification méthyle) 0 % Cri7:0 0%
Ci7:0 (ramification méthyle) 9 %
C18:0 31 %
Ci8:i 23 % C18:2 0%
Ci8:3 0 %.
Ci4:0 4%
Ci5:0 0%
C15:0 (ramification méthyle) li %
Cri6:0 21 %
C16:0 (ramification méthyle) 0 % Cri7:0 0%
Ci7:0 (ramification méthyle) 9 %
C18:0 31 %
Ci8:i 23 % C18:2 0%
Ci8:3 0 %.
Parmi les propriétés susmentionnées de CB1, la capacité de liaison aux polysaccharides, la présence ou l'absence d'activité de chitinase et d'activité de chitosanase, la propriété fongicide et la propriété insecticide seront commentées plus en détail ci-dessous.
On place séparément de la chitine en poudre, du chitosane en poudre et de la cellulose en poudre dans différents tubes de centrifugeuse de 1,5 ml, chacun en une quantité de 20 mg ; on y ajoute 100 Fl de solution de CBî à 0,1 mg/ml pour que chaque poudre gonfle bien ; la poudre gonflée est ensuite soumise à une centrifugation à 10 000 tr/min pendant 5 minutes ; et le surnageant séparé est soumis à une électrophorèse sur gel de polyacrylamide.
La protéine est détectée en utilisant un nécessaire de coloration par l'argent (fabriqué par Wako Pure Chemicals
Co.). Il en résulte que les échantillons traités par la poudre de chitine et la poudre de chitosane ne présentent presque aucune bande attribuable à CB1, tandis que l'échantillon traité par la poudre de cellulose présente des bandes détectables des mêmes densités que celles de l'échantillon non traité. De la N-acétylglucosamine et son trimère, le chitotriose, sont ajoutés séparément à une solution de CBî et l'adsorption du mélange résultant sur la chitine est examinée de la même manière que ci-dessus. Il en résulte que la liaison de CBî à la chitine n'est pas du tout inhibée.
Co.). Il en résulte que les échantillons traités par la poudre de chitine et la poudre de chitosane ne présentent presque aucune bande attribuable à CB1, tandis que l'échantillon traité par la poudre de cellulose présente des bandes détectables des mêmes densités que celles de l'échantillon non traité. De la N-acétylglucosamine et son trimère, le chitotriose, sont ajoutés séparément à une solution de CBî et l'adsorption du mélange résultant sur la chitine est examinée de la même manière que ci-dessus. Il en résulte que la liaison de CBî à la chitine n'est pas du tout inhibée.
Ensuite, la protéine CBî est mélangée séparément avec de la chitine colloïdale (préparée à partir de poudre de chitine), de l'éthylène-glycol-chitine (fabriquée par
Seikagaku Co.) et du glycol-chitosane (fabriqué par Wako
Pure Chemicals Co.) et amenée à réagir avec ceux-ci dans des conditions de pH 5 (tampon acide acétique), pH 7 (tampon acide phosphorique) ou pH 9 (tampon chlorhydrate de Tris) à 250C pendant 12 heures. Une solution alcaline de ferricyanure de potassium est ajoutée à la solution réactionnelle qui est portée à l'ébullition, après quoi 1 on constate que l'absorption à une longueur d'onde de 400 nm du produit résultant n'est pas très différente de celle du témoin.
Seikagaku Co.) et du glycol-chitosane (fabriqué par Wako
Pure Chemicals Co.) et amenée à réagir avec ceux-ci dans des conditions de pH 5 (tampon acide acétique), pH 7 (tampon acide phosphorique) ou pH 9 (tampon chlorhydrate de Tris) à 250C pendant 12 heures. Une solution alcaline de ferricyanure de potassium est ajoutée à la solution réactionnelle qui est portée à l'ébullition, après quoi 1 on constate que l'absorption à une longueur d'onde de 400 nm du produit résultant n'est pas très différente de celle du témoin.
Autrement dit, étant donné qu'on n'observe la formation d'aucun sucre réducteur, on conclut que la protéine CBî de l'invention ne possède pas d'activité de chitinase ni d'activité de chitosanase.
