FR2666897A1 - Colonnes capillaires presentant une charge positive permanente utilisees en electrophorese capillaire. - Google Patents

Colonnes capillaires presentant une charge positive permanente utilisees en electrophorese capillaire. Download PDF

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Abstract

Les parois intérieures de tubes capillaires ayant de fines parois, ainsi qu'un petit diamètre sont recouvertes d'un revêtement présentant une charge positive permanente utilisée en électrophorèse capillaire et préparé par une réaction chimique entre la surface intérieure du tube capillaire et une substance bifonctionnelle. Le premier groupement chimique d'une substance bifonctionnelle est capable de formé une liaison covalente avec la surface intérieure des parois du tube capillaire; le deuxième groupement contient une ou plusieurs charges positives qui sont stables et permanentes et qui peuvent être sous forme d'ammonium quaternaire. La charge positive, permanente et stable, dans le revêtement de la surface intérieure du tube capillaire a deux effets: il inverse la direction du débit électroosmose en même temps qu'il augmente sa valeur par rapport aux tubes capillaires non-traités ou aux revêtements non-chargés ou chargés negativement. La présence de ce revêtement permet la séparation simultanée de plusieurs substances chimiques qui ne peuvent pas être réalisée autrement. D'autre part, il permet une réduction substantielle de l'adsorption des substances aux parois intérieures du tube capillaire par un mécanisme différent aux autres types de revêtements qui permettent une amélioration des caractéristiques de séparation.

Description

Colonnes capillaires présentant une charge positive permanente utilisées en electrophorèse capillaire.
La présente invention a pour objet la préparation et/ou l'emploi de colonnes capillaires présentant une charge positive permanente utilisées en électrophorèse capillaire permettant de séparer des composés chargés négativement, chargés positivement ou des composés neutres dans un but analytique ou pour la préparation de composés purs. Cette charge positive permanente est fixée à l'intérieur de la colonne capillaire par une liaison covalente. Cette liaison covalente résulte de la combinaison entre la paroi de la colonne capillaire et un composé polymérique ou non-polymérique de structure bifonctionnelle, l'une des fonction présentant une charge positive permanente de nature ammonium quaternaire, l'autre fonction étant un groupement très réactif réagissant avec les hydroxyles de la colonne ou avec la paroi intérieure de la colonne capillaire modifiée chimiquement.
Actuellement les colonnes capillaires utilisées dans l'électrophorèse capillaire sont de plusieur types. Les colonnes en Silice fondue non traités présentant des groupements actifs au niveau de surface du type silanols (-SiOH), silyl éthers (-Si-O-Si-). Les désavantages sont nombreux. Des nombreuses classes chimiques ne peuvent pas être séparées convenablement. L'analyse peut etre réalisée seulement si le composé à analyser est neutre ou possède une charge négative faible. Les cations principalement les amines sont adsorbés à la surface et ne peuvent être analysés, uniquement dans des conditions spéciales. Le débit d'électroosmose est trop élevé pour la réalisation de focalisation isoélectrique. Le débit d'électroosmose est trop faible et ne permet pas l'analyse des anions possédant des charges multiples.Beaucoup d'interactions entre les parois de la colonne et les électrolytes sont observées.
Les colonnes traitées du type acrylamides présentent les desavantages suivants : la détérioration de la couche acrylamide est possible en dehors de la gamme de pH de 2 à 7,5. Les acrylamides sont instables en présence d'une tension très élevée. La forte inhibition de débit électroosmose entraine un temps d'analyse très long de l'ordre de 30 à 90 minutes.
Les colonnes à base d'acrylates conduisent à des liaisons ioniques avec les cations et une forte adsorption.
Les colonnes à base de poly(éthylènenéimine) conduisent également à de fortes adsoprtions.
Les colonnes capillaires de cette invention sont de deux types ; le type 1 présente une liaison covalente siloxane - Si-O-Si-, le type 2 présente une liaison covalente silicium-carbone
Figure img00020001
Le groupement actif au niveau de la surface est un sel de tétraalkyl ammonium quaternaire. Les avantages des colonnes de type 1 et de type 2 sont : un traitement des colonnes relativement facile à réaliser ; la surface créée à l'intérieur de la colonne possède une grande résistance aux solutions caustiques aussi bien qu'aux acides minéraux. Aucune adsorption de n'importe quelle substance chimique n'est observée. Le débit de l'électroosmose très élevé suivant les conditions, et le temps d'analyse est très court.
Toute substance chimique et quelque soit la nature de la charge peut être analysée : les anions à charges multiples, à charge fractionelle peuvent être analysés. Les avantages des colonnes du type 2 sont identiques aux précédentes.
De ce fait le but de l'invention est de disposer de plusieurs types de colonnes capillaires utilisables en électrophorèse capillaire dont la structure est identique pour toutes : ces colonnes capillaires présentant une charge positive permanente fixée à la surface intérieure de la colonne capillaire sur une chaine organique liée par une liaison covalente.
La colonne capillaire est en verre ou en quartz ou en silice fondue ou en dérivé polymérique ou en matériaux similaires ; elle est utilisée en électrophorèse capillaire. Cette colonne capillaire présente une charge positive permanente, sous forme d'ammonium quaternaire, fixée à la surface intérieure par une liaison covalente, résultant de la combinaison entre la paroi de la colonne capillaire et un composé polymérique ou non-polymérique de structure bifonctionnelle, l'une des fonctions présentant une charge positive permanente de nature ammonium quaternaire, l'autre fonction étant destinée à former la liaison covalente avec la paroi de la colonne capillaire, la liaison covalente peut être sous forme de siloxane -Si-O-Si- résultant de la combinaison d'un groupement constituée d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants halogènés, tel le chlore ou le brome, soit d'un groupement constitué d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants alkoxy ou acyloxy réagissant avec les groupements hydroxyles de la surface intérieure du capillaire. La liaison covalente peut aussi être sous forme de liaison silicium-carbone
Figure img00030001

résultant de la combinaison au niveau de la paroi de la colonne capillaire d'un groupement vinylique et de groupements d'hydrure de silicium -SiH préalablement formés par la transformation de silanol -SiOH en halogénures de silicium -SiX, X étant un halogénure du type chlore ou brome suivies d'une réduction en hydrure de silicium -SiH.
La colonne capillaire présentant une charge positive permanente peut être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
La colonne capillaire présentant une charge positive permanente peut aussi être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
La colonne capillaire peut aussi être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs amines primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les amines étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La charge positive permanente peut aussi être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs amines primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les amines étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La charge positive permanente peut également être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en amine primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La colonne capillaire présentant cette charge positive permanente peut encore être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes halosilanes, pour lequel l'atome d'halogène peut être le chlore ou le brome réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en amine primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La charge positive permanente peut encore être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes époxy étant transformés en ammonium quaternaire par réaction dans un premier temps avec une amine primaire ou une amine secondaire conduisant à un amino-alcool transformé en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La substance bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, chlorure de n-octadecyldiméthyl- [3 -(tri-méthoxysilyl)- propyl] ammonium, chlorure de n-tétradecyldimethyl(3-triméthoxy silylpropyl)ammonium, chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl)triméthyl- ammonium, chlorure de N-(3-triméthoxypropyl-N-méthyl-N,
N-diallylammonium, chlorure de N-triméthoxysilylpropyl-N,N,
N-triméthylammonium, chlorure de N-triméthoxysilylpropyl-tri-n-butylammonium, le composé préférentiel étant le chlorure de N-(triméthoxy silyloctyl)triméthylammonium.
La substance bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques est sélectionnée parmi les composés suivants, l'iodure de hexallyl-éthylènediammonium, l'iodure de octallyl-diethylene-triammonium, l'iodure de decallyl-triéthylènetétrammonium, l'iodure de dodécallyl-tétraéthylènepentammonium, l'iodure de tétradécallyl-pentaéthylènehexammonium, le composé préférentiel étant le hexabromure de tétradecaallyl-pentaéthylènehexammonium
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieures amines primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes est
sélectionnée parmi les composés suivants, 4-Aminobutyldiméthylméthoxysilane,4-Aminobutyltriéthoxysilane ,(aminoéthyl
aminoéthyl)phenethyltriméthoxysilane,N-2-aminoéthyl) -3 - aminopropylmé thyldiméthoxy silane,N-(2-aminoethyl-3 -aminopropyl)-triméthoxysilane,
N-(2-aminoethyl-3 -aminopropyl) -tris-(2-éthylhexoxy) silane,
N-(2-aminohexyl-3 -aminopropyl) triméthoxysilane,4-aminophényltrimétho xysilane ,3 - (1 -aminopropoxy) -3,3 -diméthyl- l-propényltriméthoxysilane, 3
aminopropyl-tris (methoxyethoxyethoxy) silane ,3 - aminopropyl-diméthyleth oxysilane,3-aminopropylméthyldiéthoxysilane, 3 - aminopropyltriétho- xysilane, 3 - aminopropyltriméthoxysilane,3 -aminopropyltris(triméthylsilyl
oxy) silane,J-aminoundecyltriméthoxysilane,3 - [2-N-benzylaminoethylamino propylitrimethoxysilane ,B is- (2-hydroxyethyl) -3 -aminopropyltriethoxysila ne, Bis [3-(triéthoxysilyl)propyl] amine, Bis [3 -(triméthoxysilyl)propyl]
éthylenediamine ,(cyclohexylaminométhyl)méthyldiéthoxysilane,
(cyclohexylaminométhyl)diméthyléthoxysilane, (N,N-diéthyl-3-aminopropyl)trimethoxysilane ,dimethylméthoxysilylpropyldiéthylènetriamine,
diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehexamine, N-méthylamino
propyltriméthoxysilane,méthyl[2-(3 -triméthoxy silylpropylamino)éthyla
mino]-3-propionate,N-phénylaminopropyltriméthoxysilane, 3 -(N-.s tyryl
méthyl-2-aminoéthylamino)propyltriméthoxysilane,N-( [3 -(triéthoxysilyl) propyl] -2,4-dintrophénylamine,N- [3 -(triéthoxysilyl)propylj -4 ,5-dihydroimi
dazole,triméthoxysilylpropyldiéthylènetriamine, N-(3-triméthoxysilyl
propyl)pyrrole, le composé préférentiel étant le diméthylméthoxysilylpro
pylpentaéthylènehéxamine.