L'activité microbicide de la protéine CBî envers divers microorganismes est montrée dans le Tableau 1 cidessous. Pour ce qui concerne les moisissures, un morceau 3 cubique d'environ 1 mm de mycéliums de la moisissure d'épreuve, découpé à partir d'une culture inclinée de celle-ci, est inoculé dans chacune de plusieurs plaques de milieu MYG (1 % d'extrait de malt, 0,4 % d'extrait de levure, 0,4 % de glucose, pH 6,3)-gélose (1,5 %), contenant la protéine CBî à différentes concentrations, et cultivé à 250C ou à 300C pendant 3 à 7 jours, après quoi la concentration de CBî réduisant de moitié le diamètre de la colonie formée est exprimée en tant que CI50.Pour ce qui concerne les bactéries, on utilise un bouillon liquide comme milieu et pour la levure, on utilise un milieu MYG liquide. Dans les deux cas, la protéine CBî est ajoutée en plusieurs étapes à différentes concentrations au milieu et la bactérie ou la levure d'épreuve est inoculée dans le milieu et y est cultivée à 300C ou 370C pendant 1 à 2 jours. La concentration de CBî réduisant de moitié la turbidité à 590 nm est exprimée en tant que CI50. Les résultats sont présentés dans le Tableau 1 ci-dessous.
Pour examiner la stabilité de l'activité microbicide de la protéine CB1, celle-ci est dissoute dans divers tampons ayant chacun un pH différent et maintenue à 250C pendant 24 heures, puis ajoutée au milieu de la manière mentionnée ci-dessus. Aucune différence n'est observée dans l'activité microbicide envers Corticium rolfsii MAFF 07-12043 dans l'intervalle de pH de 4 à 9. Lorsque le système microbien à pH 7 avec CBî est chauffé dans un autoclave pendant 15 minutes, l'activité microbicide de CBî ne diminue pas jusqu'à une température d'au moins 1200C.
TABLEAU 1
<tb> <SEP> Microbes <SEP> testés <SEP> C150 <SEP> (g/m1) <SEP>
<tb> Champignons <SEP> de <SEP> moisissures
<tb> <SEP> Pyricularia <SEP> oryzae <SEP> MAFF <SEP> 01-01002 <SEP> 2
<tb> <SEP> Rhizoctonia <SEP> solani <SEP> CFî <SEP> 5
<tb> <SEP> Corticium <SEP> rolfsii <SEP> MAFF <SEP> 07-12043 <SEP> 5
<tb> <SEP> Tyromyces <SEP> palustris <SEP> MAFF <SEP> 11-20001 <SEP> 5
<tb> <SEP> Botrytis <SEP> cinerea <SEP> MAFF <SEP> 07-12057 <SEP> 10
<tb> <SEP> Coriolus <SEP> versicolor <SEP> CF2 <SEP> 20
<tb> <SEP> Fusarium <SEP> oxysporium <SEP> NFRI <SEP> 1011 <SEP> 50
<tb> <SEP> Aspergillus <SEP> oryzae <SEP> NFRI <SEP> 1132 <SEP> > 100
<tb> Bactéries
<tb> <SEP> Escherichia <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Pseudomonas <SEP> fluorescens <SEP> AHU <SEP> 1719 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Bacillus <SEP> cereus <SEP> NFRI <SEP> 8004 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Staphylococcus <SEP> aureus <SEP> AHU <SEP> 1142 <SEP> 100
<tb> Levures
<tb> <SEP> Saccharomyces <SEP> cerevisiae <SEP> Y02587 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Candida <SEP> albicans <SEP> IFO <SEP> 1385 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Hansenula <SEP> anomala <SEP> NFRI <SEP> 3706 <SEP> > 100
<tb>
L'effet de CBî sur la croissance de Sitophilus zeamais est indiqué dans le Tableau 2 ci-dessous. La protéine
CBI est ajoutée à de la poudre de riz complet à une concentration de 0 % à 1 %, malaxée avec de l'eau, transformée en comprimés et séchée. Sitophilus zeamais y est appliqué pour la ponte et le développement des oeufs est observé.
<tb> Champignons <SEP> de <SEP> moisissures
<tb> <SEP> Pyricularia <SEP> oryzae <SEP> MAFF <SEP> 01-01002 <SEP> 2
<tb> <SEP> Rhizoctonia <SEP> solani <SEP> CFî <SEP> 5
<tb> <SEP> Corticium <SEP> rolfsii <SEP> MAFF <SEP> 07-12043 <SEP> 5
<tb> <SEP> Tyromyces <SEP> palustris <SEP> MAFF <SEP> 11-20001 <SEP> 5
<tb> <SEP> Botrytis <SEP> cinerea <SEP> MAFF <SEP> 07-12057 <SEP> 10
<tb> <SEP> Coriolus <SEP> versicolor <SEP> CF2 <SEP> 20
<tb> <SEP> Fusarium <SEP> oxysporium <SEP> NFRI <SEP> 1011 <SEP> 50
<tb> <SEP> Aspergillus <SEP> oryzae <SEP> NFRI <SEP> 1132 <SEP> > 100
<tb> Bactéries
<tb> <SEP> Escherichia <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Pseudomonas <SEP> fluorescens <SEP> AHU <SEP> 1719 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Bacillus <SEP> cereus <SEP> NFRI <SEP> 8004 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Staphylococcus <SEP> aureus <SEP> AHU <SEP> 1142 <SEP> 100
<tb> Levures
<tb> <SEP> Saccharomyces <SEP> cerevisiae <SEP> Y02587 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Candida <SEP> albicans <SEP> IFO <SEP> 1385 <SEP> > 100
<tb> <SEP> Hansenula <SEP> anomala <SEP> NFRI <SEP> 3706 <SEP> > 100
<tb>
L'effet de CBî sur la croissance de Sitophilus zeamais est indiqué dans le Tableau 2 ci-dessous. La protéine
CBI est ajoutée à de la poudre de riz complet à une concentration de 0 % à 1 %, malaxée avec de l'eau, transformée en comprimés et séchée. Sitophilus zeamais y est appliqué pour la ponte et le développement des oeufs est observé.
TABLEAU 2
<tb> <SEP> Nombre <SEP> Nombre <SEP> Pourcentage
<tb> Concentration <SEP> Temps <SEP> (jours) <SEP> insectes <SEP> d'insectes <SEP> d'insectes
<tb> de <SEP> CBR <SEP> (%) <SEP> après <SEP> éclosion <SEP> testés <SEP> morts <SEP> morts <SEP> (%) <SEP>
<tb> <SEP> 1 <SEP> 10 <SEP> 30 <SEP> 30 <SEP> 100
<tb> <SEP> 0,1 <SEP> 30 <SEP> 60 <SEP> 20 <SEP> 33
<tb> <SEP> 0,01 <SEP> 30 <SEP> 60 <SEP> 14 <SEP> 23
<tb> <SEP> 30 <SEP> 60 <SEP> 10 <SEP> 17
<tb>
Comme décrit ci-dessus, la protéine CBî de la présente invention est différente de la substance microbicide produite par des bactéries du genre Bacillus.
<tb> Concentration <SEP> Temps <SEP> (jours) <SEP> insectes <SEP> d'insectes <SEP> d'insectes
<tb> de <SEP> CBR <SEP> (%) <SEP> après <SEP> éclosion <SEP> testés <SEP> morts <SEP> morts <SEP> (%) <SEP>
<tb> <SEP> 1 <SEP> 10 <SEP> 30 <SEP> 30 <SEP> 100
<tb> <SEP> 0,1 <SEP> 30 <SEP> 60 <SEP> 20 <SEP> 33
<tb> <SEP> 0,01 <SEP> 30 <SEP> 60 <SEP> 14 <SEP> 23
<tb> <SEP> 30 <SEP> 60 <SEP> 10 <SEP> 17
<tb>
Comme décrit ci-dessus, la protéine CBî de la présente invention est différente de la substance microbicide produite par des bactéries du genre Bacillus.
On connaissait jusqu'à présent un certain nombre de protéines du type lectine liant la chitine chez les végétaux.
Cependant, la liaison des lectines à la chitine est inhibée par les monosaccharides ou les oligosaccharides constituant la chitine, tels que la N-acétylglucosamine et le chitotriose. Par conséquent, ces protéines sont différentes de la protéine CBI de la présente invention. Il a été mentionné jusqu'à présent des lectines liant la chitine nommées UDA (Science, Vol. 245, page 1100, 1989) et Hevein (Planta, Vol.