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieures amines
primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs vinyliques est
sélectionnée parmi les composés suivants, N-allyl-éthylènediamine, N,N-diallyl-éthylènediamine ,N,N,N-triallyl-éthylènediamine,N,N,N,N
tétrallyléthylènediamine, N-allyldiéthylènetriamine,N,N-diallyldiéthylènetriamine,N,N,N-triallyl- diéthylènetriamine,N,N,N,N-tétrallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N-pental lyldiéthylènetriamine,N,N,N,N,N,N-hexallyldiéthylènetriamine ,N,N,N,N,N,N- hexallyl-pentaéthylènehexamine, le composé préférentiel étant le N,N,N,N,N,N-hexallylpentaéthylènehexamine.
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, 3-(cyanoéthoxy)-3,3-dimethyl- l-propényltriméthoxysilane, 2-cyanoéthyltriéthoxysilane,2-cyanoéthyltriméthoxysilane,(cyanométhyl- phènethyl)triméthoxy silane ,3 -cyanopropyldiméthylméthoxylsilane, 3-cyanopropyltriéthoxysilane le composé préférentiel étant le bromure de 3-c yanopropyldiméthylméthoxy silane
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs halosilanes est sélectionnée parmi les composés suivants ,(3 -cyanobutyl)trichlorosilane,2-cyanoéthylméthyldichloro silane, 2-cyanoéthyltrichloro silane,3 -cyanopropyldimethylchloro silane, 3 -cyanopropylmethyldichloro silane, 3 -cy anopropyltrichloro silane, le composé préférentiel étant le 3-cyanopropyldiméthylchlorosilane dérivés.
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, (3 -glycidoxypropyl)bis (triméthylsiloxy)méthylsilane, 3 -glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane,(3 -glycidoxypropyl)méthyldiétho xysilane ,3 -glycidoxypropylméthyldiisopropenoxysilane,(3 -glycidoxypro- pyl)triméthoxysilane, le composé préférentiel étant le 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane.
Préparation de la Colonne Capillaire
L'ensemble de ces traitements concerne la face interieure des colonnes capillaires.
Méthode A mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement ammonium quaternaire-alkoxysilanes. figure 1
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par de l'acide chlorhydrique 0,1M.
Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes.
Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de chlorure de
N-(triméthoxysilyloctyl)triméthylammonium. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion.
Méthode B mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement amines-alkoxysilanes.figure 2
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par de l'acide chlorhydrique 0,1M.
Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes.
Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehéxamine. Rincer à nouveau par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution méthanolique à 25% (v/v) d'iodure de méthyle durant une période de l'ordre de 10 minutes. Ensuite laver la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique à 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion.
Grâce à cette préparation de la colonne, plusieurs centaines d'analyses électrophorétiques ont été réalisées.
Méthode C mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement époxy-alkoxysilanes figure 3
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par l'acide chlorhydrique 0,1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes.
Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane. Rincer à nouveau par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution de tetrahydrofurane à 25% (v/v) de diéthylènetriamine durant environ de 30 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée suivie par un rinçage par du méthanol. Faire passer à travers la colonne une solution méthanolique à 25% (v/v) de l'iodure de méthyle durant environ 10 minutes. Laver ensuite la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ.
Rincer à nouveau par de l'eau distillée pendant 10 minutes.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique à 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion.
Grâce à cette préparation, plusieurs centaines d'analyses électrophorétique s peuvent être réalisées.
Méthode D mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement nitriles-alkoxysilanes figure 4
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par l'acide chlorhydrique 0,lu. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes.
Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de 3 -cyanopropyldiméthylméthoxy silane. Rincer à nouveau par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution de tétrahydrofurane anhydre à 1% (P/v) d'hydrure de lithium aluminium de durant environ 60 minutes. Rincer ensuite par une solution de tetrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée pendant 5 minutes suivie par un rinçage par du méthanol pendant 10 minutes. Faire passer à travers la colonne une solution méthanolique à 25% (v/v) de l'iodure de méthyle durant environ 10 minutes. Laver ensuite la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique à 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion.
Grâce à cette préparation, plusieurs centaines d'analyses électrophorétiques peuvent être réalisées.
Méthode E mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement ammonium quaternaire- vinylique figure 5
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par l'acide chlorhydrique 0,1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes.
Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Rincer à nouveau par une solution de tetrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ.
Faire passer à travers la colonne la chlorure de thionyle pendant 2 à 3 heures. Rincer ensuite par une solution de tetrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Faire passer à travers la colonne une solution de tetrahydrofurane anhydre à 1% (P/v) du hydrure de lithium aluminium durant environ 60 minutes. RinCer ensuite par une solution de tétrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Faire passer une solution de isopropanol anhydre à 0,1 g% d'acide chloroplatinique et 10% de N-allyle-éthylènediamine pendant 1 heure. Rincer à nouveau par de l'isopropanol suivies par du méthanol pendant 10 minutes pour chacune.
Faire passer à travers la colonne une solution méthanolique à 25% (v/v) de l'iodure de méthyle de l'ordre de 10 minutes. Laver ensuite la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
RESULTATS
Grâce à ce type de préparation, plusieurs centaines d'analyses électrophorétiques ont été réalisées avec la même colonne.
Grâce a ce type de colonne nous avons pu séparer des substances chimiques de faible poids moléculaire et de structure chimique voisine.
Des substances présentes dans un sérum humain et dans les urines humaines ont pu être séparées sans interférences de la part des constituants normaux de sérum ou des urines.
Une séparation des divers substances acides de charges multiples réalisées avec l'un des colonnes traitées est présentée dans la figure G . Les substances séparées sont indiquées sur la figure 6. I1 faut remarquer que toutes ces composés ne peuvent pas être séparés simultanément dans aucun cas avec une colonne traitée autrement ou non-traitée. Surtout, l'ensemble des acide de charges multiples tel que l'acide sulfo-5-salicylique, l'acide trimesique, l'acide phthalique, l'acide isophthalique, l'acide hydroxy-5 isophthalique, et l'acide amino-5 isophthalique ne peuvent pas être séparés des autres acides, qui ne possèdent qu'un groupement chargé au cours du même essai, lors de l'emploi d'autre type de colonne
Les conditions employés pour cette separation sont marquées dans la figure (i.
D'autres acides ont été séparés du mélange acide oxalique, acide maléique, acide succinique, acide fumarique, acide citrique, acide D-tartarique.figure
Le exemple décrits ci-devant montrent les étendus de cette invention ; de nombreuses colonnes capillaires chargés positivement d'une manière permanente ont été réalisées et permettent cette excellente séparation indiquée ci-devant.
Figure img00100001
<tb> <SEP> OCH3 <SEP> H3C <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface <SEP> | <SEP> +
<tb> <SEP> interieure <SEP> H3CO-Si-(CH2-N+
<tb> de <SEP> la <SEP> colonne <SEP> I
<tb> <SEP> capillaire <SEP> OCH3 <SEP> H3C <SEP> Cl
<tb> <SEP> OH
<tb> <SEP> OH <SEP> H3C <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface <SEP> I <SEP> \ <SEP> /
<tb> <SEP> interieure <SEP> = <SEP> Si-O-Si- <SEP> (CH2)8 <SEP> N+
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire <SEP> I <SEP> I <SEP> C1
<SEP> OH <SEP> H3C <SEP> Cl
Revêtement final
Figure 1 : Méthode A mettant en jeu une substance
bifonctionnelle comprenant un groupement
ammonium quaternaire-alkoxysilane
Figure img00110001
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H
<tb> <SEP> I <SEP> I
<tb> <SEP> H3CO <SEP> Si <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> NCH2-CH2-N <SEP> CH2- <SEP> CH2-N
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H <SEP> H3
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieure <SEP> g
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne <SEP> 2
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> I
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H
<tb> <SEP> surface <SEP> I
<tb> <SEP> surface <SEP> -"-si <SEP> CH2-CH2-NCH2-CH2-N
<tb> :<SEP> la <SEP> colonne <SEP> O- <SEP> S1i-CH2--CH2-CH2--N
<tb> <SEP> capillaire <SEP> CH3 <SEP> llH13
<tb> <SEP> CH3I <SEP> CH3I <SEP> + <SEP> CH3OH
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H3C <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface <SEP> I
<tb> <SEP> interieure <SEP> ~~~Si-O- <SEP> Si- <SEP> CH2 <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH3
<tb> <SEP> la <SEP> teollioeUree <SEP> t <SEP> CH3
<tb> <SEP> capillaire <SEP> CH3 <SEP> I- <SEP> ' <SEP> H3 <SEP> L <SEP> CH3 <SEP> cH33
<tb>
Revêtement final
Figure 2 :Méthode B mettant en jeu une substance
bifonctionelle comprenant un groupement
amines-alkoxysilane
Figure img00120001
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieurt <SEP> si~ <SEP> OH <SEP> + <SEP> - <SEP> Si-CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2-o-CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2
<tb> <SEP> denibe <SEP> - <SEP> I
<tb> <SEP> capillaire <SEP> CH3 <SEP> O
<tb> <SEP> (3-Glycidoxypropyl)
<tb> <SEP> diméthyl <SEP> éthoxysilane
<tb> <SEP> l
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface
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<tb> <SEP> de <SEP> tube <SEP> =Si- <SEP> O <SEP> - <SEP> Si- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> O-CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2
<tb> <SEP> I <SEP> O
<tb> capillaire <SEP> CH3
<tb> <SEP> H <SEP> H
<tb> <SEP> / <SEP> /
<tb> <SEP> N-CH2- <SEP> CH2- <SEP> N-CH2- <SEP> CH2- <SEP> N
<tb> <SEP> H <SEP> H <SEP> H
<tb> <SEP> N <SEP> diéthylènetriamine
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> "It"eur <SEP> su~ <SEP> o <SEP> ~ <SEP> si, <SEP> CH <SEP> CH,- <SEP> CK2 <SEP> -.