183, page 258, 1991) et des peptides liant la chitine nommés
Ac-AMP1 et Ac-AMP2 (Biochemistry, Vol. 31, page 4308, 1992).
Ac-AMP1 et Ac-AMP2 (Biochemistry, Vol. 31, page 4308, 1992).
Cependant, tous ont un poids moléculaire de 10 000 ou moins et sont nettement différents de la protéine CBî de l'invention. Par conséquent, il a été confirmé que la protéine CBî liant la chitine est une substance nouvelle.
La présente invention sera maintenant décrite plus en détail au moyen de l'exemple suivant qui n'est cependant pas destiné à limiter le cadre de la présente invention.
EXEMPLE 1
Des cellules d'une culture inclinée de Bacillus licheniformis CBî (FRI 4008, FERM BP-4008) sont inoculées dans une fiole d'Erlenmeyer de 100 ml contenant 10 ml d'un milieu liquide (pH 7,2) comprenant 1 % de peptone, 0,5 % d'extrait de levure et 1 % ae chlorure de sodium, et la fiole est mise à incuber à 370C pendant 24 heures. Ensuite, la culture d'ensemencement est inoculée en un volume d'environ 1 ml dans chacune de 10 fioles de Sakaguchi de 0,5 litre contenant chacune 0,1 litre d'un milieu liquide (pH 7,2) comprenant 1 % de peptone, 0,5 % d'extrait de levure, 1,5 % de Na2HPO4 12H2O, 0,2 % de KH2PO4 et 1 % de glucose, et les fioles sont mises à incuber sous secousses à 370C pendant 72 heures.L'amplitude d'oscillation pour la culture sous secousses est de 7 cm et la vitesse de rotation est de 140 tr/min.
Des cellules d'une culture inclinée de Bacillus licheniformis CBî (FRI 4008, FERM BP-4008) sont inoculées dans une fiole d'Erlenmeyer de 100 ml contenant 10 ml d'un milieu liquide (pH 7,2) comprenant 1 % de peptone, 0,5 % d'extrait de levure et 1 % ae chlorure de sodium, et la fiole est mise à incuber à 370C pendant 24 heures. Ensuite, la culture d'ensemencement est inoculée en un volume d'environ 1 ml dans chacune de 10 fioles de Sakaguchi de 0,5 litre contenant chacune 0,1 litre d'un milieu liquide (pH 7,2) comprenant 1 % de peptone, 0,5 % d'extrait de levure, 1,5 % de Na2HPO4 12H2O, 0,2 % de KH2PO4 et 1 % de glucose, et les fioles sont mises à incuber sous secousses à 370C pendant 72 heures.L'amplitude d'oscillation pour la culture sous secousses est de 7 cm et la vitesse de rotation est de 140 tr/min.
Environ 1 litre de la culture est agité avec 0,2 litre de n-butanol, puis soumis à une centrifugation.
On recueille environ 0,15 litre de la phase supérieure de butanol et l'on y ajoute 0,2 litre d'hexane et l'agite.
La phase supérieure de butanol/hexane est enlevée après centrifugation et l'on obtient environ 16 ml de la phase aqueuse inférieure. Celle-ci est ensuite soumise à une chromatographie sur colonne de tamis moléculaires avec
Sephacryl S-300HR (fabriqué par Pharmacia Co.), pour laquelle on utilise un tampon acétate d'ammonium 50mM (pH 6,5). L'absorption de l'éluat est suivie à 280 nm et l'on recueille la première fraction éluée d'une fraction du plus haut poids moléculaire. La fraction est dialysée contre de l'eau pure et lyophilisée pour donner 48 mg de cristaux.
Sephacryl S-300HR (fabriqué par Pharmacia Co.), pour laquelle on utilise un tampon acétate d'ammonium 50mM (pH 6,5). L'absorption de l'éluat est suivie à 280 nm et l'on recueille la première fraction éluée d'une fraction du plus haut poids moléculaire. La fraction est dialysée contre de l'eau pure et lyophilisée pour donner 48 mg de cristaux.