<tb> <SEP> de <SEP> tube <SEP> Si- <SEP> O <SEP> - <SEP> Si- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> O- <SEP> CH2- <SEP> CH-CH2- <SEP> N-CH2- <SEP> CH2-N- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> N
<tb> <SEP> capillaire <SEP> CH3 <SEP> 1H <SEP> H <SEP> H <SEP> H
<tb> <SEP> CH3 <SEP> OH
<tb> <SEP> CHI <SEP> + <SEP> CH3OH
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H3C <SEP> CH3 <SEP> H3C <SEP> CH3 <SEP> H3C <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface <SEP> < ,
<tb> <SEP> interieur <SEP> -.
<tb> <SEP> indeIT <SEP> =Si- <SEP> O-Si- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> O-CH2- <SEP> CH- <SEP> CH2- <SEP> N- <SEP> cnr <SEP> CHr <SEP> N- <SEP> cH2- <SEP> N
<tb> <SEP> I <SEP> I <SEP> i <SEP> i <SEP> \ <SEP> i <SEP> \
<tb> capillaire <SEP> CH3 <SEP> OH <SEP> I- <SEP> CH3 <SEP> I- <SEP> CH3 <SEP> I- <SEP> CH3
<tb>
Revêtement final
Figure 3: Méthode C mettant en jeu une substance bifonctionelle
comprenant un groupement époxy-alkoxysilane
Figure img00130001
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> I
<tb> <SEP> H,CO <SEP> Si- <SEP> CH,- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> C=N
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> (cyanopropyl-3)
<tb> <SEP> diméthylméthoxysilane
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> inteneure <SEP> g <SEP> Si-OH
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface <SEP> I
<tb> <SEP> interieure <SEP> g <SEP> Si0 <SEP> Si-CH,-CH,-CH2-C~N
<tb> de <SEP> la <SEP> colonne <SEP> I
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> LAlH4
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieure <SEP> = <SEP> Si-O-Si- <SEP> si~ <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2-NH2
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire <SEP> CH3
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> CH3I <SEP> + <SEP> CH3OH
<tb> <SEP> CH3 <SEP> H3C <SEP> CH3
<tb> <SEP> surfice < , <SEP> |
<tb> <SEP> interieure <SEP> Si <SEP> 2 <SEP> Si <SEP> - <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> N+
<tb> de <SEP> la <SEP> colonne <SEP>
<tb> <SEP> capillaire <SEP> CH3 <SEP> H3C <SEP> I
Revêtement final
Figure 4 :Méthode D mettant en jeu une substance
bifonctionelle comprenant un groupement
nitrile-alkoxysilane
Figure img00140001
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieure <SEP> SSiOH
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> Colonne <SEP> Chlorure <SEP> de <SEP> thionyle <SEP> (SOC12)
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieure <SEP> z- <SEP> Si-Cl
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> | <SEP> LiAlH4
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieure <SEP> 1--Si-K
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> H
<tb> l'acide <SEP> chloroplatinique
<tb> <SEP> H
<tb> <SEP> N-- <SEP> CH,- <SEP> CH- <SEP> N
<tb> <SEP> N <SEP> - <SEP> CH2- <SEP> CH2- <SEP> N
<tb> <SEP> K
<tb> <SEP> 8 <SEP> f <SEP> H
<tb> <SEP> N-allyle-éthylènediamine
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> intérieure <SEP> 5
<tb> de <SEP> la <SEP> colonne
<tb> <SEP> capillaire
<tb> <SEP> H
<tb> <SEP> CH3I <SEP> + <SEP> CH30H <SEP> NCH2-CH2-NX
<tb> <SEP> H <SEP> H
<tb> <SEP> M <SEP> r
<tb> <SEP> surface
<tb> <SEP> interieur <SEP> S <SEP> Si
<tb> <SEP> de <SEP> colonne <SEP> S <SEP> CH3
<tb> <SEP> CH3
<tb> <SEP> ,iS <SEP> \
<tb> <SEP> H3C <SEP> CH3 <SEP> I- <SEP> CH3
<tb>
Revêtement Final
Figure 5: Méthode E mettant en jeu une substance bifonctionelle comprenant un groupement amine-vinylique TIME CHANNEL B: ABSORBANCE -0.001 0.050
Figure img00150001
<tb> <SEP> Identification <SEP> des <SEP> Pics
<tb> 1. <SEP> I'acide <SEP> sulfo-5 <SEP> salicylique
<tb> <SEP> 2. <SEP> l'acide <SEP> salicylique
<tb> <SEP> 3. <SEP> I'acide <SEP> trimesique
<tb> <SEP> 4. <SEP> Acide <SEP> toluene-4 <SEP> sulfonique
<tb> <SEP> 5. <SEP> de <SEP> la <SEP> Colonne <SEP> 5.<SEP> I'acide <SEP> nitro-5 <SEP> isophthalique
<tb> <SEP> Dimensions <SEP> de <SEP> la <SEP> Colonne <SEP> 6. <SEP> l'acide <SEP> phthalique
<tb> <SEP> 7. <SEP> Lm <SEP> ID <SEP> x <SEP> 365 <SEP> Cl <SEP> OD <SEP> x <SEP> 67 <SEP> cm <SEP> 7. <SEP> I'acide <SEP> nitro-2 <SEP> benzoique