La protéine CBî ainsi obtenue possède les propriétés physico-chimiques et biologiques susmentionnées.
Comme expliqué en détail ci-dessus, la protéine CBî liant la chitine de la présente invention peut être produite en un bon rendement par incubation de microorganismes particuliers.
La protéine CBî possède à la fois une propriété fongicide et une propriété insecticide et elle est donc utile comme agent chimique pour l'agriculture (fongicide ou insecticide) et comme agent conservateur pour le bois.
Claims (5)
1. Nouvelle protéine CBl liant la chitine, caractérisée par les propriétés suivantes
1) Aspect Extérieur : Poudre blanche
2) Point de fusion : Environ 1370C
3) Éléments constitutifs : C, H, N, O, S
4) Analyse élémentaire :
C 60,90 %
H 9,61 %
N 12,19 %
S 0,29 %
5) Poids moléculaire : Environ 45 000 (par filtration
sur gel)
6) pH au point isoélectrique :Environ 4,3
7) Spectre d'absorption dans l'ultraviolet : Amax
196, 275
8) Spectre d'absorption dans l'infrarouge : (cm-1)
3310, 2950, 1730, 1660, 1540, 1470, 1390, 1200, 650
9) Solubilité
Soluble dans l'eau, le méthanol, l'éthanol et le
butanol
Insoluble dans l'acétate d'éthyle, le chloroforme,
l'éther, le benzène et l'hexane 10) Extraction par solvant
Presque totalement extraite par le n-butanol et l'isobutanol
Non extraite par l'acétate d'éthyle, le chloro
forme, l'éther et le benzène 11) Réaction colorée ::
Positive dans la réaction à la ninhydrine
Négative dans la réaction au phénol-acide sulfurique 12) Capacité de liaison aux polysaccharides
Capable de se lier à la chitine et au chitosane,
et la liaison n'est pas gênée par le chitotriose,
la N-acétylglucosamine et la glucosamine
Incapable de se lier à la cellulose 13) Ne possède pas d'activité de chitinase ni d'activité de
chitosanase 14) Possède une propriété fongicide 15) Possède une propriété insecticide 16) Contient des acides gras dans les proportions suivantes
Ci4:0 4%
C15:0 0%
Ci5:0 (ramification méthyle) 11 %
C16:0 21 %
Ci6:0 (ramification méthyle) 0 % Ci7:0 0%
Ci7:0 (ramification méthyle) 9 %
Ci8::0 31 %
Ci8:i 23 % C18:2 0%
C18:3 0 %.
2. Procédé de production d'une nouvelle protéine
CBl liant la chitine, selon la revendication 1, caractérisé en ce que des bactéries appartenant au genre Bacillus et ayant la faculté de produire une nouvelle protéine cBl liant la chitine, selonla revendication 1 sont mises à incuber et la protéine CBî est recueillie à partir de la culture.
3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que les bactéries sont celles de Bacillus licheniformis CBî (FERM BP-4008).
4. Fongicide caractérisé en ce qu'il contient une protéine CBl liant la chitine, selon la revendication 1 comme ingrédient actif.