<tb> <SEP> 75 <SEP> ijin <SEP> ID <SEP> x <SEP> 365 <SEP> Fm <SEP> OD <SEP> x <SEP> 67 <SEP> cm <SEP> 8. <SEP> I'acide <SEP> isophthalique
<tb> <SEP> 9. <SEP> Tapon <SEP> 9. <SEP> I'acide <SEP> nitro-3 <SEP> benzoique
<tb> <SEP> 6 <SEP> Tampon <SEP> 10. <SEP> l'acide <SEP> hydroxy-5 <SEP> isophthalique
<tb> <SEP> . <SEP> . <SEP> I <SEP> 1. <SEP> I'acide <SEP> acétique <SEP> In. <SEP> I'acide <SEP> amino-5 <SEP> isophthalique
<tb> <SEP> 95 <SEP> mM <SEP> de <SEP> l'acide <SEP> actique <SEP> 12.<SEP> l'acide <SEP> amines4 <SEP> salicylique
<tb> <SEP> 9 <SEP> 50 <SEP> mM <SEP> de <SEP> la <SEP> sel <SEP> sodique <SEP> de <SEP> acide <SEP> acétique <SEP> 13. <SEP> I'acide <SEP> benzoique
<tb> <SEP> dans <SEP> l'eau <SEP> 14. <SEP> I'acide <SEP> anthracene-9 <SEP> carboxylique
<tb> <SEP> 15. <SEP> Conditions <SEP> 15. <SEP> I'acide <SEP> nitre4 <SEP> phenylacetique
<tb> <SEP> Autres <SEP> 16. <SEP> 16. <SEP> I'acidenaphthalene-2acetique
<tb> <SEP> 17. <SEP> I'acide <SEP> hydroxy-4 <SEP> benzoique
<tb> <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 1 <SEP> 200 <SEP> nm <SEP> détection <SEP> UV <SEP> 18. <SEP> acide <SEP> sulfanilique
<tb> <SEP> \ <SEP> / <SEP> 12 <SEP> Detector <SEP> vers <SEP> l'anode <SEP> ! <SEP> 19. <SEP> 1 <SEP> acide <SEP> diméthoxy-3,4 <SEP> benzoique
<tb> <SEP> 72 <SEP> 20KV <SEP> 28a <SEP> 20. <SEP> l'acide <SEP> dihydroxy-2,3 <SEP> benzoique
<tb> <SEP> Injection <SEP> par <SEP> pression <SEP> 2 <SEP> seconds <SEP> 21. <SEP> Acide <SEP> amino-4 <SEP> benzoique
<tb> <SEP> 10
<tb> <SEP> 20 <SEP> Concentration <SEP> des <SEP> Pics
<tb> <SEP> 1 <SEP> l <SEP> 13
<tb> <SEP> 19 <SEP> 22.2 <SEP> to <SEP> 22.4 <SEP> g'mI
<tb> <SEP> de <SEP> chaque <SEP> compos
<tb> <SEP> il <SEP> 21
<tb> <SEP> 16
<tb> <SEP> 7
<tb> <SEP> 14
<tb> <SEP> 4 <SEP> 15
<tb> 5.0 30.0
Figure 6 : Electrophorègramme de diverses substances
acidiques TIME CHANNEL A: ABSORBANCE -0.010 0.080
Figure img00160001
<tb> <SEP> 4
<tb> <SEP> Identification <SEP> des <SEP> Pics
<tb> <SEP> 1. <SEP> I'acide <SEP> oxalique
<tb> <SEP> 2. <SEP> l'acide <SEP> maleique
<tb> <SEP> 3. <SEP> I'acide <SEP> succinique
<tb> <SEP> 4. <SEP> I'acide <SEP> fumarique
<tb> <SEP> 5. <SEP> I'acide <SEP> citrique
<tb> <SEP> 6. <SEP> I'acide <SEP> tartarique-D
<tb> <SEP> Concentration <SEP> des <SEP> Pics
<tb> <SEP> 222 <SEP> to <SEP> 244 <SEP> llglml
<tb> <SEP> 2 <SEP> de <SEP> chaque <SEP> composé
<tb> <SEP> Dimensions <SEP> de <SEP> la <SEP> Colonne
<tb> <SEP> 75 <SEP> CLm <SEP> ID <SEP> x <SEP> 365 <SEP> CLm <SEP> OD <SEP> x <SEP> 67 <SEP> cm
<tb> <SEP> Tampon
<tb> <SEP> 10 <SEP> mM <SEP> de <SEP> l'acide <SEP> trifluoroacétique
<tb> <SEP> 20 <SEP> mM <SEP> Sodium <SEP> Trifluoroacetate
<tb> <SEP> dans <SEP> l'eau
<tb> <SEP> Autres <SEP> Conditions
<tb> <SEP> 6 <SEP> 200 <SEP> nm <SEP> detection <SEP> Uv
<tb> l <SEP> Detector <SEP> vers <SEP> l'anode
<tb> <SEP> 20RV <SEP> 42La
<tb> <SEP> 3
<tb> 0.0 30.0
Figure 7: Electrophorègramme de diverses substances
acidiques

Claims (12)

    REVENDICATIONS 1. Colonne capillaire en verre ou en quartz ou en silice fondue ou en dérivé polymérique ou en matériaux similaires, utilisée en électrophorèse capillaire, présentant une charge positive permanente, sous forme d'ammonium quaternaire, fixée à la surface intérieure par une liaison covalente, résultant de la combinaison entre la paroi de la colonne capillaire et un composé polymérique ou non-polymérique de structure bifonctionnelle, l'une des fonctions présentant une charge positive permanente de nature ammonium quaternaire, l'autre fonction étant destinée à former la liaison covalente avec la paroi de la colonne capillaire, en ce que la liaison covalente peut être sous forme de siloxane -Si-O-Si- résultant de la combinaison d'un groupement constituée d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants halogènés, tel le chlore ou le brome, soit d'un groupement constitué d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants alkoxy ou acyloxy réagissant avec les groupements hydroxyles de la surface intérieure du capillaire, en ce que la liaison covalente peut être obtenu soit sous forme de liaison silicium-carbone -Si-C- résultant de la combinaison au niveau de la paroi de la colonne capillaire d'un groupement vinylique et de groupements d'hydrure de silicium -SiH préalablement formés par la transformation de silanol -SiOH en halogénures de silicium -SiX, X étant un halogénure du type chlore ou brome suivies d'une réduction en hydrure de silicium -SiH.
  1. 2. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication 1 due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes,
    réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant
    à une fixation sous forme de liaison covalente.
  2. 3. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication 1 due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes
    vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et
    conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
  3. 4. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication 1 due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs amines primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs
    alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire
    et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les amines
    étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures
    d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne
    capillaire soit in situ après fixation.
  4. 5. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication I due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs amines primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs
    groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne
    capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les
    amines étant transformées en ammonium quaternaire par action
    d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la
    colonne capillaire soit in situ après fixation.
  5. 6. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication 1 due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes,
    réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant
    à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant
    transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en
    amine primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par
    réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi
    intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
  6. 7. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication 1 due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes halosilanes, pour
    lequel l'atome d'halogène peut être le chlore ou le brome réagissant avec
    la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation
    sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en
    ammonium quaternaire par réduction du nitrile en amine primaire,
    elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction
    d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la
    colonne capillaire soit in situ après fixation.
  7. 8. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la
    revendication 1 due à la combinaison entre une substance
    bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou
    plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes,
    réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant
    à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes époxy étant
    transformés en ammonium quaternaire par réaction dans un premier
    temps avec une amine primaire ou une amine secondaire conduisant à
    un amino-alcool transformé en ammonium quaternaire par réaction
    d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la
    colonne capillaire soit in situ après fixation.
  8. 9. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 à 2 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium
    quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les
    composés suivants, chlorure de n-octadecyldiméthyl- [3 -(triméthoxy-
    silyl)propyl] ammonium, chlorure de n-tétradecyldimethyl(3 -triméthoxy
    silylpropyl)ammonium, chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl)
    triméthylammonium, chlorure de N-( 3 -triméthoxypropyl-N-méthyl-N,
    N-diallylammonium, chlorure de N-triméthoxy silylpropyl-N,N,
    N-triméthylammonium, chlorure de N-triméthoxy silylpropyl-tri-n-
    butylammonium, le composé préférentiel étant le chlorure de
    N-(triméthoxy silyloctyl) triméthylammonium .