5. Insecticide caractérisé en ce qu'il contient une protéine CBl liant la chitine, selon la revendication 1 comme ingrédient actif.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4276743A JPH0694478B2 (ja) | 1992-09-22 | 1992-09-22 | 新規キチン結合性蛋白ｃｂ１ならびにその製造法と用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2695932A1 true FR2695932A1 (fr) | 1994-03-25 |
| FR2695932B1 FR2695932B1 (fr) | 1996-12-06 |
Family
ID=17573724
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR9302460A Expired - Fee Related FR2695932B1 (fr) | 1992-09-22 | 1993-03-03 | Proteine liant la chitine, procede pour sa production, et insecticide et fongicide la contenant. |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0694478B2 (fr) |
| AU (1) | AU646195B2 (fr) |
| CA (1) | CA2090562C (fr) |
| FR (1) | FR2695932B1 (fr) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0332369A2 (fr) * | 1988-03-07 | 1989-09-13 | Agricultural Genetics Company Limited | Antibiotique |
| WO1992021699A1 (fr) * | 1991-06-07 | 1992-12-10 | Zeneca Limited | Proteines biocides |
| US5187262A (en) * | 1990-09-24 | 1993-02-16 | Board Of Trustees, Operating Michigan State University | cDNA encoding a polypeptide including a hevein sequence |
-
1992
- 1992-09-22 JP JP4276743A patent/JPH0694478B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-02-24 AU AU33728/93A patent/AU646195B2/en not_active Ceased
- 1993-02-26 CA CA002090562A patent/CA2090562C/fr not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-03 FR FR9302460A patent/FR2695932B1/fr not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0332369A2 (fr) * | 1988-03-07 | 1989-09-13 | Agricultural Genetics Company Limited | Antibiotique |
| US5187262A (en) * | 1990-09-24 | 1993-02-16 | Board Of Trustees, Operating Michigan State University | cDNA encoding a polypeptide including a hevein sequence |
| WO1992021699A1 (fr) * | 1991-06-07 | 1992-12-10 | Zeneca Limited | Proteines biocides |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BROEKAERT, WILLEM F. ET AL: "Antimicrobial peptides from Amaranthus caudatus seeds with sequence homology to the cysteine/glycine-rich domain of chitin - binding proteins", BIOCHEMISTRY (1992), 31(17), 4308-14 CODEN: BICHAW;ISSN: 0006-2960 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2090562A1 (fr) | 1994-03-23 |
| CA2090562C (fr) | 1997-08-12 |
| JPH0694478B2 (ja) | 1994-11-24 |
| AU646195B2 (en) | 1994-02-10 |
| FR2695932B1 (fr) | 1996-12-06 |
| JPH06179699A (ja) | 1994-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jackson et al. | The composition and attributes of Colletotrichum truncatum spores are altered by the nutritional environment | |
| Fenice et al. | Chitinolytic activity at low temperature of an Antarctic strain (A3) of Verticillium lecanii | |
| FR2540516A1 (fr) | Procede de production de proteines correspondant a la toxine diphterique | |
| DE3880585T2 (de) | Acylaminosaeure-racemase, herstellung und verwendung. | |
| FR2766059A1 (fr) | Procede pour la stimulation des defenses naturelles de plantes agronomiquement utiles et composition pour la mise en oeuvre de ce procede | |
| JPH06508618A (ja) | 精製キチナーゼおよびその用途 | |
| US4226941A (en) | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| DE2614114B2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Kreatininamidohydrolase | |
| JPS585189A (ja) | 新規なアミドヒドロラ−ゼ | |
| JPS6247520B2 (fr) | ||
| US5328689A (en) | Induction of settlement and metamorphosis in crassostrea virginica by melanin-synthesizing bacteria and ammonia, and metabolic products of said bacteria | |
| US5155041A (en) | Culture of Bacillus subtilis | |
| FR2695932A1 (fr) | Protéine liant la chitine, procédé pour sa production, et insecticide et fongicide la contenant. | |
| CN110564649A (zh) | 一株产脂肪酶菌株及其应用 | |
| JPH0156755B2 (fr) | ||
| CH651316A5 (de) | Verfahren zur mikrobiologischen umwandlung von c(3)-c(6)-n-alkanen oder c(3)-c(6)-sec.-alkoholen in c(3)-c(6)-sek.-alkohole oder entsprechende methylketone. | |
| BE1007064A3 (fr) | Enzyme de levane saccharase, procede pour sa preparation, micro-organismes qui le produisent et compositions le contenant. | |
| US4181714A (en) | Antibiotics Bacileucines A and B and process for production and use thereof | |
| JP3085895B2 (ja) | エキセロヒルム・モノセラスに属する新規な菌株及びその用途 | |
| FR2518988A1 (fr) | Procede pour preparer la l-threonine | |
| JP2837624B2 (ja) | 天然紫色色素の製造方法 | |
| KR20200027482A (ko) | 살리니비브리오 속 코스티콜라 bao1801 균주 및 이의 용도 | |
| KR0136299B1 (ko) | 미생물세포벽 용해효소와 그의 생산 미생물 | |
| FR2489691A1 (fr) | Antibiotique am-3603 et procede pour sa production | |
| JPH0648904A (ja) | 抗菌性・抗線虫組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20051130 |