    I 0. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 et 3 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium
    quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques est sélectionnée parmi
    les composés suivants, l'iodure de hexallyl-éthylènediammonium,
    l'iodure de octallyl-diethylene- triammonium, l'iodure de
    decallyl-triéthylènetétrammonium, l'iodure de dodécallyl
    tétraéthylènepentammonium,l'iodure de tétradécallyl- pentaéthylène
    hexammonium, le composé préférentiel étant le hexabromure de
    tétradecaallyl-pentaéthylènehexammonium il. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 et 4 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant une ou plusieures amines primaires,
    secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes est
    sélectionnée parmi les composés suivants, 4-Aminobutyl diméthylméthoxysilane,4-Aminobutyltriéthoxysilane,(aminoéthyl-
    aminoéthyl)phenethyltriméthoxysilane,N-2- aminoéthyl)-3 -aminopropyl méthyldiméthoxysilane,N-(2-aminoethyl-3 -aminopropyl) -triméthoxy-
    silane, N-(2-aminoethyl-3 -aminopropyl)-tris- (2-éthylhexoxy) silane,
    N-(2-aminohexyl-3 - aminopropyl)triméthoxysilane,4-aminophnyltrimet hoxysilane,3-(l -aminopropoxy) ,3-diméthyl- 1 -propényltriméthoxy-
    silane, 3 -aminopropyl-tris(methoxyethoxyethoxy) silane, 3 -aminopropyl
    dimethylethoxysilane,3-aminopropylméthyldiéthoxysilane, 3-aminopro
    pyltriéthoxysilane, 3-aminopropyltriméthoxysilane, 3-aminopro
    pyltris(triméthylsilyloxy)silane, J-aminoundecyltriméthoxysilane,
    3 - [2-N-benzylaminoethylaminopropyl] trimethoxysilane,B is-(2-hydroxye
    thyl)-3 -aminopropyltriethoxysilane, Bis [3 -(triéthoxysilyl)propyl] amine,
    B is [3 -(triméthoxysilyl)propyl]ethylenediamine,(cyclohexylaminométhyl)
    méthyldiéthoxy silane, (cyclohexylaminométhyl)diméthyléthoxysilane,
    (N,N-diéthyl-3 -aminopropyl)trimethoxysilane,dimethylméthoxysilylprop
    yldiéthylènetriamine, diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehexa
    mine, N-méthylaminopropyltriméthoxysilane, methyl[2- (3-triméthoxy silylpropylamino)éthylamino] -3 -propionate,N-phénylaminopropyl-
    triméthoxysilane, 3 -(N-styrylméthyl-2-aminoéthylamino)propyltri-
    méthoxysilane, N-(t3-(triéthoxysilyl)propyl]-2,4-dintrophénylamine,
    N- [3 -(triéthoxysilyl)propyl]-4,5-dihydroimidazoleXtriméthoxy silyl
    propyldiéthylènetriamine, N-(3-triméthoxysilylpropyl)pyrrole, le
    composé préférentiel étant le diméthylméthoxysilylpropylpenta-
    éthylènehéxamine 12.Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 et 5 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant une ou plusieures amines primaires,
    secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs vinyliques est sélectionnée
    parmi les composés suivants, N-allyl-éthylènediamine,
    N,N-diallyl-éthylènediamine ,N,N,N-triallyl-éthylènediamine,N,N,
    N,N-tétrallyléthylènediamine,N-allyldiéthylènetriamine,
    N,N-diallyldiéthylènetriamine,N,N,N-triallyldiéthylènetriamine, N,N,N,
    N- tétrallyldiéthylènetri amine, N,N,N,N,N-pentallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N,N-hexallyldiéthylènetriamine,N,N,N,N,N,N-hexallyl-pentaéthy-
    lènehexamine, le composé préférentiel étant le N,N,N,N,N,N-hexallyl-
    pentaéthylènehexamine.
  9. 13. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 et 6 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou
    plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants,
    3 -(cyanoéthoxy)-3 ,3 -dimethyl-1-propényltriméthoxysilane,
    2-cyanoéthyltriéthoxy silane,2-cyanoéthyltriméthoxysilane,(cyano méthylphènethyl)triméthoxysilane, 3 -cyanopropyldimthylméthoxy-
    silane, 3-cyanopropyltriéthoxysilane le composé préférentiel étant le 3 -cyanopropyldiméthylméthoxysilane 14.Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 et 7 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou
    plusieurs halosilanes est sélectionnée parmi les composés
    suivants, (3-cyano butyl)trichlorosilane,2-cyanoéthylméthyldichloro-
    silane, 2-cyanoéthyltrichlorosilane,3 -cyanopropyldimethylchloro silane,
    3 -cyanopropylmethyldichloro silane, 3 -cyanopropyltrichloro silane, le
    composé préférentiel étant le 3-cyanopropyldiméthylchlorosilane and
    related substances.
  10. 15. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 et 8 caratérisées en ce que la substance
    bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes époxy et un ou
    plusieurs groupes alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés
    suivants, (3-glycidoxypropyl)bis(triméthylsiloxy)
    méthylsilane, 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane, (3-glycidoxy
    propyl)méthyldiéthoxysilane, 3 -glycidoxypropylméthyldiisopro
    penoxysilane, (3-glycidoxypropyl)triméthoxysilane, le composé
    préférentiel étant le 3-glycidoxypropyldiméthylethoxy silane.
  11. 16. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une
    quelconque des revendications 1 à 15, en ce que la préparation du
    revêtement intérieur de la colonne capillaire est réalisée selon les étapes
    suivantes : lavages successifs par l'acide chlorhydrique, par de l'eau, par
    de la soude, par de l'eau, puis traitement par la substance
    bifonctionnelle qui par exemple et d'une manière non limitative peut
    être le chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl) triméthylammonium ; puis
    lavage à l'eau suivie éventuellement par un traitement par de l'acide
    campho sulfonique.
  12. 17. Colonnes capillaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 16
    caractérisées en ce qu'elles permettent de séparer des composés chargés
    négativement, chargés positivement ou des composés neutres dans un
    but analytique ou pour la préparation de composés purs.
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